Анализ генетических маркеров изменчивости изолятов вируса африканской чумы свиней, выделенных в Российской Федерации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Сибгатуллова Адыля Камилевна
Сибгатуллова Адыля Камилевна
кандидат наук
2022
- Специальность ВАК РФ00.00.00
- Количество страниц 131
Оглавление диссертации кандидат наук Сибгатуллова Адыля Камилевна
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1 Характеристика вируса Африканской чумы свиней
2.2 Эпизоотология АЧС
2.3 Структура вириона
2.3.1 Морфология
2.4 Структура генома вируса АЧС
2.5 Генотипирование изолятов вируса АЧС
2.6 Рестрикционный анализ генома вируса АЧС
2.7 Генотипирование по гену Б646Ь
2.8 Мультигенные семейства вируса АЧС
2.9 Генетические маркеры вируса АЧС
2.9.1 Ген Б602Ь
2.9.2 Ген ЕР402Я
2.9.3 Ген 1268Ь
2.9.4 Межегенный регион 173К/1329Ь
2.9.5 Мультигенное семейство 110, 360 и
2.9.6 Ген 061Я
2.10 Заключение по обзору литературы
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Материалы и методы исследований
3.1.1 Материалы исследований
3.1.2 Растворы и реактивы
3.1.3 Коммерческие наборы
3.1.4 Лабораторное оборудование и расходные материалы
3.1.5 Праймеры и зонды
3.2 Методы исследований
3.2.1 Подготовка проб органов для выделения вируса
3.2.2 Выделение нуклеиновых кислот
3.2.3 Полимеразная цепная реакция и электрофорез
3.2.4 Нуклеотидное секвенирование
3.2.5 Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени
3.2.6 Программное обеспечение
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
4.1.1 Анализ нуклеотидных последовательностей гена B602L
вируса АЧС
4.1.2 Анализ наличия вставки в межгенной области I73R/I329L у
изолятов вируса, выделенных в РФ с 2016 по 2019 гг
4.1.3 Анализ нуклеотидных последовательностей гена EP402R
вируса АЧС
4.1.4 Анализ мультигенного семейства 110 полевых
изолятов вируса АЧС
4.1.5 Анализ мультигенного семейства 505 (9R-10R) полевых
изолятов вируса АЧС
4.1.6 Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей трех изолятов вируса АЧС по генам B602L, EP402R, межгенному
участку I73R/I329L и мультигенным семействам 110 и
4.1.7 Отечетсвенные изоляты вируса АЧС в филогенетическом анализе
по гену B602L
4.1.8 Отечественные изоляты вируса АЧС в филогенетическом анализе
по гену I73R/I329L
4.1.9 Пространственно-временные характеристики изолятов вируса АЧС, циркулирующих на территории Российской Федерации по межгенному
участку I73R/I329L и MGF110
4.1. Обсуждение результатов исследований
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
5.1 Итоги исследований
5.2 Практические предложения
5.3 Перспективы дальнейшей разработки темы
6.СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
8. ПРИЛОЖЕНИЯ
Приложение
Приложение
Приложение
Приложение
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Другие cпециальности», 00.00.00 шифр ВАК
Получение стабильной клеточной линии, экспрессирующей рекомбинантный белок I329L вируса АЧС -антагонист TLR-32018 год, кандидат наук Каторкин Сергей Александрович
Изучение первичной структуры генома изолятов вируса высокопатогенного гриппа птиц A/H5N1, выделенных на территории Российской Федерации2012 год, кандидат наук Новикова, Мария Викторовна
Характеристика биологических свойств изолятов вируса АЧС, выделенных на территории Российской Федерации в 2017-2020 гг.2023 год, кандидат наук Шотин Андрей Романович
Характеристика рекомбинантного вируса африканской чумы свиней с делецией регулятора транскрипции A238L2020 год, кандидат наук Нефедьева Мария Владимировна
Биологические свойства и анализ полных геномов российских изолятов вируса африканской чумы свиней, выделенных в 2013-2014 гг.2017 год, кандидат наук Шевченко, Иван Вячеславович
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Анализ генетических маркеров изменчивости изолятов вируса африканской чумы свиней, выделенных в Российской Федерации»
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы исследования. Африканская чума свиней (АЧС) -геморрагическое вирусное заболевание домашних свиней и кабанов всех пород и возрастов, вызываемое вирусом АЧС. [54]. Это инфекционное заболевание вызывает высокую смертность, приближающуюся к 100% у домашних свиней и диких кабанов, и считается наиболее серьезной проблемой для свиноводческой промышленности и продовольственной безопасности во всем мире [107,122].
К настоящему времени АЧС зарегистрирована на территории нашей страны, а также в странах Восточной и Западной Европы. Кроме того, в 2018-2019 гг. вирус АЧС уже обнаружен в странах Юго-Восточной Азии, таких как Вьетнам, Северная Корея, Южная Корея, Лаос и Китай [52,136]. В настоящее время, эта болезнь является эндемичной или вызывает спорадические вспышки в большинстве стран Африки к югу от Сахары [107]. В последние годы АЧС широко распространилась и в настоящее время представляет угрозу для производства свинины во всем мире [39, 136].
В Африке вирус африканской чумы свиней поддерживается в цикле передачи между природными хозяевами - бородавочниками (Ркасосковтш ¿рр.), кустарниковыми свиньями (РоХотоскотш рогсш) и мягкими клещами рода Oтnithodoтos [59]. Вирус передается при прямом или косвенном контакте с зараженными свиньями [69]. Кроме того, мягкие клещи рода Oтnithodoтos и мухи-жигалки служат резервуарами и механическими переносчиками вирус АЧС к свиньям [36, 108]. Вирус способен передаваться клещами [149].
В литературных данных имеется информация о возможной механической передаче вируса АЧС мухами, слепнями, птицами, грызунами и плотоядными животными [108,112,137]. У домашних свиней вирус АЧС реплицируется преимущественно в моноцитах, вызывая широкий спектр симптомов и поражений, от сверхострых до хронических форм заболевания, с уровнем смертности до ста процентов [37, 128].
Ущерб носит социальный и экономический характер и выражается в запрете экспорта свиней и продуктов свиноводства, массовом убое здоровых и больных животных, экономической компенсации хозяйствам, затратах на санитарные и ветеринарные мероприятия (создание карантинных зон, массовые лабораторные исследования и т.д.) [6, 9, 25].
Помимо противоэпизоотических мероприятий, направленных на ликвидацию уже имеющихся очагов заболевания, большое значение имеют мероприятия, способствующие недопущению проникновения вируса на новые территории [20, 121,123]. Для повышения эффективности этих мероприятий важно постоянно аккумулировать и всесторонне анализировать информацию о уже возникших вспышках заболевания, на основании чего появляется возможность прогнозирования направлений распространения вируса и выявление потенциально угрожаемых территорий [20, 121,123].
АЧС является одной из наиболее значимых и трудно контролируемых болезней домашних свиней. В настоящее время различными исследователями показано, что вирус АЧС обладает разнообразными механизмами уклонения от иммунной системы хозяина, что является основным препятствием для создания средств защиты от болезни [12, 138]. Поскольку не существует эффективной вакцины для предотвращения этой инфекции, АЧС остается глобальной угрозой для всех стран [55, 135].
Неудачи в создании средств специфической профилактики стимулируют проведение фундаментальных исследований структуры и функций многочисленных белков вируса АЧС, высокой генетической и антигенной вариабельности, а также механизмов ускользания его от иммунной системы организма хозяев [12, 92, 138].
Степень разработанности темы исследования. В настоящее время одним из наиболее актуальных вопросов, стоящих перед отечественными и зарубежными исследователями, является изучение генетического разнообразия изолятов вируса АЧС, определения факторов передачи вируса, молекулярных механизмов проявления патогенных свойств, а также генетической из-
менчивости вируса АЧС [118].
Изначально, в качестве маркерных генов для характеристики изолятов и штаммов вируса АЧС испанскими учеными было предложено использовать ряд последовательностей, а именно фрагменты генов B602L и EP402R, а также межгенный участок I73R/I329L [94].
В совместной работе российских и испанских ученых была описана методика генетической дифференциации циркулирующих штаммов и изолятов вируса АЧС в Российской Федерации по наличию замен в межгенном участке I73R/I329L [94].
Ген B602L, расположенный в центральной консервативной области, используется для генетического типирования. Показано, что число тандем-ных повторов в последовательности данного гена может варьировать. Отмечают всего двадцать два возможных варианта данного участка [116].
Однако у всех до настоящего времени исследованных изолятов, выделенных на территории Российской Федерации обнаружен только один из вариантов центральной вариабельной области гена B602L (CVR1, central variable region) [116]. Генетическая изменчивость вируса АЧС определяет изменения и его биологических свойств. Так, в своих работах зарубежные авторы описывают исследования, проводимые на домашних свиньях с применением изолятов, у которых отсутствовали несколько тысяч пар нуклеотидов в геноме вируса АЧС. Заражение домашних свиней такими изолятами показало, что они обладают сниженной вирулентностью [78].
Понимание генетических особенностей возбудителя важно для определения источника, распространения и изучения эволюции изолятов АЧС, а также выяснения путей их циркуляции в Российской Федерации, странах Восточной Европы и Юго-Восточной Азии. Более подробное изучение генома вируса АЧС на основе анализа ряда маркерных генов позволят комплексно оценить генетические изменения вируса, их возможные фенотипические проявления.
Изучение генетической вариабельности генов и также определение их
корреляции с патогенными свойствами вируса, сроками персистенции и территориальной принадлежности позволят получить молекулярно-эпизоотологическую картину распространения заболевания на территории Российской Федерации [118].
Цель и задачи исследования. Целью работы являлось получение мо-лекулярно-генетических характеристик изолятов вируса африканской чумы свиней, циркулирующих на территории Российской Федерации.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Провести секвенирование маркерных участков генома (B602L, EP402R, I73R/I329L, MGF110, MGF505) изолятов вируса АЧС, циркулировавших на территории Российской Федерации в период с 2008 по 2019 гг.
2. Оценить возможность использования генетических маркеров для отслеживания динамики распространения изолятов вируса АЧС выделенных на территории Российской Федерации.
3. Провести филогенетический анализ изолятов и штаммов вируса АЧС на основе нуклеотидных последовательностей гена B602L и межгенного участка I73R/I329L.
4. Провести анализ пространственно-временного распространения отечественных изолятов вируса АЧС на основании гетерогенности межгенного участка I73R/I329L.
Научная новизна результатов исследований. Проведенный сравнительный анализ семидесяти девяти отечественных изолятов по пяти маркерным генам позволил выявить различия в нуклеотидных последовательностях у двадцати восьми из них.
Впервые обнаружены единичные изменения во фрагментах последовательностей в правой вариабельной области мультигенного семейства 110 у одиннадцати изолятов («Stavropol 01/08», «Stavropol 23.10.08», «Rostov 26.06.10», «Pskov 10.06.16», «Samara 16.03.17», «Saratov 18.02.17», «Omsk 17.09.17», «Pskov 23.08.16», «Saratov 22.02.17», «Krasnodar 18.09.11»,
«Volgograd 05.06.17»), выделенных от домашних свиней и диких кабанов в Российской Федерации в различные годы. В результате проведенных исследований впервые были обнаружены две нуклеотидные встройки, представляющие собой тандемный повтор (AATATATAGA) в интергенном регионе I73R/I329L длиной 10 нуклеотидов у двух изолятов, выделенных в Саратовской области. Также был обнаружен изолят «Tumen 15.11.2017» не содержащий встройку (TATATAGGAA) в межгенном участке I73R/I329L. Этот изолят являлся, гомологичным штамму «Georgia 2007/1», у которого также отсутствовала встройка в данном участке.
Впервые определены и опубликованы в базе данных «GenBank» фрагменты нуклеотидных последовательностей изолятов «Saratov 20.01.2017» и «Saratov 18.02.2017» под номерами «MT901177» и «MT901178», соответственно.
Проведен анализ пространственно-временного распространения современных отечественных изолятов вируса АЧС на основании гетерогенности межгенного участка I73R/I329L и MGF110 имеющего тандемные повторы и единичные замены в геноме. Показана возможность отслеживания динамики распространения вируса АЧС по наличию и отсутствию данных встроек и единичных замен.
Теоретическая и практическая значимость работы. В результате се-квенирования пяти маркерных генов была получена информация о наличии изолятов вируса АЧС, содержащих генетические мутации, что позволяет проводить дифференциацию изолятов и, возможно, отслеживать динамику их распространения.
В международную базу данных «GenBank» добавлены фрагменты геномных последовательностей двух отечественных изолятов вируса АЧС из Саратовской области. Показано, что фрагменты нуклеотидных последовательностей изолятов «Saratov 20.01.17» и «Saratov 18.02.17» в межгенной области I73R/I329L содержат две десятинуклеотидные вставки.
При проведении филогенетического анализа на основе межгенного
участка I73R/I329L и гена B602L установлено, что большинство отечественных изолятов сгруппированы в один кластер и обладают 100% идентичностью.
Методология и методы исследования. В работе использованы молекулярные методы исследований (выделение нуклеиновых кислот, ПЦР, гель-электрофорез, ПЦР в режиме реального времени, секвенирование) и биоин-форматические методы (анализ нуклеотидных последовательностей методами программы «QustalW», филогенетический анализ методом максимального правдоподобия).
Методология настоящего исследования также включает использование современных геоинформационных технологий. В процессе выполнения работы проведен пространственно-временной кластерный анализ. В работе использовалось программное обеспечение: (ESRI).
Положения, выносимые на защиту:
1. Результаты анализа нуклеотидных последовательностей изолятов вируса АЧС, выделенных на территории Российской Федерации.
2. Обнаружены генетические изменения в гене B602L, межгенном участке I73R/I329L и мультигенном семействе MGF110 у отечественных изолятов вируса АЧС.
3. Распространение вируса АЧС на территории РФ согласно идентификации мутаций в маркерных участках генома.
4. Формирование кластеров распространения изолятов вируса АЧС в Российской Федерации по обнаруженным генетическим изменениям.
Степень достоверности и апробация результатов работы. Достоверность всех экспериментальных данных подтверждена статистическими исследованиями. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на IX Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика 2017» (г. Москва, 2017г.); Международной научной конференции «Молодежь и наука XXI века», (г. Ульяновск, УлГАУ, 20-21 сентября, 2017); Международной научной конференции «Мо-
лодежь и наука XXI века» (г. Ульяновск, УлГАУ, 13 декабря, 2018 г.)
Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 11 научных работ, из них 1 статья - в международном журнале, цитируемом в системах Web of Science и Scopus, в том числе 7 статей в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки для докторских и кандидатских диссертаций.
Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена соискателем самостоятельно в лаборатории Диагностики и мониторинга ФГБНУ ФИЦВиМ. Автор выражает искреннюю благодарность сотруднику лаборатории Молекулярно-генетических исследований микробиологу Кудряшову Д.А. и главному научному сотруднику лаборатории Геномики вирусов, кандидату биологических наук Холод Н.С. за консультативную и методическую помощь при выполнении отдельных этапов работы.
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении ФГБНУ «ФИЦВиМ» c 2017-2019 гг. и поддержана грантом президента РФ МК-2000.2017.11 от 22.02.17.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, результаты исследований и их обсуждение, заключение, список сокращений, список литературы и приложения: иллюстрирована 9 таблицами и 34 рисунками. Список использованной литературы включает 160 источников, из них 132 иностранных.
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика вируса Африканской чумы свиней
Африканская чума свиней (АЧС) - вирусная контагиозная септическая болезнь, поражающая диких и домашних свиней всех пород и возрастов [10].
Болезнь характеризуется лихорадкой, обширными геморрагиями и цианозом кожи, тяжелыми дистрофическими и некротическими поражениями внутренних органов и высокой летальностью [1, 24].
Источником вируса АЧС являются больные и переболевшие дикие кабаны, и домашние свиньи [14]. Распространению АЧС способствует несколько факторов [5]. Трупы кабанов и домашних свиней, в том числе их разделанные туши, отходы боенских предприятий и пунктов общественного питания, а также вода, корма и места обитания животных служат факторами передачи [14]. Вирус АЧС имеет ряд биологических особенностей, обеспечивающих его длительное нахождение в биологических образцах, объектах ветеринар-но-санитарного надзора и мясных продуктах [5].
Вирус АЧС является крупным двухцепочечным ДНК-вирусом, он включен в семейство Asfaтviтidae в отряд Asfuviтales и класс Pokkesviтicetes. Он является единственным в своем роде, несмотря на то, что имеет общие структурные, геномные и репликативные характеристики с другими крупными ядерно-цитоплазматическими ДНК-содержащими вирусами [54]. Кроме того, согласно официальной номенклатуре, было спорное обсуждение о включении АЧС в отряд Megaviтales, в который, входят монофилетические по гетерогенному кладу крупные ядерно-цитоплазматические ДНК-содержащие вирусы [145]. В эту группу также входят Poxviтidae (порядок Chitoviтales), Iтidoviтidae (порядок Pimascoviтales), Asfaтviтidae, Phycodnaviтi-dae (порядок Algaviтales), Mimiviтidae (порядок Imiteтviтalesoviтales), Ascoviт-idae MaтseШeviтidae (ныне Pimascoviтales) [88].
Вирус африканской чумы свиней успешно размножается в клещах (рода Oтnithdoтous) и в свиньях семейства, он циркулирует между ними в естественном лесном цикле передачи в Африке.
Высокопатогеннные варианты вируса АЧС способны вызывать гибель диких кабанов (Sus scrofa) достигающей 100% [143]. Вирус обладает высоким антигенным и генетическим разнообразием. Всего было выявлено 24 генотипа и 9 серотипов [73, 91]. Основным препятствием на пути создания безопасной и достаточно эффективной вакцины против вируса АЧС является недостаток иммунологической информации.
К настоящему времени достигнут существенный прогресс в понимании патогенеза заболевания и взаимодействия вируса и хозяина [68]. В многочисленных исследованиях, отечественных и иностранных авторов было показано, что у переболевших свиней формируется иммунитет к гомологичным се-ротипам вируса АЧС.
Свиньи, которые переболевают вирус АЧС, обладают длительным иммунитетом к последующему заражению умеренно вирулентным вирусам гомологичного сероиммунотипа, но они редко бывают, устойчивы к гетероло-гичным вирусам [133]. Однако до сих пор не предложено безопасной и эффективной вакцины для борьбы с АЧС [55,135].
2.2 Эпизоотология АЧС
Африканская чума свиней является трансграничной экономически значимой болезнью, ущерб от которой в Российской Федерации и в мире исчисляется миллиардами рублей и долларов. Эта болезнь оказывает большое влияние на экономику и торговлю значительного количества стран. [2, 13, 50, 111]. В последние десятилетия АЧС неоднократно регистрировалась в странах Африки, а также распространилась к югу от Сахары и в страны Европы [38,39]. Вирус АЧС является эндемичным заболеванием в Восточной Африке, и о частых вспышках сообщалось в Кении и Уганде [103]. Быстрый рост свиноводства в этих странах, стало источником дохода для мелких фермеров. Поэтому регулярные вспышки АЧС представляют собой серьезный экономический ущерб для фермеров [119].
В Замбии вирус АЧС впервые был зарегистрирован в 1912 году в Восточной провинции, считается эндемическим заболеванием только в этой провинции. Строгие карантинные меры оказались успешными в ограничении этой болезни. Однако в 1989 году вспышка впервые произошла за пределами эндемичной провинции. Далее спорадические вспышки возникали почти на всей территории страны [146].
Вспышки вируса АЧС также регистрировали во Франции в 1964, 1967 и в 1974, Карибском бассейне, на Кубе в 1971 и 1980 годы; Доминиканской Республике, 1978 год; в Гаити, 1979 году) и в Бразилии в 1978 году. В течение 2013-2015 гг. в Замбии наблюдались беспрецедентные широко распространенные вспышки АЧС у домашних свиней, которые охватывали шесть провинций и десять районов. В таких странах как Португалия и Испания (Пиренейский полуостров) АЧС приобрела стационарный характер, неся угрозу свиноводству Европы [75, 80, 127].
Эпизоотическая обстановка ухудшилась в Италии, вспышки АЧС регистрировали на острове Сардиния, где было зафиксировано двадцать четыре очага в двух провинциях. Далее, в этот же период АЧС была впервые зарегистрирована на острове Мальта, а затем попала на территорию Бразилии в штат Рио-де-Жанейро, где заболевание быстро распространилось и, уже к лету, насчитывалось девяносто восемь очагов в десяти штатах [75, 80, 127].
Впервые АЧС была зарегистрирована на территории бывшего СССР в 1977 году: в Одесской области и Молдавии. Осуществление ветеринарно -санитарных мероприятий привело к искоренению эпизоотии из этих территорий [24]. В 2007 году АЧС впервые была зарегистрирована в Чечне в Ша-тойском районе (граничащей с Грузией), где были выявлены дикие кабаны, инфицированные вирусом. Молниеносное распространение заболевания произошло и в других районах Чечни, где регистрировали вторичные вспышки вируса АЧС.
Последняя крупная вспышка вируса АЧС началась в 2007 году Грузии в результате неправильного захоронения контаминированных пищевых отходов
в непосредственной близости от гавани Поти, откуда она распространилась на Северный Кавказ и Российскую Федерацию, а также достигла восточной границы Европейского Союза в начале 2014 г [19, 38, 39]. Первичная ошибка в постановке диагноза привела к тому, что АЧС быстро распространилась по всей территории Грузии [7,17]. Несвоевременная диагностика вспышек АЧС и неконтролируемое перемещение зараженных домашних свиней являются движущими силами быстрого распространения данного вируса [71,134]. Так, интенсивное распространение инфекции в Чеченской Республике привело к тому, что вирус вышел за пределы данной территории и последующее инфицирование диких кабанов, произошло в соседних с Чечней республиках - Ингушетии в июне 2008 года, Северной Осетии - (Алании), Кабардино-Балкарии в 2008 г., и Республике Дагестан в 2009 и 2010 гг. [24].
Следует отметить, что одной из причин заноса вируса АЧС в 2007 году на территорию России являлись кабаны, мигрирующие с территории Грузии [27]. Больные и переболевшие дикие кабаны, являлись главными источниками распространения АЧС на территории РФ [58, 105].
Заболевание от Южного Кавказа продолжило свое распространение на север и запад Российской Федерации, а также за ее пределы. Были сообщения о нескольких изолированных случаях заболевания у дикого кабана в Иране в 2008 году [83]. В округе Мбала (Северная провинция) вспышки АЧС были зарегистрированы в 2013 году среди домашних свиней, разводимых в деревнях вдоль границы с соседней Танзанией. Далее в июле того же года вспышки АЧС были зарегистрированы в районе Казунгула в Южной провинции. Вспышки АЧС возникали и в других районах, включая Каломо, Чома, Лусака и Чонгве (2013 г.). Эти вспышки, по-видимому, следовали по основному торговому маршруту вдоль шоссе Ливингстон-Лусака.
В дальнейшем произошло распространение вируса АЧС среди популяций дикого кабана и домашних свиней в Восточной Европе (Прибалтика, Беларусь, Молдова, Украина) и в Европейском союзе (Болгария, Венгрия, Чешская Республика, Словакия, Румыния, Эстония, Латвия, Литва и Польша) [41,
53, 105]. Во всех этих странах, за исключением Румынии, кабан является основным хозяином (резервуаром) вируса АЧС, так как на его долю приходится более 90% вспышек [39].
О вспышках вируса АЧС в 2012 и 2013 годах сообщили такие страны как Украина, и Белоруссия [39, 49]. Дикие кабаны сыграли важную роль в заносе и последующем распространении заболевания в странах Балтии и Польше [85, 138]. В течение 2015 года в Прибалтике и соседних странах было выявлено несколько случаев возникновения АЧС среди дикого кабана и вспышек среди домашних свиней [39, 49, 85,139]. Вирус АЧС вновь появился на территории Южной Африки в 2015 году, вспышки АЧС были зарегистрированы в округах Китве, Солвези и Касемпа располагающихся в Замбии [80]. Затем из Африки, вирус АЧС был дважды занесен в Европу (Португалия) и впоследствии распространился в другие европейские страны, например, Испанию, Францию, Италию, Бельгию и Нидерланды [34, 42].
В течение 2016 года вирус АЧС был обнаружен в Молдове, а в следующем году в Чехии, Румынии, Венгрии и Бельгии, что заставило Европейский Союз объявить состояние повышенной готовности [156,160]. В 2017 году вспышка АЧС была зарегистрирована в Иркутске, что в дальнейшем создает риск проникновения АЧС в Северный Китай и Юго-Восточную Азию [53,132]. Серьезность угрозы распространения АЧС подтвердилась возникновением вспышек заболевания в Молдове, Чехии и Румынии в 2017 г: в Венгрии, Китае, Бельгии и Монголии в 2018 г. [4].
В 2018-2019 гг. вирус АЧС уже проник в соседние страны такие как: Вьетнам, Северная и Южная Корея, Лаос, Тайланд, Камбодже, Маньям и др. [114,157,158]. В августе 2018 г. появились первые сообщения о вспышках АЧС в городе Шэньяне, северо-восточной провинции Китая [82]. По состоянию на октябрь 2018 года в восьми провинциях страны уже было зарегистрировано тридцать три вспышки АЧС. Предполагается, что болезнь могла быть завезена из стран Восточной Европы, через контрабанду свинины или субпродуктов пораженной АЧС, поскольку нуклеотидная последователь-
ность генома вируса АЧС выделенного в Китае имеет достаточно высокий уровень гомологии с последовательностью штамма «Georgia 2007/1» [110,114].
Первые вспышки АЧС во Вьетнаме были зарегистрированы в северной части страны, граничащей с Китаем, за счет незаконного перемещения животных и мясных продуктов через границу Китая и Вьетнама [148]. В 2019 году вспышка АЧС была зарегистрирована на свиноферме в провинции Хунг Йен, (Вьетнам) [125]. Клинические признаки и результаты вскрытия свиней во Вьетнаме в 2019 году были аналогичны патологоанатомическим изменениям, которые были вызваны изолятами вируса в Китае и Грузии (высокие показатели смертности животных за короткий период времени и многоочаговые геморрагические поражения во многих органах). На основе эпидемиологического анализа особенностей территории, где произошла вспышка АЧС, было высказано предположение о том, что вирус, скорее всего, проник во Вьетнам через дикого кабана, инфицированного вирусом АЧС, или больных домашних свиней, а также продуктов из свинины [148].
Несмотря на распространение АЧС во многих странах, в том числе в России и Европе, вспышки вируса в Юго-Восточной Азии гораздо более опасны, поскольку 60% поголовья свиней в мире сосредоточены в этом регионе и поэтому социально-экономические последствия заболевания будут более значительными [29,64,100,125,152].
2.3 Структура вириона 2.3.1 Морфология
Вирион возбудителя АЧС имеет икосаэдрическую форму, с диаметром 200 нм и состоит из нескольких слоев: нуклеопротеинового фибриллярного центра (нуклеопротеиновой корковой структуры), диаметр которого составляет 70-100 нм, покрытого плотным белковым слоем ядерной оболочки; внутреннего липидного слоя; икосаэдрического капсида с диаметром 170190 нм; и внешней липидсодержащей оболочки [46].
Внеклеточный вирион обладает дополнительной внешней оболочкой, которая образуется при выходе вируса через плазматическую мембрану [90]. В состав вириона входят пятьдесят четыре структурных белка. Молекулярная масса этих белков варьирует от десяти до ста пятидесяти кДа. В формировании зрелых инфекционных частиц икосаэдрической формы принимает активное участие трансмембранный белок р17, расположенный на внутренней поверхности оболочки вириона (рисунок 1) [46].
Капсид обладает икосаэдрической симметрией (Т=189-217), соответствующей 1892-2172 капсомерам (каждый капсомер имеет вид гексагональной призмы с центральным отверстием диаметра 13 нм и шириной 7,4-8,1 нм). Оболочки вирионов имеют диаметр 175-215 нм. Протеин р72, кодируемый геном Б646Ь, является основным их компонентом. Протеин ур Е120Я является мажорным компонентом капсида, он участвует в транспортировке зрелых вирионов от клеточных фабрик сборки к плазматической мембране, что обеспечивает вирусный экзоцитоз [54]. Внутренняя однослойная липид-ная оболчка вириона включает в себя белки ур17, ур54, урБ248Я и белок ур12, обнаруженный также в составе бислойной липопротеидной мембраны вириона [54].
Структурные белки вириона включают: на внешней оболочке белок СБ2у (ЕР402Я), р24 (pKP177R), рР2 (р06Ж); на капсидной оболочке - основной капсидный белок Р72 (pB646L), Р49 (pB438L) и pE120R; во внутренней оболочке Р17 (pD117L), Р54 или j13L (pE183L) и, вероятно, ]18Ь (pE199L) и j5R (pH108R) [140].
Похожие диссертационные работы по специальности «Другие cпециальности», 00.00.00 шифр ВАК
Анализ влияния рекомбинантных белков вируса африканской чумы свиней на его репродукцию in vitro2019 год, кандидат наук Мазлум Али
Совершенствование методов идентификации вируса гриппа птиц2021 год, кандидат наук Акшалова Перизат Батырханкызы
Генотипирование серотипов вируса блютанга2012 год, кандидат биологических наук Панферова, Агнеса Владимировна
Молекулярно-генетический анализ вариантов вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки, циркулирующих в Российской Федерации2018 год, кандидат наук Волынкина, Анна Сергеевна
Функциональная характеристика гликопротеина СD2v вируса африканской чумы свиней, слитого с Fс фрагментом иммуноглобулина G свиньи2020 год, кандидат наук Каторкина Елена Ивановна
Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Сибгатуллова Адыля Камилевна, 2022 год
Турция
Republic of Ту
Казахстан
Китай
^Корея
Рисунок 30 - Результаты картирования отечественных изолятов вируса АЧС по межгенному участку 173Я/1329Ь (наличие и отсутствие вставки и единичных замен) на территории РФ с 2016 по 2018 гг.
Вставки и единичные замены в геноме АЧС:
^ ^ направленное пространственное распределение изолятов АЧС с единичными вставками и заменами ^ 3 направленное пространственное распределение изолятов без изменений в геноме АЧС
J 500 1 000 км
I
135°0'В
оо
Таблица 6 - Список изолятов вируса АЧС составляющих два кластера отличающихся по межгенному участку I73R/I329L
N Дата Название изолятов Вид животного Замены, встрой-
п/п вспышки ки
1 15.06.2016 Рязанская область дикий кабан —
2 28.06.2016 Великий Новгород дикий кабан —
3 06.01.2017 Республика Крым домашняя свинья G/A
4 20.01.2017 Саратовская область домашняя свинья AATATATAGA, замена с G/A
5 25.01.2017 Владимирская область дикий кабан —
6 30.01.2017 Владимирская область дикий кабан G/A
7 02.02.2017 Саратовская область домашняя свинья —
8 18.02.2017 Саратовская область домашняя свинья AATATATAG
9 20.02.2017 Орловская область дикий кабан —
10 22.02.2017 Саратовская область домашняя свинья —
11 16.03.2017 Самарская область домашняя свинья —
12 25.03.2017 Иркутская область домашняя свинья G/A
13 04.04.2017 Московская область домашняя свинья
14 05.04.2017 Московская область домашняя свинья
15 02.05.2017 Владимирская область дикий кабан
16 05.06.2017 Волгоградская область домашняя свинья
17 14.06.2017 Волгоградская область домашняя свинья
18 03.07.2017 Владимирская область домашняя свинья
19 04.07.2017 Ивановская область домашняя свинья
20 05.07.2017 Волгоградская область домашняя свинья
21 12.07.2017 Нижний Новгород домашняя свинья A/C, A/C, A/C,A/C, A/T
22 13.07.2017 Владимирская область домашняя
свинья
23 13.07.2017 Волгоградская область домашняя свинья
24 14.07.2017 Владимирская область домашняя свинья
25 14.07.2017 Белгородская область домашняя свинья
26 15.07.2017 Московская область домашняя свинья
27 15.07.2017. Волгоградская область домашняя свинья
28 16.07.2017. Омская область домашняя свинья
29 24.07.2017 Саратовская область домашняя свинья
30 25.07.2017 Московская область домашняя свинья
31 28.07.2017 Омская область домашняя свинья
32 29.07.2017 Краснодарский край домашняя свинья
33 29.07.2017 Владимирская область дикий кабан
34 18.08.2017 Омская область домашняя свинья
35 01.09.2017 Воронежская область домашняя свинья
36 05.09.2017 Белгородская область домашняя свинья
37 09.09.2017 Владимирская область домашняя свинья
38 13.09.2017 Саратовская область домашняя свинья
39 17.09.2017 Омская область домашняя свинья
40 26.09.2017 Саратовская область домашняя свинья
41 29.10.2017 Самарская область домашняя свинья
42 29.10.2017 Самарская область домашняя свинья
43 01.11.2017 Волгоградская область домашняя свинья
44 06.11.2017 Калининградская об- дикий кабан
ласть
45 10.11.2017 Саратовская область домашняя свинья G/A
46 13.11.2017 Белгородская область дикий кабан
47 15.11.2017 Тюменская область домашняя свинья
48 17.11.2017 Белгородская область дикий кабан
49 22.11.2017 Белгородская область дикий кабан
50 23.11.2017 Белгородская область домашняя свинья G/A
51 28.11.2017 Белгородская область дикий кабан G/A
52 08.12.2017 Белгородская область дикий кабан
В результате анализа тридцати шести изолятов выделенных от кабанов и домашних свиней, было установлено, что изменения в нуклеотидных последовательностях наблюдали чаще в материалах изолятов, выделенных от домашних свиней. Полученные результаты географического картирования показали, что малая часть вспышек заболевания во временной период 20162018 гг. были вызваны изолятами вируса, обладающими встройкой в межгенной области I73R/I329L. На основе полученных данных можно утверждать, что наличие TRS вставки между генами I73R и I329L позволяет дифференцировать полевые изоляты вируса АЧС внутри II генотипа и отслеживать динамику распространения мутированных изолятов на территории РФ. На сегодняшний день изоляты вируса АЧС с генетической изменчивостью в участке I73R/I329L (TRS+) успешно вытесняют первоначальную исходную форму вируса.
Однако на территории страны все еще фиксируются вспышки, вызванные вирусом первоначального типа. Генетические маркеры гетерогенности вирусной популяции позволяют группировать изоляты вируса согласно структуре генома. Вариабельные области генома вируса АЧС отличаются у изолятов с разной историей происхождения. Так, изоляты вируса АЧС в Саратовской области («Saratov 20.01.17» и «Saratov 18.02.17») генетически
идентичны по межгенному участку 173КЛ329Ь, что свидетельствует об общности их происхождения.
Для того чтобы изучить динамику распространения отечественных изолятов с различным географическим происхождением обладающими мутациями в М0БП0 нами был проведен пространственно-временной анализ. Информация о вспышках вируса АЧС с генетическими изменениями МОБ110 представлены в таблице 7. На карте красными точками отмечены десять вспышек вируса АЧС среди домашних свиней, а синим цветом, отмечена одна среди диких кабанов (Рисунок 31).
Множество единичных замен было обнаружено у отечественных изолятов выделенных с 2008 по 2017 гг. Впервые восемь единичных замен было обнаружено у изолята выделенного от домашней свиньи из Ставропольского края в 2008 году (Рисунок 23-25).
Таблица 7 - Список изолятов вируса АЧС имеющих генетические изменения
в MGF110
N Название изолята Дата Вид живот- Встройки
п/п вспышки ного
1 Ставропольский край 2008 домашняя свинья замена C/A, G/A, T/A, T/A, G/A, G/A, T/C, T/C
2 Ставропольский край 23.10.2008 домашняя свинья замена C/A, C/G, C/T, G/C,T/A, T/A,G/A,G/A, T/C,T/C
3 Ростовская область 26.06.2010 домашняя свинья замена C/A, C/G, C/T, G/A, T/A, T/A, G/A, G/A, T/C, T/C
4 Краснодарский 18.09.2011 домашняя свинья замена C/A, G/A, T/A,T/A, G/A, G/A, T/C, T/C
5 Псковская область 10.06.2016 дикий кабан замена C/A, G/A, T/A, T/A, G/A, G/A, T/C, T/C
6 Псковская область 23.08.2016 домашняя свинья замена C/A, G/A, T/A, T/A, G/A, G/A,
Т/С, Т/С
7 Саратовская область 18.02.2017 домашняя свинья замена С/А, С/Т, С/Т, С/О, С/Т, О/А, Т/А, Т/А, О/А, О/А Т/С, Т/С
8 Саратовская область 22.02.2017 домашняя свинья замена с О/А, С/Т, С/О, С/Т, О/А, Т/А, Т/А, О/А, О/А, Т/С, Т/С
9 Самарская область 16.03.2017 домашняя свинья замена С/А, С/Т, С/О, С/Т, О/А, Т/А, Т/А, О/А, О/А, Т/С, Т/С, А/О
10 Волгоградская область 05.06.2017 домашняя свинья замена С/А, С/Т, С/О, С/Т, О/А, Т/А, Т/А, О/А, О/А, Т/С, Т/С
11 Омская область 17.09.2017 домашняя свинья замена С/А, G/A, Т/А, Т/А, О/А, О/А, Т/С, Т/С
Рисунок 31- Результаты картирования отечественных изолятов вируса АЧС по 1УЮР110 (наличие множества единичных замен на территории РФ с 2008 по 2017 гг.) Красным отмечены вспышки среди домашних свиней, синим среди диких кабанов
Далее на этой же территории была зарегистрирована вспышка вируса АЧС. Обнаруженный изолят с одиннадцатью заменами был найден у домашней свиньи осенью в 2008 году.
Спустя два года после обнаружения изолята на территории Ростовской области в июле 2010 года был выявлен изолят с десятью единичными заменами выделенный от домашней свиньи. Осенью 2011 года была зафиксирована вспышка у свиньи на территории Краснодарского края, в патологическом материале которой был идентифицирован вирус, также содержащий девять единичных замен в мультигенном семействе 110. Таким образом, циркуляция отечественных изолятов с генетическими изменениями с 2008 по 2011 гг. происходила среди домашних свиней в Центральном ФО.
Через пять лет после последней вспышки, вирус АЧС был найден в Северо-Западном ФО на территории Псковской области в июне и августе 2016 года, патологические материалы были выделены от домашней свиньи и дикого кабана. Два изолята полученные от этих животных содержали по восемь единичных замен. Затем в феврале 2017 года на территории Саратовской области Приволжского ФО были зарегистрированы две вспышки АЧС от двух домашних свиней. Всего у этих двух изолятов было выявлено двадцать три единичные замены. Далее в Самарской области вспышка заболевания была зарегистрирована на территории Самарской области. Изолят вируса АЧС с одиннадцатью заменами был обнаружен у домашних свиней. Вновь вспышка АЧС была зафиксирована в Южном ФО в Волгоградской области в июне 2017 года у домашней свиньи. Изолят от этого животного содержал одиннадцать замен при анализе МОБ 110. Далее циркуляция изолята вируса АЧС с восьми нуклеотидными заменами происходила на территории Омской области Сибирского ФО среди популяции домашних свиней. Результаты географического картирования показали, что одиннадцать изолятов вируса АЧС обнаруженных на территории РФ с 2008 по 2017 гг. обладали множественными заменами в мультигенном семействе 110. Поэтому полу-
ченные нами данные не позволили провести разделение изолятов на кластеры.
Таким образом, проведенные исследования показали, что межгенный участок I73R/I329L и MGF110 являются вариабельными среди отечественных изолятов вируса АЧС и могут быть использованы для анализа гетерогенности вирусной популяции. Изоляты вируса АЧС с генетическими изменениями, по двум маркерным генам обнаруженных в популяциях домашних свиней и диких кабанов могут быть использованы для отслеживания распространения возбудителя и установления источника заноса.
4.1 Обсуждение результатов исследований
В данной работе изучалось генетическое разнообразие изолятов вируса АЧС, выделенных на территории Российской Федерации от домашних свиней и диких кабанов с 2008 по 2019 гг. Для этого, была проведена работа по определению нуклеотидных последовательностей известных маркерных генов B602L, EP402R, мультигенных семейств MGF110, MGF505 ^-т) и межгенного участка и I73R/I329L. Изоляты вируса АЧС являются объектами для изучения молекулярной эволюции вируса. К настоящему времени зарубежными и отечественными авторами были накоплены данные результатов генетических исследований вируса АЧС, выделенных в разных регионах мира (Африка, Европа, Латинская Америка, Китай), в которых продемонстрирована выраженная гетерогенность вируса.
Полученные нами данные молекулярных исследований генома вируса АЧС, циркулирующего на территории Российской Федерации, позволяют дополнить сведения о характере генетических изменений вируса. В ходе выполнения работы нами были определены нуклеотидные последовательности 73 отечественных изолятов вируса АЧС.
В результате проведенного анализа гена EP402R у отечественных изолятов мутаций выявлено не было. Так в 2019 году в своей работе Мазлум А. с соавт. в результате анализа пяти изолятов выделенных с 2014 по 2016 гг. об-
наружили у изолята «Krasnodar 07/15» единичную замену в гене EP402R. Возможно единичная мутация, выявленная, Мазлумом А. в этом изоляте могла носить случайный характер и не закрепилась в геноме вируса АЧС. Также нельзя исключать, что животные, содержащие данный мутантный вирус были уничтожены и вирус не получил дальнейшего распространения.
В результате анализа нуклеотидных последовательностей межгенного участка 9R-10R мультигенного семейства 505 у отечественных изолятов вируса АЧС нам также не удалось выявить мутации. В 2014 году Gallardo C. опубликовали наличие тандемных повторов в межгенном участке 9R-10R MGF505 в изолятах вируса АЧС, выделенных на территории Польши.
Позднее, в 2016 г. Шевченко И.В. при проведении анализа нуклеотидных последовательностей изолятов, выделенных на территории РФ обнаружили делеции в этом же межгенном регионе. Однако, изменений в межгенном регионе 9R-10R у изолятов циркулировавших на територии РФ с 2018 по 2019 гг. не обнаружено.
При анализе нуклеотидных последовательностей гена B602L, мультигенного семейства 110 и межгенного участка I73R/I329L изолятов вируса АЧС обнаружены генетические измененения. В результате проведенных нами исследований выявлено, что двенадцать изолятов содержали идентичные единичные замены в позиции 353 (Рисунок 32). В 2016 г. Nieto R. с соавт. при исследовании двадцати четырех изолятов выделенных на территории Эстонии обнаружили генетические изменения в позиции 267. В этой области произошла замена G на A. Возможно, появление изолятов с единичными заменами носил случайный характер, поскольку после 2016 на территории Эстонии их больше не наблюдалось. Замена в гене B602L, определенная в данной работе не была обнаружена ранее в исследованиях других авторов и расположена не в центральной вариабельной области, а ближе к 3Л- концевой области гена. Следует отметить, что выявленные нами мутации в нуклеотидных последовательностях 12 изолятов имеют единичные случаи встречаемости.
Рисунок 32 - Схема расположения мутаций в нуклеотидной последовательности маркерного гена B602L ДНК вируса АЧС.
Примечание: желтой стрелкой отмечены замены нуклеотида G на A описанные в литературном обзоре; синей стрелкой, отмечены единичные замены нуклеотида С на Т, обнаруженные нами
В 2014 году С. Gallardo с соавт. впервые выявили и показали наличие десятинуклеотидной вставки (GAATATATAG) в межгенном регионе I73R/I329L у изолятов вируса АЧС из Литвы и Восточной Европы. В Российской Федерации такая же вставка была обнаружена в 2017 г. при секвениро-вании изолята «Odintsovo 02/14». Проведеный нами анализ 54-х изолятов вируса АЧС, выделенных на территории РФ с 2016 по 2018 гг. показал, что 53 изолята содержат идентичную вставку, что может говорить об общности происхождения или циркуляции изолятов на территории Восточной Европы и России. Кроме того, такие же изменения в 2018 г. были обнаружены в Китае в изолятах «SY18» и «CN201801».
Появление изолятов с идентичной нуклеотидной вставкой (GAATATATAG) в межгенном участке I73R/I329L, последовательностях европейских и азиатских изолятах имеют множественные случаи встречаемости на своих территориях, что может свидетельствовать о закреплении данного генотипа в вирусной популяции.
В ходе проведенного анализа нам удалось обнаружить в последовательностях фрагмента межгенного участка I73R/I329L у двух изолятов выделен-
ных в Саратовской области совершенно новую десятинуклеотидную вставку (AATATATAGA), а также ряд единичных замен. Обнаруженная нуклеотид-ная встройка является уникальной, и пока неясно, получит ли изолят дальнейшее распространение среди популяции диких или домашних свиней, или нет. На рисунке 33 видно, что вставка, обнаруженная, нами располагается в позиции 173410-173419 и ее начало перекрывается с нуклеотидными встройками, выявленными другими авторами (Gallardo C., Шевченко, Hyun-Joo Kim). Единичные замены, обнаруженные, нами локализуются в позициях 173285 и 173434. Это может свидетельствовать о том, что данный участок межгенной области наиболее подврежен мутагенезу и является хорошим кандидатом для определения родства между изолятами и изучения путей распространения вируса.
Рисунок 33 - Схема расположения нуклеотидных замен и вставок в последовательности межгенного участка I73R/I329L вируса АЧС.
Примечание: фиолетовыми стрелками показаны идентичные замены, обнаруженные другими авторами; красными стрелками отмечены обнаруженные нами вставки и единичные замены
Впервые в 2014 году зарубежные исследователи Nurmoja с соавт. провели анализ изолята «Estonia 2014», который был обнаружен на территории Эсто-
нии. Представленный изолят являлся единственным и уникальным, поскольку у него отсутствовали 14560 п.о. на 5'-конце генома. Мы провели исследование изолятов АЧС методом ПЦР на наличие такой же делеции у отечественных изолятов. Анализ 51-го изолята не выявил делеционных вариантов в данном регионе. Следует отметить, что на сегодняшний день подобные де-леционные события у изолятов и штаммов вируса АЧС также не были обна-руженыи другими исследователями. Возможно, что делеция в геноме изолята «Estonia 2014» свидетельствует о ее случайном характере, и она не закрепилась впоследствии в вирусной популяции.
Для обнаружения генетических мутаций в области MGF110 нами было проведено секвенирования других отчественных изолятов на выбранные нами гены 4L и 5L. Выбор данных генов был связан с тем, что в работах зарубежных авторов представлены данные об утрате гена 4L у двух изолятов «Estonia 2014» и OURT88/3.
Результаты секвенирования участка генома MGF110 вируса АЧС выявили наличие множественных единичных замен в гене 4L у одиннадцати изолятов, циркулировавших на территории РФ с 2008 по 2017 гг. (Рисунок 34). При сравнении полученных последовательностей одиннадцати изолятов с рефе-ренс-штаммом «Georgia 2007/1» нами были обнаружены множественные единичные замены в MGF 110. Обнаруженные нами замены являются на сегодняшний день уникальными, так как ген 4L не подвергался изучению.
Рисунок 34 - Схема расположения единичных мутаций в гене 4L мультиген-ного семейства 110 ДНК вируса АЧС.
Примечание: черным цветом выделены идентичные множественные замены, а красным две замены обнаруженные у двух изолятов
Из рисунка 34 видно, что все одиннадцать отечественных изолятов обладающие генетическими изменениями были обнаружены в гене 4Ь в позициях с 9068 по 9936. Полученные нами данные говорят о том, что участок с 9068 по 9280 семейства МОБ 110 наиболее подвержен мутагенезу. Возможно, остальные гены этого семейства также могут содержать большое количество различных мутаций и для обнаружения этих изменений необходимо проведение секвенирование всех генов, входящих в состав данного мультигенного семейства. В дальнейшем полученные данные о вариабельности семейства МОБ 110 может позволить проводить дифференциацию изолятов вируса АЧС.
Таким образом, результаты нашей работы показывают, что большинство исследованных отечественных изолятов вируса АЧС не обладают ярко выраженной генетической изменчивостью. Тем не менее, полученные данные о молекулярно-генетических изменениях в трех маркерных генах можно использовать для картирования и кластерного анализа изолятов вируса АЧС, что в дальнейшем даст возможность оценить географическую локализацию и временное происхождение новых вариантов вируса АЧС. Однако, на наш взгляд, биологическая значимость мутаций во многом остается неизвестной, ввиду отсутствия информации.
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ 5.1 Итоги исследований
1. Проведен сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей пяти маркерных участков генома у отечественных изолятов вируса АЧС, циркулировавших на территории РФ с 2008 по 2019 гг.
2. Генетических изменений в генах ЕР402Я и мультигенном семействе MGF505 не обнаружено.
3. Показано, что 12 отечественных изолятов вируса АЧС содержат единичную замену в гене B602L. Филогенетический анализ на основании генетической изменчивости маркера B602L позволил провести предварительное разделение изолятов на две группы внутри одного генотипа.
4. Анализ нуклеотидных последовательностей гена 4L фрагмента MGF110 показал наличие множественных замен у всех проанализированных 11 отечественных изолятов вируса АЧС.
5. При анализе межгенного участка I73R/I329L у двух изолятов обнаружена уникальная вставка из десятинуклеотидного тандемного повтора, а у шести отечественных изолятов выявлено множество единичных замен.
6. Проведение географического картирования по генетическим изменениям на основе межгенного участка I73R/I329L позволило сгруппировать изоляты вируса АЧС, выделенных на территории Российской Федерации, в два кластера, что позволяет отслеживать динамику распространения изолятов на территории РФ.
5.2 Практические предложения
1. В международную базу данных «ОепВапк» выложены фрагменты нуклеотидных последовательностией межгенной области I73R/I329L полевых изолятов вируса АЧС под номерами: «МТ901177» и «МТ901178».
2. Полученные нуклеотидные последовательности маркерных генов B602L, I73R/I329L, MGF110 можно использовать для дифференциации современных отечественных, европейских и азиатских изолятов и штаммов вируса АЧС.
3. Полученные данные по маркерным генам B602L, I73R/I329L, MGF110 позволяют провести хронологическое отслеживание изолятов с мутациями вируса АЧС, циркулирующих на территории Российской Федерации.
5.3 Перспективы дальнейшей разработки
Для дальнейшего изучения данной темы целесообразно продолжить исследование B602L, MGF110, межгенного участка I73R/I329L и других генов вируса АЧС с последующим проведением полногеномного секвенирования современных отечественных изолятов вируса АЧС выделенных на территории Российской Федерации, что позволит полнее изучить изменения генома вируса АЧС, происходящие в ходе его естественной эволюции.
6. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
АЧС - африканская чума свиней ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота Ед - единиц
ЕР - эндоплазматический ретикулум
«К-» - отрицательный контроль
ЛПХ - личное подсобное хозяйство
МЭБ - Международное эпизоотическое бюро
мА - миллиампер
мМ - миллимоль
мин - минут
мкл - микролитр
мл - миллилитр
нм - нанометр
об/мин - оборотов в минуту
ОРС - открытая рамка считывания
п.н. - пар нуклеотидов
пкМ - пикомоль
ПК - положительный контроль
ПЦР - полимеразная цепная реакц
РФ - Российская Федерация
сек - секунда
т.п.н. - тысяч пар нуклеотидов
ФГБНУ ФИЦВиМ - Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии»
dNTP - дезоксинуклеотидтрифосфаты MGF - мультигенное семейство
Nm - нанометр
OIE - Всемирная организация по охране здоровья животных RVR- правая вариабельная область
Трис - трис(гидроксиметил)аминометан (tris(hydroxymethyl)aminomethane)
LVR - левая вариабельная область
CVR - центральная вариабельная область
7. СПИСОК ЛИТЕРТАУРЫ
1. Анализ генетических маркеров изменчивости изолятов вируса африканская чума свиней, выделенных на территории Российской Федерации / А. К. Сибгатуллова, М. В. Нефедьева, Д. А. Кудряшов [и др.] // Ветеринария. - 2020. - № 2. - С. 14-19.
2. Африканская чума свиней в Российской Федерации (2007-2012 гг.): эпидемиологический обзор и последствия для стран Европы. Документ ФАО № 178/ А. Гогин, А. Середа, С. Хоменко [и др.]// Рим, 2014. -87 с.
3. Варенцова, А.А. Анализ структуры генов изолятов вируса африканской чумы свиней, выделенных на территории Российской Федерации: дис. ...канд. биол. наук: 03.02.02: утв. 9.12.2014/ Варенцова Алиса Алексеевна. - Владимир, 2014. - 140 с.
4. Вирус африканской чумы свиней: использование генетических маркеров при анализе путей его распространении/ А. Мазлум, А.С. Игол-кин, Н.Н. Власова [и др.]// Ветеринария сегодня. - 2019. - №3. - С. 3-14.
5. Газаев, И.Х. Совершенствование методов индикации генома вируса африканской чумы свиней в объектах ветеринарного надзора: дис. ... канд. биол. наук: 03.02.02 / Газаев Исмаил Хизирович. - Покров, 2011. -130 с.
6. Гулёнкин, В.М. Оценка экономического ущерба от африканской чумы свиней / В.М. Гулёнкин, Н.С. Бардина, А.А. Шевцов // Ветеринария. - 2011. - №10. - С. 10-12.
7. Дикий европейский кабан. Ветеринарная биология и эпизоотология/ Б.В. Боев, В.В. Макаров, О.И. Сухарев [и др.]// Ветеринария. -2010. -№7. - С.28-31.
8. Елсукова, А.А. Генотипирование изолятов вируса африканской чумы свиней: дис....канд. биол.наук: 03.02.02 / Елсукова Александра Андреевна. - Покров, 2010. - 138 с.
9. Изотова, О.Г. Африканская чума свиней как угроза отечествен-
ному свиноводству/ О.Г. Изотова, М.М. Горячева// Современные проблемы инновационного развития науки. Сборник статей Международной научно-практической конференции. - Уфа: ОМЕГА-САЙНС, 2017. - С. 274-276.
10. Изучение антигенности, иммуногенности и протективности ДНК-конструкций, содержащих фрагменты генов CP204L, E183L и ЕР402Я вируса африканской чумы свиней/ А.Р. Иматдинов, О.А. Дубровская, Д.Ю. Морозова [и др.] //Сельскохозяйственная биология. - 2018. - Т. 53, № 4. - С. 860-867.
11. Каторкин, С.А. Получение стабильной клеточной линии, экс-прессирующей рекомбинантный белок I329L вируса АЧС - антагонист ТЬЯ-3.: дис....канд. биол. наук: 03.01.06/ Каторкин Сергей Александрович. - Щелково, 2018. - 126 с.
12. Колбасов, Д.В. Итоги разработки живых вакцин против африканской чумы свиней/ Д.В. Колбасов, В.М. Балышев, А.Д. Середа/Ветеринария. - 2014. - № 8. - С. 3-8.
13. Макаров, В.В. Африканская чума свиней: эпизоотический полиморфизм и контроль. Часть 3. Экономика и экстраполяция на РФ / В.В. Макаров, В.А. Грубый // Ветеринария сегодня. - 2013. - №4. - С. 8-11.
14. Максимович, В.В. Дифференциальная диагностика африканской чумы свиней/ В.В. Максимович, С.В. Семенов// Ученые записки учреждения образования «Витебская ордена «Знак почета» государственная академия ветеринарной медицины». - 2016. - Т. 52, № 1. - С. 60-67.
15. Метод рестрикционного анализа геномов млекопитающих т silico / М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, В.А. Чернухин, Д.А. Гончар [и др.] // Вестник биотехнологии и физико-химимческой биологии им. Ю.А. Овчинникова. - 2006. - Т.2, № 3. - С.29-38.
16. Олигонуклеотидные праймеры и флюоресцентный зонд с внутренним гасителем, комплементарные участку гена Р30 (CP204L) вируса африканской чумы свиней, для использования в полимеразной цепной ре-
акции в режиме реального времени/ Д.А. Кудряшов, Г.С. Бурмакина, И.А. Титов [и др.]// МПК7 СВД 1/68. ГНУ ВНИИВВ и М (РФ). № 2606253. Заявл.15.02.2016. Опубл. 10.01.2017. Бюл. № 1.
17. Орлянкин, Б.Г. Африканская чума свиней / Б.Г. Орлянкин // Ветеринария Кубани. - 2008 - №1.
18. Патент №2577997 Штамм "Калуга-2014" вируса африканской чумы свиней для мониторинговых исследований изучения патогенеза болезни: заявл. 25.12.2014; опубл. 10.02. 2016/ В.М. Балышев. - Бюл. №8. -8с.
19. Прогноз до 2025 г. по распространению африканской чумы свиней в России/ А.К. Караулов, А.А. Шевцов, О.Н. Петрова [и др.]// Ветеринария и кормление. - 2018. - № 3. - С. 12-14.
20. Роль антропогенного фактора в распространении африканской чумы свиней на территории Российской Федерации/ Д.Л. Поклонский, К.А. Шербашов, Г.Г. Еремин [и др.] // Ветеринария Кубани. - 2019. - №2. - С.15-17.
21. Селянинов, Ю.О. Физическое картирование генома вируса африканской чумы свиней/ Ю.О. Селянинов, Е.К. Сенечкина // Доклады РАСХН. - 1995. - № 2. - С. 37 - 39.
22. Селянинов, Ю.О. Вирус африканской чумы свиней: физическое картирование генома штаммов / Ю.О. Селянинов В.М. Балышев, С.Ж. Цыбанов // Вестник российской сельскохозяйственной науки - 2000. - № 5. - С. 75-76.
23. Середа, А.Д. Белки вируса африканской чумы свиней / А.Д. Середа, Д.В. Колбасов // Научный журнал КубГАУ. - 2012. - Т. 3, № 77. - С. 534-550.
24. Степанов, Д.В. Эпизоотология африканской чумы свиней в России/ Д.В. Степанов, М.М. Горячева// Наука: прошлое, настоящее, будущее. - 2017. - С. 55-60.
25. Состояние и тенденции развития производства свинины в Рос-
сийской Федерации/ А.В. Трифанов, В.В. Калюга, В.И. Базыкин// Технологии и технические средства механизированного производства продукции растениеводства и животноводства. - 2016. - № 90. - С. 5-13.
26. Филогенетический анализ полевых изолятов вируса африканской чумы свиней/ И.М. Калабеков, А.А. Елсукова, А.Г. Шендрик [и др.] // Ветеринария. - 2010 - №5. - С. 31-33.
27. Чернов, А.Н. Практические аспекты профилактики африканской чумы свиней в России/ А.Н. Чернов, О.Ю. Черных, К.Н. Груздев// Ветеринарный врач. - 2017. - № 2. - С. 19 -25.
28. Шевченко, И.В. Молекулярно-биологические свойства изолятов вируса африканской чумы свиней, выделенных на территории Российской Федерации в 2013-2014 гг.: дис. ...канд. биол. наук: 03.01.06: утв. 9.03.2016/ Шевченко Иван Вячеславович - Владимир, 2016. - 148 с.
29. A cartographic tool for managing african swine fever in Eurasia: mapping wild boar distribution based on the quality of available habitats / J. Bosch, I. Iglesias, M. J. Munoz [et al]. // Transbound. Emerg. Dis.- 2016. - Vol. 64, N 6. - P.1-14.
30. A greedy algorithm for aligning DNA sequences/ Z. Zhang, S. Schwartz, L. Wagner [et al.]// Journal of Computational Biology. - 2000. -Vol. 7, P. 203-214.
31. An African swine fever virus ERV1-ALR homologue, 9GL, affects virion maturation and viral growth in macrophages and viral virulence in swine/ T. Lewis, L. Zsak, T.G. Burrage [et al.]// J Virol. - 2000. - Vol. 74. -P.1275-1285.
32. A new recombinant live attenuated African swine fever virus with cross-protective capabilities / P.L. Monteagudo, A. Lacasta, E. Lopez [et al.] // J. Virol. - 2017. - Vol. 91, N 21. - e01058-17.
33. A set of African swine fever virus tandem repeats shares similarities with SAR-like sequences/ F. Almazan, J.R. Murguia, J.M. Rodriguez [et al.]// J GenVirol. - 1995. - Vol 76, N 4 - P. 729-740.
34. An update on the epidemiology and pathology of African swine fever/ J.M Sanchez-Vizcaino, L. Mur, J.C. Gomez-Villamandos [et al.]// Comp. Pathol. - 2015. - Vol. 152. - P. 9-21.
35. African swine fever virus / E.R. Tulman, G.A. Delhon, B.K. Ku [et al.] // Current Topics in Microbiology and Immunology (eds Van Etten J.L.). Lesser Known Large dsDNA Viruses. - 2009. - Vol. 328. - P. 43-87.
36. African Swine Fever Virus Isolate, Georgia, 2007/ R. J. Rowlands, V. Michaud, L. Heath [et al.] //Emerg. Infect. Dis. - 2008. - Vol. 14, N 12 - P. 1870-1874.
37. African swine fever: how can global spread be prevented? /S. Costard, B. Wieland, W. de Glanville [et al.]// Philos Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci.
- 2009. - Vol. 364. - P. 2683-2696.
38. African swine fever virus eradication in Africa/ M. L. Penrith, W. Vosloo, F. Jori [et al.] // Virus Res. - 2013. - Vol. 173. - P. 228-246.
39. African swine fever: A re-emerging viral disease threatening the global pig industry / P.J. Sánchez-Cordón, M. Montoya, A.L. Reis [et al.] // Vet. J.
- 2018. - Vol. 233. - P. 41-48.
40. African swine fever virus CD2v and C- type lectin gene loci mediate serological specificity/ A. Malogolovkin, G. Burmakina, E.R. Tulman [et al.]// The J GenVirol. - 2015. - Vol. 96, N 4, P. 866-873.
41. African swine fever in the North Caucasus region and the Russian Federation in years 2007-2012/ A. Gogin, V. Gerasimov, A. Malogolovkin [et al.] // Virus Res. - 2013. - Vol. 173. - P. 198-203.
42. African swine fever: An epidemiological update / J.M. Sanchez-Vizcaino, L. Mur, B. Martinez-Lopez [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. -2012. - Vol. 59. - P. 27-35.
43. African swine fever virus Georgia isolate harboring deletions of 9GL and MGF360/505 genes is highly attenuated in swine but does not confer protection against parental virus challenge / V. O'Donnell, L.G. Holinka, B. San-ford [et al.] // Virus Res. - 2016. - Vol. 221. - P.8-14.
44. African swine fever virus Georgia isolate harboring deletions of MGF360 and MGF505 genes is attenuated in swine and confers protection against challenge with virulent parental virus / V. O'Donnell, L.G. Holinka, D.P. Gladue [et al.] // J. Virol. - 2015. - Vol. 89, N 11. - P.6048-6056.
45. African swine fever virus in pork Brought into South Korea by Travelers from China, August 2018/ H.J. Kim, M.J. Lee, S.K. Lee [et al.]//. Emerg. Infect. Diseas. - 2019. - Vol. 25, N 6. - P. 1231 - 1233.
46. African swine fever virus protein p17 is essential for the progression of viral membrane precursors toward icosahedral intermediates/ C. Suárez, J. Gutiérrez-Berzal, G. Andrés [et al.] // J. Virol. - 2010. - Vol. 84, N 15. - P. 7484-7499.
47. African swine fever viruses with two different genotypes, both of which occur in domestic pigs, are associated with ticks and adult warthogs, respectively, at a single geographical site / C. Gallardo, E. Okoth, V. Pelayo [et al.] // J. Gen. Virol. - 2011. - Vol. 92, N 2. - P. 432-444.
48. African swine fever in the Russian Federation: risk factors for Europe and beyond/ S. Khomenko, I. Titov, S. Tsybanov [et al.]// EMPRES Watch. -2013. - Vol. 28. - P. 1-14.
49. African swine fever epidemic, Poland, 2014-2015/ K. Smietanka, G. Wozniakowski, E. Kozak [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 2016. - Vol. 22, -P.1201-1207.
50. African swine fever virus: a new old enemy of Europe/ A.A. Cisek, I. Dabrowska, K.P. Gregorczyk [et al.]// Ann. Parasitol. - 2016. - Vol. 62, - P. 161-167.
51. African swine fever virus p72 genotype IX in domestic pigs, Congo, 2009 / C. Gallardo, R. Anchuelo, V. Pelayo [et al.] // Emerg. Infect. Dis. -2011. - Vol. 17, N 8. - P. 1556-1558.
52. African swine fever virus (ASFV) protection mediated by NH/P68 and NH/P68 recombinant live-attenuated viruses / C. Gallardo, E.G. Sanchez, D. Perez-Nunez [et al.] // Vaccine. - 2018. - Vol. 36, N 19. - P. 2694-2704.
53. African swine fever virus, Siberia, Russia, 2017/ D. Kolbasov, I. Ti-tov, S. Tsybanov [et al.] // Emerg Infect Dis. - 2018 - Vol. 24. - P. 796-798.
54. ICTV Virus Taxonomy Profile: Asfarviridae / C. Alonso, M. Borca, L. Dixon [et al.] // J. Gen. Virol. - 2018. - Vol. 99, N 5. - P. 613-614.
55. Approaches and perspectives for development of african swine fever virus vaccines/ M. Arias, de la Torre, A. Dixon [et al.] // Vaccines. - 2017 -Vol. 5, N 4. - P.1-20.
56. African swine fever virus structural protein p72 contains a conformational neutralizing epitope / M.V. Borca, P. Irusta, C. Carrillo [et al.] // Virology. - 1994. - Vol. 201, N 2. - P. 413-418.
57. African swine fever virus multigene family 360 genes affect virus replication and generalization of infection in Ornithodoros porcinus ticks / T.G. Burrage, Z. Lu, J.G. Neilan [et al.] // J. Virol. - 2004. - Vol. 78, N 5. - P. 2445-2453.
58. African swine fever: detection and diagnosis - a manual for veterinarians / D. Beltran-Alcrudo, M. Arias, C. Gallardo [et al.] - Rome: Food and Agriculture Organization of the United Nations, 2017. - P. 80.
59. African swine fever virus proteins involved in evading host defence systems / L. K. Dixon, C. C. Abrams, G. Bowick [et al.] // Vet. Immunol. Im-munopathol. - 2004. - Vol. 100. - P. 117-134.
60. African swine fever virus multigene family 360 and 530 genes are novel macrophage host range determinants / L. Zsak, Z. Lu, T. G. Burrage [et al.] // Virology. - 1992. - Vol. 75, N 7. - P. 3066-3076.
61. African swine fever virus multigene family 360 and 530 genes affect host interferon response. / C. Afonso, M. E. Piccone, K. M. Zaffuto [et al.] // J. Virol. - 2004. - Vol. 78. - P. 1858-1864.
62. African swine fever virus replication and genomics / L. K. Dixon, D. A. Chapman, C. L. Nethertona [et al.] // Virus Res. - 2013. - Vol. 173, N1. -P. 3-14.
63. Amino acid tandem repeats within a late viral gene define the central
variable region of African swine fever virus/ P.M Irusta, M.V. Borca, G.F. Kutish [et al.]// Virology. - 1996. - Vol. 220. - P. 20-27.
64. Bellini, S. Preventive measures aimed at minimizing the risk of African swine fever virus spread in pig farming systems/ S. Bellini, D. Rutili, V. Guberti // Acta Vet Scand. - 2016. - Vol. 58, N 1. - P. 82.
65. Biological characterization of African swine fever virus genotype II strains from north-eastern Estonia in European wild boar / I. Nurmoja, A. Pe-trov, C. Breidenstein. [et al.]// Transbound. Emerg. Dis. - 2017. - Vol. 64, N. 6. - P. 2034-2041.
66. Biological properties of African swine fever virus Odintsovo 02/14 isolate and its genome analysis/ A.A. Elsukova, I.V. Shevchenko, A.A. Var-entsova [et al.] // Int. J. Environ. Agric. Res. IJOEAR. - 2017. - Vol. 3. - P. 26-37.
67. Biological characterization of African swine fever (ASF) moderate virulent isolates associated to wild boar cases occurred in Southern Estonia in 2015 / C.Gallardo [et al.] // Workshop on Laboratory Diagnosis and Control of CSF and ASF". - Madrid, Spain, 2017. - 19h June.
68. Blome, S. Pathogenesis of African swine fever in domestic pigs and European wild boar/ S. Blome, C. Gabriel, M. Beer // Virus Res. - 2013. - Vol. 173. - P. 122-130.
69. Brown, V. R. A Review of African swine fever and the Potential for Introduction into the United States and the Possibility of Subsequent Establishment in Feral Swine and Native Ticks / V. R. Brown, S. N. Bevins // Front. Vet. Sci. - 2018 - Vol. 6. - P. 5 - 11.
70. Burmakina G. Real-time analysis of the cytopathic effect of African swine fever virus/ G. Burmakina, K. Bliznetsov, A. Malogolovkin //J Virol Methods. - 2018. - Vol. 257. - P. 58-61.
71. Characteristics of African swine fever virus isolated from domestic pigs and wild boars in the Russian federation and south Ossetia/ M. Vlasov, A. Imatdinov, I. Titov [et al.]// Acta Veterinaria-Beograd. - 2020. - Vol. 70, N 1.
- P. 58 -70.
72. Comparison of the genome sequences of non-pathogenic and pathogenic African swine fever virus isolates / D.A.G. Chapman, V. Tcherepanov, C. Upton [et al.] // J. Gen. Virol. - 2008. - Vol. 89, N 2. - P. 397-408.
73. Comparative analysis of African swine fever virus genotypes and serogroups / A. Malogolovkin, G. Burmakina, I. Titov [et al.] // Emerg Infect Dis. - 2015. - Vol. 21, N 2. - P.312-315.
74. Comparative analysis of whole-genome sequence of African swine fever virus Belgium 2018/1 / J.H. Forth, M. Tignon, A.B. Cay [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 2019. - Vol. 25, N 6. - P. 1249-1252.
75. Co-circulation of multiple genotypes of African swine fever viruses among domestic pigs in Zambia (2013-2015) / E. Simulundu, H.M. Chambaro, Y. Sinkala [et al.] Transbound. Emerg. Dis. - 2017. - Vol. 65, N1. - P.114-122.
76. Comparative evaluation of novel African swine fever virus (ASF) antibody detection techniques derived from specific ASF viral genotypes with the OIE internationally prescribed serological tests/ C. Gallardo, A. Soler, R. Nieto [et al.]// Vet Microbiol. - 2013. - Vol. 162, N 1. - P. 32-43.
77. Correia, S. Identification and utility of innate immune system evasion mechanisms of ASFV/ S. Correia, S. Ventura, R. M. Parkhouse // Virus Res. -2013. - Vol. 173, N 1. - P.87-100.
78. Deletion at the 5'end of Estonian ASFV strains associated with an attenuated phenotype/ L. Zani, J.H. Forth, L. Fort [et al]. // Sci. Rep. - 2018. -Vol. 8. - P. 6510.
79. Deletion of African swine fever virus interferon inhibitors from the genome of a virulent isolate reduces virulence in domestic pigs and induces a protective response/ A.L. Reis, C.C. Abrams, L.C. Goatley [et al.]// Vaccine. -2016. - Vol. 34, N 39. - P. 4698-4705.
80. Diagnosis and genotyping of African swine fever viruses from 2015 outbreaks in Zambia / A. Takada, G. Misinzo, A.S. Mweene [et al.] // Vet. Res.
- 2016. - Vol. 83: a1095.
81. Ekue, N.F. Comparison of genomes of African swine fever virus isolates from Cameroon, other African countries and Europe/ N.F. Ekue, P.J. Wilkinson// Revue Elev. Med. Vet. Pays Trop. - 2000. - Vol. 53, N 3. - P. 229236.
82. Emergence of African swine fever in China, 2018/ X. Zhou, N. Li, Y. Lu [et al.] // Transbound Emerg Dis. - 2018. - Vol. 65, N 6. - P. 1482-1484.
83. Emergence of African swine fever virus, northwestern Iran / P. Rahi-mi, A. Sohrabi, J. Ashrafihelan [et al.] // Emerg Infect Dis. - 2010. - Vol. 16, N12. - P.1946-1948.
84. Enhanced discrimination of African swine fever virus isolates through nucleotide sequencing of the p54, p72 and pB602L (CVR) genes/ C. Gallardo, D.M. Mwaengo, J.M. Macharia [et al.] // Virus Genes. - 2009. - Vol. 38, N 1.
- P. 85-95.
85. Epidemiology of African swine fever in Poland since the detection of the first case/ Z. Pejsak, M. Truszczynski, K. Niemczuk [et al.]// Pol. J. Vet. Sci. - 2014. - Vol. 17, N 4. - P. 665-672.
86. Evolution in Europe of African swine fever genotype II viruses from highly to moderately virulent/ C. Gallardo, I. Nurmoja, A. Soler [et al.] // Vet. Microbiol. - 2018. - Vol. 219. - P. 70-79.
87. Evolution of African swine fever virus genes related to evasion of host immune response / M. Fraczyk, G. Wozniakowski, A. Kowalczyk [et al.] // Vet. Microbiol. - 2016. - Vol. 193. - P. 133-144.
88. Evolutionary genomics of nucleo-cytoplasmic large DNA viruses/ L.M. Iyer, S Balaji, V. Eugene Koonin [et al.] // Virus Research. - 2006. -Vol.117, N 1. - P.156-184.
89. Experimental infection of domestic pigs with African swine fever virus Lithuania 2014 genotype II field isolate/ C. Gallardo, A. Soler, R. Nieto [et al.]// Transbound. Emerg. Dis. - 2017. - Vol. 64, N 1. - P. 300-304.
90. Galindo, I. African Swine Fever Virus: A Review/ I. Galindo, C.
Alonso// Viruses. - 2017. - Vol. 9, N 5. - P. 103.
91. Genetic characterization of African swine fever virus isolates from soft ticks at the wildlife/domestic interface in Mozambique and identification of a novel genotype/ C.J. Quembo, F. Jori, W. Vosloo [et al.] // Transbound. Emerg Dis. - 2018. - Vol. 65, N 2. - P. 420-431.
92. Genomic Analysis of Highly Virulent Georgia 2007/1 Isolate of African Swine Fever Virus / D.G. Chapman, A.C. Darby, M. Da Silva [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 2011. - Vol. 17, N 4. - P. 599-605.
93. Genotyping field strains of African swine fever virus by partial p72 gene characterisation / A.D.S. Bastos, M.L. Penrith, C. Cruciere [et al.] // ArchVirol. - 2003. - Vol. 148, N 4. - P. 693-706.
94. Genetic variation among African swine fever genotype II viruses, Eastern and Central Europe/ C. Gallardo, J. Fernandez-Pinero, V. Pelayo [et al.]// Emerg. Infect Dis. - 2014. - Vol. 20, N 9. - P. 1544-1547.
95. Genetic variation of African swine fever virus: variable regions near the ends of the viral DNA / R. Blasco [et al.] // Virology. - 1989. - Vol. 173, N 1. - P. 251-257.
96. Genome sequence of african swine fever virus BA71, the virulent parental strain of the nonpathogenic and tissue-culture adapted BA71V / J.M. Rodriguez, L.T. Moreno, A. Alejo [et al.] // PLoS One - 2015. - Vol. 10, N 11. -e0142889.
97. Genome comparison of African swine fever virus Chi-na/2018/AnhuiXCGQ strain and related European p72 Genotype II strains / J. Bao, Q. Wang, P. Lin [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2019. - Vol. 66, N 3.- P. 1167-1176.
98. Genetic characterization of African swine fever viruses from a 2008 outbreak in Tanzania / G. Misinzo, G. Magambo, J. Masambu [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2011. - Vol. 58, N 1. - P. 86-92.
99. Hall, T.A. BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT / T.A. Hall // Nucleic Acids
Symp. Ser. - 1999. - Vol. 41. - P. 95 - 98.
100. High probability areas for ASF infection in China along the Russian and Korean borders/ F.R. Joka, H. Van Gils, L. Huang [et al.]// Transbound Emerg Dis. - 2018. - Vol. 66, N 2. - P. 852-864.
101. Host cell targets for African swine fever virus. / R. Munoz-Moreno, I. Galindo, M. Angel Cuesta-Geijo [et al.] // Virus Res. - 2015. - Vol. 209. - P. 118-127.
102. Howard, W. E. Innate and environmental dispersal of individual verte brates / W. E. Howard // Amer Midland Nat. - 1960. - Vol. 63. - P. 152-161.
103. Identification of a new genotype of African swine fever virus in domestic pigs from Ethiopia / J.E. Achenbach, C. Gallardo, E. Nieto-Pelegrin [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2016. - Vol. 64, N 5. - P. 1393-1404.
104. Identification of a variable region of the African swine fever virus genome which has undergone separate DNA rearrangements leading to expansion of minisatellite like sequences / L.K. Dixon, C. Bristow, P.J. Wilkinson [et al.]// J Mol Biol. - 1990. - Vol. 216, N 3. - P. 677-688.
105. Identifiation of wild boar - habitat epidemiologic cycle in African swine fever epizootics/ E. Chenais, K. Stahl, V. Guberti [et al.] // Emerg Infect Dis. - 2018. - Vol. 24, N. 4. - P.810-812.
106. Improved strategy for molecular characterization of african swine fever viruses from Sardinia, based on analysis of p30, CD2V and I73R/I329L variable regions/ G. Sanna, S. Dei Giudici, D. Bacciu [et al.]// Transbound Emerg Dis. - 2016. - Vol. 4, N 6. - e01220-16.
107. Immunization of pigs by DNA prime and recombinant vaccinia virus boost to identify and rank african swine fever virus immunogenic and protective proteins. Proteins/ J. K. Jancovich, D. Chapman, D. T. Hansen [et al.]// Journal of Virology. - 2018. Vol. 92, N 8. - e02219-17.
108. Infection of pigs with African swine fever virus via ingestion of stable flies (Stomoxys calcitrans) / A. S. Olesen, L. Lohse, M. Frimodt [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2018. -Vol. 65, N 5. - P. 1-6.
109. Intra-genotypic resolution of African swine fever viruses from an East African domestic pig cycle: a combined p72-CVR approach /B. A. Lubisi, A.D.S. Bastos, R.M. Dwarka [et al] // Virus Genes. - 2007. - Vol. 35, N 3. -P.729-735.
110. Li, X. African swine fever in China/ X. Li, K. Tian// Vet Rec. -2018. -Vol. 183, N 9. - P. 300-301.
111. Malogolovkin, A. Genetic and antigenic diversity of african swine fever virus/ A. Malogolovkin, D. Kolbasov // Virus Res. - 2019. - Vol. 271. - P. 1-7.
112. Mellor, P.S. Mechanical transmission of capripox virus and African swine fever virus by Stomoxys calcitrans/ P.S. Mellor, R.P. Kitching, P.J. Wilkinson// Research in Veterinary Science. - 1987. - Vol. 43, N 1. - P. 109-112.
113. MEGA6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.0 / K. Tamura, G. Stecher, D. Peterson [et al.] // Mol. Biol. Evol. - 2013. - Vol. 30, № 12. - P. 2725 - 2729.
114. Molecular characterization of African swine fever virus (ASFV) isolates circulating in the Eastern European Union countries 2014-2016 / R. Nieto, A. Soler, I. Nurmoja [et al.]// Proc. 10th Annu Meet EPIZONE. - 2016. - Vol. 9, N 7. - P. 582.
115. Molecular characterization of African swine fever virus, China, 2018. / S. Ge, J. Li, X. Fan [et al.]// Emerg. Infect. Dis. - 2018. - Vol. 24, N 11. - P. 2131-2133.
116. Molecular epidemiology of African swine fever virus studied by analysis of four variable genome regions/ R.J. Nix, C. Gallardo, G. Hutchings [et al.] //Arch Virol. - 2006. - Vol.151, N 12. - P.2475 - 2494.
117. Molecular epidemiology of African swine fever in East Africa/ B.A. Lubisi, A.D.S. Bastos, R.M. Dwarka [et al.] // Arch. Virol. - 2005. - Vol. 150, N 12. - P. 2439-2452.
118. Molecular characterization of African swine fever virus isolates originating from outbreaks in the Russian Federation between 2007 and 2011 / A.
Malogolovkin, A. Yelsukova, C. Gallardo [et al.] // Veterinary Microbiology -2012. - Vol. 158. - P. 415-419.
119. Multi-locus sequence typing of African swine fever viruses from endemic regions of Kenya and Eastern Uganda (2011-2013) reveals rapid B602L central variable region evolution / C. K. Onzere, A. D. Bastos, E. A. Okoth [et al.] // Virus Genes. -2018. - Vol. 54, N 1. - P. 111-123.
120. Neutralizing antibodies to African swine fever virus proteins p30, p54, and p72 are not sufficient for antibody-mediated protection/ J.G. Neilan, L. Zsak, Z. Lu [et al.]// Virology. - 2004. - Vol. 319, N 2. - P. 337-342.
121. New insights into the role of ticks in African swine fever epidemiology/ Sanchez-Vizcaino J. M., Mur L., Bastos A. D. [et al.] // Rev. Sci. Tech. -2015. Vol. 34, P. 503-511.
122. Newly emerged African swine fever virus strain Belgium/Etalle/wb/ 2018: complete genomic sequence and comparative analysis with reference p72 genotype II strains / G. Gilliaux, M. Garigliany, A. Licoppe, [et al.]// Transbound Emerg Dis. - 2019. - Vol. 66, N 6. - P. 2566-2591.
123. No evidence of African swine fever virus replication in hard ticks/ H. C. De Carvalho Ferreira, S. T. Zuquete, M. Wijnveld [et al.]// Ticks Tick-borne Dis. - 2014. - Vol. 5, N 5. - P. 582-589.
124. Novel swine virulence determinant in the left variable region of the African swine fever virus genome / J. G. Neilan, L. Zsak, Z. Lu [et al.]// J. Virol. - 2002. - Vol .76, P. 3095-3104.
125. Outbreak of African Swine Fever, Vietnam, 2019/ V.P. Le, D.G. Jeong, S.W. Yoon [et al.] // Emerg Infect Dis. - 2019. - Vol. 2, N 7. - P. 14331435.
126. Oura, C.A. Virological diagnosis of African swine fever-comparative study of available tests / C.A. Oura, L. Edwards, C.A. Batten // Virus Research. - 2013. - Vol. 173, N 1. - P. 150-158.
127. Pathological and molecular diagnosis of the 2013 African swine fever outbreak in Lusaka, Zambia / J. Yabe, P. Hamambulu, E. Simulundu [et al.] // Trop. Anim. Health Prod. - 2015 - Vol. 47. - P. 459-463.
128. Penrith, M.L. Review of African swine fever: transmission, spread end control / M.L. Penrith, W. Vosloo // Afr. Vet. Assoc. - 2009. - Vol. 80, N 2. - P. 58 - 62.
129. Phologane, S.B. Intra- and Inter-Genotypic Size Variation in the Central Variable Region of the 9RL Open Reading Frame of Diverse African Swine Fever Viruses/ S.B. Phologane, A.D.S. Bastos, M.-L. Penrith //Virus Genes. - 2005. - Vol. 31. N 3, - P. 357 - 360.
130. Phylogenomic analysis of 11 complete African swine fever virus genome sequences/ E.P. de Villiers, C. Gallardo, M. Arias [et al.] // Virology. -2010. - Vol. 400, N 1. - P.128 -136.
131. Phylogeographic analysis of African swine fever virus, Western Europe, 2018 / M. Garigliany, D. Desmecht, M. Tignon [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 2019. - Vol. 25, N 1. - P. 184 -186.
132. Prevalence and research progress of African swine fever in Russia. Microbiology China/ S. Q. Ge, J. M. Li, W. J. Ren [et al.] // Microbiology China - 2017 - Vol. 44, N 12. - P. 3067-3076.
133. Protection of European domestic pigs from virulent African isolates of African swine fever virus by experimental immunization / K. King, D. Chapman, J.M. Argilaguet [et al.] // Vaccine. - 2011. - Vol. 29, N 28. - P. 4593 -4600.
134. Quantitative risk assessment for the introduction of African swine fever into the European Union by legal import of live pigs/ L. Mur, B. Martinez-Lopez, M. Martinez-Aviles [et al.]// Transbound. Emerg. Dis. - 2011. - Vol. 59, N 2. - P.134-144.
135. Revilla, Y. African Swine Fever Virus Biology and Vaccine Approaches / Revilla, Y.D. Perez-Nunez, J.A. Richt// Adv Virus Res - 2018. -Vol. 100. - P. 41-74.
136. Relevant measures to prevent the spread of african swine fever in the european union domestic pig sector/ C. Jurado, M. Martinez-Aviles, A. De La Torre [et al.]// Front. Vet. Sci. - 2018. - Vol. 5. - P.77.
137. Risk factors for farm -level African swine fever infection in major pig- producing areas in Nigeria, 1997-2011/ F.O. Fasina, M. Agbaje, F.L. Ajani, [et al.] // Preventive veterinary medicine. - 2012. -Vol.107, N 1-2. P.65-75.
138. Rock, D.L. Challenges for African swine fever vaccine development -"...perhaps the end of the beginning." / D.L. Rock // Vet. Microbiol. - 2017. -Vol. 206. - P. 52-58.
139. Spatio-temporal analysis of African swine fever in Sardinia (20122014): trends in domestic pigs and wild boar/ I. Iglesias, A. Rodriguez, F. Fe-liziani [et al.]// Transbound. Emerg. Dis. - 2017. - Vol. 64, N 2. - P. 656-662.
140. Suarez, C. African swine fever virus polyprotein p62 is essential for viral core development / C. Suarez, M. L. Salas, J.M. Rodriguez // J Virol. -2010. - Vol. 84, N 1. - P.176-187.
141. Tandem repeat insertion in African swine fever virus, Russia, 2012 / K.V. Goller, A.S. Malogolovkin, S. Katorkin [et al.] // Emerg. Infect. Dis. -2015. - Vol. 21, N 4. - P.731-732.
142. Tandem repeat sequence in the intergenic region MGF 505 9R/10R is a new marker of the genetic variability among ASF genotype II viruses / A. Elsukova, I. Shevchenko, A. Varentsova [et al.] // Proc. 10th Annual Meeting EPIZONE, 27-29 September 2016. - Madrid, 2016. - P. 78.
143. The CD2v protein enhances African swine fever virus replication in the tick vector, Ornithodoros erraticus/ R.G. Rowlands, M.M. Duarte, F. Boinas // Virology. - 2009. - Vol. 393, N 2. - P. 319-328.
144. The African Swine Fever Virus Nonstructural Protein pB602L Is Required for Formation of the Icosahedral Capsid of the Virus Particle/ C. Epi-fano, J. Krijnse-Locker, M. L. S. Salas [et al.] // J. Virol. - 2006. - Vol. 80, N 24. - P. 12260-12270.
145. The cryo-EM structure of African swine fever virus unravels a unique architecture comprising two icosahedral protein capsids and two lipoprotein membranes/ G. Andres, D. Charro, T. Matamoros [et al.]// J Biol Chem. -2020. -Vol. 295. - P.1-12.
146. The Epidemiology of african swine fever in "Nonendemic" regions of Zambia (1989-2015): Implications for Disease Prevention and Control/ E. Simulundu, H. Caesar, Lubaba, J. van Heerden [et al.]// Viruses - 2017. -Vol. 9, N 9. - P. 236.
147. The progressive adaptation of a Georgian isolate of african swine fever virus to Vero cells leads to a gradual attenuation of virulence in swine corresponding to major modification sof the viral genome / P.W. Krug, L.G. Holinka, V. O'Donnell [et al.]// J. Virol. - 2015. - Vol. 89, N. 4. - P. 23242332.
148. Transmission routes of African swine fever virus to domestic pigs: current knowledge and future research directions/ C. Guinat, A. Gogin, S. Blome [et al.] //Vet Rec. - 2016. - Vol. 178, N 11. - P. 262-267. - URL: http://www.fao.org/3/ i8805en / I8805EN. pdf.
149. Transmission of African swine fever virus from infected pigs by direct contact and aerosol routes / A.S. Olesen, L. Lohse, A. Boklund [et al.] // Vet. Microbiol. - 2017. - Vol. 211. - P.92-102.
150. Two novel multigene families, 530 and 300, in the terminal variable regions of African swine fever virus genome/ T. Yozawa, G.F. Kutish, C.L. Afonso [et al.] // Virology. - 1994. - Vol. 202, N 2. - P. 997-1002.
151. Variable and constant regions in African swine fever virus DNA // R. Blasco [et al.] // Virology. - 1989b. - Vol. 168, N 2. - P. 330-338.
152. Vergne, T. Statistical exploration of local transmission routes for african swine fever in pigs in the Russian Federation, 2007-2014/ T. Vergne, A. Gogin, D.U. Pfeiffer// Transbound. Emerg. Dis. - 2015. - Vol. 64, N 2. - P. 504-512.
153. Virulent strain of African swine fever virus eclipses its attenuated derivative after challenge Archives of virology/ I. Titov, G. Burmakina, Y. Morgunov, S. Morgunov [et al.] // Arch. Virol - 2017. - Vol.162, N 10. - P. 3081-3088.
154. Wambura, P.N. Molecular diagnosis and epidemiology of African swine fever outbreaks in Tanzania/ P.N. Wambura, J. Masambu, H. Msami// Veterinary Research communications. - 2006. - N 30. - P.667 - 672.
155. Wesley, R.D. Genome relatedness among african swine fever virus field isolates by restriction endonuclease analysis / R.D. Wesley, A.E. Tuthil // Prevent. Vet. Med. - 1984. - Vol. 2, N 1-4. - P. 53-62.
156. WAHID.Disease information.WAHID database[cited 2018 Nov]. Available
from:https://www.oie.int/wahis_2/public/wahid.php/Diseaseinformation/Imms um mary (дата обращения 03.12.2019).
157. ViralZone [Электронный ресурс]. - Режим доступа: URL: https://viralzone.expasy.org/ 12?outline=all_by_species (дата обращения 17.05.2019).
158. OIE [Электронный ресурс]. - Режим доступа: URL: https: //www. oie. int/wahis_2/public/wahid.php/Reviewreport/Review?page_ref er=MapFullEventReport&reportid=31884 (дата обращения 23.09.2019).
159. Россельхознадзор [Электронный ресурс]. - Режим доступа: URL:https://www.fsvps.ru/fsvps/asf/news/31570.html (дата обращения 10.11.2019).
160. Управление федеральной службы по ветеринарному и фитосани-тарному надзору по Воронежской и Липецкой областям [Электронный ресурс]. - Режим доступа: URL: http://rsnvrn.ucoz.ru/news/17_11_2017_rosselkhoznadzor_obespokoen_masso vym_rasprostraneniem_achs_v_stranakh_vostochnoj_evropy/2017-11-17-5194 (дата обращения 19.06.2019).
8. ПРИЛОЖЕНИЯ
Таблица 8 - Изоляты вируса АЧС использованные для постановки ПЦР по
Mut и Wt праймерам
№ п/п Номер образца Дата Изолят Место Источник
1. 304 18.01.2012 Тверская область лесной массив близ д. Лесная Осташковского с/п Торжокского р-на. дикий кабан
2. 307 01.02.2012 Краснодарский край Окрестности ст. Копанская Ейского р-на, (Копанские плавни между Гусинским и Круглым Лиманами) дикий кабан
3. 308 03.02.2012 Волгоградская область территория госзаказника «Лещев-ский» Среднеахту-бинского р-на. дикий кабан
4. 317 29.03.2012 Тверская область охотугодья, принадлежащие ООО «Залесье» Торжокского р-на. дикий кабан
5. 319 18.02.2012 Волгоградская область охот. хозяйство «замуровское» Ленинского р-на дикий кабан
6. 322 02.05.2012 Тульская область Рудневское о/х ООО «Цефей» Ленинского р-на дикий кабан
7. 404 26.01.2013 Ярославская область охот. хозяйство «Прилуцкое» в районе д. Шишки-но Угличского р-на дикий кабан
8. 405 07.03.2013 Тверская область Кашинский р-н, д. Починки, Шепе-левского с/п дикий кабан
9. 406 07.03.2013 Тверская область Старицкий р-н, территория ООО «Хубертус» дикий кабан
10. 407 08.03.2013 Тульская область Веневский р-н, д. Потетенко дикий кабан
11. 413 29.03.2013 Краснодарский край Государственный природный заповедник «Утриш» в р-не Сухого лимана муниципального образования город- курорт Анапа. дикий кабан
12. 429 11.06.2013 Смоленская область Охотхозяйства РООиР «Тайга» в 5 км от д. Ракитня Сычевского р-на. дикий кабан
13. 598 20.01.2014 Московская область Истринский р-н, Онуфриевское с/п, ЛПХ «Карасино 2» дикий кабан
14. 602 10.02.2014 Тульская область Ясногорский р-н, ОАО «Тульский патронный завод» д. Аргуново, о/х «Жерновское» дикий кабан
15. 603 14.02.2014 Тульская область Заокский р-н, 9 км северо-восточнее п. Миротинский дикий кабан
16. 604 18.02.2014 Брянская область Мглинский р-н, ГЗ «Клетнянский», ур. Луговка дикий кабан
17. 605 18.02.2014 Тульская область Ясногорский р-н, ООО «Диана» дикий кабан
18. 606 21.02.2014 Тульская область Заокский р-н, о/х «Дмитровское» дикий кабан
19. 607 21.02.2014 Тульская область Ясногорский р-н, ООО «Диана», о/х «Миланское» дикий кабан
20. 608 24.02.2014 Волгоградская об- Даниловский р-н, дикий кабан
ласть ТОП «Островское»
21 609 26.02.2014 Тульская область Заокский р-н, о/х «Дмитровское», «Тул ГУ» дикий кабан
22. 610 01.03.2014 Волгоградская область Иловлинский р-н, о/х «Иловлинское» дикий кабан
23 665 07.01.2015 Орловская область Мценский р-н, ур. Роща дикий кабан
24 670. 23.01.2015 Орловская область Мценский р-н, ОХ ООООиРОСО «Орловчанка», ур. Овечье дикий кабан
25 676. 11.02.2015 Калужская область Медынский р-н, ОХ «Медынский парк» дикий кабан
26 678 04.03.2015 Волгоградская область Даниловский р-н, ГЗ «Раздорский» дикий кабан
27 680 14.03.2015 Калужская область Ульяновский р-н, ГЗ «Калужские засеки», 200 м южнее д. Новая деревня дикий кабан
28 682 24.03.2015 Калужская область Ферзиковский район, ООО «Охотхозяйство Петровское» дикий кабан
29 683 27.06.2015 Курская область Рыльский р-н, ООО «ПКП «Антонина» дикий кабан
30 684 01.07.2015 Саратовская область Лысогорский р-н, с. Атаевка дикий кабан
31 700 02.08.2015 Рязанская область Клепиковский р-н, территория Клепи-ковский общедоступных угодий, близ д. Озерки дикий кабан
32 703 08.08.2015 Кабардино-Балкарская рес- Черкесский р-н, Вольно-Аульское дикий кабан
публика охотничье хозяйство
33 704. 08.08.2015 Псковская область Красногородский р-н, охотничьи угодья ПООООиР «Красногородский филиал» дикий кабан
34 705 08.08.2015 Орловская область Дмитровский р-н, ур. Осмоньская Дача дикий кабан
35 709 21.08.2015 Рязанская область Пронский р-н, с. Гремяки, свалка дикий кабан
36 715. 22.09.2015 Рязанская область Спасский р-н, с. Веретье. дикий кабан
37 733. 11.02.2016 Новгородская область Холмский р-н, ур. Радилово. дикий кабан
38 737 02.03.2016 Орловская область Кромский р-н, ул. Красный Клин, ООО ООиР дикий кабан
39 738. 15.03.2016 Кабардино-Балкарская республика охотучасток Бак-санский дикий кабан
40 742. 06.06.2016 Воронежская область ФГБУ» Воронежский государственный природный биосферный дикий кабан
41 744 07.06.2016 Липецкая область Усманский р-н, ФГБУ «Воронежский государственный природный биосферный заповедник им. В.М. Пескова», кв. № 109 дикий кабан
42 746 07.06.2016 Рязанская область Сапожковский р-н, в 3-х км от юго-запада от с. Ястребки, Лукомос-ское о/х дикий кабан
43 755. 15.06.2016 Рязанская область Территория общедоступных охоту-годий Кадомского р-на, в 4,5 км от д. Ивановка на юг, вблизи нежилой д. Давыдовка Коте-линского с/п Ка-домского муниципального р-на. дикий кабан
44 764. 20.06.2016 Рязанская область Сасовский р-н, Са-совского РОООиР, Кустаревского охотхозяйства. дикий кабан
45 767 24.06.2016 Новгородская область Вблизи д. Полянки Тогодского с/п Холмского р-на дикий кабан
46 768. 24.06.2016 Липецкая область Грязинский р-н, 138 кв. Фащевско-го лесничества дикий кабан
47 769. 25.06.2016 Московская область Хорловское лесничество кв.79 вблизи д. Новочеркасское, Воскресенский р-н. дикий кабан
48 770 25.06.2016 Рязанская область на территории Петровского о/х, Ряжского р-на дикий кабан
49 771 25.06.2016 Рязанская область Территория Рай-польского о/х вышка № 1,11,4, Шацкого р-на дикий кабан
50 773. 26.06.2016 Владимирская область Территория общедоступных о/х в 1 км от д. Михай-ловка, Сараевского р-на. дикий кабан
51 777 28.06.2016 Рязанская область Территория общедоступных о/х в 1 км от д. Михай-ловка Сараевского р-на дикий кабан
Таблица 9 - Изоляты вируса АЧС использованные в работе
№ п/ п Дата Изолят Место Вид животного
1 2008г Ставропольский край Советский р-н., ТОО «Горькая Балка» домашняя свинья
2 23.10.2008 Ставропольский край Советский р-н. домашняя свинья
3 26.06.2010 Ростовская область Константиновский р-н., х. Ермилов домашняя свинья
4 18.09.2011 Краснодарский край Щербиновский р-н., СПК колхоз «Знамя Ленина» домашняя свинья
5 06.06.2016 Воронежская область ФГБУ» Воронежский государственный природный биосферный заповедник им. В.М. Пескова дикий кабан
6 10.06.2016 Псковская область Палкинский р-н., Качанов-ская волость, д. Яшково дикий кабан
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.