Естественная цитотоксическая активность дендритных клеток против клеток опухолевых линий и активированных лимфоцитов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат биологических наук Тыринова, Тамара Викторовна

• Тыринова, Тамара Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Тыринова, Тамара Викторовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ. РОЛЬ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК В ИММУННОМ ОТВЕТЕ (Обзор литературы)

1.1. ХАРАКТЕРИСТИКА ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК

1.1.1. Общие сведения о дендритных клетках

1.1.2. Фенотипические и функциональные особенности различных типов дендритных клеток

1.2. ЦИТОТОКСИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК

1.2.1. Молекулярные механизмы, опосредующие гибель клеток-мишеней

1.2.2. Цитотоксическая активность ДК против опухолевых клеток

1.2.3. Цитотоксическая активность ДК против иммуннокомпетентных клеток

1.3. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА №N01- И 11-4-ИНДУЦИРОВАННЫХ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ, ВКЛЮЧЕННЫХ В ИССЛЕДОВАНИЕ

2.2. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.2.1. Получение дендритных клеток и супернатантов цельных культур

2.2.2. Определение субпопуляций клеток методом проточной цитофлуориметрии

2.2.3. Определение цитотоксической активности ИФН-ДК

2.2.4.0ценка аллостимуляторной активности ИФН-ДК

2.2.5. Определение продукции цитокинов методом иммуноферментного анализа

2.3.СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ ЦИТОТОКСИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ИФН-ДК IN VITRO

3.2. ЦИТОТОКСИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ИФН-ДК БОЛЬНЫХ ОПУХОЛЯМИ ГОЛОВНОГО МОЗГА

3.3. РЕГУЛЯЦИЯ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ИФН-ДК IN VITRO

3.3.1. Коррекция цитотоксической активности ИФН-ДК при онкопатологии

3.3.2. Гормональная регуляция цитотоксической активности ИФН-ДК in vitro

3.4. ЦИТОТОКСИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ИФН-ДК ПРОТИВ 1 ЛИМФОЦИТОВ И NK-КЛЕТОК

ОБСУЖДЕНИЕ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

112

Список сокращений

АГ Антиген

АПК Антиген презентирующие клетки

ДК Дендритные клетки

ДНК Дезоксирибонуклеиновая кислота

дцДНК Двуцепочечная ДНК

ИЛ4-ДК Интерлейкин-4-индуцированные дендритные клетки

ИФН-ДК Интерферон-альфа-индуцированные дендритные клетки

КМ Костный мозг

ЛПС Липополисахарид

МНК Мононуклеарные клетки

ПК Периферическая кровь

СКЛ Смешанная культура лимфоцитов

сЭП Сополимер производных этиленпиперазина

ФГА Фитогемагглютинин

ЦТЛ Цитотоксические Т-лимфоциты

CD Кластер дифференцировки

CD40L лиганд к CD40

dsRNA Двуцепочечная рибонуклеиновая кислота

FADD Fas-ассоциированный домен смерти

FasL Fas-лиганд

GM-C SF Гранулоцитарно-макрофагальный

колониестимулирующий фактор

HLA-DR DR антигены главного комплекса гистосовместимости

IDO Индоламин 2,3-Диоксигеназа

IFN Интерферон

IL-2, IL-4 и др. Интерлейкин-2, интерлейкин-4 и др.

Ig Иммуноглобулин

МНС I, МНС II Молекулы I и II класса главного комплекса

гистосовместимости

NFkB Ядерный фактор кВ

NfC-клетки Натуральные киллерные клетки

PD-1 Рецептор смерти-1

rIL-2 Рекомбинантный IL-2

SN Супернатант

TGF-p Трансформирующий ростовой фактор-Р

ThO, Thl и Th2 Субпопуляции Т-хелперных клеток

TLR Toll-like рецептор

TNFa Фактор некроза опухолей-а

TRAIL TNF-связанный апоптоз-индуцирующий лиганд

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Естественная цитотоксическая активность дендритных клеток против клеток опухолевых линий и активированных лимфоцитов»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования:

Дендритные клетки (ДК), будучи профессиональными антигенпрезентирующими клетками, играют ведущую роль в запуске специфического противоопухолевого и противовирусного иммунного ответа [23]. Благодаря высокой плотности антигенпредставляющих молекул МНС I и II классов, экспрессии костимуляторных молекул (СБ80, СЭ86) и продукции широкого спектра цитокинов и хемокинов ДК обладают способностью активировать наивные Т-клетки, эффекторные С08+Т-клетки и индуцировать антигенспецифический иммунный ответ [22, 205]. В связи с этим большой интерес к ДК обусловлен их ключевой ролью в интеграции врожденного и адаптивного иммунного ответа. С другой стороны ДК относятся к клеткам врожденного иммунитета, направленного на разрушение и удаление из организма чужеродных и потенциально опасных эндогенных компонентов. Защитная функция клеток врожденного иммунитета опосредуется через механизмы фагоцитоза и киллинга с участием контактных взаимодействий и секретируемых продуктов. Поскольку ДК захватывают антигены путем макропиноцитоза, но не обладают способностью к фагоцитозу [129], вполне допустимо предположить, что эффекторная функция этих клеток, как и других клеток естественного иммунитета (№С-клетки, нейтрофилы, макрофаги), связана с цитотоксическим действием на клетки-мишени.

Действительно, исследования показали, что ДК могут подавлять рост и пролиферацию опухолевых клеток за счет прямого цитостатического и цитотоксического эффектов [100, 220], при этом не повреждая здоровые клетки [96, 100]. Однако данная функция ДК остается недостаточно исследованной.

Согласно данным литературы индуцированная ДК гибель опухолевых клеток может опосредоваться через механизмы апоптоза и некроза с вовлечением мембранно-связанных и растворимых молекул семейства

фактора некроза опухоли (TNFa, lymphotoxin-a 1 (32, FasL, TRAIL), а также перфорина и/или гранзима [46, 227]. При этом предполагается, что реализация тех или иных сигнальных путей цитотоксической активности ДК определяется наличием рецепторов и чувствительностью опухолевых клеток к соответствующим проапоптогенным лигандам.

Двойственная функция ДК как непосредственных эффекторов (клеток-киллеров) врожденного иммунитета и индукторов/регуляторов адоптивного иммунного ответа придает особую значимость ДК в противоопухолевой защите и привлекает к этим клеткам особый интерес в плане их терапевтического использования. Так, наличие прямой противоопухолевой цитотоксической активности «облегчает» поглощение опухолевых антигенов ДК и, следовательно, способствует более раннему развитию эффективного противоопухолевого иммунного ответа, индуцированного презентацией опухолевых антигенов в комплексе с МНС I и II класса наивным Т-клеткам и CD8+T-лимфоцитам [22].

Важно отметить, что в связи с малочисленностью популяции ДК в организме для изучения свойств и клинической апробации этих клеток в качестве вакцин используют культуры дендритных клеток, генерируемых in vitro из их предшественников. Большинство исследований основано на генерации миелоидных ДК in vitro путем культивирования моноцитов (CD14+) периферической крови в присутствии гранул оцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) и интерлейкина-4 (IL-4) [225]. Относительно недавно была также описана популяция ДК, генерируемая в культуре in vitro в условиях замены IL-4 на интерферон-a (ИФН-ДК). ИФН-ДК отличаются от ИЛ4-ДК более высокой миграционной активностью, выраженной антигенпрезентирующей функцией, большей стабильностью в условиях дефицита ростовых факторов, а также способностью стимулировать как Thl-, так и ТЬ2-ответ [40, 167, 187, 188]. Кроме того, ИФН-ДК являются более эффективными стимуляторами CD8+ эффекторных Т-клеток [123].

Согласно данным литературы, интерфероны являются мощными индукторами цитотоксической активности естественных киллерных клеток. Исследования показали, что интерфероны I типа и интерферон-у при краткосрочной обработке клеток in vitro могут также усиливать цитотоксическую активность стандартно генерируемых миелоидных ДК [70, 135]. Однако, противоопухолевый потенциал ДК, генерируемых в присутствии интерферона-a (IFNa), остается практически не изученным.

Значение цитотоксической активности ДК in vivo подтверждается рядом фактов. Во-первых, ДК присутствуют в зоне опухолевого роста, причем более высокое их содержание коррелирует с более благоприятным прогнозом [28]. Во-вторых, интактные ИЛ4-ДК (не нагруженные опухолевым антигеном) при локальном введении в опухоль ингибируют опухолевый рост и в ряде случаев вызывают ремиссию [67]. Кроме того, показано, что внутриопухолевое введение ИЛ4-ДК повышает эффективность химиотерапии, что может быть обусловлено суммацией противоопухолевого эффекта цитостатиков и ДК [67]. Тем не менее, данные об эффекторной функции ИФН-ДК при онкопатологии практически отсутствуют. В этом аспекте исследования цитотоксической активности ИФН-ДК могут иметь практическую ценность, обосновывая новые перспективы для использования аутологичных ДК при онкопатологии.

Следует отметить, что цитотоксическая активность ДК может играть важную роль не только в противоопухолевом, но и в противовирусном иммунном ответе. Клетками-мишенями цитотоксической активности ДК могут быть инфицированные вирусом папилломы человека кератиноциты и клетки цервикального эпителия [96, 126], отличающиеся повышенной экспрессией CD40 и TRAIL-R1/R2 по сравнению с неинфицированными клетками. Кроме того, цитотоксическая активность ДК может быть направлена на элиминацию вирус-инфицированных лимфоцитов. Это особенно важно, поскольку инфицирование клеток иммунной системы при вирусной инфекции способствует ослаблению иммунного ответа и

персистенции вирусной инфекции. Так, например, недавно продемонстрировано, что плазмацитоидные ДК способны индуцировать апоптоз С04+Т-лимфоцитов ВИЧ-инфицированных больных через TRAIL-зависимый сигнальный путь [203]. Эффекторная функция ДК может также иметь большое значение в негативной регуляции активированных Т-клеток при их взаимодействии с ДК. Недавние исследования показали, что миелоидные ДК участвуют в элиминации активированных, но не покоящихся CD4+ и CD8+T-лимфоцитов, и данная функция опосредуется через механизм FasL/Fas-индуцированного апоптоза [94]. Кроме того, недавно нами было продемонстрировано, что ИФН-ДК обладают цитотоксическим эффектом в отношении активированных NK-клеток [12].

Способность ДК индуцировать гибель активированных клеток иммунной системы может являться механизмом feed-back регуляции в ограничении иммунного и воспалительного ответа. С другой стороны, известно, что наряду со стимулирующим действием ДК могут подавлять иммунный ответ [204] и наличие цитотоксической активности ДК может быть еще одним механизмом толерогенной активности ДК наряду с

КА ___U ГГЧ

продукцией иммуносупрессивных цитокинов и генерацией регуляторных Т-клеток. Однако до сих пор цитотоксический эффект ДК в отношении клеток иммунной системы, а также молекулярные механизмы цитотоксической активности ДК остаются во многом неисследованными.

Все вышеизложенное определили цель и задачи настоящего исследования. Цель исследования

Изучить феномен, регуляторные механизмы и роль отдельных сигнальных путей в реализации цитотоксической активности интерферон-а-индуцированных дендритных клеток.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Охарактеризовать в культуре in vitro противоопухолевую цитотоксическую активность ДК, различающихся по степени зрелости (интактные и ЛПС-активированные) и условиям генерации (ИФН-ДК и ИЛ4-ДК).

2. Изучить механизмы, опосредующие цитотоксическую активность ИФН-ДК против опухолевых клеток.

3. Исследовать противоопухолевую цитотоксическую активность ИФН-ДК у больных с внутримозговыми глиомами, в том числе с высокой и низкой степенью злокачественности.

4. Оценить влияние иммуномодулирующих препаратов на основе производных этиленпиперазина, двуцепочечной ДНК человека и рекомбинантного интерлейкин-2 человека на цитотоксическую активность ИФН-ДК пациентов с внутримозговыми опухолями.

5. Исследовать влияние стероидных гормонов дегидроэпиандростерона сульфата (ДЭАС) и прогестерона на противоопухолевую цитотоксическую активность ИФН-ДК.

6. Изучить цитотоксическую активность ИФН-ДК против активированных Т-лимфоцитов и NK-клеток и вовлеченность отдельных сигнальных путей в реализацию данного эффекта.

Научная новизна

В результате выполнения работы впервые детально охарактеризован феномен цитотоксической активности ДК, генерированных в условиях замены IL-4 на IFNa, против разных типов клеток-мишеней. Установлено, что ИФН-ДК обладают дозозависимой цитотоксической активностью против NK-чувствительных и NK-резистентных опухолевых линий, включая TRAIL-чувствительные и TRAIL-резистентные мишени. Цитотоксический эффект ИФН-ДК против TRAIL-резистентных клеток НЕр-2 является контакт-зависимым, тогда как против TRAIL-чувствительных мишеней Jurkat частично опосредуется растворимыми факторами; обусловлен индукцией апоптоза клеток-мишеней и ассоциирован с экспрессией проапоптогенных

молекул (TRAIL, FasL, B7-H1, перфорина). При этом более высокая (по сравнению с ИЛ4-ДК) цитотоксическая активность ДК против TRAIL-чувствительных клеток-мишеней сопряжена с более высокой экспрессией TRAIL. Установлено, что апоптоз-индуцирующая активность ИФН-ДК в культурах клеток TRAIL-резистентной линии НЕр-2 опосредуется с вовлечением TNFa/TNF-RI сигнального пути.

Получены новые данные о нарушении цитотоксической функции ИФН-ДК против TRAIL-резистентных клеток НЕр-2 у больных с внутримозговыми опухолями высокой степени злокачественности и продемонстрированы возможности коррекции данного нарушения при культивировании ИФН-ДК с иммуноактивными препаратами на основе производных этиленпиперазина, двуцепочечной ДНК человека или рекомбинантного IL-2. Впервые показано, что стероидные гормоны прогестерон и ДЭАС обладают ингибирующим эффектом на цитотоксическую активность ИФН-ДК здоровых доноров против TRAIL-резистентных и TRAIL-чувствительных опухолевых линий.

Установлено, что ИФН-ДК способны индуцировать апоптоз активированных в алло-СКЛ CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов и NK-клеток. Цитотоксическая активность ИФН-ДК против активированных лимфоцитов опосредуется с участием В7-Н1 и молекул семейства TNF (TRAIL, TNFa и FasL). При этом блокирование PD-1/В7-Н1-сигнального пути приводит к двукратному снижению цитотоксической активности ИФН-ДК, тогда как ингибиция TRAIL/TRAIL-R2-, TNFa/TNF-Rl- и FasL/Fas-сигнальных путей существенно в меньшей степени подавляет проапоптогенный эффект ДК. Продемонстрировано, что CD4+ и CD8+ Т-клетки обладают сходной чувствительностью к РО-1/В7-Н1-медиируемому апоптозу, однако различаются по чувствительности к проапоптогенным молекулам TNF семейства. В частности, цитотоксический эффект ДК против CD4+T-лимфоцитов медиируется с участием молекул TRAIL, TNFa и FasL, тогда как против CD8+T-лимфоцитов опосредуется только через TNFa/TNF-Rl-сигнальный путь.

Теоретическая и практическая значимость

Теоретическая значимость работы заключается в расширении представлений о функциях ДК как клеток врожденного иммунитета, в частности характеристике цитотоксической активности дендритных клеток, генерируемых в культуре in vitro в условиях замены IL-4 на IFNa, а также раскрытии некоторых механизмов, опосредующих цитотоксическую функцию ДК против опухолевых мишеней и активированных лимфоцитов. Полученные результаты свидетельствуют о различной степени участия отдельных сигнальных путей в опосредовании цитотоксического эффекта ДК против опухолевых клеток и активированных лимфоцитов.

Наиболее выраженные нарушения цитотоксической активности ИФН-ДК против линии НЕр-2 у пациентов с опухолями высокой степени злокачественности и низкими показателями выживаемости свидетельствуют о патогенетической значимости цитотоксической функции ДК при опухолевом росте и обосновывают возможность использования данного критерия для диагностики степени злокачественности опухолей и сроков выживания у пациентов с внутримозговыми глиомами. Более высокая противоопухолевая активность ИФН-ДК по сравнению с ИЛ4-ДК и возможность коррекции исходно сниженной активности ИФН-ДК больных в культуре in vitro обосновывает целесообразность использования ИФН-ДК при проведении иммунотерапии у больных с онкопатологией, а также возможность коррекции in vitro нарушенных свойств ИФН-ДК при патологии.

Способность ИФН-ДК индуцировать апоптоз активированных Т-лимфоцитов и NK-клеток и преимущественная роль B7-H1/PD-1-сигнального пути в реализации данного эффекта раскрывает новый механизм негативной регуляции иммунного ответа при взаимодействии ДК с клетками иммунной системы.

Основные положения, выносимые на защиту

1. ИФН-ДК обладают дозозависимой противоопухолевой цитотоксической активностью, которая превышает аналогичную функцию ИЛ4-ДК против TRAIL-чувствительных мишеней (Jurkat), не отличается от цитотоксической активности ИЛ4-ДК против TRAIL-резистентных мишеней (НЕр-2), и в последнем случае реализуется с вовлечением TNFa/TNF-RI-сигнального пути.

2. Угнетение цитотоксической функции ДК у больных с внутримозговыми опухолями является характерным признаком глиом высокой степени злокачественности и сопряжен с низкой выживаемостью пациентов.

3. ИФН-ДК обладают цитотоксическим эффектом против активированных Т-лимфоцитов и NK-клеток, который реализуется с вовлечением B7-H1/PD-1-сигнального пути и в меньшей степени -молекул семейства TNF (TRAIL, FasL , TNFa).

Объем и структура диссертации

Диссертация написана в традиционном стиле и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения и выводов. Материал изложен на 136 страницах машинописного текста, включающего 7 таблиц и 21 рисунок. Прилагаемая библиография содержит ссылки на 239 литературных источника, в том числе 227 иностранных. Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: Всероссийских научно-практических конференциях «Дни иммунологии в Сибири» (Красноярск, 2010; Абакан, 2011), на Всероссийской научной конференции «Молекулярно-генетические основы функционирования цитокиновой сети в норме и при патологии» (Новосибирск, 2010), на 11-ом

международном симпозиуме по дендритным клеткам - 11th International Symposium on Dendritic Cells in Fundamental and Clinical Immunology -DC2010: Forum on Vaccine Science (Lugano, 2010), а также на 6-ой отчетной конференции ИКИ СО РАМН (Новосибирск, 2011). Апробация диссертации состоялась 13 декабря 2011 г на семинаре клинического отдела НИИ клинической иммунологии СО РАМН.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ, из них 6 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов диссертационных работ.

Работа выполнена в лаборатории клеточной иммунотерапии отдела клинической иммунологии НИИ Клинической иммунологии СО РАМН (руководитель лаборатории д.м.н., профессор, член-корреспондент РАМН Е.Р. Черных).

ГЛАВА 1. ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ. РОЛЬ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК В ИММУННОМ ОТВЕТЕ (Обзор литературы)

1.1. Характеристика дендритных клеток 1,1.1. Общие сведения о дендритных клетках

Дендритные клетки принадлежат к уникальным антигенпрезентирующим клеткам, морфология, фенотип и функции которых претерпевают значительные изменения в процессе дифференцировки из гематопоэтических СВ34+-клеток-предшественников костного мозга [111]. На первом этапе незрелые ДК циркулируют в крови, затем проникают в периферические ткани, где приобретают способность к захвату и процессингу антигенов. ДК присутствуют почти во всех тканях организма в результате их миграции в ответ на провоспалительные сигналы или внедрение микроорганизма [22]. В дальнейшем ДК мигрируют в региональные лимфатические узлы, где они презентируют антигены в комплексе с молекулами МНС I или II класса Т-лимфоцитам [116]. Причем представление антигена в комплексе с молекулами МНС I класса необходимо для активации СБ8+ЦТЛ, тогда как узнавание белкового комплекса, образующегося в результате связывания процессированного антигена с молекулами МНС II класса, необходимо для активации СБ4+Т-клеток.

Свойства ДК во многом обусловлены степенью зрелости и характером дифференцировки. В процессе дифференцировки ДК снижается их способность к пиноцитозу, но повышается уровень экспрессии молекул МНС, что способствует появлению функций эффективной презентации антигенов. Кроме того, по мере созревания ДК начинают активно экспрессировать костимуляторные и адгезионные молекулы - LFA-3 (CD58), В7-1 (CD80), В7-2 (CD86), ICAM-1 (CD54), ICAM-3 (CD50), CD40 [86].

ДК способны представлять антигены не только «наивным» Т-лимфоцитам, но и праймированным Т-клеткам памяти в паракортикальных зонах вторичных лимфоидных органов, а также (при определенных

условиях) В-лимфоцитам [205]. Это свойство несомненно определяет важную роль ДК в инициации иммунного ответа и является основанием для использования ДК при разработке новых терапевтических подходов при ряде заболеваний.

Первичные и вторичные В-клеточные фолликулы содержат фолликулярные ДК (ФДК), которые могут поглощать «интактный» антиген и сохранять его в течение длительного времени [43]. До сих пор не выяснено происхождение ФДК, однако показано образование некоторых из них из мезенхимальных фибробластов. ФДК презентируют антиген В-клеткам, способствуя созреванию антител, развитию гуморального иммунного ответа и формированию иммунной памяти.

В культуре ДК можно получить из мобилизованных клеток костного мозга и/или периферической крови гемопоэтических клеток-предшественников СБ34+и моноцитов в присутствии различных комбинаций цитокинов [8]. При культивировании ДК из СО 14+-моноцитов чаще всего используют смесь гранулоцитарно-макрофагального

колониестимулирующего фактора (ОМ-С8Б) и интерлейкина-4 (1Ь-4) [225], а при культивировании ДК из С034+клеток - ОМ-СББ и Т№а [186]. Кроме того, в коктейль цитокинов для увеличения пула ДК добавляют с-кк %ап<1, ШЗЬ, 1Ь-12 [199].

1.1.2. Фенотипические и функциональные особенности различных типов дендритных клеток

ДК представляют собой линейно-негативную гетерогенную популяцию, которую можно разделить на 2 типа клеток - миелоидные ДК (мДК) и плазмацитоидные (пДК). Несмотря на общего костномозгового предшественника, мДк и пДК фенотипически и функционально представляют собой различные субпопуляции ДК

мДК происходят из миелоидных предшественников и онтогенетически близки к моноцитарно/макрофагальной линии [60]. ДК миелоидного происхождения располагаются в эпидермисе кожи, слизистых оболочках

респираторного, урогенитального и гастроинтестинального трактов. Они также присутствуют в интерстиции солидных органов, таких, как сердце и почки, но отсутствуют при обычных условиях в «иммунологически привилегированных» органах. Типичными представителями мДК являются клетки Лангерганца в коже [200]. С фенотипической точки зрения мДК - это CD4+Lin~CDl lcbrightCD123dimCD45RO+CD2+-^etkh [181, 184]. Они экспрессируют миелоидные маркеры CD 13 и CD33, а также рецепторы для Fc-порции IgG и компонентов комплемента. Кроме того, незрелые мДК периферической крови (ПК) несут на своей поверхности молекулу BDCA-1 (Blood Dendritic Cells Antigen-1, CDlc) [147].

пДК, имеющие лимфоидных предшественников, характеризуются морфологией схожей с плазматическими клетками [44, 117, 180]. пДК обнаруживаются в лимфатических узлах, селезенке и тимусе [22]. пДК представляют собой CD4+LinXD 11 cCD 123brightCD45RA+CD2" клетки. Типичным маркером пДК является молекула CD 123, представляющая собой а-цепь рецептора к IL-3, который необходим для выживания предшественников пДК и их дифференцировки в зрелые пДК [54]. Кроме того, пДК экспрессируют молекулы BDCA-2 и BDCA-4 [147]. Все выше перечисленные маркеры не являются высоко специфичными для ДК ПК. Так, например, BDCA-1 экспрессируется B-лимфоцитами, a CD 123 гранулоцитами и моноцитами [144]. Однако, используя стратегию исключения популяций, экспрессирующих не характерные для ДК молекулы, с помощью проточной цитофлуориметрии можно охарактеризовать ДК и отнести их к тому или иному типу.

В норме количество циркулирующих ДК не превышает 1% от всех лейкоцитов ПК человека. При этом баланс миелоидных и плазмацитоидных ДК смещен в сторону первых. По разным данным индекс мДК/пДК может составлять от 1,5 до 7,5 [33, 172, 178]. Механизм поддержания баланса мДк и пДК в ПК неизвестен. Flt3 (Fms-like tyrosine kinase 3)-лиганд, продуцируемый гематопоэтическими и костно-мозговыми стромальными

клетками, в комбинации с другими ростовыми факторами стимулирует пролиферацию и дифференцировку клеток-предшественников ДК [66]. Ряд исследователей показали, что FltS-лиганд поддерживает развитие как мДК, так и пДК [21], тогда как G-CSF увеличивает количество только пДК в ПК [173]. Поскольку G-CSF рекрутирует гранулоциты и CD34+kлетки из КМ в ПК, возможно, что он также селективно мобилизует только пДК или их предшественники в ПК. Кроме того, показано, что гистамин, медиатор, активирующий тучные клетки и секретирующийся при аллергическом воспалении, поляризует ДК в сторону фенотипа, характерного для пДК [42]. Еще одним из факторов, определяющих развитие ДК в сторону плазмацитоидного или милоидного типа, может быть трансформирующий ростовой фактор (3 (TGF-(3). Показано, что TGF-(31 индуцирует экспрессию транскрипционных факторов (IFN regulatory factor-4, RelB), характерных для мДК, а также ряда ингибиторных факторов, которые подавляют развитие пДК [72].

Интересные данные были получены Zuniga и соавт. о пластичности пДК. Установлено, что костно-мозговые предшественники пДК под влиянием вирусной двуцепочечной РНК в присутствии IFN I типа претерпевают фенотипические и функциональные изменения и дифференцируются в мДК, приобретая антигенпрезентирующие свойства, а также способность распознавать различные микробные структуры через toll-Нке-рецептор-4 (TLR-4) [239].

Нарушение гомеостаза ДК может сопровождать различные патологические состояния у человека. Показано, что при аутоиммунных заболеваниях пДК отличаются повышенной продукцией IFNa [33], что вносит негативный вклад в развитие болезни, поскольку IFNa направляет дифференцировку моноцитов в мДК. В свою очередь, мДК захватывают циркулирующие комплексы, содержащие нуклеиновые кислоты, и активируют аутореактивные В-лимфоциты, что ведет к увеличению продукции аутоантител плазматическими клетками [101, 178]. Для пациентов

с ревматоидным артритом характерно снижение количества циркулирующих мДК и пДК по сравнению со здоровыми донорами. При этом в синовиальной жидкости больных содержание мДК значительно превышает аналогичный показатель, характерный для здоровых доноров, что свидетельствует о миграции мДК из крови в воспаленные ткани [178]. Кроме того, показатели активности РА коррелируют с количеством мДК. Дефицит мДК и пДК наблюдается также у септических больных, что можно объяснить усилением апоптоза ДК или возможной миграцией циркулирующих предшественников ДК в очаги воспаления [30]. Интересно отметить, что продукция IFNa пДК в ответ на стимуляцию лигандами к TLR-9 значительно снижена при сепсисе [172]. Нарушение соотношения миелоидных и плазмацитоидных ДК отмечают и при онкопатологии. Показано, что у пациентов с раком яичников и легких снижено относительное и абсолютное содержание мДК и повышено количество пДК как в ПК, так и в асцитической жидкости [229]. Подобное изменение может иметь значение в патогенезе развития и прогрессирования опухоли, поскольку пДК обладают толерогенной активностью и индуцируют Т-клеточную анергию [56, 204].

мДК и пДК обладают различными миграционными способностями. Циркулирующие мДК проникают в периферические ткани или очаги воспаления через кровяное русло, захватывают чужеродный антиген и мигрируют в региональные лимфатические узлы через афферентные лимфатические сосуды. В дальнейшем происходит дифференцировка в зрелые ДК, обладающие высокой способностью стимулировать наивные Т-клетки, презентировать и процессировать АГ Т-клеткам для инициации Т-клеточного ответа [25].

Незрелые пДК, которые отличаются сниженной фагоцитарной активностью против экзогенных патогенов, могут напрямую проникать в Т-клеточную зону лимфоидных тканей через высокий эндотелий венул [44]. Этот процесс обусловлен взаимодействием L-селектина, присутствующего на ДК, с его лигандом - адрессином, экспрессируемым эндотелиальными

клетками [44, 99]. ТаИшеп и соавт. показали, что пациенты с аллергическим ринитом отличаются повышенной экспрессией адрессинов в слизистой носа, что обусловливает рекрутирование и накопление пДК. [99]. После проникновения в Т-клеточную зону в ответ на стимуляцию бактерий или вирусов через ТЬЯ пДК продуцируют большое количество ШИ I типа, что в свою очередь стимулирует мДК-опосредованный иммунный ответ к экзогенным патогенам. Вслед за этим предшественники пДК превращаются в зрелые пДК (интердигитальные клетки) [235], которые также регулируют иммунный ответ [54, 235].

Важную роль в инициации врожденного иммунного ответа на патоген играют ШП-Нке-рецепторы. Нужно отметить, что миелоидные и плазмацитоидные ДК отличаются между собой экспрессией ТЬЯ. Так, для мДК характерны ТЬЯ-1, ТЬЯ-2, ТЬЯ-З, ТЬЯ-4, ТЬЯ-5 и ТЬЫ-8, тогда как для пДК - ТЫ1-7 и ТЬЯ-9 [54, 198]. Связывание ТЬЯ-2 с пептидогликанами грам-положительных бактерий, а также ТЬЯ-4 с липополисахаридом (ЛПС) грам-негативных бактерий стимулирует продукцию дендритными клетками провоспалительных цитокинов Т№а, 1Ь-1р и 1Ь-6. Активация мДК вирусной двуцепочечной РНК или ее аналогом - ро1у(Г.С) через ТЫ1-3 индуцирует секрецию ШИа/р и 1Ь-12р70. В свою очередь, пДК в ответ на стимуляцию ТЬЯ-7 и ТЬЯ-9 вирусной одноцепочечной РНК и неметилированными СрО-олигонуклеотидами ДНК вирусов, соответственно, продуцируют большое количество №N0,, играя важную роль в противовирусном иммунитете [119, 198].

Участие пДК и мДК определяет поляризацию наивных Т-клеток в сторону ТЫ или ТЪ2 типа во время развития первичного иммунного ответа [179]. мДК продуцируют 1Ь-12, определяя таким образом развитие ТЬ1-клеток, тогда как пДК секретируют 1Ь-12 в небольшом количестве и способствуют развитию ТЬ2-ответа [21, 173]. С другой стороны, несмотря на более низкую по сравнению с мДК продукцию 1Ь-12, пДК являются основными продуцентами П^а/р, обладающими частично схожими с 1Ь-12

биологическими эффектами. IFNa/ß индуцируют дифференцировку наивных CD4+T-лимфоцитов в сторону Thl-клеток, продуцирующих IFN-y [107], а также подавляет секрецию IL-4 и IL-5 [63] через активацию транскрипционного фактора STAT-4 [161]. Кроме того, Krug и соавт. показали, что при стимуляции CpG-олигонуклеотидами и CD40L пДК также могут секретировать на высоком уровне IL-12. [119]. С другой стороны, IL-3, будучи ростовым фактором для пДК, в присутствии CD40L снижает продукцию дендритными клетками IL-12 или IFN I типа. В этом случае пДК индуцируют наивные С04+Т-клетки к выработке IL-4, IL-5 и IL-10 [107]. Продуцентами IL-3 могут быть базофилы, эозинофилы и тучные клетки, например, при паразитарной инфекции, тем самым, соответственно, стимулируя пДК к инициированию ТЬ2-клеточного иммунного ответа. Кроме того, наряду с иммуногенной функцией пДК могут обладать толерогенной активностью. Так, исследования показали, что свежевыделенные пДК индуцируют анергию С04+Т-клеток [121], а активация пДК IL-3 и CpG-олигонуклеотидами способствует дифференцировке CD4+ наивных Т-клеток в сторону IL-10-продуцирующих CD4+CD25+Foxp3+ регуляторных Т-клеток [155].

Ряд авторов описали пластичность мДК в развитии Т-клеточного ответа. Так, например, ЛПС Е. coli, пептидогликаны грам-негативных бактерий, St. aureus, Н. pylori, М. tuberculosis, двуцепочечная РНК вируса [98] активируют ДК к продукции IL-12 и направляет Т-клеточный ответ в сторону Thl, тогда как аллергены клеща домашней пыли (Der р 1) [84], ряд внеклеточных паразитов, холерный токсин активируют мДК к индукции Th2-клеток [58], что связано с более низкой способностью ДК продуцировать IL-12. Стимулирующим влиянием на незрелые мДК к индукции ТЬ2-иммунного ответа обладают и другие молекулы, в том числе IL-10, TGF-ß и простагландин Е2, гистамин [108, 110, 114]. Это указывает на то, что функциональные различия в направлении Т-клеточного ответа зависят не только от типа ДК, но и от сигналов, исходящих из их микроокружения.

1.2. Цитотоксическая активность дендритных клеток

1.2.1. Молекулярные механизмы, опосредующие гибель клеток-мишеней

Недавние исследования показали, что цитотоксическим потенциалом против различных клеток-мишеней наряду с NK-клетками и ЦТЛ обладают ДК. При этом описывают различные варианты механизмов, используемые ДК для элиминации вирус-инфицированных и опухолевых клеток.

Существуют два основных пути реализации апоптоза. Один из них опосредуется проапоптогенными молекулами, относящимися к семейству TNF, в том числе TNFa, TNFß (лимфотоксин), FasL, TRAIL (Apo2L) и CD40L. Второй путь связан с цитолитическими медиаторами перфорином и гранзимами, находящимися в цитоплазматических гранулах эффекторных клеток. Многочисленные исследования демонстрируют, что все эти механизмы характерны для реализации цитотоксической функции ДК. Рассмотрим несколько подробнее перечисленные механизмы индукции апоптоза в клетках-мишенях.

TRAIL/Apo2L и FasL, относящиеся к семейству TNF-лигандов, экспрессируется в клетках в виде трансмембранных белков II типа [159, 190]. В результате расщепления протеазами их внеклеточные домены могут также высвобождаться из клетки в свободном растворимом тримерном виде. В отличие от FasL, экспрессия мРНК TRAIL наблюдается в различных типах клеток, но при этом TRAIL способен индуцировать апоптоз в культурах клеток различных типов опухолей, не повреждая нормальные клетки [190, 195].

Механизм индукции апоптоза сходен для FasL и TRAIL. Проапоптотический эффект этих молекул основан на взаимодействии с соответствующими рецепторами, относящимися к семейству TNF. При этом если для FasL существует только один рецептор - Fas (CD95) [159], то TRAIL может связываться с 5 типами рецепторов [195]. Два из них - TRAIL-R1/death receptor (DR4) и TRAIL-R2/TRICK2 (DR5) - способны проводить сигнал апоптоза, поскольку содержат так называемые домены смерти (DD).

Связывание TRAIL с рецепторами-«ловушками» TRAIL-R3/decoy receptor l(DcRl) и TRAIL-R4/decoy receptor 2 (DcR2), не приводит к клеточной гибели, так как эти рецепторы не имеют цитоплазматического домена смерти, либо он находится в виде усеченного нефункционального варианта. Однако они также играют важную роль в регуляции TRAIL-индуцированного апоптоза. Рецепторы DcRl и DcR2 ингибируют TRAIL-опосредованный апоптоз, конкурируя с рецепторами смерти DR4 и DR5 за связывание с TRAIL или препятствуя передаче сигнала апоптоза. Наконец, TRAIL может связываться с остеопротегерином (OPG) [68], растворимым гомологом TNF-R. OPG является рецептором, обладающим слабым сродством к TRAIL, и его физиологические функции до конца не известны. Показано, что OPG может ингибировать остеокластогенез, в результате чего увеличивается плотность костной ткани in vivo. Кроме того, OPG при связывании с TRAIL активирует сигнальные пути, способствующие выживанию опухолевых клеток при раке предстательной железы и миеломе у человека [91, 197].

Связывание цитотоксических лигандов TRAIL и FasL с рецепторами (TRAIL-R1 или TRAIL-R2 и Fas, соответственно) приводит к взаимодействию последних с адаптерным протеином FADD (Fas-ассоциированный протеин, содержащий домен смерти) [34]. Вслед за этим FADD рекрутирует прокаспазы-8 или -10 за счет связывания через эффекторные домены смерти (DED), присутствующие в этих молекулах. В результате образуются агрегаты, называемые сигнальными комплексами, индуцирующими смерть (DISC - death-inducing signaling complex), в которых происходит активация каспаз путем аутокаталитического расщепления. Каспазы - семейство цистеиновых протеиназ, расщепляющих свои субстраты по остаткам аспартатовой кислоты [211]. Каспазы присутствуют в цитоплазме в виде проэнзимов и активируются до полностью функциональных протеаз путем расщепления проэнзима на большую и малую субединицы и дальнейшего отщепления от них N-концевых доменов. Затем субъединицы собираются в тетрамеры с двумя активными центрами.

Инициаторная каспаза-8 расщепляет прокаспазу-3, -6 и -7, эффекторов апоптоза, до формы активных ферментов [59]. В этом случае процесс гибели клетки оказывается уже необратимым. Расщепление каспазами ряда ключевых субстратов, в частности ингибиторов нуклеаз, ламинов - ядерных цитоскелетных белков и т.д., приводит к фрагментации ДНК и деструкции клетки [53].

Характерно, что в одних клетках-мишенях (клетки I типа) связывание лиганда с рецептором бывает достаточно для запуска программированной гибели, тогда как в других (клетки II типа) происходит запуск внутреннего митохондриального пути индукции апоптоза [190]. Кроме того, что внутренний путь может быть активирован ферментами внешнего пути, каспазой-8 и каспазой-10, он также может инициироваться продуктами клеточного стресса, вызванного, например, ультрафиолетовым излучением или экстремальными температурами. В этом случае активированная каспаза-8 или -10 расщепляет протеин Bid [190], относящийся к проапоптотическому семейству белков Вс1-2. Далее Bid транслоцируется в митохондриальную мембрану и взаимодействует с другими молекулами-членами семейства Вс1-2 (Вах и Bäk), что приводит выходу цитохрома С в цитозоль клетки [217]. Высвобождаемый из митохондрий цитохром С вместе с цитоплазматическим фактором APAF-1 (apoptosis protease activating factor-1) участвует в активации каспазы-9, что в дальнейшем активизирует эффекторные каспазы-3,-6, и-7 [130].

Кроме TRAIL и FasL, семейство гомотримерных TNF-лигандов включает в себя TNFa, TNFß (лимфотоксин), CD40L, CD27L, CD30L, OX40L. Во внеклеточной части молекул семейства рецепторов TNF содержится от двух до шести цистеинобогащенных доменов, аминокислотные последовательности которых весьма схожи у различных представителей семейства, в результате чего гомология этого района белков достигает 25% [27]. Цитоплазматические же части рецепторов отличаются значительной вариабельностью. Исключение составляют Fas, TRAIL-Rl, TRAIL-R2 и TNF-

R1, содержащие в цитоплазматических участках гомологичные домены (около 80 аминокислот), которые имеют существенное значение для передачи апоптотического сигнала. В случае TNFa взаимодействие рецептора и лиганда также приводит к образованию кластеров рецепторных молекул и связыванию их внутриклеточных участков с адаптерным белком TRADD (TNF-R1-associated DD-protein), содержащим домен смерти (DD) и имеющим сходную структуру с FADD. В дальнейшем запускается тот же каскад клеточных реакции, что и при FasL/Fas и TRAIL/TRAIL-DR взаимодействиях [82].

Интересно отметить, что для TNFa описаны два клеточных рецептора TNF-R1 и TNF-R2 [81]. Оба рецептора TNF могут передавать сигнал как апоптоза, так и активации транскрипционного фактора NF-кВ, но в большинстве случаев передача этих сигналов осуществляется через TNF-R1 [218]. TNF-R1 индуцирует клеточную смерть лишь под воздействием определенных условий. Наличие домена смерти в цитоплазматической части TNF-R1 определяет участие этого рецептора в передачи апоптотического сигнала [209]. Хотя TNF-R2 не связан непосредственно с апоптозом, тем не менее, у дефектных по TNF-R2 мышей выявлено снижение уровня клеточной гибели при обработке TNFa [69], тогда как повышенная экспрессия TNF-R2 может привести к увеличению чувствительности к индуцируемому TNFa апоптозу [218]. Кроме TNF-R2, к рецепторам, не содержащим доменов смерти, относятся CD40, CD30, LT-(3R и CD27 и ряд других [81]. Эти рецепторы вовлечены преимущественно в транскрипцию генов, ответственных за адаптацию клетки, ее рост и дифференцировку, хотя при определенных условиях они способны проводит сигналы, ингибирующие клеточный рост.

Грануло-опосредованная цитотоксичность представляет собой процесс, заключающийся в распознавании эффекторными клетками клеток-мишеней, поляризации цитотоксических гранул к иммунологическому синапсу, и высвобождение их содержимого в синапс для индукции апоптоза клеток-

мишеней [133]. Перфорин (Pfr), который обеспечивает проникновение гранзимов в цитозоль клеток-мишеней, является одной из ключевых молекул цитотоксической активности NK-клеток и ЦТЛ. Показано, что Pfr"7" мыши отличаются повышенной чувствительностью к спонтанному развитию опухоли [201]. Перфорин и гранзимы находятся в гранулах клеток-эффекторов. При этом перфорин связан с протеогликаном серглицином, который поддерживает перфорин в мономерной неактивной форме [170]. Нейтральный pH в иммунологическом синапсе позволяет перфорину диссоциировать от серглицина и полимеризоваться с формированием пор на мембране клеток-мишеней через Са2+-зависимый механизм. Образующиеся при этом поры могут функционировать как неселективные ионные каналы. Проникновение через них воды и низкомолекулярных веществ вызывает коллоидно-осмотический лизис клеток-мишеней.

Гранзим В, наиболее активный среди всех гранзимов, представляет собой каспазо-подобную сериновую протеазу, специфичную в отношении остатков аспарагиновой кислоты [26]. Гранзим В, проникая через перфориновые поры в клетки-мишени, вызывает фрагментацию двуцепочечной ДНК как каспазо-зависимым, так и каспазо-независимым путями. В случае каспазо-зависимой гибели клеток, прокаспазы-3 и -8 расщепляются гранзимом В до активных форм, что в дальнейшем запускает каскад клеточных реакций апоптоза. При каспазо-независимом пути гранзим В активирует митохондриальный протеин Bid, который, как уже выше было описано, в дальнейшем рекрутирует белки Вс12-семейства Вах (Вс12-associated X protein) и Bäk (Bcl2-antagonist/killer) и способствует выпуску активных форм кислорода и цитохрома С из митохондриальных пространств в цитозоль.

Что касается других типов гранзимов, то показано, что гранзимы А и К расщепляют субстраты по аргининовым или лизиновым остаткам. Их активность направлена на протеиновый комплекс, ассоциированный с эндоплазматической сетью (SET complex), что приводит к выходу гранзим А-

активированной ДНК-азы и ее транслокации в ядро. Гранзимы С и М также могут индуцировать гибель клеток через перфорин-зависимый путь in vitro [26].

1.2.2. Цитотоксическая активность ДК против опухолевых клеток

Будучи описанными около 10 лет назад, цитотоксические свойства ДК привлекают к себе повышенное внимание. Помимо важной роли в запуске адоптивного противоопухолевого иммунного ответа, ДК могут непосредственно подавлять рост опухолевых клеток за счет цитостатического и цитотоксического эффектов. При этом работы многих независимых исследовательских групп демонстрируют, что молекулярные механизмы противоопухолевой активности ДК существенно варьируют в зависимости от типа дендритных и опухолевых клеток.

Моноциты, являющиеся непосредственными предшественниками миелоидных ДК, не обладают противоопухолевой цитотоксической активностью [100]. С другой стороны, генерированные из моноцитов ДК экспрессируют различные проапоптогенные молекулы и способны проявлять цитотоксическое действие против широкого спектра опухолевых линий.

Цитотоксическая активность свежевыделенных ДК из периферической крови, а также ДК, генерированных в культуре, связана с запуском апоптотического сигнала в опухолевых клетках. ДК индуцируют фрагментацию ДНК, экспрессию фосфотидилсерина на клеточной мембране, являющегося признаком ранней стадии апоптоза и детектируемого до полной деградации клетки, митохондриальные повреждения и активацию каспаз, что в дальнейшем ведет к дезинтеграции клеточной мембраны и деградации ядерных протеинов в опухолевых клетках [100]. ДК стимулируют в опухолевых клетках активацию каспаз-8 и -9, что означает запуск одновременно нескольких сигнальных путей индукции апоптоза через рецепторное взаимодействие и/или клеточный стресс. Кроме того, анализ клеточного цикла показывает, что противоопухолевая активность ДК и/или их супернатантов связана не только с увеличением количества опухолевых

клеток в гиподиплоидной фазе апоптоза, но также снижении в пролиферативной фазе [106], что свидетельствует и о цитостатическом действии ДК.

Исследования показали, что ДК, как выделенные из ПК, так и генерированные в культуре из моноцитов ПК в присутствии IL-4 и GM-CSF, экспрессируют TNFa, LT-aiß2, FasL и TRAIL на своей поверхности [100]. Характерно, что моноциты, являющиеся непосредственными предшественниками миелоидных ДК экспрессируют только TNFa. Однако высокий уровень всех четырех лигандов регистрируется в цитоплазме как ДК, так и моноцитов. Это наблюдение позволяет предположить, что соответствующая активация ДК способствует транслокации проапоптогенных молекул из цитозоля в клеточную мембрану и/или секреции во внеклеточное микроокружение. Действительно, генерируемые in vitro зрелые ДК продуцируют более высокий уровень растворимых TNFa и FasL, чем незрелые ДК. Таким образом, экспрессия мембранных форм и секреция этих цитотоксических лигандов, как представляется, жестко регулируется и зависит от стадии и степени зрелости и дифференцировки ДК. Изменения в экспрессии цитотоксических лигандов может быть связано с процессом созревания ДК и ассоциируется с изменениями антигенпредставляющей функции. Незрелые ДК вслед за активацией апоптоза в опухолевых клетках поглощают и процессируют опухолевые антигены, тогда как более зрелые, нагруженные антигеном ДК эффективно презентируют опухолевые АГ и активируют антиген-специфические Т-клетки.

Ряд исследований показывает, что для осуществления цитотоксической активности ДК необходимо контактное взаимодействие с клетками-мишенями [220, 225]. Им противоречат данные Joo H.-G. [106], которые демонстрируют, что индукция апоптоза осуществляется через растворимые факторы, секретируемые при ЛПС-индуцированном созревании ДК. Причем

здесь могут быть вовлечены как TNF-зависимые, так и TNF-независимые механизмы.

Большое количество исследований далее продемонстрировало, что активация/созревание ИЛ4-ДК под действием IFN I типа и IFN-y [70, 135], ЛПС [146], dsRNA различных вирусов [45, 221] усиливает цитотоксичность ДК. Эта активность была главным образом опосредована TRAIL.

Показано, что IFN(3 оказывает стимулирующее влияние на экспрессию мембранной формы TRAIL стандартно генерируемыми миелоидными ИЛ4-ДК, что проявляется в усилении цитотоксической активности ДК против TRAIL-чувствительных опухолевых клеток [135]. При этом реализация цитотоксичности ДК регулируется активацией каспазного каскада и NF-kB пути в опухолевых клетках. Аналогичная активация цитотоксической функции наблюдается при вирусной стимуляции ИЛ4-ДК. Вирусная мРНК усиливает продукцию дендритными клетками IFNa/p [221]. Показано, что интерфероны индуцируют апоптоз клеток-мишеней за счет стимулирующего эффекта на экспрессию различных проапотогенных молекул (FasL, TRAIL) [70, 145]. Кроме того, IFN I типа индуцируют дифференцировку CD14+ моноцитов в сторону TRAIL-экспрессирующих ДК, обладающих цитотоксической активностью [187]. По-видимому, именно этот цитокин может иметь ключевое значение при экспрессии ДК молекулы TRAIL и, соответственно, реализации литической активности ДК.

Активация IFNy или IFNa выделенных из ПК CD11с+ДК также ведет к усилению экспрессии TRAIL и способности индуцировать гибель TRAIL-чувствительных опухолевых клеток [146]. Соответственно, TRAIL-резистентные и нормальные ^трансформированные клетки остаются резистентными к ДК. По-видимому, резистентность к TRAIL связана с низким уровнем рецепторов к цитотоксическим лигандам на клетках-мишенях, присутствием антиапоптотических рецепторов и/или активностью внутриклеточных антиапоптотических молекул, в частности активностью белка c-FLIP, ингибирующего FADD, и NF-kB. [100, 151, 195]. Эффект с-

FLIP связан с ингибицией связывания каспазы-8 с доменом смерти адаптерного белка FADD и отменой дальнейшего запуска апоптотического сигнала. Внутриклеточный уровень c-FLIP регистрируется в TRAIL-резистентных опухолевых линиях и нормальных клетках. Кроме того, высокий уровень c-FLIP коррелирует с резистентностью к FasL-опосредованному апоптозу клеток-мишеней [15].

Известно, что одним из механизмов ускользания опухоли из-под иммунного надзора и дальнейшей ее прогрессии является индукция регуляторных CD4+CD25+T-KneTOK, которые ингибируют цитотоксическую функцию эффекторных Т-лимфоцитов и NK-клеток [50, 79]. Более того, на экспериментальных моделях установлено, что регуляторные CD4+CD25+T-клетки могут подавлять также цитотоксичность миелоидных ДК [182], инфильтрирующих зону опухолевого роста за счет TGF-ß-опосредованной ингибиции экспрессии TRAIL на ДК.

Интересные данные были получены Janjic В.М. [100], который показал, что в отличие от IFN и ряда других стимулов, С040Е-индуцированное созревание ИЛ4-ДК сопровождается снижением цитотоксической активности против опухолевых клеток. В отличие от незрелых ДК, зрелые ДК характеризуются более высокой секрецией TNFa и FasL, а также сниженной экспрессией их мембранных форм [137]. Некоторые исследования демонстрируют, что мембрано-связанные формы обладают более сильным цитотоксическим действием, чем секретируемые молекулы. Растворимая форма часто может быть нефункциональной или служить антагонистом своей мембраной форме [82, 224]. Возможно, этим и объясняется меньшая способность зрелых ДК индуцировать гибель опухолевых клеток по сравнению с незрелыми ДК.

Цитотоксическая активность ИЛ4-ДК против опухолевых клеток может быть связана не с экспрессией TRAIL, FasL или TNF, а с FADD-независимой активацией каспазы-8 [219, 220]. В этом случае апоптотический сигнал в опухолевых клетках контролируется на митохондриальном уровне за счет

баланса между анти- и проапоптотическими молекулами семейства Вс1-2. Действительно, ДК могут способствовать активации Bid в Jurkat, что в дальнейшем ведет к выходу цитохрома С в цитозоль из митохондрии и запуску каскадного пути с вовлечением эффекторных каспаз.

Помимо TNF-R, Fas и TRAIL-R к суперсемейству TNF-рецепторов относится молекула CD40. Соответственно, наряду с участием в клеточной активации, молекула CD40 также может быть вовлечена в индукцию апоптоза клеток-мишеней. Функциональная роль CD40/С040Ь-сигнального пути зависит от типа и степени дифференцировки клеток, участвующих в этом взаимодействии. Например, при связывании с CD40L CD40-экспрессирующие эпителиальные клетки активно пролиферируют, а также продуцируют провоспалительные цитокины [234]. В то же время, CD40+onyxo левые клетки оказываются чувствительны к CD40L-медиируемому апоптозу [78]. В этом случае CD40L индуцирует гибель опухолевых клеток через механизм, связанный с регуляцией TRAF3 белка и активацией JNK/AP-1 каскадного пути, что в конечном итоге запускает каспаза-9/каспаза-З-ассоциированный внутренний путь апоптоза. Характерно, что именно мембранная, а не растворимая форма CD40L опосредует апоптоз в клетках-мишенях.

С040/С040Ь-сигнальный путь индукции апоптоза опухолевых клеток описан для OK-432-стимулированных ИЛ4-ДК (ОК-ДК) [88]. Препарат ОК-432 (пицибанил) представляет собой лиофилизированный, низко вирулентный Streptococcus pyogenes группы А, инкубированный с пенициллином. ОК-342 успешно применяется при иммунотерапии некоторых злокачественных опухолей [185]. Действие ОК-432 опосредуется через связывание с TLR-2 и/или TLR-4, экспрессируемыми ДК [160]. ОК-432 индуцирует созревание ИЛ4-ДК, повышая экспрессию молекул МНС I, МНС II, CD80, CD86, CD54 и CD83, а также стимулирует секрецию ДК провоспалительных цитокинов IL-12, TNF-a и IL-6. Важно то, что стимуляция ОК-432 усиливает экспрессию CD40L на ДК, что ассоциируется

с выраженной цитотоксической активностью против С040+опухолевых клеток. Характерно, что СВ40+нетрансформированные клетки отличаются резистентностью к цитотоксическому действию ОК-ДК. Кроме того, пилотное клиническое исследование продемонстрировало успешность лимфотропного введения ОК-ДК пациентам с прогрессирующим характером рака кишечника [228].

В качестве еще одного возможного механизма цитотоксической активности ДК против опухолевых клеток ряд исследователей рассматривают продукцию ДК оксида азота (N0) и его метаболитов. В экспериментальных моделях показано, что ДК, генерированные из костномозговых предшественников, могут оказывать повреждающее действие на опухолевые клетки через МО-зависимый путь [14, 75]. При этом активация такими стимулами, как ЛПС или №N7 усиливает цитотоксичность ДК. Этот эффект связан со стимулирующим действием данных факторов на экспрессию ДК индуцибельной ЫО-синтетазы (¡МОб) и, следовательно, с увеличением продукции N0. Интересно отметить тот факт, что гибель опухолевых клеток при взаимодействии с ДК может быть связана не только с индукцией апоптоза в клетках-мишенях. Известно, что N0 может вызывать апоптоз или некроз клетки в зависимости от концентрации [222]. Именно высокие концентрации N0, продуцируемые ДК, могут приводить к некрозо-подобным изменениям в опухолевых клетках [14].

Одним из главных метаболитов оксида азота (N0) является пероксинитрит. Будучи сильным окислителем, он способен вызывать повреждения широкого спектра молекул в клетке, в том числе ДНК и белков [165]. При этом показано, что пероксинитрит оказывает больший цитотоксический эффект по сравнению с N0 [75]. Поскольку указанная молекула обладает коротким периодом полураспада, для реализации цитотоксической активности необходимо клеточно-опосредованное взаимодействие. Ьакошу и соавт. показали, что ИЛ4-ДК здоровых доноров могут вызывать гибель клеток различных опухолевых линий через

пероксинитритный путь [122]. Кроме того, после киллинга опухолевых клеток, ДК способны захватывать фрагменты опухолевых клеток и индуцировать активацию АГ-специфичных CD8+T-лимфоцитов.

Интересные данные были получены при изучении цитотоксических свойств плазмацитоидных и миелоидных ДК. Показано, что миелоидные CD11+ДК ПК подавляют рост клеток рака молочной железы при стимуляции IFN-y, IL-15 или ЛПС [146]. Причем, молекула TNFa, продуцируемая активированными ДК, может действовать как потенциальный противоопухолевый фактор, который принимает участие в ингибиции пролиферации опухолевых клеток и опосредует цитотоксическое действие ДК через индукцию апоптоза. В то же время IFN-стимулированные IL-3Ra+ пДК практически не обладают цитотоксической активностью против TRAIL-чувствительных линий в отличие от CD11с+ мДК [70].

С другой стороны, недавние исследования показали, что стимуляция ДК агонистами TLR-7 усиливает экспрессию литических молекул перфорина и гранзима В в мДК, что ассоциируется с выраженной цитотоксической активностью ДК против перфорин-чувствительной линии К562 [202]. В то же время этот протокол способствует повышению экспрессии TRAIL на пДК и, соответственно, цитотоксической активности против TRAIL-чувствительной линии Jurkat. При этом эффекты в отношении ДК ПК схожи с изменениями, наблюдаемыми у пациентов с базально-клеточной карциномой в опухолевой зоне, получающих лечение в виде местного нанесения крема имиквимода. Имиквимод представляет собой синтетический агонист TLR-7 и -8, который успешно применяется при различных кожных неоплазиях. При применении имиквимода среди инфильтрирующих перитуморальную область клеток иммунной системы присутствуют перфорин- и гранзим-позитивные CD 11 c+HLA-DR+ мДК , а также TRAIL+CD123+HLA-DR+ пДК. Тем не менее при иных условиях активации, в частности CD40L/IL-3 или лигандами к TLR-9, пДК экспрессируют гранзим В и более эффективно по сравнению с мДК лизируют перфорин-чувствительную линию К562 [148].

Какова может быть роль ДК в иммунном ответе, направленном против опухоли? Поскольку свежевыделенные ДК ПК могут эффективно лизировать опухолевые клеточные линии, противоопухолевую активность можно рассматривать как конститутивную функцию, присущую ДК. Прежде всего, ДК могут непосредственно участвовать в элиминации трансформированных клеток. Однако ДК представляют собой немногочисленную популяцию клеток, которая должна быть рекрутирована в большом количестве к месту опухоли для непосредственного участия в цитолизе опухолевых клеток. Характерно, что более высокая степень инфильтрации опухоли дендритными клетками ассоциируется с лучшим прогнозом и регрессией заболевания [28, 142]. Это можно объяснить тем, что ДК, являясь АПК, захватывают в локальном микроокружении опухолевые антигены, процессируют и презентируют их в комплексе с МНС I и II класса наивным Т-клеткам и С08+-лимфоцитам. С другой стороны, можно предположить, что цитотоксическая активность ДК, направленная на элиминацию опухолевых клеток, позволяет успешнее фагоцитировать апоптотические клетки и презентировать АГ Т-клеткам.

Несмотря на то, что нормальные клетки резистентны к цитотоксическому действию ДК, пролиферирующий эндотелий подвержен киллерному действию ДК [100]. По-видимому, противоопухолевый эффект ДК связан не только с деструкцией трансформированных клеток, но и с ограничением формирования кровеносных сосудов в опухолевой зоне.

Некоторые исследователи отмечают, что степень инфильтрации ДК опухолевой зоны не всегда положительно коррелируют с благоприятным прогнозом [213]. При этом ДК, экспрессирующие индоламин-2,3-диоксигеназу (IDO), могут играть важную роль в прогрессии опухоли, индуцируя апоптоз опухольспецифичных Т-клеток [157]. Интересно отметить, что активация агонистами TLR-7/8 нарушает экспрессию IDO в ДК in vitro [76].

В экспериментальных моделях было показано, что ДК начинают поглощать фрагменты апоптотических клеток через несколько минут после индукции апоптоза в опухолевых клетках. Это позволяет предположить, что оба события тесно связаны [215]. Однако индукция цитотоксической активности ДК через TLR, IFN или иные факторы должна способствовать созреванию и соответственно уменьшению их способности поглощать антигены. Для того чтоб понять природу иммунного ответа, индуцированного ДК, необходимо определить, вызывает ли распознавание опухолевых клеток киллерными ДК созревание ДК in vivo.

Роль цитотоксической активности ДК в противоопухолевом иммунном ответе малоизучена, и все еще нет достаточного количества сведений о том, что ДК могут непосредственно уничтожать клетки-мишени in vivo. Необходимы дальнейшие исследования и накопление новых данных для понимания молекулярных путей, приводящих к приобретению цитотоксических свойств и способов их регуляции, а также механизмов распознавания опухоли дендритными клетками.

1.2.3. Цитотоксическая активность ДК против иммуннокомпетентных клеток

Важную роль в индукции цитотоксических свойств ДК при вирусной инфекции играют TLR-7- или TLR-9-опосредованная стимуляция вирусными частицами или интерферонами I типа. Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) является естественным лигандом к TLR-7 [29], присутствующему на пДК. Известно, что TLR-7-лиганды индуцируют секрецию IFNa, который в свою очередь по аутокринному механизму стимулирует экспрессию проапоптогенной молекулы TRAIL на пДК [85]. Установлено, что экспрессия TRAIL пДК может прямо коррелировать с вирусной нагрузкой у ВИЧ-инфицированных больных [202]. Кроме того, повышенный уровень экспрессии TRAIL-R1 на СБ4+Т-клетках, характерный для таких больных, сопряжен с увеличением чувствительности к TRAIL-опосредованному апоптозу, индуцированному пДК. В то же время специфическая

противовирусная терапия приводит к усилению экспрессии на CD4+T-клетках ВИЧ-инфицированных больных рецептора TRAIL-R4, обладающего антиапоптотическими свойствами. Интересно отметить, что ВИЧ-стимулированные пДК также проявляют цитотоксическую активность против ФГА-активированных СБ4+Т-клеток здоровых доноров. Этот факт может свидетельствовать о том, что дополнительная инфекция у больных ВИЧ является причиной активации С04+Т-лимфоцитов, не пораженных вирусом, и индукции их апоптоза при взаимодействии с цитотоксическими TRAIL/пДК. В связи с этим предполагают, что одним из механизмов деплеции Т-клеток при ВИЧ-инфекции является цитотоксическая активность пДК, направленная как против вирус-инфицированных, так и неинфицированных СБ4+Т-лимофцитов [132]. Похожие результаты были описаны для ИЛ4-ДК при цитомегаловирусной инфекции [175]. В этом случае ДК также индуцируют апоптоз как пораженных вирусом, так и здоровых активированных СБ4+Т-клеток через TRAIL- и FasL-медиируемые пути. Кроме того, в экспериментальных моделях показано, что ДК лимфатических узлов мышей, инфицированных высокой дозой гриппа, запускают FasL-опосредованный апоптоз в активированных CD8+T клетках [128].

Эти данные позволяют предположить, что, с одной стороны, цитотоксическая активность ДК необходима для элиминации пораженных клеток, но, с другой стороны, может стать причиной прогрессии вирусной инфекции, индуцируя гибель здоровых клеток и приводя к истощению Т-клеток на ранней стадии заболевания.

Известно, что ДК способны не только индуцировать активацию иммунокомпететных клеток, но и проявлять ингибирующий эффект при развитии иммунного ответа [204]. Толерогенные/супрессорные свойства ДК обусловлены различными механизмами, в том числе способностью ДК экспрессировать коингибиторные молекулы и рецепторы (В7-Н1, ILT-2, ILT-3, ILT-4, CD209, CD200R и HLA-G), продуцировать иммуносупрессивные

цитокины (IL-10, TGF-p), [177, 204] и индуцировать генерацию регуляторных CD4+CD25+T-icieTOK [155]. Недавние исследования на экспериментальных моделях показали, что толерогенные CD1 lc+CD8+ДК способны подавлять аллергическое кожное воспаление через TNF-опосредованный киллинг аллерген-специфичных эффекторных CD8+T-клеток, не нарушая при этом генерацию и функции регуляторных Т-клеток. [138]. Этот эффект связан с повышением экспрессии рецептора TNF-R2(p75) на СБ8+Т-клетках сенсибилизированных мышей, что обуславливает чувствительность этих клеток к TNF-медиированному апоптозу.

Одним из механизмов реализации толерогенной активности ДК является продукция фермента индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO). Известно, что метаболизм триптофана, аминокислоты, необходимой для синтеза белков во время Т-клеточной активации и пролиферации, регулируется IDO [157]. ДК, экспрессирующие IDO, ингибируют пролиферативный ответ Т-клеток, активируют регуляторные CD4+CD25hlgh Т-клетки и способствуют формированию иммунной толерантности [89, 157, 210]. Для ДК не характерна конститутивная экспрессия IDO. Однако, в ответ на IFNy, ЛПС, TNFa или poly(I:C) наблюдается усиление продукции дендритными клетками IDO. [98, 210]. Кроме того, недавние исследования показали, что совместное культивирование IDO-экспрессирующих незрелых ДК с Т-лимфоцитами индуцирует апоптоз и ингибирует экспрессию IL-4 и IL-5 в С04+Т-клетках, а также приводит к повышению IFNy+CD4+T-KneTOK [20]. В этом случае участие ДК в индукции апоптоза Т112-клеток и подавлении ТЬ2-клеточной активации может рассматриваться в качестве потенциальной стратегии при лечении ТЬ2-зависимых заболеваний.

Цитотоксическая активность против иммунокомпетентных клеток может способствовать развитию различных иммунопатологических процессов. Так, например, показано, что продуцируемые опухолью растворимые факторы, в том числе гиалуроновые фрагменты, способствуют формированию ДК с толерогенными свойствами. Толерогенные ДК в свою

очередь при взаимодействии с аутологичными Т-лимфоцитами нарушают формирование комплекса CD3/TCR в Т-клетках за счет подавления экспрессии молекул CD3s и TCR-a/f3 и запускают апоптоз в Т-клетках. [65]. При этом механизм реализации проапоптогенной активности ДК связан с NADPH-оксидазой. Таким образом, цитотоксическая активность ДК может являться одним из механизмов ускользания опухоли из-под иммунного надзора.

1.3. Сравнительная характеристика IFNa- и IL-4-индуцированных дендритных клеток

Генерация ДК из прилипающей фракции моноцитов ПК осуществляется путем добавления двух необходимых цитокинов - GM-CSF, который направляет дифференцировку клеток в сторону миело-моноцитарной линии, а также IL-4, ингибирующего развитие макрофагов. [206]. В присутствии этих цитокинов отмечается высокая экспрессия ДК костимуляторных молекул (CD80, CD86), молекул МНС II класса, в результате чего ДК приобретают способность эффективно стимулировать Т-клетки in vivo. Различные факторы могут влиять на фенотип и свойства ДК. Так, например, добавление IL-10 или простагландина Е2 (ПГЕ2) в культуры моноцитов с GM-CSF и IL-4 может ингибировать созревание ДК, а также продукцию IL-12 [109]. IFNJ3, TNFa и IL-1, липополисахарид (ЛПС) или, например, CD40L, наоборот, способствует формированию более зрелого фенотипа ИЛ4-ДК [140, 212, 237].

Рядом исследователей была описана популяция ДК, генерированная из моноцитов с заменой IL-4 на интерферон-a (ИФН-ДК) [167, 187]. Экспозиция моноцитов с интерфероном-a (IFNa) представляет собой более физиологический способ генерации ДК in vitro. Поскольку IFN I типа являются ранними медиаторами врожденного иммунитета и продуцируются в ответ на инфекционные агенты или провоспалительные цитокины [35, 44], было бы разумно предположить, что активация IFN-ассоциированных

сигнальных путей может представлять собой один из ранних и важных механизмов, участвующих в созревании/индукции ДК при иммунном ответе [187]. Кроме того, замещение IL-4 на IFNa позволяет добиться генерации ДК с более высоким миграционным ответом к специфическим хемокинам [168]. Это особенно важно, поскольку ИЛ4-ДК отличаются слабой миграционной активностью в региональные лимфатические узлы из места инъекции ДК при проведении иммунотерапии пациентам с онкопатологией. [153].

Одним из преимуществ получения ИФН-ДК является длительность культивирования. Способ генерации ДК в присутствии IFNa отличается меньшими сроками (3 суток) по сравнению с ИЛ4-ДК (5 суток) [167, 187]. ИФН-ДК обладают схожей с ИЛ4-ДК морфологией. При этом ИФН-ДК отличаются меньшими размерами и меньшим содержанием гранул в цитоплазме [118]. По фенотипическим характеристикам интактные ИФН-ДК можно отнести к клеткам с промежуточной степенью зрелости, поскольку характеризуются повышенной экспрессией костимуляторных молекул CD40, CD80 и CD86, МНС I класса (HLA-DR), а также маркера зрелости CD83 по сравнению с ИЛ4-ДК [187]. В то же время генерация ДК в присутствии IFNa вместо IL-4 не оказывает значимого влияния на их способность индуцировать пролиферативный ответ аллогенных МНК.

ИФН-ДК отличаются от ИЛ4-ДК наличием мембранной молекулы CD 123 (IL-3Ra). Несмотря на то, что CD 123 является маркером плазмацитоидных ДК, коэкспрессия маркера CD11с позволяет отнести ИФН-ДК к миелоидному типу ДК. Кроме того, экспрессия молекулы CD 123 не вносит различий между двумя субпопуляциями CD 123" и CD123+ ИФН-ДК [118]. Mohty М. и соавт. показали, что наряду с TLR1, -2, -3, -4, -5, -6, и -8, типичными для ИЛ4-ДК, ИФН-ДК характеризуются также экспрессией TLR7 [152], являющимся классическим маркером пДК [54]. Как и пДК, ИФН-ДК секретируют IFN-a в ответ на ТЪК7-опосредованную стимуляцию.

Еще одним отличием ИФН-ДК является почти полное отсутствие по сравнению с ИЛ4-ДК молекулы DC-SIGN (CD209), представляющей собой

специфичный для ДК рецептор адгезии. Молекула DC-SIGN относится к лектиновому семейству С-типа и вовлечена в контроль ряда функций ДК, в т.ч. взаимодействие ДК и Т-клеток, миграция ДК из периферической крови в ткани, а также эндоцитоз патогенов [216]. Однако снижение экспрессии DC-SIGN на ИФН-ДК не влияет на миграционную способность ДК и активацию Т-лимфоцитов in vivo [168].

ИФН-ДК и ИЛ4-ДК различаются также экспрессией провоспалительных медиаторов. Так, для ИФН-ДК характерен более высокий уровень продукции хемокинов МСР1, МСР2 и МСРЗ, являющихся важными аттрактантами и активаторами лейкоцитов, а также MIP2A, MIP2B и РРВР, которые рекрутируют эффекторные клетки [171, 192]. Это означает, что ИФН-ДК способны индуцировать массовую миграцию лейкоцитов. Кроме того, продемонстрировано, что в ИФН-ДК отмечается более высокий уровень (по сравнению с ИЛ4-ДК) экспрессии мРНК IFN-ß-, IL-4- и IL-lß-конвертирующих энзимов, что еще больше способствует активации NK-клеток, а также B-клеток и Т-клеток [118]. ИЛ4-ДК экспрессируют другие хемокины, в частности MDC, RANTES и Mip-3ß, которые привлекают активированные Т-клетки в очаг воспаления [24]. С другой стороны, ИЛ4-ДК экспрессируют большее количество мРНК ферментов липидного обмена (ALOX5 ALOX15), катализирующих синтез провоспалительных лейкотриенов и других липидных метаболитов, которые, как считается, играют важную роль в дифференцировке ДК [163].

ИЛ4-ДК и ИФН-ДК индуцируют продукцию Thl-цитокина IFNy [62, 166]. Кроме того, ИФН-ДК оказывают стимулирующий эффект на продукцию Т-клетками ТЬ2-цитокинов IL-4 и IL-10. Установлено, что ИФН-ДК индуцируют ThO-клетки, которые одновременно экспрессируют цитокины Thl и Th2 типа [62, 167]. Баланс ТЬ1/ТЬ2-ответа могут определять ряд факторов, в том числе доза антигена, сила антигенной стимуляции и природа костимуляторных молекул [120, 208]. Тем не менее, они не позволяют объяснить различия между ИЛ4-ДК и ИФН-ДК в формировании

направленности ТЪ1 /ТИ2-поляризации. Способность ИЛ4-ДК стимулировать Т-клетки к продукции №N7, вероятно, поддерживается 1Ь-12 (1Ь-12р70), известным как индуктор ТЫ-поляризации [143, 179]. В случае ИФН-ДК, отличающихся сниженной секрецией 1Ь-12р70, стимуляция продукции ТЫ-цитокинов, по-видимому, обусловлена ШЫа, который продуцируется ИФН-ДК на высоком уровне. Так же как 1Ь-12, ПТчГа направляет ТЬ1 -поляризацию через активацию транскрипционного фактора 8ТАТ-4 [156]. Кроме того, различные способности ИЛ4-ДК и ИФН-ДК индуцировать продукцию Т-клетками ТЫ- и ТЬ2-цитокинов могут быть связаны с различным паттерном секретируемых цитокинов этими двумя типами ДК. Известно, что 1Ь-4 индуцирует продукцию противоспалительных цитокинов и способствует генерации ТЬО-клеток при премировании наивных СБ4+ лимфоцитов [150]. На мышиных моделях показано, что добавление нейтрализующих анти-1Ь4-антител направляет поляризацию Т-лимфоцитов, индуцированную ИФН-ДК, в сторону ТЫ -клеток, что свидетельствует о важной роли 1Ь-4 в дифференцировки Ш1Ч-у/1Ь~4- и ШТЧ-уЛЬ-10-продуцирующих Т-клеток при взаимодействии с ИФН-ДК [71]. Клеточно-опосредованный иммунный ответ, индуцированный ТЫ-цитокинами необходим для распознавания и элиминации злокачественных клеток. Однако более сбалансированные иммунный ответ с вовлечением ТЫ- и ТЬ2-цитокинов может обеспечить рекрутирование дополнительных эффекторных клеток и индуцировать антитела специфичные для опухоль-ассоциированных антигенов, что могло бы значительно увеличить эффективность противоопухолевого ответа. Кроме того, недавно было показано, что предшественники долгоживущих Т-клеток памяти относятся к ШЫу-негативной популяции [231].

Вследствие своей быстрой генерации, чувствительности к различным факторам, стимулирующим созревание, выраженной АПК-функцией и способностью индуцировать продукцию Т-клетками ТЫ- и ТЬ2-цитокинов применение ИФН-ДК может всерьез рассматриваться как более эффективный по сравнению с ИЛ4-ДК способ иммунотерапии.

Анализ экспрессии ряда генов показывает, что ИФН-ДК и ИЛ4-ДК действительно представляют собой различные популяции ДК. Так, детальный анализ, проведенный Korthals М. и соавт., показал различия в экспрессии более чем 600 генов [118]. С одной стороны, цитокины, которые используются для генерации ДК in vitro, активируют соответствующие сигнальные пути. Так, ряд транскрипционных факторов, относящихся к IFNa-ассоциированному сигнальному пути (STAT-1, Interferon regulatory factor 7 (IRF7) и IFN-stimulated gene factor 3 (ISGF3)), экспрессируются в ИФН-ДК. Также в ИФН-ДК отмечается усиление экспрессии генов, кодирующих антипролиферативные и противовирусные эффекторные молекулы протеинкиназу R (PKR), Mxl, олигоаденилат синтетазу, а также ряд других типичных генов-мишеней интерферонов I типа. С другой стороны, для ИЛ4-ДК типична более высокая экспрессия генов, вовлеченных в IL-4-специфический ответ и связанных с липидным метаболизмом, хемотаксисом и адгезией. ИЛ4-ДК отличаются высоким уровнем экспрессии генов, ассоциированных с процессом фагоцитоза, - гены для Ig-рецепторов FCGRIIB, FCAR и FCER2, компонентов комплемента C1QA, СЗ и рецептора C1QR1, а также CD209 и CD205, что ассоциируется с более незрелым фенотипом ДК. Уровень мРНК молекулы DC-LAMP (dendritic cell lysosomal associated membrane protein), характерной для зрелых ДК и участвующей в процессинге АГ, в ИФН-ДК выше по сравнению с ИЛ4-ДК. Для ИЛ4-ДК характерно более высокая экспрессия генов, ассоциированных с адгезией к эпителию и воспаленным тканям, а также связанных со взаимодействиями с Т-клетками. К этой группе можно отнести такие молекулы, как интегрин аЕ, CD97, р2 интегрины CD 18, CD lib и CD 11с. ИФН-ДК отличаются более высоким уровнем мРНК хемокинового рецептора CCR7 и интегрина а4, играющих важную роль в миграции зрелых ДК к лимфоидным узлам [168].

Исследования, посвященные изучению цитотоксической активности ИФН-ДК, малочисленны. Korthals М. и соавт. показали, что интактные ИФН-ДК характеризуются высокой экспрессией TRAIL, а также продукцией

гранзима В, который почти не секретируется ИЛ4-ДК [118]. Эта же группа авторов продемонстрировала, что ИФН-ДК обладают дозозависимой цитотоксической активностью против TRAIL-резистентной опухолевой линии К562 при различных соотношениях клеток-эффекторов и клеток-мишеней, тогда как ИЛ4-ДК практически не индуцируют лизис опухолевых клеток К562. Согласно данным анализа экспрессии генов, более чем 30 генов, ассоциированных с цитотоксической активностью NK-клеток, отличаются повышенной экспрессией в ИФН-ДК по сравнению с ИЛ4-ДК, в т.ч. гены рецепторов NK-клеток NKp80, NKp44, NKp46, NKG2D [118]. Кроме того, Korthals М. и соавт. показали, что в ИФН-ДК наблюдается высокий уровень экспрессии мРНК цитотоксических молекул гранзимов В и М, TRAIL, дефензима-al, являющихся важной составляющей цитотоксической функции NK-клеток [112, 118, 169].

Еще одной отличительной особенностью ИФН-ДК, описанной в литературе, является экспрессия маркера NK-клеток и NKT-клеток CD56 [166]. Именно с присутствием в популяции ИФН-ДК СБ56+ДК некоторые исследователи связывают цитотоксическую активность ИФН-ДК, поскольку CD567JK обладают низкой цитотоксичностью против TRAIL-чувствительной линии К562, несмотря на достаточно высокую экспрессию проапоптогенной молекулы TRAIL. СБ56+ДК обладают более выраженной аллостимуляторной активностью по сравнению с СБ56"ДК. Тем не менее, обе эти популяции ИФН-ДК характеризуются выраженной продукцией IFNy, а вакцинация пациентов ИФН-ДК с метастазирующей медуллярной тиреоидной карциномой индуцирует АГ-специфические С08+Т-клетки, что свидетельствует о способности ИФН-ДК активировать АГ-специфический иммунный ответ in vivo [166].

Несмотря на приведенные выше данные о цитотоксической активности ДК, генерируемых в условиях замены IL-4 интерфероном-a, противоопухолевый цитотоксический эффект ИФН-ДК остается во многом не изученным. Данные, описывающие цитотоксическую активность ИФН-

ДК, в литературе представлены единичными сообщениями, которые не позволяют в полной мере сформировать целостное представление о возможных механизмах реализации цитотоксической активности ИФН-ДК против опухолевых клеток. Неизученной остается способность ИФН-ДК лизировать опухолевые клетки при онкопатологии. Это имеет важное значение, поскольку на сегодняшний день остается актуальным вопрос, какой именно тип ДК следует использовать в качестве основы вакцины для индукции специфического иммунного ответа у больных с онкологическими заболеваниями? Генерируемые in vitro ИЛ4-ДК стимулируют Т-клеточный ответ, но обладают низкой миграционной активностью и в условиях дефицита ростовых факторов могут подвергаться обратной трансформации в моноциты. Однако ИФН-ДК сохраняют стабильность в отсутствие цитокинов и превосходят ИЛ4-ДК по миграционной активности, а также способности стимулировать С08+Т-лимфоциты. Способность ИФН-ДК эффективно индуцировать АГ-специфический иммунный ответ и наличие цитотоксической активности позволили бы рассматривать эти клетки более привлекательными кандидатами для иммунотерапии опухолевых заболеваний.

Кроме того, до настоящего времени полностью неисследованной остается цитотоксическая активность ИФН-ДК по отношению к иммунокомпететным клеткам. Изучение этого вопроса способствовало бы раскрытию новых механизмов ограничения иммунного ответа и поддержания иммунного гомеостаза, а также механизмов развития иммуносупрессии при различных патологических состояниях.

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Тыринова, Тамара Викторовна

выводы

1. Генерируемые в присутствие интерферона-а ДК экспрессируют различные проапоптогенные молекулы (трансмембранные лиганды TRAIL, FasL и В7-Н1, перфорин) и характеризуются дозозависимым цитотоксическим эффектом против клеток TRAIL-чувствительных и TRAIL-резистентных опухолевых линий, что свидетельствует о наличии противоопухолевой цитотоксической активности ИФН-ДК.

2. ИФН-ДК характеризуются более высокой экспрессией TRAIL и более выраженной цитотоксической активностью против клеток Jurkat, что свидетельствует об их более высоком противоопухолевом потенциале в отношении TRAIL-чувствительных мишеней по сравнению с ИЛ4-ДК.

3. Цитотоксический эффект ИФН-ДК в культурах TRAIL-резистентных клеток НЕр-2 обусловлен индукцией апоптоза и опосредуется с участием TNFa, на что указывает практически полная отмена литического эффекта ДК при блокировании TNF/TNF-R1-сигнального пути.

4. ИФН-ДК больных внутримозговыми опухолями высокой степени злокачественности характеризуются сниженной цитотоксической активностью против TRAIL-резистентных мишеней НЕр-2 и сохранной цитотоксической активностью против TRAIL-чувствительных мишеней, что свидетельствует о нарушении TNFa-опосредованного механизма цитотоксичности ДК и обосновывает возможность оценки киллерной функции ДК в качестве диагностического маркера степени злокачественности и предиктора выживаемости у больных злокачественными глиомами.

5. Препараты на основе производного этиленпиперазина, двуцепочечной ДНК человека и рекомбинантного интерлейкин-2 при культивировании с ИФН-ДК in vitro восстанавливают исходно низкую цитотоксическую активность ДК больных глиобластомой, что демонстрирует принципиальную возможность коррекции цитотоксической активности ДК у больных злокачественными глиомами.

6. ДЭАС на этапе дифференцировки ИФН-ДК стимулирует цитотоксическую активность ДК против TRAIL-резистентных клеток НЕр-2, тогда как на этапе созревания аналогично прогестерону подавляет цитотоксическую функцию ДК против TRAIL-резистентных и TRAIL-чувствительных клеток-мишеней, что свидетельствует о гормональной регуляции эффекторной функции ДК.

7. ИФН-ДК обладают цитотоксической активностью против активированных Т-лимфоцитов и NK-клеток, которая реализуется с участием B7-H1/PD-1-сигнального пути и, в меньшей степени, - молекул TRAIL, FasL и TNFa. При этом участие всех трех лигандов семейства TNF в реализации цитотоксического эффекта ДК против СБ4+Т-лимфоцитов и вовлечение только TNFa/TNF-Rl-сигнального пути в индукции апоптоза CD8+T-лимфоцитов свидетельствует о различной чувствительности Т-клеточных субпопуляций к цитотоксическому эффекту ДК.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные в данной работе исследования позволяют заключить, что ДК, наряду с другими клетками врожденного иммунитета (NK-клетками, нейтрофилами, макрофагами), обладают естественной цитотоксической активностью, которая может быть направлена против различных клеток-мишеней. Полученные результаты свидетельствуют о том, что генерированные в культуре in vitro в условиях замены IL-4 на IFNa ДК здоровых доноров проявляют противоопухолевую цитотоксическую активность, которая ассоциируется с экспрессией ДК достаточно широкого спектра проапоптогенных молекул (TRAIL, FasL, перфорин, В7-Н1). В основе цитотоксического эффекта ДК лежит запуск программированной гибели опухолевых клеток. Цитотоксическая активность против TRAIL-резистентных опухолевых клеток-мишеней реализуется при условии непосредственного взаимодействия ДК и опухолевых клеток, тогда как против TRAIL-чувствительных клеток опосредуется с участием растворимых факторов.

Полученные в настоящей работе данные свидетельствуют, что ИФН-ДК отличаются от стандартно генерируемых ИЛ4-ДК более высокой цитотоксической активностью против TRAIL-чувствительных мишеней, что ассоциировано с более высоким уровнем экспрессии TRAIL. В то же время ИФН-ДК и ИЛ4-ДК обладают сходным цитотоксическим эффектом против TRAIL-резистентных мишеней НЕр-2. При этом цитотоксическая активность ИФН-ДК против клеток НЕр-2 опосредуется с вовлечением TNFa/TNF-Rl-сигнального пути.

Сравнение цитотоксического потенциала ИФН-ДК здоровых доноров и пациентов с внутримозговыми глиальными опухолями высокой степени злокачественности показало, что ДК больных характеризуются сниженной цитотоксической активностью против TRAIL-резистентных клеток НЕр-2 и сохранной - против TRAIL-чувствительных клеток линий U-87 и Jurkat. Эти данные указывают на нарушение TNFa-опосредованного механизма цитотоксической активности ИФН-ДК у больных данной категории. Важно отметить, что пациенты с высокой степенью злокачественности опухолей головного мозга, характеризующиеся низкими показателями выживаемости, отличались существенно сниженной цитотоксической активностью ИФН-ДК против клеток НЕр-2. С другой стороны, сохранная цитотоксическая активность ДК против клеток НЕр-2 у пациентов с низкой степенью злокачественности и у 4 пациентов с Grade III ассоциировалась с более высоким показателями выживаемости. Полученные данные свидетельствуют, что оценка противоопухолевой активности ДК больных злокачественными глиомами может иметь диагностическое и прогностическое значение. Выявленная у больных глиальными опухолями высокой степени злокачественности дисфункция ИФН-ДК частично восстанавливается под действием различных иммуноактивных факторов, в частности препаратов на основе сополимера производных этиленпиперазина, двуцепочечной ДНК человека, а также rIL-2. Эти данные обосновывают принципиальную возможность коррекции дисфункций ИФН-ДК у больных с онкопатологией. Кроме того, полученные в настоящем исследовании данные свидетельствуют о том, что способностью регулировать естественную киллерную активность ИФН-ДК обладают стероидные гормоны - ДЭАС и прогестерон.

Важным разделом работы является изучение цитотоксической активности ИФН-ДК здоровых доноров против активированных Т-лимфоцитов и NK-клеток. Полученные результаты демонстрируют, что индукция апоптоза лимфоцитов при их взаимодействии с ДК реализуется с вовлечением молекул семейства TNF (TRAIL, TNFa и FasL) и В7-Н1. Характерно, что субпопуляции CD4+ и С08+Т-клеток различаются по чувствительности к проапоптогенным молекулам TNF-семейства. С другой стороны, CD4+ и С08+Т-клетки обладают сходной чувствительностью к PD-1/В7-Н1-медиируемому апоптозу, который вносит наиболее существенный вклад в реализацию цитотоксической активности ИФН-ДК против обоих типов Т-клеток, а также активированных NK-клеток.

110

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Тыринова, Тамара Викторовна, 2011 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Блиндарь В.Н., Зубрихина Г.Н., Круглова Н.Б., Никитина Т.А. Определение поглотительной способности нейтрофилов и моноцитов периферической крови // Клиническая лабораторная диагностика. - 1996. - №

2.-С. 18-20.

2. Козлов В.К., Молчанов O.E., Жаринов Г.М. Иммунотерапия рекомбинантными цитокинами в лечении онкологических больных // Успехи клинической иммунологии и аллергологии. - 2002. - Т. III.- С. 263-279.

3. Леплина О.Ю., Тихонова М.А, Козлов Ю.П., Ступак В.В., Останин A.A., Черных Е.Р. Характеристика IFNa-индуцированных дендритных клеток у больных злокачественными глиомами головного мозга // Бюллетень СО РАМН. - 2007. - Т. 124, № 2. - С. 27-33.

4. Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Сахно Л.В., Тыринова Т.В., Останин A.A., Черных Е.Р. Эффект дегидроэпиандростерона сульфата на созревание и функциональные свойства ИНФ-а-индуцированных дендритных клеток // БЭБиМ . - 2009. - Т. 147, № 7. - С. 80 - 85.

5. Леплина, О.Ю., Ступак В.В., Козлов Ю.П. и др. IFNa-индуцированные дендритные клетки в лечении больных злокачественными глиомами головного мозга // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2007. - Т. 2. - С. 92-98.

6. Пинегин Б.В. Полиоксидоний - новое поколение иммуномодуляторов с известной структурой и механизмом действия // Аллергия, астма и клиническая иммунология. - 2000. - №1. - С. 27-28.

7. Пинегин Б.В., Некрасов A.B., Хаитов P.M. Иммуномодулятор полиоксидоний: механизмы действия и аспекты клинического применения // Цитокины и воспаление. - 2004. - № 3. - С. 41-47.

8. Прокопович С.К., Винницкий В.Б. Дендритные клетки и перспективы их использования в иммунотерапии злокачественных новообразований // Онкология. - 2001. - № 2-3. - С. 126-131.

9. Селедцова Н.В., Хонина Н.А., Дударева А.В. и др. Нарушение иммунорегуляторных механизмов у беременных с гиперандрогенией // Бюллетень СО РАМН. - 2006. - Т. 1, № 119. - С. 35-40.

Ю.Селедцова Н.В., Хонина Н.А., Тихонова М.А. и др. Влияние дегидроэпиандростерона сульфата на фенотип и функции дендритных клеток in vitro // Мед. иммунология. - 2007. - Т. 9. - № 6. - С. 589-596. П.Черных Е.Р., Леплина О.Ю., Ступак В.В. и др. Клеточные технологии в лечении злокачественных глиом головного мозга // «Клеточные технологии. Теоретические и прикладные аспекты», Сборник трудов под ред. Козлова В.А., Сенникова С.В., Черных Е.Р., Останина А.А.- Новосибирск: Наука, 2009. - С. 240-276.

12.Черных Е.Р., Селедцова Н.В., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Тыринова Т.В., Курганова Е.В., Хонина Н.А., Останин А.А., Пасман Н.М. Дендритные клетки как возможные регуляторы иммунной перестройки при беременности // Мед. иммунология. - 2009. - Т. 11, № 6. - С. 541-548.

13.Adema G.J. Dendritic cells from bench to bedside and back // Immunol. Lett. -2009. - Vol. 122, №2. - P. 128-130.

H.Alexandra N., Cathelin D., Larmonier N., et al. Dendritic cells trigger tumor cell death by a nitric oxide-dependent mechanism // The Journal of Immunology. -2007.-Vol. 179, №2.-P. 812-818.

15.Algeciras-Schimnich A., Griffith T.S., Lynch D.H., Paya C.V. Cell cycle-dependent regulation of FLIP levels and susceptibility to Fas-mediated apoptosis // J. Immunol. - 1999. - Vol. 162. - P. 5205-5211.

16.Almand В., Clark J.I., Nikitina E., et al. Increased production of immature myeloid cells in cancer patients: a mechanism of immunosuppression in cancer // J. Immunol. - 2001. - Vol. 166. - P. 678-89.

17.Akira S., Ishii K.J. Innate immune recognition of, and regulation by, DNA // Trends Immunol. - 2006. - Vol. 27, №11. - P. 525-32.

18.Alyamkina E.A., Nikolin V.P., Popova N.A., et al. A strategy of tumor treatment in mice with doxorubicin-cyclophosphamide combination based on

dendritic cell activation by human double-stranded DNA preparation // Genet. Vaccines Ther. - 2010. - Vol. 8. - P.: 70-80.

19.Alyamkina E.A., Dolgova E.V., Likhacheva A.S., et al. Combined therapy with cyclophosphamide and DNA preparation inhibits the tumor growth in mice // Genet. Vaccines Ther. - 2009. - Vol. 7. - P. 12.

20.An X.J., Bai C.X., Xia J.B., et al. Immature dendritic cells expressing Indoleamine 2,3-Dioxygenase suppress ovalbumin-induced allergic airway inflammation in mice // J. Investig. Allergol. Clin. Immunol. - 2011. - Vol. 21, №3. -P. 185-192.

21.Arpinati M., Green C.L., Heimfeld S., et al. Granulocyte-colony stimulating factor mobilizes T helper 2-inducing dendritic cells // Blood. - 2000. - Vol. 95. -P.2484-2490.

22.Austyn J.M. Dendritic cells // Curr. Opin. Hematol. - 1998. - Vol. 5, № 1. - P. 3-15.

23.Baetu T.M., Kwon H., Sharma S., et al. Disruption of NF-kappaB signaling reveals a novel role for NF-kappaB in the regulation of TNF-related apoptosis-inducing ligand expression // J Immunol. - 2001. - Vol. 167, № 6. - P. 3164-3173.

24.Baggiolini M. Chemokines and leukocyte traffic // Nature. - 1998. - Vol. 392. -P. 565-568.

25.Banchereau J., Steinman R.M. Dendritic cells and the control of immunity // Nature. - 1998. - Vol. 392. - P. 245-252.

26.Barry M., Bleackley R.C. Cytotoxic T lymphocytes: all roads lead to death // Nat. Rev. Immunol. - 2002. - Vol. 2. - P. 401-409.

27.Bazzoni F., Beutler B. The tumor necrosis factor ligand and receptor families // Engl. J. Med. - 1996. - Vol.334. - P. 1717-1725.

28.Becker Y. Dendritic cell activity against primary tumors: an overview // In Vivo. - 1993. - Vol. 7. - P. 187-191.

29.Beignon A.S., McKenna K., Skoberne M., et al. Endocytosis of HIV-1 activates plasmacytoid dendritic cells via Toll-like receptor-viral RNA interactions // J. Clin. Invest. - 2005. - Vol. 115, №11. - P. 3265-3275.

30.Benjamim C.F., Lundy S.K., Lukacs N.W., Hogaboam C.M., Kunkel S.L. Reversal of long-term sepsis-induced immunosuppression by dendritic cells // Blood. - 2005. - Vol. 105. - P. 3588-3595.

31. Benson Jr. D.M., Bakan C.E., Mishra A., et al. The PD-1/PD-L1 axis modulates the natural killer cell versus multiple myeloma effect: a therapeutic target for CT-011, a novel monoclonal anti-PD-1 antibody // Blood. - 2010. - Vol. 116, № 13.-P. 2286-2294.

32.Bigotti G., Coli A., Castagnola G. Distribution of Langerhans cells and HLA class II molecules in prostatic carcinomas of different histopathological grade // Prostate. - 1991. - Vol. 19. - P.73-87.

33.Blanco P., Palucka A.K., Gill M., Pascual V., Banchereau J. Induction of dendritic cell differentiation by IFN-alpha in systemic lupus erythematosus // Science. - 2001. - Vol. 294. - P. 1540-1543.

34.Bodmer J.L., Holler N., Reynard S., et al. TRAIL receptor-2 signals apoptosis through FADD and caspase-8 // Nat. Cell Biol. - 2000. - Vol. 2. - P. 241-243.

35.Bogdan C. The function of type I interferons in antimicrobial immunity // Curr. Opin. Immunol. - 2000. - Vol. 12. - P. 419-424.

36.Bosque A., Pardo J., Martinez-Lorenzo M.J., et al. Human CD8+T cell blasts are more sensitive than CD4+T cell blasts to regulation by AP02L/TRAIL // Eur. J. Immunol. - 2005. - Vol. 35. - P. 1812-1821.

37.Bouman A., Heineman M.J., Faas M.M. Sex hormones and the immune response in humans // Human Reproduction Update. - 2005. - Vol. 11, № 4. - P. 411—423.

38.Butts C.L., Bowers E., Horn J.C., et al. Inhibitory Effects of Progesterone Differ in Dendritic Cells from Female and Male Rodents // Gend Med. - 2008. -Vol. 5, № 4. - P. 434-447.

39.Barber G. N. STING-dependent signaling // Nature Immunology. - 2011. -Vol.12.-P.929-930.

40.Carbonneil C., Saidi H., Donkova-Petrini V., Weiss L. Dendritic cells generated in the presence of interferon-a stimulate allogeneic CD4+ T-cell proliferation: modulation by autocrine IL-10, enhanced T-cell apoptosis and T regulatory type 1 cells // Int. Immunol. - 2004. - Vol. 16. - P. 1037-1052.

41.Caron G., Delneste Y., Aubry J.-P., et al. Human NK cells constitutively express membrane TNF-a (mTNFa) and present mTNFa-dependent cytotoxic activity // Eur. J. of Immunology. - 1999. - Vol. 29, № 1. - P. 3588-3595.

42.Caron G., Delneste Y., Roelandts E., Duez C., Bonnefoy J.Y., Pestel J., Jeannin P. Histamine polarizes human dendritic cells into Th2 cell-promoting effector dendritic cells // J. Immunol. - 2001. - Vol. 167. - P.3682-3686.

43.Caux C., Liu Y.J., Banchereau J. Recent advances in the study of dendritic cells and follicular dendritic cells // Immunol Today. - 1995. - Vol. 16, № 1. - P. 2-4.

44.Cella M., Jarrossay D., Facchetti F., et al. Plasmacytoid monocytes migrate to inflamed lymph nodes and produce large amounts of type I interferon // Nat. Med. - 1999.-Vol. 5. -P. 919-923.

45.Chaperot L., Blum A., Manches O., et al. Virus or TLR agonists induce TRAIL-mediated cytotoxic activity of plasmacytoid dendritic cells // J. Immunol. -2006. - Vol. 176. - P. 248-255.

46.Chauvin C., Josien R. Dendritic cells as killers: mechanistic aspects and potential roles // J. Immunol. - 2008. - Vol. 18. - P. 11-16.

47.Chavez-Galan L., Arenas-Del Angel M.C., Zenteno E., et al. Cell death mechanisms induced by cytotoxic lymphocytes // Cell Mol. Immunol. - 2009. -Vol. 6, № 1. - P. 15-25.

48.Chen L. Co-inhibitory molecules of the B7-CD28 family in the control of T-cell immunity // Nat. Rev. Immunol. - 2004. - Vol. 4. - P. 336-347.

49.Chen L., Zhang Zh., Chen W., et al. B7-H1 up-regulation on myeloid dendritic cells significantly suppresses T cell immune function in patients with chronic hepatitis B // The J. of Immunology. - 2007. - Vol. 178, № 10. - P. 6634-6641.

50.Chen M.L., Pittet M.J., Gorelik L., et al. Regulatory T cells suppress tumor-specific CD8 T cell cytotoxicity through TGF-beta signals in vivo // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 2005. - Vol. 102. - P. 419-424.

51.Chiao P.J., Miyamoto S., Verma I.M. Autoregulation of IkBa activity // Biochemistry. - 1994. - Vol. 91. - P.28-32.

52.Coban C., Koyama S., Takeshita F., Akira S., Ishii K.J. Molecular and cellular mechanisms of DNA vaccines // Hum. Vaccin. - 2008. - Vol.4. - P.453-456.

53.Cohen G.M. Caspases: the executioners of apoptosis // Biochem. J. - 1997. -Vol. 326.-P. 1-16.

54.Colonna M., Trinchieri G., Liu Y.-J. Plasmacytoid dendritic cells in immunity // Nature Immunol. - 2004. - Vol. 5. - P. 1219- 1226.

55.Corsini E., Racchi M., Sinforiani E., et al. Age-related decline in RACK-1 expression in human leukocytes is correlated to plasma levels of dehydroepiandrosterone // J. Leukoc. Biol. - 2005. - Vol. 77, № 2. - P. 247-256.

56.Curiel T.J., Cheng P., Mottram P., et al. Dendritic cells subsets differentially regulate angiogenesis in human ovarian cancer // Cancer Res. - 2004. - Vol. 64. -P. 5535-5538.

57.Da Silva J.A. Sex hormones and glucocorticoids: interactions with the immune system // Ann. N.Y. Acad. Sci. - 1999. - Vol. 876. - P. 102-117.

58.de Jong E.C., Vieira P.L., Kalinski P., et al. Microbial compounds selectively induce Thl cell-promoting or Th2 cell-promoting dendritic cells in vitro with diverse Th cell-polarizing signals // J. Immunol. - 2002. - Vol. 168. - P. 1704-1709.

59.Degterev A., Boyce M., Yuan J. A decade of caspases // Oncogene. - 2003. -Vol. 22. - P. 8543-8567.

60.del Hoyo G.M., Martin P., Vargas H.H., et al. Characterization of a common precursor population for dendritic cells // Nature. - 2002. - Vol.415. - P. 10431047.

61.Delia Bella S., Gennaro M., Vaccari M., et al. Altered maturation of peripheral blood dendritic cells in patients with breast cancer// Br. J. Cancer. - 2003. - Vol. 89. - P. 1463-1472.

62.Della Bella S., Nicola S., Riva A., et al. Functional repertoire of dendritic cells generated in granulocyte macrophage-colony stimulating factor and interferon-a // Journal of Leukocyte Biology. - 2004. - Vol. 75. - P. 106-116.

63.Demeure C.E., Wu C.Y., Shu U., et al In vitro maturation of human neonatal CD4T lymphocytes, II: cytokines present at priming modulate the development of lymphokine production // J. Immunol. - 1994. - Vol. 152. - P. 4775-4782.

64.Di Santo E., Foddi M.C., Ricciardi-Castagnoli P., Mennini T., Ghezzi P. DHEAS inhibits TNF production in monocytes, astrocytes and microglial cells // Neuroimmunomodulation. - 1996. - Vol. 3, № 5. - P. 285-288.

65.Dong-Ming K., Zhao Q., Xu J., et al. Tumor-Educated Tolerogenic Dendritic Cells Induce CD3s Down-Regulation and Apoptosis of T Cells through Oxygen-Dependent Pathways // The J. of immunology. - 2008. - Vol. 181, № 5. - P. 30893098.

66.Drexler H.G., Quentmeier H. FLT3: Receptor and ligand // Growth Factors.-2004. - Vol. 22, № 2. - P. 71-73.

67.Ehtesham M.P., Kabos M.A., Gutierrez K., et al. Intratumoral dendritic cell vaccination elicits potent tumoricidal immunity against malignant glioma in rats // J. Immunother. - 2003. - Vol. 26. - P. 107-116.

68.Emery J. G., McDonnell P., Burke M.B., et al. Osteoprotegerin is a receptor for the cytotoxic ligand TRAIL // J. Biol. Chem. - 1998. - Vol. 273. - P. 14363-14367.

69.Erickson S.L, de Sauvage F.J., Kikly K., et al. Decreased sensitivity to tumour-necrosis factor but normal T-cell development in TNF receptor-2-defîcient mice // Nature. - 1999. - Vol. 372. - P. 560-563.

70.Fanger N. A., Maliszewski C.R., Schooley K., Griffith T.S. Human dendritic cells mediate cellular apoptosis via tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) // J. Exp. Med. - 1999. - Vol. 190. - P. 1155-1164

71.Fè d'Ostani C., Del Sero G., Bacci, A., et al. Dendritic cells discriminate between yeasts and hyphae of the fungus Candida albicans: implications for initiation of T helper cell immunity in vitro and in vivo // J. Exp. Med. - 2000. -Vol. 191.-P. 1661-1673.

72.Felker P., Seré K., Lin Q., et al. TGF-pi accelerates dendritic cell differentiation from common dendritic cell progenitors and directs subset specification toward conventional dendritic cells // The Journal of Immunology. -2010. - Vol. 185, № 9. - P. 5326-5335.

73.Fernandez N.C., Lozier A., Flament C. Dendritic cells directly trigger NK cell functions: Cross-talk relevant in innate anti-tumor immune responses in vivo // Nature Medicine. - 1999. - Vol. 5, № 4. - P. 405-411.

74.Fishman M. Cytolytic activities of activated macrophages versus paraformaldehyde-fixed macrophages; soluble versus membrane-associated TNF //Cellular Immunology. - 1991. - Vol. 137, № 1. - P. 164-174.

75.Fraszczak J., Trad M., Janikashvili N., et al. Peroxynitrite-dependent killing of cancer cells and presentation of released tumor antigens by activated dendritic cells //The Journal of Immunology. - 2010. - Vol. 184, № 4. - P. 1876-1884.

76.Furset G., Floisand Y., Sioud M. Impaired expression of indoleamine 2, 3-dioxygenase in monocyte-derived dendritic cells in response to Toll-like receptor-7/8 ligands // Immunology. - 2007. - Vol. 123. - P. 263-271.

77.Gabrilovich D.I., Chen H.L., Girgis K.R., et al. Production of vascular endothelial growth factor by human tumors inhibits the functional maturation of dendritic cells // Nat. Med. - 1996. - Vol. 2. - P. 1096-1103.

78.Georgopoulos N.T., Steele L.P., Thomson M.J., et al. A novel mechanism of CD40-induced apoptosis of carcinoma cells involving TRAF3 and JNK/AP-1 activation // Cell Death Differ. - 2006. - Vol. 13. - P. 1789-1801.

79.Ghiringhelli F., Ménard C., Terme M., et al. CD4+CD25+ regulatory T cells inhibit natural killer cell functions in a transforming growth factor-beta-dependent manner//J. Exp. Med. - 2005. - Vol. 202. - P. 1075-1085.

80.Golden-Mason L., Klarquist J., Wahedand A.S., Rosen H.R. Programmed death-1 expression is increased on immunocytes in chronic hepatitis C virus and predicts failure of response to antiviral therapy: race-dependent differences // The Journal of Immunology. - 2008. - Vol. 180, № 6. - P. 3637-3641.

81 .Grell M., Zimmermann G., Gottfried E., et al. Induction of cell death by tumour necrosis factor (TNF) receptor 2, CD40 and CD30: a role for TNF-R1 activation by endogenous membrane-anchored TNF // EMBO J. - 1999. - Vol. 18. - P. 30343043.

82.Gruss H.J. Molecular, structural and biological characteristics of the tumor necrosis factor ligand superfamily // Int. J. Clin. Lab. Res. - 1996. - Vol. 26. - P. 143-159.

83.Gupta S., Su H., Bi R., et al. Life and death of lymphocytes: a role in immunesenescence // Immunity & Ageing. - 2005. - Vol. 2. -P. 12.

84.Hammad H., Smits H.H., Ratajczak C., et al. Monocyte-derived dendritic cells exposed to Der p 1 allergen enhance the recruitment of Th2 cells: major involvement of the chemokines TARC/CCL17 and MDC/CCL22 // Eur. Cytokine Netw. - 2003. - Vol. 14. - P. 219-228.

85.Hardy A.W., Graham D.R., Shearer G.M., Herbeuval J.P. HIV turns plasmacytoid dendritic cells (pDC) into TRAIL-expressing killer pDC and down-regulates HIV coreceptors by Toll-like receptor 7-induced IFN-alpha // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2007. - Vol. 104, № 44. - P. 17453-17458.

86.Hart D.N. Dendritic cells: unique leukocyte population which control the primary immune response // Blood. - 1997. - Vol. 90. - P. 3245-3287.

87.Heil F., Hemmi H., Hochrein H., et al. Species-specific recognition of single-stranded RNA via toll-like receptor-7 and -8 // Science. - 2004. - Vol. 303. - P. 1526-1529.

88.Hill K.S., Errington F., Steele L.P., et al. OK432-Activated Human Dendritic Cells Kill Tumor Cells via CD40/CD40 Ligand // The Journal of Immunology. -2008. - Vol. 181, № 5. - P. 3108-3115.

89.Hill M., Tanguy-Royer S., Royer P., et al. IDO expands human CD4+CD25high regulatory T cells by promoting maturation of LPS-treated dendritic cells // Eur. J. Immunol. - 2007. - Vol. 37. - P. 3054-3062.

90.Hoffmann T.K., Muller-Berghaus J., Ferris R.L., et al. Alterations in the frequency of dendritic cell subsets in the peripheral circulation of patients with

squamous cell carcinomas of the head and neck// Clin. Cancer Res. - 2002. -Vol. 8.-P. 1787-1793.

91.Holen I., Croucher P.I., Hamdy F.C., Eaton C.L. Osteoprotegerin (OPG) is a survival factor for human prostate cancer cells // Cancer Res. - 2002. - Vol. 62. - P. 1619-1623.

92.Horiuchi T., Mitoma H., Harashima S., Tsukamoto H., Shimoda T. Transmembrane TNF-a: structure, function and interaction with anti-TNF agents // Rheumatology. - 2010. - Vol. 49, № 7. - P. 1215-1228.

93.Hoves S., Krause S., Scholmerich J., Fleck M. The JAM-assay: optimized conditions to determine death-receptor-mediated apoptosis // Methods. - 2003. -Vol. 31. - P. 127-134.

94.Hoves S., Krause S.W., Herfarth H., et al. Elimination of activated but not resting primary human CD4+ and CD8+T cells by Fas ligand (FasL/CD95L)-expressing killer-dendritic cells // Immunobiology. - 2004. - Vol. 208. - P. 463475.

95.Hsu S.C., Gavrilin M.A., Lee H.H., et al. NF-kappa B-dependent Fas ligand expression // Eur. J. Immunol. - 1999. - Vol. 29, № 9. - P. 2948-2956.

96.Hubert P., Glannini S.L., Vanderplasschen A., et al. Dendritic cells induce the death of human papillomavirus-transformed keratinocytes // FASEB J. - 2001. - P. 2521-2523.

97.Huck B., Steck T., Habersack M., et al. Pregnancy associated hormones modulate the cytokine production but not the phenotype of PBMC-derived human dendritic cells // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. - 2005. - Vol. 122. - P. 85. 98.Ito T., Liu Y.-J., Kadowaki N. Functional Diversity and Plasticity of Human Dendritic Cell Subsets // Int. J. Hematol. - 2005. - Vol. 81. -P. 188-196. 99.Jahnsen F.L., Lund-Johansen F., Dunne J.F., et al. Experimentally induced recruitment of plasmacytoid (CD123hlgh) dendritic cells in human nasal allergy // J Immunol. - 2000. - Vol. 165. - P. 4062^068.

100.Janjic B.M., Lu G., Pimenov A., et al. Innate direct anticancer effector function of human immature dendritic cells. I. Involvement of an apoptosis-inducing pathway // J. Immunol. - 2002. - Vol. 168. - P. 1823-1830.

101. Jego G., Palucka A.K., Blanck J.P., Chalouni C., Pascual V., Banchereau J. Plasmacytoid dendritic cells induce plasma cell differentiation through type I interferon and interleukin 6 // Immunity. - 2003. - Vol. 19. - P. 225-234.

102. Jeremias I., Herr I., Boehler T., Debatin K.M. TRAIL/Apo-2-ligand-induced apoptosis in human T cells // Eur. J. Immunol. - 1998. - Vol. 28, № 1. - P. 143-152.

103. Jewett A., Wang M.Y., Teruel A., Poupak Z., Bostanian Z., Park N.H. Cytokine dependent inverse regulation of CD54 (ICAM1) and major histocompatibility complex class I antigens by nuclear factor kappaB in HEp2 tumor cell line: effect on the function of natural killer cells // Hum. Immunol. -2003. - Vol. 64, № 5. - P. 505-520.

104. Jiang M., Liu Z., Xiang Y, et al. Synergistic antitumor effect of AAV-mediated TRAIL expression combined with cisplatin on head and neck squamous cell carcinoma // BMC Cancer. - 2011. - Vol. 11.- P.54.

105. Jones L.A, Kreem S., Shweash M., Paul A., et al. Differential modulation of TLR3- and TLR4-mediated dendritic cell maturation and function by progesterone // J. Immunol. - 2010. - Vol. 185, № 8. - P. 4525-4534.

106. Joo H.-G., Fleming T.P., Tanaka Y., et al. Human dendritic cells induce tumor-specific apoptosis by soluble factors // Int. J. Cancer - 2002. - Vol. 102. - P. 20 -28.

107. Kadowaki N., Antonenko S., Lau J.Y., Liu Y.J. Natural interferon a/|3-producing cells link innate and adaptive immunity // J. Exp. Med. - 2000. - Vol. 192.-P. 219-226.

108. Kalinski P., Hilkens C.M., Wierenga E.A., Kapsenberg M.L. T-cell priming by type-1 and type-2 polarized dendritic cells: the concept of a third signal // Immunol. Today. - 1999. - Vol. 20. - P. 561-567.

109. Kalinski P., Schuitemaker J.H., Hilkens C.M., Kapsenberg M.L. Prostaglandin E2 induces the final maturation of IL-12-deficient CDla+CD83+

dendritic cells: the levels of IL-12 are determined during the final dendritic cell maturation and are resistant to further modulation // J. Immunol. - 1998. - Vol. 161.-P. 2804-2809.

110. Kapsenberg M.L. Hilkens C.M., van Der Pouw Kraan T.C., Wierenga E.A., Kalinski P. Atopic allergy: a failure of antigen-presenting cells to properly polarize helper T cells? // Am . J. Respir. Crit. Care Med. - 2000. - Vol. 162. - P. 76-80.

111. Katz S.I., Tamaki K. Epidermal Langerhans cells are derived from cells originating in bone marrow // Nature. - 1979. - Vol. 282, № 5736. - P. 324-326.

112. Kayagaki N., Yamaguchi N., Nakayama M., et al. Expression and Function of TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand on Murine Activated NK Cells // The Journal of Immunology. - 1999. - Vol. 163, № 4. - P. 1906-1913.

113. Kawai T., Kumar H., Akira S. Pathogen recognition by the innate immune system // Int. Rev. Immunol. - 2011. - Vol. 30, № 1. - P. 16-34.

114. King C., Davies J., Mueller R., et al. TGF-fil alters APC preference, polarizing islet antigen responses toward a Th2 phenotype // Immunity. - 1998. -Vol. 8.-P. 601-613.

115. Knight M., Riffkin C., Muscat A., Ashley D., Hawkins C. Analysis of FasL and TRAIL induced apoptosis pathways in glioma cells // Oncogene.- 2001.-Vol. 20.-P. 5789-5798.

116. Koch F., Trockenbacher B., Schuler G., Romani N. Antigen processing capacity of dendritic cells from mice of different MHC backgrounds: down-regulation upon culture and evidence for heterogeneity of dendritic cell populations // Adv. Exp. Med. Biol.- 1995.- Vol. 378.- P.203-206.

117. Kohrgruber N., Halanek N., Groger M., et al. Survival, maturation, and function of CD 11c" and CDllc+ peripheral blood dendritic cells are differentially regulated by cytokines // J. Immunol. - 1999. - Vol. 163. - P. 3250-3259.

118. Korthals M., Safaian N., Kronenwett R. et al. Monocyte derived dendritic cells generated by IFN-alpha acquire mature dendritic and natural killer cell properties as shown by gene expression analysis // J. Transl. Med. - 2007. - Vol. 25. - P. 46-48.

119. Krug A., Towarowski A., Britsch S., et al. Toll-like receptor expression reveals CpG DNA as a unique microbial stimulus for plasmacytoid dendritic cells which synergizes with CD40 ligand to induce high amounts of IL-12 // Eur. J. Immunol. - 2001. - Vol. 31. - P. 3026-3037.

120. Kuchroo V.K., Das M.P., Brown J.A., et al. B7-1 and B7-2 costimulatory molecules activate differentially the Thl/Th2 developmental pathways: application to autoimmune disease therapy // Cell - 1995. - Vol. 80. - P. 707-718.

121. Kuwana M., Kaburaki J., Wright T.M., Kawakami Y., Ikeda Y. Induction of antigen-specific human CD4+T cell anergy by peripheral blood DC2 precursors // Eur. J. Immunol. - 2001. - Vol. 31. - P. 2547-2557.

122. Lakomy D., Janikashvili N., Fraszczak J., et al. Cytotoxic dendritic cells generated from cancer patients // J. Immunol. - 2011. - Vol. 187. - P. 2775-2782.

123. Lapenta C., Santini S., Spada ML, et al. IFN-a-conditioned dendritic cells are highly efficient in inducing cross-priming CD8+ T cells against exogenous viral antigens // Eur. J. Immunol. - 2006. - Vol. 36. - P. 2046-2060.

124. Laskarin G., Strbo N., Sotosek V., et al. Progesterone directly and indirectly affects perforin expression in cytolytic cells // Am. J. Reprod. Immunol. - 1999. -Vol. 42, №5. -P. 312-320.

125. Latchman Y.E., Liang S.C., Chernova Y., et al. PD-L1-deficient mice show that PD-L1 on T cells, antigen-presenting cells, and host tissues negatively regulates T cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2004. - Vol. 101. - P. 1069110696.

126. Le Poole I.C., ElMasri W.M., Denman C.J., et al. Langerhans cells and dendritic cells are cytotoxic towards HPV16 E6 and E7 expressing target cells // Cancer Immunol. Immunother. - 2008. - Vol. 57. - P. 789-797.

127. Lee N., Cheong H., Kim S., et al. Ex vivo purging of leukemia cells using tumor-necrosis-factor-related apoptosis-inducing ligand in hematopoietic stem cell transplantation // Leukemia. - 2003. - Vol. 17. - P. 1375-1383.

128. Legge K.L., Braciale T.J. Lymph node dendritic cells control CD8+ T cell responses through regulated FasL expression //Immunity. - 2005. - Vol. 23. - P. 649-659.

129. Lim J.P., Gleeson P.A. Macropinocytosis: an endocytic pathway for internalising large gulps // Immunology and Cell Biology. - 2011. - Vol. 89. - P. 836-843.

130. Li P., Nijhawan D., Wang X. Mitochondrial activation of apoptosis // Cell. -2004.-Vol. 116. -P.57-92.

131. Liau L.M., Prins R.M., Kiertscher S.M., et al. Dendritic Cell Vaccination in Glioblastoma Patients Induces Systemic and Intracranial T-cell Responses Modulated by the Local Central Nervous System Tumor Microenvironment // Clin. Cancer Res. - 2005. - Vol. 11. - P. 5515-5525.

132. Lichtner M., Maranon C., Azocar O., et al. HIV Type 1-Infected Dendritic Cells Induce Apoptotic Death in Infected and Uninfected Primary CD4T Lymphocytes // AIDS Research and Human Retroviruses. - 2004. - Vol. 20, № 2. -P. 175-182.

133. Lieberman J. The ABCs of granule-mediated cytotoxicity: new weapons in the arsenal // Nat. Rev. Immunol. - 2003. - Vol. 3. - P. 361-370.

134. Lissoni P., Vigore L., Ferranti R. et al. Circulating dendritic cells in early and advanced cancer patients: diminished percent in the metastatic disease // J. Biol. Regul. Homeost. Agents. - 1999. - Vol. 13. - P. 216-219.

135. Liu Sh., Yu Y., Zhang M., et al. The Involvement of TNF-a-Related Apoptosis-Inducing Ligand in the Enhanced Cytotoxicity of IFN-p-Stimulated Human Dendritic Cells to Tumor Cells // J. Immunol. - 2001. - Vol. 166, № 9. - P. 5407-5415.

136. Lu F., Fang J., Chen Ch.Q. TNF receptor-associated factor-2 binding site is involved in TNFR75-dependent enhancement of TNFR5 5-induced cell death // Cell Research. - 2001. - Vol. 11. - P. 217-222.

137. Lu G., Janjic B.M., Janjic J., Whiteside T.L., Storkus W.J., Vujanovic N.L. Innate direct anticancer effector function of human immature dendritic cells. II.

Role of TNF, lymphotoxin-aip2, Fas ligand, and TNF-related apoptosis-inducing ligand//J. Immunol. - 2002. - Vol. 168. - P. 1831-1839.

138. Luckey U., Maurer M., Schmidt T., et al. T cell killing by tolerogenic dendritic cells protects mice from allergy // J. Clin. Invest. - 2011. - Vol. 121, № 10.-P. 3860-3871.

139. Luettiq B., Decker T., Lohmann-Matthes M.L. Evidence for the existence of two forms of membrane tumor necrosis factor: an integral protein and a molecule attached to its receptor // J. Immunol. - 1989. - Vol. 143. - P. 4034-4038.

140. Luft T., Pang K.C., Thomas E., et al. Type I IFNs enhance the terminal differentiation of dendritic cells // J. Immunol. - 1998. - Vol. 161. - P. 1947-1953.

141. Lukens J.R., Cruise M.W, Lassen M.G., Hahn Y.S. Blockade of PD-1/B7-H1 interaction restores effector CD8+T cell responses in a hepatitis C virus core murine model // J. Immunol. - 2008. - Vol. 180. - P. 4875-4884.

142. Lynch D.H., Andreasen A., Maraskovsky E., et al. Flt3 ligand induces tumor regression and antitumor immune responses in vivo // Nat. Med. - 1997. - Vol. 3. -P. 625-631.

143. Macatonia S.E., Hosken N.A., Litton M., et al. Dendritic cells produce IL-12 and direct the development of Thl cells from naive CD4+T cells // J. Immunol. -1995.-Vol. 154.-P. 5071-5079.

144. MacDonald K.P. Characterization of human blood dendritic cell subsets // Blood. - 2002. - Vol. 100. - P. 4512-4520.

145. Maciejewski J., Selleri C., Anderson S., Young N.S. Fas antigen expression on CD34+ human marrow cells induced by interferon-y and tumor necrosis-a and potentiated cytokine mediated hemopoietic suppression in vitro // Blood. - 1995. -Vol. 85.-P. 3183-3190.

146. Manna P. P., Mohanakumar T. Human dendritic cell mediated cytotoxicity against breast carcinoma cells in vitro // Journal of Leukocyte Biology. - 2002. -Vol. 72, №2.-P. 312-320.

147. Matsuda H., Suda T., Hashizume H., et al. Alteration of balance between myeloid dendritic cells and plasmacytoid dendritic cells in peripheral blood of

patients with asthma // Am. J. Respir. Crit. Care Med. - 2002. - Vol. 166, № 8. - P. 1050-1054.

148. Matsui T., Connolly J.E., Michnevitz M., et al. CD2 distinguishes two subsets of human plasmacytoid dendritic cells with distinct phenotype and functions // The Journal of Immunology. - 2009. - Vol. 182, № 11. - P. 6815-6823.

149. Miller L., Hunt J.S. Regulation of TNF-a production in activated mouse macrophages by progesterone. // The Journal of Immunology. - 1998. - Vol. 160. -P. 5098-5104.

150. Miner K.T., Croft M. Generation, persistence, and modulation of ThO effector cells: role of autocrine IL-4 and IFN-y // J. Immunol. - 1998. - Vol. 160. -P. 5280-5287.

151. Mirandola P., Ponti C., Gobbi G., et al. Activated human NK and CD8+ T cells express both TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) and TRAIL receptors but are resistant to TRAIL-mediated cytotoxicity // Blood. - 2004. - Vol. 104, №8. -P. 2418-2424.

152. Mohty M., Vialle-Castellano A., Nunes J.A., et al. IFN-a skews monocyte differentiation into Toll-like receptor 7-expressing dendritic cells with potent functional activities // J. Immunol. - 2003. - Vol. 171. - P. 3385-3393.

153. Morse M.A., Coleman R.E., Akabani G., et al. Migration of human dendritic cells after injection in patients with metastatic malignancies // Cancer Res. - 1999. - Vol. 59. - P. 56-58.

154. Morton E., Blaho J. Herpes simplex virus blocks Fas-mediated apoptosis independent of viral activation of NF-kappaB in human epithelial HEp-2 cells // J. Interf. Cyt. Res. - 2007. - Vol. 27, № 5. - P. 365-376.

155. Moseman E.A., Liang X., Dawson A.J., et al. Human plasmacytoid dendritic cells activated by CpG oligodeoxynucleotides induce the generation of CD4+CD25+regulatory T cells //J. Immunol. - 2004. - Vol. 173. - P. 4433-4442.

156. Moser M., Murphy K.M. Dendritic cell regulation of Thl-Th2 development //Nat. Immunol. - 2000. - Vol. 1. - P. 199-205.

157. Munn D.H., Sharma M.D., Lee J.R., et al. Potential regulatory function of human dendritic cells expressing indoleamine 2,3-dioxygenase // Science. - 2002. -Vol. 297.-P. 1867-1870.

158. Muroi M., Muroi Y., Ito N., Rice N.R., Suzuki T. Effects of protease inhibitors on LPS-mediated activation of mouse macrophage cell line (J774) // J. Endotoxin Res. - 1995. - Vol. 2. - P. 337.

159. Nagata S. Apoptosis by death factor // Cell. - 1997. - Vol. 88. - P. 355-365.

160. Naito K., Ueda Y., Itoh T., et al. Mature dendritic cells generated from patient-derived peripheral blood monocytes in one-step culture using streptococcal preparation OK-432 exert an enhanced antigen-presenting capacity // Int. J. Oncol.-2006.-Vol. 28.-P. 1481-1489.

161. Nguyen K.B., Watford W.T., Salomon R., et al. Critical role for STAT4 activation by type 1 interferons in the interferon-gamma response to viral infection // Science. - 2002. - Vol. 297. - P. 2063-2066.

162. Nguyen T., Russell J. The regulation of FasL expression during activation-induced cell death (AICD) // Immunology. - 2001. - Vol. 103, № 4. - P. 426^34.

163. Okunishi K., Dohi M., Nakagome K., Tanaka R., Yamamoto K. A novel role of cysteinyl leukotrienes to promote dendritic cell activation in the antigen-induced immune responses in the lung // J. Immunol. - 2004. - Vol. 173.- P. 6393-6402. 164.0nai N., Obata-Onai A., Schmid M.A., et al. Identification of clonogenic common Flt3+M-CSFR+ plasmacytoid and conventional dendritic cell progenitors in mouse bone marrow //Nat. Immunol. - 2007. - Vol. 8. - P. 1207-1216.

165. Pacher P., Beckman J.S., Liaudet L. Nitric oxide and peroxynitrite: in health and disease // Physiological Reviews. - 2007. - Vol. 87, № 1. - P. 315^124.

166. Papewalis C., Jacobs B., Wuttke M. IFN-a skews monocytes into CD56+-expressing dendritic cells with potent functional activities in vitro and in vivo // The Journal of Immunology. - 2008. - Vol. 180. - P. 1462-1470.

167. Paquette R., Hsu N., Kiertscher S., et al. Interferon-alpha and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor differentiate peripheral blood monocytes

into potent antigen-presenting cells // J. Leukoc. Biol. - 1998. - Vol. 64. - P. 358367.

168. Parlato S., Santini S. M., Lapenta C., et al. Expression of CCR-7, MIP-313, and Th-1 chemokines in type I IFN-induced monocyte-derived dendritic cells: importance for the rapid acquisition of potent migratory and functional activities // Blood. - 2001. - Vol. 98. - P. 3022-3029.

169. Phillips J.H., Lanier L.L. Dissection of the lymphokine-activated killer phenomenon. Relative contribution of peripheral blood natural killer cells and T lymphocytes to cytolysis // J. Exp. Med. - 1987. - Vol. 164. - P. 814-825.

170. Pipkin M.E., Lieberman J. Delivering the kiss of death: progress on understanding how perforin works // Curr. Opin. Immunol. - 2007. - Vol. 19. - P. 301-308.

171. Piqueras B., Connolly J., Freitas H., et al. Upon viral exposure myeloid and plasmacytoid dendritic cells produce three waves of distinct chemokines to recruit immune effectors // Blood. - 2006. - Vol. 107, № 7. - P. 2613-2618.

172. Poehlmann H., Schefold J.C., Zuckermann-Becker H., et al. Phenotype changes and impaired function of dendritic cell subsets in patients with sepsis: a prospective observational analysis // Critical Care. - 2009. - Vol. 13. - P. 119.

173. Pulendran B., Banchereau J., Burkeholder S., et al. Flt3-ligand and granulocyte colony-stimulating factor mobilize distinct human dendritic cell subsets in vivo // J. Immunol. - 2000. - Vol. 165. - P. 566-572.

174. Rabinovich G.A, Gabrilovich D., Sotomayor E.M. Immunosuppressive strategies that are mediated by tumor cells // Annual Review of Immunology.-2007. - Vol. 25, № l. - p. 267-296.

175. Raftery M.J., Schwab M., Eibert S.M., et al. Targeting the function of mature dendritic cells by human cytomegalovirus: a multilayered viral defense strategy // Immunity. - 2001. - Vol. 15. - P. 997-1009.

176. Ratta M., Fagnoni F., Curti A., et al. Dendritic cells are functionally defective in multiple myeloma: the role of interleukin-6 // Blood. - 2002. - Vol. 100.-P. 230-237.

177. Reichardt W., Diirr C., von Elverfeldt D., et al. Impact of mammalian target of rapamycin inhibition on lymphoid homing and tolerogenic function of nanoparticle-labeled dendritic cells following allogeneic hematopoietic cell transplantation // J. Immunol.- 2008.- Vol. 181, № 7.- p. 4770-4779.

178. Richez Ch., Schaeverbeke Th., Dumoulin C., et al. Myeloid dendritic cells correlate with clinical response whereas plasmacytoid dendritic cells impact autoantibody development in rheumatoid arthritis patients treated with infliximab // Arthritis Research & Therapy.- 2009.- Vol. 11.- P. 100.

179. Rissoan M.C., Soumelis V., Kadowaki N., et al. Reciprocal control of T helper cell and dendritic cell differentiation // Science. - 1999. - Vol. 283. - P. 1183-1186.

180. Robinson S.P., Patterson S., English N., et al. Human peripheral blood contains two distinct lineages of dendritic cells // Eur J Immunol. - 1999. - Vol. 29. - P. 2769-2778.

181. Romani N., Gruner S., Brang D., et al. Proliferating dendritic cell progenitors in human blood // J. Exp. Med. - 1994. - Vol. 180. - P. 83-93.

182. Roux St., Apetoh L., Chalmin F., et al. CD4+CD25+ Tregs control the TRAIL-dependent cytotoxicity of tumor-infiltrating DCs in rodent models of colon cancer // J. Clin. Invest. - 2008. - Vol. 118, № 11. - p. 3751-3761.

183. Ruden E., Reardon D.A., Coan A.D., et al. Exercise behavior, functional capacity, and survival in adults with malignant recurrent glioma // JCO. - 2011. -Vol. 29, №21.-P. 2918-2923.

184. Ryncarz R.E., Anasetti C. Expression of CD86 on human marrow CD34+ cells identifies immunocompetent committed precursors of macrophages and dendritic cells // Blood. - 1998. - Vol. 91. - P. 3892-3900.

185. Sakamoto J., Teramukai S., Watanabe Y., et al. Meta-analysis of adjuvant immunochemotherapy using OK-432 in patients with resected non-small-cell lung cancer // J. Immunother. - 2001. - Vol. 24. - P. 250-256.

186. Santiago-Schwarz F., Rappa D.A., Laky K., et al. Stem cell factor augments tumor necrosis factor - granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-

mediated dendritic cells hematopoiesis // Stem Cells. - 1995. - Vol. 13. - P. 186197.

187. Santini S., Lapenta C., Logozzi M. et al. Type I Interferon as a powerful adjuvant for monocyte-derived dendritic cells development and activity in vitro and in HU-PBL-SCID mice // J. Exp. Med. - 2000. - Vol. 191. - P. 1777-1788.

188. Santini S., Pucchini T., Lapenta C., et al. A new type 1 IFN-mediated pathway for the rapid differentiation of monocytes into highly active dendritic cells // Stem cells. - 2003. - Vol. 21. - P. 357-362.

189. Sarina B., Cortelezzi A., Cattaneo C., et al. In vitro effects of IL-12 and IL-2 on NK cells, cytokine release and clonogenic activity in myelodysplastic syndromes (MDS) // Leukemia. - 1997. - Vol. 11. - P. 1726-1731.

190. Schaefer U., Voloshanenko O., Willen D., Walczak H. TRAIL: a multifunctional cytokine // Front. Biosc. - 2007. - Vol. 12. - P. 3813-3824.

191. Schroder S., Schwarz W., Rehpenninng W., Loning T., Bocker W. Dendritic/Langerhans cells and prognosis in patients with papillary carcinoma Immunohistochemical study of 106 thyroid neoplasm correlated to follow up data // Am. J. Clin. Pathol. - 1988. - Vol. 99. - P. 295-300.

192. Scimone M.L., Lutzky V.P., Zittermann S.I., et al. Migration of polymorphonuclear leucocytes is influenced by dendritic cells // Immunology 2005.-Vol. 114.-P. 375-385.

193. Selenko-Gebauer N., Majdic O., Szekeres A., et al. B7-H1 (Programmed death-1 ligand) on dendritic cells is involved in the induction and maintenance of T cell anergy // J. Immunol. - 2003. - Vol. 170. - P. 3637-3644.

194. Sharpe A.H., Wherry E.J., Ahmed R., Freeman G.J. The function of programmed cell death 1 and its ligands in regulating autoimmunity and infection // Nature Immunology. - 2007. - Vol. 8. - P. 239-245.

195. Sheridan J.P., Marsters S.A., Pitti R.M., et al. Control of TRAIL-induced apoptosis by a family of signaling and decoy receptors // Science. - 1997. - Vol. 277.-P. 818-821.

196. Shin S., Hur G.-H., Kim Y.-B., et al. Dehydroepiandrosterone and melatonin prevent Bacillus anthracis lethal toxin-induced TNF production in macrophages // Cell Biology and Toxicology. - 2000. - Vol. 16, № 3. - P. 165-174.

197. Shipman C.M., Croucher P.I. Osteoprotegerin is a soluble decoy receptor for tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand/Apo2 ligand and can function as a paracrine survival factor for human myeloma cells // Cancer. Res. -2003.-Vol. 63.-P. 912-916.

198. Shortman K., Liu Y.J. Mouse and human dendritic cell subtypes // Nat Rev Immunol. - 2002. - Vol. 2. - P. 151-161.

199. Shurin M.R., Panharipande P.P., Sikora S.S., et al. Characterization of dendritic cells obtained from mice treated with flt3 ligand and IL-12. In: Fourth Int. Symposium on Dendritic Cells in Fundamental and Clinical Immunology. -1996.-P. 5-10.

200. Silberberg I., Baer R.L., Rosenthal S.A. The role of Langerhans cells in allergic contact hypersensitivity. A review of findings in man and guinea pigs // J. Invest. Dermatol. - 1976. - Vol. 66. - P. 210- 217.

201. Smyth M.J., Thia K.Y., Street S.E., et al. Perforin-mediated cytotoxicity is critical for surveillance of spontaneous lymphoma // J. Exp. Med. - 2000. - Vol. 192.-P. 755-760.

202. Stary G., Bangert Ch., Tauber M., Strohal R., Kopp T., Stingl G. Tumoricidal activity of TLR7/8-activated inflammatory dendritic cells // JEM. - 2007. - Vol. 204, №6.-P. 1441-1451.

203. Stary G., Klein I., Kohlhofer S., et al. Plasmacytoid dendritic cells express TRAIL and induce CD4+ T-cell apoptosis in HIV-1 viremic patients // Blood. -2009. - Vol. 114. - P. 3854-3863.

204. Steinman R.M., Hawiger D., Nussenzweig M.C. Tolerogenic dendritic cells // Annu. Rev. Immunol. - 2003. - Vol. 21. - P. 685-711.

205. Steinman R.M.The dendritic cell system and its role in immunogenicity // Annu. Rev. Immunol. - 1991. - Vol. 9. - P. 271 -296.

206. Szabolics P., Avigan D., Gezelter S., et al. Dendritic cells and macrophages can mature independently from a human bone marrow-derived, post colony-forming unit intermediate // Blood. - 1996. - Vol. 87. - P. 4520-4530.

207. Takaoka A., Taniguchi T. Cytosolic DNA recognition for triggering innate immune responses // Adv. Drug. Deliv. Rev. - 2008. - Vol. 60. - P. 847-857.

208. Tanaka H., Demeure C.E., Rubio M., et al. Human monocyte-derived dendritic cells induce naive T cell differentiation into T helper cell type 2 (Th2) or Thl/Th2 effectors: role of stimulator/responder ratio // J. Exp. Med. - 2000. - Vol. 192.-P. 405-412.

209. Tartaglia L.A., Ayres T.M., Wong G.H.W., Goeddel D.V. A novel domain within the 55 kDa TNF receptor signals cell death // Cell. - 1993. - Vol. 74. - P. 845-853.

210. Terness P., Chuang J.J., Bauer T., et al. Regulation of human auto- and alloreactive T cells by indoleamine 2, 3-dioxygenase (IDO)-producing dendritic cells: too much ado about IDO? // Blood. - 2005. - Vol. 105. - P. 2480-2486.

211. Thornberry N.A., Lazebnik Y. Caspases: enemies within // Science. - 1998. -Vol. 281.-P. 1312-1316.

212. Thurner B., Roder C., Dieckmann D., et al. Generation of large numbers of fully mature and stable dendritic cells from leukapheresis products for clinical application // J. Immunol. Methods. - 1999. - Vol. 223. - P. 1-15.

213. Treilleux I., Blay J.Y., Bendriss-Vermare N., et al. Dendritic cell infiltration and prognosis of early stage breast cancer // Clin. Cancer Res. - 2004. - Vol. 10. -P. 7466-7474.

214. Trinchieri G., Matsumoto-Kobayashi M., Clark S.C., et al. Response of resting human peripheral blood natural killer cells to interleukin 2 // J. Exp. Med. -1984. -Vol. 160.- P.l 147.

215. Trinite B., Chauvin C., Peche H., et al. Immature CD4~CD103+ rat dendritic cells induce rapid caspase-independent apoptosis-like cell death in various tumor and nontumor cells and phagocytose their victims // J. Immunol. - 2005. -Vol. 175.-P. 2408-2417.

216. Van Kooyk Y., Geijtenbeek T.B. A novel adhesion pathway that regulates dendritic cell trafficking and T cell interactions // Immunol. Rev. - 2002. - Vol. 186.-P. 47-56.

217. Van Loo G., Saelens X., van Gurp M., et al. The role of mitochondrial factors in apoptosis: a Russian roulette with more than one bullet // Cell Death Differ. - 2002. - Vol. 9. - P. 1031-1042.

218. Vandenabeele P., Declercq W., Vanhaesebroeck B., Grooten J., Fiers W. Both TNF receptors are required for TNF- mediated induction of apoptosis in PC60 cells // J. Immunol. - 1995. - Vol. 154. - P. 2904-2913.

219. Vanderheyde N., Aksoy E., Amraoui Z., et al. Tumoricidal activity of monocyte-derived dendritic cells: evidence for a caspase-8-dependent, Fas-associated death domain-independent mechanism // The Journal of Immunology. -2001. - Vol. 167. - P. 3565-3569.

220. Vanderheyde N., Vandenabeele P., Goldman M., Willems F. Distinct mechanisms are involved in tumoristatic and tumoricidal activities of monocyte-derived dendritic cells // Immunology Letters. - 2004. - Vol. 91. - P. 99-101.

221. Vidalain P.O., Azocar O., Lamouille B., et al. Measles virus induces functional TRAIL production by human dendritic cells // J. Virol. - 2000. - Vol. 74, № 1.-P. 556-559.

222. Virag L., Szabo E., Gergely P., Szabo C. Peroxynitrite-induced cytotoxicity: mechanism and opportunities for intervention // Toxicol. Lett. - 2003. - Vol. 140-141.-P. 113-124.

223. Waaga-Gasser A., Grimm M., Kim M., et al. Use of tumor-mediated TRAIL-receptor expression to evaluate apoptotic depletion of infiltrating CD8+ immune cells in clinical colorectal cancer // J. Clin. Oncol. - 2010. - Vol. 28, № 15 (Suppl. 1). - abstr. E21038.

224. Wallach D., Varfolomeev E.E., Malinin N.L., et al. Tumor necrosis factor and Fas signaling mechanisms // Annu. Rev. Immunol. - 1999. - Vol. 17. - P.331-367.

225. Wang M., Shi J., Wan Y., Li J., Yuan Y. A subset of myeloid dendritic cells derived from peripheral blood monocytes represented a predominant subset

characterized by their potential tumor-inhibiting activity // In Vitro Cell Dev. Biol. Anim.- 2009.- Vol. 45, № 7.- P. 398-404.

226. Weil-Hillman G., Voss S.D., Fisch P., et al. Natural killer cells activated by interleukin 2 treatment in vivo respond to interleukin 2 primarily through the p75 receptor and maintain the p55 (TAC) negative phenotype // Cancer Res. - 1990. -Vol. 50.-P. 2683-2691.

227. Wesa A.K., Storkus W.J. Killer dendritic cells: mechanisms of action and therapeutic implications for cancer // Cell Death Differ. - 2008. - Vol. 15. - P. 5157.

228. West E., Morgan R., Scott K., et al. Clinical grade OK432-activated dendritic cells: in vitro characterization and tracking during intralymphatic delivery // J. Immunother. - 2009. - Vol. 32, № 1. - P. 66-78.

229. Wojas K., Tabarkiewicz J., Jankiewicz M., Rolinski J. Dendritic cells in peripheral blood of patients with breast and lung cancer - a pilot study // Folia Histochem. Cytobiol. - 2004. - Vol. 42. - P. 45-48.

230. Wolfe T., Asseman C., Hughes A., et al. Reduction of antiviral CD8 lymphocytes in vivo with dendritic cells expressing Fas ligand increased survival of viral (lymphocytic choriomeningitis virus) central nervous system infection // J. Immunol. - 2002. - Vol. 169. - P. 4867-4872.

231. Wu C.Y., Kirman J.R., Rotte M.J. Distinct lineages of Thl cells have differential capacities for memory cell generation in vivo // Nat. Immunol. - 2002. -Vol.3.-P. 852-858.

232. Xu Y., He H., Li C., et al. Immunosuppressive effect of progesterone on dendritic cells in mice // J. Reprod Immunol. - 2011. - Vol. 91, № 1-2. - P. 17-23.

233. Yang R., Xu D., Zhang A., Gruber A. Immature dendritic cells kill ovarian carcinoma cells by a FAS/FASL pathway, enabling them to sensitize tumor-specific CTLs // Int. J. Cancer. - 2001. - Vol. 94, № 3. - P. 407-413.

234. Yellin M.J., Winikoff S., Fortune S.M., et al. Ligation of CD40 on fibroblasts induces CD54 (ICAM-1) and CD 106 (VCAM-1) up-regulation and IL-6 production and proliferation // J. Leukocyte Biol. - 1995. - Vol. 58. - P. 209-216.

235. Yoneyama H., Matsuno K., Zhang Y. Evidence for recruitment of plasmacytoid dendritic cell precursors to inflamed lymph nodes through high endothelial venules // Int. Immunol. - 2004. - Vol. 16. - P. 915- 928.

236. Zhang Z.J., Fu Q., Zhao Y., et al. Differential restoration of myeloid and plasmacytoid dendritic cells in HIV-1-infected children after treatment with highly active antiretroviral therapy // J. Immunol. - 2006. - Vol. 176. - P. 5644-5651.

237. Zhou L.J., Tedder T.F. CD14+ blood monocytes can differentiate into functionally mature CD83+ dendritic cells // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 1996. -Vol. 93. - P. 2588-2592.

238. Zuckerman S.H., Evans G.F. Endotoxin tolerance: in vivo regulation of tumor necrosis factor and interleukin-1 synthesis is at the transcriptional level // Cell. Immunol. - 1992. - Vol.140. - P. 513.

239. Zuniga E.I., McGavern D.B., Pruneda-Paz J.L., Teng Ch., Oldstone M.B. Bone marrow plasmacytoid dendritic cells can differentiate into myeloid dendritic cells upon virus infection // Nature Immunology. - 2004. - Vol. 5. - P. 1227 - 1234.