Характеристика рекомбинантного вируса африканской чумы свиней с делецией регулятора транскрипции A238L тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Нефедьева Мария Владимировна
Нефедьева Мария Владимировна
кандидат наук
2020
- Специальность ВАК РФ03.02.02
- Количество страниц 139
Оглавление диссертации кандидат наук Нефедьева Мария Владимировна
Оглавление
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1 Характеристика вируса АЧС
2.2 Организация генома вируса АЧС
2.3 Механизм репликации вируса АЧС
2.4 Клинические формы АЧС
2.5 Иммунный ответ при АЧС
2.6 Белки вируса АЧС, ответственные за иммунное уклонение и 25 вирулентность
2.7 Вариабельность вируса АЧС
2.8 Использование клеточных линий для получения делеционных 36 вариантов вируса АЧС
2.9 Заключение по обзору литературы
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Материалы и оборудование
3.1.1 Штаммы и изоляты вируса АЧС
3.1.2 Культуры клеток
3.1.3 Питательные среды для культивирования, растворы и реактивы
3.1.4 Плазмиды и бактериальные штаммы
3.1.5 Коммерческие наборы
3.1.6 Лабораторное оборудование
3.2 Методы исследований
3.2.1 Анализ вариабельности белков
3.2.2 Анализ нуклеотидных последовательностей вируса АЧС
3.2.3 Выделение нуклеиновых кислот
3.2.4 Полимеразная цепная реакция с детекцией продуктов амплификации 46 методом электрофореза
3.2.5 Нуклеотидное секвенирование
3.2.6 Биоинформатический анализ нуклеотидных последовательностей
генов вируса АЧС
3.2.7 Конструирование рекомбинантных векторов
3.2.8 Получение рекомбинантного вируса АЧС
3.2.9 Инфекционная активность вируса АЧС
3.2.10 Проверка отсутствия исходного родительского типа вируса
3.2.11 Проверка контаминации бактериальной, грибной микрофлорой и 50 микоплазмами
3.2.12 Ростовые характеристики вируса АЧС
3.2.13 Количественная ПЦР в режиме реального времени
3.2.14 Количественное обнаружение апоптоза в клетках
3.2.15 Статистическая обработка результатов исследований 51 4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1 Сравнительный анализ генов вируса АЧС, участвующих в иммунном 52 уклонении
4.1.1 Дизайн специфических праймеров для амплификации копий генов 58 Л238Ь, 1329Ь и БР71Ь вируса АЧС
4.1.2 Амплификация фрагментов генов Л238Ь, ¡329Ь и БР71Ь методом 60 ПЦР
4.1.3 Филогенетический анализ генов Л238Ь, ¡329Ь и БР71Ь вируса АЧС
4.1.4 Анализ синонимичных и несинонимичных замен псевдо- 71 последовательности генов Л238Ь (5БЬ), 1329Ь (К11Ь) и ЭР71Ь (114Ь) вируса АЧС
4.2 Получение рекомбинантного вируса АЧС
4.2.1 Олигонуклеотидные праймеры для секвенирования плечей 72 рекомбинации гена А238L
4.2.2 Олигонуклеотидные праймеры для создания генетической 75 конструкции на основе плазмидного вектора
4.2.3 Генетическая конструкция на основе плазмидного вектора
4.2.4 Рекомбинантный вирус АЧС Волгоград/14с ДA238L, полученный 83 методом гомологичной рекомбинации
4.2.5 Инфекционная активность рекомбинантного вируса АЧС (штамм 88 Волгоград/14с ДA238L)
4.2.6 Отсутствие исходного вируса Волгоград/14с в суспензии 89 рекомбинантного вируса
4.2.7 Репродукция рекомбинантного вируса Волгоград/14с ДA238L в 91 перевиваемой культуре клеток COS-1
4.2.8 Активность эффекторной каспазы-3 в культуре клеток COS-1, 94 инфицированной вирусом АЧС
4.2.9 Полногеномное секвенирование рекомбинантного вируса (штамм
Волгоград/14с ДA238L)
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
5.1 Итоги выполненного исследования
5.2 Практические предложения
5.3 Перспективы дальнейшей разработки темы
6. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
8. ПРИЛОЖЕНИЯ
1. ВВЕДЕНИЕ
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Вирусология», 03.02.02 шифр ВАК
Получение стабильной клеточной линии, экспрессирующей рекомбинантный белок I329L вируса АЧС -антагонист TLR-32018 год, кандидат наук Каторкин Сергей Александрович
Получение рекомбинантных белков P17, P54 и CD2v вируса африканской чумы свиней в клетках млекопитающих2017 год, кандидат наук Мима, Ксения Александровна
Функциональная характеристика гликопротеина СD2v вируса африканской чумы свиней, слитого с Fс фрагментом иммуноглобулина G свиньи2020 год, кандидат наук Каторкина Елена Ивановна
Получение и изучение свойств ДНК-конструкций, кодирующих гены потенциально протективных белков вируса африканской чумы свиней2019 год, кандидат наук Иматдинов Алмаз Рамисович
Конструирование продуцентов рекомбинантных белков Р72, Р30 и Р54 вируса африканской чумы свиней2013 год, кандидат биологических наук Казакова, Анна Сергеевна
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеристика рекомбинантного вируса африканской чумы свиней с делецией регулятора транскрипции A238L»
Актуальность темы исследования
Вирус африканской чумы свиней является ДНК-содержащим вирусом семейства Asfarviridae, который вызывает смертельную болезнь свиней, что приводит к серьезным экономическим потерям в свиноводстве [164].
В связи с отсутствием эффективных и безопасных средств защиты от АЧС, контроль болезни ограничен применением диагностических тестов и противоэпизоотическими мероприятиями, что и определяет актуальность ее изучения.
Исследованиями, проведенными ранее, было показано, что вирус АЧС может вызывать персистирующую инфекцию у своих естественных хозяев, которые выздоравливают после заражения умеренно вирулентными изолятами, что свидетельствует о сложной эпидемиологии вируса АЧС. Эти данные указывают на то, что вирус обладает эффективными механизмами, позволяющими избежать иммунного ответа хозяина [82, 210].
Геном вируса АЧС кодирует более 160 белков, и некоторые из них играют важную роль в уклонении от систем защиты хозяина [69]. Поскольку эволюция генов вируса АЧС, кодирующих иммуномодулирующие белки, не достаточно широко изучена, то исследование геномного разнообразия и роли гомологичной рекомбинации поможет понять эволюцию вируса и тем самым, будет способствовать разработке мер борьбы с ним.
В процессе репродукции вирус АЧС использует молекулярные механизмы инфицированных клеток, которые контролируются определенными вирусными белками. Данные белки кодируются генами, участвующими в регуляции каскада иммунных реакций путем воздействия на различные сигнальные пути, например, А238Ь, БР71Ь, 1329Ь, А179Ь, А224Ь, ЕР153Я и ЕР402Я [41, 82, 69, 140].
Проведение биоинформатического анализа с учетом наличия известных штаммов и изолятов вируса АЧС позволит определить наиболее вариабельный
ген среди выбранной группы генов для дальнейшего конструирования рекомбинантного вируса АЧС.
Существует ряд стратегий получения рекомбинантных вирусов, таких как таргетные делеции, обратная генетика и рекомбинация [263]. Конструирование рекомбинантных вирусов АЧС с измененными или удаленными генами, является перспективным направлением исследований.
Несмотря на то, что свиные моноциты и макрофаги являются естественными клетками-мишенями для репликации вируса АЧС in vitro и in vivo, со временем стало возможным культивирование изолятов и штаммов вируса АЧС в различных перевиваемых клеточных линиях (COS-1, CV-1, PK, Vero, WSL) [27, 123, 252].
Среди многих доступных вариантов перевиваемых клеточных линий как возможный альтернативный метод для манипулирования с геномом вируса АЧС, широко используется именно линия клеток COS-1 [123].
Восприимчивость клеток культуры COS-1 к инфицированию как полевыми изолятами, так и различными штаммами вируса АЧС открыла множество возможностей не только для выявления и диагностики АЧС, но также для выращивания, титрования и конструирования рекомбинантных вирусов без их предварительной адаптации [123, 163]. Ранее было описано применение перевиваемой культуры клеток COS-1 для получения делеционных мутантов вируса АЧС [32, 35, 68, 250, 243].
Таким образом, прогресс в понимании функций белков, кодируемых вирусом АЧС, участвующих в модулировании его реакции в ответ на инфицирование, представляет огромный интерес.
Степень разработанности проблемы
Как вирусы, так и их хозяева находятся под сильным эволюционным давлением. Со временем клетки хозяина выработали сложные антивирусные стратегии, которым противодействует способность вирусов обходить или снимать защиту с этих клеток [262]. Вирусы, от, казалось бы, простого бактериофага до
сложных эукариотических вирусов, используют сложные механизмы, которые не только способствуют генетическому разнообразию, но и способствуют репликации вируса [262].
Вирус АЧС размножается преимущественно в моноцитах и макрофагах, принадлежащих к мононуклеарной фагоцитарной системе макроорганизма, хотя на поздних стадиях инфекции также могут быть инфицированы и другие типы клеток [60, 123].
Данные многих исследователей свидетельствуют о том, что основной стратегией, используемой вирусом АЧС, является его влияние на сигнальные пути в инфицированных макрофагах, что препятствует экспрессии большого количества иммуномодулирующих генов [41, 82, 69, 140]. Таким образом, вирус АЧС после проникновения в организм животного может манипулировать как врожденным, так и адаптивным иммунным ответом [69].
Диапазон модуляционной активности вирусных белков весьма разнообразен и включает в себя: ингибирование гуморального ответа, ингибирование цитокинов и хемокинов, уклонение от цитотоксических Т-лимфоцитов (CTLs) и природных клеток-киллеров (МКб), и управление функцией главного комплекса гистосовместимости (МНС I и II), изменение эффекторной функции дендритных клеток и ингибирование апоптоза [71].
К их числу относится и иммуномодулирующий белок 5EL (ген А238Ь) вируса АЧС, который ингибирует активацию фактора транскрипции хозяина, активность кальцинейрин фосфатазы и активацию транскрипции, опосредованную факторами, взаимодействующими с ^терминальным доменом транскрипционного коактиватора р300/СВР [155, 214, 249, 250].
Поэтому, при инфицировании вирусом АЧС, в первую очередь ингибируются кальцинейрин-зависимые пути, включая активацию фактора транскрипции №АТ [150]. Также накапливаются новые данные о том, что белок 5EL является мощным противовоспалительным белком и тем самым ингибирует индукцию TNF-a и путей, активируемых Т№-а, индуцибельной синтазы оксида азота и циклооксигеназы [150, 214, 249, 250].
Таким образом, получение новых знаний о взаимодействии вируса с клеткой хозяина и механизмах иммунного ответа способствует дальнейшему изучению характеристик и механизмов действия иммуномодулирующих белков.
Ранее в клетках культуры COS-1 методом гомологичной рекомбинации из аттенуированного штамма КК-262 вируса АЧС были получены рекомбинантные штаммы вируса АЧС ACongoCD2v с делецией гена EP402R (CD2v) и DswCongo/FranceLectmCD2, содержащий гены EP153R и EP402R из штамма ФК-32 [32, 35, 64, 84].
Метод гомологичной рекомбинации также был успешно использован различными авторами для получения делеций отдельных генов (DP71L, DP96R, EP402R, A238L) из вирулентных штаммов Malawi LiL20/1, E70 и Рг4 [50, 54, 55, 93].
Однако в настоящее время отсутствуют данные о получении рекомбинантного вируса АЧС (II генотипа) с делецией гена A238L.
Идентификация генов вируса АЧС, участвующих в проявлении вирулентных свойств и определение механизмов, используемых вирусом для уклонения от иммунного ответа хозяина, являются важными этапами при разработке вакцин.
В связи с вышеперечисленным, изучение влияния удаления генов на репликацию вируса в клетках и подавление сигнальных путей позволит изучить механизмы иммунного уклонения при АЧС, что и определяет актуальность настоящей работы.
Цель и задачи исследований
Целью исследований является получение делеционного варианта вирулентного штамма Волгоград/14с вируса АЧС и изучение его культуральных характеристик.
Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:
1. Провести сравнительный бионформатический анализ семи генов A179L, A224L, A238L, EP153R, EP402R, I329L, DP71L вируса АЧС, кодирующих белки, участвующих в иммунном уклонении.
2. Определить нуклеотидные последовательности генов A238L, I329L и DP71L штаммов и изолятов вируса АЧС различных генотипов (I, II, V, X), сероиммунотипов (1, 2, 3, 4, 5, 6, 8) и провести филогенетический анализ.
3. Создать генетическую конструкцию на основе плазмидного вектора pGEM®-T Easy, несущего ген флуоресцентного белка EGFP и фрагменты генома, фланкирующие ген A238L вирулентного штамма Волгоград/14с вируса АЧС.
4. Методом гомологичной рекомбинации получить рекомбинантный вирус АЧС с делецией гена A238L и изучить его репродукцию in vitro.
5. Определить роль A238L в индукции апоптоза при репродукции вируса АЧС в клетках культуры COS-1.
Научная новизна результатов исследований
Впервые определены и депонированы в GenBank нуклеотидные последовательности генов A238L, I329L и DP71L 16 штаммов из Государственной коллекции микроорганизмов, вызывающих опасные, особо опасные, в том числе зооантропонозные и не встречающиеся на территории страны болезни животных ФГБНУ ФИЦВиМ, принадлежащих к I, II, V, X генотипам и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8 сероиммунотипам вируса АЧС.
Обнаружено слияние двух открытых рамок считывания генов у изолятов вируса АЧС X генотипа, что привело к образованию длинной и короткой форм гена DP71L, кодирующего белок I14L вируса АЧС.
Сконструирована рекомбинантная плазмида pGEM®-T Easy, несущая ген флуоресцентного белка EGFP вместо гена A238L, кодирующего иммуномодулирующий белок 5EL вирулентного штамма Волгоград/14с вируса АЧС (генотип II, сероиммунотип 8).
Получен рекомбинантный вирус АЧС Волгоград/14с AA238L с делецией гена A238L и изучены характеристики его репродукции in vitro.
В опытах in vitro установлено, что на ранних стадиях после заражения рекомбинантный штамм Волгоград/14с AA238L с делецией гена A238L не ингибирует активность эффекторной каспазы-3 в отличие от родительского штамма с активным геном A238L (Волгоград/14с).
Теоретическая и практическая значимость работы
Поиск новых генов - мишеней для конструирования генетически модифицированного вируса АЧС позволит изучить характеристики и тонкие механизмы действия иммуномодулирующих белков, и будет способствовать развитию рациональной стратегии разработки эффективных вакцин против этой болезни.
Нуклеотидные последовательности генов A238L и I329L 12 изолятов вируса АЧС, выделенных в 2016 г. и трех генов A238L, I329L, DP71L 16 штаммов, принадлежащих к различным генотипам и сероиммунотипам вируса АЧС, могут быть использованы для сравнительного анализа иммуномодулирующих белков и проведения молекулярно - генетических исследований.
В составе плазмидного вектора pGEM®-T Easy создана генетическая конструкция, несущая ген флуоресцентного белка EGFP вместо гена A238L вирулентного штамма Волгоград/14с вируса АЧС.
Методом гомологичной рекомбинации получен делеционный вариант вируса АЧС (штамм Волгоград/14с AA238L), пригодный для изучения характеристики иммуномодулирующего белка 5EL, механизмов иммунного ответа и взаимодействия вируса с клеткой хозяина.
Отсутствие у делеционного варианта вируса АЧС (штамм Волгоград/14с AA238L) возможности ингибирования апоптоза на ранних стадиях после заражения может способствовать аттенуации вируса.
В Государственную коллекцию микроорганизмов, вызывающих опасные, особо опасные, в том числе зооантропонозные и не встречающиеся на территории страны болезни животных ФГБНУ ФИЦВиМ был депонирован рекомбинантный
вирус АЧС Волгоград/14с AA238L под инвентарным номером 3181 (протокол №9 от 06.06.2019 г.).
Методология и методы исследования
Методология проведенных исследований включает биоинформатические методы (анализ вариабельности белков по методу Симпсона, анализ нуклеотидных последовательностей методами ClustalW и MUSCLE, филогенетический анализ методом максимального правдоподобия, анализ наличия трансмембранных доменов, анализ синонимичных и несинонимичных замен); молекулярно-биологические методы исследований (ПЦР, гель-электрофорез, количественная ПЦР в режиме реального времени, полногеномное секвенирование, клонирование, трансфекция клеток, гомологичная рекомбинация); вирусологические (вирусовыделение, культивирование и титрование вируса); световую и флуоресцентную микроскопию.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Биоинформатический анализ нуклеотидных последовательностей генов A238L, I329L и DP71L 16 аттенуированных и вирулентных штаммов, изолятов вируса АЧС различных генотипов (I, II, V, X) и сероиммунотипов (1, 2, 3, 4, 5, 6, 8).
2. Генетическая конструкция на основе плазмидного вектора pGEM®-T Easy, несущая ген флуоресцентного белка EGFP вместо гена A238L вирулентного штамма Волгоград/14с вируса АЧС.
3. Рекомбинантный вирус АЧС Волгоград/14с AA238L с делецией гена A238L и его характеристики in vitro.
Личный вклад соискателя
Диссертационная работа выполнена соискателем самостоятельно в лаборатории Геномики вирусов ФГБНУ ФИЦВиМ. Автор выражает искреннюю благодарность сотруднику лаборатории Геномики вирусов к.б.н. И.А. Титову и
д.б.н., проф. Середе А.Д. за консультативную и методическую помощь при выполнении отдельных этапов работы.
Работа выполнена в рамках государственного задания при поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации.
Степень достоверности и апробация результатов
Степень достоверности результатов проведенных экспериментов подтверждена комиссионными испытаниями, статистическими исследованиями и положительными результатами их проверки на момент проведения экспериментальных исследований.
Результаты исследований по теме диссертационной работы представлены и обсуждены на заседаниях Ученого совета ФГБНУ ФИЦВиМ (2015-2019 гг.), XVI и XVII Всероссийской молодежной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» (г. Москва, 2016, 2017 гг.); III Международной конференции молодых ученых: биотехнологов, молекулярных биологов и вирусологов (пос. Кольцово, 2016 г.); 11-м ежегодном собрании Epizone «Crossing Barriers» (г. Париж, Франция, 2017 г.); Международной научной конференции «Молодежь и наука XXI века» (г. Ульяновск, 2017, 2018 гг.); юбилейной Международной научно-практической конференции, посвященной 120-летию со дня создания ВИЭВ «Здоровье животных: современные научные подходы, направления, тенденции» (г. Москва, 2018 г.); XIX Всероссийской конференции молодых ученых «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и сельскохозяйственной микробиологии» (г. Москва, 2019 г.); V Международной научной конференции «Постгеномные технологии: от теории к практике» (г. Воронеж, 2019 г.).
Публикации
По материалам диссертационной работы опубликовано 15 научных работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых научных изданиях по Перечню рекомендованном ВАК Министерства образования и науки РФ для докторских и кандидатских диссертаций.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 139 страницах и включает: введение, обзор литературы, материалы, методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список сокращений, список использованной литературы, включающий 264 источника, из которых 219 - иностранные. Диссертация иллюстрирована 30 рисунками и 9 таблицами. В приложении представлены документы, подтверждающие достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика вируса АЧС
Африканская чума свиней (АЧС) - смертельная болезнь домашних свиней и кабанов, вызываемая крупным цитоплазматическим ДНК-вирусом семейства Asfarviridae. У инфицированных животных летальность может достигать 100 % [5, 26, 28, 60, 62].
От больных животных и вирусоносителей заболевание передается алиментарным, контактным путём и с помощью биологических векторов [227].
В отличие от домашних свиней (Sus scrofa domesticus), африканские представители семейства Suidae - бородавочники (Phacochoerus africanus), кустарниковые свиньи (Potamochoerus porcus) и гигантские лесные свиньи (Hylochoerus spp.), инфицированные вирусом АЧС, как правило, невосприимчивы к вирусу АЧС или болезнь протекает в хронической форме, что может свидетельствовать о длительной коэволюции патогена и хозяина [177, 214].
Основным резервуаром вируса в дикой природе являются различные виды мягких клещей, где Ornithodorus mobata выступает в роли вектора в странах Восточной Африки к югу от Сахары, а Ornithodoros erraticus на юго-западе Испании и Португалии [253].
Сильватический цикл (дикие свиньи + мягкие клещи) является наиболее древним эпидемиологическим сценарием распространения и эндемичности АЧС [61]. Вирус может передаваться клещами трансстадийно и трансовариально. Бородавочники и дикие аборигенные свиньи могут быть заражены путем прямого контакта с инфицированными животными, алиментарно или через укусы инфицированных клещей [253].
Монтгомери впервые официально опубликовал сведения об АЧС в Кении в 1921 году [196]. Далее из Западной Африки болезнь распространилась на Пиренейский полуостров, первоначально в Португалию в 1957 и 1960 годах, а затем в ряд других стран Европы (Испания, Португалия, Италия, Франция) и Латинской Америки [208].
Генетическая характеристика изолятов вируса АЧС, циркулирующих в Восточной и Южной частях Африки, на основе секвенирования С- концевой части структурного белка р72 выявила наличие 23 генотипов, а позже в Мозамбике был идентифицирован новый генотип XXIV [145, 165, 147]. Таким образом, большое разнообразие вируса АЧС, сохраняемое в дикой природе, может выступать в качестве постоянного источника для возникновения болезни.
Штаммы и изоляты вируса АЧС генотипа I преимущественно распространены в Западной Африке и на острове Сардиния [208].
Вирус АЧС генотипа II был выделен в Мозамбике и Замбии [17]. Позднее, в 2007 г. вирус АЧС был выявлен в Грузии. Впоследствии вирус распространился по всей территории Российской Федерации и далее в Украину (2012), Беларусь (2013), страны Балтии (2014), Польшу (2014), Молдову (2016), Чехию (2017), Румынию (2017), Болгарию (август 2018) и Бельгию (сентябрь 2018), где на данный момент АЧС является эндемичной [76, 139, 184, 226].
Кроме того, в августе 2018 г. была выявлена первая вспышка АЧС в городе Шэньяне, расположенном на северо-востоке Китая [133]. С тех пор АЧС продолжает свое распространение по многим провинциям Китая, затрагивая большую часть популяции домашних свиней [133, 261].
В настоящее время болезнь распространилась на соседние страны, в частности в 2019 г. зарегистрированы первые случаи АЧС во Вьетнаме, Монголии, Камбодже, Зимбабве, Гонконге и КНДР [56, 57, 58].
2.2 Организация генома вируса АЧС
Вирус АЧС является единственным представителем семейства Asfarviridae [25, 75]. Вирионы представлены в виде частиц округлой или икосаэдрической формы диаметром до 215 нм с внутренней липидной мембраной и наружной липидной оболочкой [25, 75].
Вирусная частица содержит 54 структурных белка [10]. Около 100 вирусспецифических белков были идентифицированы на клетках-мишенях в макрофагах свиней, инфицированных вирусом АЧС [5, 83, 225].
Различными исследователями было показано, что структурные, и также вирусспецифические белки могут регулировать, ингибировать и модулировать биохимические процессы в инфицированных клетках (репликацию вируса, сборку вирусных частиц, апоптоз и др.) [65]. Некоторые из них ингибируют факторы транскрипции хозяина, индукцию интерферона или взаимодействие нескольких субпопуляций иммунных клеток, чтобы уклониться от иммунной системы хозяина [65, 220].
Геном вируса АЧС представляет собой линейную двухцепочечную молекулу ДНК, состоящую из центральной консервативной области размером около 125 т.п.о. и двух вариабельных концевых участков, кодирующих пять мультигенных семейств (МОБ 100, МОБ 110, МОБ 300, МОБ 360, МОБ 530/505) [5, 61]. Геном вируса АЧС также содержит от 160 до 175 открытых рамок считывания (ОРС), кодирующих значительное количество вирусспецифических белков, ферментов и также вирусных транскрипционных факторов, и иммунных гомологов [61].
Размер вариабельных концов генома варьирует среди различных штаммов и изолятов вируса АЧС [83, 225]. Концевые петли присутствуют в виде двух флип-флоп-форм, которые являются инвертированными повторами [60, 210].
Высокий уровень генетической вариабельности вируса АЧС объясняется не только разницей в размере генома, но и также обусловлен изменениями числа и нуклеотидной последовательности членов мультигенных семейств (MGF) [60, 193].
Установлено, что некоторые мультигенные семейства (MGF 505/360) ответственны за вирулентность вируса, и также обеспечивают репликацию вируса в мягких клещах [78]. Удаление отдельных генов в составе MGF (MGF360/505) привело к изменению фенотипа изолятов, снижению репликации вируса и генерализации инфекции у инфицированных клещей [78, 230].
Несмотря на значительный прогресс, достигнутый в области изучения генетического разнообразия вируса АЧС, в должной мере не определено какие
гены в мультигенном семействе MGF могут быть связаны с индукцией защитного иммунитета у инфицированных животных [78].
2.3 Механизм репликации вируса АЧС
Инфекционный цикл вируса АЧС начинается с адсорбции вируса на поверхности клеток мононуклеарно-фагоцитарной системы, в том числе резидентных макрофагов кроветворных органов и специфических ретикулярных клеток [164].
Ранние исследования по проникновению вируса АЧС показали, что этот процесс зависит от значений рН, температуры и связан со специфическим рецептор-опосредованным эндоцитозом в клетках Vera и макрофагах свиней [91, 143]. Однако все рецепторы, специфичные для вируса АЧС, остаются неопределенными [143].
Sanchez-Torres C. с соавт. [142] было показано, что инфицирование моноцитов и макрофагов свиней вирусом АЧС коррелировало с экспрессией рецептора - CD163 «мусорщика» макрофагов. Поэтому эти авторы предположили, что рецептор CD163 может являться потенциальным вирусным рецептором, поскольку моноклональные антитела против этого белка могли блокировать инфицирование первичных альвеолярных макрофагов [60, 142].
Однако более поздние исследования показали, что белок CD163 не является необходимым рецептором для инфицирования свиней референс-штаммом вируса АЧС Georgia 2007/1 [142, 151]. При заражении генно-модифицированных свиней, у которых был удален ген белка CD163, с использованием системы CRISPR/Cas9, не показано различий в проявлении клинических признаков, уровне смертности, патологии или виремии [151 ]. Таким образом, белок CD163 может быть необходимым, но не единственным рецептором для вируса АЧС. Можно предположить, что другие поверхностные маркеры макрофагов, также могут участвовать в процессе инфицирования [151 ].
Несмотря на то, что существуют рецептор-зависимые механизмы проникновения вируса, такие как клатрин - и динамин-зависимый рецептор-
опосредованный эндоцитоз, также имеются данные о том, что для проникновения в клетку вирус АЧС использует механизмы фагоцитоза и макропиноцитоза [60, 74, 87, 88, 109, 159].
Различными авторами показано, что в механизме проникновения вируса АЧС в клетку принимает участие белок р30, который способствует интернализации вируса, а также белки р12 и р54 [96, 97, 237].
После проникновения вируса АЧС в чувствительную клетку и для последующего успешного размножения он должен взаимодействовать с разными популяциями эндосом [134]. Белки семейства Rab GTPase являются основными регуляторами созревания эндосомального пути [232].
Через несколько минут после адсорбции вирус АЧС обнаруживают в ранних эндосомах, помеченных маркерами Rab5 и ЕЕА1. Полностью инкапсулированные вирионы встречаются только на уровне ранних эндосом [134].
Использование ингибитора закисления эндосом - бафиломицина А1 предотвращало декапсидирование вируса, что позволило наблюдать полноразмерные вирионы в мультивезикулярных эндосомах. В отсутствии ингибитора в поздних эндосомах содержатся только коры вируса, лишенные капсидного белка [134].
Декапсидирование вириона АЧС происходит при кислом значении рН в зрелых эндосомальных компартментах клеток между 30 и 45 мин после инфицирования [134]. Зрелые эндосомы представляют собой мультивезикулярные тела, экспрессирующие белок CD63. Зависимость последовательного «раздевания» вируса от эндосомального созревания была также описана и для других вирусов [136, 201].
После декапсидирования вирусных частиц происходит слияние вирусной оболочки с мембраной эндосом и затем обнаженные коры вириона поступают в цитозоль для начала репликации [113]. В этом процессе участвует белок внутренней оболочки вириона pE248R [22]. Блокирование транспорта
холестерина способствует сохранению вирионов внутри эндосом, препятствуя прогрессированию инфекции [113].
Механизм репликации ДНК вируса АЧС в цитоплазме клеток аналогичен таковым процессам, характерным для вирусов семейства Poxviridae. После проникновения в клетку, вирионы достигают перинуклеарной области, близкой к центру организации микротрубочек (ЦОМТ), где происходит репликация ДНК вируса АЧС [60, 81]. Ранние гены экспрессируются до начала репликации ДНК, причем обе цепи вирусной ДНК являются альтернативами и используются в качестве кодирующей цепи [143, 223].
После репликации ДНК начинается транскрипция промежуточных и поздних генов, участвующих в транскрипции и модификации мРНК. Этот транскрипционный механизм дает вирусу АЧС относительную независимость от хозяина и тем самым позволяет осуществлять точное позиционное и временное управление экспрессией своих генов [223].
В ранние периоды после инфекции в ядре клеток обнаруживается вирусная ДНК, что указывает на возможное участие клеточных ферментов на начальных стадиях репликации ДНК. Репликативные промежуточные формы ДНК, которые синтезируются как в ядре, так и в цитоплазме клеток, инфицированных вирусом АЧС, состоят из конкатемеров «голова к голове» [221].
Возможно, в ядре клеток синтезируются небольшие транскрипты или другие факторы, необходимые для прайминга репликации вируса или в нем происходит ранняя стадия репликации вирусной ДНК [221].
Для транспортировки вируса в перинуклеарную область клетки необходимы микротрубочки, где происходит репликация и образование вирусных фабрик [160].
Структурный белок р54 вируса АЧС во время вирусной инфекции взаимодействует с легкой цепью динеина, что может служить молекулярным механизмом для передачи вируса, опосредованного микротрубочками [81]. Промежуточные волокна клетки - виментины окружают вирусную фабрику,
Похожие диссертационные работы по специальности «Вирусология», 03.02.02 шифр ВАК
Анализ влияния рекомбинантных белков вируса африканской чумы свиней на его репродукцию in vitro2019 год, кандидат наук Мазлум Али
Получение и исследование свойств рекомбинантных антител к гликопротеину вируса бешенства для постэкспозиционной профилактики заболевания2019 год, кандидат наук Ильина Екатерина Николаевна
Методы выявления и изучение молекулярно-генетических свойств изолятов вирусов оспы птиц2013 год, кандидат биологических наук Елаткин, Николай Павлович
Молекулярно-биологические свойства изолятов вируса инфекционного ларинготрахеита птиц, выявленных на территории российской федерации в период с 2012 по 2017 гг.2018 год, кандидат наук Козлов Антон Александрович
Протективное химерное антитело против вируса клещевого энцефалита: получение и характеризация2019 год, кандидат наук Матвеев Андрей Леонидович
Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Нефедьева Мария Владимировна, 2020 год
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. СОП 00566-01. Название: Определение микробиологической чистоты штаммов бактериальной, грибной, микоплазменной и вирусной этиологии.
2. Адаптация вируса африканской чумы свиней к перевиваемым культурам клеток / Е.Ю. Прудникова, В.М. Балышев, С.Г. Юрков [и др.] // Научный журнал КубГАУ. - 2012. - Т. 6, № 80. - С. 384-393.
3. Адаптация вируса АЧС к перевиваемым линиям клеток / Ю.П. Моргунов, А.С. Малоголовкин, О.Л. Колбасова [и др.] // Ветеринария. - 2013. - № 11. - С. 58-61.
4. Африканская чума свиней - модель взаимодействия патогена с системой мононуклеарных фагоцитов / В.В. Макаров, М.С. Малахова, Н.А. Власов, С.Ф. Чевелев // Доклады Россельхозакадемии. - 1992. - № 11-12. - С. 37-44.
5. Африканская чума свиней в Российской Федерации / А.Д. Забережный, Т.И. Алипер, Т.В. Гребенникова [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2012. - Т. 57, № 5. -С. 4-10.
6. Бакулов, И.А. Проблемы современной эволюции африканской чумы свиней / И.А. Бакулов, В.В. Макаров // Вестн. с.-х. науки. - 1990. - № 3. - С. 46-55.
7. Бейли, Н. Статистические методы в биологии / Н. Бейли - Москва: Изд-во иностранной литературы, 1962. - 260 с.
8. Биологические характеристики штаммов вируса африканской чумы свиней 8-го сероиммунотипа, адаптированных к перевиваемой линии клеток СОS-1 / Ю.П. Моргунов, А.С. Малоголовкин, С.Ю. Моргунов [и др.] // Ветеринария. -2015. - № 10. - С. 53-57.
9. Болгова, М.В. Паспортизация изолята Девис вируса африканской чумы свиней / М.В. Болгова, В.М. Балышев, В.Н. Пономарев, Н.С. Неверовская // Актуальные вопросы контроля инфекционных болезней животных: материалы Междунар. науч. - практ. конф. посвященной 55-летию ВНИИВВиМ.Ч. 1. -Покров, 2013. - С. 43-47.
10. Вирус африканской чумы свиней: использование генетических маркеров при анализе путей его распространения / А. Мазлум, А.С. Иголкин, Н.Н. Власова, Д.В. Роменская // Ветеринария сегодня. - 2019. - № 3 (30). - С. 3-14.
11. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самойленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина. - Москва: ВНИТИБП, 1998. - С. 770-777.
12. Власова, Н.Н. Перспективы использования методов молекулярной иммунологии и генной инженерии в системе мер по борьбе с африканской чумой свиней (обзор) / Н.Н. Власова // Сельскохозяйственная биология. - 2012. - Т. 47, № 4. - С. 22-30.
13. Влияние полудана на репродукцию вирусов репродуктивно-респираторного синдрома, трансмиссивного гастроэнтерита и африканской чумы свиней в первичных и перевиваемых культурах клеток / Д.В. Шарыпова, И.Ю. Жуков, А. Мазлум [и др.] // Ветеринария сегодня. - 2018. - № 1 (24). - С. 37-41.
14. Влияние умеренно вирулентного вируса АЧС на продукцию интерлейкина-10 / А.С. Першин, И.В. Шевченко, А.С. Иголкин [и др.] // Ветеринария сегодня. -2019. - № 3 (30). - С. 23-28.
15. ГОСТ 28573-90. Свиньи. Методы лабораторной диагностики африканской чумы. - Москва: Изд-во стандартов, 1991. - 10 с.
16. Гуморальные и клеточно-опосредованные механизмы иммунитета при африканской чуме свиней / А.Д. Середа, А.С. Казакова, А.Р. Иматдинов, Д.В. Колбасов // Сельскохозяйственная биология. - 2015. - Т. 50, № 6. - С. 709-718.
17. Диагностика африканской чумы свиней в Российской Федерации / Т.В. Гребенникова, А.Д. Забережный, Т.И. Алипер [и др.] // Вопросы вирусологии. -2013. - № Б1. - С. 64-79.
18. Иммунологически значимые гликопротеины р54 и СЭ2у вируса африканской чумы свиней: биоинформатический анализ генетических вариаций и гетерогенности / К.А. Мима, Г.С. Бурмакина, И.А. Титов, А.С. Малоголовкин // Сельскохозяйственная биология. - 2015. - Т. 50, № 6. - С. 785-793.
19. История изучения африканской чумы свиней / М.И. Гулюкин, Г.А. Надточей, Т.В. Степанова // Ветеринарная патология. - 2012. - № 3. - С. 7-12.
20. Каламина, Т.В. Персистенция вируса АЧС в культуре клеток ПСГК / Т.В. Каламина, В.И. Жестерев // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: материалы научной конференции ВНИИВВиМ / ГНУ ВНИИВВиМ. - Покров, 1992. - С. 36-37.
21. Калантаенко, Ю.Ф. Выращивание вируса африканской чумы свиней в культуре перевиваемых клеток: дис. ... канд. ветеринарных наук: 16.00.03 / Калантаенко Юрий Федорович. - Покров, 1982. - 155 с.
22. Клонирование генов, кодирующих трансмембранные белки и белки, ответственные за вирулентность вируса африканской чумы свиней / А. Мазлум, Н.Г. Зиняков, А.С. Иголкин, Н.Н. Власова // Ветеринария сегодня. - 2018. - № 2 (25). - С. 3-7.
23. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. - Москва: Высшая школа, 1990. - 352 с.
24. Макаров, В.В. Апоптоз в системе вирус африканской чумы -мононуклеарные фагоциты свиньи / В.В. Макаров // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 1995. - № 3. - с. 38-43.
25. Макаров, В.В. Африканская чума свиней / В.В. Макаров // Москва: РУДН, 2011, 268 с.
26. Макаров, В.В. Гирусы (сравнительная таксономия вируса африканской чумы свиней в группе крупных ядерно-цитоплазматических дезоксирибовирусов) / В.В. Макаров // Ветеринария сегодня. - 2012. - № 1. - С. 5-8.
27. Макаров, В.В. Иммунологическая концепция африканской чумы свиней (некоторые итоги исследований) / В.В. Макаров // Ветеринарная практика. - 2013. - Т. 62, № 3. - С. 7-22.
28. Макаров, В.В. Эпизоотологическая характеристика вируса африканской чумы свиней / В.В. Макаров, О.И. Сухарев, И.В. Цветнова // Ветеринарная практика. - 2013. - Т. 1, № 60. - С. 6-16.
29. Моргунов, С.Ю. Адаптация вируса африканской чумы свиней циркулирующего в Российской Федерации в перевиваемых линиях клеток / С.Ю. Моргунов, Ю.П. Моргунов, А.С. Малоголовкин // Актуальные вопросы контроля
инфекционных болезней животных: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвященной 55-летию ВНИИВВиМ. - Ч. II. - Покров, 2014. - С. 159-165.
30. Моргунов, Ю.П. Адаптация вируса африканской чумы свиней штамма КК-262 и изолята Долизи-74 к перевиваемым линиям клеток / Ю.П. Моргунов, С.Д. Кушнир, О.Л. Колбасова // Актуальные вопросы контроля инфекционных болезней животных: материалы Международной научно - практической конференции, посвященной 55-летию ВНИИВВиМ, 13 ноября 2013 г. - Покров. 2013.- С. 48-53.
31. Определение корреляции показателя CT и титра вируса африканской чумы свиней в биологических жидкостях / А. Мазлум, Н.Н. Власова, Е.В. Аронова [и др.] // Ветеринария Кубани. - 2018. - № 6. - С. 4-7.
32. Патент 2571858 Российская Федерация, Рекомбинационная кассета, содержащая гены EP153R и EP402R штамма Ф-32 вируса африканской чумы свиней и рекомбинантный штамм DswCongo/FranceLectinCD2 вируса африканской чумы свиней / Г.С. Бурмакина, Ю.П. Моргунов, И.А. Титов [и др.]; ГНУ ВНИИВВиМ. - № 2014133432/10; заявл. 13.08.2014; опубл. 20.12.2015, Бюл. № 35.
33. Патент 2575079 Российская Федерация, Штамм вируса африканской чумы свиней 8-го серотипа, адаптированный к перевиваемой культуре клеток COS-1 / Ю.П. Моргунов, С.Ю. Моргунов, Г.С. Бурмакина [и др.]; ГНУ ВНИИВВиМ. - № 2014152959/10; заявл. 25.12.2014; опубл. 10.02.2016, Бюл. № 4.
34. Патент 2606253 Российская Федерация, Олигонуклеотидные праймеры и флюоресцентный зонд с внутренним гасителем, комплементарные участку гена р30 (CP204L) вируса африканской чумы свиней, для использования в полимеразной цепной реакции в режиме реального времени / Д.А. Кудряшов, Г.С. Бурмакина, И.А. Титов [и др.]; ГНУ ВНИИВВиМ. - № 20161050224; заявл. 15.02.2016; опубл. 10.01.2017, Бюл. № 1.
35. Патент 2654586 Российская Федерация, Рекомбинационная кассета, содержащая гены EP153R и EP364R штамма Congo (КК-262) вируса африканской чумы свиней и рекомбинантный штамм A^ngoCD2v вируса африканской чумы
свиней / Г.С. Бурмакина, Ю.П. Моргунов, И.А. Титов [и др.]; ФГБНУ ФИЦВиМ. -№ 2016115461; заявл. 20.04.2016; опубл. 25.10.2017, Бюл. № 30.
36. Патент 2675535 Российская Федерация, Штамм "АЧС/ВНИИЗЖ/ CV-1" вируса африканской чумы свиней, со сниженной вирулентностью для свиней, для вирусологических, диагностических, молекулярно-генетических и мониторинговых исследований / Н.Н. Власова, И.Ю. Жуков, А. Мазлум [и др.]; ФГБУ "ВНИИЗЖ". - № 2018117990; заявл. 15.05.2018; опубл. 19.12.2018, Бюл. № 35.
37. Получение типовых задерживающих гемадсорбцию референс-сывороток к вирусу африканской чумы свиней / В.М. Балышев, М.В. Болгова, В.И. Балышева [и др.] // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2015. -№ 2. - С. 23-25.
38. Прудникова, Е.Ю. Адаптация вируса африканской чумы свиней, выделенного в Российской Федерации, к перевиваемым культурам клеток и изучение его биологических свойств: дис. ... канд. ветеринарных наук: 06.02.02. / Прудникова Елена Юрьевна. - Покров, 2013. - 138 с.
39. Разработка и усовершенствование методов серологической диагностики африканской чумы свиней / Д.В. Шарыпова, О.В. Капустина, И.Ю. Жуков [и др.] // Ветеринария сегодня. - 2019. - № 2 (29). - С. 30-34.
40. Середа, А.Д. Антигенное разнообразие вируса африканской чумы свиней / А.Д. Середа, В.М. Балышев // Вопросы вирусологии. - 2011. - Т. 56, № 4. - С. 3842.
41. Середа, А.Д. Белки вируса африканской чумы свиней / А.Д. Середа, Д.В. Колбасов // Научный журнал КубГАУ. - 2012. - Т. 3, № 77. - С. 534-550.
42. Середа, А.Д. Моделирование in vitro защитных иммунных механизмов при африканской чуме свиней / А.Д. Середа // Сельскохозяйственная биология. -2013. - Т. 48, № 4. - С. 59-64.
43. Середа, А.Д. Определение серотиповой специфичности негемадсорбирующих штаммов вируса африканской чумы свиней / А.Д. Середа // Научый журнал КубГАУ. - 2010. - № 62. - С. 122-127.
44. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей интергенного региона I73R/ I329L кавказских, российских и европейских изолятов вируса АЧС / И.В. Шевченко, Н.Г. Зиняков, А.С. Иголкин [и др.] // Ветеринария и кормление. -2015. - № 2. - С. 26-27.
45. Сравнительный анализ показателей функциональной активности гуморального и клеточного иммунитета при вирусных инфекциях in vivo / В.В. Макаров, И.Ф. Вишняков, А.А. Коломыцев [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1995. - Т. 120, № 12. - С. 599-602.
46. A BIR motif containing gene of African swine fever virus, 4CL, is nonessential for growth in vitro and viral virulence / J.G. Neilan, Z. Lu, G.F. Kutish [et al.] // Virology. - 1997. - Vol. 230, № 2. - P. 252-264.
47. A conserved African swine fever virus I kappa B homolog, 5EL, is nonessential for growth in vitro and virulence in domestic swine / J.G. Neilan, Z. Lu, G.F. Kutish [et al.] // Virology. - 1997. - Vol. 235, № 2. - P. 377-385.
48. A conserved domain of herpes simplex virus ICP340.5 regulates protein phosphatase complex in mammalian cells / C. Zhang, J. Tang, J. Xie [et al.] // Febs Lett. - 2008. - Vol. 582. - Р. 171-176.
49. A natural recombinant between the geminiviruses Tomato yellow leaf curl Sardinia virus and Tomato yellow leaf curl virus exhibits a novel pathogenic phenotype and is becoming prevalent in Spanish populations / F. Monci, S. Sanchez -Campos, J. Navas-Castillo, E. Moriones // Virology. - 2002. - Vol. 303, № 2. - Р. 317-326.
50. A nonessential African swine fever virus gene UK is a significant virulence determinant in domestic swine / L. Zsak, E. Caler, Z. Lu [et al.] // J. Virol. - 1998. -Vol. 72, № 2. - Р. 1028-1035.
51. A novel non-integrative single-cycle chimeric HIV lentivector DNA vaccine / M. Moussa, G. Arrode-Brusés, I. Manoylov [et al.] // Vaccine. - 2015. - Vol. 33, № 19. - P. 2273-2282.
52. A novel TLR3 inhibitor encoded by African swine fever virus (ASFV) / V.L. de Oliveira, S.C. Almeida, H.R. Soares [et al.] // Arch. Virol. - 2011. - Vol. 156, № 4. - Р. 597-609.
53. A179L, a viral BCL-2 homologue, targets the core BCL-2 apoptotic machinery and its upstream BH3 activators with selective binding restrictions for bid and noxa / I. Galindo, B. Hernaez, G. Diaz-Gil [et al.] // Virology. - 2008. - Vol. 375. - P. 561-572.
54. Abrams, C.C. Sequential deletion of genes from the African swine fever virus genome using the cre/loxP recombination system / C.C. Abrams, L.K. Dixon // Virology. - 2012. - Vol. 433, № 1. - P. 142-148.
55. Afonso, C.L. African swine fever virus NL gene is not required for virus virulence / C.L. Afonso, L.C. Zsak, C.M.V. Carrillo [et al.] // J. Gen. Virol. - 1998. -Vol.79, № 10. - P. 2543-2547.
56. African Swine Fever (ASF). Report N°15. April 12-25, 2019 / World Organisation for Animal Health (OIE). - URL: https://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Animal Health in the World/docs/pdf/Disea se cards/ASF/Report 15 Current situation of ASF.pdf
57. African Swine Fever (ASF). Report N°17: 2016 -2019 / World Organisation for Animal Health (OIE). - URL: https://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Animal Health in the World/docs/pdf/Disea se cards/ASF/Report 17. Global situation of ASF.pdf
58. African Swine Fever (ASF). Report N°28: September 27-October 10, 2019 / World Organisation for Animal Health (OIE). - URL: https://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Animal Health in the World/docs/pdf/Disea se cards/ASF/Report 28 Current situation of ASF.pdf
59. African swine fever virus (ASFV) protection mediated by NH/P68 and NH/P68 recombinant live-attenuated viruses / C. Gallardo, E.G. Sanchez, D. Perez-Nunez [et al.] // Vaccine. - 2018. - Vol. 36, № 19. - P. 2694-2704.
60. African Swine Fever Virus / E.R. Tulman, G.A. Delhon, B.K. Ku, D.L. Rock // In: Current Topics in Microbiology and Immunology (eds Van Etten J.L.). Lesser Known Large dsDNA Viruses. - 2009. - Vol. 328. - P. 43-87.
61. African Swine Fever Virus / L.K. Dixon, C.C. Abrams, D.G. Chapman, F. Zhang // In: Animal viruses molecular biology (eds T.C. Mettenleiter, F. Sobrino). Norwich, UK: Caister Academic Press. - 2008. - P. 457-521.
62. African swine fever virus A238L inhibitor of NF-kB and of calcineurin phosphatase is imported actively into the nucleus and exported by a CRM1-mediated pathway / R.N. Silk, G.C. Bowick, C.C. Abrams, L.K. Dixon // J. Gen. Virol. - 2007. -Vol. 88, № 2. - P. 411-419.
63. African swine fever virus blocks the host cell antiviral inflammatory response through a direct inhibition of PKC-theta-mediated p300 transactivation / A.G. Granja, E.G. Sanchez, P. Sabina [et al.] // J. Virol. - 2009. - Vol. 83, № 2. - P. 969-980.
64. African swine fever virus CD2v and C-type lectin gene loci mediate serological specificity / A. Malogolovkin, G. Burmakina, E.R. Tulman [et al.] // J. Gen. Virol. -2015. - Vol. 96, № 4. - P. 866-873.
65. African swine fever virus controls the host transcription and cellular machinery of protein synthesis / E.G. Sanchez, A. Quintas, M. Nogal [et al.] // Virus Res. - 2013. -Vol. 173, № 1. - P. 58-75.
66. African swine fever virus DNA: deletions and additions during adaptation to growth in monkey kidney cells / E. Tabares, I. Olivares, G. Santurde [et al.] // Arch. Virol. - 1987. - Vol. 97, № 3-4. - P. 333-346.
67. African swine fever virus encodes a CD2 homolog responsible for the adhesion of erythrocytes to infected cells / J.M. Rodriguez, R.J. Yanez, F. Almazan [et al.] // J. Virol. - 1993. - Vol. 67, № 9. - P. 5312-5320.
68. African swine fever virus EP153R open reading frame encodes a glycoprotein involved in the hemadsorption of infected cells / I. Galindo, F. Almazan, M.J. Bustos [et al.] // Virology. - 2000. - Vol. 266. - P. 340-351.
69. African swine fever virus evasion of host defences / L.K. Dixon, M. Islam, R. Nash, A.L. Reis // Virus Res. - 2019. - Vol. 266. - P. 25-33.
70. African swine fever virus gene A179L, a viral homologue of bcl -2, protects cells from programmed cell death / A. Brun, C. Rivas, M. Esteban [et al.] // Virology. -1996. - Vol. 225, № 1. - P. 227-230.
71. African swine fever virus genome content and variability / L.K. Dixon, S.A. Baylis, S. Vydelingum [et al.] // Arch. Virol. - 1993. - Vol. 7. - P. 185-199.
72. African swine fever virus IAP homologue inhibits caspase activation and promotes cell survival in mammalian cells / M.L. Nogal, G. Gonzalez de Buitrago, C. Rodriguez [et al.] // J. Virol. - 2001. - Vol. 75, № 6. - P. 2535-2543.
73. African swine fever virus IAP-like protein induces the activation of nuclear factor kappa, B / C.I. Rodriguez, M.L. Nogal, A.L. Carrascosa [et al.] // J. Virol. - 2002.
- Vol. 76, № 8. - P. 3936-3942.
74. African swine fever virus infects macrophages, the natural host cells, via clathrin and cholesterol-dependent endocytosis / I. Galindo, M.A. Cuesta-Geijo, K. Hlavova [et al.] // Virus Res. - 2015. - Vol. 200. - P. 45-55.
75. African Swine fever Virus is wrapped by the endoplasmic reticulum / I. Rouiller, S.M. Brookes, A.D. Hyatt [et al.] // J. Virol. - 1998. - Vol. 72, №3. - P. 2373-2387.
76. African swine fever virus isolate, Georgia, 2007 / R.J. Rowlands, V. Michaud, L. Heath [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 2008. - Vol. 14, № 12. - P. 1870-1874.
77. African swine fever virus multigene family 360 and 530 genes affect host interferon response / C.L. Afonso, M.E. Piccone, K.M. Zaffuto [et al.] // J. Virol. -2004. - Vol. 78, № 4. - P. 1858-1864.
78. African swine fever virus multigene family 360 genes affect virus replication and generalization of infection in Ornithodoros porcinus ticks / T.G. Burrage, Z. Lu, J.G. Neilan [et al.] // J. Virol. - 2004. - Vol. 78, № 5. - P. 2445-2453.
79. African swine fever virus p72 genotype IX in domestic pigs, Congo, 2009 / C. Gallardo, R. Anchuelo, V. Pelayo [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 2011. - Vol. 17, № 8.
- P. 1556-1558.
80. African swine fever virus protein p17 is essential for the progression of viral membrane precursors toward icosahedral intermediates / C. Suarez, J. Gutierrez-Berzal, G. Andres [et al.] // J. Virol. - 2010. - Vol. 84, № 15. - P. 7484-7499.
81. African swine fever virus protein p54 interacts with the microtubular motor complex through direct binding to light-chain dynein / C. Alonso, J. Miskin, B. Hernaez [et al.] // J. Virol. - 2001. - Vol. 75, № 20. - P. 9819-9827.
82. African swine fever virus proteins involved in evading host defence systems / L.K. Dixon, C.C. Abrams, G. Bowick [et al.] // Vet. Immunol. Immunopathol. - 2004. -Vol. 100, № 3-4. - P. 117-134.
83. African swine fever virus replication and genomics / L.K. Dixon, D.A. Chapman, C.L. Netherton, C. Upton // Virus Res. - 2013. - Vol. 173, № 1. - P. 3-14.
84. African swine fever virus serotype-specific proteins are significant protective antigens for African swine fever / G. Burmakina, A. Malogolovkin, E.R. Tulman [et al.] // J. Gen. Virol. - 2016. - Vol. 97, № 7. - P. 1670-1675.
85. African swine fever virus specific porcine cytotoxic T cell activity / C.L. Martins, M.J. Lawman, T. Scholl [et al.] // Arch. Virol. - 1993. - Vol. 129, № 1-4. - P. 211-225.
86. African swine fever virus structural protein p72 contains a conformational neutralizing epitope / M.V. Borca, P. Irusta, C. Carrillo [et al.] // Virology. - 1994. -Vol. 201, № 2. - P. 413-418.
87. African swine fever virus undergoes outer envelope disruption, capsid disassembly and inner envelope fusion before core release from multivesicular endosomes / B. Hernaez, M. Guerra, M.L. Salas, G. Andres // PLoS Pathog. - 2016. -Vol. 12, № 4. - P. e1005595.
88. African swine fever virus uses macropinocytosis to enter host cells / E.G. Sanchez, A. Quintas, D. Perez-Nunez [et al.] // PLoS Pathog. - 2012. - Vol. 8, № 6. -P. e1002754.
89. African swine fever viruses with two different genotypes, both of which occur in domestic pigs, are associated with ticks and adult warthogs, respectively, at a single geographical site / C. Gallardo, E. Okoth, V. Pelayo [et al.] // J. Gen. Virol. - 2011. -Vol. 92, № 2. - P. 432-444.
90. African swine fever: A global view of the current challenge / C. Gallardo, A. De la Torre, J. Fernandez-Pinero [et al.] // Porcine Health Manag. - 2015. - Vol. 1. - P. 21.
91. Alcami, A. Saturable binding sites mediate the entry of African swine fever virus into vero cells / A. Alcami, A.L. Carrascosa, E. Vinuela // Virology. - 1989. - Vol. 168. - P. 393-398.
92. An African swine fever virus ERV1-ALR homologue, 9GL, affects virion maturation and viral growth in macrophages and viral virulence in swine / T. Lewis, L. Zsak, T.G. Burrage [et al.] // J. Virol. - 2000. - Vol. 74, № 3. - P. 1275-1285.
93. An African swine fever virus gene with similarity to the T-lymphocyte surface antigen CD2 mediates hemadsorption / M.V. Borca, G.F. Kutish, C.L. Afonso [et al.] // Virology. - 1994. - Vol. 199, № 2. - P. 463-468.
94. An african swine fever virus virulence-associated gene NL-S with similarity to the herpes simplex virus ICP34.5 gene / L. Zsak, Z. Lu, G.F. Kutish [et al.] // J. Virol. -1996. - Vol. 70, № 12. - P. 8865-8871.
95. An update on the epidemiology and pathology of African swine fever / J.M. Sanchez-Vizcaino, L. Mur, J.C. Gomez-Villamandos, L. Carrasco // J. Comp. Pathol.
- 2015. - Vol. 152, № 1. - P. 9-21.
96. Angulo, A. Comparison of the sequence of the gene encoding African swine fever virus attachment protein p12 from field virus isolates and viruses passaged in tissue culture / A. Angulo, E. Vinuela, A. Alcami // J. Virol. - 1992. - Vol. 66, № 6. - P. 3869-3872.
97. Angulo, A. Inhibition of African swine fever virus binding and infectivity by purified recombinant virus attachment protein p12 / A. Angulo, E. Vinuela, A. Alcami // J. Virol. - 1993. - Vol. 67, № 9. - P. 5463-5471.
98. Apoptosis induced in an early step of African swine virus entry into Vero cell does not require virus replication / A.L. Carrascosa, M.J. Bustos, M.L. Nogal [et al.] // J. Virol. - 2002. - Vol. 294. - P. 372-382.
99. Awadalla, P. The evolutionary genomics of pathogen recombination / P. Awadalla // Nat. Rev. Genet. - 2003. - Vol. 4, № 1. - P. 50-60.
100. BA71ACD2: A new recombinant live attenuated African swine fever virus with cross-protective capabilities / P.L. Monteagudo, A. Lacasta, E. Lopez [et al.] // J. Virol.
- 2017. - Vol. 91, № 21. - P. e01058-17.
101. Bastos, A.D.S. African swine fever (Chapter 50) / A.D.S. Bastos, F.O. Fasina, D.P. King // Manual of Security Sensitive Microbes and Toxins, Edited by D. Liu. Taylor and Francis CRC Press, 2014. - P. 579-587.
102. Benedict, C.A. To kill or be killed: Viral evasion of apoptosis / C.A. Benedict, P.S. Norris, C.F. Ware // Nat. Immunol. - 2002. - Vol. 3. - P. 1013-1018.
103. Biological characterization of African swine fever virus genotype II strains from north-eastern Estonia in European wild boar / I. Nurmoja, A. Petrov, C. Breidenstein [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2017. - Vol. 64, № 6. - P. 2034-2041.
104. Blome, S. Pathogenesis of African swine fever in domestic pigs and European wild boar / S. Blome, C. Gabriel, M. Beer // Virus Res. - 2013. - Vol. 173. - P. 122130.
105. Breese, S.S. Jr. Electron microscope observations of African swine fever virus in tissue culture cells / Jr. S.S. Breese, C.J. de Boer // Virology. - 1966. - Vol. 28. - P. 420-428.
106. Bugert, J.J. Poxvirus homologues of cellular genes / J.J. Bugert, G. Darai // Virus Genes. - 2000. - Vol. 21, № 1-2. - P. 111-133.
107. Carrascosa, A.L. Production and titration of African swine fever virus in porcine alveolar macrophages / A.L. Carrascosa, J.F. Santaren, E. Vinuela // J. Virol. Methods.
- 1982. - Vol. 3. - P. 303-310.
108. Cellular immunity in ASFV responses / H.H. Takamatsu, M.S. Denyer, A. Lacasta [et al.] // Virus Res. - 2013. - Vol. 173, № 1. - P. 110-121.
109. Cellular processes essential for African swine fever virus to infect and replicate in primary macrophages / S. Basta, H. Gerber, A. Schaub [et al.] // Vet. Microbiol. - 2010.
- Vol. 140, № 1-2. - P. 9-17.
110. Changes in macrophages in spleen and lymph nodes during acute African swine fever: expression of cytokines / F.J. Salguero, E. Ruiz-Villamor, M.J. Bautista [et al.] // Vet. Immunol. Immunop. - 2002. - Vol. 90, № 1-2. - P. 11-22.
111. Characterization of pathogenic and non-pathogenic African swine fever virus isolates from Ornithodoros erraticus inhabiting pig premises in Portugal / F.S. Boinas, G.H. Hutchings, L.K. Dixon, P.J. Wilkinson // J. Gen. Virol. - 2004. - Vol. 85, № 8. -P. 2177-2187.
112. Characterization of the interaction of African swine fever virus with monocytes and derived macrophage subsets / G. Franzoni, S.P. Graham, S.D. Giudici [et al.] // Vet. Microbiol. - 2017. - Vol. 198. - P. 88-98.
113. Cholesterol flux is required for endosomal progression of african swine fever virions during the initial establishment of infection / M.A. Cuesta-Geijo, M. Chiappi, I. Galindo [et al.] // J. Virol. - 2015. - Vol. 90, № 3. - P. 1534-1543.
114. Christensen, J.E. Co-ordinating innate and adaptive immunity to viral infection: mobility is the key / J.E. Christensen, A.R. Thomsen // APMIS. - 2009. - Vol. 117, № 5-6. - P. 338-355.
115. Coggins, L. Segregation of a non-hemadsorbing African swine fever virus in tissue culture / L. Coggins // Cornell Vet. - 1968. - Vol. 58, № 1. - P. 12-20.
116. Comparative analysis of African swine fever virus genotypes and serogroups / A. Malogolovkin, G. Burmakina, I. Titov [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 2015. - Vol. 21, №2. - P. 312-315.
117. Comparison of the genome sequences of non-pathogenic and pathogenic African swine fever virus isolates / D.A. Chapman, V. Tcherepanov, C. Upton, L.K. Dixon // J. Gen. Virol. - 2008. - Vol. 89, № 2. - P. 397-408.
118. Correia, S. Identification and utility of innate immune system evasion mechanisms of ASFV / S. Correia, S. Ventura, R.M. Parkhouse // Virus Res. - 2013. -Vol. 173, №1. - P. 87-100.
119. Crowther, J.R. Solid-phase radioimmunoassay techniques for the detection of African swine fever antigen and antibody / J.R. Crowther, R.C. Wardley, P.J. Wilkinson // J. Hyg. (Lond). - 1979. - Vol. 83, № 2. - P. 353-361.
120. Cytokine mRNA expression and pathological findings in pigs inoculated with African swine fever virus (E-70) deleted on A238L / F.J. Salguero, S. Gil, Y. Revilla [et al.] // Vet. Immunol. Immunopathol. - 2008. - Vol. 124, № 1-2. - P.107-119.
121. De Boer, C.J. Studies to determine neutralizing antibody in sera from animals recovered from African swine fever and laboratory animals inoculated with African virus with adjuvants / C.J. De Boer // Arch. Gesamte Virus forsch. - 1967. - Vol. 20, № 2. - P. 164-179.
122. De la Vega, I. Genetic variation and multigene families in African swine fever virus / I. De la Vega, E. Vinuela, R. Blasco // Virology. - 1990. - Vol. 179, № 1. - P. 234-246.
123. de Leon, P. Laboratory methods to study African swine fever virus / P. de Leon, M.J. Bustos, A.L. Carrascosa // Virus Res. - 2013. - Vol. 173. - P. 168-79.
124. Deletion of a CD2-like gene, 8-DR, from African swine fever virus affects viral infection in domestic swine / M.V. Borca, C. Carrillo, L. Zsak [et al.] // J. Virol. - 1998.
- Vol. 72, № 4. - P. 2881-2889.
125. Detection of African swine fever antibodies in experimental samples from the Russian Federation: Implications for control / L. Mur, A. Igolkin, A. Varentsova [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2016. - Vol. 63, № 5. - P. 436-440.
126. Development and characterization of two porcine monocyte-derived macrophage cell lines / C.G. Chitko-McKown, S.K. Chapes, L.C. Miller [et al.] // Results immunol.
- 2013. - Vol. 3. - P. 26-32.
127. Dixon, L.K. Genetic diversity of African swine fever virus isolates from soft ticks (Ornithodoros moubata) inhabiting warthog burrows in Zambia / L.K. Dixon, P.J. Wilkinson // J. Gen. Virol. - 1988. - Vol. 69, № 12. - P. 2981-2993.
128. Dobson, L. CCTOP: a Consensus Constrained TOPology prediction web server / L. Dobson, I. Remenyi, G.E. Tusnady // Nucleic Acids Res. - 2015. - Vol. 43, № 1. -P. 408-412.
129. Domains involved in calcineurin phosphatase inhibition and nuclear localisation in the African swine fever virus A238L protein / C.C. Abrams, D.A. Chapman, R. Silk [et al.] // Virology. - 2008. - Vol. 374, № 2. - P. 477-486.
130. Duplicated genes within the variable right end of the genome of a pathogenic isolate of African swine fever virus / S. Vydelingum, S.A. Baylis, C. Bristow [et al.] // J. Gen. Virol. - 1993. - Vol. 74, № 10. - P. 2125-2130.
131. Edgar, R.C. MUSCLE: multiple sequence alignment with high accuracy and high throughput / R.C. Edgar // Nucleic Acids Res. - 2004. - Vol. 32, № 5. - P. 1792-1797.
132. Effectiveness and practicality of control strategies for African swine fever: What do we really know? / C. Guinat, T. Vergne, C. Jurado-Diaz [et al.] // Vet. Rec. - 2016.
- Vol. 180, № 4. - P. 97.
133. Emergence of African swine fever in China, 2018 / X. Zhou, N. Li, Y. Luo [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2018. - Vol. 65, № 6. - P. 1482-1484.
134. Endosomal maturation, Rab7 GTPase and phosphoinositides in African swine fever virus entry / M.A. Cuesta-Geijo, I. Galindo, B. Hernaez [et al.] // PLoS One. -2012. - Vol. 7, № 11. - P. e48853.
135. Enhanced discrimination of African swine fever virus isolates through nucleotide sequencing of the p54, p72, and pB602L (CVR) genes / C. Gallardo, D.M. Mwaengo, J. M. Macharia [et al.] // Virus Genes. - 2009. - Vol. 38, № 1. - P. 85-95.
136. Entry of bunyaviruses into mammalian cells / P.Y. Lozach, R. Mancini, D. Bitto [et al.] // Cell Host Microbe. - 2010. - Vol. 7, № 6. - P. 488-499.
137. Escribano, J.M. Antibody-mediated neutralization of African swine fever virus: Myths and facts / J.M. Escribano, I. Galindo, C. Alonso // Virus Res. - 2013. - Vol. 173, № 1. - P. 101-109.
138. Esparza, I. Effect of interferon-alpha, interferon-gamma and tumour necrosis factor on African swine fever virus replication in porcine monocytes and macrophages / I. Esparza, J.C. Gonzalez, E. Vinuela // J. Gen. Virol. - 1988. - Vol. 69, № 12. - P. 2973-2980.
139. Evolution in Europe of African swine fever genotype II viruses from highly to moderately virulent / C. Gallardo, I. Nurmoja, A. Soler [et al.] // Vet. Microbiol. - 2018.
- Vol. 219. - P. 70-79.
140. Evolution of African swine fever virus genes related to evasion of host immune response / M. Fraczyk, G. Wozniakowski, A. Kowalczyk [et al.] // Vet. Microbiol. -2016. - Vol. 193. - P. 133-144.
141. Experimental transmission of African swine fever (ASF) low virulent isolate NH/P68 by surviving pigs / C. Gallardo, A. Soler, R. Nieto [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2016. - Vol. 62, № 6. - P. 612-622.
142. Expression of porcine cd163 on monocytes/macrophages correlates with permissiveness to African swine fever infection / C. Sanchez-Torres, P. Gomez-Puertas, M. Gomez-del-Moral [et al.] // Arch. Virol. - 2003. - Vol. 148, № 12. - P. 2307-2323.
143. Galindo, I. African Swine Fever Virus: A Review / I. Galindo, C. Alonso // Viruses. - 2017. - Vol. 9, № 5. - P. 103.
144. Gaps in African swine fever: Analysis and priorities / M. Arias, C. Jurado, C. Gallardo [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2018. - Vol. 65, № 1. - P. 235-247.
145. Genetic characterization of African swine fever virus isolates from soft ticks at the wildlife/domestic interface in Mozambique and identification of a novel genotype / C.J. Quembo, F. Jori, W. Vosloo, L. Heath // Transbound. Emerg. Dis. - 2018. - Vol. 65, № 2. - P. 420-431.
146. Genetic characterization of African swine fever viruses from a 2008 outbreak in Tanzania / G. Misinzo, J. Magambo, J. Masambu [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. -2011. - Vol. 58, № 1. - P. 86-92.
147. Genetic characterization of African swine fever viruses from outbreaks in southern Africa (1973-1999) / C.I. Boshoff, A.D. Bastos, L.J. Gerber, W. Vosloo // Vet. Microbiol. - 2007. - Vol. 121, № 1-2. - P. 45-55.
148. Genetic Characterization of Circulating African Swine Fever Viruses in Nigeria (2007-2015) / P.D. Luka, J.E. Achenbach, F.N. Mwiine [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2017. - Vol. 64, № 5. - P. 1598-1609.
149. Genetic manipulation of African swine fever virus: construction of recombinants expressing the b-galactosidase gene / J.M. Rodriguez, F. Almazan, E. Vinuela, J.F. Rodriguez // Virology. - 1992. - Vol. 188. - P. 67-76.
150. Genetic variation among African swine fever genotype II viruses, eastern and central Europe / C. Gallardo, J. Fernandez-Pinero, V. Pelayo [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 2014. - Vol. 20, № 9. - P. 1544-1547.
151. Genetically edited pigs lacking cd163 show no resistance following infection with the African swine fever virus isolate, Georgia 2007/1 / L. Popescu, N.N. Gaudreault, K.M. Whitworth [et al.] // Virology. - 2017. - Vol. 501. - P. 102-106.
152. Genomic Analysis of Highly Virulent Georgia 2007/1 Isolate of African Swine Fever Virus / D.G. Chapman, A.C. Darby, M. Da Silva [et al.] // Emerg. Infect. Dis. -2011. - Vol. 17, № 4. - P. 599-605.
153. Genotyping field strains of African swine fever virus by partial p72 gene characterization / A.D. Bastos, M.L. Penrith, C. Cruciere [et al.] // Arch. Virol. - 2003. - Vol. 148, № 4. - P. 693-706.
154. Goatley, L.C. Processing and localization of the african swine fever virus CD2v transmembrane protein / L.C. Goatley, L.K. Dixon // J. Virol. - 2011. Vol. 85, № 7. - P. 3294-305.
155. Granja, A.G. A238L inhibits NF-ATc2, NF-kappa B, and c-Jun activation through a novel mechanism involving protein kinase C-theta-mediated up-regulation of the amino-terminal transactivation domain of p300 / A.G. Granja, N.D. Perkins, Y. Revilla // J. Immunol. - 2008. - Vol. 180, № 4. - P. 2429-2442.
156. Green, M.R. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. - 4th ed. / M.R. Green, J. Sambrook. - New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2012. - P. 2096.
157. Hall, T.A. BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT / T.A. Hall // Nucleic Acids Symp. Ser. -1999. - Vol. 41. - P. 95-98.
158. Han, G.Z. Cross-species recombination in the haemagglutinin gene of canine distemper virus / G.Z. Han, X.P. Liu, S.S. Li // Virus Res. - 2008. - Vol. 136, № 1-2. -P. 198-201.
159. Hernaez, B. Dynamin and clathrin-dependent endocytosis in African swine fever virus entry / B. Hernaez, C. Alonso // J. Virol. - 2010. - Vol. 84, № 4. - P. 2100-2109.
160. Hernaez, B. Visualization of the African swine fever virus infection in living cells by incorporation into the virus particle of green fluorescent protein-p54 membrane protein chimera / B. Hernaez, J.M. Escribano, C. Alonso // Virology. - 2006. - Vol. 350, № 1. - P. 1-14.
161. Homologous recombination and its regulation / L. Krejci, V. Altmannova, M. Spirek, X. Zhao // Nucleic Acids Res. - 2012. - Vol. 40. - P. 5795-5818.
162. Homologous recombination shapes the genetic diversity and drives the evolution of African swine fever viruses / Z. Zhu, C.T. Xiao, Y. Fan [et al.] // Vet. Microbiol. -2019. - Vol. 236. - P. e108380.
163. Hurtado, C. The use of COS-1 cells for studies of field and laboratory African swine fever virus samples / C. Hurtado, M. J. Bustos, A. L. Carrascosa // J. Virol. Methods. - 2010. - Vol. 164. - P. 131-134.
164. ICTV Virus Taxonomy Profile: Asfarviridae / C. Alonso, M. Borca, L. Dixon [et al.] // J. Gen. Virol. - 2018. - Vol. 99, № 5. - P. 613-614.
165. Identification of a New Genotype of African Swine Fever Virus in Domestic Pigs from Ethiopia / J.E. Achenbach, C. Gallardo, E. Nieto-Pelegrin [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2016. - Vol. 64, № 5. - P. 1393-1404.
166. Immunization of African Indigenous Pigs with Attenuated Genotype I African Swine Fever Virus OURT88/3 Induces Protection Against Challenge with Virulent Strains of Genotype, I / L.K. Mulumba-Mfumu, L.C. Goatley, C. Saegerman [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2016. - Vol. 63, № 5. - P. 323-327.
167. In vivo depletion of CD8+ T lymphocytes abrogates protective immunity to African swine fever virus / C.A. Oura, M.S. Denyer, H. Takamatsu, R.M. Parkhouse // J. Gen. Virol. - 2005. - Vol. 86, № 9. - P. 2445-2450.
168. In vivo experimental studies of genotype II African swine fever virus (ASFV) isolates currently circulating in two Estonian counties / C. Gallardo, A. Soler, V. Delicado // Proc. 10th Annu Meet EPIZONE. - 2016. - P. 81.
169. Inhibition of a constitutive translation initiation factor 2a phosphatase, CReP, promotes survival of stressed cells / C. Jousse, S. Oyadomari, I. Novoa [et al.] // J. Cell Biol. - 2003. - Vol. 163, № 4. - P. 767-775.
170. Inhibition of African swine fever infection in the presence of immune sera in vivo and in vitro / F. Ruiz Gonzalvo, M.E. Carnero, C. Caballero, J. Martinez // Am. J. Vet. Res. - 1986. - Vol. 47, № 6. - P. 1249-1252.
171. Inhibition of apoptosis by the African swine fever virus Bcl-2 homologue: role of the BH1 domain / Y. Revilla, A. Cebrian, E. Baixeras [et al.] // Virology. - 1997. - Vol. 228, № 2. - P. 400-404.
172. Inhibition of nuclear factor kappaB activation by a virus-encoded IkappaB-like protein / Y. Revilla, M. Callejo, J.M. Rodriguez [et al.] // J. Biol. Chem. - 1998. - Vol. 273, № 9. - P. 5405-5411.
173. Intra-genotypic resolution of African swine fever viruses from an East African domestic pig cycle: a combined p72-CVR approach / B.A. Lubisi, A.D. Bastos, R.M. Dwarka, W. Vosloo // Virus Genes. - 2007. - Vol. 35, № 3. - P. 729-735.
174. Isolation of a non-haemadsorbing, non-cytopathic strain of African swine fever virus in Madagascar / M. Gonzague, F. Roger, A. Bastos [et al.] // Epidemiol. Infect. -2001. - Vol. 126, № 3. - P. 453-459.
175. Jin, M.S. Structures of TLR-ligand complexes / M.S. Jin, J.O. Lee // Curr. Opin. Immunol. - 2008. - Vol. 20. - P. 414-419.
176. Kass, E.M. Collaboration and competition between DNA double-strand break repair pathways / E.M. Kass, M. Jasin // FEBS Lett. - 2010. - Vol. 584. - P. 3703-3708.
177. Kawai, T. Toll-like receptors and their crosstalk with other innate receptors in infection and immunity / T. Kawai, S. Akira // Immunity. - 2011. - Vol. 34. - P. 637650.
178. Kinetics of African swine fever virus infection in Ornithodoros erraticus ticks / A.P. Basto, R.J. Nix, F. Boinas [et al.] // J. Gen. Virol. - 2006. - Vol. 87. - P. 18631871.
179. Lederberg, J. Gene recombination and linked segregations in Escherichia coli / J. Lederberg // Genetics. - 1947. - Vol. 32. - P. 505-525.
180. Live attenuated African swine fever viruses as ideal tools to dissect the mechanisms involved in viral pathogenesis and immune protection / A. Lacasta, P.L. Monteagudo, A. Jimenez-Marin [et al.] // Vet. Res. - 2015. - Vol. 20, № 46. - P. 135.
181. Lucas, A. Secreted immunomodulatory viral proteins as novel biotherapeutics / A. Lucas, G. McFadden // J. Immunol. - 2004. - Vol. 173, № 8. - P. 4765-4774.
182. Mapping and sequence of the gene encoding protein p17, a major African swine fever virus structural protein / C. Simon-Mateo, J.M. Freije, G. Andres [et al.] // Virology. - 1995. - Vol. 206, № 2. - P. 1140-1144.
183. Martin, C.L. Porcine immune responses to African swine fever virus (ASFV) infection / C.L. Martin, A.C. Leitao // Vet. Immunol. Immunopathol. - 1994. - Vol. 43, № 1-3. - P. 99-106.
184. Mazur-Panasiuk, N. The first complete genomic sequences of African swine fever virus isolated in Poland / N. Mazur-Panasiuk, G. Wozniakowski, K. Niemczuk // Scientific Reports. - 2019. - Vol. 9, № 1. - P. 4556.
185. McCarthy, A.J. Pathogen evolution and disease emergence in carnivores / A.J. McCarthy, M.A. Shaw, S.J. Goodman // Proc. Biol. Sci. - 2007. - Vol. 274, № 1629. -P. 3165-3174.
186. McFadden, G. Host-related immunomodulators encoded by poxviruses and herpesviruses / G. McFadden, P.M. Murphy // Curr. Opin. Microbiol. - 2000. - Vol. 3, № 4. - P. 371-378.
187. MEGA6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.0 / K. Tamura, G. Stecher, D. Peterson [et al.] // Mol. Biol. Evol. - 2013. - Vol. 30, № 12. - P. 27252729.
188. Michaud, V. Comprehensive phylogenetic reconstructions of African swine fever virus: proposal for a new classification and molecular dating of the virus / V. Michaud, T. Randriamparany, E. Albina // PLoS ONE. - 2013. - Vol. 8, № 7. - P. e69662.
189. Miskin, J.E. African swine fever virus protein A238L interacts with the cellular phosphatase calcineurin via a binding domain similar to that of NFAT / J.E. Miskin, C.C. Abrams, L.K. Dixon // J. Virol. - 2000. - Vol. 74, № 20. - P. 9412-9420.
190. Miya, M. Use of mitogenomic information in teleostean molecular phylogenetics: a tree-based exploration under the maximum-parsimony optimality criterion / M. Miya, M. Nishida // Mol. Phylogenet. Evol. - 2000. - Vol. 17, № 3. - P. 437-455.
191. Molecular characterization and phylogenetic study of African swine fever virus isolates from recent outbreaks in Uganda (2010-2013) / D.K. Atuhaire, M. Afayoa, S. Ochwo [et al.] // Virol. J. - 2013. - Vol. 10. - P. 247.
192. Molecular epidemiology of African swine fever in East Africa / B.A. Lubisi, A.D.S. Bastos, R.M. Dwarka, W. Vosloo // Arch. Virol. - 2005. - Vol. 150, № 12. - P. 2439-2452.
193. Molecular epidemiology of African swine fever virus studied by analysis of four variable genome regions / R.J. Nix, C. Gallardo, G. Hutchings [et al.] // Arch.Virol. -2006. - Vol. 151, № 12. - P. 2475-2494.
194. Molecular immunobiology of macrophages: Recent progress / S. Gordon, S. Clarke, D. Greaves, A. Doyle // Curr. Opin. Immunol. - 1995. - Vol. 7, № 1. - P. 2433.
195. Mononuclear phagocytic system: New classification of macrophages, monocytes and of their cell line / R. Van Furth, Z.A. Cohn, J.G. Hirsch [et al.] // Bull. World Health Organ. - 1972. - Vol. 47, № 5. - P. 651-658.
196. Montgomery, R.E. A form of swine fever occurring in British East Africa (Kenya Colony) / R.E. Montgomery // J. Comp. Pathol. - 1921. - P. 159-191.
197. Multigene families in African swine fever virus: Family 110 / J.M. Almendral, F. Almazan, R. Blasco, E. Vinuela // J. Virol. - 1990. - Vol. 64, № 5. - P. 2064-2072.
198. Multigene families in African swine fever virus: Family 360 / A. Gonzalez, V. Calvo, F. Almazan [et al.] // J. Virol. - 1990. - Vol. 64, № 5. - P. 2073-2081.
199. Nielsen, H. Predicting Secretory Proteins with SignalP / H. Nielsen // Methods Mol. Biol. - 2017. - Vol. 1611. - P. 59-73.
200. O'Neill, L.A. The family of five: TIR-domain containing adaptors in Toll-like receptor signalling / L.A. O'Neill, A.G. Bowie // Nat. Rev. Immunol. - 2007. - Vol. 7. - P. 353-364.
201. Old world arenaviruses enter the host cell via the multivesicular body and depend on the endosomal sorting complex required for transport / G. Pasqual, J.M. Rojek, M. Masin [et al.] // PLoS Pathog. - 2011. - Vol. 7, № 9. - P. e1002232.
202. Oura, C.A. African swine fever: a disease characterized by apoptosis / C.A. Oura, P.P. Powell, R.M. Parkhouse // J. Gen. Virol. - 1998. - Vol. 79, № 6. - P. 1427-1438.
203. Oura, C.A. Virological diagnosis of African swine fever-comparative study of available tests / C.A. Oura, L. Edwards, C.A. Batten // Virus. Res. - 2013. - Vol. 173, № 1. - P. 150-158.
204. Pan, I.C. Virulence in African swine fever: Its measurement and implications / I.C. Pan, W.R. Hess // Am. J. Vet. Res. - 1984. - Vol. 45, № 2. - P. 361-366.
205. Passively transferred African swine fever virus antibodies protect swine against lethal infection / D.V. Onisk, M.V. Borca, G. Kutish [et al.] // Virology. - 1994. - Vol. 198, № 1. - P. 350-354.
206. Pathological evaluation of pigs immunised with the low virulent African swine fever virus OURT88/3 using different routes and doses / P. Sanchez-Cordon, D. Chapman, T. Jabbar [et al.] // Antiviral Res. - 2017. - Vol. 138. - P. 1-8.
207. Pathology of African swine fever: The role of monocyte-macrophage / J.C. Gomez-Villamandos, M.J. Bautista, P.J. Sanchez-Cordon, L. Carrasco // Virus Res. -2013. - Vol. 173, № 1. - P. 140-149.
208. Penrith, M.L. Infectious Diseases of Livestock with Special Reference to Southern Africa / M.L. Penrith, G.R. Thompson, A.D.S. Bastos // In: Coetzer, J.A.W., Tustin, R.C. (Eds.). 2nd ed. Oxford Univ. Press. - 2004. - P. 1087-1119.
209. Phenotyping and susceptibility of established porcine cells lines to African Swine Fever Virus infection and viral production / E.G. Sanchez, E. Riera, M. Nogal [et al.] // Sci Rep. - 2017. - Vol.7, № 1. - P.10369.
210. Phylogenomic analysis of 11 complete African swine fever virus genome sequences / E.P. de Villiers, C. Gallardo, M. Arias [et al.] // Virology. - 2010. - Vol. 400, № 1. - P. 128-136.
211. Plowright, W. African swine fever virus in ticks (Ornithodoros moubata, murray) collected from animal burrows in Tanzania / W. Plowright, J. Parker, M.A. Peirce // Nature. - 1969. - Vol. 221, № 5185. - P. 1071-1073.
212. Portugal, R. Novel approach for the generation of recombinant African swine fever virus from a field isolate using GFP expression and 5-bromo-2'-deoxyuridine selection / R. Portugal, C. Martins, G.M. Keil // J. Virol. Methods. -2012. - Vol. 183, № 1. - P. 86-89.
213. Portugal, R.S. Characterization of African swine fever virus IAP homologue expression in porcine macrophages infected with different virulence isolates / R.S. Portugal, A. Leitao, C. Martins // Vet. Microbiol. - 2009. - Vol. 139, № 1-2. - P. 140146.
214. Powell, P.P. An IkappaB homolog encoded by African swine fever virus provides a novel mechanism for downregulation of proinflammatory cytokine responses in host macrophages / P.P. Powell, L.K. Dixon, R.M. Parkhouse // J. Virol. - 1996. - Vol. 70, № 12. - P. 8527-8533.
215. Proinflammatory cytokines induce lymphocyte apoptosis in acute African swine fever infection / F.J. Salguero, P.J. Sanchez-Cordon, A. Nunez [et al.] // J. Comp. Pathol. - 2005. - Vol. 132, № 4. - P. 289-302.
216. Protection of European domestic pigs from virulent African isolates of African swine fever virus by experimental immunization / K. King, D. Chapman, J.M. Argilaguet [et al.] // Vaccine. - 2011. - Vol. 29, № 28. - P. 4593-4600.
217. PVS: a web server for protein sequence variability analysis tuned to facilitate conserved epitope discovery / M. Garcia-Boronat, C.M. Diez-Rivero, E.L. Reinherz, P.A. Reche // Nucleic Acids Res. - 2008. - Vol. 36. - P. 35-41.
218. Recombination in alphaherpesviruses / E. Thiry, F. Meurens, B. Muylkens [et al.] // Rev. Med. Virol. - 2005. - Vol. 15, № 2. - P. 89-103.
219. Reed, L.J. A simple method of estimating fifty percent endpoints / L.J. Reed, H. Muench // Am. J. Hyg. - 1938. - Vol. 27, №20. - P. 493-497
220. Reis, A.L. Unraveling the armor of a killer: Evasion of host defenses by African swine fever virus / A.L. Reis, C. Netherton, L. Dixon // J. Virol. - 2017. - Vol. 91, № 6. - P. e02338-16.
221. Replication of African swine fever virus DNA in infected cells / G. Rojo, R. Garcia-Beato, E. Vinuela [et al.] // Virology. - 1999. - Vol. 257, № 2. - P. 524-536.
222. Rock, D.L. Challenges for African swine fever vaccine development -"...perhaps the end of the beginning." / D.L. Rock // Vet. Microbiol. - 2017. - Vol. 206. - P. 52-58.
223. Rodriguez, J.M. African swine fever virus transcription / J.M. Rodriguez, M.L. Salas // Virus Res. - 2013. - Vol. 173, № 1. - P. 15-28.
224. Ruiz-Gonzalvo, F. Functional and immunological properties of the baculovirus-expressed hemagglutinin of African swine fever virus / F. Ruiz-Gonzalvo, F. Rodriguez, J.M. Escribano // Virology. - 1996. - Vol. 218, № 1. - P. 285-289.
225. Salas, M.L. African swine fever virus morphogenesis / M.L. Salas, G. Andres // Virus Res. - 2013. - Vol. 173, №1. - P. 29-41.
226. Sanchez-Vizcaino, J.M. African swine fever (ASF): Five years around Europe / J.M. Sanchez-Vizcaino, L. Mur, B. Martinez-Lopez // Vet. Microbiol. - 2013. - Vol. 165. - P. 45-50.
227. Sanchez-Vizcaino, J.M. African Swine Fever. In: Straw, B., D'Allaire, S., Mengeling, W., Taylor, D., (eds). Diseases of Swine. 9th edition. USA: Iowa State University; 2006: 291-298.
228. Schlafer, D.H. African swine fever in neonatal pigs: passively acquired protection from colostrum or serum of recovered pigs / D.H. Schlafer, C.A. Mebus, J.W. McVicar // Am. J. Vet. Res. - 1984. - Vol. 45, № 7. - P. 1367-1372.
229. Sensitivity of African swine fever virus to type I interferon is linked to genes within multigene families 360 and 505 / J.P. Golding, L. Goatley, S. Goodbourn [et al.] // Virology. - 2016. - Vol. 493. - P. 154-161.
230. Simultaneous deletion of the 9GL and UK genes from the African swine fever virus Georgia 2007 isolate offers increased safety and protection against homologous challenge / V. O'Donnell, G.R. Risatti, L.G. Holinka [et al.] // J. Virol. - 2016. - Vol. 91, № 1. - P. e01760-16.
231. Small Rho GTPases and cholesterol biosynthetic pathway intermediates in African swine fever virus infection / J.I. Quetglas, B. Hernaez, I. Galindo [et al.] // J. Virol. - 2012. - Vol. 86, № 3. - P. 1758-1767.
232. Stenmark, H. Rab GTPases as coordinators of vesicle traffic / H. Stenmark // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. - 2009. - Vol. 10, № 8. - P. 513-525.
233. The African swine fever virus DP71L protein recruits the protein phosphatase 1 catalytic subunit to dephosphorylate eIF2 alpha and inhibits CHOP induction but is dispensable for these activities during virus infection / F. Zhang, A. Moon, K. Childs [et al.] // J. Virol. - 2010. - Vol. 84. - P. 10681-10689.
234. The African swine fever virus dynein-binding protein p54 induces infected cell apoptosis / B. Hernaez, G. Díaz-Gil, M. García-Gallo [et al.] // FEBS Lett. - 2004. -Vol. 569, № 1-3. - P. 224-228.
235. The African swine fever virus IAP homolog is a late structural polypeptide / M.R. Chacon, F. Almazan, M.L. Nogal [et al.] // Virology. - 1995. - Vol. 214. - P. 670-674.
236. The African swine fever virus lectin EP153R modulates the surface membrane expression of MHC class I antigens / C. Hurtado, M.J. Bustos, A.G. Granja [et al.] // Arch Virol. - 2011. - Vol.156, № 2. - P. 219-234.
237. The African swine fever virus proteins p54 and p30 are involved in two distinct steps of virus attachment and both contribute to the antibody-mediated protective immune response / P. Gomez-Puertas, F. Rodriguez, J.M. Oviedo [et al.] // Virology. -1998. - Vol. 243, № 2. - P. 461-471.
238. The African swine fever virus thymidine kinase gene is required for efficient replication in swine macrophages and for virulence in swine / D.M. Moore, L. Zsak, J.G. Neilan [et al.] // J. Virol. - 1998. - Vol. 72, № 12. - P. 10310-10315.
239. The ankyrin repeat as molecular architecture for protein recognition / L.K. Mosavi, T.J. Cammett, D.C. Desrosiers [et al.] // Protein Sci. - 2004. - Vol. 13, № 6. -
P. 1435-1448.
240. The ATF6 branch of unfolded protein response and apoptosis are activated to promote African swine fever virus infection / I. Galindo, B. Hernaez, R. Munoz-Moreno [et al.] // Cell Death Dis. - 2012. - Vol. 3. - P. e341.
241. The CD2v protein enhances African swine fever virus replication in the tick vector, Ornithodoros erraticus / R.J. Rowlands, M.M. Duarte, F. Boinas [et al.] // Virology. - 2009. - Vol. 393, №2. - P. 319-328.
242. The cellular immune recognition of proteins expressed by an African swine fever virus random genomic library / J.S. Jenson, A. Childerstone, H. Takamatsu [et al.] // J. Immunol. Methods. - 2000. - Vol. 242, №1-2. - P. 33-42.
243. The C-type lectin homologue gene (EP153R) of African swine fever virus inhibits apoptosis both in virus infection and in heterologous expression / C. Hurtado, A.G. Granja, M.J. Bustos [et al.] // Virology. - 2004 - Vol. 326. - P. 160-170.
244. The Ep152R ORF of African swine fever virus strain Georgia encodes for an essential gene that interacts with host protein BAG6 / M.V. Borca, V. O'Donnell, L.G. Holinka [et al.] // Virus Res. - 2016. - Vol. 223. - P. 181-189.
245. The L83L ORF of African swine fever virus strain Georgia encodes for a nonessential gene that interacts with the host protein IL-1 beta / M.V. Borca, V. ODonnell, L.G. Holinka [et al.] // Virus Res. - 2018. - Vol. 249. - P. 116-123.
246. The MyD116 African swine fever virus homologue interacts with the catalytic subunit of protein phosphatase 1 and activates its phosphatase activity / J. Rivera, C. Abrams, B. Hernaez [et al.] // J. Virol. - 2007. - Vol. 81, № 6. - P. 2923-2929.
247. The non-haemadsorbing African swine fever virus isolate ASFV/NH/P68 provides a model for defining the protective anti-virus immune response / A. Leitao, C. Cartaxeiro, R. Coelho [et al.] // J. Gen. Virol. - 2001. - Vol. 82, № 3. - P. 513-523.
248. The role of antibody in protection against African swine fever virus / R.C. Wardley, S.G. Norley, P.J. Wilkinson, S. Williams // Vet. Immunol. Immunop. - 1985. - Vol. 9, № 3. - P. 201-212.
249. The viral protein A238L inhibits cyclooxygenase-2 expression through a nuclear factor of activated T cell-dependent transactivation pathway / A.G. Granja, M.L. Nogal, C. Hurtado [et al.] // J. Biol. Chem. - 2004. - Vol. 279. - P. 53736-53746.
250. The viral protein A238L inhibits TNF-{alpha} expression through a CBP/p300 transcriptional coactivators pathway / A.G. Granja, M.L. Nogal, C. Hurtado [et al.] // J. Immunol. - 2006. - Vol. 176. - P. 451-462.
251. Thirty-five-year presence of African swine fever in Sardinia: History evolution and risk factors for disease maintenance / L. Mur, M. Atzeni, B. Martinez-Lopez [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2016. - Vol. 63, № 2. - P. 165-177.
252. Titration of African swine fever (ASF) virus / L. Enjuanes, A.L. Carrascosa, M.A. Moreno, E. Vinuela // J. Gen. Virol. - 1976. - Vol. 32. - P. 471-477.
253. Transmission of African swine fever virus from infected pigs by direct contact and aerosol routes / A.S. Olesen, L. Lohse, A. Boklund [et al.] // Vet. Microbiol. -2017. - Vol. 211. - P.92-102.
254. Turvey, S.E. Innate immunity / S.E. Turvey, D.H. Broide // J. Allergy Clin. Immunol. - 2010. - Vol. 125, № 2. - P. 24-32.
255. Two novel multigene families, 530 and 300, in the terminal variable regions of African swine fever virus genome / T. Yozawa, G.F. Kutish, C.L. Afonso [et al.] // Virology. - 1994. - Vol. 202, № 2. - P. 997-1002.
256. Universal trees based on large combined protein sequence data sets / J.R. Brown, C.J. Douady, M.J. Italia [et al.] // Nat .Genet. - 2001. - Vol. 28, № 3. - P. 281-285.
257. Variable and constant regions in African swine fever virus DNA // R. Blasco, M. Aguero, J.M. Almendral, E. Vinuela // Virology. - 1989. - Vol. 168, № 2. - P. 330-338.
258. Variable regions on the genome of Malawi isolates of African swine fever virus / K.J. Sumption, G.H. Hutchings, P.J. Wilkinson, L.K. Dixon // J. Gen. Virol. - 1990. -Vol. 71, № 10. - P. 2331-2340.
259. Vimentin rearrangement during African swine fever virus infection involves retrograde transport along microtubules and phosphorylation of vimentin by calcium calmodulin kinase II / S. Stefanovic, M. Windsor, K.I. Nagata [et al.] // J. Virol. - 2005. - Vol. 79, № 18. - P. 11766-11775.
260. Virus-specific cellular blastogenesis and interleukin-2 production in swine after recovery from African swine fever / T. Scholl, J.K. Lunney, C.A. Mebus [et al.] // Am. J. Vet. Res. - 1989. - Vol. 50, № 10. - P. 1781-1786.
261. Wang, T. African swine fever: an unprecedented disaster and challenge to China / T. Wang, Y. Sun, H.J. Qiu // Infect. Dis. Poverty. - 2018. - Vol. 7, № 1. - P. 111.
262. Weller, S.K. Recombination promoted by DNA viruses: phage X to herpes simplex virus / S.K. Weller, J.A. Sawitzke // Annu. Rev. Microbiol. - 2014. - Vol. 68. -P. 237-258.
263. Zakaryan, H. African swine fever virus: current state and future perspectives in vaccine and antiviral research / H. Zakaryan, Y. Revilla // Vet. Microbiol. - 2016. -Vol. 185. - P. 15-19.
264. Zsak, L. Regulation of apoptosis in African swine fever virus-infected macrophages / L. Zsak, J.G. Neilan // Scientific World Journal. - 2002. - Vol. 2. - P. 1186-1195.
8. ПРИЛОЖЕНИЯ
Приложение 1
КОПИЯ
УТВЕРЖДАЮ
ктор ФГБНУ ФИЦВиМ 3 Д.В. Колбасов и^илс 2019 г.
АКТ
комиссионной проверки биологических свойств рекомбинантного штамма Волгоград/14с ДА238Ь вируса африканской чумы свиней (АЧС)
Комиссия в составе: председателя - заведующего лаборатории «Диагностики и мониторинга» Егоровой И.Ю., членов комиссии: заведующего Научно-экспериментальным отделом Живодерова С.П., младшего научного сотрудника отдела Государственной коллекции микроорганизмов Иматдинова А.Р., заведующего лабораторией «Молекулярной вирусологии» Мима К.А. в соответствии с распоряжением директора № Ц_от 22.04.19 г. и утвержденной программой провели на базе лабораторий «Диагностики и мониторинга» и «Молекулярной вирусологии» ФГБНУ ФИ1 ЩиМ проверку соответствия биологических свойств лиофилизировапного рекомбинантного штамма Волгоград/14с ДА238Ь вируса африканской чумы свиней (АЧС) паспортным данным по следующим показателям:
- отсутствие контаминации бактериальной, грибной микрофлорой и микоплазмамн;
- отсутствие исходного родительского типа вируса АЧС «Волгоград/14с»;
• инфекционная активность;
- сероти товая принадлежность.
В результате проведенных комиссионных испытаний получены следующие характеристики лиофилизиро ванного рекомбинантного штамма
Волгоград'14с ДА238Г:
1. Штамм Волгоград/14с ДА238Ь вируса АЧС не контаминирован бактериальной, грибной микрофлорой и микоплазмами. Высевы штамма на жидких и плотных питательных средах (МПА, МПБ, среда Китта-Тароцци, агар и бульон Сабуро, среда для культивирования микоплазм) оставались стерильными в течение всего срока наблюдения (протокол №1 и №2).
2. Отсутствие исходного родительского типа вируса Волгоград/14с в рекомбгнантном вирусе Волгоград/14с ДА238Ь подтверждено ПЦР со специфическими олигонуклеотидными праймерами, фланкирующими фрагмент сна А238Ь вируса АЧС, что свидетельствует о чистоте вирусного материала (протокол №¡3).
Копия верна
и ректор ФГБНУ ФИЦВиМ
Д.В. Колбасов
Инфекционная активность штамма Волгоград/14с АА238Г вируса АЧС в первичной культуре клеток макрофагов свиней по результатам 3 титрований составила 4,5 1ц 1АЕ50/см' и 4,5 1ц ТЦД 50/см' в перевиваемой культуре клеток СС)8-1 (протокол №4).
4. Рекомбинантный штамм Волгоград 14с АА238Ь вируса АЧС по результатам секвенирования и биоинформатичеекого анализа принадлежит к 8 сероимму нотипу.
Заключение
Лиофилизированный рекомбинантный штамм Волгоград/14с АА238Ь вируса АЧС от 12.12.2018 г., прошел комиссионные испытания по показателя и на отсутствие контаминации бактериальной, грибной микрофлорой и микоплазмами, отсутствию исходного родительского типа вируса АЧС «Волгоград/14с», инфекционной активности, определению серотиповсй принадлежности и соответствует паспортным данным.
Предложение
Лиофилизированный рекомбинантный штамм Волгоград/Не АА238Г вируса АЧС от 12.12.2018 г., депонировать в Государственную коллекцию микроорганизмов ФГЪНУ ФИЦВиМ и заложить в количестве 30 ампул при температуре не выше минус 40°С сроком на 10 лет, с целью его послсдуюцего использования при проведении НМОКР.
Председатель комиссии:
</
И.Ю. Егорова
Члены комиссии:
С.П. Живодеров А.Р. Иматдипов К.А. Мима
I [риложен 1я на «Р_листах.
1, Паспорт на рекомбинантный штамм Волгоград/Не АА238Г вируса АЧС.
2. Протоколы испытаний (1-5).
Копия верна
Директор ФГБНУ ФИЦВиМ
_Д.В. Колбасов
КОПИЯ
Приложение 2
ш1.Л*ЪШ
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии» (ФГБНУ ФИЦВиМ) 601125, Владимирская область, п. Вольгинский, ул. Академика Бакулова, стр. 1
ПАСПОРТ
1 Наименование возбудителя, его таксономия Вирус африканской чумы свиней (АЧС), сем. Asfamiridae, род Asflvirus
2 Название штамма, его № или условное обозначение Волгоград/14с AA238L
3 Кем, когда и от какого животного получен штамм Получен во ФГБНУ ФИЦВиМ в 2018 г. Нефедьевой М.В., Малоголовкиным A.C., Титовым И.А., Моргуновым С.Ю. методом гомологичной рекомбинации путем удаления гена A238L (5EL) на основе вирулентного штамма Волгоград/Мс в культуре клеток COS-1.
4 История пассирования Прошел б пассажей на культуре клеток COS-1.
5 Из какого учреждения получен данный штамм и дата его получения В лаборатории Молекулярной вирусологии ФГБНУ ФИЦВиМ 24.10.2018.
6 Производственный штамм в данное время или музейный Музейный
7 Примененный способ стабилизации и хранения штамма в учреждении Лиофилизированная вируссодержащая культуральная жидкость с добавлением в качестве стабилизатора фетальной бычьей сыворотки (FBS) в соотношении 1:1. Хранить при температуре минус 40 'С.
8 Периодичность освежения штамма Один раз в 10 лет, при активности выше 4,0 lg ГАЕ 50/см3 срок хранения продлевается.
9 Серологические свойства 8 сероиммунотип
10 Патогенность для лабораторных, с.-х. животных и КЭ Не определена
И Чувствительность культур клеток Размножается в первичной культуре клеток макрофагов свиней и перевиваемой культуре клеток COS-1 в титре до 5,0 lg ГАЕ50/см3.
12 Предназначенное применение, информация о коммутативности образца (при наличии) Для изучения иммунобиологических свойств вируса АЧС.
13 Дополнительные сведения о штамме Содержит ген EGFP. Не контаминнрован бактериальной и грибной микрофлорой. Лиофилизирован 12.12.2018 г., 1,0 см3 в ампуле. Активность лиоф. материала - 4,5 Ir ГАЕ50/см3.
Паспорт составили: Начальник ОГКМ
Гл. научный сотрудник
Младший научный сотрудник лаб. Молекулярной вирусологии
B.M. Балышев A.C. Малоголовкин " M.B. Нефедьева
Копия верна
Директор ФГЫ1У ФИЦВиМ
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.