Судебно-химическое исследование нитробензола и его основных метаболитов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат фармацевтических наук Малыхина, Ольга Ивановна

• Малыхина, Ольга Ивановна
• кандидат фармацевтических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Малыхина, Ольга Ивановна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Физические свойства нитробензола и его основных метаболитов.

1.2. Получение объектов исследования и их применение.

1.3. Токсикологическая характеристика.

1.4. Идентификация объектов исследования.

1.5. Количественное определение.

1.6. Изолирование и очистка рассматриваемых соединений.

1.7. Метаболизм, распределение в теплокровных организмах и сохраняемость в трупном материале.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. ИДЕНТИФИКАЦИЯ НИТРОБЕНЗОЛА И ЕГО ОСНОВНЫХ

МЕТАБОЛИТОВ.

2.1. Идентификация хроматографическими методами.

2.1.1. Идентификация в тонких слоях нормальнофазного сорбента.

2.1.2. Идентификация методом ВЭЖХ с применением нормальнофазного сорбента.

2.2. Идентификация спектральными методами.

2.2.1. Электронная спектроскопия.

2.2.2. Колебательная спектроскопия.

2.3. Идентификация с помощью хромогенных реакций.

2.3.1. Идентификация нитробензола по реакции с гидроксидом натрия в среде ДМФА-вода (98:2).

2.3.2. Идентификация о- и ж-нитрофенола по реакции с гидроксидом натрия в среде ДМФА-вода (99:1).

2.3.3. Идентификация и-нитрофенола по реакции с гидроксидом натрия в водной среде.

ВЫВОДЫ КО ВТОРОЙ ГЛАВЕ.

Глава 3. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРОБЕНЗОЛА И

РЯДА ЕГО МЕТАБОЛИТОВ.

3.1. Определение спектрофотометрическим методом.

3.1.1. Определение на основе собственного поглощения.

3.1.2. Определение на основе реакции с гидроксидом натрия.

3.1.2.1. Определение нитробензола в среде ДМФА-вода (98:2).

3.1.2.2. Определение о- и л/-питрофенола в среде ДМФА-вода (99:1).

3.1.2.3. Определение «-нитрофенола в водной среде.

3.2. Определение методом ВЭЖХ с применением. нормальнофазного сорбента.

ВЫВОДЫ К ТРЕТЬЕЙ ГЛАВЕ.

Глава 4. ОСОБЕННОСТИ ОЧИСТКИ ИССЛЕДУЕМЫХ

СОЕДИНЕНИЙ.

4.1. Экстракционное выделение из водных растворов.

4.2. Очистка хроматографическими методами и особенности хроматографической активности рассматриваемых соединений.

4.2.1. Очистка в тонком слое сорбента.

4.2.2. Очистка методом колоночной хроматографии.

4.3. Оценка степени очистки извлечений из биологического материала в контрольных опытах.

4.3.1. Оценка эффективности очистки ацетоновых и толуольных извлечений методом тонкослойной хроматографии.

4.3.2. Оценка эффективности очистки ацетоновых извлечений методом тонкослойной хроматографии после предварительной экстракции.

4.3.3. Оценка эффективности очистки ацетоновых и толуольных извлечений методом колоночной хроматографии.

4.3.4. Оценка эффективности очистки ацетоновых извлечений методом колоночной хроматографии после предварительной экстракции.

4.4. Применение ИК-спектрофотометрии для оценки степени чистоты нитробензола и его основных метаболитов, изолированных из биоматериала и очищенных методами экстракции и колоночной хроматографии.

ВЫВОДЫ К ЧЕТВЕРТОЙ ГЛАВЕ.

Глава 5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРОБЕНЗОЛА И ЕГО ОСНОВНЫХ

МЕТАБОЛИТОВ В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ.

5.1. Сравнительное изолирование исследуемых соединений из биологической ткани различными изолирующими агентами.

5.2. Исследование особенностей извлечения нитробензола и его основных метаболитов оптимальными изолирующими агентами.

5.2.1. Изолирование нитробензола толуолом в зависимости от ряда факторов.

5.2.1.1. Исследование зависимости степени извлечения нитробензола от объема изолирующего агента и кратности изолирования.

5.2.1.2. Изучение зависимости степени извлечения нитробензола от продолжительности контакта изолирующей жидкости и биологического материала.

5.2.1.3. Изучение зависимости степени извлечения нитробензола от соотношения количества биоматериала и отравляющего вещества.

5.2.2. Методика определения нитробензола в ткани трупных органов (печени) при изолировании толуолом.

5.2.3. Методика определения нитробензола в биологических жидкостях при изолировании толуолом.

5.2.4. Методика определения нитробензола в гнилостно-измененном материале.

5.2.5. Изолирование основных метаболитов нитробензола ацетоном в зависимости от ряда факторов.

5.2.5.1. Исследование зависимости степени извлечения основных метаболитов нитробензола от объема изолирующего агента и кратности изолирования.

5.2.5.2. Изучение зависимости степени извлечения основных метаболитов нитробензола от продолжительности контакта изолирующей жидкости и биоматериала.

5.2.5.3. Изучение зависимости степени извлечения основных метаболитов нитробензола от соотношения количества биоматериала и отравляющего вещества.

5.2.6. Методика определения основных метаболитов нитробензола в ткани трупных органов при изолировании ацетоном.

5.2.7. Методика определения основных метаболитов нитробензола в биологических жидкостях при изолировании ацетоном.

5.2.8. Методика определения основных метаболитов нитробензола в гнилостно-измененном материале.

ВЫВОДЫ К ПЯТОЙ ГЛАВЕ.

Глава 6. ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ

НИТРОБЕНЗОЛА В ОРГАНИЗМЕ ТЕПЛОКРОВНЫХ И СОХРАНЯЕМОСТЬ РЯДА ИССЛЕДУЕМЫХ СОЕДИНЕНИЙ В ТРУПНОМ МАТЕРИАЛЕ.

6.1. Особенности распределения нитробензола в организме кролика.

6.2. Сохраняемость объектов исследования в трупном материале.

ВЫВОДЫ К ШЕСТОЙ ГЛАВЕ.

ОБЩАЯ СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО

МАТЕРИАЛА ПРИ ОТРАВЛЕНИИ НИТРОБЕНЗОЛОМ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Судебно-химическое исследование нитробензола и его основных метаболитов»

Актуальность темы. Нитро- и аминопроизводные бензола широко используются в синтезе органических красителей и некоторых сельскохозяйственных ядохимикатов.

В клинике интоксикаций данными соединениями характерными являются поражения нервной системы, красной крови с образованием метгемоглоби-на, развитие гемолитической анемии, гепатотоксическое и пефротоксическое действие.

Одним из представителей данной группы соединений является нитробензол. Известно применение нитробензола в качестве полупродукта органических синтезов, ароматизатора, реагента в аналитической практике, растворителя. Он обладает высокой токсичностью по отношению к теплокровным животным и человеку. Описаны случаи отравления нитробензолом, в том числе с летальным исходом. Отравления могут происходить при непосредственном контакте с веществом в процессе производства, хранения, применения, вследствие аварии, в условиях загрязнения объектов окружающей среды отходами химических производств, выбросами в атмосферу и сточными водами предприятий.

Летальная доза нитробензола для человека составляет 10 мг/кг, но смертельный исход может наступить уже от приема 1-2 мл или нескольких капель вещества.

Широкое применение нитробензола, его токсичность и токсичность ряда его основных метаболитов, наличие случаев смертельного отравления обусловливает необходимость изучения данного вещества в судебно-химическом отношении.

До настоящего времени условия изолирования нитробензола и его метаболитов из биологического материала, их очистки, идентификации и количественного определения недостаточно изучены. Отсутствует методика определения нитробензола при наличии его метаболитов в биологическом материале. В доступной литературе практически отсутствуют данные по сохраняемости нитробензола и его метаболитов в трупном материале в зависимости от ряда внешних факторов.

Исходя из вышеизложенного, разработка методики судебно-химического исследования нитробензола и его основных метаболитов является актуальной.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей диссертационной работы являлась разработка методики судебно-химического исследования нитробензола и его основных метаболитов: анилина, о-, м-, я-нитрофенолов, м-нитроанилина, о-, м-, я-аминофенолов, «-нитрокатехола. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Определить особенности хроматографического поведения нитробензола и его основных метаболитов в тонких слоях и колонках сорбентов, выявить оптимальные условия идентификации и количественного определения объектов исследования методами ТСХ и ВЭЖХ;

2. Изучить особенности взаимодействия исследуемых соединений с рядом цветореагентов, показать возможность применения отдельных реакций в условиях анализа биологического материала;

3. Провести изучение возможности применения различных видов экстракционных процессов для концентрирования и очистки объектов исследования;

4. Исследовать закономерности изолирования объектов исследования отдельными классами изолирующих жидкостей из биологического материала, разработать схему очистки извлечений;

5. Изучить особенности распределения нитробензола в организме теплокровных животных;

6. Определить сроки сохраняемости объектов исследования в трупном материале и исследовать зависимость скорости разложения анализируемых веществ в трупном материале от продолжительности и температурного режима сохранения.

Научная новизна исследований. Изучены особенности хроматографиче-ского поведения нитробензола и его основных метаболитов в сорбентах с гид-роксилированной поверхностью при использовании различных подвижных фаз. Расчитаны значения ряда величин, характеризующих хроматографическую подвижность веществ. Определены оптимальные условия хроматографическо-го рвзделения объектов исследования в тонких слоях и колонках сорбентов.

Разработаны унифицированные, хорошо воспроизводимые, высокочувствительные методики обнаружения и количественного определения нитробензола и его основных метаболитов.

Изучены особенности светопоглощения рассматриваемыми соединениями в ультрафиолетовой, видимой и инфракрасной областях спектра, рассчитан ряд основных оптических характеристик электронных спектров.

Определены оптимальные условия экстрагирования нитробензола и его основных метаболитов из водных растворов с учетом рН среды, насыщения экстрагентов водой и природы органических растворителей.

Впервые, применяя сочетание методов экстракции и хроматографической очистки, разработаны оригинальные методики определения объектов исследования в ткани трупных органов и биожидкостях, которые могут быть использованы как для исследования свежего, так и гнилостно-измененного трупного материала.

С помощью разработанных методов изучены особенности распределения нитробензола в органах и биологических жидкостях теплокровных животных (кролики), отравленных нитробензолом.

Получены данные по сохраняемости объектов исследования в ткани трупных органов. Исследована зависимость скорости разложения веществ от продолжительности и температурного режима сохранения.

Предложена схема судебно-химического исследования нитробензола и ряда его основных метаболитов.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработана методика изолирования из биологического материала, очистки, идентификации и количественного определения нитробензола (информационное письмо "Определение нитробензола при судебно-химическом исследовании биологического материала" (№ 129 от 15. 03. 04; утверждено Российским центром судебно-медицинской экспертизы МЗ РФ. - М., 2004. - 26 с.)

Внедрение результатов работы:

- методика определения ряда метаболитов нитробензола методом ВЭЖХ (внедрена в научный процесс кафедры неорганической химии Курского государственного медицинского университета с 17.11.2003 г.; акт внедрения №22 от 12.04.2005 г.);

- методика количественного определения нитробензола и его основных метаболитов методом спектрофотометрии (внедрена в научный процесс кафедры органической химии Курского государственного медицинского университета с 15.12.2003 г.; акт внедрения №25 от 15.04.2005 г.);

- методика экстракционно-фотометрического определения метаболитов нитробензола в биологическом материале при совместном присутствии (внедрена в научный процесс кафедры фармацевтической химии Курского государственного медицинского университета с 22.01.2004 г.; акт внедрения №20 от 06.04.2005 г.);

- методика идентификации нитробензола и его основных метаболитов в тонком слое силикагеля (пластины «Силуфол» иУ-254) (внедрена в научный процесс кафедры органической химии Курского государственного медицинского университета с 11.02.2004 г.; акт внедрения №24 от 15.04.2005 г.);

- методики определения нитробензола и ряда его метаболитов на основе реакции с гидроксидом натрия (внедрена в научный процесс кафедры неорганической химии Курского государственного медицинского университета с 19.02.2004 г.; акт внедрения №23 от 12.04.2005 г.); и методика определения нитробензола и его метаболитов в биологическом материале методом ВЭЖХ (внедрена в научный процесс кафедры фармацевтической химии Курского государственного медицинского университета с 26.02.2004 г.; акт внедрения №21 от 06.04.2005 г.).

Апробация работы. Основные положения работы представлены и доложены на X и XI Российских национальных конгрессах "Человек и лекарство" (Москва 2003, 2004 гг.), 67-й и 69-й межвузовских научных конференциях студентов и молодых ученых (Курск 2002, 2003 гг.), 67-й, 68-й и 69-й итоговых научных сессиях КГМУ и отделения медико-биологических наук ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН (Курск 2002, 2003, 2004 гг.), 32-й вузовской научно-технической конференции студентов и аспирантов в области научных исследований.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Связь исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена по плану научно-исследовательских работ кафедры фармацевтической химии Курского государственного медицинского университета и соответствует проблеме "Фармация" межведомственного научного совета №36 РАМН. Номер государственной регистрации 01. 200. 117602.

Объём и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (5 глав), общих выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Материалы диссертации изложены на 236 страницах машинописного текста, содержат 61 рисунок, 40 таблиц и 6 формул. Список цитируемой литературы включает 168 источников, из которых 54 на иностранных языках.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Малыхина, Ольга Ивановна

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Изучена хроматографическая активность нитробензола и его основных метаболитов в тонких слоях и колонках нормальнофазных сорбентов при использовании элюентов различной полярности. Рассчитан ряд параметров хроматографирования. Установлено, что наиболее оптимальными подвижными фазами для селективного разделения объектов исследования методами ТСХ и ВЭЖХ являются соответственно системы растворителей гексан-диоксан-пропанол-2-ацетон (40:15:2:0,5) и гексан-диоксан-пропанол-2 (50:20:3).

2. Исследован характер поглощения веществами электромагнитного излучения в УФ-, видимой и ИК-областях спектра. Показана возможность идентификации рассматриваемых соединений методами электронной и колебательной спектрофотометрии.

3. Разработаны методики количественного определения нитробензола и его основных метаболитов методами СФМ и ВЭЖХ. Относительная ошибка среднего результата не превышает соответственно ±1,3 и ±2,1%.

4. На основе изученных хромогенных реакций нитробензола и мононитрофе-нолов с гидроксидом натрия в среде ДМФА-вода разработаны методики идентификации и количественного определения рассматриваемых соединений. Относительная ошибка среднего результата при количественном определении не превышает ±1,5%.

5. Изучена экстрагируемость метаболитов нитробензола из водных растворов гидрофобными органическими растворителями в зависимости от природы экстрагента, рН среды, насыщения экстрагентов водой. Показано, что моно-нитрофенолы наиболее полно извлекаются хлороформом из водных растворов с рН 2,0, а анилин и моноаминофенолы - диэтиловым эфиром, насыще-ным водой и этилацетатом из водных растворов с рН 6,0-7,0. Предложены эффективные способы экстракционной и хроматографической очистки объектов исследования от соэкстрактивных веществ биологического материала.

6. Проведено сравнительное изолирование нитробензола и его основных метаболитов из биологического материала различными изолирующими агентами. Определены оптимальные условия изолирования анализируемых веществ толуолом (для нитробензола) и ацетоном (для метаболитов нитробензола).

7. Разработаны методики определения объектов исследования в тканях трупных органов и биожидкостях на основе изолирования оптимальными изолирующими агентами и последующей очистки извлечений методом хроматографии или сочетанием методов экстракции и хроматографии. Разработанные методики характеризуются достаточными для подобного рода исследований правильностью и воспроизводимостью.

8. Исследованы особенности распределения нитробензола в организме теплокровных животных (кролики) при введении отравляющего вещества через желудок. Установлено присутствие в органах и биожидкостях отравленных животных как нитробензола, так и ряда его метаболитов: м- и п-нитрофенола, я-аминофенола.

9. Изучена сохраняемость нитробензола и его основных метаболитов в трупном материале на протяжении 55 суток. Определена продолжительность сохранения каждого из рассматриваемых соединений при 10-12 и 18-20°С. По результатам проведенных исследований предложена общая схема исследования биологического материала при отравлении нитробензолом.

Заключение

Обзор источников литературы по теме диссертации включает известные сведения о свойствах, применении, токсическом действии на организм нитробензола и ряда его метаболитов, а также о методах их обнаружения, количественного определения и способах изолирования из биоматериала и биожидкостей.

Идентификация объектов исследования основана, главным образом, на их способности образовывать окрашенные продукты с рядом цветореагентов. Имеющиеся методики определения характеризуются недостаточной селективностью, некоторые из них зачастую длительны по выполнению.

Для количественного определения рассматриваемых соединений в источниках литературы предложен ряд химических и физико-химических методов. Однако, в связи с тем, что информация носит отрывочный характер, отсутствуют способы определения объектов исследования при их возможном совместном присутствии в извлечениях, полученных из объектов биологического происхождения, адаптация данных методик к условиям судебно-химического анализа крайне затруднительна.

Недостаточно изучены вопросы изолирования и очистки рассматриваемых веществ. Многие известные методики изолирования нитробензола основаны на применении перегонки с водяным паром. Они, как правило, трудоемки и требуют использования громоздкой аппаратуры.

Имеющаяся информация не дает полного представления об особенностях распределения и сохраняемости рассматриваемых соединений в ткани трупных органов и биожидкостях в зависимости от ряда факторов окружающей среды.

На основании существующих данных источников литературы можно сделать заключение о необходимости изучения нитробензола и его основных метаболитов в судебно-химическом отношении и разработки унифицированной методики их определения в биологическом материале.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объекты исследования:

1. Нитробензол ч. д. а. ТУ 6-09-99-120-78;

2. Анилин ч. д. а. или х. ч. ГОСТ 5819-78 (содержание основного вещества более 99,5%);

3. о-Нитрофенол ч. ТУ 6-09-11-1561-81;

4. ^-Нитрофенол ч. д. а. ТУ 6-09-9915-74;

5. и-Нитрофенол ч. д. а. ТУ 6-09-3973-75;

6. о-Аминофенол ч. д. а. (фирма "АМисИ", Германия; регистрационный номер 935IX; содержание действующего вещества 99,9%);

7. лг-Аминофенол ч. д. а. (фирма "АШпсЬ", Германия; регистрационный помер 1024Х; содержание действующего вещества 99,9%);

8. и-Аминофенол ч. д. а. МРТУ 6-09-6035-69;

9. лг-Нитроанилин ч. д. а. ТУ 6-09-4181-76;

10. «-Нитрокатехол ч. д. а. (фирма "АМпсЬ", Германия; регистрационный номер 25455-071; содержание действующего вещества 97,0%);.

Приборы:

1. Спектрофотометр СФ-46 (производственное объединение «ЛОМО», г. Ленинград);

2. Спектрофотометр СФ-56 (производственное объединение «ЛОМО», г. СПб);

3. Спектрофотометр СФ-2000 (г. Москва);

4. ИК-Фурье спектрофотометр «№ко1е1 Magna-750» (США);

5. Жидкостный хроматограф «Милихром» (производственное объединение «Научприбор», г. Орел);

6. Ультрафиолетовый облучатель Л-80;

7. Потенциометр ЭВ-74;

8. Термостат ТС-80 М-2;

9. Вакуумный испаритель;

10. Водяная баня;

11. Электроплитка.

Реактивы:

1. Ацетон о. с. ч. ТУ 6-09-3513-86;

2. Ацетонитрил ч. ТУ 6-09-8534-87;

3. Борная кислота х. ч. ГОСТ 9656-75;

4. Гексан ч. д. а. ТУ 261 -003-05807999-98;

5. Гидроксид натрия х. ч. ГОСТ 4328-77;

6. 1, 4-Диоксан ч. д. а. ГОСТ 10455-80;

7. И, Ы- диметилформамид (ДМФА) ч. ГОСТ 20289;

8. Диэтиловый эфир ОСТ 82-2006-88;

9. Нитрат калия ч. д. а. ГОСТ 4217-77;

10. Пропанол-2 х. ч. ТУ 6-09-402-87;

11. Серная кислота х. ч. ГОСТ 4204-77;

12. Сульфат натрия безводный х. ч. ГОСТ 4166-76;

13. Тетрахлорметан ч. д. а. ГОСТ 20288-74;

14. Толуол ч. д. а. ГОСТ 5789-78;

15. Уксусная кислота х. ч. ГОСТ 61-75;

16. Фосфорная кислота ч. д. а. ГОСТ 6552-80;

17. Хлорид 2,3,5-трифенилтетразолия ч. д. а. ТУ 6-09-07-1646-87;

18. Хлороводородная кислота х. ч. ГОСТ 3118-77;

19. Хлороформ ч. д. а. ТУ 2631-020-11291058-96;

20. Этанол 95%;

21. Этилацетат х. ч. ГОСТ 22300-76.

Материалы:

1. Бумага индикаторная универсальная ПНД 50-975-84 («Lachema»,Чехия);

2. Колонки хроматографические КАХ-1 и КАХ-3 размерами 64x2 мм для жидкостного хроматографа , заполненные сорбентом «Силасорб-600»;

3. Силикагель L 40/100/z («Lachema»,Чехия);

4. Хроматографические пластины типа «Силуфол» UV-254;

5. Фильтры бумажные.

Посуда:

1. Бюретки стеклянные градуированные на 25 мл;

2. Воронки делительные вместимостью 25, 50 и 100 мл;

3. Колбы мерные на 10, 25 и 50 мл;

4. Колбы конические на 100 и 200 мл;

5. Камеры хроматографические цилиндрические стеклянные (внутренний объем около 600 см );

6. Пробирки стеклянные вместимостью 20 мл;

7. Пипетки градуированные на 0,2, 1, 2, 5 и 10 мл;

8. Стеклянные фильтры №4 (диаметром 2 см);

9. Цилиндры мерные градуированные на 10, 50, 100 и 250 мл;

10. Чашки выпарительные фарфоровые вместимостью 50, 100 и 250 мл.

Методы исследования Были использованы методы хроматографии в тонком слое сорбента, жидкостной колоночной хроматографии низкого давления, спектрофотометрии в УФ-, ИК- и видимой областях спектра, высоко-эффективной жидкостной хроматографии.

Статистическая обработка данных Методики количественного определения были разработаны на модельных смесях с известным содержанием определяемого вещества. Обработка результатов проводилась в соответствии с установленными требованиями и с использованием пакета прикладных программ "Microsoft Excel".

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. ИДЕНТИФИКАЦИЯ НИТРОБЕНЗОЛА И ЕГО ОСНОВНЫХ

МЕТАБОЛИТОВ

2.1. Идентификация хроматографическими методами 2ЛЛ. Идентификация в тонких слоях нормальнофазного сорбента

Изучена хроматографическая подвижность нитробензола и его основных метаболитов в тонком слое силикагеля с гидроксилированной поверхностью (пластины "Силуфол" иУ-254).

В процессе исследования на линию старта хроматографической пластины размером 6x10 см наносили по 5 мкг каждого из анализируемых веществ в виде 0,02% этанольного раствора. Для хроматографического разделения объектов исследования использовали стеклянные камеры с внутренним объемом около 600 см . Перемещение подвижной фазы в слое сорбента происходило восходящим методом под действием капиллярных сил. Детекцию хроматограмм осуществляли в УФ-свете. Наблюдали появление темных пятен анализируемых веществ на более светлом общем фоне пластины. В УФ-свете пятна нитробензола и нитрофенолов имели фиолетовую окраску, а анилина, аминофенолов и и-нитрокатехола - светло-желтую, усиливающуюся при обработке пластины парами аммиака.

Хроматографическая активность рассматриваемых соединений обусловлена различными типами взаимодействий, основные из которых приводят к образованию водородных связей. Данные связи образуются при взаимодействии силанольных групп адсорбента, имеющего гидроксилированную поверхность, и отдельными группами атомов в молекулах адсорбата. Кроме возникающих связей между адсорбатом и адсорбентом на хроматографическую подвижность соединений влияют взаимодействия, которые возникают между поверхностью адсорбента и подвижной фазой, а также подвижной фазой и адсорбатом.

В работе рассмотрена возможность применения одно- и двухкомпонент-ных подвижных фаз при изучении хроматографической активности объектов исследования. В качестве подобных фаз использовались растворители с различной полярностью. Низшие предельные алифатические углеводороды (гек-сан, гептан), обладающие наименьшей диэлектрической проницаемостью, обусловливали наименьшую хроматографическую подвижность рассматриваемых веществ. При этом фенольный гидроксил, нитро- и аминогруппы взаимодействовали с гидроксилированной поверхностью силикагеля с образованием различного рода связей, в том числе водородных. В этом случае пятна веществ на хроматограмме обнаруживались вблизи линии старта. Рост хроматографической подвижности анализируемых веществ наблюдался при увеличении диэлектрической проницаемости элементов систем. Наибольшие значения подвижности объектов исследования достигались в силыгополярных элюентах. Объяснить это можно тем, что полярные растворители обладают достаточным сродством к анализируемым веществам и способны конкурировать с ними при образовании связей с силанольиыми группами сорбента. В данных условиях взаимодействие активных групп объектов исследования с поверхностью сорбента ослабляется и происходит увеличение скорости продвижения веществ вместе с подвижной фазой.

По данным результатов хроматографирования нитробензола и его основных метаболитов при использовании одно- и двухкомпонентпых подвижных фаз составлялись элюенты из трех или четырех компонентов. В каждую из таких систем включали неполярный или малополярный растворитель и один или два растворителя со средней или сильной полярностью в различных объемных соотношениях. Многокомпонентные подвижные фазы позволили подобрать оптимальные условия хроматографического разделения анализируемых объектов. Результаты хроматографирования нитробензола и его основных метаболитов с использованием трех- и четырехкомпонентных элюентов представлены в таблице 1.

Для оценки поведения исследуемых структур при хроматографировании нами был рассчитан ряд величин: (относительно стандартного вещества

-,и-нитрофенола), В, величина, которая представляет собой отношение средних скоростей перемещения вещества и фронта подвижной фазы за время получения хрома-тограммы.

- величина, которая определяется как отношение ЯГ анализируемого и стандартного вещества.

В - условное удерживание в тонком слое сорбента, рассчитаное по формуле:

В=1/ЯГ (1)

Рк • - относительный коэффициент емкости тонкого слоя, определяемый по формуле:

Р - . где 1Уа — значение КГ анализируемого вещества, ИД - значение КГ "базовой структуры" (.«-нитрофенола).

Д(ДО) - относительное изменение свободной энергии при адсорбции (по отношению к льнитрофенолу), найденное по формуле:

Л(ЛО)=-К-Т-1пРк. (3)

Значения рассчитанных величин представлены в таблице 1. Как свидетельствуют полученные данные, величина хроматографической активности (относительно изменения свободной энергии при адсорбции) рассматриваемых соединений, при использовании малополярных элюентов, содержащих преимущественно гексан, возрастает в ряду л/-аминофенол —> п-нитрокатехол —» о-аминофенол —» я-аминофенол —> и-нитрофенол —> м-нитроанилин —> лг-нитрофенол —> анилин —> о-нитрофенол —> нитробензол.

Наиболее подвижным на пластинах "Силуфол" ЦУ-254 является нитробензол, который в своей структуре имеет питрогруппу, практически не способную к образованию водородных связей с поверхностью силикагеля. Нитрофе-нолы в своей структуре кроме нитрогруппы содержат в орто-, мета- или пара-положении гидроксильную группу, обладающую большей способностью, чем нитрогруппа, взаимодействовать с поверхностью сорбента. Образование внутримолекулярной водородной связи между нитрогруппой и фенольным гидро-ксилом происходит у о-нитрофенола в большей степени, чем у .и-нитрофенола и и-нитрофенола, поэтому значение относительного изменения свободной энергии при адсорбции для и-нитрофенола оказывается меньшим, чем для о-нитрофенола, что проявляется меньшей хроматографической подвижностью п-нитрофенола по сравнению с о-нитрофенолом.

Аминогруппа в структуре анилина имеет возможность более активно взаимодействовать с гидроксилированной поверхностью силикагеля, по сравнению с нитрогруппой, уменьшая тем самым хроматографическую подвижность вещества.

Хроматографическую активность моноаминофенолов характеризует наличие фенольного гидроксила и аминогруппы в структуре веществ. При этом элюент, основу которого составляет неполярный растворитель, оказывает влияние на подвижность исследуемых объектов. и-Аминофенол в большей степени, чем о- и д/-аминофенол, способен взаимодействовать с полярным компонентом подвижной фазы — диоксаном, что уменьшает возможность взаимодействия вещества с гидроксилированной поверхностью сорбента и увеличивает его хроматографическую подвижность.

Наличие нитро- и аминогруппы в структуре ,и-нитроанштина способствует увеличению возможности конкурентного взаимодействия данных групп с поверхностью сорбента. Следовательно, хроматографическая подвижность м-нитроанилина будет меньше подвижности анилина и, соответственно, нитробензола.

Наименее подвижным на пластинах "Силуфол" иУ-254 является м-аминофенол, который в своей структуре имеет гидроксильную группу и аминогруппу в положении "3". Из-за незначительного внутримолекулярного взаимодействия фепольного гидроксила и первичной аминогруппы увеличивается возможность более активного взаимодействия данных групп с гидроксилиро-ванной поверхностью силикагеля. При этом хроматографическая подвижность вещества уменьшается и значение относительного изменения свободной энергии при адсорбции будет минимальным.

Введение в состав подвижной фазы сильнополярного компонента - ацетона не меняет порядок продвижения веществ по пластине, но изменяет хрома-тографическую подвижность каждого из анализируемых веществ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Малыхина, Ольга Ивановна, 2005 год

1. A.c. 309283 СССР, МКИ2 G01 N21/20. Способ количественного определения нитросоединений / Я.В. Релин, Т.К. Соколова. № 1412526 / 23-04; Заявл. 20.04.70; Опубл. 09.07.71, Бюл. №2.-3 с.

2. A.c. 362238 СССР, МКИ2 G01 N31/16. Способ количественного определения в сточных водах ароматических нитросоединений / М.Д. Белостоцкий, Е.А. Чистякова. -№ 1631031 /23-04; Заявл. 17.03.71; Опубл. 13.12.72, Бюл. №2.-2 с.

3. A.c. 947766 СССР, МКИЗ G01 N33/48. Способ определения анилина в биологических объектах / JT.B. Песахович, З.М. Деева; Тюменск. гос. мед. ип-т и Алтайск. гос. мед. ин-т. № 2849192 /28-13; Заявл. 02.10.79; Опубл. 30.07.82, Бюл. № 28. - 4 с.

4. Актуальные проблемы теоретической и прикладной токсикологии: Сб. науч. тр. / Моск. НИИ гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана; Под ред. М.И. Михеева. — М.: МНИИГ, 1988.-179 с.

5. Альберт, А. Избирательная токсичность / А. Альберт; Под ред. В.А. Фило-ва. М.: Медицина, 1989. - 432 с.

6. Анализ зарубежных и отечественных статистических данных по острым химическим отравлениям / Н.И. Литвинов, Ю.И. Остапенко, В.И. Казачен-ков и др. // Токсикологический вестник. 1997. - № 5. - С. 5-12.

7. Багирова, H.A. Ферментативный метод определения фенолов с использованием пероксидазы арахиса / H.A. Багирова, Т.Н. Шеховцева, Н.В. Табачникова // Журн. аналит. химии. 2000. - Т. 55, № 1. — С. 93-101.

8. Баразьян, А.Г. Определение понятий и систематизация веществ повышенной опасности / А.Г. Баразьян, C.B. Суворов // Гигиена и санитария. — 1997.- № 3. С. 59-61.

9. Берштейн, И.Я. Спектрофотометрический анализ в органической химии / И .Я. Берштейн, Л. А. Шевнюк, Ю.Л. Каминский. Л.: Химия, 1986. - 187 с.

10. Беспамятнов, Г.П. Предельно допустимые концентрации химических веществ в окружающей среде / Г.П. Беспамятнов, Ю.А. Кротов. JL: Химия, 1985.-528 с.

11. Булочникова, Е.К. Гигиеническая оценка доочищенных сточных вод ани-линокрасочной промышленности / Е.К. Булочникова, Н.В. Пиртахия // Гигиена и санитария. 1985.- № 1.-С. 13-16.

12. Буркацкая, E.H. Вопросы токсикологии нитрофенольиых соединений. Вопросы гигиены и токсикологии пестицидов. — Труды АМН СССР. М., 1966. - С. 121-124.

13. Бушма, М.И. Влияние витамина К3 на активность ферментов редокс- цепей эндоплазматической сети печени крыс и гидроксилирование амидопирина, этилморфина и анилина / М.И. Бушма, П.И. Лукиенко // Фармакология и токсикология. 1983. - Т. 46, № 3. - С. 65-67.

14. Василенко, Н.М. Сравнительная оценка изменений в крови при острой и подострой интоксикации ароматическими нитро- и аминосоединениями / Н.М. Василенко, В.И. Звездай // Фармакология и токсикология. — 1972. — Т. 35,№ 1.-С. 108-110.

15. Веревкин, С.П. Хроматографическое определение алкилнитрофенолов / С.П. Веревкин, А.И. Рожнов, A.B. Зимичев // Журн. аналит. химии. -1989. -Т. 44, №9.-С. 1680-1685.

16. Влияние анилина и бензола на крыс, предварительно адаптированных к низким положительным температурам воздуха / В.В. Кустов, Л.М. Меле-сова, В.К. Фадеева и др. // Гигиена и санитария. 1987. - № 2. - С. 26-29.

17. Влияние низких положительных температур воздуха на чувствительность животных к токсическому действию анилина / В.В. Кустов, В.К. Фадеева,

18. Л.М. Мелесова, М.В. Сидорова // Гигиена и санитария. 1987. - № 5. — С. 32-34.

19. ВЭЖХ определение нитробензола в воде / Определение концентраций химических веществ в воде централизованных систем питьевого водоснабжения: Сборник методических указаний. Вып. 2. — М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999. — 175 с.

20. Гадаскина, И.Д. Превращения и определение промышленных органических ядов в организме / И.Д. Гадаскина, В.А. Филов. М.: Медицина, 1971.-304 с.

21. Газохроматографическое определение ароматических аминов в воде водных объектов / М.Т. Дмитриев, Н.В. Зайцева, В.Ю. Малков, Т.С. Уланова // Гигиена и санитария. 1989. - № 7. - С. 29-31.

22. Газохроматографическое определение нитро- и аминосоединений ароматического ряда / Н.В. Зайцева, Т.С. Уланова, В.Ю. Малков, Т.В. Нурисла-мова// Гигиена и санитария. 1991. — № 12. - С. 82.

23. Гигиенические нормативы содержания вредных веществ в питьевой воде (Постановление № 26 от 24.10.96. СанПиН 2.1.4.559-96) / Токсикологический вестник. 1997. - № 2. - С. 37-44.

24. Голиков, С.Н. Общие механизмы токсического действия / С.Н. Голиков, И.В. Саноцкий, Л.А. Тиунов. Л.: Химия, 1986. - 216 с.

25. Гордон, П.Ф. Органическая химия красителей / П.Ф. Гордон, П.П. Грегори; Под ред. Г.Н. Ворожцова. М.: Мир, 1987. - 344 с.

26. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1. — 11-е изд. М.: Медицина, 1987.-336 с.

27. Грушко, Я.М. Вредные органические соединения в промышленных выбросах в атмосферу / Я.М. Грушко. Л.: Химия, 1986. - 207 с.

28. Грушко, Я.М. Вредные органические соединения в промышленных сточных водах / Я.М. Грушко. Л.: Химия, 1982. - 216 с.

29. Грязнова, Е.А. Обнаружение и определение анилина при судебно-химических исследованиях / Е.А. Грязнова, В.Г. Беликов // Суд. мед. эксп-за. 1959. - Т. 2, № 4. - С. 39-43.

30. Действие нитробензола и его хлорпроизводных на некоторые показатели антиокислительного гомеостаза в тканях крыс / Л.И. Паранич, A.B. Пара-нич, Н.М. Василенко, Е.В. Бугай // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1993.-Т. 116, № 10.-С. 402-405.

31. Денеш, И. Титрование в неводных средах / И. Денеш; Под ред. И.П. Белецкой. М.: Мир, 1971.-413 с.

32. Дергачева, Т.С. Обоснование норматива 4-нитроанилина в воде водоемов / Т.С. Дергачева, Н.Я. Михайловский // Гигиена и санитария. 1985. - № 4. -С. 82-83.

33. Дмитриев, М.Т. Газохроматографическое определение ароматических аминов в воздухе / М.Т. Дмитриев, Т.С. Уланова, A.B. Михайлов // Гигиена и санитария. 1985. - № 1. - С. 57-59.

34. Дмитриев, М.Т. Газохроматографическое определение фенола в моче / М.Т. Дмитриев, Ю.Б. Суворова // Гигиена и санитария. 1991. - № 2. - С. 85-86.

35. Доронин, С.Ю. Фотоматрический анализ парацетамола на содержание примеси п-аминофенола / С.Ю. Доронин, H.H. Гусакова, Р.К. Чернова // Фармация. 2001. -№3.- С. 35-37.

36. Евгеньев, М.И. Автоматическое определение анилина и его замещенных в воздушной среде / М.И. Евгеньев, С.Ю. Гармопов, В.В. Медведев // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. 1996. - Т. 62, № 3. - С. 8-9.

37. Евгеньев, М.И. Проточно-инжекционное определение ариламинов с фотометрическим детектированием / М.И. Евгеньев, И.И. Евгеньева, Ф.С. Ле-винсон // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. -1996. — Т. 62, № 1.-С. 11-14.

38. Ивахненко, П.Н. Фотометрическое определение азотсодержащих лекарственных препаратов, основанное на превращениях с образованием нитрита / П.Н. Ивахненко, C.B. Малыгина, JI.C. Чигаренко // Фармация. 1978. - Т. 27, №3,-С. 83-84.

39. Идентификация органических соединений / Р. Шрайдер, Д. Кертин и др.; Под ред. Б.А. Руденко. М.: Мир, 1988. - 704 с.

40. Инверсионный вольтамперометрический анализ воды на содержание анилина и фенола / JI.C. Анисимова, Ю.А. Акенеев, В.Ф. Слипченко и др. // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. 1999. - Т. 65, № 2. — С. 6-8.

41. Кашкалда, Д.А. Биохимические критерии оценки ранних признаков неблагоприятного воздействия нитрохлорсоединений бензола / Д.А. Кашкалда, Ф.А. Колодуб // Врачебное дело. 1992. - № 5. - С. 62-65.

42. Конева, Н.Д. Динамика численности и структуры бактериального комплекса почвы при внесении азобензола / Н.Д. Конева, Ю.В. Круглов // Микробиология. 2001. - Т. 70, № 4. - С. 552-557.

43. Коренман, И.М. Извлечение малых количеств нитрофенолов из воды макропористыми ионами / И.М. Коренман, А.Т. Алымова, С.Н. Талопкина // Журн. аналит. химии. 1979. - Т. 34, № 12. - С. 2425-2427.

44. Коренман, И.М. Новые титриметрические методы / И.М. Коренман. — М.: Химия, 1983.- 173 с.

45. Коренман, И.М. Фотометрический анализ / И.М. Коренман. М.: Химия, 1970.- 150 с.

46. Коренман, Я.И. Фотометрическое определение фенола в воде в присутствии анилина и нитроанилипов после извлечения гидрофильными растворителями / Я.И. Коренман, Т.А. Кучменко // Журн. аналит. химии. 1995. -Т. 50, №7.-С. 787-791.

47. Коренман, Я.И. Экстракционно-фотометрическое раздельное определение анилина и нитроанилинов / Я.И. Коренман, Г.М. Смольский, H.H. Сель-манщук // Журн. аналит. химии. 1992. - Т. 47, № 7. - С. 1251-1254.

48. Коршунов, И.А. Полярографическое определение нитробензола / И.А. Коршунов, A.B. Рабов, JI.H. Сазанова // Заводская лаборатория. 1948. — Т. 14, №3.-С. 519-522.

49. Кофанов, В.И. Распределение ароматических нитросоединений между органическими фазами трехфазных экстракционных систем / В.И. Кофанов, В.А. Франковский, И.Н. Ребик // Жури, аналит. химии. 1991. - Т. 46, № 3. -С. 506-512.

50. Крамаренко, В.Ф. Анализ ядохимикатов / В.Ф. Крамаренко, Б.М. Турке-вич. М.: Химия, 1978. - 264 с.

51. Крешков, А.П. Аналитическая химия неводных растворов / А.П. Крешков. М.: Химия, 1982. - 256 с.

52. Лазарев, А.И. Анализ металлов / А.И. Лазарев, И.П. Харламов. — М.: Металлургия, 1987. 320 с.

53. Линева, О.И. Скрининг метод оценки влияния ксенобиотиков на репродуктивную функцию / О.И. Линева, В.И. Карнаух // Гигиена и санитария. — 1991.-№3.-С. 79-81.

54. Лошадкин, H.A. Классификация токсических веществ, вызывающих различные типы гипоксий на начальных стадиях интоксикации / H.A. Лошадкин, С.С. Абнизов // Токсикологический вестник. — 1995. № 3. — С. 25-27.

55. Лудевиг, Р. Острые отравления / Р. Лудевиг, К. Лос; Пер. с нем. A.B. Низового; Под ред. Е.В. Гембицкого. М.: Медицина, 1983. - 560 с.

56. Лужников, Е.А. Клиническая токсикология / Е.А. Лужников. М.: Медицина, 1994.-256 с.

57. Лужников, Е.А. Острые отравления: Руководство для врачей / Е.А. Лужников, Л.Г. Костомарова. М.: Медицина, 1989. — 431 с.

58. Луйк, А.И. Параметры воздействия нитрофеиолов различного химического строения с альбумином и их токсичность / А.И. Луйк, В.Д. Лукянчук // Вопр. мед. химии. 1982. - Т. 28, № 5. - С. 48-51.

59. Мазор, Л. Методы органического анализа / Л. Мазор; Под ред. А.Н. Кашина. М.: Мир, 1986. - 584 с.

60. Масленникова, Т.А. Анализ продуктов реакции антрахинона, гидрохлорида анилина и анилина методом ТСХ / Т.А. Масленникова // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. 1993. - Т. 59, № 1. - С. 18-20.

61. Махиня, А.П. Фотоэлектроколориметрический метод определения малых концентраций пара-нитрофенола в воде / А.П. Махиня // Гигиена и санитария. 1967. - № 3. - С. 58-60.

62. Мелещешсо, К.Ф. Предупреждение загрязнения водоемов сточными водами предприятий синтетической химии / К.Ф. Мелещенко. Киев: Здоров'я, 1971.- 144 с.

63. Николаев, Ю.Т. Анилин / Б.Т. Николаев, A.M. Якубсон. М.: Химия, 1984. - 148 с.

64. Новицкая, Л.П. Метод определения анилина при санитарно-химических исследованиях резин / Л.П. Новицкая, И.С. Духовная // Гигиена и санитария. 1985. -№ 3. -С. 60-61.

65. Об острых отравлениях амидо- и нитропроизводными бензола / И.Т. Фе-сенко, О.В. Чаплий, Н.И. Омельченко, JT.M. Калиниченко // Врачебное дело. 1982. -№ 7. - С. 112-113.

66. Овчинников, М.М. Количественный спектрофотометрический анализ в ультрафиолетовой, видимой и ближней инфракрасных областях / М.М. Овчинников, Г.Н. Подгорный, И.С. Балаховский // Клинич. лаб. диагностика. 2002. - № 2. - С. 6-11.

67. Определение анилина и изомеров толуидина в воде водных объектов методом жидкостной хроматографии / Н.В. Зайцева, Т.С. Уланова, В.Ю. Малков, Т.В. Нурисламова // Гигиена и санитария. 1992. - № 7-8. - С. 76.

68. Основы аналитической токсикологии: Международная программа по химической безопасности / Р. Дж. Фланаган, P.A. Брейтуэйт и др. — Женева: ВОЗ, 1997.-368 с.

69. Очистка сточных вод нефтеперерабатывающих заводов / Я.А. Карелин, И. А. Попова, JT.A. Евсеева, О .Я. Евсеева. М.: Стройиздат, 1982. - 184 с.

70. Павлова, Н.Я. Отравление нитробензолом / Н.Я. Павлова, Б.О. Рехтман // Врачебное дело. 1974.-№5.-С. 125-126.

71. Першин, С.Е. Влияние выбросов предприятий химии и нефтехимии на здоровье населения / С.Е. Першин, Л.К. Квартовкина // Гигиена и санитария. 2003. - № 6. - С. 84-85.

72. Применение методов газовой и жидкостной хроматографии при изучении метаболизма органических соединений / H.A. Тараненко, В.Б. Дорогова, Н.М. Мещаков, Л.И. Панфилова // Гигиена и санитария. 2001. - № 2. - С. 75-76.

73. Рубан, В.Ф. Определение нитрофенолов в воде методом капилярной ВЭЖХ с амперометрическим детектированием / В.Ф. Рубан // Журн. ана-лит. химии. 1992. - Т. 47, № 12. - С. 2042-2045.

74. Рунова, О.Б. Методы определения фенола и его производных в биологических средах / О.Б. Рунова, P.A. Волкова // Клинич. лаб. диагностика.1996. -№ 5. С. 15-19.

75. С1 2121681 RU G 01 N33/50. Способ определения 4-нитрофенолов в биологическом материале / Шорманов В.К. (Курский гос. мед. ун-т. — № 94021 200/14; Заявл. 07.06.94 // Изобретения (Заявки и патенты). 1998. — № 31. -С. 1-2.

76. Свойства органических соединений. Справочник. / Под ред. A.A. Потехи-на. Л.: Химия, 1984. - 520 с.

77. Селиванова, Г.А. Анион-радикалы ароматических соединений 24*. Электрохимическое восстановление полигалогенированных производных нитробензола / Г.А. Селиванова, В.Ф. Стариченко, В.Д. Штейнгарц // Журн. биоорган, химии. 1995.-Т. 31, №2. -С. 226-232.

78. Сиггиа, С. Количественный органический анализ по функциональным группам / С. Сиггиа, Дж. Г. Ханна. М.: Химия, 1983. - 672 с.

79. Спектрофотометрическое и хроматографическое определение п-аминофенола в парацетамоле / М.И. Евгеньев, С.Ю. Гармонов, Л.Ш. Ша-кирова, A.C. Брысаев // Химико-фармац. журн. 2000. - Т. 34, № 5. - С. 52-54.

80. Справочник химика / Под ред. Б.П. Никольского. — М.: Химия, 1964. Т. 2. - 1168 с.

81. Справочное руководство по компонентному составу водотоков и сточных вод различных производств. Казань: Изд-во Казанск. ун-та, 1992. - 82 с.

82. Страдомская, А.Г. Экстракционно-хроматографический метод определения анилина в природных водах / А.Г. Страдомская, К.П. Тарасова, Н.И. Гавриленко//Гидрохим. матер. 1991. -№ ПО.-С. 117-122.

83. Субоч, Г.А. Окислительные методы синтеза производных п-нитрофенола / Г.А. Субоч, Е.Ю. Беляев // Хим. фармац. журн. 2000. - Т. 34, № 4. - С. 51-52.

84. Троцкевич, В.А. Тактика и неотложная помощь при острых химических отравлениях / В.А. Троцкевич, О.В. Курашов // Врачебное дело. 1991. — №6.-С. 91-94.

85. Файгль, Ф. Капельный анализ органических веществ / Ф. Файгль; Под ред.

86. B.И. Кузнецова. М.: Госхимиздат, 1986. - 584 с.

87. Фельдт, Е.Г. Оценка мутагенной опасности бензола и ряда его производных / Е.Г. Фельдт // Гигиена и санитария. — 1985. № 7. — С. 21-23.

88. Фесенко, И.Т. Об острых отравлениях амидо- и нитропроизводными бензола / И.Т. Фесенко, О.В. Чаплий, Н.И. Омельченко // Врачебное дело. — 1982.-№7.-С. 112-113.

89. Чекрышкина, Л.А. Идентификация лекарственных препаратов, содержащих ароматическую нитрогруппу / Л.А. Черкашкина, Л.И. Парфенова, Н.И. Двич // Фармация. 1983. - Т. 32, № 3. - С. 39-40.

90. Чмиль, В.Д. Определение фенольных соединений в воде хроматографиче-скими методами / В.Д. Чмиль // Журн. аналит. химии. 1981. - Т. 2, № 4.1. C. 1095-1098.

91. Шандала, М.Г. О роли токсических модифицирующих веществ в химическом канцерогенезе / М.Г. Шандала, Н.Я. Янышева, Н.В. Балепко // Гигиена и санитария. 1991. - № 3. - С. 55-58.

92. Широбокова, Л.П. Особенности биоэлектрической активности миокарда крыс на фоне развивающейся гемической гипоксии, вызванной острым отравлением нитробензолом / Л.П. Широбокова // Токсикол. вестн. — 2002. — № 1.-С. 24-28.

93. Токсикол. вестн. — 2003. № 2. — С. 6-9.

94. Широбокова, Л.П. Фармакопротекторное действие церебрала и митохонд-рина при гемической гипоксии, вызванной острым отравлением нитробензолом / Л.П. Широбокова, А.Н. Макаренко, A.M. Шаяхметова // Токсикологический вестник. 2002. - № 4. - С. 14-16.

95. Шорманов В.К. Изолирование алкилдинитрофенольных соединений из трупного материала / В.К. Шорманов, Н.Д. Захарова, A.B. Нестерова // Суд. мед. эксп-за. 1993. - Т. 36, № 3. - С. 34-36.

96. Шорманов В.К. Химико-токсикологическое исследование отдельных классов ароматических соединений кислотного характера и их эфиров: Дис. . д-ра фармац. наук: 15.00.02 / В.К. Шорманов. Защищена 01.03.99; 01960012564. - М., 1999. - 643 с.

97. Шорманов, В.К. Определение 4-нитрофенолов в объектах биологического происхождения / В.К. Шорманов, И.А. Фурсова // Судебно-мед. Экспертиза. 1998. - Т. 41, № 6. - С. 28-33.

98. Шорманов, В.К. Определение токсичных соединений динитрофенольной структуры при судебно-химических исследованиях биологического материала / В.К. Шорманов, И.А. Фурсова // Суд. мед. эксп-за. 1996. - Т. 39, №3.-С. 31-34.

99. Шорманов, В.К. Особенности изолирования нитробензола из биологического материала / В.К. Шорманов, Л.В. Бредихина // Суд. мед. эксп-за. -2000. Т. 43, № 3. - С. 28-30.

100. Шорманов, В.К. Особенности экстракции 2,4-динитрофенола и 2,4,6-тринитрофенола из водных растворов / В.К. Шорманов, И.А. Фурсова, М.Н. Якубовская // Суд. мед. эксп-за. 1994. - Т. 37, № 2. - С. 22-23.

101. Шорманов, В.К. Экстрагирование 4-нитрофенола и 2-хлор-4-нитрофенола из водных растворов / В.К. Шорманов, И.А. Фурсова, М.И. Якубовская // Фармация. 1996. - Т. 45, № 4. - С. 40-41.

102. Шорманов, В.К. Экстрагируемость 2-нитрофенола и 3-нитрофенола из водных растворов / В.К. Шорманов, М.К. Шепиев // Суд. мед. эксп-за. -1997.-Т. 40, №3.-С. 30-32.

103. Штанников Е.В. Отдаленное действие на организм ароматических аминов и продуктов их трансформации в воде / Е.В. Штанников, И.Н. Луцевич // Гигиена и санитария. 1983. -№ 9. - С. 19-22.

104. Штанников Е.В. Трансформация ароматических аминов в процессе кондиционирования воды / Е.В. Штанников, И.Н. Луцевич // Гигиена и санитария. 1982. - № 4. - С. 20-23.

105. Эйхлер, В. Яды в нашей пище / В. Эйхлер; Под ред. Б.Р. Стригановой 2-е изд., доп. М.: Мир, 1993. - 187 с.

106. Ягодин, Г.А. Основы жидкостной экстракции / Г.А. Ягодин, С.З. Каган. — М.: Химия, 1981.- 400 с.

107. Acute nitrobenzene poisoning with severe associated methemoglobinemia:, identification in whole blood by GC-FID and GC-MS / A.M. Marbinez, S. Ballesteros, E. Almarra et. // J. Anal. Toxicol. 2003. - Vol. 27, № 4. - P. 221-225.

108. Alber, M. Determination of nitrophenols in rain and snow / M. Alber, H. Bohm, I. Brodesser // Fresenius J. Anal. Chem. 1989. - Vol. 334, № 6. - P. 540-545.

109. Archer, J. Extraction of phenols from an acidic water matrix using solid phase extraction / J. Archer, Chen Ying-Lin // Anal. Chem. and Appl. Spectrosc.: Pitsburgh Conf. Atlanta(Ga), 1993.-901 p.

110. Bagnato, L. Two-dimensional thin-lager chromatography for the separation and identification of nitro derivatives in explosives / L. Bagnato, G. Grasso // J. Chromatogr. 1986. - Vol. 57, № 3. - P. 440-444.

111. Benowitz, L. Novel treatment in stroke. Endogenous low molecular weight factors support extensive CNS axon growth / L. Benowitz // Eur. J. Neuropsycho-pharm. 2000. - Vol. 10, № 4. - P. 23.

112. Biodégradation of sorbed chemicals in soil / K. Scow, F. Shifang, C. Johnson, M. Guang // J. Environmental Health Perspectives 1995. - Vol. 21, № 102. -P. 93-95.

113. Bohm, H.B. Identification of nitrophenols in rain-water by high-performance liquid chromatography with photodiode array detection / H.B. Bohm, I. Teltes, D. Vol mer // J. Chromatogr. 1989. - Vol. 478, № 2. - P. 390-407.

114. Brauchamp, R.O. A critical review of the literature on nitrobenzene toxicity / R.O. Brauchamp, R.D. Irons, D.E. Rickert // CRC Crit. Rev. Toxicol. 1982. -№ 11.-P. 33-84.

115. Breda, A. Determination of phenol, m-, o- and n- cresd, n-aminophenol in urine by high-performance liquid chromatography / A. Breda // J. Chromatogr. — 1990.-Vol. 535, № 1-2.-P. 311-316.

116. Cserhati, T. Determination of the lipophilicity of some aniline derivatives by reversed-phase thin-lager chromatography. The effect of salts / T. Cserhati, B. -Bordas, M. Srogyi // J. Chromatogr. 1986. - Vol. 21, № 6. - P. 312-316.

117. Feifes, J. Gas chromatographic and mass spectrometric determination of ni-troaromatics in water / J. Feifes, K. Lensen, D. Volmer // J. Chromatogr. 1990. -Vol. 518, № 1.-P. 21-40.

118. Haring, R.C. Azobenzene as an acaricide and insecticide / R.C. Haring // J. Econom. Entomol. 1946. - Vol. 39, № 1. - P. 78-81.

119. Hassan, Y.M. Spectrofotometric determination of some pharmaceutically important nitro compounds in thier dosage from / Y.M. Hassan, F. Belal, M.Y. El-Din // J. Analyst. 1988. - Vol. 113, № 7. - P. 1087-1089.

120. Hernandez, L. Voltammetric determination of methyl parathion, ortho, meta and para nitrophenol with a carbon paste electrode modified with C|8 / L. Hernandez, P. Hernandes, J. Vicente // Fresenius J. Anal. Chem. — 1993. Vol. 345, № 1 l.-P. 712-715.

121. Hernandez, P. Determination of 4-nitrophenyl by adsorptive stripping aguare-wave polarography / P. Hernandez, F. Galan-Estella, L. Hernandez // J. Anal. Chem. acta. 1993. - Vol. 271, № 2. - P. 217-221.

122. Herterich, R. Gas chromatographic determination of nitrophenols in atmospheric liquid water and airborne particulates / R. Herterich // J. Chromatogr. -1991.-Vol. 549, № 1-3. P. 313-324.

123. Investigation into the mechanism of action of nitrobenzene as a mild dehydro-genating agent under acid-catalysed conditions / M.L. Cristiano, D.J. Gago, A.M. Gonsalves et. // J. Org. Biomol. Chem. 2003. - Vol. 1, № 3. - P. 565574.

124. Johnson, G.R. Evolution of catabolic pathways for synthetic compounds: bacterial pathways for degradation of 2,4-dinitrotoluene and nitrobenzene / G.R. Johnson, J.C. Spain // J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2003. - Vol. 62, № 2-3. - P. 110123.

125. Kadiyala, V. Construction of Escherichia coli strains for conversion of ni-troacetophenones to ortho-aminophenols / V. Kadiyala, L.J. Nadeau, J.C. Spain // J. Appl. Environ. Microbiol. 2003. - Vol. 69, № 11. - P. 6520-6526.

126. Kastelan, M. TLC separation of m- and n-aminophenols by metal-ion addition to the chromatographic layer / M. Kastelan, M. Petrovic // Fresenius J. Anal. Chem. 1991.-Vol. 34, № 12.-P. 784-785.

127. Kosson, D.S. Interactions of aniline with soil and groundwater at an industrial spill site / D.S. Kosson, V.B. Stephen // J. Environmental Health Perspectives -1995.-Vol. 21, № 103.-P. 71-73.

128. Kunugi, A. HPLC of nitrophenols determination of products of oncolumn nitration of phenol / A. Kunugi, C. Truji, K. Tabei // Resolut. Chromatogr. and Chromatogr. Commun. 1987. - Vol. 10, № 11. - P. 624-625.

129. Kuruc, J. GC-FTIR-MS analysis of volatile radiolysis products of nitrophenol solution in carbon tetrachloride / J. Kuruc, M.K. Yahoo, P. Kuran // J. Radioanal. and Nucl. Chem. Lett. 1993. - Vol. 175, № 5. - P. 359-370.

130. Leon-Gonsalez, M.E. Simultaneous flow-injection determination of o- and p-nitrophenol using a photodiode-array detector/ M.E. Leon-Gonsalez, L.V. Perer-Arribas, M.J. Santos-Delgado// J. Anal. Chem. acta. 1992. - Vol. 258, №2.-P. 269-273.

131. Mattews, E. W. Recovery of dichlorobenzene, nitrobenzene and naphthalene during evaporative concentration / E.W. Mattews // J. Anal. Chem 1985. — Vol. 57, №7.-P. 1494-1496.

132. Michalke, P. Determination of p-nitrophenol is serum and urine by ensymatic conjugate hydrolysis and HPLC application after paration intoxication / P. Michalke // J. Rechtsmed. 1984. - Vol. 92, № 2. - P. 95-100.

133. Morris, M.E. High-performance liquid chromatographic analysis of p-nitrophenol and its conjugates in biological samples / M.E. Moms, Y.B. Hansel // J. Chromatogr. Biomed. Appl. 1990. - Vol. 532, № 2. - P. 285-293.

134. Nick, K. Gas chromatographic determination of nitrophenols after derivativa-tion with diazomethane / K. Nick, H.F. Ycholler // Fresenius J. Anal. Chem. -1992. Vol. 343, № 3. - P. 304-307.

135. Nishikova, Y. Determination of nitrobenzenes in river, water, sediment and fish samples by gas chromatography-mass spectrometry / Y. Nishikova, T. Okumura //J. Anal. Chem. Acta. 1995. - Vol. 312, № 1. - p. 45-55.

136. Patil, S.F. Thermal desorption-gas chromatography for the determination of benzene, aniline, nitrobenzene and chlorobenzene in workplace air / S.F. Patil // J. Chromatogr. 1992. - Vol. 600, № 2. - P. 344-351.

137. Patil, S.S. Gas chromatographic studies on the biodégradation of nitrobenzene and 2,4-dinitrophenolin the nitrobenzene plant wastewater / S.S. Patil, V.M. Shinde // J. Environ. Pol lut. 1989. - Vol. 57, № 3. - P. 235-250.

138. Patil, Y.Y. Shimulfaneous gas chromatographic determination of nitrobenzene and 2,4-dinitrophenol in nitrobenzene manufacturing plant wastewater / Y.Y. Patil, V.M. Shinde // J. Anal. Lett. 1988. - Vol. 21, № 8. - P. 1397-1408.

139. Rafii, F. Reduction of Azo Dyes and nitroaromatic compounds by bacterial enzymes from the human intestinal tract / F. Rafii, C.E. Cerniglia // J. Environmental Health Perspectives 1995. - Vol. 21, № 103. - P. 17-19.

140. Rahim, S.A. Spectrophotometric determination of aniline in aqueous solutions by aro-dye formation with diazotired p-nitroaniline / S.A. Rahim, N.D. Ismail, S.A. Bashir//J. Mikrochim. acta. 1987. - Vol. 3, № 5-6. - P. 417-423.

141. Reeves, J.B. Nitrobenzene oxidation vs pyrolysis-gas chromatography mass-spectrometry as a means to determine lignin composition / J.B. Reeves, G.C. Galetti // J. Anal, and Appl. Pyrol. 1993. - Vol. 27, № 1. - P. 195-207.

142. Riggin, R.M. Determination of aniline and substituted derivatives in wastewater by gas and liquid chromatography / R.M. Riggin, T.F. Cole, B.C. Stephen // J. Anal. Chem.- 1983. -Vol. 55, № 12.-P. 1862-1869.

143. Sancher, J.A. The investigation of coating materials for the detection of nitrobenzene with coated quartz piezoelectriccrystals / J.A. Sancher, P.K. Drew, J.F. Alder//J. Anal. Chem. acta. 1986. - Vol. 182,№ 3.-P. 285-291.

144. Santos-Delgado, M.J. Shimulfaneous determination of o- and n-nitrophenol by doide array spectrophotometry and dirivative techniques / M.J. Santos-Delgado, L.V. Perez-Arribas, M.E. Leon-Gonzalez // Fresenius J. Anal. Chem. 1989. — Vol. 343, №7.-P. 705.

145. Scanton, J.J. High-perfomance liquid chromatography of nitrophenols with a swept-potential electrochemical detector / J.J. Scanton, P.A. Flaguer, G.W. Robinson//J. Anal. Chem. acta. 1984. - Vol. 158, №2.-P. 169-177.

146. Spectrophotometric determination of aniline by flow injection analysis in a nonagueous medium / C.R. Berman, G.D. Clark, D.A. Whitman, B.D. Christian // J. Microchem. 1989. - Vol. 39, № 1. - P. 20-24.

147. Study of the aromatic by-products formed from ozonation of anilines in aqueous solution / J. Sarasa, S. Cortes, P. Ormad P et al. // J. Water Res. 2002. - Vol. 36.-№ 12.-P. 3035-3044.

148. The influence of medication "Cerebral" on T-lymphocytes of asthma patients / L.V. Kuznetsova, O.G. Kuznetsov // 4th Int. Congr. Sona 99 (Dakar, Senegal, 12-16 April, 1999). Dacar, 1999.-P. 30.

149. Thorburn, B.D. Identification and determination of aromatic intro compounds by electron spin resonance spectrometry / B.D. Thorburn, A.Z. Eltayeb, B.D. Flockhart // J. Anal. Chem. Acta. 1987. - Vol. 200, № 1. - P. 481-490.

150. Tritz, Y.I. Titration of phenols in nonaqueous solvents / Y.I. Tritz, R.T. Kenn // J. Anal. Chem.- 1993.-Vol. 65, № 5. P. 179-181.

151. Verma, K.K. Detection of nitrobenzene and related aromatics by reduction and indophenol formation / K.K. Verma, D.D. Gupta // J. Anal. Chem. acta. 1987. -Vol. 199, №3.-P. 233-236.

152. Xiong, H. Brainderived peptides are inhibited transynaptic transmission by GABA- В receptors in CAI region of rat hippocampal slices / H. Hiong, A. Baskys, J.M. Woitowicz // J. Brain Res. 1996. - Vol. 737, № 7. - P. 188-194.

153. Zhuang, H. Determination of volatile phenols by a flow injection chemilumi-nescent quench method / H. Zhuang, F. Zhang, Q. Wang // J. Analyst. 1995. -Vol. 120, № l.-P. 121-124.

154. Zissi, U. Biodégradation of p-aminoazzobenzene by Bacillus Subtilis under aerobic conditions / U. Zissi, G. Liberatos, S. Pavlou // J. Industr. Microbiol. Biotech.- 1996.-Vol. 19, № l.-P. 49-55.

155. Zuman, P. Reaction of electrogenerated arylhydroxylamines and nitrosoben-zene in the course freduction of nitrobenzene under conditions of cyclic volt-ammetry / P. Zuman, Z. Figalek // J. Electronal. Chem. 1990. - Vol. 296, № 2. -P. 589-593.