Стратегия применения эффекторов противоопухолевого иммунитета в адоптивной иммунотерапии злокачественных новообразований тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, доктор биологических наук Шубина, Ирина Жановна

• Шубина, Ирина Жановна
• доктор биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации доктор биологических наук Шубина, Ирина Жановна

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 Обзор литературы

1.1 Принципы противоопухолевого иммунитета 12 1.1.1 Иммунологический надзор 15 1.1.2. Иммуноредактирование

1.2 Биотерапевтические (иимунотерапевтические) подходы к лечению 48 злокачественных заболеваний

1.2.1 Вакцинотерапия

1.2.2 Адоптивная иммунотерапия с применением лимфоцитов 55 ГЛАВА 2 Материалы и методы исследования

2.1 Препараты, реактивы, оборудование

2.2 Методы исследования

2.3 Общие данные по пациентам и методика проведения пилотного 82 клинического исследования

ГЛАВА 3 Сравнительная характеристика активированных эффекторов 85 противоопухолевого иммунитета

3.1 Отработка условий генерации смешанной популяции цитокин- 86 активированных натуральных киллерных клеток (а-НК)

3.1.1 Выделение МНЛ из периферической крови

3.1.2 Генерация цитокин-активированных киллеров (смешанной популяции а- 87 НК)

3.2 Изучение особенностей морфологической, иммунофенотипической и 87 функциональной характеристики эффекторных клеток смешанной популяции

а-НК, генерируемых экстракорпорально для адоптивной иммунотерапии

3.2.1 Морфологические особенности смешанной популяции а-НК

3.2.2 Изучение иммунофенотипа смешанной популяции а-НК на разные сутки 95 культивирования

3.2.3 Анализ иммунофенотипа субпопуляции активированных НК (а-НК)

3.2.4 Оценка иммунофенотипа субпопуляции НКТ-клеток в цитокин- 106 активированной смешанной культуре а-НК

3.2.5 Анализ иммунофенотипа субпопуляции Т-регуляторных (Т-рег) клеток в 108 цитокин-активированной смешанной культуре а-НК

3.2.6 Оценка цитотоксической и пролиферативной активности смешанной 112 популяции а-НК

3.2.7 Изучение цитотоксической активности смешанной популяции а-НК по 118 отношению к культурам опухолевых и нетрансформированных клеток

различного гистогенеза

3.2.8 Анализ продукции цитокинов клетками смешанной популяции а-НК

ГЛАВА 4 Генерация смешанной популяции активированных НК-клеток из 132 различных источников

4.1 Получение смешанной популяции а-НК из экссудата, селезенки и

паратуморальных участков печени онкологических больных

4.1.1 Получение мононуклеарных лейкоцитов из периферической крови, экссудата, селезенки и паратуморальных участков печени онкологических больных

4.1.2 Методы оценки МНЛ и смешанной популяции а-НК, полученных из разных источников

4.2 Морфологические, функциональные и иммунофенотипические особенности смешанной популяции а-НК, генерированных из плеврального выпота онкологических больных

4.3 Характеристика и применение смешанной популяции а-НК, генерированных из селезенки онкологических больных

4.3.1 Характеристика больных и их лечения в пилотном исследовании по оценке иммунокррекции с помощью ИЛ-2/а-НК иммунотерапии

4.3.2 Смешанная популяция а-НК, генерированных из селезенки больных раком желудка после радикальной операции со спленэктомией

4.3.3 Применение смешанной популяции а-НК в пилотном исследовании по оценке иммунокррекции с помощью ИЛ-2/а-НК иммунотерапии у больных раком желудка после радикальной операции со спленэктомией

4.4 Характеристика функциональных свойств клеток смешанной популяции а-НК, генерированных из печени и паратуморального участка печени онкологических больных

4.5 Получение смешанной популяции мононуклеарных клеток из дренирующих опухоль лимфатических узлов онкологических больных 4.5.1. Получение биопсийного материала из лимфатических узлов и костного мозга онкологических больных

4.5.2 Определение опухолевых клеток в биопсийном материале с помощью методов иммуноцитохимии и магнитной сепарации

4.5.3 Выявление опухолевых клеток в биопсийном материале

4.5.4 Сравнительный анализ выявления опухолевых клеток в биопсийном материале лимфатических узлов и костного мозга при помощи методов иммуноцитохимии и магнитной сепарации

ГЛАВА 5 Индукция активированных лимфоцитов иммуномодуляторами различного происхождения

5.1 Методологический подход к исследованию влияния препаратов различного происхождения на активацию лимфоцитов

5.2 Пролиферативная активность МНЛ, под воздействием различных иммуномодуляторов

5.3 Цитотоксическая активность клеток МНЛ, под воздействием различных иммуномодуляторов

5.4 Иммунофенотипические особенности клеток смешанной популяции лимфоцитов, под воздействием различных иммуномодуляторов

ГЛАВА 6. Оценка возможности использования смешанной популяции а-НК в клинической практике при локорегионарном лечении злокачественных плевритов

6.1 Эффективность внутриплеврального введения ИЛ-2 и аутологичных а-НК при опухолевых плевритах

6.1.1 Пациенты

6.1.2 Методика внутриплевральной иммунотерапии

6.1.3 Методика получения аутологичных активированных лимфоцитов

6.1.4 Оценка результатов внутриплевральной ИЛ-2/а-НК и ИЛ-2

иммунотерапии

6.1.5 Цитологическая оценка в процессе проведения внутриплевральной ИЛ-

2/а-НК и ИЛ-2 иммунотерапии

6.2 Эффективность внутриплеврального введения ИЛ-2 и аллогенных а-НК

при опухолевых плевритах

6.2.1 Пациенты и методика проведения иммунотерапии

6.2.2 Оценка эффективности и побочной реакции при внутриплевральной 206 иммунотерапии ИЛ-2 и ИЛ-2/аллогенные а-НК

6.2.3 Цитологическая оценка эффективности внутриплевральной 209 иммунотерапии

6.3. Алгоритм проведения диагностики, мониторинга и лечения

экссудативных опухолевых плевритов

ГЛАВА 7. Генерация и характеристика дендритных клеток — ключевых

эффекторов противоопухолевого иммунитета

7.1. Характеристика дендритных клеток, получаемых из костномозговых

предшественников мышей

7.1.1 Морфологическая характеристика ленлоитных клеток на иазных этапах

Г Т 11 ' "X х

созревания

7.1.2 Иммунофенотипическая характеристика дендритных клеток на разных 221 этапах созревания

7.1.3 Фагоцитарная активность дендритных клеток на разных этапах 223 созревания

7.1.4 Продукция цитокинов дендритными клетками

7.1.5 Влияние дендритных клеток на пролиферативную активность 228 лимфоцитов

7.2 Характеристика дендритных клеток, получаемых из

моноцитов/макрофагов периферической крови здоровых доноров

7.2.1 Морфологическая характеристика дендритных клеток, получаемых из 234 моноцитов/макрофагов периферической крови здоровых доноров, на разных

этапах созревания

7.2.2 Иммунофенотипическая характеристика дендритных клеток, 238 получаемых из моноцитов/макрофагов периферической крови здоровых

доноров, на разных этапах созревания

7.2.3 Изучение апоптоза в популяциях дендритных клеток, генерированных из 243 моноцитов/макрофагов периферической крови здоровых доноров, на разных

этапах созревания

7.2.4 Оценка функциональной активности дендритных клеток при их 246 воздействии на пролиферацию и цитотоксичность лимфоцитов, полученных

из периферической крови здоровых доноров

7.3. Оценка комбинированного применения смешанной популяции а-НК и

зрелых ДК для противоопухолевой иммунотерапии мышей

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

а-НК активированные натуральные киллеры

АПК антиген представляющие клетки

ГЗТ гиперчувствительность замедленного типа

ГКГ главный комплекс гистосовместимости

Г-КСФ гранулоцитарный колониестимулирующий фактор

ГМ-КСФ гранулоцитарно/макрофагальный колониестимулирующий фактор

ДК дендритные клетки

ил интерлейкин

ИФН интерферон

ИФА иммуноферментный анализ

ЛАК лимфокин-активированные киллеры

ЛПС липополисахарид

МКА моноклональные антитела

МНК мононуклеарные клетки

МНПК мононуклеарные клетки периферической крови

мнл мононуклеарные лейкоциты

нк натуральные киллеры

нкт натуральные киллеры Т-клетки

ОАА опухоль-ассоциированный антиген

ПКС полная культуральная среда

ТФР трансформирующий фактор роста

Тх Т хэлперы

ФСБ Фосфатно-солевой буфер

ФТС фетальная телячья сыворотка

ФИО фактор некроза опухолей

цтл цитотоксические лимфоциты

ЭДТА этилендиаминтетраацетат

АРС (англ.) аллофикоцианин

CCL СС-лиганд

CD cluster of differentiation - кластер дифференцировки лимфоцитов

CIK cytokine induced killers

CTL cytotoxic T lymphocytes

ELISA enzyme-linked immunosorbent assay

FasL Fas ligand

FITC ФИТЦ, флуоресцеинизотиоционат

FOXP3 (англ.) внутриклеточный транскрипционный фактор

GM-CSF granulocyte macrophage colony stimulating factor (ГМ-КСФ)

IFNAR1 interferon-a receptor

MCA methylcholanthrene

MHC major histocompatibility complex (главный комплекс

гистосовместимости)

MFI mean fluorescence intensity (средняя интенсивность флуоресценции)

NK natural killer

NKT natural killer T ctlls

РЕ (англ.) фикоэритрин

pfp perforin

TLR То11-подобный рецептор

TNF (англ.) tumor necrosis factor (фактор некроза опухоли)

TCR T-cell receptor

TIL tumor-infiltrating lymphocytes

TPA 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate

TRAIL tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Стратегия применения эффекторов противоопухолевого иммунитета в адоптивной иммунотерапии злокачественных новообразований»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

Клиническое применение методов иммунотерапии (биотерапии) злокачественных новообразований основано на способности иммунной системы организма элиминировать злокачественно трансформированные клетки [Smyth M.J., 2000; Барышников, А.Ю., 2003; Kim R., 2007; Schmidt-Wolf I.G., 1999; Olioso P., 2009]. Несмотря на более чем 20-летнюю историю исследований, противоопухолевая иммунотерапия остается новым, перспективным методом лечения злокачественных новообразований, рассматриваемая в качестве четвертой модальности в ряду традиционных методов хирургической, лучевой и химиотерапии опухолей [Shi М., 2004; Hui D., 2009; Jiang J.T., 2010]. Актуальность внедрения в клиническую практику онкологии подходов иммунотерапии обусловлена недостаточной эффективностью современных схем консервативного лечения так называемых иммуночувствительных форм неоплазий (таких как меланома и рак почки) и ряда относительно химиорезистентных форм рака (немелкоклеточный рак легкого, рак желудка и др.) [Jiang J., 2006; Niu Q., 2011; Hontscha С, 2011]. Расширенные хирургические операции (радикальные и условно-радикальные) позволяют удалить новообразования и эффективно предупреждают развитие рецидивов опухоли, однако вероятность возникновения отдаленных метастазов у этих пациентов остается достаточно высокой, что свидетельствует о необходимости проведения системного лечения даже при местно-распространенных формах злокачественных новообразований [Pages F, 2005; SagioloD., 2011].

По данным первых клинических исследований применение иммунотерапии после хирургической резекции опухоли увеличивает безрецидивный период, в некоторых случаях наблюдается стабилизация процесса злокачественного роста опухоли или регрессия метастазов.

Актуальной проблемой является поиск методов биотерапии, направленных на активацию противоопухолевого иммунитета и повышение распознаваемости опухолевых антигенов [Pittet M.J., 2001; Romero P., 2006; Parmiani G., 2007; Provinciali M., 2009]. Терапевтические подходы противоопухолевой иммунотерапии основаны на стимуляции врожденного и приобретенного иммунитета в результате воздействия на неспецефическое и адаптивное эффекторное звено иммунной системы. Используемые для адоптивной иммунотерапии получаемые ex vivo эффекторы врожденного и приобретенного иммунитета (натуральные киллеры (НК), Т-лимфоциты, цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ), инфильтрирующие опухоль Т-клетки (ОИЛ), НКТ-клетки, дендритные клетки (ДК) претерпевают дифференцировку под воздействием различного рода агентов и приобретают определенные морфологические, иммунофенотипические и функциональные свойства [Hiroishi К, 2000; Smyth M.J., 2001; Antony P., 2005; Antony P., 2005; Xue Sh., 2007; Zwirner, N. W., 2007; Finn O.J., 2009; Tan G., 2011]. Однако к настоящему времени многие аспекты, характеризующие применяемые в клинической практике эффекторы иммунитета, остаются неисследованными, а имеющиеся литературные данные часто противоречивы.

Практическое применение и повышение эффективности иммунотерапии злокачественных новообразований связано с решением сложного комплекса проблем на разных этапах этого метода лечения. Ключевым звеном здесь является разработка методики стандартизации и контроля качества клеточных препаратов на основе морфологической, фенотипической и функциональной характеристики эффекторов иммунитета. Кроме того, необходим поиск и оценка оптимальных иммуностимулирующих препаратов, и режимов генерации функционально активных эффекторных клеток. Важным и недостаточно разработанным аспектом иммунотерапии злокачественных новообразований является определение схем лечения, и выбор наиболее чувствительных в отношении данного метода терапии форм злокачественных заболеваний.

Таким образом, ввиду большого разнообразия методов клеточной технологии, отсутствия стандартизованных параметров и методов контроля качества используемых клеток-эффекторов, а также неопределенность в подборе контингента онкологических больных, для которых данный вид иммунотерапии будет наиболее эффективным, и отсутствие ясных рекомендаций в отношении оптимальных режимов проводимой иммунотерапии, становится необходимой разработка современной стратегии получения и применения эффекторов противоопухолевого иммунитета в адоптивной иммунотерапии злокачественных новообразований.

Цель работы:

Целью работы является изучение особенностей дифференцировки эффекторов противоопухолевого иммунитета под воздействием активационных факторов различной природы и экспериментальное обоснование стратегии применения адоптивной иммунотерапии злокачественных новообразований.

Задачи исследования:

1. Изучить особенности морфологической, иммунофенотипической и функциональной характеристики эффекторных клеток врожденного и приобретенного иммунитета человека, генерируемых экстракорпорально для адоптивной иммунотерапии.

2. Оценить возможность генерации активированных эффекторных иммуннокомпетентных клеток из различных источников.

3. Изучить влияние отечественных иммуномодулирующих препаратов («Ронколейкин», «Дикарбамин», поликомпонентная вакцина «Иммуновак-ВП4», «Нейпоген», «Бивален», «Галавит») на морфологические, иммунофенотипические и функциональные свойства эффекторных клеток иммунитета.

4. Определить эффективность иммунотерапии с использованием активированных ex vivo интерлейкином-2 лимфоцитов и пульсированных

лизатом опухоли дендритных клеток (в монорежиме) на экспериментальных животных с перевиваемыми опухолями.

5. Изучить эффективность комбинированной иммунотерапии с использованием активированных интерлейкином-2 лимфоцитов и вакцин на основе дендритных клеток на экспериментальных животных с перевиваемыми опухолями.

6. Оценить возможность оптимального применения активированных эффекторов противоопухолевого иммунитета для иммунотерапии онкологических больных в пилотном клиническом исследовании.

7. Разработать современную стратегию получения и применения стандартизованных эффекторов противоопухолевого иммунитета для адоптивной иммунотерапии злокачественных новообразований.

Научная новизна работы:

Впервые представлена комплексная морфологическая,

иммунофенотипическая и функциональная характеристика эффекторов противоопухолевого иммунитета, используемых для адоптивной иммунотерапии злокачественных заболеваний.

Получены новые данные об особенностях дифференцировки эффекторных клеток иммунной системы при их генерации ex vivo из различных источников и при воздействии стимулирующих препаратов различного механизма действия.

Впервые проведена оценка наиболее эффективного клинического применения смешанной популяции активированных лимфоцитов в лечении злокачественных плевритов.

Разработана современная стратегия получения и применения активированных эффекторов противоопухолевого иммунитета для адоптивной иммунотерапии злокачественных новообразований.

Практическая значимость:

Разработаны методические рекомендации по получению смешанной культуры активированных натуральных киллерных клеток, определяющие оптимальные условия генерации эффекторов противоопухолевого иммунитета со стандартной морфологической, иммунофенотипической, функциональной характеристикой для использования в адоптивной иммунотерапии опухолей.

Предложено экспериментальное обоснование проведения противоопухолевой иммунотерапии с применением экстракорпорально активированных эффекторов иммунной системы, воздействующих как на звено врожденного, так и адаптивного иммунитета.

Показана высокая эффективность и удовлетворительная переносимость адоптивной иммунотерапии злокачественных плевритов с применением экстракорпорально активированных иммуннокомпетентных клеток.

Полученные данные создают основу для разработки клинических протоколов по иммунотерапии онкологических больных. Внедрение в клиническую практику результатов работы обеспечит повышение эффективности адоптивной иммунотерапии при локорегионарном введении активированных эффекторов иммунитета при лечении злокачественных плевритов.

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННАЯ КОНЦЕПЦИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ИММУНИТЕТА

1.1. Принципы противоопухолевого иммунитета

Введение

Несмотря на огромные достижения в области иммунологии, роль иммунной системы в защите организма человека от злокачественных новообразований раскрыта далеко не полностью. Проблема взаимоотношений между неопластическими клетками и системами врожденного и приобретенного иммунитета находит отражение в основных принципах противоопухолевого иммунитета. Главное положение теории противоопухолевого иммунитета - это существование системы иммунологического надзора.

Еще в начале XX века Пауль Эрлих [Ehrlich Р. , 1909] предположил, что у человека с высокой частотой возникают "аномальные образования" - опухоли, которые неизбежно разовьются в такие формы, которые приведут к смертельным заболеваниям, если их не будет устранять иммунная система. Это предположение получило дальнейшее развитие и обоснование, подтверждаемое данными многочисленных экспериментальных исследований.

Ф. М. Бернет, сформулировавший в конце 1950-х годов основные принципы иммунологического надзора [Burnet М., 1957], полагал, что вследствие часто происходящих соматических мутаций в эволюции возникла такая система, которая стала ответственной за поддержание постоянства внутренней среды организма - гомеостаза. Рассматривая иммунитет как реакцию, направленную на дифференциацию всего "своего" от всего "чужого", он исследовал вопрос о значении иммунных механизмов в поддержании генетической целостности организма в период индивидуального (онтогенетического) развития. Гипотеза Бернета состояла в том, что иммунная система постоянно следит за появлением в организме измененных клеток и при распознавании разрушает их. Таким образом, согласно данной концепции,

противоопухолевый иммунный ответ формируется на ранней стадии развития опухоли и обеспечивает ее уничтожение в большинстве случаев до того, как она даст клинические проявления. Бернет и Томас [Burnet M., 1957, Thomas L. , 1959], высказывали также предположение, что влияние иммунной системы имеет значение для торможения роста опухоли и регрессии уже развившихся неопластических новообразований. В качестве подтверждения этих взглядов приводились различного рода известные факты:

в При патологоанатомическом исследовании может быть выявлено больше опухолей, чем по клиническим проявлениям.

• Во многих случаях опухоли инфильтрированы лимфоцитами и иногда это может быть благоприятным признаком.

• Возможна спонтанная регрессия опухолей.

• Наиболее часто опухоли возникают у новорожденных и в старческом возрасте, т.е. когда иммунная система функционирует менее эффективно.

• Опухоли часто развиваются у лиц с иммуносупрессией.

Последующие исследования продемонстрировали наличие опухолевых антигенов на химически и вирусо-индуцированных опухолях у мышей и подтвердили состоятельность концепции иммунного надзора [Klein, 1966; Old и Boyse, 1966]. Согласно положениям теории иммунного надзора, можно было ожидать, что у мышей с поврежденной иммунной системой значительно повышается частота возникновения спонтанных опухолей или более быстрое появление химически-индуцированных опухолей. Однако, когда это предположение было проверено в экспериментах на бестимусных иммунодефицитных мышах, оказалось, что частота возникновения спонтанных опухолей и развитие химически индуцированных новообразований не отличалась от таковой в сравнении с иммунокомпетентными животными [Stutman, 1974, 1975]. Вследствие таких разочаровывающих результатов, теория иммунного надзора на некоторое время была предана забвению. Оценивая ретроспективно эти данные, теперь можно сказать, что у бестимусных мышей нарушена система адаптивного иммунитета, однако эффекторы врожденного

иммунитета, а именно натуральные киллеры (НК-клётки, NK) продолжают активно функционировать. Спустя два десятилетия вновь стали появляться данные экспериментальных исследований, свидетельствующие в пользу теории иммунобиологического надзора.

Накопленные в последние несколько лет данные убедительно свидетельствуют об определенной роли иммунной системы организма при возникновении, развитии и прогрессии злокачественного заболевания, также как и при образовании метастазов [Wang, Е., 2004; Xue Sh., 2007; Raman, D. 2007; Dell'Agnola, С. 2007; Oblel, D.A., 2009; Manjili, M. H., 20011]. У многих онкологических больных, хотя и не у всех, отмечается противоопухолевый клеточный или гуморальный иммунный ответ, или одновременно оба типа иммунной реакции на опухоль-ассоциированные антгены (ОАА) [Pawelec, G., 2004; Tsujimura, К., 2004; Romero P. et al., 2006; Dunn GP. et al., 2006]. Сам факт существования такого противоопухолевого иммунитета у больных со злокачественными новообразованиями указывает на то, что в организме этих больных может быть индуцирован более выраженный иммунный ответ на ОАА. Опухолевая прогрессия представляет собой многоступенчатый процесс, ведущий от единственной трансформированной клетки к массе неконтролируемо пролиферирующих злокачественных клеток, который сопряжен с целой серией генетических изменений, происходящих в течение некоторого периода времени - месяцев или лет, в результате чего образуется устойчиво сформированная злокачественная опухоль [Zhang L. et al., 1997]. Однако, в течение этого периода и иммунная система организма, и сами развивающиеся опухолевые клетки находятся в активном взаимодействии: вновь образовавшиеся опухолевые клетки, которые распознаются эффекторами иммунитета, элиминируются, но затем замещаются генетически трансформированными клонами, резистентными к воздействию иммунной системы, и таким образом дают начало гетерогенной популяции злокачественных клеток, обнаруживаемой в любой опухоли. Опухоль представляет собой генетически нестабильную структуру, и появление новых

генетических клонов, формирующих генетическую гетерогенность, обеспечивает выживаемость опухоли в условиях активной иммунной системы организма. Только те опухолевые клетки, которым удается избежать распознавания иммунокомпетентными клетками, смогут выжить, в то время как трансформированные клетки, распознаваемые иммунной системой, элиминируются сразу, как только образуются. Развитие опухоли сопровождается длительным балансированием между попытками организма остановить рост опухоли и тем преимуществом, которое опухоль получает в результате генетических изменений, модифицирующих ее микроокружение, и способствующих ускользанию от иммунного воздействия.

1.1.1.Иммунологический надзор

Можно выделить несколько уровней доказательств, указывающих на то, что иммунная система организма реагирует на процессы, связанные с развитием злокачественного новообразования, как на ранних этапах, так и на поздних стадиях. На ранней стадии в опухоли и даже в предраковых очагах, таких как меланоцитный невус, часто наблюдается инфильтрация гематопоэтическими клетками, включая лимфоциты, макрофаги, и, иногда, гранулоциты. [Kornstein MJ. Et al., 1983; Von Kleist S. 1987; Antony, P. A., 2005]. Инфильтрация опухолевой ткани иммуннокомпетентными клетками на поздних стадиях развития опухоли (напр., большая концентрация опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов (ОИЛ или TIL), по предположению авторов некоторых ранних исследований, связывали с более благоприятным прогнозом выживаемости больных (обзор этих работ опубликован Whiteside TL. [Whiteside TL., 1993]. Позднее, по результатам проведенных исследований группа авторов [Huh JW, 2012] выполнила широкий многовариантный анализ клеточных взаимодействий в опухолевом микроокружении, учитывая тип, плотность, локализацию и функцию иммунных клеток, обнаруженных в операционном материале больных с колоректальным раком. Авторы других исследований продемонстрировали, что иммунная реакция в опухолевом очаге оказывает

влияние на клинический эффект [Galon J. et al., 2006; Galon J. et al.„ 2007; Pages F. et al. , 2005]. Так, повышенная концентрация Т-клеточной инфильтрации с большой долей CD8+ Т-лимфоцитов в очаге первичного колоректального рака ассоциировалась со значительной степенью предотвращения возникновения рецидивов [Pages F. et al., 2005]. Более того, те же авторы показали, что по ко-экспрессии генов, опосредующих цитотоксичность и адаптивный иммунный ответ по пути Тх1 можно было точно прогнозировать выживаемость больных с колоректальным раком независимо от метастатического статуса. [Camus M. et al., 2009]. В итоге, результаты этих многофакторных анализов опухоль-инфильтрирующих клеток in situ предполагают, что иммунные клетки могут и, в действительности, часто играют большую роль в контроле опухолевого роста, однако оба аспекта в опухолевом микроокружении - врожденный и приобретенный — изменяют баланс иммунных факторов, необходимых для оптимального контроля прогрессии опухоли [Camus M. et al., 2009, Friedman KM, 2012]. В культуре и исследованиях in vitro можно увеличить популяцию и повысить функциональную активность цитотоксических опухоль-специфических Т-лимфоцитов (ЦТЛ или CTL), выделенных из периферической крови или ОИЛ онкологических больных. [Whiteside TL., 1993]. Были проведены многочисленные исследования по изучению роли ОИЛ и их возможной корреляции с прогнозом заболевания [напр., West NR, 2011; Hwang WT, 2012]. Наблюдения, подтвержденные данными различных экспериментальных исследований, позволяют предположить, что предшественники таких ЦТЛ присутствуют в периферической крови или в области злокачественного новообразования, и их пролиферация может быть индуцирована аутологичными дендритными клетками (ДК), пульсированными соответствующими опухолевыми эпитопами, которые используются в качестве антиген-презентирующих клеток (АПК). Присутствие в периферической крови онкологических больных опухоль-пептид-специфических Т-клеток было четко показано в более поздних исследованиях прямыми измерениями с тетрамерами и методом проточной цитометрии [Lee PP. et al., 1999; Pittet MJ. et al., 2001;

Romero P. et al., 2006]. Более того, оказалось, что у онкологических больных количество пептид-специфических Т-клеток было выше, чем у здоровых людей [Hoffmann ТК. et al., 2002]. Наконец, во многих исследованиях стали успешно применять методику SEREX, основанную на определении опухоль-специфических антител в сыворотке онкологических больных, для выявления опухолевых антигенов. [Sahin U. et al., 1997]. Эти данные, а также идентификация многочисленных опухоль-ассоциированных антигенов [Тюряева И.И., 2008], оказавшихся иммунногенными в том смысле, что они индуцируют гуморальный иммунный ответ, клеточный иммунный ответ, или одновременно и тот и другой при использовании иммуннокомпетентных клеток человека in vitro и на моделях опухолевого роста у экспериментальных животных in vivo, убедительно свидетельствуют о том, что иммунная система организма распознает опухоль и реагирует на ее развитие генерацией локального и системного иммунного ответа [Ostrand-Rosenberg S., 2008; Zitvogel L. et al., 2008; Барышников, А.Ю., 2003].

Если иммунная система не игнорирует, а распознает злокачественное новообразование, то почему опухоль продолжает прогрессировать? Для ответа на этот вопрос можно принять к рассмотрению несколько объяснений. Во-первых, уже долгое время в качестве одной из возможных причин рассматривается отсутствие «сигнала опасности» [Matzinger Р. et al., 1998] -такого, какой формируется при проникновении в организм патогенов во время инфекционного заражения. Распознавание дендритными клетками патоген-ассоциированного паттерна через вездесущие Toll-like рецепторы ведет к эффективной активации и созреванию ДК. В результате этого генерируется значительный клеточный и гуморальный ответ на бактериальный или вирусный антиген, преимущественно потому, что иммунная система воспринимает инфекцию как сигнал опасности [Matzinger Р. et al., 1998], создавая благоприятный эффект для организма [Mushegian А., 2001; Pasare С. 2003]. Однако известно, что функциональные Toll-like рецепторы экспрессированы на многих солидных опухолях человека [Szczepanski MJ. et al., 2009; Samara KD,

2012; МиссюН М, 2012], и в соответствии с результатами последних исследований, опухоль использует их для обеспечения собственного роста и/или для защиты от спонтанного апоптоза, опосредованного действием иммунитета или индуцированного лекарственными препаратами. [БгсгерапзЫ Ш. ег а1., 2009; иеп^и 8. ег а1., 2006].

Во вторых, ОАА воспринимаются иммунной системой организма как «свои» или «измененные свои» антигены, которые индуцируют лишь слабую иммунную реакцию, поскольку иммунная толерантность предотвращает развитие иммунного ответа на свои антигены. Единственно «уникальные» ОАА представлены мутированными антигенами, и они высоко иммунногенны и индуцируют жесткую иммунную реакцию [НЫЫет М, е1 а1., 1991]. Однако в действительности обнаружено лишь несколько таких мутированных антигенов, а подавляющее большинство известных ОАА слабо иммунногенны или вовсе толерогенны. В контексте вышеизложенного злокачественное новообразование может рассматриваться как аутоиммунное явление, при котором толерантность к своим антигенам препятствует эффективному иммунному ответу против ОАА. У большинства онкологических больных, которым не проводили лучевую или химиотерапию, развивается нормальный иммунный ответ на вирусные или бактериальные антигены, однако, у них не возникает иммунной реакции к собственным ОАА. За исключением поздней стадии заболевания, у таких больных чаще всего наблюдается нормальная реакция гиперчувствительности замедленного типа к названным антигенам, но у них же отмечается анергия к аутологичным ОАА. Кроме того, что толерантность к своим антигенам препятствует генерации противоопухолевого эффекта у онкологических больных, существует еще один фактор, который оказывает чрезвычайно сильное влияние на иммунный ответ - это микроокружение опухоли. Каждая опухоль формирует свою собственную среду микроокружения, которая характеризуется наличием иммунносупрессивных факторов и избытком ОАА, продуцируемых и высвобождаемых растущей опухолью. Данные исследований свидетельствуют о том, что опухоли

продуцируют широкий спектр иммунно-ингибирующих факторов, которые оказывают либо локальное, либо системное влияние на противоопухолевый иммунитет [Cunha GR, 2003; Whiteside TL., 2008; Noguera R, 2012]. Таким образом, не удивительно, что у онкологических больных противоопухолевый иммунитет может быть слабым, неэффективным или вовсе отсутствовать в зависимости от характера взаимодействий между опухолью и организмом, а также в зависимости от выраженности регуляторных механизмов, контролирующих иммунную толерантность.

На эффективность противоопухолевого иммунитета может также влиять постепенное снижение активности иммунной системы организма с возрастом. [Provinciali М., 2009]. Повышенная заболеваемость онкологическими заболеваниями у лиц пожилого возраста может быть связана с иммунологическим старением (т.е. прогрессивной реструктуризацией иммунной системы и снижением способности иммунных клеток реагировать на активирующие стимулы, и в то же время повышенной реакцией на толерогенные сигналы), [Provinciali М., 2009]. Иммунологическое старение может значительно влиять на эффективность противоопухолевой иммунотерапии, и поэтому было сделано предложение, чтобы клинические исследования иммуностимулирующих препаратов проводились у пожилых пациентов [Provinciali М., 2009].

Последние данные многофакторных анализов первичных и метастатических опухолей человека (напр., колоректальный рак) выявили несколько главных иммунных «координационных профилей», наличие которых определяется балансом между способностью опухоли ускользнуть от иммунной реакции и выраженностью иммунного ответа организма, что и является областью взаимодействия опухоли и организма [Camus М. et al., 2009]. В данном контексте важно рассмотреть различия между первичной и метастатической опухолью. Метастатические опухоли характеризуются не только более иммунносупрессивными свойствами, но оказывается, они хуже распознаются эффекторными клетками иммунитета специфическими к

опухоль-ассоциированным антигенам. Это может быть следствием нарушения экспрессии компонентов механизма процессинга антигенов (АРМ или МПА), молекул МНС или и того и другого в опухоли и ее метастазах [Ferrone S, 2007]. Поскольку различные количества копий отдельных тримолекулярных комплексов МНС-пептид-р2- микроглобулин ф2 м) могут привести к дифференцированному распознаванию Т-клеток, этот аспект взаимодействия опухоль — иммунная клетка представляется чрезвычайно важным [Ferrone S, 2007; Ferris RL et al., 2006]. В сравнительном исследовании по оценке экспрессии HLA-лиганда и тРНК в опухоли первичного почечно-клеточного рака, метастазах почечно-клеточного рака и в нормальной ткани почек было выявлено, что первичная опухоль и метастазы имеют больше сходства по этим параметрам, чем опухоль и нормальная ткань [Stickel JS. et al., 2009]. Это наблюдение может служить хорошим обоснованием применения иммуннотерапии, основанной на использовании пептидов, поскольку в таком случае возможно преимущественное воздействие на опухоль и ее метастазы, а не на нормальную ткань.

Противоопухолевый иммунный ответ: врожденный или приобретенный. Противоопухолевый иммунный ответ, как частная реакция иммунной системы организма, может реализовываться через механизмы как врожденного (естественный), так и приобретенного (адаптивный) иммунитета. Врожденный иммунитет определяется эффекторными клетками или растворимыми факторами, которые естественным образом присутствуют в тканях и жидкостях организма и могут влиять на процесс опухолевого роста или выживаемость опухоли. Среди гемопоэтических клеток такие эффекторы, как макрофаги, гранулоциты, натуральные киллеры (CD3 CD56+), Т-клетки не рестриктированные по МНС (CD3+CD56 ) и у5Т-клетки, обладают естественной способностью элиминировать опухолевые клетки-мишени [Provinciali М., 2009].

Кроме того, в сыворотке крови онкологических больных могут обнаруживаться естественные антитела со специфическими свойствами против

поверхностных антигенов опухолевых клеток [Sahin U. et al., 1997; Thakur A, 2011]. Другие сывороточные компоненты, такие как система комплемента, С-реактивный белок, связывающий маммозу белок и сывороточный амилоидный белок также играют важную роль в реализации врожденного иммунитета [Fearon DT. et al., 1996]. Адаптивный иммунный ответ на опухоль требует участия Т-лимфоцитов, экспрессирующих Т-клеточный рецептор CD3+ (TCR+), когда они распознают опухолевые пептиды, связанные с собственными молекулами МНС, которые экспрессируются на поверхности АПК. До сих пор мало известно о молекулярных сигналах и субпопуляциях клеток, участвующих в направленном воздействии на АПК, таких как ДК, ведущем к реализации толерогенной, а не иммунногенной программы в ответ на экспрессию антигенов. Как было указано выше, опухоли также могут выступать в качестве АПК, хотя низкий уровень экспрессии молекул МНС I класса, МНС II класса или и тех и других на поверхности опухолевой клетки ведет к тому, что такие свойства АПК оказываются неэффективными [Ferrone S, 2007]. Вероятно, ОАА захватываются ДК, находящимися у опухолевого очага, которые осуществляют процессинг антигенов и представляют их Т-клеткам в опухоль-дренирующих лимфатических узлах в форме тримолекулярного комплекса пептид- ß2M-MHC [Ferris RL et al., 2006]. Для реализации ответа адаптивного иммунитета необходимо наличие Т-лимфоцитов, экспрессирующих соответствующие TCR. Распознавание пептидов и связывание их с вариабельными доменами TCR инициирует сигнальные пути (сигнал 1), что ведет к активации Т-клеток. [Irving ВА. et al., 1991; Canderan G, 2010; Yang S, 2011]. Этот процесс подразумевает предшествующую сенсибилизацию и клональную экспансию Т-клеток памяти в ответ на соответствующий опухолевый эпитоп (анамнестический или ответ памяти). С другой стороны, предшественники Т-клеток, экспрессирующие TCR могут быть примированы соответствующими пептид-МНС лигандами на поверхности АПК, и последующие процессы на уровне противоопухолевых эффекторных клеток могут рассматриваться как первичный иммунный ответ. В любом случае, необходимо участие костимулирующих молекул (сигнал 2) для

развития иммунной реакции [Callahan МК, 2010; Seliger В, 2012] и, как только запущена пролиферация Т-клеток, становится необходимым присутствие определенных цитокинов (сигнал 3) для поддержания иммунного ответа. [Kalinski P. et al., 1999, Mocellin S, 2001; Hsiao YW, 2008; Alshaker HA, 2011]. Полученные данные указывают на ключевую роль сигнала 3 в развитии противоопухолевой иммунной реакции или ее прекращения [Kalinski P. et al., 1999; Sheu ВС, 2008; Pellegrini M, 2010]. Как и все иммунные реакции, специфический иммунный ответ на ОАА не продолжается до бесконечности, а достигнув своего пика, затем сходит на убыль, и восстанавливается баланс, существовавший до момента активации. Еще не определен точный механизм прекращения иммунной реакции, было сделано предположение о роли регуляторных Т-клеток (Трег), а также других механизмов, контролирующих иммунную реактивность, однако ясно одно - события, происходящие в опухолевом микроокружении, играют доминирующую роль в этих реакциях.

Противоопухолевый иммунитет может быть местным или системным. Местная реакция или in situ относится в основном к ОИЛ (TIL), которые накапливаются в области солидных опухолей, но роль которых в прогрессии опухолей все еще остается крайне противоречивой. Долгое время считалось, что ОИЛ представляют один из аспектов противоопухолевого иммунитета, однако, по мнению некоторых исследователей, ОИЛ являются жертвами опухолевого микроокружения, поскольку их эффекторные функции часто нарушены, предположительно теми факторами, которые продуцирует опухоль. [Whiteside TL., 2006]. Есть мнение о том, что неэффективный противоопухолевый ответ, опосредованный ОИЛ, способствует опухолевой прогрессии [Estrela-Lima А, 2010; Carvalho MI, 2011; Turcotte S, 2011] Системный противоопухолевый иммунитет, выраженный в виде реакции гиперчувствительности замедленного типа или в виде Т-клеточного ответа, который в различных исследованиях ex vivo регистрируют в периферической крови онкологических больных, продемонстрировать на самом деле сложно, и специфический ответ против ОАА представляется скорее иллюзорным. Тем не

менее, с помощью высокочувствительного метода проточной цитометрии с использованием множественного окрашивания определяется количественное содержание лимфоцитов CD8+, специфичных к ОАА, и CD4+ Т-клеток в периферической крови онкологических больных. [Romero Р. et al., 2006]. Кроме того что уровень ответа в значительной степени варьирует, неспецифический и специфический к ОАА пролиферативный и цитотоксический ответ лимфоцитов перифекрической крови онкологических больных оказался, по крайней мере, частично, нарушен [Uzzo RG. et al., 1999; Reichert ТЕ. et al., 2002; Whiteside TL., 2006]. Было обнаружено, что одни и те же функциональные нарушения ОИЛ наблюдаются в их популяции в периферической крови и лимфатических узлах больных со злокачественными заболеваниями [Reichert ТЕ. et al., 1998; Whiteside TL. 2006]. Таким образом, было сделано заключение о том, что в целом, злокачественные опухоли человека оказывают глубокий супрессивный эффект как на местный, так и на системный противоопухолевый иммунитет у этих больных.

В отличие от неэффективности противоопухолевого иммунного ответа в отношении опухолевой прогрессии у человека, большое количество данных, полученных в доклинических исследованиях на опухолевых моделях экспериментальных животных, позволяют сделать вывод о том, что иммунная система может предотвращать рост опухоли или вызывать ее отторжение [Cavallo F. et al., 2006; Higashijima J, 2009; Thacker RI, 2012; Eslami NS, 2012]. В условиях эксперимента, моделирующего профилактику, вакцинация животных с использованием ОАА плюс адъювантный препарат, защищает животных от развития опухоли при повторной трансплантации опухолевых клеток. [Lollini PL. et al., 2005]. Кроме того, иммуннотерапия злокачественных опухолей с устойчивым ростом при использовании цитокинов, адоптивного переноса иммуннокомпетентных клеток или иммунномодулирующих препаратов приводит к отторжению опухоли, при условии, что опухоль еще не достигла поздней стадии. Примечательно, что такие результаты стабильно регистрировались в экспериментах на мышах с опухолями, индуцированными

канцерогенами, вирусами, а также спонтанно возникающими злокачественными новообразованиями, что позволяет предположить существование фундаментальных различий между иммунным ответом у мышей и у человека. Действительно, оказывается, что эти различия могут быть следствием значительно большей иммунногенности мышиных ОАА, которые в большинстве случаев содержат вирус- или канцероген-ассоциированные эпитопы и т.о. являются скорее «чужими», чем «своими» эпитопами. Другим объяснением таких результатов может быть то, что экспериментальные мышиные опухоли закрепляются, растут, прогрессируют и удаляются с помощью терапии в течение очень короткого времени, необходимого для проведения эксперимента, не оставляя времени для формирования механизма ускользания опухоли от иммунного воздействия. В противоположность этому, диагностика и лечение злокачественных заболеваний у человека начинается после нескольких лет сосуществования опухоли и организма. Трансплантация и закрепление опухоли у мышей - это сложный процесс, во время которого мобилизуется защитная система организма животного, в отличие от спокойного сосуществования опухолевых клеток и иммунной системы человека в течение длительного времени. Для того, чтобы свести к минимуму эти различия, были созданы трансгенные мышиные модели, которые позволяют гарантированное, генетически опосредованное развитие опухоли в «спонтанной» среде окружения. [РаппеШт Т, е1 а1., 2004]. Особенно нужны были трансгенные мышиные модели при разработке профилактических противоопухолевых вакцин [ЬоШт РЬ. е1 а1., 2005], а полученная в этих исследованиях информация позволяет поддержать разработку иммуннопрофилактики рака у человека. Тем не менее, в настоящее время, трудно было бы транслировать положительные результаты, наблюдаемые в эксперименте на мышах, на иммунотерапию опухолей поздних стадий у человека. Вполне вероятно, что многочисленные и разнообразные механизмы ускользания опухоли от иммунного воздействия, которые формируются в течение длительного периода роста опухоли в организме человека и ее взаимодействия с организмом, обеспечивают

злокачественному новообразованию человека преимущества, которые не могут сформироваться у мышиных опухолей в экспериментальных условиях.

Опухоль-ассоциированные антигены. Прогресс в разработке противоопухолевых вакцин в последнее время был в большей степени обусловлен доступностью хорошо охарактеризованных ОАА, многие из которых были обнаружены в последнее десятилетие. [Parmiani G. et al., 2007]. Большинство из этих ОАА имеют в основе свои собственные белки, либо мутированные, либо каким либо другим образом дифференцированно экспрессирующиеся в нормальных и опухолевых клетках, как это происходит с онкогенами, онкофетальными или раково-тестикулярными антигенами. Основные категории ОАА, указанные в литературе [Parmiani G. et al., 2007; Finn OJ. et al., 2009], которые используются в качестве потенциальных базовых компонентов для иммунотерапии включают следующие группы антигенов :

- Онкофетальные : а-фетопротеин (АФП), раковоэмбриональные антиген (РЭА или англ. СЕ А)

- Онкогены: семейство онкогенов RAS: р53, Her2 neu

- Раково-тестикулярные (CT от англ. «cancer testis»): MAGE-1, BAGE, GAGE, NY-ESO-l/LAGE, SAGE и еще 35-40 антигенов CT, относящихся к хромосоме X (СТ-Х) или распределенных по всему геному (не-Х CT)

- Антигены меланомы человека: MART-1/MELAN-A, GplOO/pmel 17, тирозиназа, белки, ассоциированные с тирозиназой (TRP) 1 и 2, протеогликан сульфата хондроитина (CSPG4)

- Антигены глиомы человека: рецептор а2 интерлейкина -13, Eph А2, сурвивин (Survivin), вариант III EGFR (EGFRvIII)

- Антигены, ассоциированные с опухолями головы и шеи: EGFR, вирус папиломы человека (HPV 16 or 18), альдегид дегидрогеназа Al (ALDHA1)

- Гиперэкспрессированные нормальные или измененные антигены: антиген MUC-1, циклин-В 1, простат-специфический антиген (ПСА).

Также расширенный список многосторонне охарактеризованных ОАА, которые могли бы быть использованы в противоопухолевых вакцинах,

приводится в одной из публикаций исследователями Национального Института Рака США (NCI) [Cheever М. et al., 2009]. Список включает антигены, отвечающие критериям, разработанным группой экспертов NCI, которые предлагаются для использования в иммунотерапии при отборе наиболее многообещающих ОАА для дальнейшего изучения в клинических исследованиях.

Как указывалось выше, иммунный ответ на ОАА, даже на те, которые представляют собой измененные собственные антигены, может быть зарегистрирован в организме больного со злокачественной опухолью, однако в большинстве случаев отсутствует корреляция между результатами реакции на ОАА in vitro и прогнозом развития заболевания у пациентов. Это наблюдение находится в противоречии с многочисленными данными, полученными на опухолевых моделях экспериментальных животных, которые убедительно свидетельствуют, что при наличии эффективного противоопухолевого иммунитета опухоль не прогрессирует, а уже сформировавшаяся опухоль регрессирует [Smyth MJ. et al., 2006]. В клинических исследованиях противоопухолевых вакцин у онкологических больных были изучены многие из хорошо охарактеризованных ОАА в надежде, что презентация этих антигенов примированными ДК позволит преодолеть трудности в генерации выраженного иммунного ответа в условиях терапевтического режима. В некоторых, более поздних, публикациях результатов клинических исследований отмечается, что многократные подкожные инъекции иммунногенного опухолевого пептида, NY-ESO-1, плюс смесь 2-х сильных адъювантов, Монтанид ISA-51 и CpG7909, может эффективно индуцировать устойчивый пептид-специфический иммунный ответ, а также значительно продлевать период выживаемости, даже у больных с заболеванием поздней стадии, включая, кроме меланомы, различные солидные опухоли. [Jager Е. et al., 2006]. Такие публикации, демонстрирующие, что противоопухолевый ответ или ответ на вакцину, соответствуют клиническим результатам, позволяют предположить, что оптимизация стратегии применения вакцин может привести

к преодолению иммунной суппрессии, индуцированной опухолевым ростом, и восстановить иммунный баланс, нарушенный развитием злокачественного заболевания.

Иммуннокомпетентные клетки и другие факторы в микроокружении опухоли. Чаще всего среди иммуннокомпетентных клеток, обнаруживаемых в опухолевом микроокружении у онкологических больных, встречаются лимфоциты, которые способны определять как врожденный, так и адаптивный иммунитет, при этом также часто наблюдаются моноциты, опухоль-ассоциированные макрофаги (ОAM или ТАМ) [Schmieder А, 2012] и ДК [Whiteside TL., 2007]. Кроме того, клетки воспалительного процесса, обнаруживаемые в опухоли, находятся в тесном контакте с опухолевыми клетками, стромальными фибробластами, компонентами внеклеточного матрикса и кровеносными сосудами. Свой вклад в прогрессию опухоли могут вносить провоспалительные цитокины, секретируемые клетками, участвующими в воспалительном процессе, а растворимые факторы, продуцируемые опухолью в ответ на неспецифические или опухоль-специфические сигналы, такие как простагландин Е2 (PGE2), аденозин или TGF-Р снижают функциональную активность иммунных клеток. [Sethi G, 2012; Vendramini-Costa DB, 2012]. Опухолевое микроокружение формируется опухолью, опухоль доминирует и постоянно регулирует его состояние, направляет все клеточные и молекулярные процессы, которые происходят в окружающих тканях.

Наибольшее внимание уделялось изучению Т-клеток (CD3+TCR+), составляющих основную популяцию инфильтрирующих мононуклеарных клеток, которые рекрутируются опухолью в составе иммунных компонентов [Whiteside TL., 2007]. Аккумуляция этих иммуннокомпетентных клеток в опухолевой ткани может рассматриваться как подтверждение функции иммуннологического надзора организма, однако они совершенно неэффективны в отношении торможения опухолевого роста, хотя эти же клетки могут проявлять пролиферативную и противоопухолевую цитотоксическую

активность при их активации ИЛ-2 ex vivo, после выделения этих клеток из опухолевой массы. [June CH., 2007].

Последние данные о свойствах Т-клеток, обнаруживаемых в опухолях человека свидетельствуют о том, что их фенотипический и функциональный профиль варьирует в зависимости от микроокружения, сформированного опухолью, и этот профиль или «иммунологический портрет» («immunologie signature») может влиять на прогноз заболевания и его исход [ Galon J. et al. 2006; Camus M. et al., 2009]. Оказалось, что в ОИЛ, полученных из метастатических новообразований или опухолей поздней стадии, наблюдается больше функциональных нарушений, чем в ОИЛ, выделенных из опухолей ранних стадий, что опухолевый статус или способность опухоли подавлять иммунную систему может определять функциональное состояние инфильтрирующих Т-клеток. Среди инфильтрирующих опухоль CD4+ Т-клеток, содержание субпопуляции CD4+ CD25hlgh FOXP3 -положительных Трег клеток повышено и составляет от 5% до 15% от популяции CD4+ Т-клеток, представленных в инфильтрате. Процент этой субпопуляции выше в опухолевой ткани, чем в периферической крови [Bergmann С. et al.„ 2007; Woo EY. et al., 2001]. Эти регуляторные Т-клетки подавляют активность других иммунных клеток в микроокружении с помощью механизмов, которые могут быть, как зависимы от межклеточных контактов, так и от продукции ингибирующих цитокинов или аденозина. [Bergmann С. et al., 2007; Woo EY. et al., 2001; Strauss L. et al., 2007; Mandapathil M et al., 2009]. Недавно была обнаружена субпопуляция CD4+ Т-клеток, представленная активными провоспалительными продуцирующими ИЛ-17 клетками Тх17 у больных с раком яичника. Наличие этих клеток значимым образом коррелировало с повышенным уровнем выживаемости среди этой группы больных, а также наблюдалась обратная корреляция с количеством FOXP3 + Трег клеток. [Kryczek I. et al., 2009].

Кроме большого количества накопленных экспериментальных данных, свидетельствовавших об участии лимфоцитов в иммуннологическом надзоре,

важнейшим подтверждением их роли в этом процессе послужили результаты экспериментов на мышах с удаленным геном Ragl (активационный ген рекомбинации 1) или Rag2. Гомозиготные мутантные по гену Rag-2 мыши жизнеспособны, но у них не образуются зрелые формы Т или В -лимфоцитов. [ Shinkai Y, et al., 1992 ]. Потеря функции Rag2 in vivo ведет к полной неспособности реорганизации VDJ, в результате чего появляется новый фенотип SCID. Функциональная активность Rag2 и рекомбиназы VDJ по существу не влияет на развитие никаких других типов клеток, кроме лимфоцитов. Поскольку у этих мышей не была полностью потеряна функциональная активность Т-клеток и сохранены были другие два компонента иммунной системы ИФН-у и перфорин, участвующие в предотвращении формирования опухоли, элегантный дизайн исследования с использованием мышиной модели Rag24~ и StatFпозволил впервые убедительно показать, что взаимодействие лимфоцитов и ИФН-у препятствует развитию саркомы, индуцируемой химическим канцерогеном, и спонтанно возникающей эпителиальной саркомы. [Shankaran V, et al., 2001]. Мышам одной линии, контрольной группе и с фенотипом Rag2~'~, вводили МСА и наблюдали скорость образования опухолей. У мышей Rag2~'~ новообразования появлялись раньше и в большем количестве, чем у животных контрольной группы. Через 160 суток наблюдения у 9 из 15 мышей Rag2~~,~ зарегистрировано образование индуцированных МСА опухолей, в то время как в контрольной группе лишь у 2 из 15 животных были обнаружены новообразования. Повышенная частота возникновения опухолей у мышей Rag2~'~ была сравнима с результатами, полученными на мышах, не чувствительных к ИФН-у, нокаутированные по гену Ifngrl (опухоли выявлялись у 12 из 20 животных) или Statl (опухоли выявлялись у 17 из 30 животных), в то время как у нормальных мышей частота возникновения опухолей была ниже (у 11 из 57 животных). Кроме того, была обнаружена синергичность действия механизмов подавления опухолевого роста лимфоцитами и сигнального пути, опосредованного генами ИФН-у /Statl: в экспериментах на мышах с отсутствием обоих генов - мыши с фенотипом

Rag2~'~ x Statl4' (мыши RkSk), была показана повышенная предрасположенность к формированию индуцированных MC А опухолей. У 13 из 18 мышей RkSk зарегистрировано появление новообразований, по сравнению с 11 из 57 животных контрольной группы. Однако столь значимых различий не наблюдалось в группах мышей, у которых отсутствовал лишь один ген - либо Rag2, либо Stat 1.

Таким образом, выше приведенные данные свидетельствуют о том, что Т, NKT и/или В клетки играют существенную роль в предотвращении формирования химически индуцированных опухолей, кроме того, эти эксперименты показали, что существует тесное взаимодействие между механизмом действия лимфоцитов и сигнальным путем с участим Statl-зависимого ИФН-у. Эффективность реализации механизма действия подавления спонтанных опухолей выражалась в том, что у 9 из 11 контрольных мышей не было обнаружено новообразований; в 2 случаях зарегистрирована аденома, но ни одной злокачественной опухоли. Напротив, у всех 12 мышей Rag2~'~ были обнаружены новообразования в кишечнике и других органах. У половины из этих животных развились злокачественные заболевания: у 3 -аденокарцинома слепой кишки, 1 - илеоцекальный рак, 1 - аденокарцинома тонкой кишки, 1 - аденокарцинома легкого. Кроме того, у 6 из 11 мышей RkSk был зарегистрирован рак молочной железы. И хотя у остальных 5 мышей не было выявлено пальпируемых опухолевых узлов, при вскрытии у них было обнаружено 3 аденокарциномы слепой кишки, аденокарцинома легкого, две аденокарциномы в кишечнике. В целом, у 82% мышей RkSk были зарегистрированы спонтанные раковые опухоли. Таким образом, результаты экспериментальных исследований указывают на то, что отсутствие определенных популяций лимфоцитов, либо самих лимфоидных клеток, либо одновременно с дефектом ИФН-у зависимого сигнального пути, ведет к значительно более высокому уровню частоты возникновения спонтанных эпителиальных опухолей у таких животных по сравнению с нормальным контролем. Более того, у мышей RkSk спонтанные формы рака развивались

чаще, чем у мышей Rag2~'~, что позволяет сделать предположение о том, что эффективность совместного действия механизмов подавления опухолевой прогрессии, обусловленных функциональной активностью лимфоцитов и сигнального пути IFN-yIStatl, проявляется лишь частично. [Shankaran V, et al., 2001]. Girardi M. с соавторами [Girardi М, et al., 2001] изучали роль а|3 и у5 Т клеток в процессах блокировки образования опухолей при индукции химическими канцерогенами MCA, DMBA и TPA и при трансплантации клеток плоскоклеточного рака PDV на мышиных моделях TCR-5~/_ и TCR-(T/_ TCR-5_/~, где у экспериментальных животных отсутствовали оф, уб, и другие Т-клетки. При сравнении частоты образования опухолей после трансплантации клеток линии PDV у мышей TCR8_/~~ и контрольной группы, обнаружено появление 41 новообразования из 110 мест введения трансплантируемых клеток у мышей TCR5~/_, и 13 из 134 - у контрольных животных. Латентный период формирования опухолей был снижен незначительно, однако, участие уб Т -клеток проявлялось в уменьшении количества возникающих новообразований. В то же время, у мышей с фенотипом TCRfT и TCRtf7- TCR5_/~ новообразования были выявлены практически в 100% случаев в месте трансплантации, а латентный период был значительно снижен. Эти данные ясно свидетельствуют о критической роли ар Т - и yS Т -лимфоцитов в регуляции роста опухолевых клеток линии PDV, а также демонстрируют тот факт, что отсутствие у8 Т-лимфоцитов не сможет быть компенсировано наличием af3 Т - лимфоцитов и NK -клеток. Более того, рассматривая роль у8 Т-лимфоцитов в формировании индуцированной МСА саркомы и веретеноклеточной карциномы, наблюдали увеличение числа новообразований у мышей TCR5_/_ и TCRP~/_ после индукции МСА, в сравнении с нормальным контролем в тех же условиях. [Girardi М, et al., 2001]. При индукции DMBA и TP А спонтанно образующихся опухолей у 67% мышей TCRS_/_ наблюдали увеличение частоты образования опухолей по сравнению с 16% случаев в группе контрольных животных. Кроме того, у мышей TCR8_/~ также чаще наблюдались случаи развития папилломы в карциному. Полученные таким

образом данные вполне очевидно показывают значительный вклад уб Т - и ар Т - клеток в контроль развития опухоли. Исходя из описанных результатов, можно также предположить, что уб Т - клетки подавляют образование опухоли в самой начальной фазе перехода в злокачественную прогрессию, в то время как а(3 Т - клетки непосредственно ингибируют опухолевую прогрессию с помощью цитотоксического механизма действия, осуществляющего киллинг злокачественно трансформированных клеток. Следовательно, и предшествовавшие исследования и данные последних лет подтверждают базовую концепцию противоопухолевого иммунологического надзора, предложенную впервые Бернетом и Томасом: иммунная система, естественным образом присущая каждому организму, способна распознавать появляющиеся трансформированные клетки и уничтожать формирующуюся первичную опухоль, используя для этого лимфоциты и цитокины, которые играют важнейшую роль в защитном механизме организма.

Присутствующие в опухолевой ткани макрофаги (CD14+) называют опухоль-ассоциированные макрофаги (ОАМ или ТАМ). Нормальные макрофаги захватывают антигены и играют важную роль в контроле распространения инфекций, а популяция ОАМ проходит перепрограммирование, что ведет к подавлению функций иммунных клеток через высвобождение ингибирующих цитокинов, таких как ИЛ-10, PGE2 или соединений реактивного кислорода (ROS). [Martinez О. et al., 2008]. Предполагается, что перепрограммирование ОАМ происходит в среде опухолевого микроокружения в результате индуцированной опухолью активации. Были получены данные, свидетельствующие о том, что степень инвазивности опухоли, например, первичного рака толстой кишки человека, напрямую связана с количеством ОАМ, обнаруженных в опухоли. У пациенток с инвазивным раком молочной железы повышенное количество ОАМ считается независимым прогностическим фактором уменьшения периода безрецидивной выживаемости, также как снижения выживаемости в целом. [Leek RD. et al., 1996]. Опубликованные к настоящему времени результаты указывают на

активную роль ОАМ в индуцированной опухолью иммунносупрессии с одной стороны, и стимулировании опухолевого роста, с другой стороны. Более того, судя по предварительным результатам, предполагается, что соответствующая дифференцировка Трег и Тх17 из неспециализированных предшественников CD4+ по пути либо супрессивному, либо провоспалительному, соответственно, определяется влиянием ОАМ. [Kryczek I. et al., 2009]. Таким образом, оказывается, что ОАМ вносят значительный вклад в формирование опухолевого микроокружения.

В опухолевой ткани обнаружена аккумуляция так называемых миелоидных супрессорных клеток (MDSC - myeloid-derived suppressor cells), представляющих субпопуляцию производных миелоидных клеток, соответствующих мышиным клеткам CDllb+/Grl+ , с фенотипом CD34+ CD33+ CD13+ CD 15" . [Serafini P. et al., 2006; Ochoa A.C. et al., 2007; Luszynski W., et al., 2008]. Они рекрутируются из костного мозга под влиянием растворимых факторов, продуцируемых опухолью, - ГМ-КСФ, эндотелиальный фактор роста сосудов (VEGF) и ИЛ-10; мигрируют в лимфатические узлы, где происходит перекрестное примирование ДК Т-клеток, и принимают участие в этом процессе. Они также мигрируют в опухоль и становятся опухоль-ассоциированными MDSC и ингибируют функции иммунных клеток, продуцируя аргиназу 1, фермент, участвующий в метаболизме L-аргинина. Синергичная активность аргиназы 1 и индуцируемой синтазы окиси азота (iNOS) ведет к увеличению продукции супероксида и окиси азота, подавляя реакцию лимфоцитов вследствие стимулирования активности iNOS в окружающих клетках. [Ochoa AC et al., 2007]. Сейчас представлены результаты, подтверждающие активную роль MDSC в индуцированной опухолью иммунной супрессии, которая сказывается на нарушении функциональной активности иммунных клеток в опухолевой ткани, а также в периферической крови онкологических больных.

Дендритные клетки (HLA-DR CD86 CD80 CD14") - профессиональные естественные антиген-презентирующие клетки. ДК являются обычным

компонентом популяции опухоль-инфильтрирующих иммуннокомпетентных клеток и отвечают за захват, процессинг и перекрестное представление ОАА наивным Т-лимфоцитам или Т-клеткам памяти, таким образом осуществляя решающую функцию в генерации опухоль-специфических эффекторных Т-клеток [Diebold SS., 2008]. Кроме того, ДК влияют на индукцию Трег клеток. У онкологических больных межклеточные взаимодействия между антиген-презентирующими ДК и Т-клетками ведут к увеличению количества и накоплению Трег в области опухолевого очага и периферической крови. [Diebold SS., 2008]. Сигналы от ДК, определяющие результат взаимодействия ДК и Т-клеток, могут оказывать воздействие на уровнях: а) презентации антигена (сигнал 1); б) экспрессии ко-стимулирующих молекул (сигнал 2); в) имму номо дул ирующих цитокинов (сигнал 3). Стимуляция повышения экспрессии сигнала 1 и 2 при отсутствии сигнала 3 может способствовать индукции толерантности лимфоцитов в периферической крови [Diebold SS., 2008]. В то же время, есть данные, указывающие на то, что некоторые события, относящиеся к сигналу 1, например, уровень экспрессии презентируемых антигенов, определяют какой путь будет индуцирован - по Трег или Тх2 эффекторным (Тэфф) клеткам, независимо от статуса зрелости ДК [Diebold SS., 2008]. Кроме того, рассматривая антиген-презентирующий механизм (АРМ или АПМ) ДК, а также учитывая, что активность некоторых из компонентов АПМ , включая молекулы МНС II класса, может быть снижена или изменена у онкологических больных, [Ferris RL. et al., 2006] можно предположить, что индукция Трег клеток может зависеть не только от уровня экспрессии антигена, но и от эффективности его процессинга и презентации Т-клеткам.

Было показано, что опухоль-ассоциированные ДК, которые находятся в непосредственном контакте с опухолевыми клетками и/или опухолевыми факторами, быстро вступают в апоптоз и у них нарушен процесс созревания. [Gabrilovich DI. Et al., 1996]. В частности, было показано, что такие опухоль-ассоциированные факторы, как ганглиозиды, подавляют генерацию и функциональную активность ДК in vitro. [Shurin GV. et al., 2001].

Супрессивный эффект ганглиозадов в отношении ДК определяется известным анти-дендритно-поэтическим фактором VEGF опухолевого происхождения. [Gabrilovich DI. et al., 1996]. Рассматривая результаты о функциональных нарушениях опухоль-ассоциированных ДК, многочисленные литературные данные позволяют сделать предположение о том, что наличие ДК в опухолевой ткани ассоциируется с более благоприятным прогнозом и большим периодом выживаемости, а также со снижением уровня рецидивирования и метастазирования [Reichert ТЕ. et al., 2001]. В противоположность этому, у больных, у которых в опухоли определялось очень малое количество ДК, прогноз заболевания был неблагоприятный. [Murphy GF. et al., 1993]. В метастазах обнаруживалось меньше ДК, чем в первичной опухоли. В одном исследовании, проведенном на большой группе пациентов (п=132) с оральной карциномой, было показано, что количество ДК в опухолевой ткани было значительно более важным независимым прогностическим фактором для предсказания общей выживаемости, безрецидивного периода и времени до появления рецидивов, по сравнению с хорошо известными прогностическими факторами стадии заболевания или статуса лимфатических узлов [Reichert ТЕ. et al., 2001]. Предполагается, что не только количество ДК, но также наличие функционально не поврежденных Т-клеток в опухолевом микроокружении, передающих сигналы нормальным образом, имеет важное значение в общей выживаемости онкологических больных. [Reichert ТЕ. et al., 2001].

NK, NKT и уб T -клетки. НК-клетки (CD3" CD56+ CD16+), которые опосредуют врожденный иммунитет и содержат в цитоплазме гранулы, богатые перфорином и гранзимом, обладают хорошим потенциалом, способствующему эффективному лизису опухолевых клеток. Хорошо известно, что НК-клетки представляют «первую линию защиты» организма против воздействия патогенов [Lanier LL. et al., 2003] однако опухолевые клетки человека устойчивы против перфорин-опосредованного лизиса, осуществляемого НК-клетками, кроме того, среди популяции ОИЛ редко выявляются НК [Whiteside TL., 2007] . И это несмотря на то, что в присутствии опухолевых клеток

снижается экспрессия антигена МНС и повышается содержание молекул MICA и MICB. [Chang СС. et al., 2005]. Можно рассматривать несколько причин малочисленности НК в опухолевой ткани, включая тот факт, что они обнаруживаются в предраковых состояниях и ранних новообразованиях и отсутствуют в ткани распространенных злокачественных опухолей, что соответствует скорее их роли в иммуннологическом надзоре, а не в уничтожении злокачественных клеток в области локализации опухоли [Whiteside TL., 2007]. Более поздние данные позволяют предположить, что первичная биологическая роль НК заключается не в уничтожении мишеней-опухолевых клеток, а участии во взаимодействии между ДК и Т-клетками и стимулировании иммунного ответа на ОАА [Kelly JM. et al., 2002]. Поскольку опухолевое микроокружение едва ли представляет оптимальную среду для такого рода иммунного взаимодействия, малочисленность НК может объясняться их физиологическими функциями.

В 2000-х годах в экспериментах на мышиных моделях с удалением специфических генов (имбредные мыши с нокаутированными генами) или субпопуляций лимфоцитов была показана важная роль клеток NK и NK1.1+ Т (натуральные киллерные Т-клетки, NKT) в защите организма против вновь образующихся опухолей и метастазов. На этих моделях было показано, что именно клетки NK CD3+ участвуют в отторжении возникающей опухоли и метастазов, когда опухолевые клетки не экспрессировали МНС-I и торможение роста опухоли не было связано с действием ИЛ-12. [ Smyth MJ, et al., 2000]. У мышей C57BL/6, у которых отсутствовали субпопуляции NK и NKT в результате применения МКА против антигена NK1.1 (воздействует на обе популяции), индуцированные MCA (methylcholanthrene - метилхолантрен) опухоли развивались в 2-3 раза чаще, чем у контрольных животных [Smyth MJ, et al., 2001]. Схожие результаты наблюдались у мышей C57BL/6, которым вводили МКА анти-азиаро- GM1, что селективно удаляет только NK , а не NKT-клетки, хотя анти-азиаро- GM1 может также элиминировать активированные макрофаги. Защитная роль NKT-клеток проявлялась только в

случаях, когда для стимуляции процесса отторжения опухоли требовалось участие эндогенного ИЛ-12. Например, эксперименты на мышах с отсутствующим геном TCR Ja281, подтвердили важнейшую роль NKT-клеток в защите против возникновения спонтанных опухолей, индуцированных химическим кнцерогеном МСА. У мышей с фенотипом Ja28r/_ с отсутствием NKT-клеток экспрессирующих антиген Val4Ja281, гораздо чаще формировались индуцированные МСА саркомы, чем у контрольных мышей [Smyth MJ, et al., 2000]. В других экспериментах было показано, что у мышей, которым вводили лиганд а-галактозилцерамид, активирующий NKT-клетки, на протяжении периода индукции опухоли с помощью МСА, частота возникновения спонтанных опухолей была снижена, а латентный период возникновения опухоли был дольше, чем у контрольных мышей. [Hayakawa Y, et al., 2003]. Мыши с отсутствующей субпопуляцией клеток уб Т были гораздо более восприимчивы к различным способам индуцирования кожного канцерогенеза. После воздействия канцерогена, клетки кожного эпидермиса экспрессировали Rae-1 и Н60, молекулы класса МНС, которые структурно напоминают молекулы человека МНС-I A (MICA). Эти молекулы являются лигандами для рецептора NKG2D, экспрессируемого цитолитическими Т-клетками и NK-клетками. В экспериментах in vitro NKG2D+ у8 Т-клетки уничтожали клетки рака кожи, механизм действия которых был высоко чувствителен к блокировке рецептора NKG2D. [Girardi М, et al., 2001]. Локализация клеток уб Т в эпителии может быть фактором, отвечающим за снижение роста эпителиальных злокачественных новообразований.

Интерферон-у. В некоторых исследованиях [напр., Dighe AS, et al., 1994] было показано, что продуцируемый в организме интерферон -у (ИФН-у) проявлял защитную функцию против трансплантата опухоли, а также против образования спонтанных и индуцируемых опухолей. В случае, если мышам вводили нейтрализующее ИФН-у МКА, скорость роста трансплантируемой саркомы у этих мышей значительно увеличивалась по сравнению с контрольными животными. Гиперэкспрессия доминантной негативной формы

субъединицы а рецептора ИФН-у (IFNGR1) в образцах фибросаркомы Meth А полностью отменяла чувствительность опухоли к ИФН-у, а опухоль проявляла свойства повышенной туморогенности и ослабленной иммуногенности при трансплантации сингенным мышам BALB/c [Dighe AS, et al., 1994]. Эти результаты продемонстрировали, что ИФН-у оказывает непосредственное влияние на иммуногенность опухолевых клеток и играет важную роль в процессах распознавания и удаления опухолевых клеток. При изучении формирования у мышей опухолей, индуцированных MC А в сравнении с контрольными интактными мышами, скорость и частота образования опухолей была выше у тех животных, у которых отсутствовала чувствительность либо к ИФН-у (мыши, без IFNGR), либо ко всем членам семейства ИФН (мыши, с отсутствием Stat 1, который является транскриптационным фактором, необходимым звеном сигнального пути IFNGR) в результате воздействия различных доз химического канцерогена МСА. Кроме того, у мышей, нечувствительных к ИФН-у, злокачественные новообразования развивались быстрее, чем у контрольных животных, на фоне нокаута гена р53, обладающего опухоль-ингибирующей функцией [Kaplan DH, et al., 1998 ]. Также у мышей, нечувствительных к ИФН-у с фенотипом р53~'~ развивались опухоли более широкого спектра, чем у мышей, дефицитных лишь по одному только гену р53. На основе этих результатов было сделано заключение о том, что некоторые типы опухолей человека становятся селективно нечувствительными к действию ИФН-у. Таким образом, ИФН-у образует основу внешнего механизма подавления опухолевого роста в иммунокомпетентном организме. Используя экспериментальные модели (В6, рак предстательной железы RM-1) и модели спонтанных метастазирующих опухолей (BALB/c, рак молочной железы DA3, было показано, что у мышей, дефицитных одновременно по гену pfp (перфорина) и ИФН-у, значительно чаще развивались метастазы в легкие, чем у мышей с отсутствием либо pfp, либо ИФН-у. Однако и у мышей, дефицитных по pfp, и у мышей, дефицитных по ИФН-у, зарегистрирован одинаковый показатель частоты образования метастазов обеих опухолевых моделей, как и у

мышей, лишенных субпопуляции клеток NK, при этом оказалось, что защитная роль ИФН-у заметна на ранних этапах развития метастазов. [Street SE. et al., 2001]. Дальнейший анализ данных продемонстрировал, что именно ИФН-у, а не pfp, контролирует скорость роста саркомы у этих мышей. А вырабатываемый в организме ИФН-у и прямая цитотоксичность, опосредованная функциональной активностью цитотоксических лимфоцитов, экспрессирующих pfp (перфорин), являлись независимым фактором противоопухолевого действия, и оказывали совместный контроль над возникновением, ростом и распространением злокачественного новообразования у мышей. Данные другого исследования показали, что и ИФН-у, и перфорин играли решающую роль в подавлении развития лимфомы, однако уровень защитной активности ИФН-у зависел от модели. Лимфомы, формирующиеся у мышей, дефицитных по ИФН-у были совершенно не иммуногенны, в отличие от опухолей мышей с отсутствующим геном pfp, что говорит о сравнительно более слабом влиянии ИФН-у на иммунно-селективные процессы [Street SE, et al., 2002]. Значительно высокая частота позднего образования аденокарциномы, наблюдавшаяся на обеих моделях мышей дефицитных по ИФН-у и pfp говорит о том, что в некоторых эпителиальных тканях также существует эффект иммунологического надзора.

Перфорин и система Fas/FasL. Перфорин и система Fas/Fas лиганд (FasL) представляют еще один важный фактор, участвующий в процессе иммунологического надзора. Если рассматривать процесс в общем, то клеточная цитотоксичность реализуется Т-лимфоцитами (ЦТЛ, CTL) и НК (NK) клетками либо путем гранулярного экзоцитоза, либо через сигнальный путь системы Fas/Fas лиганд. В первом случае, при участии гранул перфорина гранзимы проникают в клетки-мишени, где они взаимодействуют с молекулами, которые инициируют апоптоз. Гранзимы А и В индуцируют клеточную гибель через альтернативные не перекрывающиеся сигнальные пути. Система Fas/FasL отвечает за программированную клеточную смерть в результате активации сигнальных путей, а также играет важную роль в киллинге клеток-мишеней, опосредованном функциональной активностью

лимфоцитов при определенных условиях. [Russell JH, et al., 2002] Фармакологическое воздействие на одну или другую из этих цитотоксических систем является одним из подходов контроля злокачественного заболевания, однако сверхактивация этих сигнальных путей ведет к снижению уровня клеточной гибели. В действительности, у мышей C57BL/6 лишенных гена pfp (т.е. с фенотипом pfp~/_) значительно чаще развивались опухоли, индуцированные МСА, чем у контрольной группы интактных мышей при тех же условиях воздействия MCA. [Street SE, et al., 2001; Street SE, et al., 2002]. Так, дополняя данные предыдущих исследований, показавших, что цитотоксичность, опосредованная перфорином, является не только решающим механизмом действия для реализации цитолитического эффекта клеток CTL и NK при отторжении трансплантируемых опухолевых клеток, но также реализуется в процессе вирусного и химического канцерогенеза, индуцируемого МСА, или DMBA (12-0-1гетрадецаноилфорбол -13-ацетат (TPА) плюс 7,12-диметилбензантрен) или при инъекции онкогенного вируса саркомы Молони [van den Broek ME, et al., 1996]. И хотя результаты экспериментов по изучению роли Fas-опосредованной цитотоксичности в резистентности к трансплантации опухолевых клеток, которые были стабильно трансфециторованы геном Fas, не позволили выявить решающую роль Fas в контроле возникновения злокачественного новообразования, они не исключают и некоторого функционального вклада системы Fas/FasL в процесс иммунобиологического надзора, [van den Broek ME, et al. 1996]. В другом исследовании было показано, мыши с фенотипом pfp-/~ (без перфорина) обладали высокой предрасположенностью к развитию злокачественных новообразований именно в лимфоидных тканях (при трансплантации линий Т, В, NKT клеток), что указывает на специфическую роль перфорина в лимфомагенезе [Smyth MJ, et al., 2000]. Предрасположенность к образованию лимфомы была усилена при одновременном отсутствии экпрессии гена р53. При трансплантации опухолевых клеток мышам pfp~7~, частота возникновения лимфомы увеличивалась в 1000 раз по сравнению с контрольной группой

иммунокомпетентных животных, у которых отторжение опухолевых клеток контролировалось CD8+ Т-лимфоцитами. [Smyth MJ, et al., 2000]. Обобщая эти данные, можно предположить, что эффекторные компоненты иммунной системы участвуют в контроле развития первичной опухоли, при этом перфорин и ИНФ-у играют специфичекую роль в предотвращении формирования опухоли в лимфоидной и эпителиальной тканях.

Интерфероны I типа. Об участии в процессе противоопухолевого иммунологического надзора интерферонов I типа (ИФН-а/р), регулирующих иммунологическую активность и стимулирующих те же биологические эффекты, как и ИФН-у, известно гораздо меньше. По данным некоторых исследований предполагалось, что эндогенно секретируемый ИФН-а/р потенциально может иметь противоопухолевую активность. Это заключение было сделано на основе экспериментов на мышах, показавших, что нейтрализация ИФН-а/р поликлональными антителами усиливала рост трансплантируемых сингенных опухолевых клеток у иммунокомпетентных животных [ Gresser I, et al., 1974; Affabris E, et al, 1987], и отменяла реакцию отторжения аллографтов или опухолевых ксенографтов [Gresser I, et al., 1988]. В более поздних исследованиях по изучению потенциальной роли эндогенного ИФН-а/р в процессе иммуноредактирования при трансплантации опухолевых клеток и формировании первичного опухолевого узла, секретируемый эндогенно ИФН-а/р стимулировал отторжение высоко иммуногенной сингенной мышиной саркомы [Dunn GP, et al., 2005]. Более того, хотя сама по себе иммуногенность опухолевых клеток не менялась вследствие чувствительности к ИФН-а/р, участие ИФН-а/р в противоопухолевом иммунном ответе оказывалось необходимым условием и зависело от уровня активности гематопоэтических клеток. Протективный эффект ИФН-а/р не перекрывался полностью действием ИФН-у, что указывает на определенную роль ИФН-а/р как важного компонента в процессе опухолевого иммуноредактирования. В этом исследовании показана роль эндогенно секретируемого ИФН-а/р, блокирующего образование индуцированной МСА

высоко иммунногенной саркомы, который также подавлял развитие первичной опухоли, индуцируемой канцерогеном, у иммуннокомпетентных мышей.

Интересные результаты были получены при перевивке интактным животным саркомы, полученной у мышей с фенотипом IfnarFт.е. с отсутствием рецептора 1 ИФН- а в результате индукции канцерогеном МСА. Трансплантируемая инбредным нормальным мышам опухоль отторгалась с участием опосредованного лимфоцитами механизма действия. Эти эксперименты позволяют предположить, что опухоль, формирующаяся в отсутствии IFN-a/ß становится более иммуногенной, чем слабо иммуногенные новообразования у иммунокомпетентных мышей. В отличие от механизмов, связанных с IFN-a/ß, такая слабая иммуногенность может быть значительно повышена при стимуляции экспрессии гена Ifngrl, тогда перевиваемые опухоли отторгаются вследствие увеличения чувствительности к действию IFN-y [ Kaplan DH, et al., 1998; Street SE, et al.,2001].

Интерфероны I типа представляют важное связующее звено между врожденным и приобретенным иммунитетом [Asselin-Paturel С, et al., 2005] и оказывают влияние на функциональную активность некоторых субпопуляций клеток, таких как ДК [ Hoshino К, et al., 2002], клеток памяти CD8+ Т [ Hiroishi К, et al.,2000], НК - через индукцию лиганда TRAIL [ Sato К, et al., 2001], участвующих в элиминации трансформированных клеток.

Среди инфильтрирующих солидные опухоли человека лейкоцитов, полиморфноядерные лейкоциты встречаются не часто, за исключением скоплений эозинофилов, которые могут присутствовать в ассоциации с опухолевыми клетками. Гранулоциты также редко выявляются в опухолевой ткани человека, их замещают опухоль-ассоциированные макрофаги и MDSC, хотя часто в мышиных опухолях они представляют основной клеточный компонент. Это может объясняться тем, что в опухолях человека воспалительные инфильтраты представлены элементами хронического воспаления, а не острого, вследствие чего к моменту диагностирования

злокачественной опухоли, анализа биопсии и обследования больного гранулоциты уже длительное время отсутствуют в области новообразования. Иногда в опухолевой ткани, за исключением рака молочной железы и меланомы, обнаруживаются В-клетки (CD19+ CD20+) [Kornstein MJ. et al., 1983; Coronelía JA. et al., 2002]. Поскольку первичная функция В-клеток заключается в продукции антител в результате их дифференцировки в плазматические клетки, которые циркулируют в кровеносной системе, нельзя ожидать a priory наличие плазматических и В-клеток в опухоли, хотя возможно они и способны продуцировать антитела in situ, что может быть еще одним фактором защитной системы организма.

1.1.2. Иммуноредактирование

Итак, согласно теории иммунологического надзора иммунная система распознает аномальные трансформированные клетки и разрушает их. Если неопластическая клетка сможет избежать уничтожения факторами иммунитета, она дает начало клону клеток, приводящих к злокачественным новообразованиям.

Однако ряд авторов приводят факты, которые не укладываются полностью в теорию иммунологического надзора. Например, при иммуносупрессии отсутствует увеличение частоты развития опухолей в иммуно-привилегированных зонах (головной и спинной мозг); отсутствует увеличение заболеваемости онкологическими заболеваниями при иммунодефицитах у человека (исключение, саркома Капоши и лимфомы при СПИДе) [де Вита, 2002.]. При этом большая часть опухолей, возникающих при иммуно-некомпетентных состояниях, имеет вирусную природу. По данным собственных исследований и других авторов наблюдается отсутствие иммуносупрессии на I и II стадиях онкологических заболеваний (показатели по иммунному статусу, цитокиновому профилю, функциональной активности эффекторов иммунитета не отличаются от этих параметров у здоровых доноров).

В последующие годы теория «иммунологического надзора» Бернета, была значительно расширенна и дополнена современными исследованиями естественной противоопухолевой резистентности. По общепризнанному мнению одним из важных факторов появления и дальнейшей прогрессии опухоли является ускользание опухолевых клеток от надзора иммунной системы. Из доказанных механизмов «ускользания» А.А.Ярилин [Ярилин A.A., 1999] приводит следующие:

® утрата опухолевыми клетками некоторых типов молекул главного комплекса гистосовместимости (HLA) 1-го класса, необходимых для распознавания антигенных пептидов опухолевых клеток цитотоксическими Т-лимфоцитами;

• отсутствие экспрессии на опухолевых клетках ко-факторных молекул CD80 (В7-1) и CD86 (В7-2), которые разпознаются ко-рецептором CD28. Без сигнала, поступающего с ко-рецептора, вместо активации развивается анергия Т-лимфоцитов;

® индукция опухолевым антигеном образования антител, «защищающих» злокачественные клетки от действия цитотоксических Т-лимфоцитов;

• выделение опухолевыми клетками растворимых форм мембранных антигенов или синтез секреторных вариантов антигенов, «перехватывающих» эффекторы иммунной системы;

• отбор тех вариантов мутаций, на которые факторы специфической защиты не реагируют.

Развитие представлений о противоопухолевом иммунитете привело к формулировке теории «иммунного редактирования» сформулированной Шрейбером с соавторами [Schreiber RD., 2002], в подтверждение которой затем стало появляться все большее количество данных [Kim R., 2007]. В процессе постоянного возникновения трансформированных клеток иммунная система распознает аномальные клетки, которые несут отличные от нормальных клеток антигены, и уничтожает их (иммуннологический надзор), при этом происходит отбор клеток, устойчивых к действию иммунной системы, которые затем дают

клоны низкоиммуногенных опухолей. Этот процесс назван иммуннологическим редактированием (или иммуноредактированием), который с одной стороны отсекает трансформированные высокоиммуногенные клетки, а вследствие этого, с другой стороны позволяет развиваться селективным клонам неиммуногенных опухолевых клеток, часто с низкой экспрессией МНС II, в результате чего цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ) не могут выполнять свою функцию.

Эта теория частично объясняет недостаточную эффективность иммунотерапии, т.к. в результате селективного отбора иммунологического редактирования развиваются резистентные к действию иммунной системы опухоли.

Иммунный баланс поддерживается балансом цитокинов, продуцируемых эффекторами врожденного и приобретенного иммунитета. Иммунорегуляция 1 типа (клеточный иммунитет) осуществляется при участии стимулирующих цитокинов ИЛ-12 и ИФН-гамма, а гуморальный ответ (иммунорегуляция 2 типа) - при участии ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10 и/или ТРФ-(3. Противоопухолевый иммунитет может осуществляться за счет функционирования ЦТЛ, которые способны напрямую оказывать цитотоксическое действие в отношении клеток-мишеней, в то время как при гуморальном иммунитете ввиду неимуногенности (или низкой иммуногенности) опухолей специфические антитела не вырабатываются или же действие их неэффективно.

Дендритные клетки играют важнейшую роль в осуществлении связи врожденного и приобретенного иммунитета. ИЛ-12, вырабатываемый ДК в ответ на их активацию, стимулирует эффекторы врожденного иммунитета у5Т-лимфоциты, натуральные киллеры (НК), натуральные киллеры Т-клетки (НКТ), которые начинают активно продуцировать ИФН-гамма, играющий основную роль в стимуляции ЦТЛ, а в последующем в угнетении ангиогенеза. Являясь эффективными антиген-презентирующими клетками (АПК), с повышенной экспрессией МНС I и II класса, ДК стимулируют развитие специфического (приобретенного) иммунитета, активируя функции лимфоцитов Т -хелперов и

Т-цитотоксических 1 типа (Txl и Тц1). Txl, выделяя ИФН-гамма и ИЛ-2 стимулируют цитотоксическую активность Тц1, взаимодействующих с опухолевой клеткой. Т-клетки памяти CD8+ (CD8m) и CD4+ (CD4m) также продуцируют ИФН-гамма, стимулируя ранний ответ по типу 1.

Напротив, эффекторные клетки, продуцирующие ИЛ-4, ИЛ-10 и/или ТРФ-(3, а также регуляторные Т-клетки (Трег CD4+/CD25+, оказывают супрессорное действие на функцию ЦТЛ и НК), подавляют иммунорегуляцию 1типа и стимулируют иммунный ответ 2 типа.

Кроме того, реализация противоопухолевого потенциала иммунорегуляторного звена 1 типа осложнена тем, что вследствие иммунологического редактирования наблюдается низкая иммуногенность опухолей, низкая экспрессия МНС I и II и/или костимулирующих молекул, отсутствие или низкая экспрессия опухолевых антигенов, а также гетерогенность опухолей.

Таким образом, иммунная система может либо предотвращать развитие злокачественного новообразования и разрушать уже сформировавшуюся опухоль, либо стимулировать канцерогенез, прогрессию злокачественного заболевания или метастазирование. Который из этих процессов будет преобладать, — зависит от равновесия между медиаторами, стимулирующими или ингибирующими опухолевый рост, которые участвуют в реализации как врожденного, так и приобретенного иммунитета.

Итак, современная концепция теории иммунного надзора предполагает, что иммунная система действительно обладает способностью распознавать и разрушать опухолевые клетки, однако с другой стороны, может способствовать «иммунному отбору» резистентных опухолевых клонов. Гипотеза «иммунного редактирования» [Dunn GP. Et al., 2006; Dunn GP. et al., 2002] предполагает, что элиминируя опухолевые клетки, чувствительные к действию иммунной системы, организм редактирует процесс выживаемости опухолей, которые становятся устойчивыми против иммуннокомпетентных клеток. Альтернативная теория позволяет сделать вывод о том, что в процессе

прогрессии опухоль индуцирует иммуносупрессивные механизмы, которые не допускают никакой возможности иммунного уничтожения опухоли и фактически приводят к состоянию опухоль-специфической толерантности [Whiteside TL., 2008]. Сначала иммунная система инициирует селекцию резистентных опухолевых клонов, а затем опухоль становится невосприимчивой к иммунному воздействию. Основным положением теории иммунной селекции или иммунологического редактирования и иммунной супрессии является допущение, что опухоль, в которой происходят новые мутации, способна ускользнуть от воздействия иммунной системы и может, как избежать действия иммунитета, так и инактивировать функционирование иммунной системы организма [Jewett А., 2011].

Однако на сегодняшний день ни одна из двух гипотез не принята окончательно, и одни авторы утверждают, что прогрессия опухоли происходит в результате генетической нестабильности, а другие считают, что главную роль играет опухоль-специфическая толерантность иммунитета, которая позволяет создавать благоприятное для опухоли тканевое микроокружение независимо от иммунной системы. Такое противоречие в отношении роли иммунитета в развитии и прогрессии злокачественного новообразования лишь подчеркивает сложный характер взаимодействий между опухолевыми и иммунными клетками. Это также предполагает, что взаимодействия могут происходить в обоих направлениях, подвержены влиянию микроокружения, и нередко могут приводить к гибели иммунокомпетентных клеток, а не опухолевых.

Механизм и действующие звенья противоопухолевого иммунного ответа организма, а также причины, по которым иммунной системе не удается сдерживать опухолевый рост и образование метастазов, интенсивно обсуждаются в научной литературе в течение десятков лет. Для клинической практики особенно важна большая определенность по последней проблеме, поскольку именно этот аспект иммунобиологии злокачественного заболевания напрямую влияет на результат противоопухолевой иммунотерапии.

Представленные многими авторами [напр., Gumperz J. Е., 2004; Onji, М., 2005;

Obeid, M. 2007; Storkus, W. J., 2007; Boyton R.J., 2007; Tan, G. 2011] данные о том, что опухоль вооружена множеством высокоэффективных механизмов для противодействия иммунной системе организма, позволяют использовать новые терапевтические стратегии, чтобы не допустить ускользание опухоли от иммунного воздействия [Slavin, S., 2010]. Если механизмы, которые помогают опухоли защититься от действия иммунитета, на самом деле ответственны за опухолевую прогрессию, то можно предположить, что небольшие успехи современной противоопухолевой иммунотерапии могут быть значительно оптимизированы благодаря новым подходам, которые направлены против механизмов ускользания опухоли от иммунного воздействия. А поскольку эти механизмы могут быть скорее уникальны (специфичны) для каждой опухоли, а не общие для всех злокачественных новообразований, задачей будущего станет определение «иммунологического портрета» («immunologic signature») каждой опухоли и использование определенной, выборочно назначаемой, терапии для инактивации опухолевых защитных механизмов и восстановления активного противоопухолевого иммунитета.

1.2. Биотерапевтические (иимунотерапевтические) подходы к лечению

злокачественных заболеваний

Несмотря на разработку и внедрение в клиническую практику новых лекарственных препаратов, большая часть злокачественных заболеваний связана с неблагоприятным прогнозом. Современные представления о механизмах врожденного и приобретенного иммунитета позволяют определить направление подходов к противоопухолевой иммунотерапии даже при наличии отрицательных регуляторных механизмов при онкологических заболеваниях для повышения эффективности лечения и улучшения качества жизни онкологических пациентов.

1.2.1. Вакцинотерапия

Один из наиболее популярных методов биотерапии представляет противоопухолевая вакцинотерапия, которая насчитывает уже сотни клинических исследований как законченных, так и продолжающихся.

По определению известного автора многих публикаций по иммунотерапии N. И^Их» вакцинотерапия - это метод, основанный на использовании любого антигена или комплекса антигенов (при наличии или в отсутствии адъюванта) для модуляции иммунного ответа [М. Яезйй), 1997]. Методы вакцинотерапии могут быть объединены в различные группы в зависимости от принципа их действия [Моисеенко В.М., 2001]:

I группа - активная иммунотерапия:

• неспецифическая иммунотерапия (ВСв, С. рагуиш, левамизол, интерферон, ИЛ-2),

• специфическая иммунотерапия (вакцинотерапия).

II группа - пассивная иммунотерапия:

• антитела (моно- или поликлональные антитела или конъюгаты с токсинами и изотопами),

• клетки (опухоль-инфильтрирующие лимфоциты, лимфокин-активированные киллеры).

III группа - непрямые методы:

• удаление или блокирование факторов роста или ангиогенеза.

IV группа - высокодозная неаблативная химиотерапия с аллогенной трансплантацией элементов костного мозга.

Активная специфическая противоопухолевая вакцинотерапия, которой уделяется наибольшее внимание, в свою очередь условно подразделяется на следующие группы:

• Вакцины на основе цельных клеток: аллогенные, аутологичные.

• Аутологичные белки теплового шока.

• Ганглиозиды.

• Синтетические пептиды. •ДНК.

• Рекомбинантные вирусы.

• Вакцины на основе дендритных клеток.

Использование ДК для лечения онкологических заболеваний стало особо привлекательным после обнаружения ряда опухоль ассоциированных антигенов (ОАА) [Jefford, M., 2001, Parmiani, G., 2002].

Использование ДК для лечения онкологических заболеваний стало особо привлекательным после обнаружения ряда опухоль ассоциированных антигенов [Jefford, M., 2001, Parmiani, G., 2002].

Зрелые ДК для противоопухолевых вакцин чаще всего получают из CD 14+ моноцитов по известной 2-стадийной методике [Sallusto, F., 1994, Romani, N., 1996].

На первой стадии моноциты развиваются в незрелые ДК в присутствии гранулоцит/макрофаг колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) и интерлейкина-4 (ИЛ-4). Незрелые ДК обладают высокой способностью захватывать антигены путем макропиноцитоза и фагоцитоза [Пащенков, 2001, Banchereau, J., 1998, Keller, R., 2001]. Следует отметить, что незрелые ДК, полученные из моноцитов, (моДК) не стабильны и снова превращаются в моноциты при удалении ИЛ-4 и ГМ-КСФ [Romani, N., 1996].

На второй стадии инициируется созревание ДК. Созревание ДК может происходить под воздействием ряда факторов: бактерий (живых или мертвых), бактериальных продуктов (ЛПС), вирусов, двунитевой РНК или ее аналога поли-1:С, провоспалительных факторов и их комбинаций (ИЛ-1(3, ФНО-а, ИЛ-6, простагландин-Е2 (ПГЕ-2)) и лиганда CD40 (CD40L). Белок теплового шока gp96, высвобождаемый из некротических клеток, связывается с CD91 на поверхности ДК и также индуцирует их созревание. По мере созревания они в значительной степени теряют способность эндоцитировать и процессировать антигены. Однако зрелые ДК сохраняют способность презентировать иммуногенные пептиды, не требующие предварительного процессинга внутри клетки [Пальцев М.А., 2004].

В настоящее время считается, что для изготовления оптимальной противоопухолевой вакцины следует инкубировать незрелые ДК с опухолевыми антигенами (опухолевый лизат, специфичные для опухоли пептиды или белки, опухолевая РНК и т. д.) в присутствие стимулов, ведущих к созреванию ДК [Dhodopkar, М. V., 2000]. Исследование на мышах показало, что лишь иммунизация полностью зрелыми ДК, нагруженными опухолевым антигеном, эффективно защищает при заражении низкоиммуногенной опухолью (выжило 8 из 8 мышей) [Chen, Z., 2001]. В то же время, в тех же условиях незрелые ДК не давали ни малейшей защиты (не выжило ни одной мыши из 8). Следует также отметить, что некоторыми авторами было показано, что введение мышам незрелых ДК, нагруженных антигеном, не только не вызывает эффективного иммунного ответа, а наоборот способствует подавлению или препятствует развитию иммунного ответа [Enk, А., 2001, Blankenstein, Т., 2002, Morel, Р. А., 2001]. Предполагается, что данный подход может оказаться перспективным направлением лечения аутоиммунных заболеваний и предотвращения отторжения трансплантированных органов

Однако есть данные о получении положительного клинического эффекта у пациентки с фибросаркомой при введении подкожно ДК, нагруженных опухолевым лизатом в отсутствие каких-либо факторов созревания [Geiger, J., 2000]. К сожалению, фенотип ДК в данном случае не был исследован. Нельзя исключить возможность созревания ДК под воздействием не идентифицированных факторов (вирусов, белков теплового шока [Cho, В. К., 2000], содержащихся в опухолевом лизате.

Наибольшее применение в наши дни ДК нашли в практике лечения онкологических больных [Nencioni, А., 2004, O'Neill, 2004]. Использование ДК-вакцин для лечения онкологических заболеваний направлено на стимуляцию специфического звена противоопухолевого иммунитета при условии, что можно обеспечить взаимодействие с опухоль-ассоциированными антигенами.

К ОАА относят, во-первых, антигены онкогенных вирусов (карцинома печени - вирусы гепатита В и С, рак шейки матки - вирус папилломы, лимфома

Беркитта - вирус Эпштейиа-Барр и т. д.), во-вторых, измененные белки, возникшие в результате соматических мутаций, в-третьих, не экспрессируемые в соматических тканях взрослого организма антигены (а-фетопротеин, теломераза), в-четвертых, нормальные антигены, гиперэкспессируемые опухолью (антигены меланомы и рака простаты). В настоящее время считается, что многие опухоли экспрессируют антигены, в той или иной степени распознаваемые иммунной системой [Foss, F. М., 2002]. Однако в большинстве случаев не развивается адекватный иммунный ответ, так как у опухолей и онкогенных вирусов существует целый спектр уловок, позволяющих ускользнуть от эффекторов иммунной системы. Большинство опухолевых антигенов, за исключением вирусных, слабо иммуногенны. Кроме того, многие опухоли прекращают экспрессировать несколько или все аллели молекул ГКГ-I. В ряде случаев клетки опухоли выделяют иммуносупрессивные факторы или факторы, препятствующие нормальному развитию АПК (ИЛ-6, простаноиды) [Menetrier-Caux, С., 2001, Sombroek, М. J., 2002, Peguet-Navarro, J., 2003, Shurin, G. V., 2001, Shen, W, 2002, Wolfl, M., 2002, Caldwell, S., 2003].

ДК, обработанные опухолевым антигеном в присутствие факторов, повышающих его иммуногенность (ФНО-а; ИЛ-1(3; CD40L; ЛПС; среда, кондиционированная моноцитами; аналог вирусной РНК - полиинозиновая-цитидиловая кислота), способны эффективно презентировать антиген и вызывать развитие Т-клеточного иммунного ответа на него, что было показано в ряде исследований in vi tro, в экспериментах на животных и даже в опытах на здоровых добровольцах [Dhodopkar, М. V., 2000, Nouri-Shirazi, М., 2000, Sallusto, F., 1994, Chen, Z., 2001, Dhodopkar, M. V., 1999, Mayordomo, J.I., 1995]. Эксперимент на добровольцах показал, что иммунный ответ на ДК развивался быстро, в течение 7 дней, но пик как CD4+, так и CD8+ Т-клеточных реакций на презентируемый антиген отмечался лишь через 1-3 месяца [Dhodopkar, М. V., 1999]. Наблюдалось развитие Т-клеточной памяти. Однако при естественной вирусной инфекции возникает гораздо более сильный и прочный иммунный ответ.

Кроме типа используемых ДК, очевидно, важную роль также играют источник опухолевого антигена и способ введения ДК. В экспериментах на животных с успехом было опробовано несколько источников антигена (пептиды, белки, клеточные лизаты, РНК, ДНК, вирусные векторы, белки теплового шока, апоптические тельца) [Banchereau, J., 1998]. В клинической практике до сих пор использовались, главным образом, белки и пептиды, а также, в несколько меньшей степени, опухолевые лизаты [Keller, R., 2001, Dhodopkar, М. V., 2000]. Недостаток вакцин на основе конкретных пептидов или белков заключается, во-первых, в том, что не все ОАА уже идентифицированы. Кроме того, популяция клеток опухоли гетерогенна и часть клеток может не экспрессировать отдельный антиген [Lappin, М. В., 1999]. Опухолевый лизат, очевидно, содержит широкий спектр различных антигенов, в том числе и неизвестные ОАА. Однако при иммунизации ДК, нагруженными тотальным опухолевым лизатом, существует риск развития аутоиммунных состояний [Keller, R., 2001]. Впрочем, до сих пор ни разу не было отмечено развития аутоиммунных реакций после иммунизации ДК, обработанными опухолевым лизатом [Lappin, М. В., 1999]. Недавно появилось предварительное сообщение о применении ДК, трансфецированных тотальной опухолевой РНК, для лечения распространенных форм рака толстой кишки и легких [Nair, S. К., 2002]. ДК индуцировали развитие ЦТЛ, способных специфически лизировать опухоль.

Способ введения ДК может существенно повлиять на их миграцию в лимфоидную ткань и их иммуногенность. Как было показано, ДК успешно добирались до лимфатических узлов при введении внутрикожно, но не внутривенно [Morse, М. А., 1999а]. Однако сведения об иммуногенности ДК человека, введенных различными способами, отсутствуют. Сравнительное исследование на мышах позволяет предположить, что ДК, введенные внутривенно, менее иммуногенны, чем те, что были введены подкожно [Lappin, М. В., 1999]. Некоторые исследователи пытались также вводить ДК прямо в

лимфатические узлы, что, очевидно, достаточно сложно в техническом плане [Hsu, F. J., 1996, Fong, L., 2001].

К настоящему времени был проведен ряд клинических испытаний противоопухолевых вакцин на основе ДК [Dhodopkar, М. V., 2000, Nouri-Shirazi, М, 2000, Geiger, J., 2000, Hsu, F. J., 1996, Jefford, M., 2001, Nestle, F. O., 1996, Thurner, В., 1999].

В исследовании с распространенной формой меланомы на IV стадии участвовало 11 пациентов [Thurner, В., 1999]. Использовались зрелые ДК, полученные из моноцитов, нагруженные меланомным пептидом MAGE-ЗА1. ДК вводили 5 дозами: 3 - подкожно и 2 - внутривенно. Наблюдались развитие иммунных реакций на антиген и экспансия цитотоксических лимфоцитов (ЦТЛ), специфичных к MAGE-3A1. У 6 из 11 пациентов происходила регрессия отдельных метастазов. Интересно, что не регрессирующие метастазы не экспрессировали м-РНК MAGE-3A1. Имеются также сходные многообещающие данные о применении ДК для лечения распространенных форм рака простаты, почек, щитовидной железы, молочной железы, толстой кишки, шейки матки, миеломы [Akbar, S. М., 2004; Hildenbrand, В.2007; Leonhartsberger N, 2012; Baek S, 2011; Bachleitner-Hofmann T, 2009; Fuiii S, 2009].

Таким образом, было доказано, что данный метод лечения безопасен. В ряде случаев наблюдался положительный клинический эффект. Это особо обнадеживает, так как испытания проводились исключительно на больных с распространенной формой заболевания после неудачного использования традиционных методов терапии. Очевидно, гораздо более эффективным данный способ лечения может оказаться для продления безрецидивного периода жизни онкологических больных после максимальной циторедукции хирургическим путем и/или при помощи химиотерапии.

По мнению специалиста в области противоопухолевой вакцинотерапии И.А. Балдуевой [Балдуева И.А., 2003] решение вопроса об эффективности применяемых вакцин с лечебной или адъювантной целью, основывается на

получении объективных данных об увеличении продолжительности жизни онкологических больных, отсутствии риска развития поствакцинальных осложнений и соотношении стоимость/эффективность. И, несмотря на свою более чем 70-летнюю историю, противоопухолевая вакцинотерапия и сейчас еще является скорее экспериментальным, а не стандартным методом лечения.

1.2.2. Адоптивная иммунотерапия с применением лимфоцитов

В основе применения метода адоптивной (от английского «adopt» -принимать, усваивать) иммунотерапии, которая включает внесение активного иммунокомпетентного компонента, лежит использование естественных для организма веществ или активация механизмов иммунной защиты.

В результате длительных исследований, начатых в 1965 г. был обнаружен фактор - интерлейкин-2 (ИЛ-2), ответственный за пролиферацию и активацию лимфоцитов. В экспериментальных условиях было показано, что ИЛ-2 повышает цитотоксичность НК против опухолевых клеток, в том числе и резистентных к действию интактных лимфоцитов.

Первые упоминания о цитокиновой терапии, примененной в монорежиме, относятся к 80-м годам прошлого столетия. В 1983 Bindon et al. применили ИЛ-2 для лечения больных с меланомой; клинические эффекты были обнаружены при введении ИЛ-2 в дозе 100000 МЕ/кг в течение 4-5 суток. Введение в организм больных ИЛ-2 приводило к активации эндогенных НК и стимуляции их киллерной активности по отношению к опухолевым клеткам, однако высокодозная цитокиновая терапия сопровождалась выраженными побочными явлениями, которые превосходили по своей значимости клинические эффекты. ИЛ-2 применялся также для индукции НК при различных гематологических заболеваниях, в качестве адъювантного средства при химиотерапии [Margolin К. , 2008]. Группой С.Розенберга [Rosenberg SA, 1985; Rosenberg SA, 1987] были проведены клинические испытания ИЛ-2 в сочетании с лимфокин-активированными киллерами. ЛАК клетки получали из

лимфоцитов периферической крови больных при инкубации с ИЛ-2 в экстракорпоральных условиях.

Активированные ИЛ-2 лимфоциты доноров (аллогенные ЛАК) обладают более высокой противоопухолевой цитотоксичностью, чем ЛАК онкологических больных. Поэтому, они были использованы для лечения химиорезистенных форм гемобластозов и солидных опухолей, при этом клинический эффект в некоторых исследованиях превышал 70% [Ruggeri L, 2005; Ruggeri L, 2002; Ren XB, 2007].

Адоптивная иммунотерапия с использованием иннтерлейкина-2 и ЛАК-клеток применялась, главным образом, для лечения так называемых иммуночувствительных форм злокачественных новообразований: меланомы и рака почки. В последние годы появились сведения о применении адъювантной ИЛ-2/ЛАК терапии при различных локализациях злокачественных новообразования. Наибольшие клинические эффекты были получены при локальных и локорегионарных введениях ИЛ-2 и ЛАК, в частности, при метастатических поражениях печени и легких [Киселевский М.В., 2003; Kimura Н, 1997; Kobari М., 2000; Semino С, 1999; Ueda Y., 2000] и при лечении опухолевых серозитов [Astoul Р., 1993; Viallat JR., 1993].

Внутриполостная иммунотерапия злокачественных плевритов. Внутриплевральное введение ИЛ-2 по сравнению с системной терапией поддерживает значительно более высокий локальный уровень цитокина, создавая благоприятные условия для ИЛ-2-зависимой активации внутриплевральных мононуклеарных лейкоцитов. При внутриплевральном введении ИЛ-2 обладает дозозависимой токсичностью, при этом максимально переносимая доза ИЛ-2 составила 36 х 106 МЕ. Основными и наиболее частыми побочными эффектами были лихорадка (до 39°С) и гриппоподобный синдром. В ряде случаев отмечалась эозинофилия и транзиторное увеличение плеврального выпота. Однако серьезные побочные эффекты у пациентов не выявлялись. У больных с мезотелиомой плевры внутриплевральная ИЛ-2-терапия приводила к частичной регрессии (4P) у 19% и стабилизации

заболевания (СД) - в 33% случаев. [Yasumoto К, 1987; А. М. Eggermont, 1995]. У больных немелкоклеточным раком легкого, осложненным плевритами, внутриплевральное введения 9 х 106 ME ИЛ-2 приводило к полной или частичной регрессии злокачественного выпота у 62 % больных [Masotti А, 1997].

В ряде исследований была показано, что более высокой эффективностью по сравнению с внутриплевральной ИЛ-2 терапией обдает комбинация ИЛ-2 с аутологичными ЛАК, полученными при активации лимфоцитов в присутствии интерлейкина-2, выделенных из злокачественного выпота у пациентов с мезотелиомой плевры, раком легкого, раком молочной железы и раком яичников [Liu X., 1993; Давыдов М.И., 2000; Киселевский М.В., 2003].

В числе методов использующих клеточные технологии в последнее время заметное место отводится адоптивной иммунотерапии с использованием цитокин-индуцированных киллерных клеток (CIK) [Guang Tan, 2011; Hontscha С, 2011]. Проводившие экспертную оценку авторы сделали заключение о том, что комбинация различных режимов введения CIK с традиционной химиотерапией и другими стандартными методами лечения рассматривается как новый эффективный подход в лечении злокачественных новообразований [Thanendrarajan S, et al., 2012].

Цитокин-индуцированные киллерные клетки (CIK) представляют собой гетерогенную популяцию генерированных ex-vivo Т-лимфоцитов, в которой присутствуют также клетки с фенотипом НКТ, и проявляют противоопухолевую активность, не зависимую от главного комплекса гистосовместимости МНС. [Sagiolo D.,2011]. Важные функциональные особенности CIK помогают преодолевать главные ограничения в клиническом использовании адоптивной иммунотерапии.

Необходимое количество иммуннокомпетентных эффекторов для многократных инфузий можно получить в результате несложной и недорогой методики их генерации ex-vivo из мононуклеарных клеток периферической крови. Эффект киллинга злокачественно трансформированных клеток, не

зависимый от механизма МНС, основан на взаимодействии поверхностных молекул NKG2D на клетках CIK и молекул MIC А/В или ULBP на опухолевых клетках. Было показано, что это воздействие CIK эффективно осуществляется в отношении некоторых солидных опухолей и онкогематологических заболеваний, и в этом случае не требуется экспрессии антигенов HLA, что увеличивает количество пациентов, которые потенциально могут получить эффективное лечение таким способом. Кроме того, цитокин-индуцированные киллерные клетки проявляют сниженную аллореактивность, связанную с барьером HLA, что предполагает их потенциал для более широкого применения в клинических условиях как альтернативный метод для традиционной инфузии донорских лимфоцитов после трансплантациии аллогенных гематопоэтических клеток с низким риском реакции «трансплантат против хозяина». [Sagiolo D.,2011].

Было проведено несколько клинических исследований с применением CIK, которые показали интересные клинические результаты. Основные параметры и выводы некоторых исследований собраны в предлагаемой ниже таблице 1.0:

Таблица 1.0. Клинические исследования по адоптивной иммунотерапии с использованием клеток С1К при лечении солидных опухолей_

Заболевание Кол-во пациентов С1К-клетки Токсичность Эффективность Ссылки

Колоректальный рак, почечная карцинома, не-Ходжкинская лимфома 10 аутологичные лихорадка: 3 Полный ответ (1) стабилизация заболевания (3) SchmidtWolf I.G. et al., 1999

не-Ходжкинская лимфома; почечная карцинома; печеночно-клеточный рак 12 аутологичные лихорадка: 2 Полный ответ (3); стабилизация заболевания (2) Olioso P. et al., 2009

рас пространен н ы й НМРЛ 59 (рандомизированное исследование) аутологичные (+ химиотерапия) не связана с иммунотерапией увеличение периода до прогрессирования и общей выживаемости Jiang J. et al., 2006

После операции по поводу печеночно-клеточного рака (адъювантный режим) 127 (рандомизированное исследование) аутологичные лихорадка: 5 увеличение без рецидивной выживаемости Hui D. et al., 2009

Заболевание Кол-во пациентов С1К-клетки Токсичность Эффективность Ссылки

печеночно-клеточный рак (адъювантный режим) 85 (рандомизированное исследование) аутологичные не связана с иммунотерапией уменьшение частоты рецидивов Weng D.S. et al., 2008

Рак желудка (IV стадия) 57 (рандомизированное исследование) аутологичные (+ химиотерапия) не связана с иммунотерапией Снижение уровня опухолевых маркеров; улучшение качества жизни Jiang J. et al., 2006

печеночно-клеточный рак 13 аутологичные Кратковременная лихорадка (большинство пациентов) Уменьшение размера опухоли (3); улучшение симптомов Shi M. et al., 2004

Различные типы (НМРЛ; желудочно-кишечный) 40 (рандомизированное исследование) аллогенные (из клеток периф.крови) не связана с иммунотерапией увеличение периода до прогрессирования и общей выживаемости Niu Q. et al., 2011

Рак желудка 156 (рандомизированное исследование) аутологичные (+ химиотерапия) не связана с иммунотерапией Увеличение выживаемости Jiang J.T. et al., 2010

В целом, проведенные исследования подтверждают высокий уровень безопасности адоптивной иммунотерапии с применением цитокин-индуцированных киллерных клеток с определенным положительным клиническим результатом. Тем не менее, разнообразие методов и критериев оценки эффективности не позволяют делать конкретные заключения о противоопухолевой эффективности и влиянии иммунотерапии на выживаемость. В 2011 году был создан сайт IRCC (International Registry on CIK Cells) - международный регистр no CIK клеткам, для сбора данных проводимых во всем мире клинических исследований с целью выработки стандартных критериев для оценки результатов клинических исследований с применением CIK [Hontscha С. et al., 2011].

Подобные инициативы очень важны, поскольку это помогает рационально направлять клинические исследования в перспективной области иммунотерапии рака и позволяет использовать адекватные параметры как для ретроспективного, так и проспективного анализа полученных данных.

Вышеизложенные методы иммунотерапии с использованием цитокинов и лимфокин-активированных киллерных клеток направлены на стимуляцию

неспецифического звена противоопухолевого иммунитета, что является по большей мере оправданным, поскольку большинство опухолей не экспрессируют МНС и костимуляторную молекулу В7-1, однако нельзя не учитывать тот факт, что именно ЦТЛ, отвечающие за реализацию специфических механизмов, должны быть активно вовлечены в противоопухолевую защиту. Поэтому перспективным направлением в развитии иммунотерапии злокачественных новообразований на современном этапе развития биотерапии является сочетание методов активации специфического (вакцины на основе ДК) и неспецифического иммунитета. Биотерапия активированными киллерами и противоопухолевой аутовакциной на основе ДК в сочетании с невысокими (иммуностимулирующими) дозами цитокинов должна применяться для лечения резидуальной болезни и профилактики рецидивов заболевания.

Суммируя вышеприведенный анализ лишь некоторой части огромной массы литературных данных, можно сделать заключение о том, что у онкологических больных часто обнаруживается иммунный ответ на опухоль-ассоциированные антигены (ОАА), однако наличие этих антигенов не повышает возможности элиминировать злокачественные клетки или воспрепятствовать развитию метастазов. Замечено, что у онкологических больных развивается сильный иммунный ответ на инфекционные агенты (бактерии и вирусы), которые воспринимаются как «сигнал опасности», а на опухоль-ассоциированные антигены, которые воспринимаются как «свои», возникает лишь слабый неэффективный ответ. Эта фундаментальная разница в ответе на «свои» в отличие от «не своих» в дальнейшем усиливается свойствами опухолей подавлять иммунную систему своего организма. Прогрессия опухоли ведет к нарушению функции эффекторных иммунных клеток СБ8+, индуцирующих апоптоз трансформированных клеток, и стимулирует нарастание популяции регуляторных Т-клеток (Трег) и супрессорных клеток миелоидного происхождения (МОБС), что снижает противоопухолевый иммунитет, позволяя, таким образом, опухоли избежать

воздействия иммунной системы организма. Ускользание опухоли от иммунного надзора определяется несколькими отчетливо выраженными молекулярными механизмами. Изучение этих механизмов дает надежду на то, что в ближайшем будущем будут разработаны более эффективные способы предотвращения нарушения функции иммунитета, индуцированного опухолевым процессом. Новые стратегии противоопухолевой иммунотерапии направлены на защиту и повышение жизнеспособности иммунных (противоопухолевых) эффекторных клеток и Т-клеток памяти в опухолевом микроокружении.

Иммунная система организма обладает необходимыми защитными механизмами, способными реализовать свою функцию против постоянно возникающих трансформированных клеток. Для более успешной борьбы организма со злокачественными клетками и развившимися новообразованиями возможно использование экстракорпорально активированных эффекторных иммуннокмпетентных клеток. Однако, как следует из публикуемой в настоящее время литературы, в мире используется большое разнообразие методов и факторов активации эффекторов иммунитета, источников получения иммунных клеток, способов и мишеней применения генерированных эффекторов, а также параметров определения эффективности используемого биотерапевтического подхода. Критерии оценки и возможность сравнения с определенными стандартизованными параметрами имеют решающее значение, когда необходимо сделать объективное и надежное заключение об использовании эффекторов противоопухолевой адоптивной иммунотерапии. Тем не менее, проблема стандартизации применяемых в клеточной иммунотерапии эффекторных клеток остается до сих пор открытой и требует своего скорейшего решения. Кроме того, учитывая невысокий уровень эффективности различных видов иммунотерапии, актуальной становится необходимость разработки новой стратегии лечения злокачественных новообразований с применением клеточных технологий.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Шубина, Ирина Жановна

выводы

1. Разработана двух-стадийная методика экстракорпоральной генерации активированных натуральных киллерных клеток, которая позволяет получить стандартизованную культуру клеток, включающую субпопуляции Т-лимфоцитов (CD3+) 35-55%, НК-клеток (CD16+/CD56+) 30-50%., Т-регуляторных клеток (CD4+/CD25+/FOXP3+) не более 4%, НКТ-клеток (CD3+/CD16-/CD56+) 10-14%; характеризующуюся экспрессией маркера адгезии CD58 свыше 70%, высоким пролиферативным индексом 21,3±6,5 и цитотоксической активностью по отношению к линии К562 (не менее 85% при соотношении клетка-эффектор/клетка-мишень 5:1). Разработаны методические рекомендации по получению смешанной культуры активированных натуральных киллерных клеток.

2. Показано, что разработанная методика позволяет получить популяцию активированных эффекторных клеток со стандартной иммунофенотипической, морфологической и функциональной характеристикой из различных источников (злокачественный экссудат, селезенка после спленэктомии при радикальной операции рака желудка, паратуморальные участки печени).

3. Показано, что метод магнитной иммуносепарации цитокератин-положительных клеток позволяет удалить элементы опухолевой контаминации из общего пула клеток, выделенных из костного мозга и лимфатических узлов при хирургической операции онкологических больных, которые затем можно использовать в качестве источника мононуклеарных лейкоцитов для генерации активированных эффекторов иммунитета.

4. Выявление цитокератин-положительных клеток в обогащенной клеточной популяции, полученной из костного мозга и лимфатических узлов, при последующем иммуноцитохимическом окрашивании позволяет эффективно обнаружить микрометастазы и уточнить стадию заболевания.

5. Установлено, что под влиянием отечественных иммуномодулирующих препаратов различного механизма действия («Ронколейкин», «Дикарбамин», поликомпонентная вакцина «Иммуновак-ВП4», «Нейпоген», «Бивален», «Галавит») в культуре мононуклеарных лейкоцитов периферической крови человека происходит стимуляция эффекторов иммунитета, обладающих характеристикой смешанной культуры активированных натуральных киллерных клеток со специфичными для каждого индуктора свойствами.

6. В экспериментальных условиях установлено, что протективный противоопухолевый эффект при вакцинации дендритными клетками, нагруженными опухолевым лизатом, наблюдается только при наименьшей прививочной дозе меланомы В-16 (50 тыс.кл./мышь). На экспериментальных животных с перевиваемой опухолью САО-1 (рак яичника мышей) показано преимущество комбинированной иммунотерапии с использованием активированных ИЛ-2 лимфоцитов и нагруженных опухолевым лизатом дендритных клеток.

7. В пилотных клинических исследованиях показано, что при лечении злокачественных плевритов с использованием активированных ИЛ-2 лимфоцитов, эффективность (полная или частичная регрессия экссудата) внутриплевральной комбинированной иммунотерапии ИЛ-2/а-НК составила 84,5% и иммунотерапии ИЛ-2 (препарат «Ронколейкин») в монорежиме - 66,6% при удовлетворительной переносимости внутриплевральной иммунотерапии.

8. Современная стратегия применения эффекторов противоопухолевого иммунитета подразумевает необходимость получения стандартизованной культуры активных иммуннокомпетентных клеток, проведение соответствующих тестов контроля качества полученной культуры; определение чувствительных в отношении данного метода терапии форм злокачественных новообразований, учитывая возможность создания наиболее эффективного соотношения эффектор/мишень, которое достигается при локорегионарном воздействии или при максимальной опухолевой циторедукции; а также активную стимуляцию эффекторов как врожденного, так и адаптивного иммунитета.

Заключение

Новая стратегия применения активированных эффекторов иммунитета, направленная на достижение наиболее эффективного противоопухолевого ответа иммунной системы, на первом этапе предполагает получение стандартизованной культуры активированных натуральных киллерных клеток. Стандартизованная смешанная культура а-НК, получаемая по разработанной двух-стадийной методике, включает несколько субпопуляций активированных эффекторов противоопухолевого иммунитета: Т-клетки (CD3+) - 35 -55%, НК (CD16+/CD56+) - 30-50%, НКТ (CD3+/CD16-/CD56+) - 10-15%, Т-рег CD4+/CD25+/FOXP3+) < 4%, при этом экспрессия молекулы адгезии CD58 > 70%, и характеризуется высокой пролиферативной (ИС = 21,3±6,5) и цитотоксической активностью (по отношению к линии К562 (ЭС50= 2 ,2).

Реализация новой стратегии основана на активации эффекторного звена как врожденного, так и адаптивного иммунитета. Следовательно, сочетанное применение активированных натуральных киллеров и дендритных клеток, нагруженных соответствующим опухоль-ассоциированным антигеном (антигенами, опухолевым лизатом) позволит достичь наиболее эффективного противоопухолевого ответа.

Новая стратегия применения активированных ex vivo эффекторов иммунитета подразумевает создание наиболее оптимального соотношения клеток-эффекторов и опухолевых клеток-мишеней. Следовательно, методы адоптивной иммунотерапии в первую очередь целесообразно применять для локорегионарного воздействия или при максимальной циторедукции злокачественного новообразования. Так, при внутриплевральном введении цитокин-активированных лимфоцитов удается создать в ограниченной полости эффективное соотношение эффектор/мишень и достичь полной или частичной регрессии метастатического выпота.

Таким образом, проведенные доклинические и пилотные клинические исследования позволяют создать необходимую основу для новой стратегии применения активированных эффекторов противоопухолевого иммунитета.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Шубина, Ирина Жановна, 2012 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Барышникова, М.А. Влияние сублингвальной формы галавита на иммунофенотип и функциональную активность иммунокомпетентных клеток мышей / М.А. Барышникова, Ф.В., Доненко И.Ж. Шубина, М.В. Киселевский // Российский биотерапевтический журнал. - 2006.- №4. -С.43-46.

2. Балдуева, И.А. Противоопухолевые вакцины / И.А. Балдуева // Практическая онкология. - 2003. - Т.4, №3. - С. 157-167.

3. Барышников, А.Ю. Взаимоотношение опухоли и иммунной системы организма /А.Ю.Барышников // Практическая онкология. - 2003. - Т.4, №3. - С.127-130.

4. Барышников, А.Ю. Принципы и практика вакцинотерапии рака / А.Ю.Барышников // Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. - 2004. - №. 2. - С. 59-63.

5. Барышников, А.Ю. Современные проблемы биотерапии злокачественных опухолей / А.Ю. Барышников, JI.B. Демидов, З.Г.Кадагидзе, И.Н. Михайлова, Г.Ю. Харкевич, Т.Н. Заботина, А.А.Борунова, И.В. Тимофеев, М.И. Лукашина, Г.З. Чкадуа, К.А.Барышников, H.H. Петенко // Вестник Московского онкологического общества. - 2008. - №. 1. - С. 6-10.

6. Бурова, О.С. Получение и характеристика клеточных линий меланомы человека для создания противоопухолевых вакцин. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук, Москва, 2010.

7. Бычков, М. Б. Опухолевые плевриты (дифференциальная диагностика и лечение) / М. Б. Бычков //Русский медицинский журнал. - 1999. - Т.7, №10.-С.458-461.

8. Горбунова, В.А. Окончательные результаты кооперированных исследований препарата «Дикарбамин» в качестве гематопротектора при комбинированной химиотерапии онкологических больных. / В. А.

Горбунова, A.M. Гарин, Н.Т. Райхлин, С.М. Ситдикова, В.И. Борисов, M.J1. Гершанович, С.Н. Гуров, В.Е. Небольсин, Н.С. Бесова, Е.М. Трещалина, М.Б. Бычков, JI.B. Филатова, Е.В. Махнова, C.B. Топчиева, Н.В. Ведерникова, J1.B. Чития // Вопросы онкологии. - 2009. - №5. - С.627-633.

9. Давыдов М. И. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2009г. / Давыдов М. И., Аксель Е. М., // Вестник РОНЦ им. H. Н. Блохина РАМН - 2011. - Т. 22, №3 (85), прил. 1.-С. 9, 54. 124. Ю.Давыдов М. И. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2007г. / Давыдов М. И., Аксель Е. М., // Вестник РОНЦ им. H. Н. Блохина РАМН - 20091. - Т. 20, №3 (37), прил. 1. -С. 8, 52.

11. Давыдов, М.И. Адоптивная иммунотерапия опухолевых плевритов. / М.И. Давыдов, K.P. Оразгельдыев, С.М Волков, М.В. Киселевский // Здравоохранение Туркменистана. 2000. -№ 3. -С. 4 -7.

12. Давыдов, М.И. Адоптивная иммунотерапия опухолевых плевритов. / М.И. Давыдов, K.P. Оразгельдыев, С.М Волков, М.В. Киселевский // Новое в онкологии: Сб. научных трудов. Выпуск 5.Москва- 2001. - С. 72-88.

13. Давыдов, М.И. Адоптивная иммунотерапия при опухолевых плевритах: клинико-лабораторное исследование. / М.И. Давыдов, В.А. Нормантович, М.В. Киселевский, С.М. Волков и др.// Российский онкологический журнал. -2000,- № 6 - С. 14-17.

14. Де Вита, В.Т. Биологические методы лечения онкологических заболеваний./В.Т. Де Вита, С. Хеллман, С.А. Розенберг — М.: Медицина. 2002.-918с.

15. Дыгай, A.M. Механизмы протективного действия «Дикарбамина» в отношении системы крови при цитостатическом воздействии./А.М. Дыгай, В.В. Жданов, Е.В. Симанина, В.Е. Небольсин, Г.Н. Зюзьков, Л.А. Ставрова, Е.В. Удут, Т.Ю. Хричкова, Л.А. Мирошниченко, A.B. Чайковский //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2010. - №9,- С.312-316.

16. Ивашкин, В.Т. Основные понятия и положения фундаментальной иммунологии. / В.Т. Ивашкин // РЖГГК. - 2008. - Т.18, №4. - С.4-13.

17. Кадагидзе З.Г. NKT-клетки и противоопухолевый эффект / З.Г. Кадагидзе // Российский биотерапевтический журнал - 2011. - Т. 10, №3. - С.9-15.

18. Кадагидзе, З.Г. Цитокины / З.Г. Кадагидзе // Практическая онкология. -2003. - Т.4, №3. - С.131-140.

19.Кашикова, Х.Ш. Лекарственная терапия опухолевых плевритов. Дисс. канд. мед. наук: 14.00.14/ Х.Ш. Кашикова. - Москва, 1989 - 109с.

20. Киселевский, М.В. Адоптивная иммунотерапия при злокачественных опухолях. / М.В. Киселевский //Вестник РАМН. - 2003~. - № 1. - С.40-44.

21. Колесник, Е. А. Противоопухолевая аутовакцина в лечении больных распространенным колоректальным раком./Е.А. Колесник, Г.П. Потебня, В.А. Кикоть, В.А. Черный, Г.С. Лисовенко, В.А. Семерников // Онкология,- 1999.-№2,- С. 104-109.

22. Лебедев, К.А. Иммунная недостаточность: выявление и лечение / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина. // М.: Медицинская книга, 2003 - 443с.

23. Лебединская О.В., Халтурина Е.О., Ахматова Н.К., Шубина И.Ж., Леонова О.Г., Попенко В.И., Мелехин C.B., Киселевский М.В. -Морфологические и функциональные особенности лимфокин-активированных киллеров, полученных из мононуклеарных клеток периферической крови человека // Морфология. — № 1. — 2005. — с. 2832.

24.Мирчинк, Е.П. Модификация токсичности противоопухолевых препаратов как метод повышения эффективности химиотерапии злокачественных новообразований. / Е.П. Мирчинк, Д.А. Бодягин, Э.Р. Переверзева, В.М.Бухман, И.Д.Трещалин // Российский

биотерапевтический журнал. - 2005.- №3.- С.87-94.

25. Моисеенко, В.М. Вакцинотерапия при меланоме кожи. / В.М. Моисеенко. // Рос. онкол. журнал. — 2005. — №3. — С. 52—56.

26. Моисеенко, В.М. Возможности вакцинотерапии меланомы кожи / В.М. Моисеенко //Практ. онкол. - 2001. - №4(8). - С.58-64.

27. Пальцев, МА. Введение в молекулярную медицину. / М.А.Пальцев. - М.: Медицина; 2004 -496с.

28. Пащенков, М. В. Основные свойства дендритных клеток. / М.В. Пащенков, Б. В. Пинегин // Иммунология. - 2001.- №3. - С. 7-16.

29. Петров, Р.В. Миелопептиды и их роль в функционировании иммунной системы. / Р.В. Петров, A.A. Михайлова, J1.A. Фонина // Биоорг. химия. -1999.-Т. 25, №11.-С. 811-815.

30. Полосухина, Е.Р. Получение и характеристика моноклональных антител к меланомо-ассоциированному антигену./ Е.Р. Полосухина, А.Д. Михайлов, П.К. Иванов, К.Н. Новиков, М.Е. Абрамов, Е.В. Степанова, М.И. Лукашина, Т.Н. Заботина, Л.Ф. Морозова, А.Ю. Барышников //Медицинская иммунология - 1999. - Т.1,№3-4. - С.107-108.

31. Попович, A.M. Иммунотерапия в онкологии./А.М.Попович — СПб: Диалог. - 2002. - 452с.

32.Потебня, Г. П. Противоопухолевая вакцина повышает эффективность лечения онкологических больных. / Г. П. Потебня, Г. С. Лисовенко, С. И. Ялкут, Л. И. Русанова.//Провизор,- 2002,- №5- С. 191-194.

33. Суслов, Ю.А. Комбинированная химиоиммунотерапия в лечении распространенного рака желудка. / Ю.А. Суслов, А.Н. Шпиготский, Н.В. Балуева и др. // Медицинский вестник. - 2003. — № 2. — С. 12—16.

34.Тюляндин, С.А. Немелкоклеточный рак легкого в 2004: високосный год / С.А. Тюляндин // Практическая онкология. — 2005. — Т.6, №1. — С.43-49.

35. Титов, К.С. Внутриплевральная иммунотерапия метастатических плевритов у больных раком молочной железы / К.С. Титов, Л.В. Демидов, М.В. Киселевский, И.Н. Михайлова, И.Ж. Шубина, А.Н. Грицай, И.Е. Синельников, Л.М. Родионова // Опухоли женской репродуктивной системы - 2009. - №3-4 - С.29 - 33.

36. Тюряева, И.И. Опухолевые антигены / И.И.Тюряева // Цитология - 2008. -Т.50, №3 - С. 189-210.

37. Хаитов, Р. Иммунология. /Хаитов Р., Игнатьева Г., Сидорович И. Москва: Медицина; 2002. -536с.

38. Халтурина, Е.О. Морфологические особенности и иммунофенотип дендритных клеток, полученных из моноцитов периферической крови человека / Е.О. Халтурина, О.В Лебединская., И.Ж Шубина., Ф.В Доненко., Н.Т Райхлин., М.В. Киселевский // Морфология. —2004.—№ 3. — С. 89-92.

39.Чикилева, И.О. Современные подходы и направления в иммунотерапии и иммунопрофилактике злокачественных новообразований./И.О. Чикилева, Е.О. Халтурина, М.В. Киселевский //Молекулярная медицина.—2003.-№2.- С. 40-50.

40. Шубина, И.Ж. Сравнительная характеристика лимфокин-активированных киллеров, генерированных из различных источников /И.Ж Шубина., К.С Титов., О.В Лебединская., Л.В Демидов., М.В. Киселевский// Российский биотерапевтический журнал. - 2006 — №3 - С. 43-50.

41. Шубина, И.Ж. Определение микрометастазов в костном мозге и лимфатических узлах у больных раком пищевода и немелкоклеточным раком легкого. /И.Ж. Шубина, И.С Стилиди., А.В Пирогов., Е.Е Кулевич., Л.М Родионова., М.В. Киселевский // Вестник РОНЦ им. Н.Н.Блохина, Т.8, №2 - 2007. - С. 64-71.

42. Шубина, И.Ж. Адоптивная иммунотерапия злокачественных новообразований/И.Ж.Шубина, А.Г.Блюменберг, С.М. Волков, Л.В. Демидов, М.В. Киселевский // Вестник РАМН,. -2007. - №11 - С.9 - 15.

43.Ярилин, A.A. Апоптоз, роль в патологии и значимость его оценки при клинико-иммунологическом обследовании больных. / A.A. Ярилин, М.Ф. Никонова, М.И. Варфоломеева, Т.Ю. Григорьева // Медицинская иммунология. - 2000. —Т.2, №1. — С.7-16.

44.Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. — М.: Медицина. -1999.- 607с.

45. Abrams, S.I. Target cell directed NK inactivation. Concomitant loss of NK and antibody-dependent cellular cytotoxicity activivties/ S.I. Abrams., Z. Brahmi // J.Immunol. - 1988. - V. 140. - P.2090-2095.

46. Acosta-Rodriguez, EV. Interleukins lbeta and 6 but not transforming growth factor-beta are essential for the differentiation of interleukin 17-producing human T helper cells/ E.V.Acosta-Rodriguez, G. Napolitani, A. Lanzavecchia, F. Sallusto // Nat Immunol. - 2007. - V.8, N9. - P.942-949.

47. Affabris, E. Molecular mechanisms of action of interferons in the Friend virus-induced leukemia cell system/ E. Affabris, G. Romeo, M. Federico, E. Coccia, C. Locardi, F Belardelli, GB Rossi //Haematologica. - 1987. - V.72. - P.76-78.

48. Ahuja, S. Dendritic Cell (DC)-Based Anti-Infective Strategies: DCs Engineered to Secrete IL-12 Are a Potent Vaccine in a Murine Model of an Intracellular Infection/ S Ahuja, R Reddick, N Sato, et al. //The Journal of Immunol. - 1999. - V. 163. - P.3890-3897.

49.Akbar, S. Safety and efficacy of hepatitis В surface antigen-pulsed dendritic cells in human volunteers / S. M., Akbar, S. Furukawa, M.Onji, Y. Murata, T. Niva, S. Kanno, H.Murakami, N.Horiike //Hepatol. Res. - 2004. - V. 29. - P. 136-141.

50.Alshaker, HA. IFN-y, IL-17 and TGF-(3 involvement in shaping the tumor microenvironment: The significance of modulating such cytokines in treating malignant solid tumors. / HA. Alshaker, KZ. Matalka // Cancer Cell Int. - 2011.-V. 23, №11. - P.33-44.

51. Andrews, D. M. Functional interactions between dendritic cells and NK cells during viral infection / D. M. Andrews, A. A. Scalzo, W. M. Yokoyama, M. J. Smyth, and M. A. Degli-Esposti. // Nat. Immunol. - 2003. - V.4. - P. 175-181.

52. Antony, P. A. CD4+CD25+ T Regulatory Cells, Immunotherapy of Cancer, and Interleukin-2/ P. A. Antony, N. P. Restifo // J Immunother. - 2005. - V.28, №2-P. 120-128.

53. Asselin-Paturel, C. Production of type I interferons: plasmacytoid dendritic cells and beyond/ C. Asselin-Paturel, G. Trinchieri // J Exp Med. - 2005. -V.202. - P.461^65.

54.Astoul, P. Intrapleural recombinant IL-2 in passive immunotherapy for malignant pleural effusion/ P. Astoul, JR. Viallat, JC. Laurent, M. Brandely, C. Boutin//Chest. - 1993. - V.103, №1. - P.209-213.

55. Bachleitner-Hofmann T, Pilot trial of autologous dendritic cells loaded with tumor lysate(s) from allogeneic tumor cell lines in patients with metastatic medullary thyroid carcinoma. /Bachleitner-Hofmann T, Friedl J, Hassler M, Hayden H, Dubsky P, Sachet M, Rieder E, Pfragner R, Brostjan C, Riss S, Niederle B, Gnant M, Stift A.// Oncol Rep. - 2009. - V.21, N6 - P. 15851592.

56.Baek S, Combination therapy of renal cell carcinoma or breast cancer patients with dendritic cell vaccine and IL-2: results from a phase I/II trial./ Baek S, Kim CS, Kim SB, Kim YM, Kwon SW, Kim Y, Kim H, Lee H.// J Transl Med. — 2011. — V.20, N9 - P. 178-185.

57. Balazs, M. Blood dendritic cells interact with splenic marginal zone B cells to initiate T-independent immune responses. / M. Balazs, F. Martin, T. Zhou, Kearney // J. Immunity. - 2002. - V.17, №3. - P.341-352.

58. Banchereau, J., Dendritic cells and the control of immunity. / Banchereau J., Steinman R. M. //Nature, 1998, vol. 392, p. 245-252.

59. Bayly, TC. Tetracycline and quinacrine in the control of malignant pleural effusions/ TC Bayly, DL Kisher, A Sybert, et al. // Cancer - 1978. - V.41. -P.1188-1192.

60. Belani, C.P. Cost effectiveness analysis of pleurodesis in the management of malignant pleural effusion / CP Belani, TR Einardson, SR Arikian et al.// J Oncol Management - 1995. - V. 1, N2. - P.24-29.

61. Bergmann, C. Expansion of human T regulatory type 1 cells in the microenvironment of COX-2-overexpressing head and neck squamous cell

carcinoma/ C Bergmann, L Strauss, R Zeidler, S Lang, TL. Whiteside //Cancer Res-2007- V. 67 - P.8865-8873.

62. Blanchard, DK. Infiltration of interleukin-2-inducible killer cells in ascitic fluid and pleural effusions of advanced cancer patients/ DK Blanchard, JJ Kavanagh, JG Sinkovics, D Cavanagh, SM Hewitt, JY. Djeu // Cancer Res - 1988. - V.48. -P.6321-6327.

63. Blankenstein, T. Cross-priming versus cross-tolerance: are two signals enough? / T. Blankenstein, T Schüler // Trends in Immunology — 2002. — V. 23. — P. 171-173.

64. Bohnenkamp, HR. Apoptosis of monocytes and the influence on yield of monocyte-derived dendritic cells/ Bohnenkamp HR, Burchell JM, Taylor-Papadimitriou J, Noll T. //J Immunol Methods. - 2004 - V.294, N1-2 - P.67-80.

65.Bonanno G. Effects of pegylated G-CSF on immune cell number and function in patients with gynecological malignancies/ Bonanno G, Procoli A, Mariotti A, Corallo M, Perillo A, Danese S, De Cristofaro R, Scambia G, Rutella S. //J Transl Med. -2010,- V.9, N8 — P.l 14-120.

66. Borgen E., Naume B., Nesland J.M. et al Standardization of the immunocytochemical detection of cancer cells in BM and blood. I. Establishment of objective criteria for the evaluation of immunostained cells // Cytotherapy. — 1999. — V.l. — P. 377-88.

67. Borgen, E. Standardization of the immunocytochemical detection of cancer cells in BM and blood. I. Establishment of objective criteria for the evaluation of immunostained cells/ E Borgen., B Naume., J.M Nesland et al// Cytotherapy. — 1999, —V.l.—P. 377-388.

68.Boyton, R. J. Natural killer cells, killer immunoglobulin-like receptors and human leucocyte antigen class I in disease / R. J. Boyton, D. M. Altmann // Clinical and Experimental Immunology — 2007. — V. 149 — P. 1-8.

69. Braun, S. Cytokeratin-positive cells in the bone marrow and survival of patients with stage I, II, or III breast cancer/ S Braun, K Pantel, P. Mailer et al. // Engl J Med. — 2000. — V. 342. — P. 525-533

70. Brossart, P. Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses in vivo after vaccinations with peptide-pulsed dendritic cells./ P. Brossart, S Wirths., G Stuhler., L. R Volker., K Lothar., B. Wolfram //Blood . - 2000. - V. 96 - P. 3102-3108.

71. Burnet, M. Cancer: a biological approach. III. Viruses associated with neoplastic conditions. IV. Practical applications / M.Burnet //Br Med J. —1957. -V. 13, N1(5023)-P.841-847.

72. Caldwell, S., Mechanisms of ganglioside inhibition of APC function /Caldwell, S., Heitger, A., Shen, W., Liu, Y., Taylor, B., Ladisch, S.//J. Immunol. - 2003. V. 171.-P. 1676-1683.

73. Callahan, MK. Anti-CTLA-4 antibody therapy: immune monitoring during clinical development of a novel immunotherapy. / Callahan MK, Wolchok JD, Allison JP. // Semin Oncol. - 2010. - V.37, N5. - P.473-484.

74. Camus, M. Coordination of intratumoral immune reaction and human colorectal cancer recurrence / M Camus, M Tosolini, B Mlecnik, F Pages, A Kirilovsky, A Berger, et al. //Cancer Res - 2009. - V.69 - P.2685-2693.

75.Canderan, G. An efficient strategy to induce and maintain in vitro human T cells specific for autologous non-small cell lung carcinoma / Canderan G, Gruarin P, Montagna D, Fontana R, Campi G, Melloni G, Traversari C, Dellabona P, Casorati G.// PLoS One. - 2010. - V. 9, N. 5(8) - P.el2014.

76. Carvalho, M.I. T-lymphocytic infiltrate in canine mammary tumours: clinic and prognostic implications / Carvalho MI, Pires I, Prada J, Queiroga FL.// In Vivo. -2011.- V.25, N6. - P.963-969.

77. Cavallo, F. Vaccination for treatment and prevention of cancer in animal models. / F Cavallo, R Offringa, SH van der Burg, G Forni, CJ. Melief //Adv Immunol -2006. - V. 90 - P. 175-213.

78. Celebioglu, F. Intraoperative sentinel lymph node examination by frozen section, immunohistochemistry and imprint cytology during breast surgery - A prospective study/Celebioglu F., Sylvan M., Perbeck L.et al. // European Journal of Cancer— 2000. — V.42,N 5. — P. 617-620.

79.Cella, M. Inflammatory stimuli induce accumulation of MHC class II complexes on dendritic cells / M Cella, A Engering, V Pinet, T Pietras, A. Lanzavecchia // Nature. - 1997.- V. 388.- P. 782-787.

80. Chang, C.C. Classical and nonclassical HLA class I antigen and NK cell-activating ligand changes in malignant cells: current challenges and future direction / CC Chang, M Campoli, S. Ferrone //Adv Cancer Res. — 2005 — V.93.-P. 189-234.

81.Cheever, M. The prioritization of cancer antigens: a National Cancer Institute pilot project for the acceleration of translational research / M Cheever, JP Allison, AS Ferris, OJ Finn, BM Hastings, TT Hecht, et al.// Clin Cancer Res -2009—V. 15. — P.5323-5337.

82. Chen, A. Depleting Intratumoral CD4+CD25+ Regulatory T Cells via FasL Protein Transfer Enhances the Therapeutic Efficacy of Adoptive T Cell Transfer/ A Chen., S Liu., D Park., Y Kang., G. Zheng // Cancer Res. - 2007. -V. 67,N3-P. 1291 - 1298.

83. Chen, Y-Q. CD4+CD25+ Regulatory T Lymphocytes in Malignant Pleural Effusion/ Y-Q Chen., H-Z Shi., X-J. Qin et al. //Am. J. Respir. Crit. Care Med. -2005.-V.172.-P. 1434-1439.

84. Chen, Z. DNA array and biological characterization of the impact of the maturation status of mouse dendritic cells on their phenotype and antitumor vaccination efficacy/ Chen Z., Dehm S., Bonham K., Kamencic H., Juurlink B., Zhang X, Gordon J. R, Xiang J. S. // Cell Immunol. -2001,- V. 214,- P. 6071.

85. Cho, B. K. A proposed mechanism for the induction of cytotoxic T lymphocyte production by heat shock fusion proteins. / B. K. Cho // Immunity. — 2000. — V.12-P. 263-272.

86. Coronella, J.A. Antigen driven oligoclonal expansion of tumor-infiltrating B cells in infiltrating ductal carcinoma of the breast/ JA Coronella, C Spier, M Welch, KT Trevor, AT Stopeck, H Villar// J Immunol - 2002. -V.169 —P.1829-1836.

87. Cunha, GR. Role of the stromal microenvironment in carcinogenesis of the prostate / Cunha GR, Hayward SW, Wang YZ, Ricke WA. // Int J Cancer. -2003. - V.107, N1 - P. 1-10.

88. Czerniecki, B.J. Diverse functional activity of CD83+ monocyte-derived dendritic cells and the implications for cancer vaccines. /Czerniecki BJ, Cohen PA, Faries M, Xu S, Roros JG, Bedrosian I. //Crit Rev Immunol. - 2001-V.21, N1-3. — P. 157-178.

89. Davis J.E. Purification of natural killer cell cytotoxic granules for assaying target cell apoptosis /Davis J.E., Sutton V.R., Browne K.A., Trapani J.A. // J .Immunol .Methods. - 2003. -V. 276. - P.59-68.

90. de Manzoni, G. The presence of bone marrow cytokeratin-immunoreactive cells does not predict outcome in gastric cancer patients/ de Manzoni G, Pelosi G., Pavanel F. et al. //Br. J. Cancer. — 2002. — V. 86,N 7. —P. 1047-1051.

91.Delfino, D.V. Suppression of natural killer cell differentiation by activated T lymphocytes in long-term cultures of mouse bone marrow / D.V. Delfino, E. Lepri, E. Aylordi et al. // Exp Hematol. - 1998. - V. 26. - P. 2-9.

92. Dell'Agnola, C. Clinical utilization of chemokines to combat cancer: the double edged sword / C. Dell'Agnola, A. Biragyn // Expert Rev Vaccines. — 2007. - V. 6, N2 - P. 267-283.

93. Dhodopkar, M. V. Active immunization of humans with dendritic cells/ M. V. Dhodapkar, N. Bhardwaj // J. Clin. Immunol. - 2000. V. 20 -P. 167-173.

94. Dhodopkar, M. V. Rapid generation of broad T-cell immunity in humans after a single injection of mature dendritic cells/M. V. Dhodapkar, R. M. Steinman, M Sapp, H Desai, C Fossella, J Krasovsky, S. M Donahoe, P. R Dunbar, V Cerundolo, D. F Nixon, N. Bhardwaj // J. Clin. Invest. - 1999. - V. 104 - P. 173-180.

95.Diebold, SS. Determination of T-cell fate by dendritic ceils / SS. Diebold // Immunol Cell Biol - 2008. -V. 86. - P.389-397.

96.Dighe, A.S. Enhanced in vivo growth and resistance to rejection of tumor cells expressing dominant negative IFN gamma receptors / AS Dighe, E Richards, LJ Old, RD Schreiber// Immunity. -1994. - V.l. - P.447^56.

97. Dunn, G.P. Cancer immunoediting: from immunosurveillance to tumor escape /Dunn GP, Bruce AT, Ikeda H, Old LJ, Schreiber RD. //Nat Immunol. - 2002. — V.3. — P.991-998.

98. Dunn, G.P. Interferons, immunity and cancer immunoediting./ GP Dunn, CM Koebel, RD. Schreiber //Nat Rev Immunol . - 2006. - V.6. - P.836-848.

99. Eggermont, A.M. Intrapleural administration of interleukin 2 in pleural mesothelioma: a phase I-II study/ A. M. Eggermont, C. J. Punt, R. Slingerland, J. W. Gratama, R. Oosterom, R. Oskam, R. L. Bolhuis, G. Stoter // Br J Cancer. - 1995. - V. 72,N5. - P. 1283-1288.

100. Ehrlich P. Ueber den jetzigen Stand der Karzinomforschung. / P. Ehrlich //Ned Tijdschr Geneeskd. - 1909. -V. 5. P.273-290.

101. Enk, A. How do dendritic cells prevent autoimmunity: what is a mature dendritic cell in the mouse? / Enk A. H., Jonuleit H. //Trends in Immunology. — 2001. — V.22 —P. 547-561.

102. Eslami, N.S.Simultaneous immunisation with a Wilms' Tumour 1 epitope and its ubiquitin fusions results in enhanced cell mediated immunity and tumour rejection in C57BL/6 mice/ Eslami NS, Shokrgozar MA, Mousavi A, Azadmanesh K, Nomani A, Apostolopoulos V, Day S, Amanzadeh A, Alimohammadian MH. // Mol Immunol. - 2012. - V.51, N3-4. - P.325-331.

103. Estrela-Lima A, Immunophenotypic features of tumor infiltrating lymphocytes from mammary carcinomas in female dogs associated with prognostic factors and survival rates. /Estrela-Lima A, Araújo MS, Costa-Neto JM, Teixeira-Carvalho A, Barrouin-Melo SM, Cardoso SV, Martins-Filho OA, Serakides R, Cassali GD. //BMC Cancer. - 2010. - V. 4, N10. - P.256-268.

104. Fearon DT, Locksley RM. The instructive role of innate immunity in the acquired immune response. / Fearon DT, Locksley RM. //Science -1996. -V.272. -P.50-54.

105. Ferlazzo, G. Dendritic cells generated from CD34+ progenitor cells or from monocytes differ in their ability to activate antigen-specific CD8+ T cells /G. Ferlazzo , A. Wesa., W. Z. Wei, A. Guli // J. Immunol. - 1999. - V. 163 - P. 3597-3602.

106. Ferlazzo, G. Human dendritic cells activate resting NK cells and are recognized via the NKp30 receptor by activated NK cells / G. Ferlazzo, M. L. Tsang, L. Moretta, G. Melioli, R. M. Steinman, and C. Mu'nz // J. Exp. Med. -2002. — V.195. — P.343-349.

107. Ferlazzo, G. NK cell compartments and their activation by dendritic cells /G. Ferlazzo, C. J. Munz // Immunology. - 2004. - V. 172 - P. 1333-1339.

108. Ferlazzo, G. The interaction between NK cells and dendritic cells in bacterial infections results in rapid induction of NK cell activation and in the lysis of uninfected dendritic cells / G.Ferlazzo, B. Morandi, A. D'Agostino, R. Meazza, G. Melioli, A. Moretta, and L. Moretta // Eur. J. Immunol. - 2003. - V.33. -P.306 - 310.

109. Fernandez, N. C. Dendritic cells (DC) promote natural killer (NK) cell functions: dynamics of the human DC/NK cross talk. / N. C. Fernandez, C. Flament, F. Crepineau, E. Angevin, E. Vivier, L. Zitovgel // Eur. Cytokine Netw. - 2002. - V. 13.- P. 17-27.

110. Fernandez, N. C. Dendritic cells directly trigger NK cell functions: cross-talk relevant in innate anti-tumor immune responses in vivo. / N. C. Fernandez, A. Lozier, C. Flament, P. Ricciardi-Castagnoli, D. Bellet, M. Suter, M. Perricaudet, T. Tursz, E. Maraskovsky, and L. Zitvogel // Nat. Med. - 1999. -V.5. - P.405-410.

111. Ferrara, N. Angiogenesis as a therapeutic target. / N. Ferrara, RS. Kerbel // Nature - 2005. - V. 15, N438(7070) - P.967-974.

112. Ferrari, S. Flow cytometric analysis of circulating dendritic cell subsets and intracellular cytokine production in advanced breast cancer patients./ Ferrari S, Malugani F, Rovati B, Porta C, Riccardi A, Danova M. // Oncol Rep. - 2005. -V.14, N1- P.113-120.

113. Ferris, R.L. Immune escape associated with functional defects in antigen processing machinery in head and neck cancer./ R.L. Ferris, T.L. Whiteside, S. Ferrone // Clin Cancer Res - 2006. - V.12 - P.3890-3895.

114. Ferrone, S. Tumor microenvironment and immune escape / S. Ferrone, TL. Whiteside. // Surg Oncol Clin North Am - 2007. - V.16 - P.755-774.

115. Finn, O.J. Human tumor antigens as targets of immunosurveillance and candidates for cancer vaccines. / OJ Finn, RJ Binder, AG Brickner, LH Butterfield, RL Ferris, P Kalinski, et al. // In: Gires O, Seliger B, editors. Tumor-associated antigens: identification, characterization, and clinical applications. Weinheim (Germany): Wiley-VCH. - 2009,- P. 23-43.

116. Fong, L. Dendritic cells injected via different routes induce immuni9ty in cancer patients /Fong, L., Brockstedt, D., Benike, C., Engeman, E. G..//J. Immunol. - 2001. - V. 166. - P. 4254-4259.

117. Fontenot, J.D. Regulatory T cell lineage specification by the forkhead transcription factor foxp3 / J.D. Fontenot, J.P. Rasmussen, L.M. Williams, J.L. Dooley, A.G. Farr, A.Y. Rudensky // Immunity. - 2005. - V. 22 - P. 329 -341.

118. Foss, F. M. Immunologic mechanisms of antitumor activity. / F. M. Foss // Semi. Oncol. - 2002. - V. 29 - P. 5-11.

119. Friedman, K.M. Tumor-specific CD4+ Melanoma Tumor-infiltrating Lymphocytes./ Friedman K.M., Prieto P.A., Devillier L.E., Gross C.A,. Yang J.C., Wunderlich J.R., Rosenberg S.A., Dudley M.E. // J Immunother. - 2012. -V.35, N5. - P.400-408.

120. Fuchshuber, P.R. Antitumor activity, growth, and phenotype of long-term IL-2 cultures of human NK and T lymphocytes. / Fuchshuber PR, Lotzova E, Pollock RE. // Lymphokine Cytokine Res. - 1991. - V. 10, N1-2. - P.51-59.

121 .Fujii S, Dendritic cell-based cancer immunotherapies / Fujii S, Takayama T, Asakura M, Aki K, Fujimoto K, Shimizu KM Arch Immunol Ther Exp (Warsz). - 2009. -V.57.N3- P. 189-198.

122.Gabrilovich, D.I. Production of vascular endothelial growth factor by human tumors inhibits the functional maturation of dendritic cells./ DI Gabrilovich , HL Chen, KR Girgis, HT Cunningham, GM Meny, S Nadaf, et al. // Nat Med -1996.-V.2-P.1096-1103.

123. Galon, J. The adaptive immunologic microenvironment in colorectal cancer: a novel perspective. / J Galon, W-H Fridman, F. Pages //Cancer Res - 2007. -V.67 - P.1883-1886.

124. Galon, J. Type, density, and location of immune cells within human colorectal tumors predict clinical outcome. / J Galon, A Costes, F Sanchez-Cabo, A Kirilovsky, B Mlecnik, C Lagorce-Pages, et al. //Science - 2006. -V.313 -P. 1960-1964.

125. Garcia-Iglesias, T. Low NKp30, NKp46 and NKG2D expression and reduced cytotoxic activity on NK cells in cervical cancer and precursor lesions. / T Garcia-Iglesias, A Del Toro-Arreola, B Albarran-Somoza, Del S Toro-Arreola, PE Sanchez-Hernandez, MG Ramirez-Duenas, LM Balderas-Pena, A Bravo-Cuellar, PC Ortiz-Lazareno, A Daneri-Navarro// BMC Cancer. - 2009. V. 16, N9 - P.186-190.

126. Gautan, S.C. Therapeutic efficacy of interleukin-2 activated killer cells against adriamycin resistant mouse B-16-BL6 melanoma / S.C. Gautan, N.F. Chikkala, I. Lewis, D.R. Grabowski, J.H. Finke, R. Ganapathi// Anticancer Res.- 1992.-V.12.-P.921-925.

127. Gebauer , G. Epithelial cells in bone marrow of breast cancer patients at time of primary surgery: clinical outcome during long-term follow-up / G. Gebauer, T. Fehm, E. Merkle et al. // J. Clin. Oncol. — 2001. — V. 19. — P. 3669-74.

128. Geiger, J. Treatment of solid tumors in children with tumor-lysate-pulsed dendritic cells. / J. Geiger, R. Hutchinson, L. Hohenkirk, E. McKenna, A. Chang, J. Mule // Lancet - 2000. - V. 356. - P. 1163-1165.

129. Gerber, B. Simultaneous immunohistochemical detection of tumor cells in lymph nodes and bone marrow aspirates in breast cancer and its correlation with other prognostic factors / B. Gerber, A. Krause, H. Muller et al.// J. Clin. Oncol. — 2001. — V. 19. — P. 960-71.

130. Gerosa, F. Reciprocal activating interaction between natural killer cells and dendritic cells. /F. Gerosa, B. Baldani-Guerra, C. Nisii, V. Marchesini, G. Carra, and G. Trinchieri //J. Exp. Med. - 2002. - V.195. - P.327-331.

131. Ghiringhelli, F. The role of regulatory T cells in the control of natural killer cells: relevance during tumor progression. / Ghiringhelli F, Menard C, Martin F, Zitvogel L. // Immunol Rev. - 2006. - V.214. - P.229-238.

132. Girardi, M. Regulation of cutaneous malignancy by gammadelta T cells. / Girardi M, Oppenheim DE, Steele CR, et al. // Science. - 2001. V.294. -P.605-609.

133. Godfrey D.I. NKT cells: facts, functions and fallacies / D.I. Godfrey, K.J. Hammond, L.D. Poulton et al. // Immunology Today. 0 2000. 0 N 21. HI P . 573583.

134. Godfrey, D. I. Going both ways: Immune regulation via CDld-dependent NKT cells / D. I. Godfrey, M. Kronenberg // Clin. Invest. - 2004. - V. 114. -P. 1379-1388.

135. Granucci, F. IL-2 mediates adjuvant effect of dendritic cells / F. Granucci, D. M. Andrews, M. A. Degli-Espoti, P. Ricciardi-Castagnoli //Trends in Immunology - 2002,- V. 23.- P. 169-171.

136. Gresser, I. Antibody to mouse interferon alpha/beta abrogates resistance to the multiplication of Friend erythroleukemia cells in the livers of allogeneic mice. / I Gresser, C Maury, F Vignaux, O Haller, F Belardelli, MG. Tovey // J Exp Med. - 1988. - V.168. - P.1271-1291.

137. Gresser, I. Interferon and cell division. IX. Interferon-resistant L1210 cells, characteristics and origin. / I Gresser, MT Bandu, D. Brouty-Boye // J Natl Cancer Inst. - 1974. - V.52. - P.553-559.

138. Gumperz, J. E. CD ld-restricted "NKT" cells and myeloid IL-12 production: an immunological crossroads leading to promotion or suppression of effective anti-tumor immune responses? / J. E. Gumperz // Journal of Leukocyte Biology -2004.-V. 76-P. 307-314.

139. Hart, D. N. J. Dendritic cells: unique leukocyte populations which control the primary immune response / Blood. - 1997. - V. 90. - P. 3245-3287.

140. Hasebe, H. Dysfunctional regulation of the development of monocyte-derived dendritic cells in cancer patients /H. Hasebe, H. Nagayama, K. Sato, M. Enomoto, Y. Takeda, T. A. Takahashi, K. Hasumi, M. Eriguchi // Biomed.&Pharmacother. - 2000. - V. 54 - P. 291-298.

141. Hayakawa, Y. Alpha-galactosylceramide (KRN7000) suppression of chemical- and oncogene-dependent carcinogenesis / Y Hayakawa, S Rovero, G Forni, MJ. Smyth // Proc Natl Acad Sci USA. - 2003. - V.100. - P.9464-9469.

142. Herberman, RB. Natural cell-mediated immunity. / RB Herberman, HT. Holden // Adv Cancer Res. - 1978. - V.27. - P.305-377.

143. Higashijima, J. Effect of splenectomy on antitumor immune system in mice./ Higashijima J, Shimada M, Chikakiyo M, Miyatani T, Yoshikawa K, Nishioka M, Iwata T, Kurita N. // Anticancer Res. - 2009. - V.29, N1. - P.385-393.

144. Hildenbrand, B. Immunotherapy of patients with hormone-refractory prostate carcinoma pre-treated with interferon-gamma and vaccinated with autologous PSA-peptide loaded dendritic cells—a pilot study./ Hildenbrand B, Sauer B, Kalis O, Stoll C, Freudenberg MA, Niedermann G, Giesler JM, Jiittner E, Peters JH, Haring B, Leo R, Unger C, Azemar M. // Prostate - 2007. - V.67, N5 — P.500-508.

145. Hiroishi K. IFN-alpha-expressing tumor cells enhance generation and promote survival of tumor-specific CTLs / K Hiroishi, T Tuting, MT. Lotze // J Immunol. - 2000. - V. 164. - P.567-572.

146.Hoffmann, T.K. Frequencies of tetramerl T cells specific for the wildtype sequence p53264-272 peptide in the circulations of patients with head and neck

cancer. / TK Hoffmann, AD Donnenberg, SD Finkelstein, VS Donnenberg, F Friebe-Hoffmann, EN Myers, et al. // Cancer Res - 2002. - V.62. - P. 521-529.

147. Hollstein, M. p53 mutations in human cancers. / M Hollstein, D Sidransky, B Vogelstein, C. Harris // Science - 1991. - V.253. - P.49-53.

148. Homma, S. Preventive antitumor activity against hepatocellular carcinoma (HCC) induced by immunization with fusions of dendritic cells and HCC cells in mice. / S. Homma, G. Toda, J. Gong, D. Kufe, T. Ohno // J. Gastroenterol. -2001. - V. 36.-P. 764-771.

149. Hontscha, C. Clinical trials on CIK cells: first report of the international registry on CIK cells (IRCC) / C. Hontscha et al. // J Cancer Res Clin Oncol. -

2011. - V.137, N2. -P.305-310.

150. Hoshino, K. Differential involvement of IFN-beta in Toll-like receptor-stimulated dendritic cell activation. / K Hoshino, T Kaisho, T Iwabe, O Takeuchi, S. Akira // Int Immunol. - 2002. - V.14. - P. 1225-1231.

151. Hsiao, Y.W. Interactions of host IL-6 and IFN-gamma and cancer-derived TGF-betal on MHC molecule expression during tumor spontaneous regression. / Hsiao YW, Liao KW, Chung TF, Liu CH, Hsu CD, Chu RM. // Cancer Immunol Immunother. - 2008. - V.57, N7. - P. 1091-1104.

152. Hsu, F.J. Vaccination of patients with B-cell lymphoma using autologous antigen-pulsed dendritic cells. / F. J. Hsu, C. Benike, F. Fagnoni, T. M. Liles, D. Czerwinski, B. Taidi, E. G. Englemann, R. Levy //Nature - 1996. - V. 392. -P. 245-252.

153. Huh, J.W. Prognostic significance of tumor-infiltrating lymphocytes for patients with colorectal cancer./ Huh JW, Lee JH, Kim HR. // Arch Surg. -

2012,- V.147, N4. - P.366-372.

154. Hui, D. A randomized controlled trial of postoperative adjuvant cytokine-induced killer cells immunotherapy after radical resection of hepatocellular carcinoma. / D. Hui et al. //Dig Liver Dis. - 2009. - V.41, N1. - P.36-41.

155.Hwang, W.T. Prognostic significance of tumor-infiltrating T cells in ovarian cancer: a meta-analysis. / Hwang WT, Adams SF, Tahirovic E, Hagemann IS, Coukos G. // Gynecol Oncol. - 2012. - V.124, N2. - P. 192-198.

156.Irving, B.A.The cytoplasmic domain of the T cell receptor zeta chain is sufficient to couple to receptor-associated signal transduction pathways. / BA Irving, A. Weiss//Cell - 1991,- V.64. P.891-901.

157. Ishikawa, T. Adoptive immunotherapy for head and neck cancer with killer cells induced by stimulation with autologous or allogeneic tumour cells and recombinant interleukin-2. / T. Ishikawa, T. Ikawa, M. Eura et al. // Acta Otolaryngol. Stockh. - 1989. - V. 6. - P. 346-351

158. Jager, E. Recombinant vaccinia/fowlpox NY-ESO-1 vaccines induce both humoral and cellular NYESO- 1-specific immune responses in cancer patients./ Jager E, Karbach J, Gnjatic S, Neumann A, Bender A, Valmori D, et al. //Proc Natl Acad Sci U S A - 2006. - V.103. -P.14453-14458.

159. Jansson, J. Acute lymphoblastic leukemia cells that survive combination chemotherapy in vivo remain sensitive to allogeneic immune effects. / Jansson J, Hsu YC, Kuzin II, Campbell A, Mullen CA. // Leuk Res. - 2010. - V.ll. [Epub ahead of print]

160. Jauch, K.W. Prognostic significance of bone marrow micrometastases in patients with gastric cancer / K.W. Jauch, M.M. Heiss, U. Gruetzner et al. // J. Clin. Oncol. — 1996. —V. 14, —P. 1810-1817.

161. Jeannin P. Outer membrane protein A (OmpA): a new pathogen-associated molecular pattern that interacts with antigen presenting cells-impact on vaccine strategies / Jeannin P, Magistrelli G, Goetsch L, Haeuw JF, Thieblemont N, Bonnefoy JY, Delneste Y. // Vaccine. - 2002. - V.19, N20, Suppl 4 - P.A23-27.

162. Jefford, M. The use of dendritic cells in cancer therapy / M Jefford, E Maraskovsky, J Cebon, I.D. Davis // Lancet Oncol. - 2001. - V.2 - P.343-353.

163. Jewett, A. Tumor induced inactivation of natural killer cell cytotoxic function; implication in growth, expansion and differentiation of cancer stem cells / A Jewett, HC Tseng. // J Cancer. -2011. -V. 2. - P.443-457.

164. Jiang, J. Treatment of advanced gastric cancer by chemotherapy combined with autologous cytokine-induced killer cells / J. Jiang , N Xu, C Wu, H Deng, M Lu, M Li, B Xu, J Wu, R Wang, J Xu, P Nilsson-Ehle // Anticancer Res. - 2006. -V.26, N.3B. — P.2237-2242.

165. Jiang, J.T. Increasing the frequency of CIK cells adoptive immunotherapy may decrease risk of death in gastric cancer patients. / Jiang JT, Shen YP, Wu CP, Zhu YB, Wei WX, Chen LJ, Zheng X, Sun J, Lu BF, Zhang XG. // World Gastroenterol J. - 2010. - V.16, N48 - P.6155-6162.

166. June, C.H. Adoptive T cell therapy for cancer in the clinic / CH. June // J Clin Invest - 2007. - V.l 17. - P. 1466-1476.

167. Kalinski, P. T-cell priming by type- 1 and type-2 polarized dendritic cells: the concept of a third signal / P Kalinski, CM Hilkens, EA Wierenga, ML. Kapsenberg // Immunol Today - 1999. - V.20. - P.561-567.

168. Kaplan, D.H. Demonstration of an interferon gamma-dependent tumor surveillance system in immunocompetent mice / V Shankaran, AS Dighe, E Stockert, M Aguet, LJ Old, RD Schreiber // Proc Natl Acad Sci USA. - 1998. V.95 — P.7556-7561.

169. Kato, M. Enhanced anti-tumor immunity by superantigen-pulsed dendritic cells / Kato M, Nakamura Y, Suda T, Ozawa Y, Inui N, Seo N, Nagata T, Koide Y, Kalinski P, Nakamura H, Chida K. // Cancer Immunol Immunother. -2011,- V.60, N7. - P.1029-1038.

170. Keller, R. Dendritic cells: their significance in health and disease / R. Keller, - Immunol. Letters. - 2001,- V. 78,- P. 113-122.

171. Kelly, J.M. Induction of tumor-specific T cell memory by NK cell-mediated tumor rejection / JM Kelly, PK Darcy, JL Markby, DI Godfrey, K Takeda, H Yagitab, et al. // Nat Immunol - 2002. - V.3. - P.83-90.

172. Kenna, T. NKT cells from normal and tumor-bearing human liver are phenotypically and functionally distinct from murine NKT cells / T. Kenna, L.G. Mason, S.A. Porcelli et al. // Journal of Immunology. — 2003. — V. 171, N4.-P. 1775-1779.

173. Khong, H.T. Natural selection of tumor variants in the generation of "tumor escape"phenotypes / H.T. Khong, N.P. Restifo // Nat Immunol. -2002. - V.3, N11. - P.:999-1005.

174. Kikuchi, T. Antigen-pulsed dendritic cells expressing macrophage-derived chemokine elicit Th2 responses and promote specific humoral immunity / T. Kikuchi, R.G. Crystal // J Clin Invest. - 2001. - V. 108, N6 - P. 917-927.

175. Kim, R. Cancer immunoediting from immune surveillance to immune escape / R. Kim, M. Emi, K. Tanabe // Immunology. - 2007. - V. 121, N1. - P. 1-14.

176. Kimura, H. A phase III randomized study of interleukin-2 lymphokine-activated killer cell immunotherapy combined with chemotherapy or radiotherapy after curative or noncurative resection of primary lung carcinoma. / H. Kimura, Y. Yamaguchi // Cancer - 1997. - V. 80, N1 - P.42-49.

177. Kimura, H. Prospective phase II study of post-surgical adjuvant chemo-immunotherapy using autologous dendritic cells and activated killer cells from tissue culture of tumor draining lymph nodes in primary lung cancer patients / H. Kimura, T. Iizasa, A. Ishikawa // Journal of Clinical Oncology. ASCO Annual Meeting Proceedings.- 2007. - V.25, N18S. - P. 3048 - 3055.

178. Kimura, H. Prospective phase II study of post-surgical adjuvant chemo-immunotherapy using autologous dendritic cells and activated killer cells from tissue culture of tumor draining lymph nodes in primary lung cancer patients / H. Kimura, T. Iizasa, A. Ishikawa, M. Shingyouji, M. Yoshino, M. Kimura, Y. Inada, K. Matsubayashi // Anticancer Research - 2008. - V.28. - P. 1229-1238.

179. Kimura, H. Tumor-draining lymph nodes of primary lung cancer patients: a potent source of tumor-specific killer cells and dendritic cells / Kimura H, Dobrenkov K, Iida T, Suzuki M, Ando S, Yamamoto N. // Anticancer Res. -2005. - V.25, N1 A. - P.85-94.

180. Klein, G. Tumor antigens / Klein G. // Annu Rev Microbiol. - 1966. - V.20 -P.223-252.

181. Kobari, M. Effect of intraportal adoptive immunotherapy on liver metastases after resection of pancreatic cancer/ M. Kobari, S. Egawa, K. Shibuya, M. Sunamura, K. Saitoh, S. Matsuno // Br J Surg. - 2000. - V.87, N1. - P.43-48.

182. Kobayashi, N. FOXP3+ regulatory T cells affect the development and progression of hepatocarcinogenesis / N. Kobayashi, N. Hiraoka, W. Yamagami et al. // Clin. Cancer Res. - 2007,- V.13.-P.902-911

183.Kornstein, M.J. Immunoperoxidase localization of lymphocyte subsets in the host responses to melanoma and nevi / MJ Kornstein, JS Brooks, DE. Elder // Cancer Res. - 1983. - V.43. - P. 2749-2753.

184. Kryczek, I. Phenotype, distribution,generation, and functional and clinical relevance of Thl7 cells in the humantumor microenvironment /1 Kryczek, M Banerjee, P Cheng, L Vatan, W Szeliga, S Wei, et al. // Blood - 2009. -V.l 14. P.1141-1149.

185.Lanier, L.L. Natural killer cell receptor signaling / L.L. Lanier // Curr Opin Immunol-2003,-V.l5.-P. 308-314.

186. Lappin, M. B. Analysis of mouse dendritic cell migration in vivo upon subcutaneous and intravenous injection. / M. B. Lappin, J. M. Weiss, V. Delattre, B. Mai, H. Dittmar, C. Maier, K. Manke, S. Grabbe, S. Martin, J. C. Simon//Immunology - 1999.-V.98. - P. 181-188.

187.Lee, P.P. Association of macrophage infiltration with angiogenesis and prognosis in invasive breast carcinoma / RD Leek, CE Lewis, R Whitehouse, M Geenall, J Clarke, AL Harris // Cancer Res - 1996. - V.56. - P.4625-4629.

188. Lee, P.P. Characterization of circulating T cells specific for tumor-associated antigens in melanoma patients / PP Lee, C Yee, PA Savage, L Fong, D Brockstedt, JS Weber, et al. // Nat Med - 1999. - V.5 - P.677-685.

189. Leonhartsberger N, Quality of life during dendritic cell vaccination against metastatic renal cell carcinoma. /Leonhartsberger N, Ramoner R,

Falkensammer C, Rahm A, Gander H, Holtl L, Thurnher M. // Cancer Immunol Immunother. 2012 Jan 26. [Epub ahead of print]

190. Lindemann, F. Prognostic significance of micrometastatic tumour cells in bone marrow of colorectal cancer patients / Lindemann F., Schlimok G., Dirschedl P. et al. // Lancet. — 1992. — V. 340. — P. 685-689.

191. Liu, X. Treatment of 121 patients with malignant effusion due to advanced lung cancer by intrapleural transfer of autologous or allogenic LAK cells combined with rIL-2 / X. Liu, D. Li, C. Zhang, D. Ba et al. //Med. Sci. J. -1993. - V.8.- P.186-189.

192. Lodge, P.A. Dendritic Cell-based Immunotherapy of Prostate Cancer: Immune Monitoring of a Phase II Clinical Trial. / P. A. Lodge, L. A. Jones, R. A. Bader, G. P. Murphy, M. L. Salgaller. // Cancer Research - 2000. - V. 60. -P. 829-833

193. Lollini, P.L. Cancer immunoprevention / PL Lollini, C De Giovanni, T Pannellini, F Cavallo, G Forni, P. Nanni // Future Oncol - 2005. - V.I.- P.57-66.

194. Lonial, S. Regulation of alloimmune responses by dendritic cell subsets /Lonial S, Torre C, David E, Harris W, Arellano M, Waller EK. // Exp Hematol. - 2008. - V.36, N10. - P.1309-1317.

195.Lotze, M.T. Dendritic cells. Biology and clinical applications / M.T. Lotze, A.W. Thomson - 1999. -237 P.

196. Luft, T. Functionally distinct dendritic cell (DC) populations induced by physiologic stimuli: prostaglandin E2 regulates the migratory capacity of specific DC subsets / T. Luft, M. Jefford, P. Luetjens, T. Toy, H. Hochrein, K.-A. Masterman, C. Maliszewski, K. Shortman, J. Cebon, E. Maraskovsky // Blood. - 2002. - V. 100. - P. 1362-1372.

197. Luszynski, W. Myeloid-derived suppressor cells - the new mechanism of immunosuppression in cancer / W. Luszynski, Krawczuk-Rybak M, Stasiak-Barmuta A. // Postepy Hig Med Dosw - 2008. - V. 21 ,N62. - P. 18-22.

198. Mamessier, E. Human breast tumor cells induce self-tolerance mechanisms to avoid NKG2D-mediated and DNAM-mediated NK cell recognition / E Mamessier, A Sylvain, F Bertucci, R Castellano, P Finetti, G Houvenaeghel, E Charaffe-Jaufret, D Birnbaum // Mor Blood - 2005. - V.l,N106(5) - P.1685-1693.

199. Mandapathil, M. Increased ectonucleotidase expression and activity in Treg of patients with head and neck cancer / M Mandapathil, MJ Szczepanski, M Szajnik, J Ren, DE Lenzner, EK Jackson, et al. // Clin Cancer Res - 2009. -V.15 - P.6348-6357.

200. Manjili, M.H. Revisiting cancer immunoediting by understanding cancer immune complexity. / M. H. Manjili // J Pathol. - 2011. - V.224,N1. - P. 5-9.

201. Mansi, J.L. Outcome of primary-breast-cancer Patients with micrometastases: a long term follow up study / J.L. Mansi, H. Gogas, J.M. Bliss et al. // Lancet. — 1999. — V. 354. — P. 197-202.

202. Margolin, K. Cytokine therapy in cancer. / K. Margolin // Expert Opin Biol Ther - 2008.-N 8-P. 1495-1505.

203. Martinez, O. Macrophage activation and polarization / O Martinez, A Sica, A Mantovani, M. Locati // Front Biosci - 2008. - V.l3. - P.453-461.

204. Masotti, A. Intrapleural administration of recombinant interleukin-2 in non-small cell lung cancer with neoplastic pleural effusion / Masotti A, Fumagalli L, Morandini GC. // Monaldi Arch Chest Dis. - 1997. - V.52, N3. - P.225-228.

205. Matera, L. The choice of the antigen in the dendritic cell-based vaccine therapy for prostate cancer / Matera L. // Cancer Treat Rev. - 2010. -V.36,N2. -P.131-41.

206. Mattijssen, V. Clinical and immunopathological results of a phase II study of perilymphatically injected recombinant interleukin-2 in locally far advanced, nonpretreated head and neck squamous-cell carcinoma / V. Mattijssen, P.H. De-Mulder, J. H.Schornagel et al. //J. Immunother. - 1991. - V.l. - P. 63-68.

207. Matzinger, P. An innate sense of danger / P. Matzinger // Semin Immunol — 1998.- V. 10-P.399-415.

208. Mayordomo, J.I. Bone marrow-derived dendritic cells pulsed with synthetic tumour peptides elicit protective and therapeutic antitumour immunity / J. I.Mayordomo, T.Zorina, W.J. Storkus, L. Zitvogel, C. Celluzzi, L. D. Falo, C. J. Melief, S. T. Ildstad, W. M. Kast, A. B. Deleo// Nat Med. - 1995. - V.12. -P.1297-1302.

209. Menetrier-Caux, C. IL-4 prevents the blockade of dendritic cell differentiation induced by tumor cells / C. Menetrier-Caux, M. C.Thomachot, L.Alberti, G.Montamin, J. Y. Blay // Cancer Res. - 2001. - V.61. - P. 3096-3104.

210. Minami, K. Negative feedback regulation of T helper type 1 (Thl)/Th2 cytokine balance via dendritic cell and natural killer T cell interactions./ K Minami, Y Yanagawa, K Iwabuchi, N Shinohara, T Harabayashi, K Nonomura, A Onoé K.etta, D Olive // Cancer Res. - 2011. - V.l,N71(21). - P.6621-6632.

211. Mocellin S. Cytokines and Immune Response in the Tumor Microenvironment / Mocellin S, Wang E, Marineóla FM. // J Immunother -(1991). 2001. - V.24, N5. -P.392-407.

212. Mocikat, R Natural killer cells activated by MHC class Ilow targets prime dendritic cells to induce protective CD8 T cell responses / Mocikat R, Braumüller H, Gumy A, Egeter O, Ziegler H, Reusch U, Bubeck A, Louis J, Mailhammer R, Riethmüller G, Koszinowski U, Rócken M.// Immunity . -2003. - V. 19. - P.561-569.

213. Morel, P. A. How do dendritic cells prevent autoimmunity? / P. A. Morel, M. Feili-Hariri // Trends in Immunology - 2001. - V. 22. - P. 546-547.

214. Moretta, A. Activating receptors and coreceptors involved in human natural killer cell-mediated cytolysis / A Moretta, C Bottino, M Vitale, D Pende, C Cantoni, MC Mingari, R Biassoni, L Moretta// Annu Rev Immunol. — 2001. -V.l9.-P. 197-223.

215. Morse, M. A. Migration of human dendritic cells after injection in patients with metastatic malignancies. / M. A Morse, R. E Coleman, G Akabani, N Niehaus, D Coleman, H. K. Lyerly // Cancer Res. - 1999. - V. 59. -P. 56-58.

216. Muccioli, M. Toll-like receptors as novel therapeutic targets for ovarian cancer / Muccioli M, Sprague L, Nandigam H, Pate M, Benencia F. // ISRN Oncol. - 2012. - V.2012. - ID642141. -P. 1-8.

217.Murphy, G.F. Autologous melanoma vaccine induces inflammatory responses in melanoma metastases: relevance to immunologic regression and immunotherapy / GF Murphy, A Radu, M Kaminer, D. Berg // J Invest Dermatol - 1993.-V.lOO(suppl). - P.335S-41.

218. Mushegian, A. Evolutionary perspective on innate immune recognition /A. Mushegian, R. Medzhitov // The Journal of Cell Biology - 2001. - V. 155, N. 5 — P.705-710.

219. Nair, S. K. Induction of tumor-specific cytotoxic T lymphocytes in cancer patients by autologous tumor RNA-transfected dendritic cells / S. K Nair, M Morse, D Boczkowski, R. I Cumming, L Vasovic, E Gilboa, H. K Lyerly // Ann. Surg. - 2002. - V. 235. - P. 540-549.

220. Nakagawa, R. Mechanisms of the antimetastatic effect in the liver and of the hepatocyte injury induced by a-galactosylceramide in mice /, R. Nakagawa I Nagafune, Y. Tazunoki et al. // Journal of Immunology. — 2001. — V.166,N 11. - P. 6578-6584.

221. Naume B., Wiedswang G., Borgen E. et al. The Prognostic Value of Isolated Tumor Cells in Bone Marrow in Breast Cancer Patients // Clin. Cancer Res. — 2004.—V. 10.—P. 3091-3097.

222. Naume, B. Detection of isolated tumor cells in Bone marrow in early-stage breast carcinoma patients: comparison with preoperative clinical parameters and primary tumor characteristics / B.Naume, E.Borgen, G. Kvalheim et al // Clin. Cancer Res. — 2001. — V. 7. — P. 4122-4129.

223. Nencioni, A. Cellular immunotherapy with dendritic cells in cancer: current status / A. Nencioni, P.Brossart //Stem Cells. - 2004. - V. 22. - P. 501-513.

224. Nestle, F. O. Vaccination of melanoma patients with peptide- or tumor lysate-pulsed dendritic cells / F. O.Nestle, S.Alijagic, M.Gilliet, Y.Sun, S.Grabbe, R. Dummer, G Burg, D. Schadendorf// Natur. Med. - 1996. - V. 2 -P. 328-332.

225. Nishioka, Y. Human monocyte-derived and CD83_ blood dendritic cells enhance NK cell-mediated cytotoxicity. / Y. Nishioka, N. Nishimura, Y. Suzuki, S. Sone.//Eur. J. Immunol.-2001.-V. 31.-P.2633-2636.

226. Niu, Q. Cord blood-derived cytokine-induced killer cells biotherapy combined with second-line chemotherapy in the treatment of advanced solid malignancies / Q. Niu // Int Immunopharmacol. — 2011. —V.1,N4 — P.449-456.

227. Noguera R. Extracellular matrix, biotensegrity and tumor microenvironment. An update and overview / Noguera R, Nieto OA, Tadeo I, Fariñas F, Alvaro T. // Histol Histopathol. - 2012 . - V.27,N6. - P.693-705.

228. O'Neill, D. W. Manipulating dendritic cell biology for the active immunotherapy of cancer / D. W. O'Neill, S. Adams, N.Bhardwaj //Blood. -2004.-V. 104.-P. 2235-2246.

229. O'Sullivan, G.C. Micrometastases in esophagogastric cancer: high detection rate in resected rib segments/ G.C.O'Sullivan, D.Sheehan, A. Clarke et al. // Gastroenterology. — 1999. — V.l 16. — P. 543-548.

230. Obeid, M. Leveraging the Immune System during Chemotherapy: Moving Calreticulin to the Cell Surface Converts Apoptotic Death from "Silent" to Immunogenic / M. Obeid, T. Panaretakis, A. Tesniere, N. Joza, R. Tufi, L. Apetoh, F. Ghiringhelli, L. Zitvogel, and G. Kroemer // Cancer Res — 2007. — V.67, N17 — P.7941-7945.

231. Oblel, D.A. Focus on TILs: Prognostic significance of tumor infiltrating lymphocytes in human melanoma / D.A. Oblel, R. Loewel, P. Yu and M. C. Mihm Jr. // Cancer Immunity. - 2009. - V. 9 - P. 3 - 23.

232,Ochoa, A.C. Arginase, prostaglandins, and myeloid supressor cells in renal cell carcinoma / AC Ochoa, AH Zea, C Hernandez, PC. Rodn'guez // Clin Cancer Res - 2007. - V.l3. - P.721-727.

233. Okawaki, M. Dose-finding study of anti-CD25 antibody for targeting regulatory T cells in locoregional immunotherapy of malignant effusion / Okawaki M, Yamaguchi Y, Okita R, Ohara M, Okada M. // Hiroshima J Med Sci. - 2008. - V.57, N1 - P.37-46

234. Okuna, K. Suppression of T-cell function in gastric cancer patients after total gastrectomy with splenectomy: implications of splenic autotransplantation / K Okuna, A Tanaka, H. Shironory et al. // Gastric cancer. — 1999. — N2. — P. 20-25.

235. Old LJ. Specific antigens of tumors and leukemias of experimental animals / Old LJ, Boyse EA. // Med Clin North Am. - 1966. - V.50, N3 - P.901-912.

236. Olioso, P. Immunotherapy with cytokine induced killer cells in solid and hematopoietic tumours: a pilot clinical trial. / Olioso P, Giancola R, Di Riti M, Contento A, Accorsi P, Iacone A. // Hematol Oncol. - 2009. - V.27. N3 -P.130-139.

237. Onji, M. On dendritic cell-based therapy for cancers / M. Onji, Sk. Md. F. Akbar // J Zhejiang Univ SCI - 2005. - V.6B., N1 - P. 1-3.

238. Onoe K, Thl or Th2 balance regulated by interaction between dendritic cells and NKT cells / K Onoe, Y Yanagawa, K Minami, N Iijima, K Iwabuchi// Immunol Res. - 2007. - V.38, N1-3 - P.319-332.

239. Ostrand-Rosenberg, S. Immune Surveillance: A Balance Between Pro- and Anti-tumor Immunity / S. Ostrand-Rosenberg // Curr Opin Genet Dev. — 2008. -V. 18,N1 -P. 11-18.

240. Pages, F. Effector memory T cells, early metastasis and survival in colorectal cancer / F Pages, A Berger, M Camus, F Sanchez-Cabo, A Costes, R Molidor, et al. // N Engl J Med - 2005. - V.353 - P.2654-2666.

241. Pajtasz-Piasecka, E. Dendritic cell-based vaccines for the therapy of experimental tumors / Pajtasz-Piasecka E, Indrova M. // Immunotherapy. -2010.-V.2, N2 - P.257-268.

242. Pannellini, T. Immunobiology of her-2/neu transgenic mice / T Pannellini, G Forni, P. Musiani / / Breast Dis. - 2004. - V.20. - P.33-42.

243. Pantel, K. Frequency and prognostic significance of isolated tumour cells in bone marrow of patients with non-small-cell lung cancer without overt metastases / K. Pantel, J. Izbicki, B. Passlick et al. // Lancet. — 1996. — V. 347, —P. 649-653.

244. Park S.H. The contribution of NKT cells, NK cells, and other gamma-chain-dependent non-T non-B cells to IL-12-mediated rejection of tumors /Park S.H., Kyin T., Bendelas A., Carnaud C. // The Journal of Immunology. — 2003. — V. 170. —N 3. — P. 1197-1201.

245. Parmiani, G. Cancer immunotherapy with peptide-based vaccines: what have we achieved? Where are we going? / G. Parmiani, C. Castelli, P. Dalerba, R. Mortarini, L. Rivoltini, F. M. Marincola, A. J. Anichini //Natl. Cancer Inst. -2002 - V.94. - P. 805-818.

246. Parmiani, G. Unique human tumor antigens: immunobiology and use in clinical trials / G Parmiani, A De Filippo, L Novellino, C. Castelli // J Immunol. - 2007. - V.178 - P.1975-1979.

247. Pasare, C. Toll Pathway-Dependent Blockade of CD4+CD25+ T CellMediated Suppression by Dendritic Cells / C. Pasare, R. Medzhitov // Science - 2003. - V. 299, N. 5609. - P. 1033 - 1036.

248. Pawelec, G. Immunotherapy and immunoselection - tumour escape as the final hurdle / G.Pawelec // FEBS Letters - 2004. - N567 - P. 63-66.

249. Peguet-Navarro, J. Gangliosides from human melanoma tumors impair Dendritic cell differentiation from monocytes and induce their apoptosis /J. Peguet-Navarro, M. Sportouch, I. Popa, O. Berthier, D. Schmitt, J. Portoukalian //J. Immunol. - 2003. - V. 170. - P. 3488-3494.

250. Pellegrini, M. Fighting cancers from within: augmenting tumor immunity with cytokine therapy/ Pellegrini M, Mak TW, Ohashi PS.// Trends Pharmacol Sci. - 2010. - V.31, N8. - P.356-363.

251. Piccioli, D. Contact-dependent stimulation and inhibition of dendritic cells by natural killer cells /D. Piccioli, S. Sbrana, E. Melandri, N.M. Valiante // J. Exp. Med. - 2002. - V.195. - P.335-339.

252. Pittet, M.J. Expansion and functional maturation of human tumor antigen-specific CD8 T-cells after vaccination with antigenic peptide / MJ Pittet, DE Speiser, D Lienard, D Valmore, P Guillaume, V Dutoit, et al. // Clin Cancer Res . - 2001. - V.7. - P. 796s-803.

253. Porgador, A. Natural killer cell lines kill autologous (32-rmcroglobulin-deficient melanoma cells: Implications for cancer immunotherapy / A. Porgador, O. Mandelboim, N. P. Restifo, J. L. Strominger // J Immunol. -2006.-V.176,-P. 5255-5266.

254. Provinciali, M. Immunosenescence and cancer vaccines / M. Provinciali //Cancer Immunol Immunother. - 2009. - V.58. - P.1959-1967.

255. Raman, D. Role of chemokines in tumor growth / D. Raman, P. J. Baugher, Y.M. Thu, A. Richmond // Cancer Lett. - 2007. - V. 256, N2 - P. 137-165.

256. Reichert, T.E. Human immune cells in the tumor microenvironment: mechanisms responsible for signaling and functional defects / TE Reichert, H Rabinowich, JT Johnson, TL. Whiteside // J Immunother. - 1998. - V.21. -P.295-306.

257. Reichert, T.E. Signaling abnormalities and reduced proliferation of circulating and tumor-infiltrating lymphocytes in patients with oral carcinoma / TE Reichert, L Strauss, EM Wagner, W Gooding, TL. Whiteside // Clin Cancer Res. - 2002. - V.8. - P.3137-3145.

258.Reichert, T.E. The number of intratumoral dendritic cells and z-chain expression in T cells as prognostic and survival biomarkers in patients with oral carcinoma / TE Reichert, C Scheuer, R Day, W Wagner, TL. Whiteside //Cancer - 2001. - V.91. - P.2136-2147.

259. Ren, X.B. Antitumor effect of large doses IL-2-activated HLA haploidentical peripheral blood stem cells on refractory metastatic solid tumor treatment / XB Ren, JP Yu, S Cao et al. // Cancer Biother Radiopharm - 2007. - V. 22. -P.223-234.

260. Restifo, N. Cancer vaccines / N. Restifo, M. Sznol // Cancer: Principles & Practice of Oncology. - 1997. - P.3023-3043.

261. Rodríguez-Cortés, O. Granulocyte colony-stimulating factor produces a decrease in IFNgamma and increase in IL-4 when administrated to healthy donors / Rodríguez-Cortés O, Vela-Ojeda J, López-Santiago R, Montiel-Cervantes L, Reyes-Maldonado E, Estrada-García I, Moreno-Lafont MC.// J Clin Apher. - 2010. - V.25,N4. - P. 181 -187.

262. Romani, N. Generation of mature dendrite cells from human blood: an improved method with special regard to clinical applicability / N.Romani, D. Reider, M. Heuer, S. Ebner, E. Kampgen, B. Eibl, D. Niederwieser, G. Schuler // J. Immunol. Methods. - 1996. - V.l96. - P. 137-151.

263. Romero, P. The human T cell response to melanoma antigens / P Romero, JC Cerottini, DE Speiser // Adv Immunol. - 2006. - V.92. - P. 187-224.

264. Rosenberg, S.A. A progress report on the treatment of 157 patients with advanced cancer using lymphokine-activated killer cells and interleukin-2 or high-dose interleukin-2 alone / SA Rosenberg, MT Lotze, LM Muul et al. // N Engl J Med - 1987. - V.316 - P. 889-897.

265. Rosenberg, S.A. Observations on the systemic administration of autologous lymphokine-activated killer cells and recombinant interleukin-2 to patients with metastatic cancer. / SA. Rosenberg, MT . Lotze, LM. Muul et al. // N Engl J Med- 1985.-V.313.-P. 1485-1492.

266. Rosenberg, S.A. Prospective randomized trial of high-dose interleukin-2 alone or in conjunction with lymphokine-activated killer cells for the treatment of patients with advanced cancer / S.A. Rosenberg, M.T. Lotze, J.C. Yang, S.L. Topalian, A.E. Chang, D.J. Schwartzentruber et al. // J Natl Cancer Inst. -1993. - V.85. - P.622-632.

267. Ruggeri, L. Effectiveness of donor natural killer cell alloreactivity in mismatched hematopoietic transplants. / L Ruggeri, M Capanni, E Urbani et al. // Science - 2002. - V.295. - P. 2097-2100.

268. Ruggeri, L. Exploitation of alloreactive NK cells in adoptive immunotherapy of cancer / L Ruggeri, A Mancusi, M Capanni, MF Martelli, A. Velardi // Curr Opin Immunol - 2005. - V. 17. - P.211-217.

269. Russell, J.H. Lymphocyte-mediated cytotoxicity / JH Russell, TJ. Ley // Annu Rev Immunol. - 2002. - V.20. - P.323-370.

270. Sabado, R.L. Directing dendritic cell immunotherapy towards successful cancer treatment /.Sabado R.L, N. Bhardwaj // Immunotherapy. - 2010 - V.2, N1. - P.37-56.

271. Sagiolo, D. Cytokine induced killer cells as promising immunotherapy for solid tumors / D. Sagiolo// J Cancer, - 2011. - V.2. - P.363-368.

272. Sahin, U. Serologic identification of human tumor antigens / U Sahin, O Tureci, M. Pfreundschuh // Curr Opin Immunol. - 1997. - V.9. - P.709-716.

273. Sallusto, F. Ceramide inhibits antigen uptake and presentation by dendritic cells / F. Sallusto, C. Nicolo, R. De Maria, S. Corinti, R. Testi // J. Exp. Med. 1996.-V. 184,N 6,- P. 2411-2416.

274. Sallusto, F. Distinct patterns and kinetics of chemokine production regulate dendritic cell function / F. Sallusto, B. Palermo, D. Lenig, M. Miettinen, S. Matikainen, I. Julkunen, R. Forster, R. Burgstahler, M. Lipp, A. Lanzavecchia // Eur. J. Immunol. - 1999,- V. 29,- P. 1617-1625.

275. Sallusto, F. Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granulocyte-macrophage colony-stimulating factor plus interleukin-4 and down-regulated by tumor necrosis factor a / F. Sallusto, A. Lanzavecchia // J. Exp. Med. - 1994. - V. 179. - P. 1109-1118.

276. Samara, K.D. Expression profiles of Toll-like receptors in non-small cell lung cancer and idiopathic pulmonary fibrosis / Samara KD, Antoniou KM, Karagiannis K, Margaritopoulos G, Lasithiotaki I, Koutala E, Siafakas NM. // Int J Oncol. - 2012. - V. 40, N5. - P. 1397-1404.

277. Sato, K. Antiviral response by natural killer cells through TRAIL gene induction by IFN-alpha/beta / K Sato, S Hida, H Takayanagi, et al. // Eur J Immunol. - 2001. - V.31. - P.3138-3146.

278. Schmidt-Wolf, I.G. Phase I clinical study applying autologous immunological effector cells transfected with the interleukin-2 gene in patients

with metastatic renal cancer, colorectal cancer and lymphoma / I.G. Schmidt-Wolf// Br Cancer J. - 1999. - V.81,N6. - P. 1009-1016.

279. Schmieder, A. Differentiation and gene expression profile of tumor-associated macrophages / Schmieder A, Michel J, Schönhaar K, Goerdt S, Schledzewski K. // Semin Cancer Biol. - 2012. - V.22, N4. - P.289-297.

280. Schuler-Thurner, B. Mage-3 and Influenza-Matrix Peptide-Specific Cytotoxic T Cells Are Inducible in Terminal Stage HLA-A2.1+ Melanoma Patients by Mature Monocyte-Derived Dendritic Cells / Schuler-Thurner B., Dieckmann D., Keikavoussi P., Bender A., Christian M., Helmut J., Claudia R., Ina H., Waltraud L., Rod D., Vincenzo C., von den Driesch P., Knop J., Brocker E. B., A. Enk, E. Kompgen, and G. Schüler // J Immunol. - 2000. -V.165.-P. 3492-3496.

281. Schuler-Thurner, B. Rapid Induction of Tumor-specific Type 1 T Helper Cells in Metastatic Melanoma Patients by Vaccination with Mature, Cryopreserved, Peptide-loaded Monocyte-derived Dendritic Cells / Schuler B. -Thurner, E. S. Schultz, T. G. Berger, G. Weinlich, S. Ebner, P. Woerl, A. Bender, Be. Feuerstein, P. O. Fritsch, N. Romani, G. Schüler // J. Exp. Med. -2002. - V.195. - P.1279-1288.

282. Seliger, B. The expression, function, and clinical relevance of B7 family members in cancer. /Seliger B, Quandt D. // Cancer Immunol Immunother. -2012.-V. 14. - [Epub ahead of print]

283. Semino, C. Adoptive immunotherapy of advanced solid tumors: an eight year clinical experience / C Semino, L Martini, P Queirolo, G Cangemi, R Costa, A Alloisio, G Ferlazzo, MR Sertoli, UM Reali, GB Ratto, G. Melioli // Anticancer Res. - 1999. - V. 19, N6. - P.5645-5649.

284.Serafini, P. Myeloid suppressor cells in cancer: recruitment, phenotype, properties, and mechanisms of immune suppression / P Serafini, I Borello, V. Bronte// Semin Cancer Biol. - 2006. - V. 16. P.53-65.

285. Sethi, G. Multifaceted link between cancer and inflammation / Sethi G, Shanmugam MK, Ramachandran L, Kumar AP, Tergaonkar V.// Biosci Rep. -2012.-V.32,N1.-P.1-15.

286. Shankaran, V. IFN-gamma and lymphocytes prevent primary tumour development and shape tumour immunogenicity / V Shankaran, H Ikeda, AT Bruce, JM White, PE Swanson, LJ Old, RD. Schreiber // Nature. - 2001. -V.410. - P. 1107-1 111.

287. Shen, W. Gnglioside GDI a impedes lipopoysaccharide-induced maturation of human Dendritic cells / W. Shen, S. Ladisch //Cell Immunol. - 2002. - V. 220.-P. 125-133.

288. Sheu, B.C. Cytokine regulation networks in the cancer microenvironment / Sheu BC, Chang WC, Cheng CY, Lin HH, Chang DY, Huang SC. // Front Biosci. - 2008. - V. 1,N13 - P.6255-6268.

289. Shi, M. Autologous cytokine-induced killer cell therapy in clinical trial phase I is safe in patients with primary hepatocellular carcinoma / M. Shi // World Gastroenterol J. - 2004. - V. 10,N8. - P. 1146-1151.

290. Shinkai, Y. RAG-2-deficient mice lack mature lymphocytes owing to inability to initiate VDJ rearrangement / Y Shinkai, G Rathbun, KP Lam, et al. // Cell. - 1992. - V.68. - P.855-867.

291.Shurin, G.V. Neuroblastoma-derived gangliosides inhibit dendritic cell generation and function / GV Shurin, MR Shurin, S Bykovskaja, J Shogan, MT Lotze, EM. Barksdale // Cancer Res. - 2001. - V.61. - P.363-369.

292. Sincovics, J.G. Human natural killer cells: a comprehensive review / Sincovics J.G., Horvath J.C. // Int J Oncol. - 2005. - V.27, N1. - P. 5-47.

293. Slavin, S. Immunotherapy in high-risk chemotherapy-resistant patients with metastatic solid tumors and hematological malignancies using intentionally mismatched donor lymphocytes activated with rIL-2: a phase I study / S. Slavin, A. Ackerstein, R. Or, M.Y. Shapira, B. Gesundheit, N. Askenasy, S. Morecki//Cancer Immunol Immunother- 2010. -V.59- P. 1511-1519.

294. Smyth, M.J. Cancer immunosurveillance and immunoediting: the roles of immunity in suppressing tumor development and shaping tumor immunogenicity / MJ Smyth, GP Dunn, RD Schreiber // Adv Immunol. - 2006. -V.90.-P.1-50.

295. Smyth, M.J. Differential tumor surveillance by natural killer (NK) and NKT cells / MJ Smyth, KY Thia, SE Street, et al. // J Exp Med. - 2000. - V.191. -P.661-668

296. Smyth, M.J. NK cells and NKT cells collaborate in host protection from methylcholanthrene-induced fibrosarcoma / MJ Smyth, NY Crowe, DI. Godfrey // Int Immunol. - 2001. - V. 13. - P.459-463.

297. Smyth, M.J. Perforin-mediated cytotoxicity is critical for surveillance of spontaneous lymphoma / MJ Smyth, KY Thia, SE Street, D MacGregor, DI Godfrey, JA Trapani // J Exp Med. - 2000. - V.192. - P.755-760.

298. Sombroek, M. J. Prostanoids play a major role in the primary tumor induced inhibition of dendritic cell differentiation / M. J. Sombroek, A. J. Stam, A. J. Masterson, S. M. Lougheed, M. J. Schakeel, C. J. Meijer, H. M. Pinedo, A. J. van den Eertwegh, R. J. Scheper, T. D. de Gruijl // J. Immunol. - 2002. - V. 168. - P. 4333-4343.

299. Stickel, J.S. HLA ligand profile of primary renal cell carcinoma maintained in metastases / JS Stickel, AO Weinzieri, N Hillen, O Drews, MM Schuler, J Hennenlotter, et al. // Cancer Immunol Immunother. - 2009. - V.58. - P. 14071417.

300. Stober, D. NKT cells provide help for dendritic cell-dependent priming of MHC class I-restricted CD8+ T cells in vivo / Stober D., Jomantaite I., Schirmbeck R., Peimann J. // The Journal of Immunology. - 2003. - V.170, № 5. - P.2540-2548.

301. Storkus, W. J. A 'good death' for tumor immunology / W. J. Storkus, L. D. Falo Jr // Nature Medicine- 2007. -V. 13, N 1 -P.28-31.

302. Strauss, L. A unique subset of CD4 1 CD25highFOXP3 1 T cells secreting IL-10 and TGFbl mediates suppression in the tumor microenvironment / L

Strauss, C Bergmann, M Szczepanski, W Gooding, TJ Johnson, TL. Whiteside // Clin Cancer Res. - 2007. -V.13. - P.4345-4354.

303. Street, S.E. Perforin and interferon-gamma activities independently control tumor initiation, growth, and metastasis / SE Street, E Cretney, MJ. Smyth // Blood. - 2001. - V.97. - P.192-197.

304. Street, S.E. Suppression of lymphoma and epithelial malignancies effected by interferon gamma / SE Street, JA Trapani, D MacGregor, MJ. Smyth // J Exp Med. - 2002. - V.196. - P.129-134.

305. Stutman, O. Immunodepression and malignancy /Stutman O. // Adv Cancer Res. - 1975. - V.22. - P.261-422.

306. Stutman, O. Tumor development after 3-methylcholanthrene in immunologically deficient athymic-nude mice / Stutman O. // Science. - 1974. - Y.8, N183(124).-P.534-536.

307. Sugimachi, K. Clinical evaluation of prophilactic splenectomy in a total gasrtectomy for gastric cancer / K. Sugimachi, Y. Kodama, R. Kumashiro et al. // Gastric cancer. - 1980. - V.70. - P.701-709.

308. Szczepanski, M.J. Triggering of toll-like receptor 4 expressed on human head and neck squamous cell carcinoma promotes tumor development and protects the tumor from immune attack / MJ Szczepanski, M Czystowska, M Szajnik, M Harasymczuk, M Boyiadzis, A Kruk- Zagajewska, et al. // Cancer Res. - 2009. - V.69. - P.3105-3113.

309. Takei, F. LAK cell therapy of AML: not to be lost in translation / Takei F. // Exp Hematol. - 2011. - V. 23. [Epub ahead of print]

310. Tan G. The Therapeutic Effect of Cytokine-Induced Killer Cells on Pancreatic Cancer Enhanced by Dendritic Cells Pulsed with K-RasMutant Peptide/ G. Tan, X. Zhang, H. Feng, H. Luo, and Zh. Wang. // Clinical and Developmental Immunology - 2011. - Article ID 649359 doi:10.1155/2011/649359

311. Tan, G. The Therapeutic Effect of Cytokine-Induced Killer Cells on Pancreatic Cancer Enhanced by Dendritic Cells Pulsed with K-RasMutant

Peptide / G.Tan, X. Zhang, H.Feng, H. Luo, and Z.Wang // Clinical and Developmental Immunology — 2011. — V. 1 — P. 1 -9.

312. Tanaka, F. Rapid generation of potent and tumor-specific cytotoxic T lymphocytes by interleukin 18 using dendritic cells and natural killer cells / F. Tanaka, W. Hashimoto, H. Okamura, P.D. Robbins, M.T. Lotze, H. Tahara // Cancer Res. - 2000. - V.60, N17. - P. 4838-4844.

313. Thacker, R.I. Cross-presentation of cell-associated antigens by mouse splenic dendritic cell populations / Thacker RI, Janssen EM.// Front Immunol. - 2012. -N3. - P.41-50.

314. Thakur, A. Induction of specific cellular and humoral responses against renal cell carcinoma after combination therapy with cryoablation and granulocyte-macrophage colony stimulating factor: a pilot study /Thakur A, Littrup P, Paul EN, Adam B, Heilbrun LK, Lum LG. // J Immunother. - 2011. -V.34, N5. - P.457-467.

315. Thanendrarajan, S. New adoptive immunotherapy strategies for solid tumours with CIK cells / Thanendrarajan S, Kim Y, Schmidt-Wolf I. // Expert Opin Biol Ther. - 2012. -V. 12,N5 - P.565-572.

316. Thomas, L. Reactions to homologous tissue antigens in relation to hypersensitivity. / L. Thomas // In: Cellular and Humoral Aspects of the Hypersensitive States. Lawrence HS, editor. Hoebers-Harper. - New York. -1959. - P. 529-532.

317. Thurner, B. Vaccination with mage-3Al peptide-pulsed mature, monocyte derived dendritic cells expands specific cytotoxic T cells and induces regression of some metastases in advanced stage IV melanoma. / B. Thurner, I. Haendle, C. Roder, D. Dieckmann, P. Keikavoussi, H. Jonuleit, A. Bender, C. Maszek, D. Schreiner, P. von den Driesh, E. B. Brocker, R. M. Steinman, A. Enk, E. Kampgen, G. Schuler //J. Exp. Med. - 1999. - V. 190. - P. 1669-1678.

318. Trapani, J.A. Granzimes: a family of lymphocyte granule serine proteases / J.A. Trapani // Genome Biol. - 2001,- V.2 - P. 3014 -3016.

319. Traweek, S.T. Keratin gene expression in nonepithelial tissues: Detection with polymerase chain reaction / S.T. Traweek, J. Liu, H. Battifora // Am J Pathol. — 1993. — V. 142. — P. 1111-1118.

320. Trobonjaca, Z. Activating immunity in the liver. I. Liver dendritic cells (but not hepatocytes) are potent activators of IFN-a release by liver NKT cells / Z. Trobonjaca, F. Leithauser, P. Moller et al. // The Journal of Immunology. -2001. - V.167, № 3. - P. 1413-1422.

321. Trobonjaca, Z. Activating immunity in the liver. II. IFN-(3 attenuates NK cell-dependent liver injury triggered by liver NKT cell activation / Trobonjaca Z., Kroger A., Stober D. et al. // The Journal of Immunology. - 2002. - V.168, № 8. - P. 3763-3770.

322. Tsujimura, K. Thymus-leukemia antigen (TL) as a major histocompatibility complex (MHC) class lb molecule and tumor-specific antigen / K.Tsujimura, Y. Obata , T. Takahashi // Cancer Sci - 2004. - V. 95,N. 6 - P.469-474.

323. Turcotte, S. Immunotherapy for metastatic solid cancers /Turcotte S, Rosenberg SA.// Adv Surg. - 2011. - N.45. - P.341-360.

324. Ueda, Y. Locoregional adoptive immunotherapy using LAK cells and IL-2 against liver metastases from digestive tract cancer. / Y Ueda, T Sonoyama, H Itoi, H Fujiwara, N Fuji, T Itoh, H Fujiki, T Yamashita, T Yoshimura, S Harada, K Okugawa, H. Yamagishi // Gan To Kagaku Ryoho - 2000. - V. 27, N12. - P.1962-1965.

325. Uematsu, S. Toll-like receptors and innate immunity / S Uematsu, S. Akira // J Mol Med. - 2006. - V.84. - P.712-725.

326. Uzzo, R.G. Alterations in NFkB activation in T lymphocytes of patients with renal cell carcinoma / RG Uzzo, PE Clark, P Rayman, T Bloom, L Rybicki, AC Novick, et al.// J Natl Cancer Inst - 1999. - V.91. - P.718-721.

327. van den Broek, M.E. Decreased tumor surveillance in perforin-deficient mice / ME van den Broek, D Kagi, F Ossendorp, et al. // J Exp Med. - 1996. -V.184. - P. 1781-1790.

328. van Herpen, C. M. Locoregional immunotherapy in cancer patients: review of clinical studies / C. M. Van Herpen, P. H. De Mulder // Ann. Oncol. - 2000. -V. 11, N10. -P.1229-1239.

329. Vardam, T.D. Regulation of a Lymphocyte-Endothelial-IL-6 Trans-Signaling Axis by Fever-Range Thermal Stress: Hot Spot of Immune Surveillance / T.D. Vardam, L. Zhou, M.M. Appenheimer, Q.Chen, W.-Ch. Wang, H.Baumann, Sh. S. Evans//Cytokine. - 2007. - V.39,N1. -P. 84-96.

330. Vendramini-Costa, D.B. Molecular Link Mechanisms between Inflammation and Cancer. /Vendramini-Costa DB, Carvalho JE.// Curr Pharm Des. - 2012. - V.22. [Epub ahead of print]

331. Viallat, J.R. Intrapleural immunotherapy with escalating doses of interleukin-2 in metastatic pleural effusions / Viallat JR, Boutin C, Rey F, Astoul P, Farisse P, Brandely M.//Cancer. - 1993. - V. 15, N71. - P.4067-4071.

332. Vollenweider, I. Ultrastructure of cell mediated cytotoxicity /1. Vollenweider, P. Grascurth//Electron Microsc.Rev.- 1991. - V.4. - P. 249-267.

333. von Kleist, S, Immunohistochemical analysis of lymphocyte subpopulations infiltrating breast carcinomas and benign lesions / S von Kleist, J Berling, W Bohle, C. Wittekind // Int J Cancer - 1987. - V.40. - P. 18-23.

334. Wallach, H.W. Intrapleural tetracycline for malignant pleural effusions / H.W. Wallach // Chest - 1975. - V.68. - P.510-512.

335. Wallet, M.A. Immunoregulation of Dendritic Cells / M. A. Wallet, P. Sen, R. Tisch. // Clinical Medicine & Research. - 2005. - V. 3,N3. - P. 166-175.

336. Wang G.Y., Wang S.J., Li Y. et al. Detecting bone marrow micrometastasis of gastric cancer by magnetic activated cell sorting combined with fluorescent activated cell sorting // Ai. Zheng. — 2005. — V. 24. — N 5. — P. 605-10.

337. Wang, E. A Global Approach to Tumor Immunology / E. Wang, M.C. Panelli, V. Monsurro, F. M Marincola // Cellular & Molecular Immunology. — 2004. - V.l, N.4 - P.256 - 266.

338. Wang, G.Y. Detecting bone marrow micrometastasis of gastric cancer by magnetic activated cell sorting combined with fluorescent activated cell sorting

/ Wang G.Y., Wang S.J., Li Y. et al. // Ai. Zheng. — 2005. — V. 24,N 5. — P. 605-610.

339. Weng, D.S. Minimally invasive treatment combined with cytokine-induced killer cells therapy lower the short-term recurrence rates of hepatocellular carcinomas / D.S. Weng // Immunother J. - 2008. - V.31,N1.- P.63-71.

340. West, E.J. Immune activation by combination human lymphokine-activated killer and dendritic cell therapy / West EJ, Scott KJ, Jennings VA, Melcher AA. // Br J Cancer. - 2011 - V.6, N105(6). - P.787-795.

341. West, N.R. Tumor-infiltrating lymphocytes predict response to anthracycline-based chemotherapy in estrogen receptor-negative breast cancer./ West NR, Milne K, Truong PT, Macpherson N, Nelson BH, Watson PH. // Breast Cancer Res. - 2011. - V. 13, N6 :R126 - P. 1 -13.

342. Whiteside TL. The local tumor microenvironment. / Whiteside T.L. Kaufmann H, Wolchok JD // General principles of tumor immunotherapy: basic and clinical applications of tumor immunology. - 2007. - P. 145-167.

343. Whiteside TL. The tumor microenvironment and its role in promoting tumor growth / Whiteside T.L. // Oncogene. - 2008. - V.27. - P.5904-5912.

344. Whiteside TL. Tumor infiltrating lymphocytes in human malignancies. / Whiteside T.L. // Austin (TX): R.G. Landes Co - 1993. - 357p.

345. Whiteside, T.L. Anti-tumor vaccines in head and neck cancer: targeting immune responses to the tumor / Whiteside T.L. // Curr Cancer Drug Targets.-2007. - V.7, N7. - P.633-642.

346. Whiteside, T.L. Immune suppression in cancer: effects on immune cells, mechanisms and future therapeutic interventions / Whiteside T.L. // Semin Cancer Biol - 2006. - V.16. - P.3-15.

347. Wolfl, M. Gangliosides inhibit the development from monocytes to dendritic cells /M. Wolfl, W. Y. Batten, C. Posovszky, H. Bernhard, F. Berthold // Clin. Exp. Immunol. - 2002. - V. 130. - P. 441-448.

348. Woo, E.Y. Regulatory CD4 1 CD25 1 T cells in tumors from patients with early-stage non-small cell lung cancer and late-stage ovarian cancer / E.Y.

Woo, C.S. Chu, T.J. Goletz, K. Schlienger, H. Yeh, G. Coukos, et al. // Cancer Res. - 2001. - V.61. - P.4766-4772.

349. Xue, Sh. Enhancing Immune Responses for Cancer Therapy / Sh. Xue, H.J. Stauss // Cellular & Molecular Immunology - 2007. - V.4,N3 - P. 172 - 185.

350. Yamaguchi, Y. Adoptive immunotherapy of cancer using autologus lymphocytes - current status and new strategies / Y. Yamaguchi, A. Ohshita, Y. Kawabuchi, K. Ohta et al. // Hum Cell. - 2003. - V.16.N4. - P. 183-189.

351. Yang, H.G. Dendritic cell-directed lentivector vaccine induces antigen-specific immune responses against murine melanoma /Yang HG, Hu BL, Xiao L, Wang P.// Cancer Gene Ther. - 2011. - V.18, N5. - P.370-380.

352. Yang, S. In vitro generated anti-tumor T lymphocytes exhibit distinct subsets mimicking in vivo antigen-experienced cells. / Yang S, Gattinoni L, Liu F, Ji Y, Yu Z, Restifo NP, Rosenberg SA, Morgan RA. // Cancer Immunol Immunother. - 2011. - V. 60, N5. - P.739-749.

353. Yasumoto, K. Induction of Lymphokine-activated Killer Cells by Intrapleural Instillations of Recombinant Interleukin-2 in Patients with Malignant Pleurisy Due to Lung Cancer / K Yasumoto, K Mivazaki, A Nagashima, T Ishida, T Kuda, T Yano, K Sugimachi, K. Nomoto // Cancer Research - 1987. - V.47 - P. 2184-2187.

354. Ye, F. Alterations of dendritic cell subsets in the peripheral circulation of patients with cervical carcinoma /Ye F, Yu Y, Hu Y, Lu W, Xie X.// J Exp Clin Cancer Res. - 2010. - V. 18,N29. - P.78-83.

355. Yokoyama, N. Immunohistochemical detection of lymph node micrometastases from gallbladder carcinoma using monoclonal anticytokeratin antibody / N Yokoyama, Y Shirai, K. Hatakeyama // Cancer. — 1999. — V. 85. — P. 1465-1469.

356. Yu, Y. Enhancement of human cord blood CD34cell-derived NK cell cytotoxicity by dendritic cells /Y. Yu, M. Hagihara, K. Ando, B. Gansuvd, H. Matsuzawa, T. Tsuchiya, Y. Ueda, H. Inoue, T. Hotta, S. Kato // J. Immunol. -2001. - V.166. - P. 1590-1599.

357. Zhang, L Gene expression profiles in normal and cancer cells / L Zhang, W Zhou, VE Velculescu, SE Kern, RH Hruban, SR Hamilton, et al. // Science -1997.-V.276. - P.1268-1272.

358. Zitvogel, L. The anticancer immune response: indispensable for therapeutic success?/ L. Zitvogel, L. Apetoh, F. Ghiringhelli, F. Andre, A. Tesniere, G. Kroemer // The Journal of Clinical Investigation - 2008. - V.l 18,N.6.- P. 19912002.

359. Zwirner, N. W. Cytokine-driven regulation of NK cell functions in tumor immunity: Role of the MICA-NKG2D system / N. W. Zwirner, M. B. Fuertes, M. V. Girart, C. I. Domaica, L. E. Rossi // Cytokine & Growth Factor Reviews — 2007. — V.l 8. — P. 159-170.

360. Chen, R. Cytotoxicities of low dose anticancer agents combining lymphokine activated killer cell against ovarian adenocarcinoma cell line SKOV3 / Chen R, Pan L, Zhou S. // Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. -1999.-V.4,N3.-P.172-174.