Технология производства и оценка эффективности синбиотиков на основе бесклеточных пробиотиков метаболитного типа тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат технических наук Провоторова, Олеся Владимировна

• Провоторова, Олеся Владимировна
• кандидат технических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат технических наук Провоторова, Олеся Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ^ Современные особенности промышленного животноводст

1.2 Пробиотики, пребиотики исинбиотики.

1.3 Биотехнологические аспекты получения синбиотиков.

1.4 Факторы, влияющие на эффективность синбиотиков.

1.5 Технология изготовления про-и пребиотиков.

1.6 Оборудование - современные тенденции.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Технология производства и оценка эффективности синбиотиков на основе бесклеточных пробиотиков метаболитного типа»

В настоящее время интенсивно развивается такое направление экобиотехно-логии, как разработка и использование в практике пробиотиков, пребиотиков и синбиотиков [57, 77, 88, 101, 155, 167, 172]. Эти лечебно-профилактические и ростостимулирующие экологически безопасные препараты способствуют снижению техногенной и микробиологической нагрузки на организм животного в условиях интенсивного современного промышленного животноводства и птицеводства [29, 92, 127, 142, 169, 173, 176].

В области пробиотических лечебных препаратов и пищевых продуктов активно разрабатываются бесклеточные пробиотики (метаболитного типа), которые по сравнению с клеточной формой более стабильны при хранении, не снижают свою биологическую активность при применении на фоне лечебного курса антибиотиков, не оказывают побочных действий на организм человека, в отличие от живых микроорганизмов, способных в ряде случаев вызывать и/или усиливать инфекционные и воспалительные процессы [11, 14, 33, 41, 68]. Культуральная жидкость (основа бесклеточной формы пробиоти-ка) - побочный продукт в традиционной технологии производства бактерийных препаратов или концентратов. Его утилизация, как отхода производства, приводит к значительным экономическим потерям и загрязнению окружающей среды. Поэтому разработка и производство бесклеточных пробиотиков -один из этапов создания безотходного производства бактерийных препаратов. Для агропромышленного комплекса России это направление является инновационным [15, 33, 50].

Синбиотики - научно обоснованный комплекс про- и пребиотиков [28, 39, 49, 72, 135, 136, 141] - при малых расходах (от 0,2 до 5 кг на тонну корма) физиологически активны, безопасны для животных, технологичны в производстве и применении [27, 83, 105, 114, 128]. Их можно производить по унифицированным малоотходным технологиям на гибких технологических линиях, тиражированных и размещенных в непосредственной близости к потребителю [9, 45, 86, 87]. Разработка таких технологий является одним из перспективных направлений развития биотехнологии для АПК РФ.

Во ВНИТИБП накоплен значительный опыт разработки состава и технологии производства синбиотических комплексов для птицеводства и коневодства [66, 86, 111]. Синбиотики необходимо разрабатывать с учетом специфики систем пищеварения, способов кормления и т.д. для каждого вида сельскохозяйственных животных.

В связи с вышеизложенным представляются актуальными исследования, направленные на разработку малоотходной технологии производства новых препаратов пробиотиков и пребиотиков и создание на их основе биологически активных комплексов (синбиотиков) для животноводства и птицеводства.

Цель и задачи исследований. Цель исследований заключалась в разработке технологии производства бесклеточного пробиотика из лакто- и споро-образующих бактерий, пребиотика и биологически активной добавки из высшего лечебного гриба, создании на их основе новых синбиотиков и оценке их эффективности в АПК РФ (животноводстве и птицеводстве).

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- разработать технологию производства бесклеточного пробиотика на основе бактерий Lactobacillus plantarum и Bacillus subtilis и препаратов из концентрированных бактериальных масс пробиотических бактерий L. plantarum и В. subtilis;

- разработать технологию производства препаратов из высшего лечебного гриба (ВЛГ) Fusarium sambucinum (пребиотика и БАД);

- экспериментально обосновать возможность малоотходной технологии производства препаратов, входящих в состав синбиотиков;

- разработать аппаратурное оформление и методику расчета технологической линии изготовления препаратов;

- разработать режимы сублимационного высушивания концентрированной бактериальной массы пробиотических бактерий L. plantarum и В. subtilis;

- определить эффективные условия проведения распылительного высушивания биомассы гриба;

- изготовить опытные партии препаратов (бесклеточный пробиотик, пребиотик и БАД) и провести их доклинические исследования;

- разработать рецептуры синбиотиков и исследовать их эффективность для крупного рогатого скота (КРС) и птицы.

Научная новизна работы. Научно обоснована и разработана технология производства новых препаратов (комплексный бесклеточный пробиотик, препараты из концентрированной бактериальной массы пробиотических бактерий, пребиотик и БАД из высшего лечебного гриба), обеспечивающая возможность осуществления малоотходного цикла.

Исследованы физико-химические и биологические свойства разработанных препаратов, установлены показатели и количественные характеристики их безопасности и активности. Обоснована целесообразность применения бесклеточной формы пробиотиков в зависимости от объекта (особенности строения желудочно-кишечного тракта различных видов животных), способа (выпаивание) и условий (на фоне антибиотикотерапии) их применения.

Определены параметры культивирования бактерий Ь. ркг^агит и состав питательной среды. Разработан режим сублимационного высушивания концентрированной бактериальной массы (КБМ) лактобактерий. Впервые для про- и пребиотиков разработана методика расчета технологической линии их производства.

Разработана рецептура новых синбиотиков (бесклеточный пробиотик + пребиотик и бесклеточный пробиотик + БАД), показана возможность их использования в качестве биологически активных кормовых добавок.

Установлена эффективность применения синбиотиков для молодняка птицы и КРС, обусловленная защитой животных при стрессовых ситуациях (вакцинация, переход на другой вид корма и др.), повышением продуктивности, усвояемости кормов, нормализацией микрофлоры желудочно-кишечного тракта.

Подана заявка № 2013100187 от 10.01.2013 на выдачу патента РФ «Биологически активный комплекс на основе бесклеточного пробиотика, кормовая композиция, его содержащая, и способ кормления молодняка сельскохозяйственных животных и птицы».

Практическая значимость работы. Разработанная малоотходная технология производства новых препаратов апробирована и внедрена на опытном производстве ВНИТИБП. В доклинических исследованиях показана безопасность и эффективность опытных серий препаратов. С учетом требований Правил вМР разработана и утверждена директором ВНИТИБП нормативная документация: на препараты - технологические регламенты и проекты стандартов организации (СТО); на синбиотики - проекты инструкций по применению.

Разработаны и предложены для практического использования в животноводстве и птицеводстве новые синбиотики, применение которых способствует повышению продуктивности животных и птицы, обеспечению гарантии качества, биологической и экологической безопасности как самой продукции, так и процесса ее производства.

Экономический эффект от применения новых синбиотиков составил при выращивании бройлеров 7,862 тыс.руб. (в расчете на 1000 голов), при выращивании телят - 111,83 рубля на 1 теленка.

Результаты исследований положены в основу разработки четырех Методических положений, утвержденных Россельхозакадемией в установленном порядке: по обоснованию режимов сублимационного высушивания пробио-тических препаратов; по расчету технологических линий производства про-биотических и симбиотических препаратов; по применению компьютерной программы Microsoft Office VISIO 2010 для построения технологических схем; по применению пакета Microsoft Office EXCEL 2010 для построения сложных технологических графиков (на примере процесса сублимационного высушивания препаратов-пробиотиков).

Полученные экспериментальные данные использованы для обоснования разработанной во ВНИТИБП и одобренной Президиумом Россельхозакаде-мии (протокол №4 от 21.04.2011) «Концепции научного обеспечения создания и развития региональных биологических предприятий по производству препаратов для защиты животных, растений и средств, повышающих эффективность функционирования агропромышленного комплекса Российской Федерации», а также в лекционном материале курсов повышения квалификации специалистов птицеводческих предприятий «Новые технологии и пути повышения эффективности производства мяса бройлеров» (ГНУ ВНИТИП Рос-сельхозакадемии, г.Сергиев Посад, 2012г.).

Основные положения работы, выносимые на защиту:

- технология производства бесклеточного пробиотика из Ь. р1ап1ашш и В. БиЫШБ, КБМ пробиотических бактерий, препаратов из высшего лечебного гриба (пребиотика и БАД);

- аппаратурное оформление технологической линии производства препаратов в малоотходном цикле;

- режимы сублимационного высушивания КБМ пробиотических бактерий и распылительного высушивания БАД;

- характеристика состава и показатели качества опытных партий препаратов (бесклеточный пробиотик, пребиотик и БАД);

- рецептуры синбиотиков на основе этих препаратов;

- эффективность синбиотиков для молодняка птицы и КРС.

Апробация результатов работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены: в виде ежегодных отчетов по темам госзаданий на Ученом совете и методической комиссии ВНИТИБП (2008-2012гг.); на Отделении ветеринарной медицины Россельхозакадемии (2011,2012 гг.); на семи Международных конференциях, проводившихся в Москве, Покрове, Щелково, Казани, Тюмени, Саратове (2008-2013 гг.).

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Обеспечение продовольственной и биологической безопасности страны является основной задачей АПК на современном этапе, что делает актуальными научные разработки, направленные на ее решение [77, 87, 138, 140].

В настоящее время организм человека и животных подвергается воздействию целого комплекса неблагоприятных факторов, влияющих на нормальное функционирование основных систем жизнедеятельности, среди которых влияние ухудшающейся экологической обстановки, увеличение количества стрессовых ситуаций, массовое бесконтрольное применение химиоте-рапевтических препаратов, в том числе и антибиотиков [51, 56, 74, 132, 141].

При профилактике болезней сельскохозяйственных животных и птицы необходимо учитывать :

- наличие комплекса инфекций в хозяйствах, на фоне которого борьба с отдельно взятой инфекцией становится неэффективной за счет снижения общего иммунного статуса организма животных [47];

- в условиях интенсивного промышленного ведения животноводства повышается роль болезней, обусловленных условно-патогенной микрофлорой и ассоциациями возбудителей [91, 92];

- большая концентрация животных создает благоприятные условия для быстрого перезаражения, при этом изменяется значение различных факторов передачи возбудителей от зараженных животных к восприимчивым [53, 73, 103, 174, 177, 181];

- неблагоприятные экологические факторы, недоброкачественные корма и несбалансированное кормление, плохое содержание животных приводят к резкому ухудшению качества продукции (мяса, молока, яиц) и несоответствию ее требованиям ФАО и ВОЗ [5, 6, 30, 73, 147, 149, 154, 155].

Интенсивный характер современных технологий выращивания сельскохозяйственных животных и птицы оказывает негативное влияние на микроэкологию желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), изменяя эволюционно сложившуюся в условиях свободного выгула структуру кишечного микробиотипа. Это служит одной из причин появления и распространения дисбак-териозов животных и птицы, стратегия и тактика терапии и профилактики которых с помощью только антибактериальных средств не всегда эффективна и безопасна.

Одним из современных подходов к решению проблемы является разработка, производство и применение новых экологически безопасных эффективных препаратов, способных обеспечить биологическую защиту животных [5,27, 90, 103, 158, 160-163].

Такие препараты должны обеспечивать:

- повышение физиологического и иммунного статуса организма животных;

- лечение и профилактику заболеваний молодняка и взрослых особей за счет защиты от патогенных и условно-патогенных возбудителей болезней ЖКТ;

- компенсацию в рационе кормления дефицита аминокислот, витаминов и микроэлементов, а также повышение степени усвоения кормов;

- токсико- и радиопротективного действие, снижающее влияние неблагоприятных экологических факторов (загрязнения окружающей среды нитратами, пестицидами, гербицидами, тяжелыми металлами и радионуклидами);

- повышение эффективности вакцинопрофилактики инфекций при ее использовании в комплексе оздоровительных мер;

- качество и безопасность продукции.

Это обусловило интенсивное развитие экобиотехнологий, в частности направление, связанное с разработкой и применением пробиотиков, пребиоти-ков и синбиотиков, как в здравоохранении, так и в ветеринарии [30, 46, 101, 107, 116, 123, 151-153, 159]. Такие лечебно-профилактические и ростости-мулирующие экологически чистые препараты физиологичны по своему действию, безвредны для животных, просты в наработке, дешевы, технологичны для группового применения, что особенно актуально для отечественного птицеводства, занимающего передовые позиции в АПК.

1.1. Современные особенности промышленного животноводства.

В промышленном производстве необходимо создавать такие условия содержания животных и птицы, чтобы обеспечить полную реализацию ее генетических возможностей. Как наиболее важные факторы, влияющие на эффективность отрасли, в настоящее время выделяют эпизоотическую ситуацию в хозяйстве, наличие и уровень стрессов, режимы кормления и поения.

Среди причин отхода животных и птицы, и в первую очередь молодняка, основное место занимают болезни, связанные с нарушением функций желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). На предприятиях с высокой концентрацией поголовья они являются основной причиной гибели молодняка. Сдвиги в количественном и качественном составе нормальной и условно-патогенной микрофлоры приводят к дисбактериозу, снижению усвояемости питательных веществ корма и, как следствие, к диарее и падежу [11, 42, 84, 116, 167].

Чаще всего этиологических факторов болезни несколько - ассоциация патогенов может быть представлена вирусами, бактериями, патогенными грибами, простейшими и другими паразитами в различных сочетаниях.

В большинстве случаев инфекционные болезни протекают в латентной и субклинической формах [11, 13]. Это явление приобрело массовый, эпизоотический характер и негативно влияет на течение ассоциированных инфекций, вызывает обострение разнообразных сопутствующих патологических процессов. Протекание заболевания в ассоциативной и смешанной формах затушевывает истинные причины болезни и усложняет эпизоотическую ситуацию.

В этом процессе также велика роль условно-патогенных микроорганизмов. К условно-патогенным относятся микроорганизмы, которые секретиру-ют суперантигены, постоянно присутствующие в условиях промышленнго содержания животных, ослабляют их иммунную систему, не вызывая при этом клинических признаков заболевания. Вследствие этого заболевания, вызываемые другими патогенами, протекают на фоне извращенного иммунного ответа и аутоаллергических реакций, что значительно осложняет их течение [78, 81, 84, 164-166]. Условно-патогенные микроорганизмы характеризуются многочисленностью, гетерогенностью популяций, участием в разных микробиоценозах. Гетерогенность выражена в устойчивости к антибиотикам, де-зинфектантам и физическим факторам, создаёт сложности при идентификации выделенных культур. Кроме того, популяции не только гетерогенны, но и изменчивы. В процессе проведения лечебно-профилактических мероприятий устойчивые варианты переходят в множественно устойчивые.

Нарушение микроэкологического равновесия кишечного биотопа под действием ряда экзогенных (антибиотики, вакцинация) и технологических факторов приводит не только к доминированию потенциально патогенных микробов. Ускоряются темпы изменчивости условно-патогенных микроорганизмов, усиливаются генетический обмен и скорость формирования клонов, несущих плазмиды лекарственной устойчивости и нередко включающих гены, детерминирующие адгезивные, цитотоксические и энтеротоксические свойства условно-патогенных бактерий.

Антибиотики (АБ) применяют в животноводстве и птицеводстве как для лечения и профилактики болезней (колибактериоза, респираторного мико-плазмоза, сальмонеллеза, диарреи ), так и в качестве стимуляторов роста (особенно в птицеводстве и свиноводстве). Терапевтические курсы АБ входят в технологию содержания бройлеров и свиней [1, 2, 166].

К кормовым антибиотикам относят препараты, при введении которых в рационы животных и птицы улучшается обмен веществ, повышается коэффициент использования кормов, активизируется резистентность организма.

В Европе АБ использовали в качестве стимуляторов (промоутеров) роста с 1950-х годов по 2006 год, когда кормовые АБ были запрещены. В связи с риском появления устойчивых штаммов бактерий в продуктах питания животного происхождения в странах Евросоюза стали вводить запреты на применение кормовых АБ. От использования АБ в лечебных целях отказаться в условиях промышленного животноводства и птицеводства невозможно, хотя их широкое использование также влияет на появление резистентных к ним возбудителей (в том числе и опасных для человека), особенно когда их применение становится результатом плохого менеджмента, несбалансированного кормления и низкого гигиенического статуса хозяйства.

В РФ в качестве кормовых (ростостимулирующих) препаратов разрешено использовать только антибиотики немедицинского назначения, не применяющиеся в ветеринарной практике как лечебные и профилактические средства. Наиболее часто применяемые кормовые АБ: Бацилихин (Россия), Био-вит-80 (Украина), Сал Карб (Бельгия), Флавомицин (Германия), Тилмовет премикс (Болгария) и др. Применение АБ в качестве стимуляторов роста в медицине неизвестно.

Важную роль в терапии основного заболевания и устранении факторов, вызвавших нарушение нормофлоры и ее функций, играют препараты, которые в настоящее время разделяют на 3 основные группы: пробиотики, пребиотики и синбиотики [30, 126, 127, 129, 150, 180-182].

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Провоторова, Олеся Владимировна

Результаты исследования эффективных условий распылительного высушивания биомассы гриба (п=3; Р=95%) опыта Параметры высушивания Потери, % Характеристика препарата

ТвХ5 °с ТцЫХ °с Мощн., КВТ Упод., л/ч Общий белок,% от асв (не менее 38) Остаточная влажность (ОВ), %

1 120 90-80 14 7 35 49,1 7,1

2 140 100-90 18 7 10 49,2 4,8

3 160 120-110 21,5 7 7 49,2 2,5

2.2.1.3. Аппаратурное оформление технологической линии изготовления препаратов в малоотходном цикле. Аппаратурное оформление технологической линии получения препаратов в малоотходном цикле включало разработку технологической схемы основных стадий процесса изготовления препаратов (рис. 7,11), подбор и характеристику необходимого оборудования, создание аппаратурной схемы изготовления препаратов (рис. 12,13).

Проделанная в этом плане работы послужила основанием для разработки методики расчета технологической линии производства пробиотических и симбиотических препаратов (ПиСП).

При разработке методики нами использованы инструкции по изготовлению и контролю биологических препаратов, разработки ВНИТИБП, опыт производства пробиотических и симбиотических препаратов (ПиСП) в условиях опытного производства института, а также опыт создания методик расчетов технологических линий в смежных отраслях промышленности.

Методика расчета технологической линии состоит из следующих разделов:

- выбор схемы технологического процесса производства препарата и ее обоснование;

- расчет материального потока основного процесса производства;

- выбор и расчет количества основного технологического оборудования.

Выбор схемы процесса производства относится не только к области технологии: из возможных вариантов нужно выбрать такую схему, которая наряду с высокими качественными показателями продукции обеспечивала бы наибольший экономический эффект. Экономическими критериями выбора варианта технологической схемы должны быть: сокращение длительности производственного цикла, уменьшение расхода сырья и энергии на единицу продукции, снижение технологических потерь и увеличение выхода продукции, обеспечение высокого качества готовой продукции, повышение производительности труда, снижение себестоимости продукции.

Схема процесса производства препарата должна быть оптимальной, учитывать современные достижения науки и опыт передовых предприятий.

Компоненты ЗС, вода

25 Г

Бесклеточный пробиотик контроль и склад готовой продукци

Посевная серия тй контроль т склад готовой продукции

Посевная серия

В.5иЫ на контроль и склад готовой продукции

Рис. 12. Аппаратурная схема изготовления бесклеточного пробиотика.

I - термостат; 2, 12 - биореактор для культивирования бактерий; 3,13 - фильтр грубой очистки; 4, 14 - установка для ультрафильтрации; 5, 10, 17 - емкости для смешивания; 6, 15, 18 - установка для фасования; 7, 19 - низкотемпературный холодильник; 8, 20 - сублимационная установка; 9,16, 21 -устройство для этикетирования;

II - шуттель-аппарат; 22 - емкость для изготовления питательной среды (ПС); 23 - емкость для изготовления ЗС; 24, 25 - парогенератор.

Пребиотик на конроль И склад готовой продукции

БАД

На контроль И склад Готовой продукции

Рис. 13. Аппаратурная схема производства пребиотика и БАД из гриба Б. ЗатЬистит 1 - термостат с качалкой; 2 — биореактор для культивирования гриба и автолиза биомассы; 3 — нутч-фильтр; 4 - установка для ультрафильтрации автолизата; 5,8 - устройство для фасования и укупоривания продукта; 6,9 - устройство для этикетирования продукта; 7 - распылительная сушилка; 10 - емкость для изготовления питательной среды; 11 - парогенератор.

Основу деятельности каждого предприятия составляет производственный процесс - процесс воспроизводства материальных благ и производственных отношений, производственный процесс является основой действий, в результате которых исходные материалы превращаются в готовую продукцию, соответствующую своему назначению.

В каждый производственный процесс входят основные и вспомогательные технологические процессы. Технологические процессы, обеспечивающие превращение сырья и материалов в готовую продукцию, называются основными.

Вспомогательные технологические процессы обеспечивают изготовление продуктов (полупродуктов), используемых для обслуживания основного производства, например, подготовка воды, воздуха и так далее.

Технологические процессы различаются по характеру изготавливаемой продукции, используемым материалам, применяемым методам и способам производства, организационному построению и другим признакам. Но при всем этом они имеют и ряд признаков, позволяющих объединить различные процессы в группы.

Общепринято технологические процессы разделять на механические, физические, химические, биологические и комбинированные.

При механических и физических процессах изменяются только внешний вид и физические свойства материала. Химические и биологические процессы приводят к более глубоким превращениям материала, вызывая изменение его первоначальных свойств. Комбинированные процессы представляют собой сочетание указанных процессов и являются наиболее распространенными в практике.

Технология промышленного производства биопрепаратов представляет собой комплекс взаимосвязанных физических, химических, биофизических, биохимических, физико-химических процессов. Все эти процессы протекают в большом числе разнотипного оборудования, связанного между собой материальными, энергетическими потоками и образуют технологическую линию. На технологической линии осуществляются технологические процессы, которые можно разделить на стадии.

Промышленное производство ПиСП состоит из следующих стадий:

- приготовление посевного материала;

- культивирование микроорганизмов;

- концентрирование;

- ресуспендирование;

- фасовка (розлив) препарата;

- глубокое замораживание;

- сублимационное высушивание препарата;

- укупорка и закатка флаконов с препаратом;

- этикетировка;

- контроль на стадиях производства и готового препарата;

- упаковка готовой продукции;

- хранение препарата.

К вспомогательным технологическим стадиям относятся:

- очистка и стерилизация воздуха и других газов;

- водоподготовка;

- подготовка и стерилизация посуды и оборудования;

- очистка и стерилизация жидких вспомогательных ингредиентов.

Технологический процесс изображается в виде функциональной блоксхемы производства препарата.

Функциональная схема показывает технологическую связь между основными стадиями данного процесса производства, каждая из которых состоит из основных технологических операций. Функциональная схема дает обобщенное представление о процессе производства в целом.

Для систематизации материала дается технологическая схема процесса производства по стадиям от получения посевного материала /биологического сырья/до выпуска готового препарата.

После разработки технологической схемы производства препарата, разрабатывается аппаратурно-технологическая схема промышленного производства. Для разработки аппаратурно-технологической схемы производства биопрепарата надо знать количественное значение по конечному продукту. По этой цифре подбирается все основное и вспомогательное оборудование и количество материалов и реагентов, которое необходимо для технологического процесса.

Аппаратурно-технологическая схема - графическое изображение процесса, в котором каждый элемент процесса /аппараты и машины/ представлен в виде условного общепринятого изображения, а технологические связи отображаются направленными линиями со стрелками, изображений выбирается, по возможности, малым, чтобы схема имела легко обозримый вид.

К схеме дается подробное описание стадий технологического процесса изготовления ПиСП. Процессы производства излагаются последовательно по стадиям и операциям с указанием технологических параметров р, т, выход) и краткой характеристикой технологического оборудования.

Материальный поток - последовательное перемещение сырья, материалов и полуфабрикатов по стадиям и операциям технологического процесса, обеспечивающее целенаправленное функционирование технологической линии.

Расчет материального потока производства дается на серию препарата с указанием производственных потерь на каждой стадии и операции технологического процесса.

За серию принимают количество препарата, выработанное из культу-ральной жидкости, полученной за один цикл культивирования микроорганизмов в одном биореакторе.

Для проведения расчета материального потока устанавливаются еле-дующие исходные данные: объем биореактора (Уб) м ; коэффициент заполнения (К3); оптическая концентрация микробных клеток в культуральной жидкости по (ОК млрд/мл); вводимые добавки (08) л, %; потери полуфабрикатов по стадиям (Пп) л, %; выход полуфабрикатов по стадиям (В) л; объем вакцины в одном флаконе или ампуле (Урасф.) л ; количество доз в одном флаконе или ампуле (а) доз.

Технологический расчет линии следует начинать с расчета основных показателей: объема питательной среды и добавок, объема инокулята, объема и выхода культуральной жидкости.

Выбор схемы технологического процесса производства ПиСП в значительной степени предопределяет подбор определенных видов основного технологического оборудования.

Выбор основного технологического оборудования проводится на основании его технических характеристик, технологических параметров и требований, предъявляемых к каждой стадии производства препаратов.

Технологическая линия комплектуется оборудованием, выпускаемым серийно предприятиями России, зарубежными фирмами и разрабатываемым с учетом производительности, эксплуатационных характеристик и требований производства.

Технико-экономическими критериями выбора оборудования являются:

- техническая и экономическая целесообразность использования оборудования для данной технологической операции;

- производительность труда рабочих, обслуживающих выбранное оборудование;

- условия труда с точки зрения удобства обслуживания, техники безопасности, санитарных условий;

- межремонтный период, удельные расходы топлива, электроэнергии, пара, холода;

- уровень механизации процесса;

- степень использования данного оборудования в поточной линии; обеспечение снижения производственных потерь материалов и готовой продукции;

- возможность автоматического контроля и регулирования процесса, осуществляемого на данном оборудовании.

В технологической линии выделяется ведущее технологическое оборудование. Ведущим оборудованием принято считать аппарат, производительность которого определяет выработку всей технологической линии. Таким оборудованием в технологической линии производства ПиСП является аппарат для производственного культивирования микроорганизмов - биореактор.

Для проведения расчета количества основного технологического оборудования устанавливаются исходные данные: з

2) Объем (V, м ) и коэффициент заполнения (К3) для емкостей; л

3) Производительность машин и установок ("^ЛО м /час; фл/час;

4) Время занятости оборудования (Т), час;

5) Фонд рабочего времени в году (Ф), час.

Для производства с прерывным процессом годовой (расчетный) фонд времени работы оборудования равен календарному фонду времени за вычетом выходных и праздничных дней и времени на капитальный и планово-предупредительный ремонт. Фонд времени исчисляется в часах, исходя из трехсменного режима работы и установленной продолжительности смен с учетом сокращения рабочего времени в предпраздничные дни и пятидневной рабочей недели.

Расчет начинают с определения количества циклов культивирования, необходимого для выполнения годового (планового) задания по выпуску препарата.

По результатам, изложенным в разделе 2.2.1, в соответствии с требованиями разработанного во ВНИТИБП ГОСТ Р 54763-2011 («Средства лекарственные для ветеринарии. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, согласования и утверждения») разработаны технологические регламенты изготовления препаратов.

2.2.2. Характеристика состава и показатели качества препаратов.

На опытном производстве (фото 1-8) изготовлены опытные серии препаратов, исследован их состав, определены показатели качества и их нормируемые значения.

Фото 1

П-201

Фото 5.

2.2.2.1. Бесклеточный пробиотик.

В механизме действия пробиотических микроорганизмов большое значение имеет подавление роста патогенной и условно-патогенной микрофлоры. Наличие в одном препарате метаболитов кислотообразующих бактерий нормальной микрофлоры (Lactobacillus plantarum) и спорообразующих бактерий (Bacillus subtilis) позволяет сочетать механизмы действия и тех, и других.

В опытах in vitro определена биологическая (антагонистическая) активность (АнтА) препарата в отношении патогенных микроорганизмов ЖКТ и в отношении микроорганизмов, выделенных в хозяйстве от больных послеродовыми эндометритами коров (п=10) (рис. 14).

Полученные результаты свидетельствуют, что:

- препарат обладает выраженным антагонизмом в отношении патогенных микроорганизмов ЖКТ;

- большинство штаммов микроорганизмов, выделенных от больных послеродовыми эндометритами коров, чувствительны к бесклеточному пробиотическому препарату. зо

26,3

Рис. 14. Антагонистическая активность беклеточного пробиотика в отношении патогенных микроорганизмов ЖКТ и микроорганизмов, выделенных хозяйстве от больных послеродовыми эндометритами коров.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Провоторова, Олеся Владимировна, 2013 год

1. Алексеев, И.А. Качество мяса и субпродуктов молодняка крупного рогатого скота при применении пробиотической добавки к корму бацилл / И.А. Алексеев, С.Г. Петрова // Ветеринарный врач. № 5. - 2012. - С. 63-66.

2. Андреева, A.B. Иммунобиологические изменения в организме телят под влиянием композиций фитопробиотиков и полисолей микроэлементов / A.B. Андреева, О.Н. Николаева // Достижения науки и техника в АПК. №4. -2008.-С. 36-39.

3. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П.Ашмарин, A.A. Воробьев // JL: Ленмедгиз, 1962. 180 с.

4. Байрамашвили, Д.И. Биотехнологические способы получения фармацевтических препаратов : автореф. дис. . д-ра хим. наук / Д.И. Байрамашвили -М., 2007.- 49с.

5. Бакулина, Л.Ф. Пробиотики на основе спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus и их использование в ветеринарии / Л.Ф. Бакулина, И.В. Тимофеев, Н.Г. Перминова и др. // Биотехнология. №2. - 2001. - С. 48-56.

6. Безгин, В.М. Основы промышленной иммунологии / В.М. Безгин, Быкова H.H., Козлов В.Е. и др. // Курск, изд-во КГСХА, 2011. 512с.

7. Белявская, В.А. Разработка технологии получения таблеточной формы препарата субалин / В.А. Белявская, Н.Г. Ромашева, И.Б. Сорокулова и др. // Биотехнология. № 2. - 2001. - С. 64-69.

8. Бирюков, В.В. Основы промышленной биотехнологии / В.В. Бирюков // М: Колос, Химия, 2004. 295 с.

9. Богданов, В.В. Биорегуляторы новой группы, выделенные из среды культивирования гриба Fusarium sambucinum / В.В. Богданов, Э.Ф. Фаткулина,

10. А.И. Григораш // Грибные биотехнологии. Раздел 17 : Тезисы докладов 3-го съезда микологов России. -М., 2012г. С. 369.

11. Бондаренко, В.М. Метаболитные пробиотики: механизмы терапевтического эффекта при микроэкологических нарушениях / В.М. Бондаренко // Consilium Medicum. №7 - 2005. - С. 437-443.

12. Булатов, A.C. Изыскание штамма микроба-антагониста в отношении сальмонелл / A.C. Булатов // Ветеринария. № 5. - 2003. - С. 26-29.

13. Бурнышева, Н.В. Пробиотики и сохранность телят в Пермском Крае / Н.В. Бурнышева // Достижения науки и техника в АПК. №3. - 2006. - С. 4042.

14. Вахитов, Т. Я. Перспективы создания пробиотических препаратов на основе «чувства кворума» у бактерий / Т.Я. Вахитов, J1.I-I. Петров, В.М. Бондаренко и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. № 3. -2006.-С. 105-113.

15. Волков, М.Ю. Метаболиты Bacillus Subtilis как новые перспективные пробиотические препараты / М.Ю. Волков, Е.И. Ткаченко, Е.В. Воробейчи-ков и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. № 2. -2007. - С. 75-80.

16. Гаврилова, H.H. Создание ассоциации из молочнокислых и пропионово-кислых бактерий, активной в отношении возбудителя колибактериоза и сальмонеллеза / H.H. Гаврилова, И.А. Ратникова, К. Баякышова и др. // Биотехнология. № 2. - 2005. - С.26-32.

17. Геркели М.Н. Организация двухстадийной распылительной сушки термолабильных материалов в щадящем температурном режиме / М.Н. Геркели // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. научного и практич. конгресса.- М., 2008.- С.ЗЗ.

18. Глушанова, H.A. Взаимоотношения пробиотических и индигенных лак-тобацилл хозяина в условиях совместного культивирования in vitro // H.A. Глушанова, Б.А. Шендеров // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. № 2. -2005. - С. 56-61.

19. ГОСТ Р 52249-2009. Правила производства и контроля лекарственных средств / М.: Стандартинформ, 2010.-139с.

20. ГОСТ Р 54065-2010. Средства лекарственные для животных пробиотиче-ские. Методы определения пробиотических микроорганизмов / М.: Стандар-тинформ, 2010. -32с.

21. ГОСТ Р 54763-2011 «Средства лекарственные для ветеринарии. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, согласования и утверждения».

22. ГОСТ Р ИСО 9001-2008. Система менеджмента качества. Требования / М.: Стандартинформ, 2008. 37с.

23. Государственная Фармакопея РФ. XII издание, часть 1. 2007. ст.14 «Ио-нометрия», п.З «Потенциометрическое определение pH».

24. Григораш, А.И. БАД «Флоравит Э» на основе экстрактов гриба Fusarium sambucinum эффективный иммуномодулятор и адаптоген / А.И. Григораш, J1.B. Погорельская, H.A. Бредихина и др. // http://www.floravit.ru/publications2006 immunomodulator.html - 2006.

25. Григораш, А.И. Биосинергетики биорегуляторы метаболизма широкого действия / А.И. Григораш, Г.И. Воробьева, А.Е. Кудрявцев и др. // Иммунопатология, Аллергология, Инфектология. - 2009. - №2. - С. 171.

26. Грязнева, Т.Н. Разработка глубинного способа культивирования бацилл -компонентов пробиотика Биод-5 / Т.Н. Грязнева // Биотехнология. № 5. — 2004.-С. 67-68.

27. Данилевская, Н.В. Лактобифадол для стимуляции продуктивности дойных коров / Н.В. Данилевская, В.В. Субботин, O.A. Вашурин и др. // Ветеринария. №2. - 2003. - С. 50-54.

28. Данилевская, Н.В. Фармакологические аспекты применения пробиотиков

29. H.B. Данилевская II Ветеринария. № 11. - 2005. - С. 6-10.

30. Дебабов, Д.В. Устойчивость к антибиотикам: происхождение, механизмы, подходы к преодолению / Д.В. Дебабов // Биотехнология. № 4. - 2012. -С.7-17.

31. Егорова, В.Н. Распылительная сушка основ и компонентов питательных сред / В.Н.Егорова, А.А.Нежута, А.С.Фоменко и др. // Научн. основы технологии промышленного производства вет. биол. препаратов : Сб. тезисов II Всесоюзн. Конф. М., 1981. - СЛ17-118.

32. Еникеев, Р.Т. Пробиотическая терапия препаратом «Ветом 1,1» для ранней терапии желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота / Р.Т. Еникеев, Р.Б. Хазипов, Ф.Ф. Яхин // Достижения науки и техника в АПК. №4. - 2007. - С. 48.

33. Закирова, C.B. Влияние Бактоцеллолактина на бактериальную и цитологическую картину половых органов коров / C.B. Закирова, Е.В. Паньков, A.A. Ивановский // Достижения науки и техника в АПК. №9. - 2007. - С. 28-29.

34. Зорина, В.В. Модуляция клеток иммунной системы лактобактериями / В.В. Зорина, Т.Н. Николаева, В.М. Бондаренко // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. № 6. - 2004. - С. 57-60.

35. Ивановский, A.A. Применение Руменофита при желудочно-кишечных заболеваниях телят / A.A. Ивановский, О.В. Белорыбкина // Достижения наукии техника в АПК. -№11.- 2006. С. 39-40.

36. Ижик, А.В. Изоляция гликолипидов из Lactococcus lactis subsp. cremoris БИМ В-493-Д и Lactobacillus plantarum БИМ В-495-Д / А.В. Ижик, Г.И. Новик, М. Пасьцяк и др. // Биотехнология. № 1. - 2012. - С. 31-42.

37. Канардов, П.П. Экспериментальные данные изучения токсических свойств Биоспорина-В на лабораторных моделях / П.П.Канардов, Д.А. Дев-ришов // Ветеринарная медицина №1. - 2001. - С. 15-16.

38. Катлинский, А.В. Курс лекций по биотехнологии / А.В. Катлинский, 10.0. Сазыкин, С.Н. Орехов и др. Москва, 2005. - 150с.

39. Кондрахип, И.П. Влияние пробиотика лактин-К на липидно-белковый обмен и яйценоскость кур / И.П. Кондрахин, Е.В. Репко // Ветеринария. № 8.-2012.-С. 42-44.

40. Корнеева, О.С. Биотрансформация сахарозы в изомальтозу природный заменитель сахара с пребиотическими свойствами / О.С. Корнеева, O.IO. Божко, Г.П. Шуваева // Биотехнология. - № 2. - 2008. - С. 46-50.

41. Красочко, П.А. Влияние бесклеточного пробиотического препарата «Ба-цинил» на иммунную систему телят при терапии респираторных заболеваний / П.А. Красочко, И.А. Красочко, Ю.В. Санжаровская // Ветеринарный врач. -№4.-2011.-С. 11-14.

42. Кузин, А.И. Пробиотик Спорметрин для профилактики и лечения при эндометрите коров / А.И. Кузин, Г.В. Борисова, Д.В. Губанов // Ветеринария. -№ 11.-2002.-С. 28-29.

43. Лаптев, Г.Ю. T-RFLP новый биотехнологический метод для оценки микрофлоры рубца крупного рогатого скота / Г.Ю. Лаптев, Л.А. Кряжевских // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. науч. конф. - Боровск, 2010. - С. 287-288.

44. Лоенко, H.H. Экстракт биомассы гриба Fusarium sambucinum в кормлении самок соболей / Н.Н.Лоенко, И.Е.Чернова, К.В. Харламов и др. // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. науч. конф.- Боровск, 2010.-С.290-291.

45. Лыкова, Е.А. Антибактериальная резистентность штаммов, входящих в состав препаратов пробиотиков / Е.А. Лыкова // Журнал микробиологии,эпидемиологии и иммунологии. № 2. - 2000. - С. 63-66.

46. Малик, Н.И. Ветеринарные пробиотические препараты / Н.И. Малик // Ветеринария. № 7. - 2001. - С. 46-51.

47. Методика проведения научных и производственных исследований по кормлению сельскохозяйственной птицы. Рекомендации / Под общей редакцией Фисинипа В.И. и Имангулова Ш.А. // Сергиев Посад: ВНИТИП, 2004.44 с.

48. Методические рекомендации по физико-химическому и биологическому контролю белковых гидролизатов для бактериологических питательных сред / под ред. Простякова А.П. / М., 1983.-27с.

49. Методические указания по определению уровня антител к вирусу ныо-каслской болезни в РТГА, утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 23.06.97 г., № 13-7-2/988.

50. Нежута A.A. Научное обоснование и методика разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов : автореф. дис. . д-ра биологических наук / А.А.Нежута М., 2003. -44с.

51. Нежута, A.A. Технические и технологические аспекты сублимационной сушки химфармпрепаратов / A.A. Нежута, Е.С. Сербис, Ю.В. Зудилип // Медицинский бизнес. № 2 (215). - 2012. - С. 24-25.

52. Неминущая, JI.А. Синбиотики белковый кормовой продукт 21 века / Л.А.Неминущая, Г.И.Воробьева, Э.Ф.Токарик и др. // Научные основы производства ветеринарных биол. препаратов : мат. Междун. научно-практич. конф. - Щелково, 2009.- С. 489-497.

53. Неминущая, Л.А. Технология производства и обеспечение качества син-биотиков ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ и АВИЛАКТ-ФОРТЕ, эффективность их применения в птицеводстве : автореф. дис. . д-ра биологических наук/ Л.А. Неминущая Щелково, 2011. -52с.

54. Николаева, Т.Н. Иммуномодулирующий эффект белковых фракций, выделенных из бифидобактерий / Т.Н. Николаева, В.М. Бондаренко, А.И. Николаева и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. № 2. - 2004. - С. 60-64.

55. Новик, Г.И. Получение нового продукта Бифибак и изучение его влияния на продукцию цитокипов / Г.И. Новик, A.A. Самарцев, Е.Ф. Конопля и др. // Биотехнология. № 1. - 2008. - С.64-71.

56. Ноздрин, Г.А. Профилактическая и ростостимулирующая эффективность жидких форм ветомов при применении их новорожденным телятам / Г.А. Ноздрин, А.Г. Ноздрин, А.Б. Иванова и др. // Достижения науки и техники АПК. -№ 10.-2010.-С. 60-62.

57. Овод, A.C. Профилактика диарей новорожденных телят пробиотиками / A.C. Овод, В.В. Мосейчук // Ветеринария. №.2. - 2007. - С. 6-7.

58. Овчинников, A.A. Изменения кишечной микрофлоры телят молочного периода выращивания при использовании в рационе сорбента и пробиотика / A.A. Овчинников, Л.В. Иванова, Е.В. Иванов // Ветеринарный врач. № 1. -2012.-С. 37-39.

59. Огнева, О.А. Влияние биологически активной добавки «Кормикс-СО» на здоровье и продуктивность животных / О.А. Огнева, П.Г. Нестеренко // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. науч. конф. Боровск, 2010. - С. 204-205.

60. Панин, А.Н. Биотехнологические аспекты изготовления сухих пробиоти-ческих препаратов / А.Н.Панин, Н.И.Малик, Ч.К. Авылов // Науч. основы пр-ва вет.биол.препаратов : сб. науч. тр.- Щелково, 2000.-С. 343-345.

61. Панин, А.Н. Проблема обеспечения продовольственной безопасности Российской Федерации и безопасности продовольствия / А.Н.Панин, В.А. Мельников//Ветеринария.-2011.-№ 1 С.12-15.

62. Панин, А.Н. Современный подход к регуляции безопасности пробиотиков / А.Н. Панин, Н.А. Малик, О.С. Илаев, Е.В. и др. // Ветеринария. № 1. -2011.-С. 41-44.

63. Пировано, Ф. Пробиотики: производственно-технологические аспекты / Ф.Пировано // Пробиотики и пробиотические продукты : тез. докл. Всерос. конф,- М., 1999.-С. 38.

64. Попов, А.Ю. Современный подход к аппаратурно-технологическому оформлению ферментационных процессов в биотехнологии / А.Ю.Попов // Биотехнология: вода и пищевые продукты: мат. научного и практич. конгресса.- М., 2008.- С.241-242.

65. Похиленко, В. Пробиотики на основе спорообразующих бактерий и их безопасность / В. Похиленко, В. Перелыгин // Химическая и биологическая безопасность. № 2-3. - 2007. - С. 20-41.

66. Римарева, J1.B. Перспективные биотехнологии в производстве биокорректоров пищи, БАД и кормов / J1.B. Римарева, Н.С. Погоржельская // Биотехнология: вода и пищевые продукты: мат. научного и практич. конгресса.- М., 2008.- С.367-268.

67. Самуйленко, А.Я. Задачи биотехнологии в реализации доктрины продовольственной безопасности Российской Федерации / А.Я.Самуйленко, А.А.Раевский, Н.А.Бондарева и др. // Ветеринария и кормление. 2011.- №2.- С.22-29.

68. Самуйленко, А.Я. Основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов / А.Я.Самуйленко, Е.А.Рубан М: Россельхозакадемия.-Т 1.- Т 2.- M.: РАСХН, 2000. - 781 с.

69. Сафронова, В.И. Методы консервации коллекционных культур микроорганизмов. Методические рекомендации / В.И.Сафронова, Ю.С.Оследкин, О.В. Свиридова и др. // С.-Петербрг, Пушкин, 2007.-С.6-9

70. Сидоров, М.А. Нормальная микрофлора животных и ее коррекция про-биотиками / М.А. Сидоров, В.В. Субботин, Н.В. Данилевская // Ветеринария.- № 11.-2000.-С. 17-22.

71. Смоленский В.И. Обеспечение качества производства и применения лекарственных средств в промышленном птицеводстве. ЛИ Межд. Ветер. Конгресс по птицеводству.- М.- 2007.- С.28-31.

72. Смолянинов, Ю.И. Влияние экспериментальной пробиотической добавкина молочную продуктивность коров / Ю.И. Смолянинов, Е.М. Сутулов, Д.С. Белый // Достижения науки и техника в АПК. -№11.- 2008. С. 40-44.

73. Современные способы сушки / Подготовлено по материалам книги «Инновационные технологии и оборудование фармацевтического производства» //Медицинский бизнес. № 2 (215). - 2012. - С. 26-30.

74. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / под ред. Биргера М.О. // М.: Медицина, 1982.- 462с.

75. Стегний, Б.Т. Перспективы использования пробиотиков в животноводстве / Б.Т. Стегний, С.А. Гужвинская // Ветеринария. № 11.- 2005. - С. 10-11.

76. Субботин, В.В. Опыт разработки и применения пробиотика ветеринарного назначения жвачным животным / В.В. Субботин, Н.В. Данилевская // Руководство. М.,2010. - 43с.

77. Субботин, В.В. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с симптомокомплексом диареи / В. В. Субботин, М.А. Сидоров // Ветеринария № 4. - 2001. - С. 3-7.

78. Сутулов, Е.М. Пробиотические кормовые добавки в рационе телят / Е.М. Сутулов, К.В. Киреева, В.А. Мартынов // Достижения науки и техники АПК. -№06.-2010.-С. 54-55.

79. Сушкова, В.И. Безотходная конверсия растительного сырья в биологически активные вещества / В.И. Сушкова, Г.И. Воробьева М.: ДеЛи принт, 2008.-216с.

80. Тараканов, Б.В. механизмы действия пробиотиков на микрофлору пищеварительного тракта и организм животных / Б.В. Тараканов // Ветеринария. -№ 1.-2001.-С. 47-54.

81. Тараканов, Б.В. Пробиотический потенциал Lactobacillus Casei Subsp. Pseudoplantarum при выращивании телят / Б.В. Тараканов, Т.А. Николичева // Ветеринария. № 3. - 2011. - С. 46-49.

82. Татаринов, С.С. Применение штаммов Bacillus Subtilis в профилактике послеродовых осложнений коров австрийской селекции в условиях Якутии / С.С. Татаринов, М.П. Неустроев, Н.П. Тарабукипа //Достижения науки и техники АПК. № 05. - 2011. - С. 66-68.

83. Татарчук, О.П. Характеристика пробиотического штамма Bacillus Subtilis CBS 117162 и кормовой добавки на его основе / О.П. Татарчук //Ветеринария. №4. - 2012. - С. 20-22.

84. Теоретические и практические основы технологии сублимационного высушивания биопрепаратов / Нежута A.A., Токарик Э.Ф., Самуйленко А.Я. и др. -Курск: Изд-во КГСХА, 2002.-239с.

85. Ш.Титова, Е.И. Положительные аспекты применения пробиотиков в коневодстве / Е.И. Титова // Естественные и технические науки. № 6(56). - 2011. -С. 93-95.

86. Тихонов И. В. Промышленное культивирование микроорганизмов : учебно-методическое пособие по биотехнологии / под ред. Тихонова И.В.-М.: МГАВМиБ, 2000, 60 с.

87. Тихонов И.В. Технология приготовления стабилизированной рабочей культуры в качестве посевного материала для глубинного культивирования / Тихонов И.В., Овсянников Ю.С., Романов В.Е // Ветеринарная медицина.-2010.-№3-4.-С.23-25.

88. Токаев, Э.С. Свойства единой синбиотической системы бифидобактерий с пробиотиком Fibregum / Э.С. Токаев, В.И. Ганина, A.C. Багдасарян, Ю.Г. Григорова, С.И. Перминов, Т.Ф. Вустина, И.Н. Мозговая, В.В. Макаров // Биотехнологя. № 6. - 2006. - С. 51-62.

89. Трокоз, В.А. Перспективы применения биологически активных веществ из куколок дубового шелкопряда в животноводстве / В.А. Трокоз // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. науч. конф. -Боровск, 2010. С. 229-230.

90. Урбах, В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях / Урбах В.Ю. // М.: Медицина, 1975. 242 с.

91. Федеральный закон РФ от 12 апреля 2010г. №61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств. Статья 12.- С.6-7.

92. Федюкина, Г.Н. Оценка свойств сухих бактерийных препаратов по данным метода ЯМР-релаксации / Г.Н. Федюкина, В.Я. Волков // Биотехнология. -№ 2. -2009. -С. 73-82.

93. Хартман, К. Планирование эксперимента в исследовании технологических процессов. / М: Мир, 1977. 552с.

94. Хорошилова, Ы.В. Иммуномодулирующее и лечебное действие пробио-тиков / Н.В. Хорошилова // Иммунология. № 6. - 2003. - С.352-356.

95. Шабанова, Н.А. Влияние метаболитов Lactobacillus Fermentum на ультраструктуру патогенных эшерихий / Н.А. Шабанова, В.В. Гостева, Н.В. Кли-цунова, В.М. Бондаренко // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. № 2. - 2009. - С. 3-6.

96. Шамилова, Т.А. Состояние кишечного микробиоценоза поросят при ми-котоксикозе на фоне применения пробиотика / Т.А. Шамилова, JI.E. Матро-сова, Ф.Г. Ахметов / Ветеринарный врач. № 1. - 2011. - С. 4-6.

97. Шолохова Е.И. Биофармацевтические аспекты пробиотиков / Шолохова Е.И. // Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования: мат. Междун. научно-практич. конф.- М.,2002.-С.64-65.

98. Щербаков, П.Н. Применение фитобациллина при отъеме поросят / П.Н. Щербаков // Ветеринария. № 10. - 2001. - С. 41.

99. Affitives, antibiotics and probiotics: Choices for the future // Poultry intern.-Vol. 35, №4.- 1996.-P. 34-39.

100. Bansal, S. Probiotics in health and disease / S.Bansal // J. Assoc. physicians.-2001.-№ 7.- P.735-741.

101. Barbosa, T.M. Screening for bacillus isolates in the broiler gastrointestinal tract / T.M. Barbosa et al. // Appl. Environ. Microbiol.- 2005.- Vol.71.-P.968-978.

102. Berg, R.D. Probiotics, prebiotics, or conbiotics / R.D. Berg // Trends Microbiol. 1998.-Vol. 6. - P.89-92.

103. Collins, M.D. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut / M.D. Collins // Am J. Clin. Nutr.-1999.- № 9.- P.1052-1057.

104. Crary, R.S. Effects of probiotics and prebiotics on blood lipids / R.S.Craiy, T. Christine, M.Williams // British Jornal of Nutrition.-1998.-Vol. 7.- P. 225-230.

105. De Valdez, G.F. Effect of drying medium on residual moisture content and lability of freeze dried lactic acid bacteria / G.F.De Valdez, G.S.De Jion, A.P. De Rmz Holgado et al. //Appl. Environ. Microbiol.- 1985.- № 2,- P. 413-415.

106. Earll, A. M. Ecology and genomics of Bacillus Subtilis / A. M.Earll, R.Losick, R. Ко Iter // Trends in Microbiology.-2006.-Vol. 16, № 6.-P. 269-275.

107. EFSA Technical guidance on the assessment of the toxigenic potential of Baccillus species used in animal nutrition // EFSA Journal. 2011. № 9 (11 ):2245. 13p.

108. Folwaczny, C. Probiotics for prevention of ulcerative colitis recurrence: alternative medicine added to standard treatment / C.Folwaczny // Gastroenterol.-2000.-Vol.38.-P.547-550.

109. Fuller, R. Probiotics and prebiotics: microtiora management for improved gut health / R.Fuller, G.R. Gibson // Clin. Microbiol. Infect.-1998.-№4.- P. 477-480.

110. Fuller, R. Probiotics in man and animals / R.Fuller // J. Appl. Bact.- 1989.-№ 66.- P.365-378.

111. Genetics and Biotechnology of Lactic Acid Bacteria / Ed. Gasson M.J. and de Vos W.M. Blackie Academic and Professional, Glasgow, 1996. - P.211-251.

112. Gibson, G.R. Aspects of in vitro and in vivo research approaches directed toward identifying probiotics and prebiotics for human use / G.R.Gibson, R.Fuller // J. Nutr.- 2000.-Vol.130, № 2,- P.391-395.

113. Gissen, A.S. Off probiotics, prebiotics and synbiotics / A.S. Gissen // ISS VRP'S Inc. Vit. Res. Prod. Newsletters. USA, 1995. - P. 111-117.

114. Glebocka, K. Gut health is a critical factor for litter quality / K.Glebocka // World Poultiy.-2008.-№ 12.-P.27-31.

115. Green, A.A. The role of probiotic in producing quality poultry products / A.A.Green, D.W.B Sainsbury.: XV Europ. Symp. Quality of Poultry Products. XV Europ. Symp. Quality of Poultry Meat.- Turkey, 2001.-P. 245-251.

116. Greiff, D. Applications of vacuum technigues to the freeze-drying of biological materials / D.Greiff// AlCh E Sym. Ser.-1972.-Vol.68, № 125.-P.7-15.

117. Hong, H.A. The use of bacterial spore formers as probiotics / H.A.Hong et al. // FEMS Microbiol. Rev.- 2005.-Vol.29.-P.813-835.

118. Hunter, J.O. A review of the role of the gut microflora in irritable bowel syndrome and the effects of probiotic / J.O.Hunter, J.A. Madden // Br. J. Nutr.- 2002,-Vol.88 (suppl. IV).-P.67-72.

119. Huovinen, P. Bacteriotherapy: the time has come / P.Huovinen // Br. Med. J. 2001. - Vol. 323. - P. 353-354.

120. Ishibashi, N. Probiotics and safety / N.Ishibashi, S.Ymazaki // Am. J. Clin. Nutr.-2001.- Vol.73 (suppl. III).- P.465-470.

121. Isolari, E. Probiotics: Effects on immunity / E.Isolari , Y.Sutas, P.Kankaanpaa et al. // Am J. Clin. Nutr. 2001. - Vol. 73, N 2. - Suppl. 1. - P. 444-460.

122. Isolauri, E. Probiotics: effects on immunity / E.Isolauri, Y.Sutas, P. Kankaan-paa et at. // J. Clin. Nutr.- 2001.- Vol.73 (suppl. II).- P.444-450.

123. Kailasapathy, K.A. Survival and therapeutic potential of probiotic organisms with reference to Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium spp. / K.A. Kailasapathy // Chin J. Immunol. Cell Biol.-2000.- № 78.- P. 80-84.

124. Kaur, I. P. Probiotics: potential pharmaceutical applications / I. P.Kaur, A.

125. Cyopra // Eur. J. Pharm. Sci. 2002. - Vol. 15, N 1. - P. 1-9.

126. Killen, M. Genetic modification of intestinol lactobacilli and bifidobacteria / M.Killen, M.Klatnhamm / /J. Mol. Biol.- 2000.- № 2.- P. 41-50.

127. Kirchgatterer, A. Natural therapy instead of chemistry. Probiotics in gastroenterology / A.Kirchgatterer, P. Knoflach // Acta Med. Austriaca.- 2004.- № 31 (l).-P 13-17.

128. Korotkova, E.I. Usage potential of microbal nature antioxidants in meat production / E.I.Korotkova, Y.A.Karbainov, O.A. Avramchik // Analytical and Bio-analytical Chemistry.- 2003.- V.375, № 3.- P.465-468.

129. Leary, A. NuPro: Giving broiler chicks a flying start to success / A.Leary: International Poultry Scientific Forum.- USA, 2007.-P.179.

130. Lebenthal, E. Probiotics an important therapeutic concept awaiting validation / E.Lebenthal, Y.Lebenthal // IMAJ.- 2002.-№4.-P.374-375.

131. Leclere, V. Characterization of a constitutive mycosubtilin overproducing Bacillus subtilis strain and its antagonistic activity / V.Leclere, M.Bechet, A.Adam et al. // Appl Environ Microbiol.- 2004.-Vol. 7l.-P.4577-4584.

132. Levesque, Justin. The innovation process and quality tools//Justin Leves-que, Y. Fred Walker // Quality Progress.-July, 2007.-P. 11-13.

133. Ltaf-ur-rahman. Probiotics as an immune enhancer in broilers / Ltaf-ur-rahman, Sarzamin khan, Daulat khan et all // Sarhad J. Agric.-2009.-Vol.25, №3.-P.457-462.

134. Maruta, Kiyoshi. Probiotics or antibiotics / Kiyoshi Maruta // World Poultry.-1999.-№3,-P. 112-127.

135. Midilli, M. The effects of enzyme and probiotic supplementaiton to diets on broiler performance / M.Midilli, S.D. Tuncer // Turk. J. Vet. Anim. Sci.- 2001.-№5.-P.895-903.

136. Morikawa, M. Beneficial bio film formation by industrial bacteria Bacillus subtilis and related species / M.Morikawa // J. of Bioscience and Bioengineer.-2006.-Vol.101, No.l.-P. 1-8.

137. Nanney, R.I. Nutritional digestibility value of yeast extract in male broiler chicks /R.I.Nanney, P.R. Ferket// International Poultry Scientific Forum.- USA, 2007.-P.135.

138. Obayshi, Y. Some factors affecting preservability of freeze-drying bacteria /

139. Y.Obayshi, S.Ota, S.Arai//J. Hyg. Camb.-1961-Vol.59, № 1.-P.77-91.

140. Ogawa, M. Inhibition of in vitro growth of Shiga toxin-producing E.coli O 157:H7 by probiotic Lactobacillus strains due to production of lactic acid / M.Ogawa, K.Shimizu, K.Nomoto // Int. J. Food Microbiol.- 2001.- № 21.- P. 135140.

141. Panda, A.K. Growth, carcass characteristics, immunocompetence and response to Escherichia coli of broilers fed diets with various levels of probiotic / A.K.Panda, M.R.Reddy, S.V.R. Rao et al. // Archiv fur Geflugelkunde.- 2000.-Vol. 64.-P.152-156.

142. Papagianni, M. Ribosomalli synthesized peptides with antimicrobial properties: biosynthesis, structure, function and application / M.Papagianni // Biotechnol. Adv. 2003,21 (6): 465-499.

143. Perdigon, G. Lactic acid bacteria and their effect on the immune system / G.Perdigon, R.Fuller, R.Raya // Curr. Issues Intes. Microbiol.- 2001.-№2.-P.27-42.

144. Petrochkongkaew, A. Isolation of Bacillus spp. From Thai fermented soybean (Thua-nao): screening for aflatoxin B 1 and ochratoxin A detoxification / A.Petrochkongkaew, P.Taillandier, P.Gasaluck et al. // J. Appl. Microbiol.-2008.-№ 104,- P.1495-1502.

145. Reid, G. Probiotics for urogenital health / G.Reid // Nutr. Clin. Care.- 2002.-№5.-P.3-8.

146. Ricca, E. Bacterial spore formers: probiotics and emerging applications / E.Ricca, et al., eds. Horizon Scientific Press, 2004.- P.35-44.

147. Roberfroid, M.B. Prebiotics: preferential substrates for specific germs? / M.B. Roberfroid // Am. J. Clin. Nutr.- 2001.-Vol.73(suppl. II).-P.406-409.

148. Roberfroid, M.B. Prebiotics and probiotics: are they functional foods? M.B. Roberfroid//Am. J. Clin. Nutr.- 2000.-Vol.71, №6.-P. 1682-1687.

149. Setlow, P. Spores of Bacillus subtilis: their resistance to and killing by radiation, heat, and chemicals / P.Setlow // J. Appl. Microbiol.-2006.- September; 101(3).-P. 514-525.

150. Shanahan, F. Probiotics in inflammatory bowel disease / F.Shanahan // Gut.-2001.-Vol.48.-P.609.

151. Vanbelle, M. New probiotics and application of them in veterinary science and medicine / M.Vanbelle // Ann. Microbiol.-2000.-Vol. 140a, №8.- P. 251-253.