Исследование модификации множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Ермакова, Наталья Владимировна

• Ермакова, Наталья Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ермакова, Наталья Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

• ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА I. Множественная лекарственная устойчивость.

1.1 Неклеточные механизмы устойчивости.

1. 2 Клеточные механизмы устойчивости.

1.2.1 Лекарственная устойчивость, обусловленная инактивацией препарата в клетке.

1.2.2 Устойчивость, связанная с изменением мишеней лекарственных препаратов.

1.2.3 Роль ключевых генов, контролирующих апоптоз, в развитии лекарственной устойчивости.

1.2.3.1 Ген р53.

1.2.3.2 Антионкоген PTEN и лекарственная устойчивость опухолевых клеток.

1.2.3.3 Влияние онкогена Вс1-2 и других генов семейства Вс1-2 на лекарственную устойчивость опухолевых клеток.

1.2.3.4 Система CD95-L/CD95 (FasL/Fas ) и лекарственная устойчивость.

1.2.4 Транспортные белки во множественной лекарственной устойчивости.

1.2.4.1 Стуктура П-гликопротеина.

1.2.4.2.Конформационные изменения структуры Пгп.

1.2.4.3. Ген mdrl, кодирующий П-гликопротеин, генетические механизмы Пгп-МЛУ. ш 1.2.4.4. Субстратная специфичность Пгп.

1.2.4.5. Экспрессия Пгп в нормальных тканях и клетках.

1.2.4.6. Роль МЛУ, опосредованной Пгп (Пгп-МЛУ), в злокачественных новообразованиях.

1.2.4.7 MRP, белок, ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью.

1.3. Ингибиторы транспортных белков МЛУ.

1.3.1 Ингибиторы П-гликопротеина.

1.3.1.1 Ингибиторы 1 поколения.

1.3.1.2 Ингибиторы 2 поколения.

1.3.1.3 Ингибиторы 3 поколения.

1.3.2 Ингибиторы MRP.

Резюме:.

ГЛАВА II. Регуляция множественной лекарственной устойчивости.

2.1 Роль сигнальных систем клетки в МЛУ.

2.1.1. Влияние цитокинов на МЛУ.

2.1.2. Роль фосфолипазы С и протеинкиназы С в регуляции МЛУ.

2.1.3. Роль МАПК каскада в МЛУ.

2.1.4. Факторы транскрипции, регулирующие МЛУ.

2.2 Активные формы кислорода и МЛУ.

Резюме:.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. Объект исследования.

1.1 Культуры клеток.

1.2 Получение резистентного штамма клеток Р388ВР.

1.2.1. Определение экспрессии П-гликопротеина.

1.3 Получение резистентного штамма клеток НЕр-2.

2. Определение чувствительности опухолевых клеток к различным агентам по критериям выживаемости клеток и повреждению ядер в опытах in vitro.

2.1. Используемые агенты.

2.2. Определение чувствительности клеток лимфолейкоза Р388 и Р388ВР.

2.3. Определение чувствительности клеток рака гортани человека НЕр-2 и Нер-2ТР.

3. Определение роста опухолей и эффекта противоопухолевых препаратов на их рост.

4. Определение МЛУ в клетках лимфолейкоза Р388 и Р388ВР.

5. Определение МЛУ в клетках рака гортани человека НЕр-2.

6. Определение активных форм кислорода в клетках лимфолейкоза Р388 и Р388ВР.

7. Введение перфторана и создание условий гипероксии.

8. Статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Часть I. Авермектины - новый класс ингибиторов множественной лекарственной устойчивости.

1.1. Влияние авермектинов на МЛУ клеток лимфолейкоза Р388.

1.1.1. Оценка МЛУ штамма клеток лимфолейкоза Р388, устойчивого к винкристину.

1.1.2. Действие авермектинов на выживаемость клеток Р388 и Р388ВР.

1.1.3. Модификация противоопухолевого эффекта винкристина на клетках Р388 и Р388ВР авермектинами.

1.1.4. Действие авермектинов на активность транспортных белков МЛУ.

Резюме:.

1.2. Влияние авермектинов на МЛУ клеток НЕр-2.

1.2.1. Оценка МЛУ штамма клеток НЕр-2ТР, устойчивого к таксолу.

1.2.2. Действие авермектинов на выживаемость. клеток НЕр-2 и НЕр-2ТР.

1.2.3. Модификация эффекта противоопухолевых препаратов на клетки НЕр-2 и НЕр-2ТР авермектинами.

1.2.4. Действие авермектинов на активность транспортных белков клеток НЕр-2.75 Резюме:.

1.3. Противоопухолевые эффекты авермектинов.

1.3.1. Действие аверсектина С на асцитную опухоль лимфолейкоз Р388.

1.3.2. Действие аверсектина С на солидную карциному Эрлиха.

1.3.2.1 Влияние аверсектина С на рост солидной карциномы Эрлиха.

1.3.2.2. Влияние аверсектина С на большие опухоли карциномы Эрлиха.

1.3.3. Влияние авермектина В1 на рост солидной карциномы Эрлиха.

Резюме:.

1.4. Усиление противоопухолевых эффектов винкристина авермектинами.

1.4.1. Действие винкристина в сочетании с авермектинами на солидную карциному Эрлиха.

1.4.2. Противоопухолевое действие винкристина в сочетании с авермектинами на лимфолейкоз Р388.

1.4.3. Противоопухолевое действие винкристина в сочетании с авермектинами на резистентный штамм Р388ВР.

Резюме:.

Часть 2. Регуляция МЛУ опухолей уровнем их оксигенации.

2.1. Зависимость МЛУ клеток Р388ВР от срока роста опухоли.

Резюме:.

2.2. Изменение активных форм кислорода по мере роста опухолей Р388ВР.

Резюме:.

2.3. Влияние увеличения оксигенации опухолей Р3888ВР с помощью гипероксии и перфторана на МЛУ опухолевых клеток.

Резюме:.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование модификации множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток»

По данным Всемирной Организации Здравоохранения онкологические заболевания являются одной из самых распространенных причин смерти на Земле. Несмотря на многолетние изучения проблемы рака, терапия онкологических заболеваний сталкивается с рядом трудностей, одной из которых является множественная лекарственная устойчивость (МЛУ) опухолевых клеток к различным противоопухолевым препаратам.

Устойчивость к лекарственным препаратам может развиваться вследствие блока в опухолевых клетках апоптоза, вследствие особенностей роста опухолей, при которых уменьшается кровоснабжение опухоли и, следовательно, доставка препаратов с кровью. МЛУ также может быть результатом инактивации препарата в клетке, снижения его поступления в клетку и повышения вывода препарата из нее. В последние десятилетия все больше внимания уделяется проблеме повышенного транспорта лекарственных препаратов из опухолевых клеток, в результате которого внутриклеточная концентрация лекарственных средств снижается ниже летального уровня. Откачивают лекарственные препараты из клетки специфические транспортные белки семейства ABC (ATP- binding cassette).

Эти белки, локализованные в цитоплазматической мембране, осуществляют транспорт из клеток широкого ряда биологически важных веществ за счет энергии гидролиза АТФ. К транспортным белкам семейства ABC, ответственным за развитие устойчивости, относят П-гликопротеин, белок MRP1 (multidrug resistance-associated protein 1) и недавно обнаруженный белок MXR (mitoxantrone resistance protein). Эти белки в норме обеспечивают транспорт из клеток в кровь и каналы, образованные эпителием, метаболитов, продуктов распада и ксенобиотиков. Они создают гематоэнцефалический барьер, осуществляют процессы выделения в кишечнике, печени и почках и транспорт из клеток медиаторов, регулирующих иммунитет. Кроме того, сверхэкспрессия генов этих белков была обнаружена во многих опухолевых клетках, причем уровень транспортных белков существенно возрастал после терапии противоопухолевыми препаратами. Особенно важно учитывать роль транспортных белков в лечении острой миелоидной лейкемии, раках молочной железы и прямой кишки, т.к. именно эти заболевания чаще других сопровождаются развитием устойчивости опухолей.

Субстратами транспортных белков МЛУ являются такие противоопухолевые препараты, как алколоиды бравинка (винкристин, винбластин), антрациклины (даунорубицин, доксорубицин), эпиподофиллотоксины (этопозид), таксол. Более того, показано, что П-гликопротеин транспортирует ингибиторы протеазы Н1У-1, препараты, используемые в лечении вируса иммунодефицита человека.

Очевидно, что подавление множественной лекарственной устойчивости и предотвращение ее развития является задачей первоочередной важности для терапии опухолевых заболеваний.

Одним из способов подавления МЛУ является применение ингибиторов транспортных белков, блокирующих транспорт веществ из клеток и повышающих их внутриклеточную концентрацию. Эффективные ингибиторы должны избирательно действовать на опухолевые клетки в малых концентрациях и не быть токсичными для нормальных клеток. Применяемые в настоящее время в клинике ингибиторы имеют существенные недостатки: они малоэффективны, часто обладают побочными эффектами и не снимают МЛУ полностью при клинически достижимых концентрациях. Таким образом, задача подбора высокоспецифичных ингибиторов множественной лекарственной устойчивости до сих пор не решена.

В литературе есть данные об ингибиторной активности в отношении П-гликопротеина препарата ивермектина, синтетического аналога авермектина В 1а. Авермектины - соединения макролидной природы, продукты жизнедеятельности микроорганизмов 81:гер1:отусез ауегтШНБ, широко применяются в клинике благодаря своим антипаразитарным свойствам. Данные об ингибиторной активности природных авермектинов в отношении транспортных белков МЛУ отсутствуют.

Другим способом борьбы с МЛУ опухолей могло бы быть подавление экспрессии генов, кодирующих транспортные белки, и снижение их активности воздействием на клеточные сигнальные системы. Однако в настоящее время еще имеется мало информации о регуляции генов МЛУ и роли сигнализации в регуляции активности этих белков. Исследования в этом направлении только начинаются. В литературе существуют данные о зависимости экспрессии генов

МЛУ от концентрации активных форм кислорода, однако, эти данные противоречивы.

Целью настоящей работы явилось исследование подавления и регуляции множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток с помощью ингибиторов транспортных белков и путем изменения уровня активных форм кислорода в опухолевых клетках.

В работе были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние авермектинов на множественную лекарственную устойчивость клеток лимфолейкоза Р388 и штамма Р388ВР, устойчивого к винкристину.

2. Изучить влияние авермектинов на множественную лекарственную устойчивость клеток рака гортани человека НЕр-2 и штамма НЕр-2, устойчивого к таксолу.

3. Оценить противоопухолевые эффекты авермектинов in vivo.

4. Исследовать возможность усиления противоопухолевых эффектов винкристина авермектинами in vivo.

5. Изучить зависимость множественной лекарственной устойчивости клеток Р388ВР от срока роста опухоли.

6. Оценить изменение уровня активных форм кислорода по мере роста опухолей Р388ВР.

7. Определить влияние увеличения оксигенации опухолей Р3888ВР с помощью гипероксии и перфторана на множественную лекарственную устойчивость опухолевых клеток.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Ермакова, Наталья Владимировна

выводы

1. Авермектины подавляют множественную лекарственную устойчивость клеток лимфолейкоза Р388ВР, устойчивого к винкристину, клеток рака гортани человека НЕр-2ТР, устойчивого к таксолу, и их диких типов.

2. Относительная эффективность различных авермектинов в ингибировании множественной лекарственной устойчивости зависит от типа клеток и транспортируемого субстрата.

3. Внутрибрюшинное введение авермектинов в нетоксичных концентрациях подавляют рост опухолей in vivo.

4. При внутрибрюшинном введении авермектины усиливают противоопухолевый эффект винкристина in vivo.

5. Множественная лекарственная устойчивость клеток лимфолейкоза Р388ВР увеличивается с ростом опухоли.

6. Уровень активных форм кислорода снижается по мере роста опухоли Р388ВР, а выдерживание животных в условиях гипероксии или введение перфторана увеличивает концентрацию активных форм кислорода в опухолевых клетках.

7. Внутрибрюшинное введение перфторана в опухоль Р388ВР снижает количество клеток и уменьшает их множественную лекарственную устойчивость.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Определение ключевых событий, ведущих к множественной лекарственной устойчивости опухолей, и способов ее подавления является важнейшей задачей терапии онкологических заболеваний. Решение проблемы МЛУ опухолей важно также и в фундаментальном аспекте, так как связано с механизмами регуляции экспрессии генов сигнальными системами клеток и с их транспортными системами.

Несмотря на десятилетия исследований в данной области множество тайн остается неразгаданным. Нет единого мнения в вопросе о роли сигнальных систем клетки и ключевых посредников в регуляции МЛУ. Не найден эффективный и избирательный ингибитор МЛУ, который можно было бы использовать в клинике. Но нам известны основные факторы, приводящие к МЛУ: наиболее часто это увеличение экспрессии и активности специфических транспортных белков, откачивающих лекарственные препараты из клетки против градиента концентрации. Подавление МЛУ может идти как по пути использования ингибиторов активности транспортных белков, так и по пути изменения экспрессии генов, кодирующих белки МЛУ.

В данной работе впервые исследовали влияние природных макролактонов авермектинов на МЛУ опухолевых клеток. Полученные результаты свидетельствуют о том, что авермектины подавляют множественную лекарственную устойчивость клеток лимфолейкоза Р388 и штамма Р388ВР, устойчивого к винкристину. Единичные встречающиеся в литературе данные по синтетическому аналогу авермектинов ивермектину указывают, что ивермектин может являться ингибитором транспортных белков МЛУ. Показано, что устойчивость штамма Р388ВР обусловлена повышением активности транспортных белков. Обнаружено, что авермектины в нетоксичных концентрациях повышают чувствительность клеток Р388 и Р388ВР к винкристину. Самыми эффективными оказались авермектины группы А. Также показано, что авермектины подавляют транспорт флуоресцирующего субстрата транспортных белков кальцеина-АМ. Сравнение с классическим ингибитором циклоспорином А показало, что авермектин В2 по своей активности близок к нему, а авермектины группы А менее эффективны.

Авермектины также подавляют множественную лекарственную устойчивость клеток рака гортани человека НЕр-2 и штамма НЕр-2ТР, устойчивого к таксолу. Показано, что авермектины в нетоксичных концентрациях повышают чувствительность клеток дикого типа и устойчивого к таксолу штамма к противоопухолевым агентам винкристину и таксолу.

Обнаружены индивидуальные различия авермектинов. По действию на выживаемость клеток НЕр-2 наиболее активны авермектины группы А. Сравнение с классическим ингибитором циклоспорином А показало, что авермектин Al в 2 раза эффективнее подавляет активность транспортных белков, обуславливающих МЛУ.

Обнаруженная активность авермектинов в отношении транспортных белков МЛУ открывает новые возможности применения авермектинов в клинике. Информации о действии авермектинов на опухолевые клетки in vivo практически нет, а существующие работы ограничиваются экспериментами in vitro.

Показано, что введение авермектинов in vivo тормозит рост опухолей. Максимальный эффект наблюдается при внутрибрюшинном введении препарата. Авермектины влияют в широком диапазоне концентраций. Наибольший эффект достигается при суммарной дозе больше 4 мкг/г. Учитывая, что в концентрациях до 1 мкг/мл в экспериментах in vitro авермектины не вызывают гибели опухолевых клеток, можно предположить, что противоопухолевое действие идет через системы организма. Обнаружено, что комплекс авермектинов аверсектин С более активен в подавлении роста опухолей.

Также исследовали влияние авермектинов- на противоопухолевое действие винкристина in vivo. Авермектины удваивают эффект винкристина в чрезвычайно малых концентрациях. Также совместное введение с винкристином повышает среднюю продолжительность жизни мышей как с лимфолейкозом дикого типа, так и с устойчивым штаммом. Впервые показано различие в индивидуальных особенностях авермектинов в подавлении МЛУ.

Мы также исследовали возможность подавления МЛУ путем влияния на регуляцию транспортных белков МЛУ. Из литературы известно, что активные формы кислорода подавляют экспрессию белков МЛУ. Уровень АФК меняется по мере роста асцитной опухоли. Это связано с увеличением числа опухолевых клеток и снижением числа лейкоцитов, мигрирующих в опухоль, на разных стадиях- ее развития. • , . ■ ■

В нашей работе впервые показано, что рост опухоли Р388ВР сопровождается увеличением множественной лекарственной устойчивости. При этом также увеличивается устойчивость опухоли к винкристину. В то же время базальный уровень устойчивости опухоли дикого типа остается неизменным. Такая закономерность впервые обнаружена при росте асцитной опухоли.

Обнаружено, что рост асцитной опухоли лимфолейкоза Р388ВР сопровождается уменьшением уровня активных форм кислорода в брюшной полости. Наши результаты хорошо согласуются с литературными данными.

Модификация оксигенации опухолей позволяет влиять на их устойчивость. Мы увеличили концентрацию АФК в опухолевых клетках, выдерживая животных в условиях гипероксии или введением перфторана в опухоль. Двукратное введение перфторана уменьшало количество клеток в опухолях в 2 раза и МЛУ опухолевых клеток в 1.7 раза.

Полученные данные могут послужить основой для подавления и предотвращения МЛУ опухолей путем изменения их оксигенации.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ермакова, Наталья Владимировна, 2005 год

1. Барабой, В.А., Брехман, И.И., Голоткин, В.Г., Кудряшов, Ю.Б. Перекисное окисление и стресс.//Наука, 1992.

2. Владимиров, Ю.А., Азизова, O.A., Деев, А.И. Свободные радикалы в живых системах./ТИтоги науки и техники. Сер. Биофизика, 1991, 29, 1-249. Георгиев, Г. П. Как нормальная клетка превращается в раковую.// Соросовский образовательный журнал, 1999; 4, 17-22.

3. Дриняев, В.А., Кругляк, Е.Б., Мосин, В.А. Аверсектин С: физико-химические и биологические свойства.// Приклад. Биохим. Микробиол., 1999; 35(2), 206-212.

4. Ермакова, Н.В., Шапошникова, В.В., Левитман, М.Х., Ким,Ю.А., Корыстов, Ю.Н. Изменение множественной лекарственной устойчивости клеток лимфолекоза Р388, устойчивых к винкристину при росте асцитной опухоли. //Биологические мембраны, 2004; 21(2), 102-106.

5. Мосин, В.А., Кругляк, Е.Б., Стерлина, Т.С., Корыстов, Ю.Н., Шапошникова, В.В., Кублик, Л.Н., Левитман, М.Х., Дриняев, В.А. Действие авермектинов на клетки лимфолейкоза Р88 in vitro.// Антибиотики и химиотерапия, 1999, 44(6), 16-20.

6. Ярилин, А.А. Основы иммунологии.//Медицина, 1999.

7. Abolhoda, A., Wilson, А.Е., Ross, Н., Danenberg, P.V., Scotto, K.W., and Burt, M. Rapid activation of MDR1 gene expression in human metastatic sarcoma followintg in vivo exposure to doxorubicin.//Clin. Cancer Res. 1999; 5, 3352— 3356.

8. Adams, J.M., Cory, S. The Bcl-2 Protein Family: Arbiters of Cell Survival.// Science, 1998; 281(5381), 1322-1326.

9. Ahmad, S., Safa, A.R. and Glazer, R.I. Modulation of P-glycoprotein activity by protein kinase C-alpha in a baculovirus expression system. //Biochemistry, 1991, 33, 10313-10318.

10. Allen, J. D., Brinkhuis, R. F., van Deemter, L., Wijnholds, J., and Schinkel, A. H. Extensive contribution of the multidrug transporters P-glycoprotein and Mrpl to basal drug resistance.//Cancer Res., 2000; 60, 5761 -5766.

11. Baran, Y., Gunduz, U., Ural, A. Expression of multi drug resistance (MDR1) gene in human promyelocytic leukemia cell line selected with vincristine.// Turkish Journal of Cancer, 2005; 35(2), 88-92.

12. Bartsevich, V.V. and Juliano, R.L. Regulation of the MDR1 gene by transcriptional repressors selected using peptide combinatorial libraries. //Mol. Pharmacol. 2000; 58, 1-10.

13. Bass D.A., Parce J.W., Dechatelet L.R., Szeida P., Seeds M.C., Thomas M.// J. Immunol, 1983; 130(6),1910-1917.

14. Bates, S.E., Currier, S.J., Alvarez, M., and Fojo, A.T. Modulation of P-glycoprotein phosphorylation and drug transport by sodium butyrate. //Biochemistry 1992; 31, 6366-6372.

15. Bhushan, A., Abramson, R., Chiu, J.F., Tritton, T.R. Expression of c-fos in human and murine multidrug-resistant cells.//1991

16. Borst, P., Evers, R., Kool, M., Wijnholds, J. A family of drug transporters: the multidrug resistance-associated proteins.// J. Nat. Cancer Inst., 2000; 92(16), 1295-1302.

17. Burdon, R.H., Gill, V., Rice-Evans, C. Cell proliferaion and oxidative stress. //FreeRadic. Res. Commun., 1990; 11, 65-76.

18. Burg, R.W., Miller B.M., Baker, E.E. Avermectins, new family of potent anthelmintic agents: producing organism and fermentation. Antimicrob Agents Chemother// 1979; 15,3:361-367.

19. Chaudhary, P.M., Roninson, I.B. Induction of multidrug resistance in human cells by transient exposure to different chemotherapeutic drugs.// J. Natl. Cancer Inst., 1993; 85, 632-639.

20. Chen, G., Jaffrezou, J.P., Fleming, W.H., Duran, G,E., Sikic, B.I. Prevalence of multidrug resistance related to activation of the mdrl gene in human sarcomamutants derived by single-step doxorubicin selection.//Cancer Res, 2000, 54, 4980-4987.

21. Clarke, A. R., Purdie, C. A., Harrison, D. J., Morris, R. G., Bird, C. C., Hooper, M. L. and Wyllie, A. H. Thymocyte apoptosis induced by p53 dependent and independent pathways.//Nature, 1993; 362, 849-852.

22. Cobb, M.H., Goldsmith, E.J. How MAP kinases are regulated.// J Biol Chem, 1995;270, 14843-14846.

23. Cole, S.P.C., Bhardwaj, G., Gerlach, J.H., Mackie, J.E., Grant, C.E., Almquist, k.C., Stewart, A.J., Kurz, E.U., Deeley, R.G. Overexpression of a transporter gene in a multidrug-resistant human lung cancer cell line.// Science, 1992; 258, 16501654.

24. Essodaigui M., Broxterman H.J., Gamier-Suillerot A Kinetic analysis of calceinand calcein-acetoxymethyl ester efflux mediated by the multidrug resistanceprotein and P-glycoprotein.//Biochemistry, 1998; 37(8), 2243-2250.

25. Felix, R.A., Barrand, M.A. P-glycoprotein expression in rat brain endothelial cells:evidence for regulation by transient oxidative stress.// J. Neurochem., 2002; 80,64.72.

26. Feng, F., Xiang Y., Cui, Z., Liu, Z., Yang, Y. In vivo reversal of multidrug resistance by transduction of human tumor necrosis factor-alpha into drug resistant cell line of choriocarcinoma.// Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi, 2003; 38(5), 294297.

27. Filipits, M. MRP and MDR1 gene expression in primary breast carcinomas: M. Filipits.// Clin. Cancer Res., 1996; 2, 1239-1245.

28. Fine, R.L., Chambers, T.C., Sachs, C.W. P-glycoprotein, multidrug resistance and protein kinase C.II Stem Cells, 1996; 14, 47-55.

29. Fisher, G., Advani, R., Wakelee, H., Jacobs, C., Gladysheva, K., Fitzgerald, M., Sikic, B. A phase I trial of oblimersen and gemcitabine in refractory and advanced malignancies. //ASCO Meeting Abstracts, 2005; 23, 3174.

30. Ge Zhou, Tien Kuo, M. NF-B-mediated Induction of mdrlb Expression by Insulin in Rat Hepatoma Cells.//J.Biol.Chem., 1997; 272(24), 15174-15183.

31. Goa K, McTavish D, Clissold S, Ivermectin. A review of its antimicrofilarial activity, pharmacokinetic properties and clinical efficacy in onchocerciasis.//Drugs; 1991; 42, 640-658.

32. Goldsmith, M.E., Gudas, J.M., Schneider, E. Wild type p53 stimulates expression from the human multidrug resistance promoter in a p53-negative cell line.// J. Biol. Chem.,1995; 270, 1894-1898.

33. Goldstein, L.J., Fojo, A.T., Ueda, K., Crist, W., Green, A., Brodeur, G., Pastan, I., Gottesman, M.M. Expression of the multidrug resistance, MDR1, gene in neuroblastomas.//J. Clin. Oncology, 1997; 8, 128-136.

34. Gros P, Croop J, Roninson I, Varshavsky A, Housman DE. Isolation and characterization of DNA sequences amplified in multidrug-resistant hamster cells. //Proc Natl Acad Sci U S A., 1986;83(2), 337-341.

35. Hamada, H., Tsuruo, T. Characterization of the ATPase activity of the Mr 170,000 to 180,000 membrane glycoprotein associated with multidrug resistance in K562/ADM cells.//Cancer Res., 1988; 48, 4926-4932.

36. Hartmann, G., Kim, H., Piquette-Miller M. Regulation of the hepatic multidrug resistance gene expression by endotoxin and inflammatory cytokines in mice.// Int. Immunopharmacol2001; 1(2), 189-199.

37. Higgins, C.F. ABC transporters: From micro-organisms to man. // Annu. Rev. Cell. Biol., 1992; 8, 67-113.

38. Homolya H., Hollo Z., Germann U.A., Pastan I., Gottesman M.M., Sarkadi B. Fluorescent cellular indicators are extruded by the multidrug resistance protein.//J.Biol.Chem. 1993; 268(29), 21493-21496.

39. Hu, Z., Jin S.,and Scotto,K. Transcriptional activation of the MDR1 gene by UV irradiation.//J. Biol. Chem.2000; 275, 2979-2985.

40. Jones, P.M., George, A.M. Symmetry and structure in P-glycoprotein and ABC transporters .//Eur. J. Biochem., 2000; 267, 5298-5305.

41. Kolch, W., Heldecker, G., Rapp, U.R. Protein kinase C alpha activates RAF-1 by direct phosphorylation.//Nature, 1993; 364, 249-252.

42. Korystov, Y.N., Ermakova, N.V., Kublik, L.N., Levitman, M.K., Shaposhnikova, V.V., Mosin, V.A., Drinyaev, V.A., Kruglyak, E.B., Novik, T.S., Sterlina, T.S. Avermectins Inhibit Multidrug Resistance of Tumor Cells.// Eur.J.Pharmacol., 2004; 493, 57-64.

43. Cancer Res, 2001; 3,183-191.o Scotto, K., Egan, D. Transcriptional regulation of MDR1 genes.//Cytotechnol., 1998; 27,257-269.o Scotto, K., Johnson, R. Transcription of MDR1 a therapeutic target.// In Basic

44. Shapiro, A.B., Corder, A., Ling, V. P-glycoprotein-mediated Hoechst 33342 transport.//Eur J Biochem, 1997; 250, 115-121.

45. Sharom, F.J. The P-glycoprotein efflux pump: how does it transport drugs?// J. Membrane Biol, 1997; 160, 161-175.

46. Sinha, BK., Mimnaugh, E. G., Rajagopalan, S., Myers, C.E. Adriamycin activation and oxygen free radical formation in human breast tumor cells: protective role of glutathione peroxidase in adriamycin resistance //Cancer Res., 1989; 49, 3844-3848.

47. Smith, C. D., Li, Z., Lee, B. D., and Copper, J. E. Synthesis and evaluation of dihydropyrroloquinoline compounds that selectively inhibit P-glycoprotein.//Proc. Am. Assoc. Cancer Res. ,1993; 42, 953.

48. Smith, C. D., Li, Z., Lee, B. D., and Copper, J. E. Synthesis and evaluation of dihydropyrroloquinoline compounds that selectively inhibit P-glycoprotein.// Proc. Am. Assoc. Cancer Res. ,2001; 42, 953.

49. Sonveaux, N., Shapiro, A. B., Goormaghtigh, E., Ling, V., Ruysschaert, J.-M. Secondary and Tertiary Structure Changes of Reconstituted P-glycoprotein.//J. Biol. Chem., 1996; 271, 24617-24624

50. Stein, U., Walther, W., Shoemaker, R.H. Reversal of multidrug resistance by transduction of cytokine genes into human colon carcinoma cells.// J. Natl. Cancer Inst., 1996; 88(19), 83-92.

51. Sunderson, A., Jacobson, M.D. Reactive oxygen species and programmed cell death. //Trends Biochem Sci, 1995; 21, 83-86.

52. Tan S., Sagara Y., Liu Y., Maher P., Schubert D. The regulation of reactive oxygen species production during programmed cell death.//J. Cell Biol., 1998; 141(6), 1423-1432.

53. Tew, K.D., O'Brien, M., Kruh, G.D. The Influence of coordinate overexpression of glutathione phase II detoxification gene products on drug resistance.// J.Pharmacology Exp.Ther., 1994; 295(2), 480-487.

54. Treisman, R. Regulation of trancsription by MAP kinase cascades.//Curr. Opin. Cell. Biol., 1996; 8, 205-215.

55. Tsuruo, T., Iida, H., Tsulcagoshi, S., Sakurai, Y. Overcoming of vincristine resistance in P388 leucemia in vivo and in vitro through enhanced cytotoxity of vincristine and vinblastine by verapamil.//Cancer Res., 1981; 41, 1967-1972.

56. Wartenberg M., Ling F.C., Muschen M., Roe, J., Klein F. Regulation of the multidrug resistance transporter P-glycoprotein in multicellular tumor spheroids by hypoxia-inducible factor-1 and reactive oxygen species. //FASEB J. Express Article. 2003.

57. Wielinga, P.R., Haijn, M., Westerhoff, H.V., Lankelma, J. A method for studying plasma membrane transport with intact cells using computerized fluorometry.// Anal. Biochem., 2000; 263, 221-231.

58. Yamane, Y., Furuichi, M., Van Song, R.N.T., Mulcahy, R.T., Ishikawa, T., Kuo, M.T. Expression of multidrug resistance protein/GS-X pump and gamma-glutamylcysteine genes is regulated by oxydative stress.// J. Biol.Chem., 1998; 273, 31075-31085.

59. Yang, J.-M., Vassil, A., Hait, W. Activation of phospholipase C induces the expression of the multidrug resistance (mdrl) gene through the Raf-MAPK pathway.//Mol. Pharmacol., 2001; 60, 674-680.

60. Young, L. C., Campling, B. G., Voskoglou-Nomikos, T., Cole, S. P., Deeley, R. G., and Gerlach, J. H. Expression of multidrug resistance protein-related genes in lung cancer: correlation with drug response.//Clin. Cancer Res., 1999; 5, 673 -680.

61. Zamora, J.M., Pearce, H.L., Beck, W.T. Physical-chemical properties shared by compounds that modulate multidrug resistance in human leukemic cells.// Mol. Pharmacol., 1988; 33, 454-462.

62. Ziemann, C., Burkle, A., Kahl, G.F., Hirsch-Ernst, K.I. Reactive oxygen species participate in mdrlb mRNA and P-glycoprotein overexpression in primary rat hepatocyte cultures.// Carcinogenesis, 1999; 20, 407-414.