Изучение антиноцицептивной, антиэкссудативной активности и иммунотропных свойств новых производных α-цианотиоацетамида тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Олейник Ирина Сергеевна

• Олейник Ирина Сергеевна
• кандидат наук
• 2024

Оглавление диссертации кандидат наук Олейник Ирина Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Механизмы действия, преимущества и недостатки применяемых в настоящее время болеутоляющих и противовоспалительных лекарственных

препаратов

1.2. Современные направления поиска новых обезболивающих и

противовоспалительных средств

1.3 Химическое строение, фармакофоры и биологические свойства производных а-цианотиоацетамида

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Материалы исследований

2.2 Методы исследований

2.2.1 Оценка антиноцицептивной активности производных а-цианотиоацетамида в тесте горячей пластины

2.2.2 Изучение антиноцицептивной активности производных а-цианотиоацетамида в тесте тепловой иммерсии хвоста

2.2.3 Исследование антиноцицептивной активности производных а-цианотиоацетамида в тесте орофациальной тригеминальной боли

2.2.4 Оценка антиноцицептивной активности производных а-цианотиоацетамида в формалиновом тесте

2.2.5 Изучение антиэкссудативной активности производных а-цианотиоацетамида в декстрановом тесте

2.2.6 Исследование антиэкссудативной активности производных а-цианотиоацетамида в тесте острого формалинового отека лапы

2.2.7 Органометрические методы

2.2.8 Оценка острой пероральной токсичности отдельных производных а-цианотиоацетамида

2.2.9 Статистические методы, применяемые в исследованиях

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 СИНТЕЗ ВИРТУАЛЬНЫЙ БИОСКРИНИНГ И ПРЕДИКТОРНЫЙ АНАЛИЗ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ а-ЦИАНОТИОАЦЕТАМИДА Ш SILICО

3.2 ИЗУЧЕНИЕ АНТИНОЦИЦЕПТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНЫХ а-ЦИАНОТИОАЦЕТАМИДА

3.2.1 Результаты исследования антиноцицептивной активности производных а-цианотиоацетамида в тесте горячей пластины

3.2.2 Оценка антиноцицептивной активности производных а-цианотиоацетамида в тесте тепловой иммерсии хвоста

3.2.3 Изучение показателей антиноцицептивной активности производных а-цианотиоацетамида в тесте орофациальной тригеминальной боли

3.2.4 Исследование антиноцицептивной активности производных а-цианотиоацетамида в формалиновом тесте

3.3 ОЦЕНКА АНТИЭКССУДАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНЫХ а-ЦИАНОТИОАЦЕТАМИДА

3.3.1 Антиэкссудативная активность производных а-цианотиоацетамида в декстрановом тесте

3.3.2 Изучение антиэкссудативной активности производных а-цианотиоацетамида в тесте острого формалинового отека лапы

3.4 ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНОТРОПНЫХ СВОЙСТВ ПРОИЗВОДНЫХ а-ЦИАНОТИОАЦЕТАМИДА

3.4.1 Оценка органометрических показателей тимуса при хроническом применении производных а-цианотиоацетамида

3.4.2 Оценка органометрических показателей селезенки при хроническом применении производных а-цианотиоацетамида

3.5 ИЗУЧЕНИЕ ОСТРОЙ ПЕРОРАЛЬНОЙ ТОКСИЧНОСТИ ПРОИЗВОДНЫХ а-ЦИАНОТИОАЦЕТАМИДА

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение антиноцицептивной, антиэкссудативной активности и иммунотропных свойств новых производных α-цианотиоацетамида»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследований

На протяжении многих лет проблема купирования боли не утрачивает своей актуальности и в настоящее время является предметом множества исследований на междисциплинарном уровне [94].

Учеными были проведены эпидемиологические исследования последних лет, свидетельствующие о том, что в городах Российской Федерации, а также многих странах Европы, Англии и Соединенных Штатах Америки от болевого синдрома страдает 7-64% всего населения. Анализируя данные, которые были представлены 188 странами мира, исследователями выявлено, что болевой синдром различного характера в структуре глобального бремени острых и хронических заболеваний занимают лидирующее место во всех странах, приводящий на протяжении последних двадцати лет к ухудшению здоровья и значительному снижению качества жизни миллионов людей на планете.

Антиноцицептивный эффект оказывают лекарственные средства (ЛС) различных фармакологических групп: наркотические и ненаркотические анальгетики, нестероидные противовоспалительные средства (НПВС), спазмолитические препараты, холиноблокаторы, местные анестетики, антидепрессанты и т.д. На современном фармрынке представлена разнообразная номенклатура лекарственных препаратов (ЛП), применяемых для купирования болевого синдрома. Данный факт позволяет пациенту с тягостным ощущением боли переключаться с одного ЛП на другой, учитывая различные механизмы действия, дозировки, способы применения, а также удобные лекарственные формы (ЛФ) для больного. На май 2015 года по полученным данным независимого исследовательского центра «DSM Group: анализ фармацевтического рынка» было показано, что группа ЛС, оказывающих болеутоляющий эффект, а именно нестероидные противовоспалительные

препараты (НПВП), оказалась одной из самых популярных на фармацевтическом рынке [17, 20, 61].

Начиная с 1897 года, НПВС получили особый статус в фармацевтической промышленности, который сохраняется и на сегодняшний день. Исходя из анализа оборота ЛС в аптечных учреждениях, можно утверждать, что НПВП по частоте приобретения и применения занимают II место после химиотерапевтических средств биологического происхождения и их синтетических аналогов. При этом только часть пациентов приобретают анальгетические препараты по назначению врача, получая соответствующий рецепт и конкретную схему лечения [99, 123]. Остальные же используют безрецептурные препараты выбора данной группы без наблюдения медицинского работника, что может привести к бесконтрольному применению данных ЛС, и, как следствие, развитию побочных эффектов и осложнений [72]. Согласно статистике, около 34,6% случаев госпитализаций в Москве, связанных с острым желудочно-кишечным кровотечением, были вызваны приемом НПВП. Пациенты, страдающие от различных ревматических заболеваний и принимающие НПВП, подвержены риску перфорации язвы и кровотечения, что может привести к смерти. Перфорация язвы и кровотечение могут быть причиной смерти больных, страдающих различными ревматическими заболеваниями и в то же время принимающих НПВП [89]. Помимо этого, с применением НПВС ассоциируется большой спектр других нежелательных реакций (нефротоксичность [46], гепатотоксичность [38, 87], гематотоксичность [47], кардиотоксичность [33, 67] и иные).

В современном мире актуален и своевременен поиск новых антиноцицептивных медикаментозных средств, превосходящих по болеутоляющей активности существующие на фармрынке НПВС. При фармакотерапии необходимо учитывать соотношение «польза/риск» (эффективности и безопасности фармакологических эффектов, а также минимизации спектра нежелательных реакций и противопоказаний).

Подводя итоги вышесказанного, можно утверждать о насущной необходимости синтезировать новые соединения, обладающие антиноцицептивной и антиэкссудативной эффективностью, а также проводить доклинические и клинические их исследования. Данные препараты должны быть доступны с экономической точки зрения.

Степень разработанности темы

Совершенствование обезболивающих ЛП происходит в различных направлениях развития медицины, начиная от поиска новых химических формул и заканчивая созданием наиболее удобных фармацевтических лекарственных форм.

В настоящее время ведутся активные исследования в направлении поиска новых высокоэффективных антиноцицептивных, антиэкссудативных лекарственных средств, имеющие различное химическое строение [19, 49, 107].

В современном мире определенной перспективой для создания новых лекарственных средств характеризуются новые производные

а-цианотиоацетамида. Имеющиеся результаты исследований указывают на высокую активность указанных соединений относительно двух вирусов (Клещевой вирусный энцефалит и Powassan virus), а также на их антивирусную активность против ВИЧ. Кроме того, проведены исследования адаптогенного действия новых производных и изучено их влияние на течение сахарного диабета [37, 83, 88].

Считается, что в любую терапевтическую схему лечения того или иного заболевания должно входить как лечение основного заболевания, так и устранение болевого синдрома. Исходя из этого, важное место в развитии фармацевтической промышленности занимает разработка, исследования и, в конечном итоге, введения в медицинскую практику высокоэффективных и безопасных новых антиноцицептивных и антиэкссудативных ЛП.

Цель исследований

Изучить эффективность новых оригинальных производных а-цианотиоацетамида в качестве антиноцицептивных и антиэкссудативных средств, а также исследовать возможные иммунотропные свойства производных а-цианотиоацетамида.

Задачи исследований

1. Выявить антиноцицептивную активность синтезированных новых производных а-цианотиоацетамида в тесте горячей пластины.

2. Изучить болеутоляющую активность производных а-цианотиоацетамида в тесте тепловой иммерсии хвоста.

3. Исследовать анальгетические свойства производных а-цианотиоацетамида в тесте орофациальной тригеминальной боли.

4. Установить антиноцицептивные свойства синтезированных производных а-цианотиоацетамида в формалиновом тесте.

5. Изучить антиэкссудативные свойства производных а-цианотиоацетамида в декстрановом тесте.

6. Исследовать антиэкссудативную активность производных а-цианотиоацетамида в тесте острого формалинового отека лапы.

7. Оценить острую пероральную токсичность отдельных производных а-цианотиоацетамида.

8. Выявить возможные иммунотропные свойства новых производных а-цианотиоацетамида.

Научная новизна исследований

В ходе проведения различных экспериментальных исследований на лабораторных крысах, были впервые определены новые соединения,

проявляющие антиноцицептивную и антиэкссудативную активности в ряду новых оригинальных соединений производных а-цианотиоацетамида.

Максимально выраженной антиноцицептивной активностью обладают четыре вещества с лабораторными шифрами Д02-133 (5-суапо-Ы-(2,4-dicЫorophenyl)-4-(2-furyl)-2-methyl-6-({2-[(3-methylphenyl)ammo]-2-oxoethyl}thю)-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide), d02-168 (5-cyano-N-(2,4-dichlorophenyl)-6-({2-[(4-fluorophenyl)amino]-2-oxoethyl}thio)-4-(2-furyl)-2-methyl-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide), d02-122 (5-cyano-N-(2,4-dicЫorophenyl)-4-(2-fшyl)-2-methyl-6-[(2-охо-2- {[2-(trifluoromethyl)phenyl]amino} ethyl)thio] - 1,4-dihydropyridine-3 -carboxamide) и d02-123 (5-cyano-N-(2,4-dichlorophenyl)-4-(2-furyl)-2-methyl-6-[(2-охо-2- {[3-(trifluoromethyl)phenyl]amino} ethyl)thio] - 1,4-dihydropyridine-3 -carboxamide), превосходящей таковую у метамизола натрия в 1,35-4,69 раза.

Лидерами в плане противовоспалительной и антиэкссудативной активности являются образцы новых гетероциклических соединений из группы производных а-цианотиоацетамида с лабораторными шифрами d02-123, d02-128 (5-суапо-Ы-(2,4-dichlorophenyl)-6-({2-[(3,5-dimethylphenyl) атто^-охоеШу^Ыо^-^-Ш^)-2-methyl-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide), d02-133, которые эффективнее препаратов сравнения (нимесулида, индометацина и кислоты ацетилсалициловой) в 1,09-4,45 раза.

В процессе исследований возможной иммунотропной активности новых образцов а-цианотиоацетамида, сравнивая органометрические показатели тимуса и селезенки при их применении с аналогичными значениями у животных контрольной группой, а также показатели гуморального и клеточного иммунитета, установлено отсутствие иммунодепрессивных свойств у образцов d02-123, d02-122 и d02-168.

С помощью метода определения класса острой токсичности выявлено отсутствие летальности у крыс, получавшие восемь новых образцов производных а-цианотиоацетамида с лабораторными шифрами d02-123, d02-122, d02-168, d02-133, d02-128, d02-149 (6-[(2-апШпо-2-охое%1)Шю]-5-суапо^-(2,4-dichlorophenyl)-4-(2-furyl)-2-methyl-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide), d02-141

(ethyl 2-[({[3-cyano-5-{[(2,4-dicMorophenyl)ammo]carbonyl}-4-(2-furyl)-6-methyl-1,4-dihydropyridm-2-yl]tMo}acetyl)ammo]-4,5,6,7-tetrahydro-1-benzothiophene-3-carboxylate) и d02-139 (5-cyano-N-(2,4-dichlorophenyl)-4-(2-furyl)-6-({2-[(4-methoxyphenyl)amino]-2-oxoethyl}thio)-2-methyl-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide) в наибольшей дозе, введение которой в организм крысы не вызывает гибели (2000 мг/кг), что позволило отнести их к 5 классу токсичности.

Теоретическая и практическая значимость исследований

Полученные экспериментальные данные подтверждают перспективность поиска соединений, обладающих антиноцицептивными и антиэкссудативными эффектами с низкой токсичностью и высокой безопасностью в ряду производных а-цианотиоацетамида.

Результаты представленной научно-исследовательской работы являются фундаментальным основанием для дальнейших исследований фармакологических свойств (противовоспалительных, болеутоляющих, антипиретических, гипокоагулянтных и др.) производных а-цианотиоацетамида, для создания новых эффективных и безопасных лекарственных средств.

Методология и методы исследований

Проведенные экспериментальные исследования выполнены на базе федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» и федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Луганский государственный медицинский университет имени Святителя Луки» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Эксперименты выполнены при финансовой поддержке научно-исследовательской работы в рамках государственного задания Минобрнауки

России по теме: «Новые гетероциклические производные метиленактивных нитрилов, тиоамидов и селенамидов: синтез, свойства и биологическая активность» (шифр «FREE-2023-0002»).

Все манипуляции с лабораторными животными осуществляли в соответствии с принципами биоэтики, правилами лабораторной практики (GLP), требованиями ФЗ РФ от 14.05.1993 N 4979-1 «О ветеринарии» (с изменениями от 02.07.2021), директивы 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского Союза «О защите животных, используемых в научных целях», ГОСТа №33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными».

Исследования реализованы на белых лабораторных крысах обоего пола массой 190-240 г. Представленная работа по исследованию антиноцицептивных и антиэкссудативных свойств а-цианотиоацетамида включает в себя несколько экспериментальных моделей: тест Эдди и Леймбаха (горячая пластина), тест тепловой иммерсии хвоста, орофациальной тригеминальной боли, Formalin Test (формалиновый тест), декстрановый тест и острый формалиновый отек задней конечности крысы.

В настоящем экспериментальном исследовании были применены экспериментальные (моделирование, собственно эксперимент, последующее наблюдение и сравнение полученных данных), биохимические (определение показателей клеточного и гуморального иммунитета), органометрические (определение показателей массы, длины, ширины и толщины селезенки и тимуса), методы виртуального моделирования (проведение виртуального биоскрининга), а также статистические методы по непараметрическим критериям сравнения.

Внедрение результатов научных исследований

Результаты диссертационной работы внедрены в учебно-методическую и научно-исследовательскую деятельность кафедры фармакологии и клинической фармакологии и НИИ Фармакологии живых систем НИУ «БелГУ», а также

кафедры фундаментальной и клинической фармакологии ФГБОУ ВО ЛГМУ им. Свт. Луки Минздрава России.

Положения, выносимые на защиту

1. Антиноцицептивная активность у новых соединений производных а-цианотиоацетамида с шифрами Д02-133 (5-cyano-N-(2,4-dichlorophenyl)-4-(2-furyl)-2-methyl-6-({2-[(3-methylphenyl)amino]-2-oxoethyl}thio)-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide), d02-168 (5-cyano-N-(2,4-dicЫorophenyl)-6-({2-[(4-fluorophenyl)ammo]-2-oxoethyl}tЫo)-4-(2-furyl)-2-methyl-1,4-dihydropyridme-3-carboxamide), d02-122 (5-cyano-N-(2,4-dicЫorophenyl)-4-(2-fшyl)-2-methyl-6-[(2-охо-2- {[2-(trifluoromethyl)phenyl]amino} ethyl)thio] - 1,4-dihydropyridine-3 -carboxamide) и d02-123 (5-cyano-N-(2,4-dicЫorophenyl)-4-(2-fшyl)-2-methyl-6-[(2-охо-2- {[3-(trifluoromethyl)phenyl]amino} ethyl)thio] - 1,4-dihydropyridine-3 -carboxamide) превосходит таковую у метамизола натрия в 1,35-4,69 раза.

2. Антиэкссудативные и противовоспалительные свойства у соединений d02-123 (5-cyano-N-(2,4-dichlorophenyl)-4-(2-furyl)-2-methyl-6-[(2-oxo-2-{[3-(trifluoromethyl)phenyl]amino}ethyl)thio]-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide), d02-128 (5-cyano-N-(2,4-dichlorophenyl)-6-({2-[(3,5-dimethylphenyl) атто]-2-oxoethyl}thio)-4-(2-furyl)-2-methyl-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide) и d02-133 (5-cyano-N-(2,4-dichlorophenyl)-4-(2-furyl)-2-methyl-6-({2-[(3-methylphenyl)amino]-2-oxoethyl}thio)-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide) превосходят препараты сравнения (нимесулид, индометацин и кислоту ацетилсалициловую) в 1,09-4,45 раза.

3. Новые гетероциклические соединения из группы производных а-цианотиоацетамида с лабораторными шифрами d02-123 (5-суапо-Ы-(2,4-dichlorophenyl)-4-(2-furyl)-2-methyl-6-[(2-oxo-2-{[3-

(trifluoromethyl)phenyl]amino}ethyl)thio]-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide), d02-122 (5-cyano-N-(2,4-dichlorophenyl)-4-(2-furyl)-2-methyl-6-[(2-oxo-2- {[2-

(trifluoromethyl)phenyl]amino}ethyl)thio]-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide) и d02-

168 (5-cyano-N-(2,4-dichlorophenyl)-6-({2-[(4-fluorophenyl)amino]-2-oxoethyl}thio)-4-(2-furyl)-2-methyl-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide) не вызывают изменений морфологических показателей органов иммуногенеза при хроническом применении на протяжении 14 дней.

4. Восемь исследуемых новых производных а-цианотиоацетамида относятся к малотоксичным соединениям (5 класс токсичности).

Личный вклад

Автором проведено изучение и анализ литературных источников по теме исследования, как зарубежных, так и отечественных. Разработан непосредственно дизайн экспериментов по оценке антиэкссудативной и антиноцицептивной активности новых производных а-цианотиоацетамида. Реализованы экспериментальные исследования, позволяющие оценить иммунотропную фармакологическую активность. Оценены острая и хроническая пероральная токсичность исследуемых оригинальных соединений новых производных а-цианотиоацетамида.

Автором проанализированы полученные данные исследований. Проведена интерпретация, статистическая обработка результатов оценки эффективности дериватов а-цианотиоацетамида. На основе всех данных была произведена формулировка выводов. По результатам диссертационной работы вышли в печать научные публикации.

Степень достоверности и апробация работы

Представленные научные исследования по изучению фармакологических свойств новых производных а-цианотиоацетамида (антиноцицептивных и антиэкссудативных), основаны на необходимом объеме полученных экспериментальных данных. Применены современные методы научно-исследовательской работы с использованием высокотехнологического

оборудования, инновационных средств виртуального биоскрининга, статистического анализа полученных данных на основе непараметрических критериев сравнения и достоверности.

Результаты и основные положения диссертационного исследования получили апробацию в докладах, сделанных на следующих конференциях: XVII международный научный конгресс «Рациональная фармакотерапия» (Санкт-Петербург, 13-15 октября 2022); дистанционная научно-практическая конференция студентов и молодых ученых «Инновации в медицине и фармации -2022» (Минск, октябрь 2022); LXXXШ научно-практическая конференция с международным участием «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины - 2022» (Санкт-Петербург, апрель 2022); 87 международная научная конференция студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность» (Курск, 20-21 апреля 2022); VII Всероссийская научно-практическая конференция студентов и молодых ученых, посвященная памяти доктора химических наук В.В. Лукова «Химия: достижения и перспективы» (Ростов-на-Дону, 19-21 мая 2022); II международная научно-практическая конференция «Актуальные проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики» (Кемерово, 20 мая 2022); VI Дальневосточный медицинский молодежный форум «Актуальные вопросы современной медицины» (Хабаровск, 3-15 октября 2022); международная научно-практическая конференция «Пациент. Врач. Лекарство» (Казань, 30-31 марта 2023); 84-я межрегиональная научно-практическая конференция с международным участием студенческого научного общества им. профессора Н.П. Пятницкого (Краснодар, 26-27 апреля 2023); LXXXIV научно-практическая конференция с международным участием «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины - 2023» (Санкт-Петербург, апрель 2023); научно-практическая конференция с международным участием «Новые горизонты» (Брянск, 14 апреля 2023); 81-я международная научно-практическая конференция молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Волгоград, 19-21 апреля 2023); XXVI международная медико-биологическая

конференция молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина - человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 22 апреля 2023); 77-я Всероссийская научно-практическая конференция студентов и молодых ученых с международным участием, посвященная 100-летию со дня рождения профессора Н.П. Пампутиса «Актуальные вопросы медицинской науки» (Ярославль, 24 апреля 2023); 80-я международная научно-практическая конференция молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Волгоград, 27-29 апреля 2022).

Публикации

По результатам проведенных исследований автором опубликовано 27 печатных работ. 3 работы представлены в рецензируемых научных журналах, включённых ВАК при Минобрнауки России в список изданий, рекомендуемых для опубликования основных научных результатов диссертаций на соискание учёной степени кандидата наук, индексируемых в международных базах данных GeoRef и Scopus.

Объем и структура диссертации

Структура диссертационной работы состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, глава результатов собственных исследований, обсуждение результатов исследований, заключение, выводы, список сокращений и условных обозначений, список литературы, содержащий 124 источников, включая 27 иностранных. Изложена на 151 странице машинописного текста и включает 23 таблицы и 29 рисунков.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Механизмы действия, преимущества и недостатки применяемых в настоящее время болеутоляющих и противовоспалительных лекарственных

препаратов

В современной медицине болевой синдром и его рациональная фармакотерапия является одной из самых актуальных проблем. Поэтому механизмы возникновения и распространения боли, а также принципы антиноцицептивной терапии могут быть исследованы более досконально. Понимание феномена и сущности боли, знание механизмов, осуществляющих регуляцию болевой чувствительности и четкое представление об этиологии и патогенезе болевых синдромов, являются залогом успешной фармакотерапии. В различных областях медицины исследованы и внедрены многочисленные методы лечения пациентов с болевыми синдромами всевозможной этиологии [32].

Феликсом Хоффманом (Bayer Industry, Германия) в 1830-х годах были исследованы салицилаты на основе ивовой коры, а затем синтезирована кислота ацетилсалициловая (аспирин). Начиная с 1897 года, НПВС получили особый статус в фармацевтической промышленности, который сохраняется и до настоящего времени.

Применение населением НПВС имеет тенденцию к возрастанию. В Великобритании зарегистрировали около 15 млн. назначений НПВС в год, а в США ежегодно назначается и выписывается 111 млн. рецептов на НПВП. Приблизительно 36 млн. человек принимают безрецептурные лекарственные средства данной группы [67].

Противовоспалительные лекарственные средства условно можно разделить на 3 группы:

А. Глюкокортикостероиды (ГКС) - противовоспалительные средства стероидной структуры (СПВС); Б. НПВС;

В. Противоревматоидные средства (медленно действующие).

ГКС по своему механизму действия ингибируют фосфолипазу А2 (PLA2), чем нарушается синтез простагландинов (ПГ). Данная группа ЛП обладает иммунодепрессантным действием, это обуславливает их частое применение при аутоиммунных заболеваниях, которые сопровождаются воспалительными реакциями (системная красная волчанка, бронхиальная астма, экзема и т.д.). Однако при длительном применении ГКС развивается обширный ряд побочных эффектов, которые в сравнении с НПВС, возникают очень часто. В данную группу можно отнести: снижение иммунитета, психозы, депрессия, тромбозы, сероидные язвы, остеопороз, гипергликемия, ульцерогенное действие, психические нарушения, повышение артериального давления, панкреатит, глаукому, синдром Кушинга, стрии, алопеция, отеки, гирсутизм и многое другое. Исходя из многочисленного перечня нежелательных реакций (НЛР) ГКС, по возможности необходимо начинать фармакотерапию болевого синдрома и воспалительных реакций с ЛС из группы НПВС, которые характеризуются меньшим списком побочных реакций [84].

Современная фармакология выделяет механизм действия НПВС, обусловленный влиянием на метаболизм арахидоновой кислоты (ARA) и дальнейшим подавлением каскада воспалительных реакций [45].

Все НПВС классифицируются в зависимости от воздействия на фермент циклооксигеназу (ЦОГ) [46].

В таблице 1.1 представлена классификация НПВС, в зависимости от селективности действия ЛС к формам ЦОГ.

Согласно исследованиям многих ученых, препараты из группы НПВС могут обладать антиэкссудативными фармакологическими свойствами по следующим причинам:

а) замедляют окисление липидов;

б) они стабилизируют мембраны пузырьков с пищеварительным соком (лизосом);

в) они снижают образование аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) и препятствуют агрегации нейтрофилов.

Таблица 1.1 - Классификация НПВС в зависимости от селективности действия ЛС к формам ЦОГ

Селективность действия ЛС к формам ЦОГ Группа НПВС и их наименования

Выраженная фармакологическая активность в отношении ЦОГ-1 Производные салициловой кислоты: кислота ацетилсалициловая. Производные индолуксусной кислоты: индометацин, сулиндак. Производные пропионовой кислоты: кетопрофен. Оксикамы: пироксикам.

Умеренная фармакологическая активность в отношении ЦОГ-1 Производные фенилуксусной кислоты: диклофенак. Производные пропионовой кислоты: ибупрофен, напроксен.

Примерно равноценное фармакологическое ингибирование ЦОГ-1 и ЦОГ-2 Оксикамы: лорноксикам.

Умеренная фармакологическая селективность в отношении ЦОГ-2 Производные индолуксусной кислоты: этодолак. Оксикамы: мелоксикам. Производные других химических соединений: нимесулид, набуметон.

Выраженная фармакологическая селективность в отношении ЦОГ-2 Коксибы: целекоксиб, рофекоксиб.

Болеутоляющий эффект можно объяснить нарушением проводимости болевых импульсов. В исследованиях по изучению хронического болевого синдрома было установлено, что только выраженные селективные ингибиторы ЦОГ-2 (в отличие от других НПВП) могут ингибировать выработку

простагландинов (ПГ) на поздних стадиях гипервозбудимости спинальных нейронов.

На сегодняшний день подтверждено присутствие третьей изоформы циклоксигеназы - ЦОГ-3, которая обнаружена в коре головного мозга и в сердце. Она угнетается производным пара-аминофенола - ацетаминофеном. Антипиретическое действие ацетаминофена основано на ингибировании ЦОГ-3 и способности селективно нарушать синтез ПГ в центральной нервной системе (ЦНС), снижая образование ПГ в цереброспинальной жидкости [96].

Несмотря на доказанную клиническую эффективность на фармацевтическом рынке, применение различных препаратов, ингибирующих ЦОГ (1 и 2 подтипов) из группы НПВП, имеет определенные медицинские ограничения и противопоказания. Одноразовый прием данных ЛС в среднетерапевтических дозах может привести к развитию НЛР (лидирующее место занимает ульцерогенное действие). Результаты статистического анализа показывают, что НЛР НПВС возникают приблизительно в 25% случаев. В то же время, у 5% пациентов, принимающих эти лекарства, может возникнуть серьезная угроза для их жизни. Риск побочных эффектов возрастает непосредственно у гериатрических пациентов, которые составляют около 60% потребителей НПВП.

Однако важно отметить, что любая фармакологическая активность в отношении той или иной селективности является относительной, и не может исключать проявления других эффектов, выходящих за рамки избирательного действия, особенно с применением лекарств в превышающих среднетерапевтические дозировки дозах [52]. О потенциальной токсичности НПВС можно судить по соотношению степени ингибирования ЦОГ-1/ЦОГ-2. Чем меньше данное значение, тем более селективным является препарат в отношении ЦОГ-2 и, как следствие, менее токсичен. Например, для мелоксикама данное значение составляет 0,33, диклофенака - 2,2, пироксикама - 33, индометацина -107.

На основе анализа литературы установлено, что наиболее значимыми нежелательными реакциями НПВС являются изменения в органах

пищеварительной системы (ЖКТ) [41, 45, 90], печени, сердечно-сосудистой (ССС) [2, 15, 39, 40, 71, 93] и мочевыделительной систем [43, 48, 70].

Изменения со стороны пищеварительного тракта именуются «НПВС-гастропатиями». Нестероидная гастропатия развивается у 30% лиц, принимающих НПВС длительный период времени [41]. Данное воздействие обусловлено блокадой ЦОГ-1 и дальнейшим ингибированием синтеза ПГ. ПГ увеличивают секрецию слизи и НСОз--иона, как следствие, уменьшая секрецию соляной кислоты - обладают гастропротекторным действием. В результате ингибирования синтеза ПГ желудка НПВС возникает раздражающее воздействие на слизистую оболочку ЖКТ - ульцерогенное действие [45]. Ссылаясь на работу Пахомовой И. Г. с соавторами, можно утверждать, что НПВС также могут являться фактором повреждения слизистой оболочки не только желудка и двенадцатиперстной кишки, но также пищевода и пищеварительного тракта в целом, инициируя механизмы развития гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (ГЭРБ). Согласно рекомендациям медицинской ассоциации гастроэнтерологов из Бетесды, штат Мэриленд (American College of Gastroenterology) [94], пациентам, имеющие высокий или умеренный риск развития гастропатии, следует либо воздержаться от назначения данных препаратов, либо принимать селективно ингибирующие ЦОГ-2, одновременно с ингибиторами протонной помпы (ИПП).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Олейник Ирина Сергеевна, 2024 год

/ У

е Э 7 Ш --а , ' Ё 155

155.55, 4.93 Д 155.55, 2.2 Ё 160

Т С / Ё 165

166.04, 4.93 166.7 1, 3.96 166.06, 2.2 Ё 170

Ё 175

6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5

РРт

Рисунок 3.6 - Фрагмент !Н-13С НМВС ЯМР спектра соединения 13

2.0

\ 8

г ; 16

17.6 >4, 9.87 ; 24

; 32

: 40

; 48

: 56

; 64

82.1 6, 9.87 ; 72

; 80

102.9 >8, 9.87 : 88

ь 10.51, 7.57 / 106.0 3, 7.56 ; 96

19П С 120.9 31 1 п л 7 7 о 121.1 2, 7.51 е» е : 104

/ 1, 10.4 □ с 128 >.82, 7.3 8 ; 112

0 паяа а «7 12 э.8, 9.36 129.5 5, 7.5 134 □ к34, 7.3 8 ; 120

5/

V"/, и \ п в в : 128

< ь 131. а 42, 6.9 » з ш : 136

155.7 3, 6.91 ; 144

166.С 9, 9.87 « > в р : 152

1 V « 155.73 7.51 15 5.53, 6. 19 ; 160

Л \ ; 168

166. 75 10 4 7 161 3.09, 9.3 6

Е

10.5 10.0

9.5

9.0

8.0

7.5

7.0

6.5

РРт

Рисунок 3.7 - Фрагмент !Н-13С НМВС ЯМР спектра соединения 13

5

Рисунок 3.8 - Основные корреляции в спектрах ЯМР 1Н-13С HSQC и 1Н-13С НМВС соединения 13: синий цвет - химические сдвиги ядер 1Н, красный цвет - химические сдвиги ядер 13С

Таблица 3.1 - Характеристики основных корреляций в спектрах ЯМР !Н-13С HSQC и 1Н-13С НМВС соединения 13

8н, м. д. Корреляции в HSQC спектре, 8, м. д. Корреляции в НМВС спектре, 8, м. д.

2.19 с (3Н, СНз Ру) 17.6* (СНз-Ру) 103.1 (С5 Ру), 139.8 (С6 Ру), 155.6 слаб. (С1 фурил), 166.0 слаб. (С=О)

3.72 с (3Н, ОСНз) 55.2* (ОСНз) 155.7 (С4 4-МеОСбШ)

3.96 АВ-кв (2Н, SCH2, V 14.8 Гц) 36.3 (SCH2) 145.2 (С2 Ру), 166.8 (С=О).

4.92 с (1Н, С4Н Ру) 36.4* (С4Н Ру) 82.2 (С3 Ру), 103.1 (С5 Ру), 119.3 (С=Я), 139.8 (С6 Ру), 145.2 (С2 Ру), 155.6 (С1 фурил), 166.0 (С=О)

6.19 д (1Н, Н3 фурил, V 3.2 Гц) 106.1* (С3 фурил) 110.5* (С4 фурил), 142.7* (С5 фурил), 155.6 (С1 фурил)

6.36 дд (1Н, Н4 фурил, V 1.8 Гц, V 3.2 Гц) 110.5* (С4 фурил) 106.1* (С3 фурил), 142.7* (С5 фурил), 155.6 (С1 фурил)

6.91 д (2Н, С3Н С5Н 4-МеОСбШКН, V 9.1 Гц) 114.0* (2С, С3Н С5Н 4-МеОСбШЖ) 114.0* (2С, С3Н С5Н 4-МеОСбШКН), 121.1* (2С, С2Н С6Н 4-МеОСбШ), 131.4 (С1 4-МеОСбШ), 155.7 (С4 4-МеОСбН4)

7.38 дд (1Н, Н5 2,4-С12СбНз, V 8.7 Гц, V 2.3 Гц) 127.4* (С5Н 2,4-С12С6Н3) 128.8* (С3Н 2,4-С12СбН3), 134.3 (2С, С1 С2 2,4-СЬСбШ)

7.49-7.53 м (3Н, С2Н С6Н 4-МеОСбШКН и Н6 2,4-С12СбНз) 121.1* (2С, С2Н С6Н 4-МеОСбН4), 128.0* (С6Н 2,4-С12С6Н3) 114.0* (2С, С3Н С5Н 4-МеОСбШКН), 121.1* (2С, С2Н С6Н 4-МеОСбН4), 129.7 (С4 2,4-С12СбН3), 134.3 (2С, С1 С2 2,4-СЬСбШ), 155.7 (С4 4-МеОСбН4)

Продолжение таблицы 3.1

7.56-7.57 м (1H, H5 фурил) 142.7* (C5 фурил) 106.1* (C3 фурил), 110.5* (C4 фурил), 155.6 (С1 фурил)

7.62 д (1H, H3 2,4-CI2C6H3, 4J 2.3 Гц) 128.8* (C3H 2,4-CI2C6H3) 127.4* (C5H 2,4-ChC6H3), 129.7 (C4 2,4-CI2C6H3), 134.3 (2С, C1 С2 2,4-ChC6H3)

9.35 с (1Н, C(O)NH) — 127.4* (C5H 2,4-Cl2C6H3), 128.8* (C3H 2,4-Cl2C6H3), 134.3 (2С, C1 С2 2,4- Cl2C6H3)

9.87 с (1Н, NHэндоцикл) — 17.6* (CH3-Py), 82.2 (C3 Py), 103.1 (C5 Py), 119.3 слаб. (C=N), 139.8 (С6 Py), 166.0 (C=O)

10.47 (1Н, CH2C(O)NH) — 121.1* (2С, C2H C6H 4-MeOC6H4), 131.4 слаб. (С1 4-MeOC6H4), 166.8 (C=O)

2-Метил-6-({2-[(3-метилфенил)амино]-2-оксоэтил}тио)-4-(2-фурил)-^ (2,4-дихлорфенил)-5-циано-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение 14), рисунок 3.9.

Рисунок 3.9 - Структурная формула соединения 14

Белый мелкокристаллический порошок, выход 83%. ИК-спектр, n, см 1: 3300, 3213, 3155 (N-H), 2204 (C^N), 1651 (C=O).

Спектр ЯМР 1Н (400 МГц, DMSO-d6), Ô, м. д.: 2.19 c (3Н, CH3 Py), 2.28 c (3Н, АгСНз), 3.97 АВ-кв (2Н, SCH2, J 15.1 Гц), 4.92 c (1H, С4Н Py), 6.19 д (1H, H3

фурил, V 2.9 Гц), 6.35-6.36 м (1Н, Н4 фурил), 6.91 д (1Н, Н6 3-МеСбШКН, V 7.5 Гц), 7.19-7.23 м (1Н, Н5 3-МеС6ШЯН), 7.35-7.42 м (3Н, 3-МеС<Н4ЫН и Н5 2,4-СШед, 7.53 д (1Н, Н6 2,4-СЬС6Н3, V 8.7 Гц), 7.55-7.57 м (1Н, Н5 фурил), 7.62 д (1Н, Н3 2,4-С12С6Н3, V 2.2 Гц), 9.35 с (1Н, С(О)ЯН), 9.74 с (1Н, ЯНэндоцикл), 10.42 (1Н, СШС(О)ЯН).

Спектр ЯМР 13С DEPTQ (101 МГц, DMSO-d6), 5с, м. д.: 17.6* (СН3-Ру), 21.2* (СН3-Аг), 36.4* (С4Н Ру), 36.5 ^СШ), 82.5 (С3 Ру), 103.1 (С5 Ру), 106.1* (С3 фурил), 110.5* (С4 фурил), 116.7* (СН 3-МеС6ШЯН), 119.2 (С^Я), 120.0* (СН 3-МеС6НЯН), 124.7* (СН 3-МеС6ШЯН), 127.4* (С5Н 2,4-С12С6Н3), 128.0* (С6Н 2,4-С12С6Н3), 128.7* (СН 3-МеС6Н4ЯН), 128.80 (С Аг), 128.83* (С3Н 2,4-С12С6Н3), 129.7 (С4 2,4-С12С6Н3), 134.3 (С 2,4-С12С6Н3), 138.1 (С Аг), 138.3 (С Аг), 139.8 (С6 Ру), 142.7* (С5 фурил), 145.0 (С2 Ру), 155.5 (С1 фурил), 166.0 (С=О), 167.0 (С=О). *Сигналы в противофазе.

Найдено, %: С 58.49; Н 4.13; N 10.07. C27H22ChN4OзS (М 553.46).

Вычислено, %: С, 58.59; Н, 4.01; Я, 10.12.

2-Метил-6-({2-оксо-[(4-фторфенил)амино]этил}тио)-4-(2-фурил)-^(2,4-дихлорфенил)-5-циано-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение 15), рисунок 3.10.

Рисунок 3.10 - Структурная формула соединения 15

Белый мелкокристаллический порошок, выход 86%. ИК-спектр, п, см 1: 3288, 3207, 3159 (Я-Н), 2201 (С=Я), 1659 (С=О).

2-Метил-6-({2-[фениламино]-2-оксоэтил}тио)-4-(2-фурил)-^(2,4-дихлорфенил)-5-циано-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение 16), рисунок 3.11.

Белый мелкокристаллический порошок, выход 82%. ИК-спектр, п, см-1: 3298, 3219, 3147 (Я-Н), 2197 (С=Я), 1678, 1657 (С=0).

НзС й 8ЛГ

п О

Рисунок 3.11 - Структурная формула соединения 16

Спектр ЯМР 1Н (400 МГц, DMSO-d6), 5, м. д.: 2.20 с (3Н, СНз Ру), 4.02 уш.с (2Н, SCH2), 4.92 с (1Н, С4Н Ру), 6.19 д (1Н, Н3 фурил, 3З 3.2 Гц), 6.35 дд (1Н, Н4 фурил, V 1.8 Гц, V 3.2 Гц), 7.07-7.11 м (1Н, Н4 PhNH), 7.31-7.35 м (1Н, Н3 Н5 PhNH), 7.38 дд (1Н, Н5 2,4-С12С6Нз, 8.7 Гц, V 2.4 Гц), 7.52 д (1Н, Н6 2,4-СЬС6Нз, V 8.7 Гц), 7.56-7.57 м (1Н, Н5 фурил), 7.59-7.62 м (3Н, Н Аг), 9.36 с (1Н, С(О)КН), 9.78 с (1Н, МН эндоцикл ), 10.61 (1Н, СШОЮ^).

Спектр ЯМР 13С DEPTQ (101 МГц, DMSO-d6), 5с, м. д.: 17.6* (СНз-Ру), 36.4* (С4Н Ру), 36.5 (SCH2), 82.5 (С3 Ру), 103.1 (С5 Ру), 106.1* (С3 фурил), 110.5* (С4 фурил), 119.3 (С^), 119.5* (2С, С2Н С6Н PhNH), 123.9* (С4Н PhNH), 127.4* (С5Н 2,4-С12С6Нз), 128.0* (С6Н 2,4-С12С6Нз), 128.8* (3С, С3Н 2,4-С12С6Нз и С3Н С5Н PhNH), 129.7 (С4 2,4-СЬС6Нз), 134.3 (С Аг), 138.4 (С Аг), 139.8 (С6 Ру), 142.7* (С5 фурил), 145.0 (С2 Ру), 155.5 (С1 фурил), 166.0 (С=0), 167.1 (С=0). *Сигналы в противофазе.

Найдено, %: С 57.78; Н 3.87; N 10.35. C26H2oChN4OзS (М 539.43).

Вычислено, %: С, 57.89; Н, 3.74; N 10.39.

Этиловый эфир 2-(2-{[6-метил-5-((2,4-дихлорфенил)карбамоил)-4-(2-фурил)-3-циано-1,4-дигидропиридин-2-ил]тио}ацетамидо)-4,5,6,7-

тетрагидробензо[Ь]тиофен-3-карбоновой кислоты (Соединение 17), рисунок 3.12.

Бежевый мелкокристаллический порошок, выход 76%. ИК-спектр, п, см 1: 3369, 3225 (К-Н), 2199 (С^), 1686, 1664, 1653 (С=0).

Спектр ЯМР 1Н (400 МГц, DMSO-d6), 5, м. д.: 1.30 т (3Н, ОСН2СН3, У 7.1 Гц), 1.70-1.75 м (4Н, СН2СН2), 2.16 с (3Н, СНз Ру), 2.58-2.62 м (2Н, СН2), 2.67-2.72 м (2Н, СН2), 4.20 АВ-кв (2Н, SCH2, У 15.2 Гц), 4.27 кв (2Н, ОСН2СН3, У 7.1 Гц), 4.89 с (1Н, С4Н Ру), 6.15 д (1Н, Н3 фурил, 3У 3.2 Гц), 6.33 дд (1Н, Н4 фурил, 3У 1.8 Гц, У 3.2 Гц), 7.37 дд (1Н, Н5 2,4-СЬСбН3, У 8.7 Гц, У 2.4 Гц), 7.49-7.52 м (2Н, Н5 фурил, Н6 2,4-СЬСбН3), 7.61 д (1Н, Н3 2,4-С12СбН3, У 2.4 Гц), 9.33 с (1Н, С(О)КН), 9.49 с (1Н, КН эндоцикл ), 11.30 (1Н, СШС(О)КН).

Спектр ЯМР 13С DEPTQ (101 МГц, DMSO-d6), 5с, м. д.: 14.1* (ОСН2СН3), 17.4* (СН3-Ру), 22.3 (СН2), 22.4 (СН2), 23.7 (СН2), 25.8 (СН2), 35.6 (SCH2), 36.5* (С4Н Ру), 60.4 (ОСН2СН3), 84.0 (С3 Ру), 103.2 (С5 Ру), 106.1* (С3 фурил), 110.4* (С4 фурил), 112.2 (С тиофен), 118.9 (С^), 126.7 (С тиофен), 127.4* (С5Н 2,4-СЬСбН3), 128.0* (С6Н 2,4-С12СбН3), 128.76 (С тиофен), 128.8* (С3Н 2,4-С12СбН3), 129.7 (С4 2,4-С12С6Н3), 130.6 (С тиофен), 134.3 (С 2,4-СЬСбШ), 139.8 (С6 Ру), 142.7* (С5 фурил), 143.6 (С Аг), 145.2 (С2 Ру), 155.4 (С1 фурил), 164.7 (COOEt), 165.3 (С=0), 166.0 (С=0). *Сигналы в противофазе.

Найдено, %: С 55.28; Н 4.32; N 8.35. CзlH28ChN4O5S2 (М 671.61).

Вычислено, %: С, 55.44; Н, 4.20; К, 8.34.

ИК-спектры соединений 10-17 записывали на ИК-спектрометре Bruker Vertex 70 в режиме ИПВО на кристалле алмаза в области 4000-400 см-1.

Элементный анализ на С, H, N проведен на анализаторе Carlo-Erba Strumentazione 1106.

ЯМР-спектры соединений 10-17 записывали на приборе Bruker Avance III HD 400MHz (400 МГц на ядрах 1H, 101 МГц на ядрах 13С) в растворе ДМСО-й, внутренний стандарт - остаточные сигналы растворителя.

H основе программного обеспечения для предикторного анализа на наличие сходства с лекарственными средствами, спрогнозированы параметры «ADMET» - Absorbtion, Distribution, Metabolism, Excretion, Toxicity для исследуемых 8 образцов новых произвоных а-цианотиоацетамида. Также получены данные о наиболее вероятных биологических мишенях новых производных а-цианотиоацетамида.

Для новых производных а-цианотиоацетамида осуществлялся виртуальный биоскрининг с использованием комплекса программного обеспечения Swiss Target Prediction, разработанный учеными из Swiss Institute ofBioinformatics, [http://swisstargetprediction.ch/index.php], онлайн-ресурсов: Online SMILES TranslatorandStructure File Generator от U.S. National Cancer Institute [https://cactus.nci.nih.gov/translate/], OPSIN: Open ParserforSystematic IUPAC nomenclature от University of Cambridge, Centre for Molecular Informatics [https://opsin.ch.cam.ac.uk/].

Среди 380 новых соединений, полученных в процессе многокомпонентного органического синтеза в научно-исследовательской лаборатории «ХимЭкс выявлено восемь образцов производных а-цианотиоацетамида, как наиболее перспективных для достижения цели исследований. Так, соединения из ряда дериватов а-цианотиоацетамида с лабораторными шифрами d02-149, d02-168 и d02-139 по результатам виртуального биоскрининга с высокой вероятностью будут воздействовать на Adenosine A2a receptor и А1, Prostanoid EP1 и ЕР4 receptor, Cannabinoid CB1 и CB2 receptor, ^agulation factor X, AMP and cAMP-inhibited cGMP 3,5-cyclic phosphodiesterase 10A, Type-1B angiotensin 2 receptor,

Cyclooxygenase-2.

Образцы d02-122 и d02-133 потенциально могут связываться с Cyclooxygenase-2, Cannabinoid CB1, CB2 и Prostanoid ЕР1 receptor, что увеличивает вероятность проявления болеутоляющей активности. Указанные вещества могут обладать антикоагулянтной активностью, так как влияют на Coagulation factor X. Также данные образцы потенциально могут влиять на cAMP and cAMP-inhibited cGMP 3,5-cyclicphosphodiesterase 10A, Adenosine A1 receptor, Type-1A и Type-IB angiotensin 2 receptor.

Образец с шифром d02-123 среди биологических мишеней имеет Cannabinoid CB2 и CB1 receptor, Prostanoid ЕР1 receptor, Delta opioid receptor, Kappa opioid receptor, Prostanoid ЕР4 receptor, а также cAMP and cAMP-inhibited cGMP 3,5-cyclicphosphodiesterase 10A, Adenosine A1 receptor, Coagulation factor X.

Производное а-цианотиоацетамида с шифром d02-141 может оказывать воздействие на Prostanoid ЕР4 receptor, Cyclooxygenase-2 и Type-1B, Type-1A angiotensin 2 receptor, Coagulation factor X, cAMP and cAMP-inhibited cGMP 3,5-cyclicphosphodiesterase 10A. Образец d02-128 помимо данных биомишеней дополнительно может воздействовать на Prostanoid ЕР1 receptor, Cannabinoid CB2 и CB1 receptor.

В таблице 3.2 приведены данные о биомишенях, которые представляют определенный интерес в плане изучения анальгетической и противовоспалительной фармакологической активности новых производных а-цианотиоацетамида.

Таблица 3.2 - Биологические мишени новых производных а-цианотиоацетамида и

возможные фармакологические эффекты

Вид биомишени Характеристика биомишени Возможный фармакологический эффект Образцы

Adenosine receptor А1 и A2a Представляют собой класс пуринергических рецепторов, связанных с G-белком, с аденозином в качестве эндогенного лиганда. Рецептор А1 локализуется в синапсе нейрона, он уменьшает высвобождение Антиэкссудативный, болеутоляющий, гипотензивный, антиаритмический d02-149 d02-133 d02-168 d02-123 d02-128 d02-139

Prostanoid EP1 и ЕР4 receptor Представляют собой рецепторы, связанные с G-белком, кодируемый геном PTGER1 и PTGER4. Экспрессия EP1: рецепторы EP1 были обнаружены в тучных клетках человека, легочных венах, кератиноцитах, миометрии и гладких мышцах толстой кишки. ЕР4: в сердце и тонком кишечнике и, в меньшей степени, в легких, почках, тимусе, матке, ганглиях задних корешков и головном мозге. синаптических пузырьков. Рецепторы A1 и A2a регулируют потребность миокарда в кислороде и увеличивают коронарное кровообращение за счет расширения сосудов. Кроме того, рецептор A2a может подавлять иммунные клетки, тем самым защищая ткань от воспаления. Рецептор A2a экспрессируется в головном мозге. Противовоспалительный, анальгетический d02-149 d02-133 d02-168 d02-123 d02-128 d02-139 d02-122 d02-141

Cannabinoid CB1 и CB2 receptor Каннабиоидные рецепторы. Семейство рецепторов, связанных с G-белком. Рецептор CB1 экспрессируется в основном в головном мозге (центральная нервная система), но также в легких, печени и почках. СВ2 рецептор экспрессируется, главным образом, в системе иммунитета и в гемопоэтических клетках, однако дальнейшее исследование показало, существование этих рецепторов в отделах головного мозга. Антиноцицептивный d02-149 d02-128 d02-123 d02-168 d02-122 d02-133

Cyclooxyge-nase-2 Представляет собой фермент, отвечающий за образование простаноидов из арахидоновой кислоты. ЦОГ-2 встречается в следующих тканях и органах: - макрофагах; - в эндотелиальных клетках пролиферирующих кровеносных сосудов, воспаленных тканях, а также в эндотелиальных клетках и моноцитарных пенистых клетках при атеросклеротических поражениях; - в ряде опухолевых клеток; - в почках; - в головном мозге ЦОГ-2 все больше индуцируется в случае воспаления; - в спинном мозге ЦОГ-2 всегда предшествует процессу обработки болевого стимула и участвует в нем. Противовоспалительный анальгетический жаропонижающий d02-149 d02-133 d02-168 d02-122 d02-141

Sodium channel protein type 9 alpha subunit Ген SCN9A кодирует альфа-субъединицу белка натриевого канала типа 9, который находится в клеточной мембране и контролирует пропускание ионов натрия через мембрану. Разность электрических потенциалов по обе стороны мембраны определяет, пропускает ли канал ионы натрия или нет. Этот тип ионных каналов играет важную роль в формировании нервных импульсов, но точная функция этого конкретного канала в нервных клетках пока неизвестна. Однако он особенно активен в нейронах периферической нервной системы, отвечающих за ощущение боли. Болеутоляющий d02-149 d02-168 d02-123 d02-122

Transient receptor potential cation channel subfamily A member 1 Переходный рецепторный потенциал канала катиона подсемейства А элемент 1. Представляет собой белок, который, в организме человека, кодируется TRPV1 гена. Функция TRPV1 - определение и регулирование температуры тела. Кроме того, TRPV1 вызывает ощущение обжигающего жара и боли (ноцицепция). Рецепторы TRPV1 преимущественно расположены в ноцицептивных нейронах, которые находятся в периферической нервной системе, однако также отмечено их присутствие во многих других тканях, в том числе в центральной нервной системе. Жаропонижающий, обезболивающий d02-149

cAMP and cAMP-inhibited cGMP 3,5-cyclic phosphodiesterase 10A Представляет собой фермент, который у человека кодируется PDE10A гена. Тканевое распределение: головной мозг, яички. Функциональная роль субстрата: передача сигнала в дофаминергических волокнах. Противовоспалительный (Ингибиторы PDE10A могут быть полезны для предотвращения апоптоза нейронов при повышении уровней сАМР и cGMP и, таким образом, могут обладать противовоспалительными свойствами), антипсихотический d02-149 d02-133 d02-168 d02-123 d02-128 d02-139 d02-122 d02-141

Delta opioid receptor Разновидность рецепторов нервной системы, относящихся к рецепторам, сопряжённым с G-белком. Наиболее сильно экспрессируется в базальных ганглиях и неокортикальных областях мозга. Анальгезирующий d02-123

Kappa opioid receptor Является G-белком рецептора, что в организме человека кодируется OPRK1 гена. KOR широко распространены в головном и спинном мозге (желатинозная субстанция) и в периферических тканях. Анальгезирующий d02-123

Для дальнейших исследований в различных фармакологических тестах с целью изучения антиноцицептивной и антиэкссудативной активности, данные производные а-цианотиоацетамида представляют перспективу. Таблицы 3.3 и 3.4 содержат информацию о рисках токсичности и физико-химических свойствах изучаемых новых образцов производных цианотиоацетамида, прогнозируемых с помощью OSIRIS Property Explorer.

Исходя из данных, приведенных в таблицы 3.3, можно сделать вывод, что синтезированные производные а-циантиоацетамида не обладают возможными мутагенными и канцерогенными свойствами, а также отсутствует риск коррозивной токсичности в плане влияния на конъюнктиву глаза (рисунок 3.13).

Таблица 3.3 - Риски токсичности исследуемых исследуемых новых образцов

производных цианотиоацетамида

Образцы с лабораторными шифрами Мутагенность (вероятность) Канцеро-генность (вероятность) Глазная коррозивность (вероятность)

d02-149 Н3С N ^ «-» «-» «-»

d02-123 И3С N F н Уо* «-»

d02-122 о V0 кА ^^ Н3С N S ¥--¥ «-»

d02-128 Н ^^^^ СНз

d02-141 НзО^ N S ^--"^Ч ОН Н I

d02-139 TlX^ N Vtx 1 CH3 «-» «-»

d02-168 TXJ^ И3С N ^S «-»

d02-133 Xx^ Из^ N S «-» «-»

Примечания: * - «+» - высокий риск токсичности; «±» - умеренный риск, «-» -отсутствие токсичности

Enter compound name. SMILES or CAS-no: 302)C(C#N)=C(N1)SCC(=0)NC1=CC=CC(=C1)C(FKF)F)C(=0)NC1=C(CI)C=C(CI)C=C1 |c:6,12,23,25,35,41,t1,4,21,38,lp:8:2,11:1,13:1,14:2,17:2,18:1.26:3,27:3,28:3,30:2,31:1,34:3,37:31 Toxicity Risks

Q mutagenic [?] Q lumongenic [J]

О imtant El

«itb

•f

/

Л*

\ Л/

\ \

Л □

О 0

О 0

+ -

С Si

N p

0 S

F CI

Br 1

H ?...

Solubility И

«.........-8.3

Molwoight

r"-"-4'"' воб.о TPSA Ш

< '—-U " 1132.4 Druglikeness [Э

♦ ' '*---------5.91

Drug-Score Ш ri......... 0.08

Рисунок 3.13 - Пример оценки рисков токсичности а-цианотиоацетамида с лабораторным шифром d02-122, спрогнозированные с помощью OSIRIS Property

Explorer

Параметр logS указывает на плохую растворимость новых производных в воде. Количество вращающихся связей (RotatableBonds) менее или равно 10 встречается у семи из восьми соединений, что указывает на наличие пероральной биодоступности этой группы синтезированных соединений (рисунок 3.14, таблица 3.4).

Molecule 1

®

гЛ

CCOC(=0)C1C(NC(=0)CSC2=C(C#N)C(C(=C(N2)C)C(=0)Nc2CCC(C c2CI)CI)c2ccco2)sc2c1CCCC2

Physicochemical Properties

Formula

Molecular weight Num. heavy atoms Num. arom. heavy atoms Fraction Csp3 Num. rotatable bonds Num. H-bond acceptors Num. H-bond donors Molar Refractivity TPSAO

C31H28CI2N405S2 671.61 g/mol 44 16 0.29 12 6 3

177.40 187.00 A1

Lipophilicity

L0gP„^,(iLOGP)O 4.68

Log Poiw (XLOGP3) О 7.02

Log Po/w (WLOGP) © 665

Lbfl Рол, (MLOGP) О 2.73

Log Po*, (SILICOS-IT) © 7.34

Consensus Log © 5.68

Water Solubility

Log S (ESOL) © -7.90

Solubility 8.38e-06 mg/ml: ; 1.25e-08mol/l

Class O Poorly soluble

Log S (Ali) © -1076

Solubility 1.16e-08 mg/ml: ; 1.73e-11 mol/l

Class « Insoluble

Log S (SILICOS-IT) © -10.47

Solubility 2.25e-08 mg/ml: ; 3.36e-11 mol/l

Class O Insoluble

Pharmacokinetics

Gl absorption © Low

BBB permeant I No

P-gp substrate * * Yes

CYP1A2 inhibitor O Yes

CYP2C19 inhibitor© No

CYP2C9 inhibitor 8 Yes

CYP2D6 inhibitor O No

CYP3A4 inhibitor ® Yes Log Kp (skin permeation) © -5.41 cm/s

Druglikeness

Lipinski в Ghose О VeberO Egan О

Muegge

Bioavailability Score О

Yes; 1 violation: MW»500

No; 4 violations: MW>480, WLOGP>5.6,

MR>130, #atoms>70

No; 2 violations: Rotors» 10, TPSA>140 No; 2 violations: WLOGP>5.88. TPSA>131.f No; 3 violations: MW>600. XLOGP3>5, TPSA>150

0.55

Medicinal Chemistry

PAINS О Brenk О

Leadlikeness в

Synthetic accessibility ©

0 alert 0 alert

No; 3 violations: MW>350, Rotors>7, XLOGP3>3.5

Рисунок 3.14 - Пример предикторного анализа на платформе SwissADME образца d02-141

Согласно таблице 3.5, метаболизм данных соединений осуществляется через цитохром Р450. Все соединения задействуют CYP2C9, что предполагает возможность их взаимодействия с варфарином, лозартаном, НПВС (в том числе ибупрофен и диклофенак натрия), ирбесартаном, карведилолом.

Таблица 3.4 - Физико-химические свойства производных а-цианотиоацетамида

по результатам программы SwissADME

Соединение d02-139 d02-149 d02-168 d02-133 d02-122 d02-141 d02-128 d02-123

А^Р 3,99 3,85 3,94 4,12 4,39 4,68 4,31 3,51

^ -6,18 -6,10 -6,26 -6,40 -6,97 -7,90 -6,71 -6,97

Физико- MW 569,46 539,43 557,42 553,46 607,43 671,61 567,49 607,43

химические H-Bond Acceptor 5 4 5 4 7 6 4 7

параметры H-Bond Donor 3 3 3 3 3 3 3 3

Rotatable Bonds 10 9 9 9 10 12 9 10

Таблица 3.5 - Характеристика прогнозируемых фармакокинетических параметров

Соединение d02-139 d02-149 d02-168 d02-122 d02-141 d02-128 d02-123 d02-133

CYP1A2 + + + + + + + +

Ингиби-рование

CYP2C1 9 + + + + - + + +

цито- CYP2C9 + + + + + + + +

хромов Р450

CYP2D6 + + + + - - + —

CYP3A4 + + + + + + + +

Индекс биодоступности 0,55 0,55 0,55 0,55 0,55 0,55 0,55 0,55

Связь с крови белками - - - + + + + -

Все образцы взаимодействуют с CYP1A2. Это создает риск взаимодействия с кофеином, теофиллином, флувоксамином, варфарином, эстрадиолом, фенацетином. Изоформа CYP2C19 задействуется всеми веществами, кроме образца с лабораторным шифром d02-141. Этим же путем метаболизируются омепразол, моклобемид, прогуанил, вальпроевая кислота, индометацин, мефенитоин и варфарин.

Также все новые производные а-цианотиоацетамида, кроме d02-133, d02-128 и d02-141 взаимодействуют с изоформой цитохрома Р450 CYP2D6. Этим же путем метаболизируются тамоксифен, амитриптиллин, флуоксетин, галоперидол, морфин, кодеин, метопролол, мексилетин и другие.

Через CYP3A4 могут метаболизироваться все исследуемые соединения, что делает возможным его лекарственные взаимодействия с инданавиром, кларитромицином, итраконазолом, эритромицином, флуконазолом, верапамилом, амиодароном, азитромицином, хлорамфениколом и другими ЛС.

Учитывая вышеперечисленные возможные механизмы воздействия на живой организм, выявлено, что можно ожидать in vivo антиноцицептивный, противоотечный, жаропонижающий фармакологические эффекты.

Описанные выше материалы были опубликованы в исследованиях [3,73].

3.2 ИЗУЧЕНИЕ АНТИНОЦИЦЕПТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНЫХ а-ЦИАНОТИОАЦЕТАМИДА

3.2.1 Результаты исследования антиноцицептивной активности производных а-цианотиоацетамида в тесте горячей пластины

Результаты проведенных исследований потенциальной болеутоляющей активности новых производных а-цианотиоацетамида на лабораторных животных в различных классических фармакологических тестах позволили получить массив данных для их анализа и комплексной оценки.

Результаты исследований антиноцицептивной активности в тесте горячей пластины представлены в таблице 3.6.

Множественное сравнение данных экспериментальных исследований антиноцицептивной активности в тесте горячей пластины по критерию Крускала-Уоллиса представлены в таблице 3.7.

Таблица 3.6 - Результаты статистической обработки данных экспериментальных

исследований антиноцицептивной активности в тесте горячей пластины

Опытная группа Измеренное в экспериментах время латентного периода до начала прыжков с поверхности горячей пластины а, сек Статистические характеристики: Среднее время латентного периода до начала прыжков с поверхности горячей пластины аср, сек; дисперсия о2; среднеквадратическое отклонение о; коэффициент вариации V, %

Доверительный интервал Исключаемые значени я Полученные по данным экспериментов Полученные после сглаживания

Референтная Х1 21, 27, 25, 18, 60, 40, 25, 37, 41, 35 аср = 32,9 с; о2 = 154,9; о= 12,4; V = 37,8% аср = 32,8 с; о2 = 49,0; о= 7,0; V = 21,4%

24,0 < аср < 41,8 21, 18, 60

*р = 0,31 > а = 0,05

Контрольная Х2 22, 17, 18, 20, 10, 17, 17, 18, 15, 14 аср = 16,8 с; о2 = 26,2; о= 5,1; V = 31,5% аср = 17,0 с; о2 = 3,2; о= 1,8; V = 10,9%

12,6 < аср < 19,8 10, 22

*р = 0,71 > а = 0,05

d02-128 Х3 13, 20, 21, 17, 14, 18, 9, 11, 10, 19 аср = 15,2 с; о2 = 17,2; о= 4,2; V = 27,6% аср = 15,3 с; о2 = 9,6; о= 3,1; V = 20,5%

10,9 < аср < 19,1 20, 21, 9, 10

*р = 0,45 > а = 0,05

а02-141 Х4 26, 35, 27, 25, 32, 28, 27, 30, 29, 34 аср = 29,3 с; о2 = 10,4; о= 3,2; V = 11,0% аср = 28,8 с; о2 = 3,8; о= 1,9; V = 6,7%

27,0 < аср < 32,1 26, 35, 25, 34

*р = 0,49 > а = 0,05

d02-122 Х5 8, 30, 34, 93, 63, 44, 38, 53, 48, 36 аср = 44,7 с; о2 = 454,6; о = 21,3; V = 47,7% аср = 40,4 с; о2 = 67,3; о = 8,2; V = 20,3%

29,5 < аср < 60,0 8, 93, 63

*р = 0,60 > а = 0,05

d02-133 Х6 33, 35, 64, 70, 48, 36, 51, 62, 36, 49 аср = 48,4 с; о2 = 162,6; о= 12,8; V = 26,3% аср 52,5 с; о2 = 41,7; о= 6,4; V = 12,3%

39,2 < аср < 62,1 33, 35, 64, 70, 36, 36

*р = 0,21 > а = 0,05

d02-123 Х7 61, 93, 38, 42, 50, 36, 47, 42, 53, 32 аср = 49,4 с; о2 = 277,6; о=16,7; V = 33,7% аср = 47,6 с; о2 = 61,6; о=7,8; V = 16,5%

37,4 < аср < 61,3 93, 36, 32

*р = 0,88 > а = 0,05

d02-168 Х8 35, 42, 63, 63, 38, 44, 57, 45, 61, 52 аср = 50,0 с; о2 = 100,6; о= 10,0; V = 20,1% аср = 48,0 с; о2 = 39,5; о= 6,3; V = 13,1%

41,9 < аср < 57,2 35, 63, 63, 38, 61

*р = 0,28 > а = 0,05

d02-149 Х9 69, 65, 50, 78, 64, 53, 61, 58, 51, 48 аср = 59,7 с; о2 = 82,4; о= 9,1; V = 15,2% аср = 60,2 с; о2 = 23,7; о= 4,9; V = 8,1%

52,9 < аср < 66,2 69, 50, 78, 51, 48

*р = 0,68 > а = 0,05

d02-139 Х10 95, 96, 90, 78, 89, 61, 58, 74, 98, 68 аср = 80,7 с; о2 = 201,0; о= 14,2; V = 17,6% аср = 79,8 с; о2 = 91,2; о= 9,5; V = 12,0%

70,5 < аср < 90,9 95, 96, 61, 58, 98

*р = 0,25 > а = 0,05

Примечание. * - /»-критерий, показывающий, что полученные данные имеют нормальное

распределение, если значениер больше принятого уровня значимости а = 0,05

Таблица 3.7 - Результаты множественного сравнения данных экспериментальных исследований антиноцицептивной активности в тесте горячей пластины по критерию Крускала-Уоллиса

Пара х1-х2 х1-х3 х1-х4 х1-х5 х1-х6 х1-х7 х1-х8 х1-х9

Р 0,078 0,065 0,690 0,343 0,050 0,089 0,103 0,007

Пара х1-х10 х2-х3 х2-х4 х2-х5 х2-х6 х2-х7 х2-х8 х2-х9

Р 0,0009 0,831 0,177 0,006 0,0006 0,0004 0,001 0,00001

Пара х2-х10 х3-х4 х3-х5 х3-х6 х3-х7 х3-х8 х3-х9 х3-х10

Р 5,6е-7 0,143 0,006 0,0006 0,0005 0,001 1,7е-5 9,5е-7

Пара х4-х5 х4-х6 х4-х7 х4-х8 х4-х9 х4-х10 х5-х6 х5-х7

Р 0,178 0,024 0,036 0,046 0,002 0,0002 0,269 0,451

Пара х5-х8 х5-х9 х5-х10 х6-х7 х6-х8 х6-х9 х6-х10 х7-х8

Р 0,445 0,068 0,01439 0,643 0,713 0,578 0,270 0,940

Пара х7-х9 х7-х10 х8-х9 х8-х10 х9-х10 - - -

Р 0,257 0,078 0,327 0,119 0,562 - - -

По результатам анализа, приведенным в таблице 3.7 установлено, что апостериорный тест Данна с использованием поправки Бонферрони (0,0011) показал, что средние ранги следующих пар различаются (где р < а): х1-х9; х1-х10; х2-х5; х2-х6; х2-х7; х2-х8; х2-х9; х2-х10; х3-х5; х3-х6; х3-х7; х3-х8; х3-х9; х3-х10; х4-х10; х4-х6; х4-х7; х4-х8; х4-х9; х4-х10; х5-х10.

В сравнении с референтной группой наибольшую антиноцицептивную активность показывают образцы х9 (d02-149) и х10 (d02-139).

Как видно из приведенных данных, время до начала подпрыгиваний с поверхности горячей пластины у крыс контрольной группы составило в среднем 16,8 с.

Предварительное введение метамизола натрия ОАО «Фармстандарт» в дозе 7 мг/кг показывает увеличение латентного периода до возникновения ноцицептивного импульса в 1,95 раза и составляет 32,9 с.

У животных семи опытных групп, получавших новые производные а-цианотиоацетамида через желудочный зонд за 1,5 часа до проведения опыта в дозах 5 мг/кг, зарегистрировано заметное увеличение времени до начала облизывания задних лап на поверхности разогретой металлической пластины, в сравнении с контрольной группой.

У животных шести опытных групп, зарегистрировано время, подтверждающее наличие антиноцицептивной активности, превышающей таковую у метамизола натрия ОАО «Фармстандарт».

Образец с лабораторным шифром d02-128 показал значения длительности латентного периода пребывания животных на горячей пластине, ниже таковым, зарегистрированным в контрольной и референтной группах - 15,2 с.

Гетероциклическое соединение с шифром d02-139 увеличивает время до начала подпрыгиваний над поверхностью разогретой металлической пластины в сравнении с референтной группой почти в 2,45 раза. Соединение d02-149 повышает продолжительность латентного периода в 1,81 раза. Тем не менее, в течение первых 60 минут после проведения эксперимента животные обеих групп проявляли высокую нервозность, отказывались от приема пищи и воды, наблюдалась взаимная агрессия.

Образец производного а-цианотиоацетамида с лабораторным шифром d02-168 способен в 1,52 раза увеличить время пребывания животных опытной группы на поверхности разогретой металлической пластины в сравнении с референтной группой, а образцы d02-123 в 1,5 раза и d02-133 в 1,47 раза.

Анализируя полученные результаты у крыс опытной группы, получавших новое биологически активное вещество с шифром d02-122 и сравнивая их с данными, полученными нами у лабораторных животных референтной группы видно, что производное цианотиоацетамида с этим шифром превосходит по анальгетической активности метамизол натрия в 1,35 раза, а образец d02-141 в 0,89 раза.

3.2.2 Оценка антиноцицептивной активности производных а-цианотиоацетамида в тесте тепловой иммерсии хвоста

Результаты исследований антиноцицептивной активности новых синтезированных производных а-цианотиоацетамида в тесте иммерсии хвоста представлены в таблице 3.8.

Таблица 3.8 - Результаты статистической обработки показателей анальгетической активности в тесте тепловой иммерсии хвоста вновь синтезированных

производных а-цианотиоацетамида

Опытная группа Измеренное в экспериментах время латентного периода тепловой иммерсии хвоста а, сек Статистические характеристики: Среднее время латентного периода тепловой иммерсии хвоста аср, сек; дисперсия о2; среднеквадратическое отклонение о; коэффициент вариации V, %

Доверительный интервал Исключаемые значения Полученные по данным экспериментов Полученные после сглаживания данных экспериментов

Референтная Х1 19, 15, 19, 14, 18, 14, 14, 15, 14, 17 аср = 15,9 с; о2 = 4,5; о= 2,1; V = 13,4% аср = 14,7 с; о2 = 1,2; о= 1,1; V = 7,8%

13,8 < аср < 17,4 19, 19, 18

*р = 0,01 < а = 0,05

Контрольная Х2 12, 11, 12, 8, 8, 9, 9, 10, 12, 11 аср = 10,2 с; о2 = 2,6; о= 1,6; V = 15,9% аср = 10,0 с; о2 = 1,0; о= 1,0; V = 10,0%

8,9 < аср < 11,4 12, 12, 8, 8, 12

*р = 0,11 > а = 0,05

d02-133 Х3 16, 5, 5, 10, 18, 22, 7, 18, 15, 16 аср = 13,2 с; о2 = 36,2; о= 6,0; V = 45,6% аср = 12,8 с; о2 = 16,7; о= 4,1; V = 31,9%

8,9 < аср < 17,5 5, 5, 18, 22, 18

*р = 0,25 > а = 0,05

d02-128 Х4 5, 5, 17, 10, 20, 17, 15, 9, 19, 19 аср = 13,6 с; о2 = 34,04; сг= 5,83; V = 42,9% аср = 13,6 с; о2 = 14,8; о= 3,8; V = 28,3%

8,8 < аср < 17,8 5, 5, 20, 19, 19

*р = 0,17 > а = 0,05

d02-139 Х5 15, 15, 11, 8, 23, 17, 13, 10, 17, 20 аср = 15,2; о2 = 22,2; о= 4,7; V = 31,0% аср = 14,7; о2 = 5,5; о= 2,3; V = 15,9%

10,8 < аср < 18,6 8, 23, 10, 20

*р = 0,99 > а = 0,05

d02-149 Х6 19, 34, 13, 12, 12, 10, 14, 22, 12, 15 аср = 16,3 с; о2 = 51,8; о= 7,2; V = 44,2% аср = 13,9 с; о2 = 6,5; 2,5; V = 18,4%

11,2 < аср < 21,4 34, 10, 22

*р = 0,04 < а = 0,05

d02-123 Х7 19, 15, 19, 27, 30, 19, 25, 15, 22, 28 аср = 21,9 с; о2 = 28,8; о= 5,4; V = 24,5% аср = 20,8 с; о2 = 7,2; 2,7; V = 12,9%

18,0 < аср < 25,7 15, 27, 30, 15, 28

*р = 0,39 > а = 0,05

d02-168 Х8 20, 36, 19, 20, 13, 22, 31, 20, 32, 17 аср = 23,0 с; о2 = 54,9; о= 7,4; V = 32,2% аср = 20,2 с; о2 = 1,2; 1,1; V = 5,4%

17,7 < аср < 28,3 36, 13, 31, 32, 17

*р = 0,16 > а = 0,05

ё02-141 Х9 4, 35, 24, 24, 45, 26, 32, 19, 15, 20 аср = 24,4 с; о2 = 127,8; о= 11,3; V = 46,3% аср = 24,2 с; о2 = 21,8; 4,7; V = 19,3%

16,3 < аср < 32,5 4, 35, 45, 15

*р = 0,99 > а = 0,05

d02-122 Х10 26, 29, 37, 19, 51, 50, 12, 28, 116, 21 аср = 38,9 с; о2 = 893,4; 29,9; V = 76,8% аср = 36,8 с; ^ = 126,2; 11,2; V = 30,5%

21,6 < аср < 56,2 19, 12, 116, 21

*р = 0,14 > а = 0,05

Примечание. * - р-критерий, показывающий, что полученные данные имеют нормальное распределение, если значение р больше принятого уровня значимости а = 0,05

Множественное сравнение данных экспериментальных исследований антиноцицептивной активности в тесте тепловой иммерсии хвоста по критерию Крускала-Уоллиса представлены в таблице 3.9.

Таблица 3.9 - Результаты множественного сравнения данных экспериментальных исследований антиноцицептивной активности в тесте тепловой иммерсии хвоста по критерию Крускала-Уоллиса

Пара х1-х2 х1-х3 х1-х4 х1-х5 х1-х6 х1-х7 х1-х8 х1-х9

Р 0,105 0,671 0,811 0,925 0,722 0,042 0,035 0,007

Пара х1-х10 х2-х3 х2-х4 х2-х5 х2-х6 х2-х7 х2-х8 х2-х9

Р 0,0005 0,268 0,201 0,098 0,195 0,0007 0,0006 5,2e-5

Пара х2-х10 х3-х4 х3-х5 х3-х6 х3-х7 х3-х8 х3-х9 х3-х10

Р 1,8e-6 0,864 0,619 0,920 0,023 0,019 0,004 0,0003

Пара х4-х5 х4-х6 х4-х7 х4-х8 х4-х9 х4-х10 х5-х6 х5-х7

Р 0,751 0,932 0,036 0,030 0,007 0,0006 0,663 0,061

Пара х5-х8 х5-х9 х5-х10 х6-х7 х6-х8 х6-х9 х6-х10 х7-х8

Р 0,052 0,012 0,001 0,018 0,015 0,002 0,0001 0,947

Пара х7-х9 х7-х10 х8-х9 х8-х10 х9-х10 - - -

Р 0,605 0,212 0,655 0,238 0,443 - - -

По результатам данных, приведенным в таблице 3.9, установлено, что апостериорный тест Данна с использованием поправки Бонферрони (0,0011) показал, что средние ранги следующих пар различаются (где р < а): х1-х7; х1-х8; х1-х9; х1-х10; х2-х7; х2-х8; х2-х9; х2-х10; х3-х7; х3-х8; х3-х9; х3-х10; х4-х7; х4-х8; х4-х9; х4-х10; х5-х9; х5-х10; х6-х7; х6-х8; х6-х9; х6-х10.

В сравнении с референтной группой наибольшую антиноцицептивную активность показывают образцы с шифром d02-122, d02-123, d02-168 и d02-141.

В контрольной группе среднее значения времени отдергивания хвоста составляет 10,0 с. У крыс референтной группы, получавших с целью

фармакокоррекции болевого синдрома метамизол натрия ОАО «Фармстандарт» в дозе 7 мг/кг, данное значение увеличилось до 14,7 с.

На рисунке 3.15 показано время до начала отдергивания хвоста животными контрольной, референтной и опытных групп в тесте тепловой иммерсии.

Примечания: достоверность р* рассчитана в сравнении с показателями контрольной группы животных; достоверность р рассчитана в сравнении споказателями референтной группы животных Рисунок 3.15 - Время до начала отдергивания хвоста крыс в тесте тепловой

иммерсии хвоста

Показатель времени отдергивания хвоста из сосуда с горячей водой, нагретой до 50-53°С у крыс, получавших производные а-цианотиоацетамида с лабораторными шифрами Д02-133, d02-128 и d02-139 составляет в среднем по группам 12,8; 13,6 и 14,7 с, соответственно, что в 1,3-1,5 раза больше значения,

зафиксированного в контрольной группе, но меньше, чем в группе с фармакокоррекцией метамизолом натрия ОАО «Фармстандарт», в 1,10-1,14 раза.

Гетероциклическое соединение производное а-цианотиоацетамида с шифром d02-149 в спектре своей фармакологической активности проявляет антиноцицептивные свойства, не превосходящие таковые значения в референтной группе, однако увеличивает время отдергивания хвоста в сравнении с контрольной группой в 1,39 раза.

Анализируя полученные экспериментальные данные в соотношении с показателями, зафиксированными в группе сравнения, установлено, что образцы d02-123, d02-168 и d02-141 эффективнее метамизола натрия ОАО «Фармстандарт» в 1,37-1,53 раза.

Максимально выраженные болеутоляющие свойства в тесте тепловой иммерсии хвоста проявляет образец с шифром d02-122. Данное производное а-цианотиоацетамида увеличивает латентный период времени отдергивания хвоста в сравнении с контрольной группой в 3,7 раза (до 36,8 с), а с группой сравнения его эффективность возрастает в 2,44 раза.

На протяжении экспериментов наблюдалась адекватная поведенческая активность в динамике у животных всех исследуемых групп. Выявлено, что крысы всех опытных групп визуально по поведенческой активности не отличались от крыс контрольной группы.

3.2.3 Изучение показателей антиноцицептивной активности производных а-

цианотиоацетамида в тесте орофациальной тригеминальной боли

В процессе проведения классического фармакологического теста орофациальной тригеминальной боли по изучению анальгетической активности восьми оригинальных вновь синтезированных производных а-цианотиоацетамида были получены результаты, представленные в таблице 3.10.

Таблица 3.10 - Дисперсионный анализ показателей анальгетической активности (темпоральная активность по количеству чесательных движений) вновь синтезированных производных а-цианотиоацетамида в динамике направления

повышения эффективности

Через 10 минут Через 15 минут Через 20 минут

Среднее Среднее Среднее

арифметичес-кое арифметичес-кое арифметичес-кое

(а), (а), (а),

Группа дисперсия о2, дисперсия о2, дисперсия о2,

животных среднеквадра- среднеквадра- среднеквадра-

тическое тическое тическое

отклонение (о), отклонение (о), отклонение (о),

коэффициент коэффициент коэффициент

вариации(V) % вариации (V) % вариации(V) %

Контрольная а = 90,2 а = 65,2 а = 35,2

о2 = 96,4 о2 = 92,6 о2 = 36,0

о = 9,8 о = 9,62 о = 6,0

V = 10,9 V = 14,8 V = 17,0

Группа сравнения а = 60,0 а = 37,6 а = 19,7

о2 = 33,3 о2 = 6,5 о2 = 84,0

о = 5,8 о = 2,5 о = 9,2

V = 9,6 V = 6,8 V = 46,5

d02-141 а =33,9 а =39,6 а =34,0

о2 =37,7 о2 =60,04 о2 =134,22

о =6,14 о =7,75 о =11,59

V =18,1 V =19,57 V =34,07

d02-128 а =30,5 а =42,7 а =14,8

о2 =400,05 о2 =1396,21 о2 =572,76

о =20,0 о =37,37 о =23,93

V =65,57 V =87,52 V =161,69

d02-123 а =28,8 а =13,7 а =5,6

о2 =277,4 о2 =765,41 о2 =18,64

о =16,7 о =27,67 о =4,31

V =58,0 V =201,97 V =76,96

d02-149 а =27,7 а =11,5 а =6,1