Влияние гестагенов на пролиферацию и факторы мультилекарственной резистентности опухолевых клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, кандидат медицинских наук Федотчева, Татьяна Александровна

• Федотчева, Татьяна Александровна
• кандидат медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Федотчева, Татьяна Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность исследования.

Цель и задачи работы.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Механизмы развития МЛР.

1.2. Возможности фармакологической регуляции состояния МЛР.

1.3. Гестагены и опухолевый рост.

1.4. Гестагены как модуляторы состояния МЛР.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Химическая структура изучаемых гестагенов.

2.2. Используемые реактивы.

2.3. Объекты исследования.

2.4. Метод культивирования клеток.

2.5. Изучение противоопухолевой активности изучаемых соединений.

2.5.1. Интегральный МТТ-тест оценки жизнеспособности и метаболической активности опухолевых клеток.

2.5.2. Оценка влияния соединений на пролиферативную активность опухолевых клеток по включению 3Н-тимидина в ДНК.

2.5.3. Оценка противоопухолевой активности соединений на мышах.

2.5.3.1.Оценка противоопухолевой активности мецигестона и бутагеста на перевиваемом мышам раке шейки матки РШМ-5.

2.5.3.2.Оценка химиосенсибилизирующей активности бутагеста на перевиваемом мышам остром лейкозе мыши Р388, резистентном к винкристину.

2.6. Анализ специфических участков связывания 3Н-прогестерона (3Н-Р4) и относительной связывающей способности (RBA) исследуемых гестагенов со специфическими участками связывания прогестерона в культурах клеток.

2.7. Оценка параметров резистентности опухолевых клеток к доксорубицину и влияния на них исследуемых соединений.

2.7.1. Оценка влияния соединений на транспортную активность Р-гликопротеина.

2.7.2. Выявление мРНК MDR-1 гена методом ОТ-ПЦР.

2.7.3. Метод определения активности глутатион-Sтрансферазы в объектах исследования.

2.7.3.1. Определение активности глутатион-8-трансферазы в гомогенате тканей.

2.7.3.2. Определение активности глутатион-Б-трансферазы в суспензии опухолевых клеток.

2.7.4. Цитофлуориметрический анализ клеточного цикла опухолевых клеток.

2.8. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Влияние новых гестагенов и доксорубицина на жизнеспособность опухолевых клеток линий MCF-7 и HeLa.

3.1.1. Цитостатическая активность новых гестагенов на культурах клеток. Концентрационная и временная зависимости.

3.1.2. Концентрационная и временная зависимости цитостатического действия доксору бицина на культурах клеток.

3.1.3. Комбинированное действие доксорубицина и гестагенов на опухолевые клетки.

3.2. Противоопухолевая активность новых гестагенов.

3.2.1. Противоопухолевая активность бутагеста и мецигестона на перевиваемого рака шейки матки человека РШМ-5.

3.2.2. Химиосенсибилизирующая активность бутагеста на перевиваемого острого лейкоза мыши Р388, резистентной к винкристину.

3.3. Характер связывания новых гестагенов с опухолевыми клетками. Анализ специфических участков связывания Н-прогестерона ( Н-Р4) и относительной связывающей способности (RBA) исследуемых гестагенов со специфическими участками связывания прогестерона в опухолевых клетках.

3.4. Возможные механизмы усиления гестагенами цитостатического действия доксорубицина.

3.4.1. Влияние гестагенов на транспортную функцию Р-гликопротеина в опухолевых клетках.

3.4.2. Влияние гестагенов на экспрессию Р-гликопротеина в опухолевых клетках.

3.4.3. Влияние гестагенов на активность глутатион-Б-трансферазы.

3.4.4. Влияние гестагенов на клеточный цикл опухолевых клеток.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние гестагенов на пролиферацию и факторы мультилекарственной резистентности опухолевых клеток»

Актуальность исследования.

Одной из проблем химиотерапии опухолей является снижение противоопухолевого действия цитостатиков вследствие развития в опухолевых клетках мультилекарственной резистентности уже после первых нескольких курсов лечения (Li et al., 2001). Требуются все более высокие дозы цитостатиков, что нежелательно, так как увеличивается их цитостатическое действие на нормальные ткани (Dive, 1997).

Причина снижения эффективности цитостатиков заключается в возникновении в опухолевых клетках мультилекарственной резистентности -multydrug resistance, MDR (Колесниченко, Кулинский, 1989; Саприн и др., 1996; Северин, 2000). Основными проявлениями MDR-фенотипа являются повышение экспрессии и активности ферментов метаболизма ксенобиотиков и внутриклеточных белков-транспортеров ксенобиотиков в опухолевых тканях (Северин, 2000).

Для преодоления состояния мультилекарственной резистентности (MJIP) опухолевых клеток необходимы высокоэффективные и нетоксичные для организма химиосенсибилизаторы (препараты, повышающие чувствительность опухолевых клеток к химиотерапии). Несмотря на интенсивный поиск таких препаратов с целью их внедрения в клиническую практику, адекватного химиосенсибилизирующего соединения пока не найдено.

Имеющиеся литературные данные свидетельствуют о том, что приблизиться к решению проблемы MJ1P можно с помощью гестагенов. Стероидные гормоны гестагены являются физиологическими субстратами Р-гликопротеина - основного белка MJIP, выкачивающего цитостатики из клетки против градиента концентрации (Barnes et al., 1996), а в высоких концентрациях способны ингибировать его активность и экспрессию по конкурентному механизму (Alpert et al., 1997), и, возможно, оказывать таким образом химиосенсибилизирующее действие на резистентные опухолевые клетки (Калинина и др., 2000).

Важность исследования новых синтетических гестагенов как потенциальных химиосенсибилизаторов связана с тем, что гестагенные препараты могут применяться и как самостоятельные препараты в лечении гормонзависимых опухолей, тогда как другие соединения, предлагающиеся в качестве химиосенсибилизаторов - верапамил, циклоспорин, как самостоятельные препараты в онкологии не применяются, вызывают ряд нежелательных побочных эффектов (Cianfrinlia et al., 2002; Kalivendi et al., 2001) и действуют на отдельные факторы МЛ Р.

В современной клинической практике для лечения рака матки, рака молочной железы и яичников в качестве дополнительной или паллиативной терапии используются препараты 17-оксипрогестерона капронат, медроксипрогестерона ацетат (МПА), мегестрола ацетат (МА) и другие, по химической структуре являющиеся производным прогестерона. Ни один из перечисленных препаратов не производится в России.

С целью создания отечественных оригинальных гестагенов в ЭНЦ и ОНЦ РАМН (Ржезников В.М. с сотр.) и в ИОХ РАН (Камерницкий А.В. с сотр.) были синтезированы новые стероиды с гестагенной активностью бутагест и мецигестон.

В проведенных ранее исследованиях обнаружена высокая специфическая гестагенная активность мецигестон а и бутагеста, их высокая химическая стабильность, отсутствие андрогенной и эсгрогенной активностей. Препараты не вызывают гибели животных даже при использовании в дозах, превышающих эффективные в сотни раз. Низкая токсичность препаратов в высоких дозах служит основанием для их изучения в качестве противоопухолевых и химиосенсибилизирующих препаратов.

Настоящая работа посвящена исследованию мецигестона и бутагеста в сравнении с прогестероном и МПА как потенциальных противоопухолевых и химиосенсибилизирующих препаратов.

Цель и задачи работы.

Цель работы: изучение новых синтетических гестагенов как противоопухолевых соединений и модуляторов состояния мультилекарственной резистентности опухолевых клеток

Задачи:

1.) Изучение влияния гестагенов, доксорубицина и их комбинации на жизнеспособность чувствительных (MCF-7/WT) и резистентных (MCF-7/R) опухолевых клеток.

2.) Изучение влияния гестагенов на факторы МИР: транспортную активность Р-гликопротеина, экспрессию мРНК Р-гликопротеина, активность глутатион-Б-трансферазы (ГСТ).

3.) Изучение влияния гестагенов на клеточный цикл опухолевых клеток.

4.) Выявление противоопухолевой активности новых гестагенов на мышах с раком шейки матки.

5.) Выявление химиосенсибилизирующей активности бутагеста на мышах с резистентным к винкристину острым лимфолейкозом

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Федотчева, Татьяна Александровна

ВЫВОДЫ.

1.) Все изученные гестагены - мецигестон, бутагест, прогестерон, МПА -обладают цитостатической активностью в отношении клеток рака молочной железы человека MCF-7 и рака шейки матки человека HeLa. Эффект развивается на 6 сутки инкубации с клетками; максимально

5 7 действующая концентрация — 10" М, минимально действующая — 10" М. Мецигестон имеет наиболее выраженный цитостатический эффект, прогестерон - наименее выраженный. Ряды по эффективности цитостатического действия гестагенов в максимально действующей концентрации (10"5М) в культурах клеток выглядят следующим образом. MCF-7AVT: Мецигестон > МПА > бутагест > прогестерон MCF-7/R: Мецигестон > МПА > бутагест > прогестерон HeLa: Мецигестон > МПА > бутагест ^ прогестерон

2.) В цитостатическом действии гестагенов и доксорубицина выявлен синергизм, наиболее выраженный в случае мецигестона в клетках MCF-7 и в случае мецигестона и прогестерона в клетках HeLa. Синергизм выявляется только при одновременном внесении в среду инкубации гестагенов и доксорубицина. В чувствительных к доксорубицину клетках синергизм имеет аддитивный характер, а в резистентных — супраадд ити в н ы й.

3.) Все изученные гестагены ингибируют транспортную активность Р-гликопротеина, снижают экспрессию мРНК Р-гликопротеина, но не влияют на активность ГСТ.

4.) Бутагест и мецигестон в комбинации с доксорубицином вызывают торможение клеточного цикла клеток MCF-7/R в премитотической фазе G2/M, тогда как по отдельности значительно не влияют на клеточный цикл, что свидетельствует об участии белков клеточного цикла в механизме химиосенсибилизирующего действия гестагенов.

5.) Мецигестон и бутагест обладают противоопухолевой активностью в отношении перевиваемого мышам рака шейки матки РШМ-5: мецигестон менее выраженной, чем препарат сравнения МПА, бутагест - более выраженной. Бутагест обладает химиосенсибилизирующей активностью в отношении лимфолейкоза мыши Р388, резистентного к винкристину.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Согласно поставленной цели — изучению новых синтетических гестагенов как потенциальных противоопухолевых соединений и соединений, повышающих эффективность цитостатиков, было исследовано влияние мецигестона и бутагеста на рост опухолевых клеток гормончувствительных клеточных культур MCF-7 и HeLa как самостоятельных препаратов и в комбинации с доксорубицином.

Показано, что мецигестон и бутагест дозозависимо тормозят рост опухолевых клеток, цитостатический эффект развивается на 6 сутки инкубации с клетками, максимально действующая концентрация -Препараты сравнения - МПА и прогестерон - ингибируют рост клеток менее эффективно.

Для оценки противоопухолевой активности мецигестона и бутагеста на мышах исследовали их влияние на рост перевиваемого рака шейки матки человека РШМ-5. Бутагест (50мкг/кг) ингибирует рост опухоли на 73%, мецигестон (100мкг/кг) - на 30%, МПА (50мкг/кг) - на 55%.

Таким образом, мецигестон и бутагест обладают выраженной цитостатической активностью в отношении клеточных культур MCF-7 и HeLa, противоопухолевой активностью в отношении перевиваемого РШМ-5.

Для изучения мецигестона и бутагеста как соединений, повышающих эффективность цитостатиков, исследовали их влияние на рост опухолевых клеток MCF-7/R, MCF-7/WT и HeLa в комбинации с доксорубицином. Во всех клеточных линиях выявлен синергизм в ци то стати ч ее ко м действии новых гестагенов и доксорубицина. Синергизм в цитостатическом действии новых гестагенов и доксорубицина в чувствительных к доксорубицину клетках MCF-7AVT и HeLa имеет кумулятивный характер, т.е. цитостатический эффект гестагенов суммируется с цитостатическим эффектом доксорубицина, в резистентных к доксорубицину клетках MCF-7/R синергизм связан с потенциированием гестагенами ослабленного цитостатического эффекта доксорубицина.

Возможные механизмы, обусловливающие синергизм в цитостатическом действии новых гестагенов и доксорубицина в резистентных к доксорубицину клетках MCF-7/R, связаны с ингибированием активности и экспрессии Р-гликопротеина, с эффектом 02/М-блока и не связаны с системой ГСТ.

Химиосенсибилизирующий эффект бутагеста имеет универсальный характер, так как наблюдается и в гормоннезависимой опухоли лимфолейкоза мыши Р388, резистентной к винкристину. На это указывает также ингибирующий эффект бутагеста и мецигестона на транспортную активность Р-гликопротеина в клетках рака гортани человека Нер-2, резистентных к винкристину. Данная клеточная линия также не содержит рецепторов прогестерона (Hagedorn, Nerlich, 2002).

Полученные данные свидетельствуют о цитостатической и противоопухолевой активности новых гестагенов. В работе обоснована целесообразность комбинированного применения гестагенов с цитостатиками. Мецигестон и бутагест обладают химиосенсибилизирующей активностью и могут быть рекомендованы для клинического изучения как универсальные модуляторы МЛР, действующие на различные типы опухолевых клеток, независимо от содержания в них рецепторов прогестерона.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Федотчева, Татьяна Александровна, 2004 год

1. Атасси Г., Жиро Б. Доклинические и клинические исследования новых противоопухолевых препаратов // Медикография. 2000. - Т. 22: № 1-2. - С. 46-53.

2. Бассалык JI.C. Рецепторы стероидных гормонов в опухолях человека. — М., 1987-С. 120-136.

3. Калинина Е.В., Новикова М.Д., Щербак Н.Р. и др. Прогестерон ингибирует глутатион-Б-трансферазу Р1-1 и оказывает антипролиферативный эффект на клетки эритролейкемии человека К562 // Вопросы онкологии. 2000. - Т. 46. №1.-С. 68-73.

4. Колесниченко Л.С., Кулинский В.И. Глутатионтрансферазы // Успехи современной биологии. 1989. - Т. 107. - С. 179-194.

5. Культура животных клеток. Методы. // Под ред. Р. Фрешни. — М., 1989.

6. Лакин Г.Ф. Биометрия. — М., 1990.

7. Саприн А.Н., Калинина Е.В., Бабенко М.Д. Биологические механизмы развития и регуляции мультилекарственной резистентности раковых клеток// Успехи биологической химии. 1996. - Т. 36. - С. 213-265.

8. Северин С.Е. // Геном человека и фармакотерапия. // Труды 7 Российского национального конгресса "Человек и лекарство". —2000.-С. 213-265.

9. Ю.Сергеев П.В., Галенко-Ярошевский П.А., Шимановский Н.Л. Очерки11. биохимической фармакологии. М.: РЦ «Фармединфо», 1996

10. Сергеев П.В., Шимановский Н. Л., Петров В. И. Рецепторы физиологически активных веществ. Волгоград, 1999.

11. Сметник В.П. Половые гормоны и молочная железа. // Гинекология. — 2000.; т. 2; №5.

12. Ставровская А. А. Клеточные механизмы мультилекарственной устойчивости опухолевых клеток. // Биохимия. 2000. - Т. 65. № 1. - С. 112126.

13. Федосов А.В. Семейкин А.В. Механизмы влияния прогестинов на пролиферацию клеток чувствительных тканей. // Вопр. Онкол. — 2003 — Т. 49 №1. — С.9-20

14. Abe М., Yamashita J., Ogawa М. Medroxyprogesterone acetate inhibits human pancreatic carcinoma cell growth by inducing apoptosis in association with Bcl-2 phosphorylation. // Cancer. 2000. - V. 88. N 9. - P. 2000-2009.

15. Ahola Т. M., Alkio N., Manninen Т., Ylikomi T. Progestin and G protein-coupled-receptor 30 inhibit mitogen-activated protein kinase activity in MCF-7 breast cancer cells // Endocrinology 2002 - V.143. N.12. - P. 4620-4626.

16. Ali-Osman F. Quenching of DNA cross-link precursors of chloroethylnitrosoureas and attenuation of DNA interstrand cross-linking by glutathione // Cancer Res. 1989. - V. 49. - P. 5258-5261.

17. Alkhalaf M., El-Mowafy A., Karam S. Growth inhibition of MCF-7 human breast cancer cells by progesterone is associated with cell differentiation and phosphorylation of Akt protein. // Endocrinology. -2002 -V.143. N12. — P.4583-4591.

18. Allen J.D., Brinkhuis R.F., Wijnholds J., Schinkel A.H. The mouse Bcrpl/Mxr/Abcp gene: amplification and overexpression in cell lines selected for resistance to topotecan, mitoxantrone, or doxorubicin // Cancer Res. — 1999. V. 59. N17.-P. 4237-4241.

19. Allikmets R., Schriml L.M., Hutchinson A. et al. A human placenta-specific ATP-binding cassette gene (ABCP) on chromosome 4q22 that is involved in multidrug resistance // Cancer Res. 1998. - V. 58. N 23. - P. 5337-5339.

20. Alpeit L.C., Schecter R.L., Berry D.A. et al. Relation of glutathione S-transferase alpha and mu isoforms to response to therapy in human breast cancer // Clin.Cancer Res. 1997. - V3. N 5. - P. 661-667.

21. Altuvia S., Stein W.D., Goldenberg S. et al. Targeted disruption of the mouse mdrVo gene reveals that steroid hormones enhance MDR gene expresion I I J.Biol.Chem. 1993. - V. 268. N 36. - P. 27127-27132.

22. Amezcua C.A., Lu J.J., Felix J.C. et al. Down-regulation of Bcl-2 is a potential marker of the efficacy of progestin therapy in the treatment of endometrial hyperplasia // Gynecol.Oncol. 2000. - V. 79. N 2. - P. 169-176.

23. Arceci R.J., Baas F., Raponi R. et al. Multidrug resistance gene expression is controlled by steroid hormones in the secretory epithelium of the uterus // MoLReprod. 1990. - V. 25. N 2. - P. 101-109.

24. Awasthi S. Interactions of GST-pi with ethacrynic acid // BBA. 1993. - V. 1164. N2.-P. 173-178.

25. Barnes K.M., Dickstein В., Cutler G.B. et al. Steroid transport, accumulation, and antagonism of P-glycoprotein in multidrug-resistant cells // Biochemistry. -1996. V. 35. N 15. - P. 4820-4827.

26. Beraardini S., Bernassola F., Coitese C. et al. Modulation of GST Pl-1 activity by polymerization during apoptosis.// Cell Biochem. 2000. - V. 77. N 4. -P. 645-653.

27. Bergman A.M., Pinedo H.M., Peters G.J. Steroids affect collateral sensitivity to gemcitabine of multydrugresistant human lung cancer cells.// EurJ.Pharmacol. — 2001.-V. 416. N1-2.-P. 19-24.

28. Borst P., Elferink R.O. Mammalian ABC transporters in health and disease // Anmi. Rev.Biochem. 2002. - V. 71. - P. 537-592.

29. Bottini A., Berruti A, Bersiga A. et al. p53 but not bcl-2 immunostaining is predictive of poor clinical complete response to primary chemotherapy in breast cancer patients.// Clin.Cancer Res. 2000. - V. 6. N 7. - P. 2751-2758.

30. Bowman K.J., Newell D.R., Calvert AH., Cuitin N.J. Differential effects of the poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) inhibitor NU1025 on topoisomerase I and II inhibitor cytotoxicity in L1210 cells in vitro // BrJ.Cancer. 2001. - V. 84. N1.-P. 106-112.

31. Buxbaum E. Co-operative binding sites for transported substrates in the multiple drug resistance transporter Mdrl. // EurJ.Biochem. 1999. - V. 265. N 1. - P. 64-70.

32. Chang A.Y. Megestrol acetate as a biomodulator // Semin. Oncol. 1998. — V. 25. Suppl.6. - P. 58-61.

33. Charpin C., Garcia S., Bouvier C. et al. Automated and quantitative immunocytochemical assays of Bcl-2 protein in breast carcinomas. // BrJ.Cancer. 1997. - V. 76. N 3. - P. 340-346.

34. Chen X., Yeung Т.К., Wang Z. Enhanced drug resistance in cells coexpressing ErbB2 with EGF receptor or ЕгЬВЗ // Biochem.Biophys.Res.Commun. — 2000. -V. 277. P. 757-763.

35. Cianfriglia M., Cenciarelli C., Barca S. et al. Monoclonal antibodies as a tool for structure-function studies of the MDRl-P-glycoprotein // Curr.Protein Pept. Sci. 2002. - V. 3. N 5. - P. 513-530.

36. Ciocca D.R., Fuqua S.A., Lock-Lim S. et al. Response of human breast cancer cells to heat shock and chemotherapeutic drugs. // Cancer Res. 1992. - V. 52. N 13.-P.3648-3654.

37. Conseil G., Baubichon-Cortay H., Dayan G. et al. Flavonoids: a class of modulators with bifunctional interactions at vicinal ATP- and steroid-binding sites on mouse P-glycoprotein // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1998. - V. 95. N 17. -P. 9831-9836.

38. Daoud R., Kast K., Gros P., Georges E. Rhodamine 123 binds to multiple sites in the multydrug resistance protein // Biochemistry. 2000. - V. 39, N 50. - P. 15344-15352.

39. Diaz G., Diana A., Falchi A. et al. Intra- and intercellular distribution of mitochondrial probes and changes after treatment with MDR modulators. // IUBMB Life 2001 - V.51. N 2 - P. 121-126.

40. Diaz-Perez M.J., Wainer I.W., Zannis-Hadjopoulos M., Price G.B. Application of an in vitro system in the study of chemotherapeutic drug effects on DNA replication. // J.Cell.Biochem. 1996 -V. 61. N 3. - P. 444-451.

41. Dive C. Avoidance of apoptosis as a mechanism of drug resistance // J.Intern.Med. 1997. - V. 242. Suppl. 740. - P. 139-145.

42. Dorr R.T., Liddil J.D. Modulation of mitomycin C-induced multydrug resistance in vitro // Cancer Chemother.Pharmacol. 1991. - V. 27. N 4. - P. 290-294.

43. Duan Z., Lamendola D.E., Yusuf R.Z. et al. Overexpression of human phosphoglycerate kinase 1 (PGK1) induces a multidrug resistance phenotype. // Anticancer Res. 2002. -V. 22. N 4. - P. 1933-1941.

44. Eden J. Progestins and breast cancer. // Am. J. Obstet. Gynecol. 2003 - V.188 N.5. - P.1123-1131.

45. Ejendal KF, Hrycyna CA. Multidrug resistance and cancer: the role of the human ABC transporter ABCG2 //Curr.Protein Pept.Sci. 2002. - V. 3. N 5. -P. 503-511.

46. Etreby M.F., Liang Y., Lewis R.W. Induction of apoptosis by mifepristone and tamoxifen in human LNCaP prostate cancer cells in culture // Prostate. 2000. -V. 43. N1.-P. 31-42.

47. Evers R., Kool M., Smith A.J. et al. Inhibitory effect of the reversal agents V-104, GF120918 and Pluronic L61 on MDR1 Pgp-, MRP1- and MRP2-mediated transport // BrJ.Cancer. 2000. - V. 83. N 3. - P. 366-374.

48. Fadeel В., Oirenius S., Zhivotovsky B. Apoptosis in human disease: a new skin for the old ceremony? // Biochem.Biophys.Res.Commun. 1999. - V. 266. N 3. -P. 699-717.

49. Fernetti С., Pascolo L., Podda E. et al. Preparation of an antibody recognizing both human and rodent MRP1 // Biochem.Biophys.Res.Commun. — 2001. — V. 288. N4.-P. 1064-1068.

50. Ferte J. Analysis of the tangled relationships between p-glycoprotein-mediated multydrug resistance and the lipid phase of the cell membrane // Eur. J.Biochem.- 2000. V. 267. - P. 277-294.

51. Formby B, Wiley TS. Bcl-2, survivin and variant CD44v7-vl0 are downregulated and p53 is upregulated in breast cancer cells by progesterone: inhibition of cell growth and induction of apoptosis.// FASEB J. 1999 — 13 N8.- P.793-803.

52. Gacad M.A., Adams J.S. Proteins in the heat shock-70 family specifically bind 25-hydroxyvitamin D3 and 17beta-estradiol // J.Clin.Endocrinol.Metab. 1998. -V. 83. N4.-P. 1264-1267.

53. Garrios M., Mir L.M., Orlowsky S. Competitive and non-competitive inhibition of the multydrug-associated P-glycoprotein ATPase // Eur. J.Biochem. 1997. — V. 244.-P. 664-673.

54. Gompel A., Chaoudt M., Lery D., et al. // Maturitas 2000 -V.35 (supp. 1). - P. 343.

55. Gros P., Ben Neriah. Isolation and expression of a complementary DNA that confers multydrug resistance // Nature. 1986. - V. 323. - P. 728-731.

56. Gruol D.J., Bourgeois S. Chemosensitizing steroids: glucocorticoid receptor agonists capable of inhibiting P-glycoprotein function // Cancer Res. 1997. - V. 57. N4.-P. 720-727.

57. Habig W. H., Jakoby W. B. Assays for differentiation of glutathione S-transferases. Methods Enzymol. -1981-V.77 P.398-405.

58. Hagedorn H.G., Nerlich A.G. Analysis of sex-hormone-receptor expression in laryngeal carcinoma // Eur.Arch.Otorhinolaryngol. 2002. - V. 259. N 4. - P. 205-210.

59. Hamaguchi К., Godwin A.K., Yakushiji M. et al. Cross resistance to diverse drugs is associated with primary cisplatin resistance in ovarian cancer cell lines // Cancer Res. 1993. - V. 21. - P. 5225-5233.

60. Hansson J., Edgren M.R., Egyhazi S. et al. Increased cisplatin sensitivity of human fibroblasts from a subject with inherent glutathione deficiency // Acta Oncol. 1996. - V. 35. N 6. - P. 683-690.

61. Hao X., Widersten M. Co-variation of GST expression and cytostatic drug resistance in HELA cells: establishment of class Mu GST M3-3 as the domaining isoenzyme // BiochemJ. 1994. - V. 297 - P.59-67.

62. He G., Liang C.H., Lippard S.J. Steroid hormones induce HMG1 overexpression and sensitize breast cancer cells to cisplatin and carboplatin // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 2000. - V. 97, N 11. - P. 5768-5772.

63. Heid C.A. Real-time quantitative PCR. // Genome Res.-1996.-№ 6.-P.986-994.

64. Herzog C.E., Tsokos M., Bates S.E., Fojo A.T. Increased mdr-l/P-glycoprotein expression after treatment of human colon carcinoma cells with P-glycoprotein antagonists. // J. Biol. Chem. 1993 - V. 268. N 4. - P. 2946-2952.

65. Higuchi R. Kinetic PCR Analysis: Real-time monitoring of DNA amplification reactions//Biotechnology.-1993.-№ 11. p. 1026-1030.

66. Honjo Y., Hrycyna C.A., Yan Q.W. et al. Acquired mutations in the MXR/BCRP/ABCP gene alter substrate specificity in MXR/BCRP/ABCP-overexpressing cells. // Cancer Res. 2001 - V. 61. N 18. - P. 6635-6639.

67. Huang J., Bay B.H., Tan P.H. Nuclear morphometry and glutathione S-transferase pi expression in breast cancer // Oncol.Rep. 2000. - V. 7. N 3. - P. 609-613.

68. Janvilisri Т., Venter H., Shahi S. et al. Sterol transport by the human breast cancer resistance protein (ABCG2) expressed in 'Lactococcus lactis' // J.Biol.Chem. 2003 - epub ahead of print.

69. Kalivendi S.V., Kotamraju S., Zhao H. et al. Doxorubicin-induced apoptosis is associated with increased transcription of endothelial nitric-oxide synthase // J.Biol.Chem. 2001. - V. 276. N 50. - P. 47266-47276.

70. Kalken, van C.K., Broxterman H.J., Pinedo H.M. et al. Cortisol is transported by the multidrug resistance gene product P-glycoprotein // BrJ.Cancer. 1993. - V. 67. N2.-P. 284-289.

71. Keira M., Nishihira J., Ishibashi T. et al. Identification of a molecular species in porcine ovarian luteal glutathione S-transferase and its hormonal regulation by pituitary gonadotropins // Arch.Biochem.Biophys. 1994. - V. 308. N 1. - P. 126-132.

72. Kim S.H., Hur W.Y., Kang C.D. et al. Involvement of heat shock factor in regulating transcriptional activation of MDR1 gene in multidrug-resistant cells // Cancer Lett. 1997. - V. 115. N 1. - P. 9-14.

73. Konishi I., Nanbu K., Mandai M. et al. Tumor response to neoadjuvant chemotherapy correlates with the expression of P-glycoprotein and PCNA but not GST-pi in the tumor cells of cervical carcinoma. // Gynecol.Oncol. 1998. -V. 70. N3.-P. 365-371.

74. Krishnamachary N., Center M. The MRP gene associated with a non-P-glycoprotein multydrug resistance encodes a 190-kDa membrane bound glycoprotein // Cancer Res. 1993. - V. 53. - P 3658-3661.

75. Kuzmich S.L., Vanderveer K.D.T. Increased levels of glutathione S-transferase 7i transcript as a mechanism of resistance to ethacrinic acid // Biochem.J. 1992. -V. 281. -P. 219-224.

76. Lecureur V., Fardel O., Guillouzo A. The antiprogestatin drug RU 486 potentiates doxorubicin cytotoxicity in multidrug resistant cells through inhibition of P-glycoprotein function. // FEBS Lett. 1994. - V. 355. N 2. - P. 187-191.

77. Lewin J., Cooper A., Birch B. Progesterone: a novel adjunct to intravesical chemotherapy.// BJU Int. 2002 - V.90. N7. - P. 736-741

78. Li J., Xu L., He K. et al. Reversal effects of nomegestrol acetate on multidrug resistance in adriamycin-resistant MCF7 breast cancer cell line // Breast Cancer Res. 2001. - V. 3. N 4. - P. 253-263.

79. Lucci A., Han T.Y., Liu Y.Y. et al. Modification of ceramide metabolism increases cancer cell sensitivity to cytotoxics.// Int. J. Oncol. 1999. - V. 15. N 3.-P. 541-546.

80. Maruo Т., Matsuo H., et al. Effects of progesterone on uterine leiomyoma growt and apoptosis.// Steroids 2000 - V.65 N10-11. P.585-92.

81. Maruyama H., Listowsky I. Preferental binding of steroids by anionic forms of rat glutathione S transferase // J.Biol.Chem. - 1984. - V. 259. N 20. - P. 1244912455.

82. Matin K., Egorin M.J., Ballesteros M.F. et al. Phase I and pharmacokinetic study of vinblastine and high-dose megestrol acetate. // Cancer Chemother. Pharmacol. 2002 - V. 50. N 3. -P. 179-185.

83. Masuda H., Ozols R.F. Increased DNA repair as a mechanism of acquired resistance to cis-diamminodichloroplatinum in human ovarian cancer cell lines // Cancer Res. 1988. - V. 48. - P. 5713-5716.

84. McRae MP., Brouwer K.L., Kashuba A.D. Cytokine regulation of P-glycoprotein //Drug Metab. Rev. 2003 - V. 35. N 1. - P. 19-33.

85. Mealey K.L., Barhoumi R., Burghardt R.C. et al. Doxycycline induces expression of P glycoprotein in MCF-7 breast carcinoma cells // Antimicrob. Agents Chemother. 2002 - V. 46. N 3. - P. 755-761.

86. Meng J., You Z., Guo Y. Effects of estradiol and medroxyprogesterone on the growth and doxorubin-resistance of drug-resistant human epithelial ovarian cancer cell line OVCAR-3 // Zhonghua Fu.Chan.Ke.Za.Zhi. 1999. - V. 34. N 11.-P. 670-673.

87. Molino A., Pedersini R., Micciolo R. et al. Relationship between the thymidine labeling and Ki-67 proliferative indices in 126 breast cancer patients // Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol. 2002.- V. 10. N 4. - P. 304-309.

88. Morrow C.S., Smitherman P.K., Townsend AJ. Role of multidrug-resistance protein 2 in glutathione S-transferase PI-1-mediated resistance to 4-nitroquinoline 1-oxide toxicities in HepG2 cells // Mol.Carcinog. 2000. - V. 29. N.3.-P. 170-178.

89. Naito M., Yusa K., Tsuruo T. Steroid hormones inhibit binding of Vinca alkaloid to multidrug resistance related P-glycoprotein // Biochem.Biophys.Res.Commun. 1989. - V. 158. N 3. - P. 1066-1071.

90. Nuessler V., Stotzer O., Gullis E. et al. Bcl-2, bax and bcl-xL expression in human sensitive and resistant leukemia cell lines // Leukemia. 1999. - V. 13. N 11.-P. 1864-1872.

91. Nylandsted J., Rohde M., Brand K. et al. Selective depletion of heat shock protein 70 (Hsp70) activates a tumor-specific death program that is independent of caspases and bypasses Bcl-2 // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 2000. - V. 97. N 14.-P. 7871-7876.

92. Orlowski S., Mir L.M., Belehradek J.Jr., Garrigos M. Bromocriptine modulates P-glycoprotein function // Biochem.J. 1996. - V. 317. Pt. 2. - P. 515522.

93. Payen L., Courtois A., Vernhet L. et al. The multidrug resistance-associated protein (MRP) is over-expressed and functional in rat hepatoma cells // IntJ.Cancer. 1999. - V. 81. N 3. - P. 479-485.

94. Payen L., Delugin L., Courtois A. et al. Reversal of MRP-mediated multidrug resistance in human lung cancer cells by the antiprogestatin drug RU486 // Biochem.Biophys.Res.Commun. 1999. - V. 258. N 3. - P. 513-518.

95. Purmonen S., Ahola T.M., Pennanen P. et al. HDLG5/KIAA0583, encoding a MAGUK-family protein, is a primary progesterone target gene in breast cancer cells // Int-J.Cancer 2002. - V. 102. N1. - P. 1-6.

96. Qian X.D., Beck W.T. Progesterone photoaffinity labels P-glycoprotein in multydrug-resistant human leukemic lymphoblasts // J.Biol.Chem. 1990. — V. 265. N31. - P. 18753-18756.

97. Rajkumar T. Gullick W.J. The type I growth factor receptors in human breast cancer.// Breast Cancer Res.Treat. -1994. V. 29. - P. 3.

98. Rao U.S., Fine R.L., Scarborough G.A. Antiestrogens and steroid hormones, substrates of the human P-glycoprotein // Biochem.Pharmacol. 1994. - V. 48. N 2. - P. 287-292.

99. Regev R., Assaraf Y.G., Eytan G.D. Membrane fluidization by ether, other anesthetics, and certain agents abolishes P-glycoprotein ATPase activity and modulates efflux from multydrug-resistant cells // Eur.J.Biochem. 1999. - V. 259. N 1-2. - P. 18-24.

100. Robey R.W., Medina-Perez W.Y., Nishiyama K. et al. Overexpression of the ATP-binding cassette half-transporter, ABCG2 (Mxr/BCrp/ABCPl), in flavopiridol-resistant human breast cancer cells // Clin.Cancer Res. — 2001. — V. 7.N1.-P. 145-152.

101. Saha P., Yang J.J., Lee V.H. Existence of a p-glycoprotein drug efflux pump in cultured rabbit conjunctival epithelial cells // Invest.Ophthalmol.Vis.Sci. — 1998.-V. 39, N7.-P. 1221-1226.

102. Santen R.J., Song R.X., McPherson R. et al. The role of mitogen-activated protein (MAP) kinase in breast cancer. // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2002 — V. 80. N2.-P. 239-256.

103. Schafer J. M., Bentrem D.J., Takei H., Gajdos C., Badve S., Jordan V. С. // A mechanism of drug resistance to tamoxifen in breast cancer. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2002- V. 83 N1-5. P.75-83.

104. Schett G., Steiner C.W., Winkler S. et al. Reciprocal modification of Fas activation and stress protein response decides apoptosis or resistance development of cells // Acta Med.Austriaca. 2000. - V. 27. N 3. - P. 94-98.

105. Seeger H., Wallwiener D., Mueck A. O. The effect of progesterone and synthetic progestins on serum- and estradiol-stimulated proliferation of human breast cancer cells. // Horm. Metab.Res. 2003 - V.35 N2. - P.76-80

106. Seelig A. A general pattern for substrate recognition by P-glycoprotein // Eur.J.Biochem. 1999. - V. 251. - P. 252-261.

107. Shapiro A.B., Ling V. Positively cooperative sites for drug transport by P-glycoprotein with distinct drug specifities // Eur.J.Biochem. 1997. — V. 250. -P. 130-137.

108. Shapiro A.B., Ling V. Stochiometry of coupling of rhodamine 123 transport to ATP hydrolysis by P-glycoprotein // EurJ.Biochem. 1998. - V. 254. - P. 189-193.

109. Shapiro A.B., Fox K., Lam P. Stimulation of P-glycoprotein-mediated drug transport by prazosin and progesterone // Eur.J.Biochem. 1999. - V. 259. - P. 841-850.

110. Stockier M., Wilcken N.R., Ghersi D., Simes R.J. Systematic reviews of chemotherapy and endocrine therapy in metastatic breast cancer // Cancer Treat.Rev. 2000. - V. 26. N 3. - P. 151-168.

111. Swami S., Krishnan A.V., Feldman D. 1 alpha,25-Dihydroxyvitamin D3 down-regulates estrogen receptor abundance and suppresses estrogen actions in MCF-7 human breast cancer cells // Clin.Cancer Res. 2000. - V. 6. N 8. - P. 3371-3379.

112. Takebayashi Y., Nakayama K., Fujioka T. Expression of multidrug resistance associated transporters (MDR1, MRP1, LRP and BCRP) in porcine oocyte // Int.J.Mol.Med. 2001. - V. 7. N 4. - P. 397-400.

113. Thomas H., Coley H.M. Overcoming multidrug resistance in cancer: an update on the clinical strategy of inhibiting p-glycoprotein // Cancer Control. -2003. V. 10. N 2. - P. 159-165.

114. Thuneke I., Schulte H.M., Bamberger A.M. Biphasic effect of medroxyprogesterone-acetate (MPA) treatment on proliferation and cyclin D1 gene transcription in T47D breast cancer cells. // Breast Cancer Res.Treat. 2000 - V.63.N3.-P. 243-248.

115. Tomiuk S., Zumbansen M., StofFel W. Characterization and subcellular localization of murine and human magnesium-dependent neutral sphingomyelinase // J.Biol.Chem. 2000. - V. 275. N 8. - P. 5710-5717.

116. Tsuruo Т., Naito M., Tomida A. et al. Molecular targeting therapy of cancer: drug resistance, apoptosis and survival signal // Cancer Sci. 2003. - V. 94. N 1. -P. 15-21.

117. Ueda K., Okamura N., Hirai M. et al. Human P-glycoprotein transports Cortisol, aldosterone, and dexamethasone, but not progesterone. // J.Biol.Chem. -1992. V. 267. N 34. - P. 24248-24252.

118. Ushigome F., Takanaga H., Matsuo H. et al. Human placental transport of vinblastine, vincristine, digoxin and progesterone: contribution of P-glycoprotein. // Eur.J.Pharmacol. 2000. - V. 408. N 1. - P. 1-10.

119. Vargas-Roig L.M., Gago F.E., Tello O. et al. Heat shock protein expression and drug resistance in breast cancer patients treated with induction chemotherapy.// Int.J.Cancer. 1998. - V. 79. N 5. - P. 468-475.

120. Veuger M.J., Honders M.W., Spoelder H.E. et al. Inactivation of deoxycytidine kinase and overexpression of P-glycoprotein in AraC and daunorubicin double resistant leukemic cell lines // Leuk.Res. 2003. — V. 27. N 5.-P. 445-453.

121. Vegeto E., Shabaz M. M., Wen D. X., Goldman M. E., O'Malley B. W., McDonnel D. P. Human progesterone receptor A form is a cell- and promoter-specific repressor of human progesteron receptor В function.// Mol. Endocrinol. 1993 — V.7. P. 1244-1255.

122. Vilaboa N.E., Galan A., Troyano A. et al. Regulation of multidrug resistance 1 (MDRl)/P-glycoprotein gene expression and activity by heat-shock transcription fector 1 (HSF1) // J.Biol.Chem. 2000. - V. 275. N 32. - P. 2497024976.

123. Wang В., Xiao C., GofF A. K. Progesterone-modulated induction of apoptosis by interferon-tau in cultured epithelial cells of bovine endometrium, vitro // Biol. Reprod. 2003 - V. 68. N2. P. 673-679.

124. Wang E., Casciano C.N., Clement R.P., Johnson W.W. Cholesterol interaction with the daunorubicin binding site of P-glycoprotein // Biochem.Biophys.Res.Commun. 2000. - V. 276. - P. 909-916.

125. Wang K., Ramji S., Bhathena A. et al. Glutathione S-transferases in wild-type and doxorubicin-resistant MCF-7 human breast cancer cell lines // Xenobiotica. -1999. V. 29. N2. - P. 155-170.

126. Weinstein-Oppenheimer C.R., Henriquez-Roldan C.F., Davis J.M. et al. Role of the Raf signal transduction cascade in the in vitro resistance to the anticancer drug doxorubicin // Clin.Cancer Res. 2001. - V. 7. N 9. - P. 2898-2907.

127. Wielinga P.R., Heijn M., Westerhoff H.V., Lankelma J. A method for studying plasma membrane transport with intact cells using computerized fluorometry//Anal. Biochem. 1998. - V.263. N2. - P. 221-231.

128. Yang C.P., Cohen D., Greenberger L.M. et al. Differential transport properties of two mdr gene products are distinguished by progesterone // J.Biol.Chem. 1990. V. 265. N 18. -P. 10282-10288.

129. Yokoyama Y., Shinohara A., Takahashi Y. et al. Synergistic effects of danazol and mifepristone on the cytotoxicity of UCN-01 in hormone-responsive breast cancer cells // Anticancer Res. 2000 - V. 20. N 5A. - P. 3131-3135.

130. Zampieri L., Bianchi P., Ruff P., Arbuthnot P. Differential modulation by estradiol of P-glycoprotein drug resistance protein expression in cultured MCF7 and T47D breast cancer cells // Anticancer Res. 2002 - V. 22. N 4. - P. 22532259.

131. Zhang W., Ling V. Cell-cycle-dependent turnover of P-glycoprotein in multidrug-resistant cells // J.Cell Physiol. 2000. - V. 184. N 1. - P. 17-26.