Технология производства нативного симбиотического препарата и оценка его эффективности в свиноводстве тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Гаврилов Владимир Андреевич

• Гаврилов Владимир Андреевич
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Гаврилов Владимир Андреевич

ВВЕДЕНИЕ

1. Обзор литературы

1.1. Краткая характеристика пробиотических препаратов

1.2. Энтеробактерии 1 6 1.2.1. Род Escherichia coli 1 7 1.2.2 Симбиотический препарат на основе E. Coli

1.3. Культивирование микроорганизмов

1.3.1.Приготовление посевного материала

1.3.2.Методы и режимы культивирования микроорганизмов

1.3.3. Физиологическое состояние микроорганизмов в процессе роста и развития при периодическом культивировании

1.4. Способы концентрирования бактериальных культур

1.5. Способы получения лизина для животноводства и птицеводства

2. Собственные исследования 43 2.1. Материалы и методы 44 3.Основное содержание работы

3.1. Разработка технологии получения жидких форм симбиотических 51 препаратов

3.2. Оптимизация состава питательной среды, используемой при 54 изготовлении симбиотического препарата

3.3. Разработка защитной среды сохраняемости, используемой при 58 изготовлении симбиотического препарата

3.4. Клинические испытания жидкого симбиотического препарата 67 «Симбиохит» в свиноводстве

3.5. Расчет эффективности применения жидкого симбиотического 70 препарата в свиноводстве

4. Выводы

5. Рекомендации и перспективы дальнейшей разработки темы 79 ОСНОВНЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

ПРИЛОЖЕНИЯ

6. Таблицы расчетов коэффициентов уравнений

7. Нормативные документы

8. Акт испытаний

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Технология производства нативного симбиотического препарата и оценка его эффективности в свиноводстве»

Решение задач импортозамещения и развития АПК России в современных условиях невозможно без внедрения в сельскохозяйственное производство передовых достижений науки направленных на разработку и применение новых экологически безопасных и эффективных препаратов [14, 63, 67, 73, 77, 83, 86, 103, 104].

Предъявляемым требованиям отвечают такие препараты как пробиотики, пребиотики, синбиотики (эубиотики) и симбиотики [29, 116, 134, 142, 143], которые в последнее время широко применяют как в медицине, так и в ветеринарии. Современные пробиотические препараты физиологичны по своему действию, безвредны для животных и человека, достаточно просты в наработке, приемлемы по себестоимости в современных экономических условиях и пригодны для группового применения, что особенно актуально для животноводства.

В настоящее время биотехнология является активно развивающимся научным направлением, использующим биологические процессы при разработке и производстве широкого спектра биопрепаратов (вакцин, сывороток, диагностикумов), биологически активных веществ (ферментов, антибиотиков, пробиотиков, кормовых добавок и т.п.). Их применение в АПК способствует повышению сохранности и продуктивности животных, обеспечению ветеринарного благополучия хозяйств, гарантирует качество животноводческой продукции, её биологическую и экологическую безопасность.

Основы моделирования технологий микробиологических производств и процессов микробиологического синтеза отражены в работах В.М. Кантере (1991)[33], Ю.П. Грачева (1979)[20] и др. Рассматриваемые технологические модели и процессы весьма актуальны и для предприятий, производящих лекарственные средства для животных, в том числе и иммунобиологические препараты [10, 33].

Интенсивное ведение свиноводства в условиях промышленных комплексов требует безусловного обеспечения животных биологически полноценными кормами, что является решающим фактором их высокой продуктивности. При этом предусматривается обеспечение свиней не только качественными белковыми кормами и энергетическими компонентами, но и лимитирующими аминокислотами и другими жизненно необходимыми веществами для их роста [35].

Доказано, что недостаток или отсутствие в рационе лимитирующих аминокислот нельзя восполнить за счет кормов животного происхождения, доля которых в комбикормах для свиней к тому же снижается, а цена на них растет. Для приготовления полноценных кормов в промышленном животноводстве широко используют премиксы, кормовые и белковые добавки и даже чистые аминокислоты.

Лизин занимает особое место среди незаменимых аминокислот, так как он входит в состав структурных тканевых белков, гормонов и белковых ферментов, способствует улучшению пищеварения, играет важную роль в формировании костяка, повышении продуктивности, оказывает благотворное влияние на воспроизводительные функции животных, участвует в выработке антител.

Эффект применения незаменимых аминокислот, в частности Ь - лизина, основывается на том, что белок зерновых - основного компонента кормов для сельскохозяйственных животных и птицы - имеет неблагоприятный состав, образующих его аминокислот. Одна из них — Ь - лизин - находится в дефиците и не может быть синтезирована в организме животного.

Обычно дефицит устраняется внесением в рацион так называемых белковых добавок, богатых Ь - лизином (рыбная мука, мясокостная мука, соевый и подсолнечниковый шрот, гидролизные и кормовые дрожжи). Однако дефицит, можно устранить и просто введением в корм соответствующего количества кристаллического Ь - лизина. В развитых странах в последнее время потребление Ь - лизина интенсивно растет - 12-15% прирост ежегодно. До середины 80 - х

Ь - лизин получается в результате микробного синтеза специально отселекционированными для этой цели штаммами микроорганизмов. Биосинтез осуществляется в асептических условиях при аэрации, перемешивании и непрерывной подаче стерильной питательной среды, содержащей источники углерода и азота, а так же питательные соли. Концентрация Ь - лизина в выходящей культуральной жидкости при использовании среды с мелассой и штамма ВгеуЛа^егшш Бр. 90 составляет 50 г/л.

Получаемый препарат представляет собой высушенную культуральную жидкость, содержащую кроме, непосредственно лизина, ряд других аминокислот, макро- и микроэлементов.

Во многих странах мира при выращивании продуктивных животных используют синтетический или микробиологический лизин (моногидрохлорид лизина). Замена синтетического лизина в животноводстве России, который в основном импортного производства, на симбиотические препараты, выполняющие в организме животных ту же роль, что и лизин - является одной из приоритетных научных проблем разработки препаратов нового поколения, которые будучи введенными в желудочно-кишечный тракт животных сохраняют способность продуцировать лизин - одну из незаменимых аминокислот[61].

Актуальность темы. Обеспечение населения России продовольствием и биологическая защита людей и животных в стране являются основными задачами АПК на современном этапе, что делает актуальными научные исследования в области биотехнологии, направленные на решение этих проблем.

В настоящее время техническая микробиология является активно развивающимся научным направлением, исследующими биотехнологические процессы при разработке и производстве широкого спектра биопрепаратов (вакцин, сывороток, диагностикумов, пробиотиков), биологически активных веществ (ферментов, антибиотиков, пребиотиков и др.), добавок к кормам (белков и аминокислот). Применение таких препаратов в животноводстве и птицеводстве

способствует повышению продуктивности животных и птицы, обеспечению ветеринарного благополучия хозяйств.

Современная ситуация в России поставила остро задачу по импортозамещению препаратов, что повышает требования к конкурентоспособности отечественной продукции, что делает необходимым реконструкцию (реинжиринг) производств многих предприятий биологической, химической и пищевой промышленности и разработку новых или усовершенствование традиционных промышленных технологий производства препаратов.

Степень разработанности. Основы разработки, оптимизации, моделирования технологий микробиологических производств и процессов микробиологического синтеза отражены в работах В.М. Кантере, В.В. Бирюкова, А.Я. Самуйленко, Е.А. Рубан, Ю.П. Грачева, И.В.Павленко (1979 - 2013 г.г.). Они актуальны и для предприятий, выпускающих лекарственные средства для животных, в том числе и пробиотические, симбиотические препараты, с точки зрения обеспечения их безопасности и качества.

В настоящее время в области создания и усовершенствования существующих промышленных технологий производства разных пробиотических, симбиотических препаратов для животных и человека не существует единого методологического подхода.

Группа бактерий, включенная в род Escherichia, насчитывает большое число разновидностей, отличающихся между собой по ферментативным и серологическим свойствам, подвижности, по чувствительности к бактериофагам и колицинам, по степени антагонистической активности и патогенности. Непатогенные виды колибактерий традиционно используются для изготовления пробиотических препаратов (А.Н Панин, 2008; А.Я. Самуйленко, 2010; Н.И. Малик, 2009; В.И. Еремец с соавт., 2008 г., И.В.Павленко, 2013).

В настоящее время достоверно установлено, что только симбиоз макроорганизма и полезных микроорганизмов обеспечивает нормальное функционирование организма животных и человека. Именно наличие полезной микрофлоры в организме реализует генетический потенциал продуктивности

животных и здоровья человека. В современных условиях ведения животноводства активно развивается направление использования симбиотиков не только как антагонистов патогенной микрофлоры, но и как продуцентов лизина -незаменимой аминокислоты. Лизин входит в состав структурных тканевых белков и белковых ферментов, является важным фактором биологически полноценного кормления, способствует улучшению пищеварения, играет важную роль в формировании костяка, повышении продуктивности сельскохозяйственных животных и птицы. Такие симбиотики используются в животноводстве (свиноводстве и птицеводстве) в качестве альтернативы дорогостоящему синтетическому лизину (моногидрохлорид лизина), в основном, импортного производства. Поэтому разработка новых препаратов такой группы и технологии их производства является актуальной проблемой. Начало решения этого вопроса было положено Л.К. Эрнстом (1985, 2007), В .И. Фисининым (2007), А.Я. Самуйленко (2007), А.А. Раевским (2007), А.А. Нежутой (2009), Е.Э. Школьниковым (2007), и др. Достойное продолжение эти работы нашли в исследованиях И.В.Павленко и соавторов (2012-2013 гг.).

В процессе изготовления готовых форм лизинсинтезирующих препаратов осуществляется стабилизация биологических и физико-химических свойств микроорганизмов, стандартизация дозировки и оптимизации условий сохранения биологической активности препарата. В настоящее время большинство пробиотиков такого класса изготавливаются в сухой форме, они выпускаются в форме порошка, таблеток, капсул или свечей, в том числе сухой - лиофильно высушенные препараты в виде таблеток или порошка. Эти формы имеют длительные сроки годности (до года) и не чувствительны к непродолжительным изменениям температуры хранения.

Преимуществом сухих форм биопрепаратов является уменьшение объемов конечного продукта, что сокращает затраты при транспортировке и хранении. Одним из способов получения ТЛФ является сублимационное высушивание, однако в процессе сублимационного высушивания снижается концентрация живых микроорганизмов в готовой сухой форме и это может снижать

эффективность их применения. Существенным недостатком является то, что процесс лиофилизации переводит бактерии в анабиоз (неактивное состояние). Для возвращения в активное физиологическое состояние им требуется 8-10 часов пребывания при температуре активации, а за это время большая часть их уже выводится из кишечника. Вместе с тем, в процессе лиофилизации бактериальные клетки теряют специфические рецепторы, которые помогают им закрепляться на слизистой кишечника, т.е. теряют способность к адгезии. В результате этого эффективность сухих пробиотиков снижается. Кроме того, затраты на производство сухих препаратов часто превышают затраты на транспортировку и хранение жидких препаратов.

При производстве жидких пробиотиков микробные клетки остаются в активном состоянии и способны к адгезии и колонизации желудочно-кишечного тракта уже в первые часы после попадания в организм. Жидкие формы препаратов содержат дополнительный лечебный фактор - продукты метаболизма активных форм живых бактерий, часть из которых (например - ферменты) могут быть разрушаться в процессе сублимационного высушивания. Кроме того они на 30 - 40 % дешевле сухих форм Недостатком нативных (жидких) форм препаратов являются трудности с их хранением и транспортировкой. Жидкие формы менее стабильны, имеют более короткий срок и более жесткие условия хранения, поэтому не всегда эффективны [125].

В связи с вышеизложенным, научно обоснованное решение проблемы производства стабильных жидких форм препаратов и до настоящего времени является актуальной задачей, имеющей практическую ценность.

Цель и задачи исследований. Цель работы - разработать технологию производства нативного симбиотического препарата и оценить эффективность его применения в свиноводстве.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

1. научно обосновать и разработать технологические процессы, схемы изготовления жидкой формы симбиотического препарата;

2. оптимизировать состав защитной среды, используемой для стабилизации жидкой формы симбиотического препарата;

3. изготовить опытные серии нового препарата;

4 провести доклинические испытания препарата;

5. разработать схему применения препарата для поросят;

6. изготовить опытно-промышленные образцы нативного препарата;

7. определить их эффективность применения в свиноводстве.

Научная новизна. Разработана технология производства нативной формы симбиотического препарата, обеспечивающего ежедневную потребность свиней в лизине путем перорального применения симбиотического препарата с кормом или водой.

Определен оптимальный состав защитной среды сохранения для жидкой формы симбиотического препарата.

Теоретическая и практическая значимость. Разработана технология производства жидкого симбиотического препарата из штамма E. coli VL-613, обладающего лизин синтезирующей активностью. Подготовлена и утверждена в установленном порядке временная нормативная документация по изготовлению и применению препарата в свиноводстве. Использование предложенной технологии позволяет снизить себестоимость препарата на 30 - 40 % без потери его биологической активности в течение 3 месяцев (срок наблюдения). Применение препарата в свиноводстве повышает суточные привесы у поросят и создает экономию 6,68 рублей на 1 рубль дополнительных затрат, связанных с приобретением и применением симбиотика.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Гаврилов Владимир Андреевич

4. Выводы

1. Разработана технология производства жидкого симбиотического препарата на основе Е.соН штамм УЬ-613, стабильность и эффективность применения которого обеспечены новой защитной средой оптимального состава.

2. Оптимизирован состав ростовой ПС для культивирования штамма УЬ-613 Е.соН, позволивший реализовать генетический потенциал штамма в направлении синтеза незаменимых аминокислот, таких как лизин и триптофан.

3. Усовершенствован состав ЗСС жидкого симбиотического препарата «Симбиохит», который включает: желатин - 0,3 %; сахарозу - 10,0 %; глицерин -0,6 %, хитозан пищевой - 2 % и фосфатный буфер - до 100%, и позволяет хранить препарат без снижения активности в течение 4 месяцев.

4. В доклинических исследованиях опытного препарата сформулированы показатели качества, которые включены в СТО и нормативную документацию.

5. На ФКП «Армавирская биофабрика» была изготовлена опытно-промышленная серия жидкого симбиотического препарата испытания которой по показателям качества соответствовали требованиям СТО на препарат, что свидетельствует о воспроизводимости разработанной технологии.

6. Применение препарата в свиноводстве показало, что использование его в дозировке 15 - 16 млрд. микробных клеток на весь цикл выкармливания поросят с 2-х до 4-х месячного возраста способствовует увеличению суточного прироста их живой массы.

7. Применение жидкого симбиотического препарата в свиноводстве позволило получить экономический эффект на поросятах послеотъемного периода, в расчете на 1 руб. дополнительных затрат - 6,68 руб.

5.Рекомендации и перспективы дальнейшей разработки темы.

Жидкий симбиотический препарат на основе лизин синтезирующих бактерий целесообразно рекомендовать для применения в свиноводстве, а также и другим видам животных.

Весьма перспективным направлением дальнейших исследований, по нашему мнению: - изучение возможности внедрения технологии производства жидкой формы симбиотического препарата непосредственно в свиноводческих комплексах, на базе действующих цехов по приготовлению кормов.

Для практического использования предложены следующие документы.

Нормативная документация:

- «Опытно - промышленный регламент производства нативной формы симбиотического препарата «Симбиохит» утвержден директором ФГБНУ Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности 15.09. 2014 г.;

- Стандарт организации (СТО 9337 - 0024 - 11734126 - 2014?) ФГБНУ ВНИТИБП: «Симбиотический препарат «Симбиохит» (нативная форма)» утвержден директором ФГБНУ Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности 15.09. 2014 г.;

- «Временная инструкция по применению нативного симбиотического препарата «Симбиохит» для поросят послеотъемного периода» утверждена директором ФГБНУ Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности 15.09. 2014 г.;

ВГНКИ - Всероссийский государственный центр качества и стандартизации

лекарственных средств для животных и кормов

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Гаврилов Владимир Андреевич, 2016 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абдумаликова А.Х., Еременко В.В. Методы разрушения микробных клеток // Прикладная биохимия и микробиология. 1976. т. 3. № 3. С. 347-351.

2. Авдеенко В.Н. Поставщики лизина // Деловой журнал пищевой отрасли «PG FOOD», 2003. №1. С. 46-50

3. Морфологические изменения клеток в периодическом процессе биосинтеза L-лизина /Александрова М.А и др. // Управляемый микробный синтез. Рига.: «Зинатне», 1973. С. 93-109.

4. Баснакьян И.А. Культивирование микроорганизмов с заданными свойствами. М.: Медицина, 1992. 192 с.

5. Баснакьян И.А. Оптимизация культивирования микроорганизмов в иммунобиотехнологии // Микробиологии, 1989. № 5. С. 90-96.

6. Башкиров О.Г. Биоплюс 2Б - натуральный пробиотик с широким спектром многофакторной активности // Зооиндустрия, 2002. №2. С.24-27.

7. Бекер В.Ф. Биохимия лизина и использование его препаратов в питании животных. Рига.: «Зинатне», 1976. 362с.

8. Биотехнология: учебник / Под ред. Е.С. Воронина. С.-Петербург.: Гиорд, 2008. 703 с.

9. Биотехнологические аспекты получения пробиотиков из биомассы дрожжей сахаромицетов и гриба Fusarium sambucinum с биопротекторными свойствами / Воробьева Г.И. и др.: материалы конференции «Перспективы и проблемы развития биотехнологии в рамках единого экономического пространства стран СНГ». Минск.: 2005. С. 38-39.

10.Бирюков В.В. Основы промышленной биотехнологии. М.: Колос, 2004. 295 с.

11. Бортников И.И., Босенко А.М. Машины и аппараты микробиологических производств. Минск.: Высшая школа. 1982. 228с.

12.Букин В.Н., Куцева Л.С., Баздырева Н.М. Микробиологический способ получения лизина: лизин - получение и применение в животноводстве. М.: «Наука», 1973. С. 8-21.

13.Вахитов Т. Л., Петров JI.H. Ауторегуляторы роста нормальной микрофлоры, как основа для создания новых пребиотиков // Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования: материалы Международной научно-практической конференции. М.: 2002. С. 17-18.

14. Ветеринарные аспекты обеспечения продовольственной безопасности России / А.Я. Самуйленко и др. // Ветеринария, 2012. С. 9-12.

15.Влияние симбиотического препарата «Пролизэр - БиоР» на основе лизинсинтезирующей культуры E. coli на показатели откорма трансгенных свиней и их аналогов / Л.К. Эрнст и др. // Достижение науки и техники АПК, 2011. № 10. С. 61-62.

16.Воробьев А.А. Проблемы физико-химической биологии и биотехнологии в микробиологии и иммунологии // Микробиология, 1982. № 11. С. 3-8.

17.Воронин Е.С. Иммуномодуляторы и пробиотики при болезнях молодняка -перспективное направление в ветеринарной медицине / Воронин Е.С., Петров Р.В., Шишков В.П. Иммунодефициты сельскохозяйственных животных: материалы Всероссийской научной конференции М.: 1994. С. 68.

18.Гангуева Г. Отечественному АПК - качественные корма // Агро Рынок, 2009. С. 14-16.

19.Гоцуленко М.И., Капрельянц Л.В. Получение БАД синбиотика / Биотехнология: вода и пищевые продукты: материалы научного и практического конгресса. М.: 2008. С. 85.

20.Грачев Ю.П. Математические методы планирования экспериментов. М.: Пищевая промышленность, 1979. 200 с.

21.Грязнева Т.Н. Технология производства пробиотика Биод-5 и его лечебно-профилактическая эффективность для разных видов животных. автореф. дис. д-ра биол. наук. М.: 2005. 43с.

22.Гуславский А.И., Попова В.М. Вопросы очистки, разделения и концентрирования биологических жидкостей / тезисы докладов

Всероссийской научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». Щелково.: 2000. С. 308-309.

23.Гуславский А.И. Высокоэффективные аппараты для разделения, очистки и концентрирования жидких систем и новые биотехнологические процессы на их основе. автореф. дисс .докт. техн. Наук. Щелково.: 2007. 55 с.

24.Гуславский А.И., Страдаев В.Е., Гуславская Т. А. Применение осадительно-фильтрующих центрифуг в биотехнологических процессах //материалы Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». Щелково.: 2009. С.421-422.

25.Даванков А.Б. Зубакова Л.Б. Высокомолекулярные соединения// Общая химия, 1960. Т. 2., № 6. С. 884-889.

26. Данилевская Н.В. Фармакостимуляция продуктивности животных пробиотическими препаратами. автореф. дис. д-ра вет. наук. М.: 2007. 49с.

27. Диффузия и электромиграция нейтральных аминокислот через ионообменные мембраны / Е.Г. Доманова и др. // Прикладная химии, 1974. Т. 47. №6. С. 1258-1261.

28. Дубинина Г.П. Управляемое культивирование патогенных микроорганизмов / Дубинина Г.П. // Микробиология, 1982. № 12 - С. 40-44.

29.Зинченко Е.В., Панин А.Н. Иммунобиотики в ветеринарной практике. Пущино.: 2000.163 с.

30. Ивашкина Н.Ю., Ботина С.Г., Маев И.В. Методология выбора микроорганизма для использования в качестве пробиотика // Российский медицинский вестник. 2011. Т. 16. № 1. С. 549-556.

31. Изучение влияния компонентов защитной среды на сохраняемость вакцины против листериоза животных из шт. «АУФ» в процессе длительного хранения. / М. Я. Ярцев и др.: тезисы докладов У Всероссийской конференции. Щелково.: 1996. С. 121-123.

32. Использование пробиотиков, пребиотиков и симбиотиков в птицеводстве: Методические рекомендации / В. И. Фисинин и др. Сергиев Посад.: ВНИТИП, 2008. 44 с.

33.Кантере В.М. Теоретические основы технологии микробиологических производств. М.: Агропромиздат, 1991. 272 с.

34.Карпов А.А., Рубан Е.А., Самуйленко А.Я. Масштабирование процессов культивирования микроорганизмов: материалы Международной научно-практической конференции «Ветеринарная биотехнология: настоящее и будущее». Щелково.: 2004. С. 190-192.

35.Ковальчук А.Я. Гематологический профиль и интенсивность роста поросят после отъема при использовании дрожжей БассИагошусев сегеу1в1ае // Актуальные проблемы биологии в животноводстве: материалы V Международной научной конференции. Боровск.: 2010. С. 182-183.

36.Контроль и доклинические испытания по определению оптимальной дозы симбиотического препарата «Пролизэр» для бройлеров / И.В. Павленко и др. // Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства и обеспечения качества биологических препаратов для АПК». Щелково.: 2012. С. 393 - 396.

37. Культуры микроорганизмов и клеток животных-продуцентов биологически активных веществ / Л.К. Эрнст и др.: тезисы докладов II Международной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии». М.: 2000. С.198.

38.Лежнев Э.И. Теория и методы управляемого культивирования клеток животного и человека: Управляемое культивирование клеток. Пущино.: 1983. С. 8-32.

39.Липатов В.Н., Новиков О.П. Саморазгружающие сепараторы. М.: Машиностроение, 1975. 247 с.

40.Лузан Н.С. Флокуляция - метод осаждения в биотехнологии / Лузан Н.С., Рубан Е.А.: сборник докладов Международной конференции молодых

ученых «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». Щелково.: 2001. С. 122-127.

41.Малик Н. И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения. автореф. дис. д-ра биол. Наук. М.: 2002. 42 с.

42.Межиня Г.Р., Лацарс А.А.Оценка периодических и непрерывных процессов биосинтеза Ь-лизина // Микробиологические препараты. Рига.: «Зинатне», 1976. С. 161-166.

43.Мельникова В.А. Значение состояния популяции микроорганизмов для разработки питательных сред и процессов культивирования. автореф. дисс. докт. биол. наук. М.: 1987. 43 с.

44.Меньшенин В.В., Школьников Е.Э., Раевский А.А. Оптимизация условий культивирования сальмонелл с использованием питательных сред на основе перевара Хоттингера // Ветеринария и кормление, 2010. № 5. С. 8-9.

45. Методика непрерывного культивирования микроорганизмов в биореакторах / А.А.Раевский и др. // Новые методы исследований по проблемам ветеринарной медицины. М.: 2006. Ч. III. С. 380-384.

46.Нежута А.А., Сербис Е.С. Технологические аспекты сублимационного высушивания биологических препаратов ветеринарного назначения: материалы Международной научно-практической конференции. М.: 2005. С. 104-113.

47.Нетесов С.В. Рекомендации ВОЗ по биобезопасности и национальные правила работы с патогенами: сравнение и ситуация в разных странах // Биотехнология: состояние и перспективы развития: материалы У Московского международного конгресса М.: 2009. С. 26.

48.Обеспечение биологической безопасности кормов / А.И.Петенко и др. Ветеринария. 2006. №7. С. 7-11.

49.Озеренко О.А., Раевский А.А., Рубан Е.А. Математическая модель периодического процесса культивирования сальмонелл: Мат. Международная научно-практическая конференция молодых ученых

«Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». Щелково.: 2004. С. 79-84.

50. Определитель бактерий Берджи / под ред.Дж. Хоулта и др. 9-е изд. В двух томах.М.:Мир, 1997. 800 с.

51. Оптимизация процесса культивирования бактерий рожи для получения антигена при производстве сыворотки против рожи свиней / Школьников Е.Э. и др.: тезисы докладов Всероссийской научной конференции «Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов». М.: 2001. С. 59-60.

52.Павленко И.В., Соловьев Л.Б., Бобровская И.В. Симбиотический препарат Пролизэр заменитель синтетического лизина в рационах кормления бройлеров. // Рационы и ветеринария Информ - Ярославль 2012. № 3 (127). С. 17 - 18.

53.Павленко И.В., Школьников Е.Э. Эффективность применения симбиотической лизинсинтезирующей кормовой добавки «Пролизэр -БиоР» на основе штамма Escherichia coli. «BioR. Prolyzer - 4L» при доращивании поросят послеотъемного периода» // Рационы и ветеринария Информ - Ярославль 2012. № 4 (128). С. 31 - 32.

54.Павленко И.В. Использование симбиотического препарата Пролизэр в рационах для цыплят бройлеров // Сборник научных трудов 5-ой международной научно-практической конференции - Научные основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных. Краснодар.: 2012. часть 1. С. 174 - 175

55.Павленко И.В. Усовершенствование технологии изготовления сухой живой вакцины против сальмонеллеза телят из штамма Salmonella dublin № 160 // Экология и животный мир. Минск.: 2012. № 1. С. 46-47.

56.Павленко И.В., Нежута А.А., Бобровская И.В. Технология получения симбиотического препарата Пролизэр // Экология и животный мир. Минск.: 2012. № 1. С. 48-50.

57.Павленко И.В. Оптимизация технологических параметров культивирования штамма Е. coli VL - 613 при производстве симбиотического препарата Пролизэр / Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства и обеспечения качества биологических препаратов для АПК». Щелково.: 2012. С.351 - 355.

58.Павленко И. В. Совершенствование промышленной биотехнологии производства сухих живых бактериальных препаратов и оценка их эффективности. Диссерт.докт. технич. наук. Щелково.: 2013. 471 с.

59.Панин А.Н., Малик Н.И. Пробиотики - неотъемлемый компонент рационального кормления животных // Ветеринария, 2006. №7. С. 3-6.

60.Панин А.Н., Мельников В.А. Проблема обеспечения продовольственной безопасности Российской Федерации и безопасности продовольствия // Ветеринария, 2011. № 1. С. 12-15.

61.Патент РФ № 2347807 Штамм Escherichia coli - продуцент лизина, способ получения кормовой добавки, содержащей данный штамм, композиция, полученная этим способом и способ кормления моногастричных животных и птиц / Л.К. Эрнст и др. подача заявки: 13.12.2007, публикация патента: 27.02.2009. 15 с.

62. Перенос аминокислот через ионитовые мембраны при электродиализе их растворов / В.А. Прохоренко и др.: А.Н. Киргизской СССР. Хим. - тех. и биол. наук. №4. С. 20 - 25

63. Перспектива производства кормовых белковых продуктов / А.Я. Самуйленко и др. // Вестник РАСХН. 2010. № 4. С. 58-60.

64.Поиск новых видов сырья для биосинтеза лизина / Г.К. Лиепиньш и др.: Биотехнология и биоинженерия. Рига.: «Зинатне», 1978. Т. 2. С. 101-102.

65.Применение симбиотической лизинсинтезирующей кормовой добавки «Пролизэр-БиоР» при доращивании поросят послеотъемочного периода / И.В. Павленко и др. // Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства и обеспечения качества биологических препаратов для АПК». Щелково.: 2012. С. 386 - 390.

66.Пробиотики на основе живых культур микроорганизмов / Смирнов В.В. и др. // Микробиология. 2002. Т. 64, №4. С. 62-80.

67.Проектный подход в обеспечении качества и безопасности лекарственных средств для животных / О. В. Еремец и др. // Ветеринария и кормление. 2010. № 6. С. 60-61.

68.Промышленная микробиология: монография / Под общей редакцией Н.С.Егорова. М.: «Высшая школа», 1989. 688 с.

69.Раевский А.А. Перспективное технологическое направление культивирования бактерий при производстве вакцин // материалы Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». Щелково.: 2003. С. 61-64.

70.Раевский А.А., Самуйленко А.Я. Разработка и моделирование управляемых процессов культивирования микроорганизмов при производстве биофармпрепаратов // материалы Международной научно-практической конференции «Фармацевтические и медицинские биотехнологии». М.: 2012. С. 291-292.

71. Разработка технологии культивирования и консервирования вакцинных штаммов листерий / М.Я. Ярцев: материалы Международного симпозиума «Листериоз на рубеже тысячелетий». Покров.: 1999. С. 102-104.

72. Разработка управляемого процесса культивирования стрептококков / А.А. Раевский и др.: материалы Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». Щелково.: 2003. С. 68-72.

73.Рахманин П.С. Вопросы поддержания и коррекции микробиоценоза продуктивных животных с использованием пробиотиков // материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных». М.: 2006. С. 350-351.

74.Римарева Л.В. Перспективные ферментные препараты и биотехнологические процессы в технологиях продуктов питания и кормов//

материалы V Международной научно-практической конференции «Перспективные ферментные препараты и биотехнологические процессы в технологиях продуктов питания и кормов». М.: 2012. С. 3 - 7.

75.Рубан Е.А., Раевский А.А., Озеренко О.А. Методика расчета материального баланса процесса культивирования, термодинамических параметров, кинетики роста и гидродинамического моделирования аэробных микроорганизмов // Новые методы исследования по проблемам ветеринарной медицины. М.: 2006. Ч. III. С. 371-379.

76. Рубан Е.А., Самуйленко А.Я.Технология изготовления пробиотиков: материалы IV Международной научно-технической конференции «Пища, экология, человек». М.: 2001. С. 104-105.

77.Самуйленко А.Я., Школьников Е.Э., Рахманин П.С. Актуальные вопросы поддержания и коррекции микробиоценоза продуктивных и домашних животных с использованием пробиотиков нового поколения: материалы Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». Щелково.: 2005. С. 506-511.

78.Самуйленко А.Я., Рахманин П.С., Ибраева А.В. К вопросу разработки технологии производства пробиотиков ветеринарного назначения // Ветеринарный врач, Казань.: 2006. № 4. С. 41.

79.Самуйленко А.Я. Перспективы развития биотехнологии в ХХ1 веке: сборник докладов Международной конференции молодых ученых «Научные основы технологии производства ветеринарных биопрепаратов». Щелково.: 2002. С. 3-5.

80.Самуйленко А.Я., Рахманин П.С. Разработка современной технологии производства пробиотиков ветеринарного назначения // Ветеринария и кормление, М.: 2006. № 6. С. 10.

81.Самуйленко А.Я., Рубан Е.А. Основы биотехнологии производства биологических препаратов. (Теоретические основы, оборудование, технологические линии). М.: 2000. 782 с.

82. Серба Е.М. Биотехнорлогические основы ресурсосберегающей переработки зернового сырья и вторичных биоресурсов. Диссерт.докт. биол.. наук. Москва.: 2015. 256 с.

83.Скичко Н.Д., Гуславский А.И. Использование природных цеолитов в биотехнологии и в рационе кормления животных и птиц: материалы Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». Щелково.: 2006. С. 566-567.

84.Соколов В.И. Центрифугирование. М.: Химия. 1976. 407 с.

85. Состояние и перспективы исследований в области ветеринарной иммунологии / материалы Международной научно-практической конференции «Задачи ветеринарной науки в реализации доктрины продовольственной безопасности Российской Федерации». Федоров Ю.Н. и др. Покров.: 2011. С. 195-197.

86.Субботин В.В., Сидоров М.А. Биотехнология пробиотиков ветеринарного назначения // Аграрная наука, 1998. № 3. С. 20-21.

87.Суворов Ф. Н., Алехина Г. Г. К вопросу о создании новых перспективных форм эубиотиков // Биотехнология в 21-веке : тезисы докладов III Форума представителей промышленных предприятий, научных и проектных организаций в области биотехнологий. Санкт-Петербург.: 2001. С.100-104.

88. Тараканов Б.В. Использование пробиотиков в животноводстве / Калуга,: 1998. 54 с.

89. Теоретические и практические основы технологии сублимационного высушивания биопрепаратов: монография / А.А. Нежута и др. Курск.: Издательство Курской государственной сельскохозяйственной академии, 2002. 240 с.

90. Тихонов И.В., Овсянников Ю.С., Романов В.Е. Технология приготовления стабилизированной рабочей культуры в качестве посевного материала для глубинного культивирования // Ветеринарная медицина, 2010. №3-4. С. 2325.

91.Токаев Э.С. Разработка синбиотического продукта с использованием бифидогенного волокна / Токаев Э.С., Максимов А.А. // Биотехнология: состояние и перспективы развития : материалы V Московского международного конгресса. - М., 2009. - С. 106-107.

92. Усовершенствование питательной среды и условий культивирования бактерий рожи свиней / Школьников Е.Э. и др.: сборник статей материалы Международной научно-практической конференции «Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животных». Покров.: 2000. С. 251-252.

93. Фихте Б.А., Гуревич Г.А. Дезинтеграция клеток. М.: Наука. 1988. 234 с.

94. Хабаров А.К. Разработка процесса хемостатного культивирования пастерелл при производстве вакцин : автореф. дис. канд. биол. наук . Щелково.: 2005. 28 с.

95. Харечко А.Г., Ларионов Л.П., Литусов Н.В. Эубиотики для профилактики, лечения и реабилитации больных при инфекционных заболеваниях и дисбактериозах. Методические рекомендации. Екатеринбург.: 1998. 19 с.

96. Целесообразность пробиотикотерапии при диарейных заболеваниях животных / Бовкун Г.Ф. и др. // Пробиотические микроорганизмы -современное состояние вопроса и перспективы использования: материалы Международного научно-практической конференции М.: 2002. С.60-61.

97. Шапошник В. А. Барьерный эффект при электромиграции пролина и валина через ионообменные мембраны при электродиализе / Шапошник В.А., Селеменев В.Ф., Терентьева Н.П.. // Прикладная химия, 1988. Т. 61. №5. С. 1185-1187.

98. Шапошник В.А., Селеменев В.Ф., Полянская-Хельдт Н.Н. Разделение валина, лизина и глутаминовой кислоты электродиализом с ионообменными мембранами // Прикладная химия, 1990. Т. 63. №1. С. 206-209.

99. Шкоропад Д.Е. Центрифуги для химических производств. М.: Машиностроение. 1975. 248 с.

100. Штамм бактерий ESCHERICHIA COLI, используемый в качестве кормовой добавки: авт. св. 3974938 / 30 - 13 СССР /, № 1354458; заяв. 30.08.85. 4 с.

101. Энтеробактерии в животноводстве: монография / под ред. Л.К. Эрнста. М.: ФГУП «Типография» Россельхозакадемии, 2011. 343 с.

102. Эрнст Л.К., Ковальский Ю.В. Промышленное использование отечественных традиционных и новых биотехнологий кормового белка -резерв ликвидации его дефицита в животноводстве // Биотехнология: состояние и перспективы развития: материалы V Московского международного конгресса. М.: 2009. С. 310.

103. Эффективность применения лизинсинтезирующего препарата «Пролизэр» при выращивании бройлерных цыплят / Л.К. Эрнст и др.: материалы Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». Щелково.: 2007. С. 289-292.

104. Эффективность применения симбиотического лизинсинтезирующего препарата при выращивании цыплят бройлеров / А.Я. Самуйленко и др. // Достижения науки и техники АПК. 2010. № 7. С. 38-39.

105. Эффективность применения нового препарата «Пролизэр» на бройлерах кросса «Кобб-500» / И.В. Павленко и др. // Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства и обеспечения качества биологических препаратов для АПК». Щелково.: 2012. С. 390 - 392.

106. Эффективность применения добавки «Пролизэр - БиоР» при доращивании поросят послеотъемышей / И.В. Павленко и др. // Материалы международной научно-практической конференции «Роль ветеринарной науки и практики в эффективном развитии животноводства». Алматы.: 2012. С. 408 - 412.

107. Adelberg E.A. Recombinant DNA research: Benefits and risks. / Adelberg E.A. // Conn. Med., 1977. V. 41. P.397.

108. Aktan I. Colonization persistense and tissue tropism of Escherichia coli 026 in conventionally reared weaned lambs. / Aktan I, La Ragione Roberto M., Woodward Martin J. //J. Appl. and Environ. Microbiol. 2007. 73, № 3. P. 691698.

109. Bansal S. Probiotics in health and disease /Bansal S. //J. Assoc. physicians. 2001. № 7. P. 735-741.

110. Berg R.D. Probiotics, prebiotics, or conbiotics /Berg R.D. // Trends Microbiol.

1998. Vol. 6. P. 89-92.

111. Bergey's manual of determinative bacteriology. 8-th ed. Eds. R.E. Buchanan, N.E. Gibbons. Baltimore: Williams & Wilkins. 1974. 1268 p.

112. Collins M.D. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut / Collins M.D. // Am J. Clin. Nutr.

1999. № 9. P. 1052-1057.

113. Cursino L. Exoproducts of the Escherichia coli and in vivo. / Cursino L. et al. // J.Appl. Microbiol. 2006. 100, № 4. Р. 821-829.

114. Dunn I. J. Variable-volume continuouse cultivation. / Dunn I. J., Mor J. R. // Bijtech. and Bioeng. 1975. V. 17, № 12. P. 1805 - 1822.

115. Farrell R.J. Microbial factors in inflammatory bowel disease / Farrell R.J., LaMont J.T. // Gastroenterol Clin North Am. 2002. Vol.3. Р. 41-62.

116. Folwaczny Q Probiotics for prevention of ulcerative colitis recurrence: alternative medicine added to standard treatment / Folwaczny Q // Gastroenterol.

2000. Vol. 38. Р. 547-550.

117. Fuller R. Probiotics and prebiotics: microtiora management for improved gut health /Fuller R., Gibson G.R. // Clin. Microbiol. Infect. 1998. №4. P. 477480.

118. Fuller R. Probiotics in man and animals / Fuller R. // J. Appl. Bacter. 1989. Vol.66, № 5. P. 365-378.

119. Gibson G.R. Aspects of in vitro and in vivo research approaches directed toward identifying probiotics and prebiotics for human use / Gibson G.R., Fuller R. // J. Nutr. 2000. Vol.130, № 2. P. 391-395.

120. Gibson G.R. Dietary modulation of the human gut microflora using the prebiotics oligofructose and inulin / Gibson G.R. // J. Nutr. 1999. Vol. 129, №7.

P. 1438-1441.

121. Glebocka K Gut health is a critical factor for litter quality / Glebocka K // World Poultry. 2008. №12. Р. 27-31.

122. Goeddel D.V. Expression in E.coli of chemically synthesized genes for human insulin. / Goeddel D.V. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. V. 76. P. 106.

123. Green A.A. The role of probiotic in producing quality poultry products / Green A.A., Sainsbury D.W.B.: XV Europ. Symp. Quality of Poultry Products. XV Europ. Symp. Quality of Poultry Meat. Turkey, 2001. P. 245-251.

124. http://tiensmed.ru/news/prebiotiki-wkti/

125. http://tiensmed.ru/news/probiotik-prebiotik-ab1 .html

126. Horne S.M. Cloning and sequencing of cnf1 from Escherichia coli ineriminated in mink and bovine colibacillosis. / Horne S.M. et al. // Vet. Res. Commun. 2004. 28, № 2. P. 103-112.

127. Hunter J.O. A review of the role of the gut microflora in irritable bowel syndrome and the effects of probiotic / Hunter J.O., Madden J.A. // Br. J. Nutr. 2002. Vol.88 (suppl. IV). Р. 67-72.

128. Hyochin K. SEL, a selective enrichment broth for simultaneous growth of Salmonella enterica, Escherichia coli 0157:H7, and Listeria monocytogenes. / Hyochin K., Bhunia Arun K. // Appl. and Environ Microbiol. 2008. 74, № 15. P. 4853-4866.

129. Ishibashi N. Probiotics and safety / Ishibashi N., Ymazaki S. // Am. J. Clin. Nutr. 2001. Vol.73 (suppl. III). Р. 465-470.

130. Isolauri E. Probiotics: effects on immunity / Isolauri E., Sutas Y., Kankaanpaa P. et at. // J. Clin. Nutr. 2001. Vol.73 (suppl. II). P. 444-450.

131. Jernigan M.A. Probiotics in poultry nurtition - a review. / Jernigan M.A., Miles R.D., Arafa A.S. // World Poultry Sceince J. 1985. V. 41. P. 99-107.

132. Killen M. Genetic modification of intestinol lactobacilli and bifidobacteria / Killen M., Klatnhamm M. // J. Mol. Biol. 2000. № 2. P. 41-50.

133. Longland A.C. Contribution of carbohydrate fermentation to energy balance in pings. / Longland A.C., Low A.G., Close W.H. // Proc. 4th Seminar on Digestive Physiology of the Pig. 1989.

134. Mc Farland L.V. Biotherapeutic agents: past, present and future / Mc Farland L.V., Elmer G.W. // Microecology Ther. 1995. № 23. P. 46-73.

135. Midilli M. The effects of enzyme and probiotic supplementaiton to diets on broiler performance / Midilli M. and S.D. Tuncer // Turk. J. Vet. Anim. Sci. 2001. №5. P. 895-903.

136. Nyizi L. Manufacture of pectinases process. / Nyizi L. // Biochem. 1969. № 4, P. 23.

137. 0bzor-rynka-kormovye-aminokisloty-2014.

138. Ogawa M. Inhibition of in vitro growth of Shiga toxin-producing E.coli O 157:H7 by probiotic Lactobacillus strains due to production of lactic acid /Ogawa M., Shimizu K., Nomoto K. // Int. J. Food Microbiol. 2001. № 21. Р. 135-140.

139. Panda A.K. Growth, carcass characteristics, immunocompetence and response to Escherichia coli of broilers fed diets with various levels of probiotic / Panda A.K., Reddy M.R., Rao S.V.R. et al. // Archiv fur Geflugelkunde. 2000. Vol. 64. P. 152-156.

140. Pretorius I.S. Designer yeasts for the fermentation industry of the 21st century / Pretorius I.S., Toit M., Rensburg P. // Food. Technol. Biotechnol. 2003. №41 (1). Р. 3-10.

141. Riccа E. Bacterial spore formers: probiotics and emerging applications / Ricca, E. et al., eds. - Horizon Scientific Press. 2004. P. 35-44.

142. Roberfroid M.B. Prebiotics and probiotics: are they functional foods? Roberfroid M.B. //Am. J. Clin. Nutr. 2000. Vol.71, №6. P. 1682-1687.

143. Shanahan F. Probiotics in inflammatory bowel disease / Shanahan F. // Gut. 2001. Vol.48. P. 609.

144. Stein T. Bacillus subtilis antibiotics: structures, syntheses and specific functions / Stein T. // Mol. Microbiol. 2005. Vol.56. P. 845-857.

145. Vanbelle M. New probiotiсs and application of them in veterinary science and medicine / Vanbelle M. // Ann. Microbiol. 2000. Vol. 140a, №8. Р. 251253.

146. Wang B.J.C. Fermentation and enzyme technology. / Wang B.J.C., Cooney C.L., Demain A.L. N-Y.: John Willey and sons. 1979 180 p.

147. Weissman B.J. Separation biomass. / Weissman B.J., Elsken I.C. // Chem.Eng. Prog. 1967. Vol. 63. № 9. P. 28-33.

148. Zhang Xiao. Deficiency in L-serine deaminase results in abnormal growth and cell division of Escherichia coli K-12. / Zhang Xiao, Newman Elaine. // Mol. Microbiol. 2008. 69, № 4. P. 870-881.