Разработка средств молекулярно-генетического анализа вируса блютанга 14 серотипа, выделенного в Российской Федерации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Кольцов, Андрей Юрьевич

• Кольцов, Андрей Юрьевич
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Кольцов, Андрей Юрьевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Эпидемиология

1.1.1 Глобальное распространение вируса блютанга

1.1.2 Распространение блютанга на территории Российской Федерации

1.2 Структура вируса блютанга и его генома

1.3 Восприимчивые животные

1.4 Вирус блютанга в векторах переносчиках

1.5 Патогенез

1.6 Клинические симптомы и патологоанатомические изменения

1.7 Лабораторная диагностика блютанга

1.8 Использование молекулярно-генетических методов для идентификации отдельных серотипов и вариантов вируса блютанга

1.9 Профилактика и меры борьбы

1.10 Мероприятия по ликвидации блютанга

1.11 Заключение по обзору литературы

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы

2.1.1 Вирусы

2.1.2 Специфические сыворотки крови

2.1.3 Культуры клеток

2.1.4 Животные

2.1.5 Патологический материал

2.1.6 Плазмиды и бактериальные штаммы

2.1.7 Реактивы

2.1.8 Лабораторное оборудование

2.2 Методы

2.2.1 Выделение вируса блютанга

2.2.1.1 Выделение вируса на куриных эмбрионах

2.2.1.2 Выделение вируса в культуре клеток

2.2.2 Типирование выделенного вируса блютанга в реакции нейтрализации с типоспецифическими сыворотками

2.2.3 Определение инфекционной активности вируса блютанга в культуре клеток

2.2.4 Определение инфекционной активности вируса на куриных эмбрионах

2.2.5 Изучение вирулентных свойств вируса

2.2.6 Мониторинговые исследования

2.2.7 Исследование мокрецов

2.2.8 Иммуноферментный анализ

2.2.9 Подбор праймеров и зондов

2.2.10 Выделение нуклеиновых кислот

2.2.11 Проведение ОТ-ПЦР с детекцией продуктов амплификации методом электрофореза

2.2.12 Проведение ОТ-ПЦР в режиме реального времени

2.2.13 Молекулярное клонирование продуктов ПЦР

2.2.14 Нуклеотидное секвенирование

2.2.15 Филогенетический анализ

2.2.16 Статистическая обработка результатов исследований

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Выявление и характеристика изолята «Г244/11» вируса блютанга,

выделенного в 2011 г. на территории Смоленской области

3.1.1 Выделение и идентификация изолята «Г244/11» вируса

блютанга

3.1.2 Изучение молекулярно-генетических характеристик выделенного в Смоленской области изолята «Г244/11»

3.1.3 Изучение биологических характеристик изолята «Г244/11»

3.2 Результаты мониторинговых исследований поголовья крупного и мелкого рогатого скота на наличие генома ВБ и антител к вирусу в Смоленской и Калужской областях

3.3 Исследование мокрецов рода Сulicoides на территории

Смоленской и Калужской областей

3.4 Разработка ОТ-ПЦР в режиме реального времени для идентификации вируса блютанга 14 серотипа

3.5 Разработка ОТ-ПЦР для идентификации нуклеотипов А, В, С

вируса блютанга

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

5 ВЫВОДЫ

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

7 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

8 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

9 ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка средств молекулярно-генетического анализа вируса блютанга 14 серотипа, выделенного в Российской Федерации»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Блютанг или катаральная лихорадка овец - вирусная трансмиссивная инфекция жвачных, передающаяся кровососущими насекомыми рода Culicoides, характеризующаяся поражением слизистой оболочки ротовой и носовой полостей, опуханием языка, отеком лицевой части головы, лихорадкой, поражением конечностей. У инфицированного крупного рогатого скота возможны аборты, рождение уродливого потомства [3, 4].

Заболевание вызывает вирус блютанга (ВБ), относящийся к роду Orbivirus, семейства Reoviridae. По данным на 2016 г. установлено 27 серотипов вируса блютанга. Определение серотипа ВБ является неотъемлемой процедурой в каждом случае его обнаружения для разработки плана мероприятий по ликвидации болезни, так как для каждого серотипа ВБ требуется своя вакцина

[41].

Геном вируса состоит из 10 сегментов двухцепочечной РНК, упакованных в икосаэдрический нуклеокапсид, формируемый семью структурными белками. Серотип вируса детерминирован белком VP2, который кодируется 2 сегментом геномной РНК вируса блютанга [60].

Наиболее генетически близкие серотипы ВБ, имеющие от 29 % до 33 % нуклеотидных различий, были объединены в 12 различных групп - нуклеотипов, обозначающихся буквами A, B, C, D, E, F, G, H, I, J, K, L [31].

В настоящее время широко применяют диагностические тест-системы на основе различных вариантов ОТ-ПЦР для идентификации отдельных серотипов. Однако при выявлении вируса с серотипом, ранее не регистрируемым на данной территории, возникают сложности, связанные с трудоемкими процедурами постановки реакции нейтрализации. В частности, необходимо наличие полного набора референтных сывороток и пермиссивных к данному вирусу культуральных систем. Определение серотипа ВБ по идентификации геномных различий в областях, ответственных за экспрессию серотип-специфического белка VP2, с использованием метода ПЦР представляется наиболее

перспективным направлением в диагностике блютанга.

Актуальность изучения блютанга для Российской Федерации (РФ) значительно возросла в 2006 г. с началом импорта племенного крупного рогатого скота (КРС) из стран Европейского Союза, в том числе из неблагополучных по блютангу государств - Германии, Голландии и др. [1, 2, 8, 9, 17, 18]. Всего за период с 2006 по 2015 гг. было ввезено примерно 610 тыс. животных.

За период с 2008 по 2009 гг. сотрудниками лаборатории Диагностики и мониторинга ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии от импортированного КРС выделены, паспортизированы и депонированы в Государственную коллекцию микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии пять изолятов вируса блютанга 8 серотипа [5].

Кроме того, в последние десятилетия наблюдается тенденция к расширению ареалов трансмиссивных инфекций, в том числе и блютанга, что делает актуальным вопрос изучения, как возбудителей данных болезней, так и их переносчиков. Сложившаяся ситуация усугубляется мировым изменением климатических условий, способствующих распространению векторов-переносчиков на новые территории и увеличению численности насекомых. Следствием этого может быть проникновение патогенов в умеренные климатические пояса обоих полушарий и рост количества вспышек в эндемических очагах [19].

Указанные выше факты определяют актуальность выполненной работы.

Степень разработанности проблемы. За рубежом для идентификации серотипов ВБ с 2009 г. широко применяют средства на основе вариантов ОТ-ПЦР с детекцией результатов амплификации методом электрофореза и в режиме реального времени (ОТ-ПЦР РВ) [102, 147]. Для проведения молекулярно-генетического анализа ВБ определяют нуклеотидные последовательности отдельных вариабельных сегментов генома или выполняют полногеномное секвенирование [31, 87].

Отечественными учеными разработаны варианты ОТ-ПЦР для выявления генома ВБ и серотип-специфические ОТ-ПЦР для идентификации 1, 2, 4, 6, 8, 9,

11 и 16 серотипов вируса [7, 13, 21, 25].

В связи с обнаружением инфицированных животных на территории Смоленской области, актуальным является выделение и изучение биологических, молекулярно-генетических характеристик нового изолята вируса блютанга, и разработка ОТ-ПЦР РВ для идентификации эпизоотически значимого серотипа вируса. В России до настоящего времени не разработаны средства на основе ОТ-ПЦР для выявления нуклеотипов ВБ, позволяющие проводить типирование вновь выделенных изолятов вируса за более короткое время.

В настоящее время систематическое изучение ареалов и плотности популяции основных переносчиков трансмиссивных инфекций на территории России, к сожалению, проводится в рамках узких исследований и только в некоторых регионах. Это значительно затрудняет оценку риска заноса и распространения трансмиссивных инфекций в современных условиях. Поэтому, актуальным является выявление и исследование потенциальных переносчиков ВБ - кровососущих мокрецов рода Culicoides.

Цель и задачи исследования. Целью данного исследования являлось изучение биологических и молекулярно-генетических характеристик изолята вируса блютанга, выделенного на территории Смоленской области, исследование потенциальных переносчиков данного вируса - кровососущих мокрецов рода Сulicoides, а также разработка тест-систем на основе ОТ-ПЦР для выявления генома вируса блютанга 14 серотипа и нуклеотипов А, В, С.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить биологические свойства и молекулярно-генетические характеристики штамма «Г244/11» вируса блютанга 14 серотипа, выделенного на территории Российской Федерации.

2. Провести мониторинговые исследования на наличие вируса блютанга на территории Смоленской и Калужской областей.

3. Провести исследование видового состава потенциальных переносчиков вируса блютанга - кровососущих мокрецов рода Сulicoides на территории Смоленской и Калужской областей.

4. Разработать тест-систему для идентификации вируса блютанга 14 серотипа на основе ОТ-ПЦР в режиме реального времени.

5. Оценить возможность использования разработанной тест-системы для лабораторной диагностики вируса блютанга 14 серотипа методом ОТ-ПЦР РВ.

6. Разработать тест-системы для идентификации нуклеотипов А (4, 10, 11, 17, 20 и 24 серотипы), В (3, 13, 16 серотипы) и С (6, 14 и 21 серотипы) вируса блютанга на основе ОТ-ПЦР с детекцией результатов амплификации методом электрофореза.

Научная новизна результатов исследований. Впервые изучены биологические свойства штамма «Г244/11» вируса блютанга, выделенного на территории Смоленской области, определены нуклеотидные последовательности 2 (2922 п.о.) и 5 (1772 п.о.) сегментов этого штамма, что позволило отнести его к 14 серотипу и западному топотипу вируса.

В результате проведенных исследований подобраны оригинальные олигонуклеотидные праймеры и ДНК-зонд, комплементарные 2 сегменту ВБ 14 серотипа, на основе которых разработана тест-система для идентификации 14 серотипа вируса блютанга методом ОТ-ПЦР РВ. Научная новизна подтверждена патентом на изобретение № 2499054 Бюл. № 32 от 20.11.2013 г.

Подобраны оригинальные олигонуклеотидные праймеры, комплементарные нуклеотидным последовательностям 2 сегмента нуклеотипа А (4, 10, 11, 17, 20 и 24 серотипы), нуклеотипа В (3, 13, 16 серотипы) и нуклеотипа С (6, 14 и 21 серотипы) вируса блютанга, на основе которых разработаны тест-системы для идентификации этих нуклеотипов методом ОТ-ПЦР с детекцией результатов амплификации методом электрофореза. Научная новизна подтверждена 3 патентами на изобретение (№ 2534358 Бюл. № 33 от 29.09.2014 г., № 2528745 Бюл. № 26 от 24.07.2014 г., № 2529955 Бюл. № 28 от 11.08.2014 г.).

Установлено присутствие на территории Смоленской и Калужской областей мокрецов C. pulicaris complex - потенциальных переносчиков вируса блютанга, и определен их видовой состав.

Теоретическая и практическая значимость работы. Нуклеотидные последовательности 2 (2922 п.о.) и 5 (1772 п.о.) сегментов и соответствующие им аминокислотные последовательности штамма «Г244/11» вируса блютанга 14 серотипа депонированы в международный банк данных GenBank (№ KR233814 и № KT869017).

На территории Смоленской и Калужской областей выявлены 4 вида мокрецов: C. pulicaris s.s., C.punctatus, C. impunctatus и C. grisescens, входящих в комплекс C. pulicaris. Кроме того, в пробах мокрецов был обнаружен геном ВБ.

Разработаны «Методические положения по применению набора препаратов для идентификации вируса блютанга 14 серотипа методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени «ВБ-14/ОТ-ПЦР РВ/2», «Методические положения по применению набора препаратов для идентификации вируса блютанга нуклеотипа С методом ОТ-ПЦР «ВБ-С/ОТ-ПЦР/2», которые утверждены академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины РАСХН 10.05.2013 г.

Разработаны «Методические положения по применению набора препаратов для идентификации вируса блютанга нуклеотипов А, В методом ОТ-ПЦР «ВБ-А/ОТ-ПЦР/2», «ВБ-В/ОТ-ПЦР/2», утвержденные директором ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии 31.03.2014 г.

Соответствие содержания диссертации паспорту научной специальности. В диссертационной работе представлены результаты по изучению биологических и молекулярно-генетических характеристик штамма «Г244/11» вируса блютанга, выделенного на территории Смоленской области, исследование потенциальных переносчиков данного вируса - кровососущих мокрецов рода Culicoides, а также разработка тест-систем на основе ОТ-ПЦР для выявления генома вируса блютанга 14 серотипа и нуклеотипов А, В, С.

Результаты научного исследования соответствуют 2, 3, 4, 6, 10 пунктам паспорта избранной специальности 03.02.02 «Вирусология».

Степень достоверности и апробации результатов работы. Степень достоверности результатов проведённых исследований подтверждена статистическими исследованиями и комиссионными испытаниями. Акты комиссионных испытаний утверждены директором ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии. Статистическая обработка включала расчёты средних арифметических значений и стандартных отклонений результатов ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в режиме реального времени.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии (2012-2016 гг.).

Результаты диссертационной работы представлены и обсуждены на 6 Ежегодной Встрече EPIZONE "Viruses on the move'' (Великобритания, 2012 г.), на Международной научно-практической конференции «Инновационные биотехнологии в странах ЕврАзЭС» (г. Санкт-Петербург, 2012 г.), на выездном заседании секции «Ветеринарной биотехнологии» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (г. Щелково, 2013 г.), на 8 Всероссийской научно -практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика 2014» (г. Москва, 2014 г.), на IV Международной конференции по блютангу и орбивирусам (г. Рим, Италия, 2014 г.), на III Международной научной конференции молодых ученых: вирусологов, биотехнологов, молекулярных биологов (г. Новосибирск, 2016 г.) и на 4 Международном конгрессе по ветеринарной диагностике EAVLD (г. Прага, Чехия, 2016 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, в том числе 2 статьи в журналах «Биотехнология» и «Ветеринария», включенных в перечень изданий, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации, получено 4 патента на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 161 страницах и включает: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список литературы, приложения; иллюстрирована 25 рисунками и 16 таблицами.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Биологические свойства и молекулярно-генетические характеристики штамма «Г244/11» ВБ 14 серотипа, выделенного в 2011 г. на территории РФ.

2. Результаты мониторинговых исследований на наличие вируса блютанга местного крупного и мелкого рогатого скота на территории Смоленской и Калужской областей.

3. Видовой состав мокрецов рода Culicoides - потенциальных переносчиков вируса блютанга на территории Смоленской и Калужской областей.

4. Разработанные на основе ОТ-ПЦР тест-системы, позволяющие идентифицировать вирус блютанга 14 серотипа и выявлять геном ВБ нуклеотипов А (4, 10, 11, 17, 20 и 24 серотипы), В (3, 13, 16 серотипы) и С (6, 14 и 21 серотипы).

5. Результаты выявления генома вируса блютанга 14 серотипа с помощью разработанной тест-системы для идентификации ВБ 14 серотипа в пробах крови от экспериментально зараженных и естественно инфицированных животных на разные сроки после инфицирования.

Личный вклад соискателя. Основной объем исследований (планирование и выполнение основных экспериментов, обобщение полученных результатов) проведен соискателем самостоятельно. Консультативную и методическую помощь при выполнении отдельных этапов работы оказывали: к.б.н. Панферова А.В., к.б.н. Сальников Н.И. Изучение биологических свойств штамма «Г244/11» вируса блютанга 14 серотипа проведено совместно с сотрудниками лаборатории Диагностики и мониторинга ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии к.б.н. Новиковой М.Б., к.б.н. Сидлик М.В., к.в.н. Вялых И.В., д.в.н. Куринновым В.В. Эксперимент с животными проведен совместно с сотрудниками Научно-экспериментального отдела ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии к.в.н. Живодеровым С.П., Глухаревой Е.Н. и Бобровской Н.К.

Диссертационная работа выполнена в ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии в 2011-2016 гг.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Эпидемиология.

1.1.1 Глобальное распространение вируса блютанга.

Блютанг - вирусная трансмиссивная болезнь жвачных, распространение которой приводит к большим экономическим потерям. Экономический ущерб от блютанга в первичном очаге составляют прямые потери (гибель и вынужденный убой животных) и затраты на проведение противоэпизоотических мероприятий; в стационарных - прямые потери, снижение продуктивности домашних жвачных, нарушение воспроизводства, а также ограничения на экспорт сельскохозяйственной продукции, в частности на торговлю мясом, шерстью и другими продуктами животного происхождения [24, 27, 28].

Важной эпизоотологической особенностью блютанга, значительно усложняющей борьбу с болезнью, является способность вируса формировать природные очаги даже при однократном его заносе на определенную территорию. Это обусловлено вовлеченностью в инфекционный процесс насекомых и большого числа восприимчивых животных, в том числе и диких.

Первое сообщение о болезни с симптомами блютанга у овец появилось в 1876 г. в Южной Африке. Затем болезнь получила глобальное распространение, периодически возникая в виде эпизоотий восприимчивых животных в разных зонах Земного шара. Анализ эпизоотической ситуации по блютангу в мире за последние 26 лет свидетельствует о том, что ареал инфекции неуклонно расширяется.

В настоящее время известно 27 серотипов вируса блютанга, распространенных по всему миру и на всех континентах, за исключением Антарктиды (рисунок 1) [41, 59]. Глобальное распространение штаммов/серотипов постоянно меняется и появление новых, не характерных для данной территории штаммов/серотипов, стало частым явлением. В последние годы распространение ВБ расширяется на север и в настоящее время включает в себя районы, расположенные между широтами 34^ и 53°М Основываясь на

филогенетическом анализе, все штаммы ВБ были разделены на две географические группы, восточные (Америка и Африка) и западные (Ближний Восток, Азия и Австралия) топотипы [48].

Рисунок 1 - Глобальное распространение вируса блютанга [206].

До 1998 года вирус блютанга очень редко выявляли в Европе. Вспышки лишь изредка регистрировали в странах средиземноморского бассейна, включая Испанию, Португалию, Кипр и Грецию [37, 129]. Ситуация резко изменилась, когда на нескольких греческих островах произошла вспышка вируса блютанга 9 серотипа, которая распространилась на север и запад, затронув 9 стран (рисунок 2). Вскоре после этого в Европе были зафиксированы вспышки 1, 4 и 16 серотипов ВБ, пришедшие из Греции и Марокко.

В это же время на территории Италии была зафиксирована вспышка блютанга 2 серотипа, занесенного из Северной Африки. Таким образом, стало ясно, что изменения климата, а возможно и какие-то иные изменения, сделали территорию Южной Европы благоприятной для персистенции вируса блютанга [55].

Рисунок 2 - Пути проникновения и распространения ВБ в Европе с 1998 г. [21].

В 2006 году на территории Нидерландов впервые был выявлен вирус блютанга 8 серотипа. Пути заноса инфекции на территорию страны до сих пор неизвестны. К сожалению, вспышку болезни не удалось ликвидировать или локализовать, и за короткое время ВБ 8 серотипа распространился по всей Европе, достигнув даже таких отдаленных уголков Европы, как север Скандинавии (рисунки 2, 3, 4) [56, 81, 164].

Вспышка явилась крупнейшей и привела к большим экономическим потерям. Этот случай наглядно продемонстрировал, что ВБ так же как и другие арбовирусы (такие как вирус ЭГБО и вирус АЧЛ) являются угрозой для скота Европы и способны широко распространиться на данной территории [62, 81, 200].

Мерре!

ТНЕ МЕТНЕ*«1_А.МР8 ^

Рисунок 3 - Распределение вируса блютанга 8 серотипа во время вспышки в северной Европе в период между 2006 и 2007 годами [160].

Вскоре после данного случая был выявлен ВБ 1 серотипа, который к концу 2008 года был обнаружен в нескольких странах Южной Европы, включая Испанию, Португалию и Францию (рисунок 4). В то же время, на территории Нидерландов и Германии был выявлен вирус блютанга 6 серотипа [87]. Вероятно, он был связан с модифицированными штаммами живой вакцины из Южной Африки [74, 87].

В 2008 году в Швейцарии был обнаружен новый вирус, который вызывал заболевание у коз и не принадлежал ни к одному из известных серотипов вируса блютанга. Вирус был назван Toggenburg, затем после проведения секвенирования и филогенетического анализа классифицирован как вирус блютанга 25 серотипа (рисунок 4) [88].

В 2012 году Прибалтийские государства и Польша сообщили о выявлении на их территориях животных, инфицированных вирусом блютанга. Литва, Латвия, Эстония и Польша при обращении в Комиссию ЕС в течение 2012 г. уведомляли о выявлении на территории страны животных, у которых обнаруживали атнитела к вирусу блютанга, у части данных животных в крови также детектировали геном вируса. Ни у одного из инфицированных животных не было клинических признаков блютанга. Референтная лаборатория в Пирбрайте (Великобритания)

подтвердила инфицирование животных в Польше, Латвии и Литве вирусом блютанга 14 серотипа [20, 82].

В 2014 году на Корсике (регион Франции) был выявлен 27 серотип вируса блютанга. Для данного варианта вируса характерен большой процент гомологии с вирусом блютанга 25 серотипа из Швейцарии и вирусом блютанга 26 серотипа из Кувейта [41, 59, 136].

Причины внезапного распространения вируса блютанга в Европе до сих пор являются предметом дискуссий [120]. Однако несколько факторов, в том числе увеличение диапазона обитания векторов-переносчиков, изменение климата (особенно более умеренные температуры в зимний период), а так же эффективные механизмы зимовки вируса, вероятно, играют решающую роль в этом процессе. Кроме того, появление новых серотипов в различных регионах Европы может отражать быструю адаптацию вируса блютанга к новым условиям среды и доступным векторам переносчикам вируса (рисунки 1, 2, 3, 4).

Рисунок 4 - Распространение вируса блютанга в Европе и бассейне Средиземного моря в 2004-2016 годах [204].

1.1.2 Распространение блютанга на территории Российской Федерации

В нашей стране, до середины 20 века государственной ветеринарной службой, блютанг (катаральная лихорадка овец) считался актуальным только для стран Африки. Однако, в начале 70 годов, учёными ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии сделан прогноз о возможности заноса и циркуляции вируса на территории нашей страны. В 1971 г. было получено подтверждение неблагоприятным прогнозам - у овец в Нахичеванском районе Азербайджана были обнаружены антитела к вирусу блютанга, а затем был выделен сам вирус.

В 1987-1989 гг., в результате экспедиционных эпизоотологических обследований в южных приграничных территориях (Украина, Молдавия, Читинская область, республики Средней Азии) в отобранных пробах сывороток крови овец были обнаружены специфические антитела к вирусу блютанга.

Летом 1993 г. в республике Бурятия, в местности Тапхар установлена вспышка блютанга, которая характеризовалась средними показателями заболеваемости (58,3 %) и летальности (66,3 %). Выделенный из крови больной овцы вирус отнесен к 16 серотипу. Очаг болезни в том же году был ликвидирован, а в зонах наблюдения весь скот вакцинирован. С 1994 г. вспышек блютанга на территории РФ не было установлено, и страна считалась благополучной [6, 10, 11].

Актуальность изучения данной болезни значительно возросла с начала 2006 г., когда российскими внешнеторговыми организациями был начат импорт стельных нетелей крупного рогатого скота из стран Европейского Союза. Импортировался скот, в том числе и из неблагополучных по блютангу стран -Германии, Голландии. Так, за период с 2007 по 2015 гг. из стран ЕС было импортировано около 610 тыс. животных в хозяйства, расположенные на всей европейской территории РФ, а также Урале и в Алтайском крае [1, 2, 8, 9, 17, 18].

В результате выполнения лабораторных исследований крови от импортированного скота, были обнаружены серо- и ПЦР-положительные животные. Из крови КРС, импортированного из Нидерландов и Германии в хозяйства Курской, Калининградской и Нижегородской областей, Вялых И.В. и

Федоровым Г.П. были выделены 5 изолятов вируса блютанга 8 серотипа. Выделенные штаммы вируса блютанга ФК/1-08, ФК/2-09, ФК/3-09, ФКл/4-09, ФН/5-09 паспортизированы и заложены в Государственную коллекцию микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии [5].

Случаи обнаружения инфицированных вирусом блютанга животных на территории России с 2007 по 2015 гг. по данным Россельхознадзора представлены на рисунке 5. За данный промежуток времени вирус (или антитела против ВБ) были детектированы в 23 различных субъектах РФ. Следует отметить, что случаи обнаружения фиксировали ежегодно, что подчеркивает важность проведения мониторинговых исследований среди импортированного и местного скота, а также актуальность данного заболевания для Российской Федерации [12, 16, 20, 38].

Рисунок 5 - Случаи обнаружения инфицированных вирусом блютанга животных на территории России с 2007 по 2015 гг. (по данным Россельхознадзора на 2016 г.) [205].

1.2 Структура вируса блютанга и его генома.

Заболевание вызывает вирус блютанга, относящийся к роду Orbivirus семейства Reoviridae, который является одним из экономически значимых арбовирусов животных. В состав рода Orbivirus входят патогенные для человека и животных вирусы. Кроме вируса блютанга данный род включает в себя вирусы африканской чумы лошадей (АЧЛ) и эпизоотической геморрагической болезни оленей (ЭГБО) [123, 140, 137, 143, 158, 178].

Возбудитель блютанга впервые был выделен в 1960 году Тайлером и охарактеризован как РНК-содержащий вирус с икосаэдральной симметрией капсида, диаметром 66-77 нм, не проявляющий чувствительность к РНКазе. Вирусные частицы содержат двухцепочечную РНК, которая составляет 20 % от общей массы, остальное приходится на вирусные белки [153, 154].

По структуре ВБ представляет собой сложно организованный вирус, состоящий из двух концентрических слоев капсида, которые окружают 10 сегментов геномной РНК. Однослойный капсид имеет гексоганальную форму и состоит из 32 капсомеров, расположенных в симметрии 5:3:2. Его в виде диффузного белкового слоя окружают два полипептида. Экстракапсидный (наружный) слой маскирует капсомеры и вирусную транскриптазу (рисунок 6). Обнаружены два типа вирионов, которые выявляют в крови животных на разных стадиях заболевания. На ранней стадии инфекционного процесса - вирионы, покрытые слоем поверхностных выступов, не имеющие наружного слоя полых капсомеров, находящиеся в «мешке» из мембраны. На более поздних стадиях болезни обнаруживают вирионы, покрытые оболочкой (полыми капсомерами), которая формируется в процессе выхода из клетки. Вирионы обоих типов защищены от нейтрализующего действия специфических антител, поэтому в крови инфицированных животных одновременно выявляют как вирус, так и антитела к нему [3, 40, 105]

Рисунок 6 - Структура вириона вируса блютанга. Наружный капсид образован VP2 и VP5 белками. Промежуточный слой (ядро) состоит из VP7 тримеров. VP3 слой (субъядро) включает в себя комплекс белков репликации (VP1, VP4, VP6) и дцРНК [85].

Геном вируса блютанга представлен двухцепочечной РНК длиной 19 кб, состоящей из 10 сегментов с длинной от 0,8 до 3 кб. [40, 47, 194].

Геном ВБ кодирует семь структурных белков (VP1-VP7) и четыре неструктурных белка (NS1, NS2, NS3 и NS4), которые синтезируются во время репликации вируса в инфицированных клетках [101, 133]. С помощью исследования перекрестной гибридизации [98, 107] и сравнения нуклеотидных последовательностей [31, 61, 147, 165, 177] установлены изменения в нуклеотидных последовательностях сегментов генома ВБ и структуре белков, которые они кодируют. Белки капсида, расположенные на поверхности вирусной частицы более вариабельны, чем неструктурные белки [31].

Условно белки вируса блютанга можно разделить на следующие группы:

• VP2 и VP5

VP2 представляет собой белок наружной оболочки, который образует тримеры на поверхности частицы ВБ [29, 39]. VP2 кодируется 2 сегментом вирусного генома. Белок, как было показано, представляет собой главную

антигенную мишень для связывания нейтрализующими антителами, тем самым, определяя серотип вируса [32].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Кольцов, Андрей Юрьевич, 2017 год

8 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Анализ риска заноса блютанга (катаральной лихорадки овец) со скотом, импортируемым в Россию из стран Западной Европы / А.К. Караулов, В.М. Гуленкин, М.А. Титов, В.М. Захаров, Н.С. Дудникова, СА. Дудников // Российский ветеринарный журнал СХЖ. — 2008. — Спец. выпуск . - С.33-35.

2. Блютанг в начале 21 века: реальная эпизоотология / В.В. Макаров, Джоханнес Шоопала, С.И. Джупина, О.И. Сухарев // Ветеринария сегодня. — 2013. — № 1. — С. 8-10.

3. Блютанг обзор литературы / О. В. Кухаркина, О.А. Борисова, Т.В. Жбанова, И.А. Борисова // Федеральное гос. учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ"), Отд. научно-методической работы. Владимир, 2010.

4. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина; ВНИТИБП.- М.,1998.- 928с.

5. Выделение вируса блютанга от импортированного крупного рогатого скота / И.В. Вялых, Г.П. Фёдоров, И.В. Ногина, В.В. Куриннов, М.Б. Новикова // Ветеринария. - 2010. - №8. - С. 23-26.

6. Выделение, идентификация и типирование вируса КЛО в Бурятии / И.Ф. Вишняков, А.А. Стрижаков, М.Б. Новикова, А.В. Луницин, В.В. Куриннов, Г.М. Карпов; НИСХИ //пгт. Гвардейский, 1994.- Ч..2. - С.16-18.

7. Гаврилова, Е.А. Совершенствование средств мониторинга блютанга на основе полимеразной цепной реакции: дис. ... канд. вет. наук: 06.02.02: защищена 2010 / Гаврилова Екатерина Анатольевна. - Покров, 2010. - 151 с.

8. Захаров, В.М. Блютанг овец и крупного рогатого скота — угроза распространения в Центрально-Азиатском регионе // Основные направления совершенствования ветеринарных услуг в эпоху могущества и счастья: матер. Междунар. науч. конф. — Ашхабад, 2013. — С. 177-179.

9. Захаров, В.М. Комплексность мер по предотвращению заноса и распространения блютанга в Российской Федерации / Захаров В.М. //

Ветеринария - 2009. - №5. - С. 3-5.

10. Идентификация и типирование вируса катаральной лихорадки овец / И.Ф. Вишняков, А.А. Стрижаков, М.Б.Новикова, А.В.Луницин, В.В. Куриннов, Г.М. Карпов, В.И. Балышева, К.С. Волокитина // Ветеринария. - 1995. - №4. -С.20-25.

11. Идентификация и типирование вируса катаральной лихорадки овец / И.Ф. Вишняков, А.А. Стрижаков, М.Б. Новикова, А.В. Луницин, В.В. Куриннов, Г.М. Карпов, В.И. Балышева, К.С. Волокитина // Ветеринария. - 1995. - №4. -С.20-25.

12. Изучение инфицированности крупного и мелкого рогатого скота вирусом блютанга 14-го серотипа в Смоленской области / М.Б. Новикова, М.В. Сидлик, В.А. Журавлева, А.Ю. Кольцов, И.В. Вялых, А.В. Панферова, В.В. Куриннов // Ветеринария -2015. - №2. - С. 17-23.

13. Использование полимеразной цепной реакции для идентификации вирусов КЛО и ЭГБО / К.А. Снетков, Н.Н. Власов, С.Ж. Цыбанов, А.А. Стрижаков, А.Ю. Чичикин // Генодиагностика инфекционных заболеваний: материалы Всероссийской научно-практической конференции.- Москва, 2002. -С.366-368.

14. Катаральная лихорадка овец (КЛО, блютанг, синий язык) // Пятьдесят лет борьбы с особо опасными болезнями животных / Рос. акад. с.-х. наук; ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии; под редю Д.В. Колбасова - -Владимир: Атлас,2008. - С.52-54.

15. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин.- М., 1990. - 352 с.

16. Макаров, В.В. Блютанг 8 серотипа в Европе. Биология и эпидемиология вектора / В.В. Макаров, О.И. Сухарев, Ф.И. Василевич // Ветеринария. - 2014. - № 9. - С. 16-21.

17. Макаров, В.В. Блютанг 8 серотипа в Европе. Отношения "Вирус ^ ^ncoides" / В.В. Макаров, О.И. Сухарев, Ф.И. Василевич // Ветеринария. - 2014. - № 6. - С. 18-23.

18. Макаров, В.В. Блютанг в Европе, вызванный вирусом 8 серотипа:

эпизоотический паттерн / В.В. Макаров, О.И. Сухарев, А.А. Стрижаков // Ветеринария. - 2014. - № 3. - С. 21-24.

19. Мокрецы рода Culicoides (Díptera: Ceratopogonidae) и их роль в распространении блютанга и болезни Шмалленберга в России / А.В. Спрыгин, О.А. Федорова, Ю.Ю. Бабин, А.В. Кононов, А.К. Караулов // Сельскохозяйственная биология. - 2015. - Т. 50,№ 2. - С. 183-197.

20. О выявлении вакциноподобного вируса блютанга 14го серотипа в Российской Федерации и странах Европы / В.М. Захаров, А.В. Кононов, В.А. Мищенко, И.В. Амирова // Ветеринария - 2015. - №12. - С. 11-16.

21. Панферова, А.В. Генотипирование серотипов вируса блютанга: дис. ... канд. биол. наук: 03.02.02: защищена 2012 / Панферова Агнеса Владимировна. - Покров, 2012. - 130 с.

22. Пособие по ветеринарной вирусологии / Р.В. Белоусова, И.В. Третьякова, М.С. Калмыкова, Е.И. Ярыгина - М., 2011. - 66c.

23. Санитарный кодекс наземных животных / МЭБ. - 13-е изд. - М.; Париж, 2004. - С. 207-208.

24. Серологическое обследование жвачных в Бурятии через семь лет после вспышки блютанга / А.А. Стрижаков, М.Б. Новикова, С.Ж. Цыбанов, Г.Б. Муруева // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзот. зооантропоноз. болезнями животных: Междунар. науч.-практ. конф Сб. ст. -Покров, 2000. - С.63-64.

25. Снетков, К.А. Идентификация возбудителей блютанга и эпизоотической геморрагической болезни оленей с помощью полимеразной цепной реакции: дис. ... канд. биол. наук: 03.00.06: защищена 2003 / Снетков Константин Анатольевич. - Покров, 2003. - 124 с.

26. Сравнительная оценка вариантов ПЦР-анализа для выявления генома вируса блютанга / Е.А. Гаврилова, Д.В. Колбасов, А.С. Малоголовкин, С.Ж. Цыбанов // Актуальные проблемы инфекционной патологии ветеринарной медицины: материалы конференции молодых ученых ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии. - Покров, 2009. - С. 83-87.

27. Шоопала, Д. Особенности проявления инфекционной катаральной лихорадки овец в Намибии/ Д. Шоопала// Ветеринария. 2005. - №12. - С.22-23.

28. Эпизоотология и меры борьбы с блютангом / А. А. Стрижаков [и др.] // Ветеринария. - 2008. - № 8. - С. 18-22.

29. 3-D reconstruction of bluetongue virus tubules using cryoelectron microscopy / E.A. Hewat, T.F. Booth, R.H. Wade, P. Roy // J. Struct. Biol. - 1992. -Vol. 108. - P. 35-48.

30. Afshar, A. Bluetongue: laboratory diagnosis / A. Afshar // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. - 1994. - 17(3-4). - P. 221-242.

31. Analysis and phylogenetic comparisons of full-length VP2 genes of the 24 bluetongue virus serotypes / S. Maan, N.S. Maan, A.R. Samuel, S. Rao, H. Attoui, P.P. Mertens // J. Gen. Virol. - 2007. -Vol. 88.- P. 621-630.

32. Analysis of the roles of bluetongue virus outer capsid proteins VP2 and VP5 in determination of virus serotype / P.P.C. Mertens, S. Pedley, J. Cowley, J.N. Burroughs, A.H. Corteyn, M.H. Jeggo, D.M. Jennings, B.M. Gorman // Virology. -1989. - N. 170. - P. 561-565.

33. Anderson, J. Use of monoclonal antibody in a blocking ELISA to detect group specific antibodies to bluetongue virus / J. Anderson // J.Immunol. Methods. -1984. - V 74. - P. 139-149.

34. Barratt-Boyes, S. Dynamics of viral spread in bluetongue virus infected calves. / S. Barratt-Boyes, N.J. MacLachlan // Veterinary Microbiology. - 1994. - N. 40. - P. 361-371.

35. Barratt-Boyes, S. Pathogenesis of bluetongue virus infection of cattle / S. Barratt-Boyes, N.J. MacLachlan // Journal of the American Veterinary Medical Association. - 1995. - T. 206. - P. 1322-1329.

36. Baylis, M. Rates of bluetongue virus transmission between Culicoides sonorensis and sheep / M. Baylis, L. O'Connell, P.S. Mellor // Med. Vet. Entomol. -2008. -Vol. 22. - P. 228-237.

37. Bluetongue in Europe and the Mediterranean Basin: history of occurrence prior to 2006 / P.S. Mellor, S. Carpenter, L. Harrup, M. Baylis, P.P. Mertens // Prev Vet

Med. - 2008. - N. 87. - P. 4-20.

38. Bluetongue situation in Russia / A. Panferova et al. - URL: http://ec.europa.eu/food/animal/diseases/controlmeasures/bluetongue en.htm.

39. Bluetongue virus coat protein VP2 contains sialic acid-binding domains, and VP5 resembles enveloped virus fusion proteins / X. Zhang, M. Boyce, B. Bhattacharya, S. Schein, P. Roy., Z.H. Zhou // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. - 2010. -Vol. 107. - P. 6292-6297.

40. Bluetongue virus replication, molecular and structural biology / P.P Mertens, J. Diprose, S. Maan, K.P. Singh, H. Attoui, A.R. Samuel // Vet. Ital. - 2004. -Vol. 40 - P. 426-437.

41. Bluetongue virus serotype 27: detection and characterization of two novel variants in Corsica, France / C. Schulz, E Breard, C. Sailleau, M. Jenckel et al. / J. Gen. Virol. - 2016. - Vol. 97, N9. - P. 73-83.

42. Bluetongue virus targets conventional dendritic cells in skin lymph / B. Hemati, V. Contreras, C. Urien, M. Bonneau, H-H. Takamatsu, P.P.C. Mertens, E. Breard, C. Sailleau, S. Zientara, I. Schwartz-Cornil // Journal of Virology. - 2009. - N. 83. - P. 8789-8799.

43. Bluetongue virus VP4 is an RNA-capping assembly line / G. Sutton, J.M. Grimes, D.I. Stuart, P. Roy // Nat. Struct. Mol. Biol. - 2007. -Vol. 14. - P. 449-451

44. Bluetongue virus VP6 protein binds ATP and exhibits an RNA-dependent ATPase function and a helicase activity that catalyze the unwinding of double-stranded RNA substrates / N. Stauber, J. Martinez-Costas, G. Sutton, K. Monastyrskaya, P. Roy // J. Virol. - 1997. - Vol. 71. - P. 7220-7226.

45. Bluetongue virus: European Community inter-laboratory comparison tests to evaluate ELISA and RT-PCR detection methods / C.A. Batten, K. Bachanek-Bankowska, A. Bin-Tarif, L. Kgosana, A.J. Swain, M. Corteyn, K. Darpel, P.S. Mellor, H.G. Elliott and C.A. Oura // Vet Microbiol. - 2008a. - V. 129. N. 1-2. - P. 80-88.

46. Bluetongue virus-induced activation of primary bovine lung microvascular endothelial cells / C.D. DeMaula, C.M. Leutenegger, M.A. Jutila, N.J. MacLachlan // Vet. Immunol. Immunopathol. - 2002. - Vol. 86. - P. 147-157.

47. Bluetongue. 1st Edn. / P.S. Mellor, M. Baylis, P.C. Peter and P.P. Mertens // Academic Press Elsiver publication. London. - 2009. - P. 167-196.

48. Bonneau, K.R. Genetic diversification of field strains of bluetongue virus / K.R. Bonneau, N.J. MacLachlan // Vet. Ital. - 2004. - Vol. 40. - P. 446-447.

49. Bonneau, K.R. Occurrence of genetic drift and founder effect during quasispecies evolution of the VP2 and NS3/NS3A genes of bluetongue virus upon passage between sheep, cattle, and Culicoides sonorensis / K.R. Bonneau, B.A. Mullens, N.J. MacLachlan // J. Virol. - 2001. - Vol. 75. - P. 8298-8305.

50. Brewer, A.W. The pathogenesis of bluetongue virus infection of bovine blood cells in vitro: ultrastructural characterization/ A.W. Brewer, N.J. MacLachlan // Arch. Virol. - 1994. - V. 136. - P. 287-298.

51. Brewer, A.W. Ultrastructural characterization of the interaction of bluetongue virus with bovine erythrocytes in vitro / A.W. Brewer, N.J. MacLachlan // Vet. Pathol. - 1992. - Vol. 29. - P. 356-359.

52. Carpenter, S. Culicoides and the emergence of bluetongue virus in northern Europe / S. Carpenter, A. Wilson and P.S. Mellor // Trends Microbiol. - 2009. - N. 17. -P. 172-178.

53. Celma, C.C. A viral nonstructural protein regulates bluetongue virus trafficking and release / C.C. Celma, P. Roy // J. Virol. - 2009. - Vol. 83. - P. 68066816.

54. Characterising Non-Structural Protein NS4 of African Horse Sickness Virus / L. Zwart, C.A. Potgieter, S.J. Clift, V. van Staden // PLoS One. - 2015. - Vol. 10. - P.0124281.

55. Climate change and the recent emergence of bluetongue in Europe / B.V. Purse, P.S. Mellor, D.J. Rogers, A.R. Samuel, P.P.C. Mertens, M. Baylis // Nature Reviews Microbiology. - 2005. - N. 3. - P. 171-181.

56. Clinical signs and pathology shown by British sheep and cattle infected with bluetongue virus serotype 8 derived from the 2006 outbreak in northern Europe / K.E. Darpel, C.A. Batte, E. Veronesi, A.E. Shaw, S. Anthony, K. Bachanek-Bankowska, L. Kgosana, A. Bin-Tarif, S. Carpenter, U.U. Muller-Doblies, H-H.

Takamatsu, P.S. Mellor, P.P.C. Mertens, C.A.L. Oura // Veterinary Record. - 2007. - V. 161. - P. 253-261.

57. Coetzee, P. A review of experimental infections with bluetongue virus in the mammalian host / P. Coetzee // Virus Res. [Электронный ресурс]. Режим доступа (URL): http://dx.doi.org/10.1016/j.virusres.2013.12.044 (дата обращения: 10.1. 2014).

58. Comparison of competitive ELISA, indirect ELISA and standard AGID tests for detecting bluetongue virus antibodies in cattle and sheep / A. Afshar, F.C. Thomas, P.F. Wright, J.L. Shapiro, J Anderson // Vet. Rec. - 1989. - N 124. - C 136141.

59. Complete coding genome sequence of putative novel bluetongue virus serotype 27 / M. Jenckel, E. Breard, C. Schulz, C. Sailleau, C. Viarouge, B. Hoffmann, D. Hoper, M. Beer, S. Zientara // Genom Announ. - 2015. - Vol. 3.

60. Complete genome characterisation of a novel 26th bluetongue virus serotype from Kuwait / S. Maan, N.S. Maan, K. Nomikou, E. Veronesi, K. Bachanek-Bankowska, et al. // PLoS One. - 2011. - Vol. 6. - P. 26147.

61. Completion of the sequence analysis and comparisons of genome segment 2 (encoding outer capsid protein VP2) from representative isolates of the 24 bluetongue virus serotypes / S. Maan, N.S. Maan, A.R. Samuel, R. O'Hara, A.J. Meyer, S. Rao, P.P. Mertens // Vet. Ital. - 2004. - Vol. 40. - P. 484-488.

62. Cost assessment of the movement restriction policy in France during the 2006 bluetongue virus episode (BTV-8) / Damian Tago, James K. Hammitt, Alban Thomas, Didier Raboisson // Preventive Veterinary Medicine. - 2014. - Vol. 117. - P. 577-589.

63. Cowley, J.A. Cross-neutralization of genetic reassortants of bluetongue virus serotypes 20 and 21 / J.A. Cowley, B.M. Gorman // Veterinary Microbiology. -1989. - N. 19. - P. 37-51.

64. Cowley, J.A. Genetic reassortants for identification of the genome segment coding for the bluetongue virus hemagglutinin / J.A. Cowley, B.M. Gorman // J. Virol. - 1987. - Vol. 61. - P. 2304-2306.

65. Culicoides biting midges (Diptera, Ceratopogonidae) in various climatic

zones of Russia and adjacent lands / A.V. Sprygin, O.A. Fiodorova, Y.Y. Babin, N.P. Elatkin, B. Mathieu, M.E. England, A.V. Kononov // Journal of Vector Ecology. - 2014. - Vol. 39, № 2. - P. 306-315.

66. Culicoides chiopterus as a potential vector of bluetongue virus in Europe / E. Dijkstra, I.J. van der Ven, R. Meiswinkel, D.R. Holzel, P.A. Van Rijn // The Veterinary record. - 2008. - Vol. 162. - P. 422.

67. Cytokine modulation of the interaction between bluetongue virus and endothelial cells in vitro / M.L. Coen, J.A. Ellis, D.T. O'Toole, W.C. Wilson // Vet. Pathol. - 1991. - Vol. 28. - P. 524-532.

68. Detection of a fourth orbivirus non-structural protein / M. Belhouchet, F. Mohd Jaafar, A.E. Firth, J.M. Grimes, P.P Mertens, H. Attoui // PLoS. One. - 2011. -Vol. 6. - P. 25697.

69. Detection of bluetongue virus in the blood of inoculated calves: comparison of virus isolation, PCR assay, and in vitro feeding of Culicoides variipennis / N.J. MacLachlan, R.A. Nunamaker, J.B. Katz et al. // Arch. Virol. - 1994. - Vol.136. -N.1-2.- P. 1-8.

70. Development and initial evaluation of a real-time RT-PCR assay to detect bluetongue virus genome segment 1 / A.E. Shaw, P. Monaghan, H.O. Alpar, S. Anthony, K.E. Darpel, et al. // J. Virol. Methods. - 2007. - Vol. 145. - P. 115-126.

71. Differentiation of Italian field and South African vaccine strains of bluetongue virus serotype 2 using real-time PCR / G. Orru, P.D. Santis, F. Solinas, G. Savini, V. Piras & V. Caporale // J. Virol. Methods. - 2004. - N. 122. - P. 37-43.

72. Du Toit R.M. The transmission of Bluetongue and Horse-sickness by Culicoides / R.M. Du Toit // Onderstepoort J Vet Sci Anim Indust. - 1944. - N. 19. - P. 7-16.

73. Effects of temperature on virogenesis of bluetongue virus serotype 11 in Culicoides variipennis and sonorensis / B.A. Mullens, W.J. Tabachnick, F.R. Holbrook, and L.H. Thompson // Med Vet Entomol. - 1995. - V. 9. N. 1. - P. 71-76.

74. Emergence of bluetongue virus serotype 6 in Europe--German field data and experimental infection of cattle / M. Eschbaumer, B. Hoffmann, A. Moss, G.

Savini, A. Leone, P. Konig, J. Zemke, F. Conraths, M. Beer // Vet. Microbiol. - 2010. -Vol. 143. - P. 189-195.

75. Epizootic congenital hydranencephaly and abortion in cattle due to bluetongue virus serotype 8 in the Netherlands / W. Wouda, N.H. Peperkamp, M.P. Roumen, J. Muskens, A. van Rijn, P. Vellema // Tijdschrift voor diergeneeskunde. -2009. - V. 134. - P. 422-427.

76. Erasmus, B.J. (1975) Bluetongue in sheep and goats / B.J. Erasmus // Aust Vet. J. - 1975. - Vol. 51. - P. 165-170.

77. Establishment of a bluetongue virus infection model in mice that are deficient in the alpha/beta interferon receptor / E. Calvo-Pinilla, T. Rodriguez-Calvo, J. Anguita, N. Sevilla, J. Ortego // PLoS One. - 2009. - Vol. 4. - P. 5171.

78. European field strain of bluetongue virus derived from two parenteral vaccine strains by genome segment reassortment / C.A. Batten, S. Maan, A.E. Shaw, N.S. Maan, P.P.C. Mertens // Virus Research. - 2008. - N. 137. - P. 56-63.

79. Excretion of bluetongue virus in cattle semen: a feature of laboratory-adapted virus / P.D. Kirkland, L.F. Melville, N.T. Hunt, C.F. Williams, R.J. Davis // Veterinaria Italiana. - 2004. - N. 40. - P. 497-501.

80. Expression and functional characterization of bluetongue virus VP5 protein: role in cellular permeabilization / S.S. Hassan, C. Wirblich, M. Forzan, P. Roy // Journal of Virology. - 2001. - N. 75. - P. 8356-8367.

81. Financial consequences of the Dutch bluetongue serotype 8 epidemics of 2006 and 2007 / A.G.J. Velthuis, H.W. Saatkamp, M.C.M. Mourits, A.A. de Koeijer, A.R.W. Elbers // Preventive Veterinary Medicine. - 2010. - N. 93. - P. 294304.

82. First detection of bluetongue virus serotype 14 in Poland / A. Orlowska, P. Trabas, M. Smreczak, A. Marzec, and Jan F. Zmudzinski // Arch. Virol. - 2016. Vol. 161. - P. 1969-1972.

83. Firth, A.E. Bioinformatic analysis suggests that the Orbivirus VP6 cistron encodes an overlapping gene / A.E. Firth // Virol. J. - 2008. - Vol. 5. - P. 48.

84. Flow cytometric analysis of in vitro bluetongue virus infection of bovine blood mononuclear cells / S.M. Barratt-Boyes, P.V. Rossitto, J.L. Stott, N.J.

MacLachlan // Journal of General Virology. - 1992. - V. 73. - P. 1953-1960.

85. Forzan, M. A capsid protein of nonenveloped Bluetongue virus exhibits membrane fusion activity / M . Forzan, C. Wirblich, P. Roy // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. - 2004. - Vol.101. - P. 2100-2105.

86. Foster, N.M. Preliminary investigations on insect transmission of bluetongue virus in sheep / N.M. Foster, R.H. Jones, B.R. McCrory // Am. J. Vet. Res. -1963. - Vol. 24. - P. 1195-1200.

87. Full genome characterisation of bluetongue virus serotype 6 from the Netherlands 2008 and comparison to other field and vaccine strains / S. Maan, N.S. Maan, P.A. Van Rijn, R.G. Van Gennip, A. Sanders, et al. // PLoS One. - 2010. - Vol. 5. - P. 10323.

88. Genetic characterization of Toggenburg Orbivirus, a new bluetongue virus, from goats, Switzerland, Emerg / M.A. Hofmann, S. Renzullo, M. Mader, V. Chaignat, G. Worwa, B. Thuer // Infect. Dis. - 2008. - N. 14. - P. 18551861.

89. Genome Sequence of Bluetongue Virus Type 2 from India: Evidence for Reassortment between Outer Capsid Protein Genes / S. Maan, N.S. Maan, M.N. Belaganahalli, A. Kumar, K. Batra, et al. // Genom Announ. - 2015. - Vol. 3.

90. Hardy, W.T. Soremuzzle of sheep / W.T. Hardy, D.A. Price // J. Am. Vet. Med. Assoc. - 1952. - V.120. - P. 23-25.

91. Hassan, S.S. Expression and functional characterization of bluetongue virus VP2 protein: role in cell entry / S.S. Hassan, P. Roy // Journal of Virology. - 1999. - N. 73. - P. 9832-9842.

92. Holbrook, F.R. Culicoides variipennis (Diptera: Ceratopogonidae) complex in California / F.R. Holbrook, W.J. Tabachnick // J. Med. Entomol. - 1995. - Vol. 32. -P. 413-419.

93. Holbrook, F.R. Genetic variation in populations of Culicoides variipennis complex in the six New England states, U.S.A / F.R. Holbrook, W.J. Tabachnick, R. Brady // Med. Vet. Entomol. - 1996. - Vol. 10. - P. 173-180.

94. Hourrigan, J.L. Bluetongue: the disease in cattle / J.L. Hourrigan, A.L. Klingsporn // Aust. Vet. J. - 1975. - Vol. 51. - P. 170-174.

95. Howell, P. G. Bluetongue virus / P.C. Howell, D.W. Verwoerd // Virol Monogr. - 1971. - N. 9. - P. 35-74.

96. Howell, P.G. A preliminary antigenic classification of strains of bluetongue virus. / P.G. Howell // Onderstepoort J Vet Res. - 1960. - N. 28. - P. 357-363.

97. Howell, P.G. The antigenic classification of strains of bluetongue virus, their significance and use in prophylactic immunization / P.G. Howell // D.V.Sc. thesis. - University of Pretoria. - 1969.

98. Huismans, H. Identification of the serotype-specific and group-specific antigens of bluetongue virus / H. Huismans, B.J. Erasmus // Onderstepoort Journal of Veterinary Research. - 1981. - N. 48. - P. 51-58.

99. Hutcheon, D. Malarial catarrhal fever of sheep / D. Hutcheon // Vet. Rec. -1902. - Vol. 1. - P. 629-633.

100. Hydranencephaly in calves following the bluetongue serotype 8 epidemic in the Netherlands / W. Wouda, M. Roumen, N. Peperkamp, J. Vos, E. van Garderen, et al. // Vet. Rec. - 2008. - Vol. 162. - P. 422-423.

101. Identification and characterization of a novel non-structural protein of bluetongue virus / M. Ratinier, M. Caporale, M. Golder, G. Franzoni, K. Allan, et al. // PLoS Pathog. - 2011. - Vol. 7. -P.1002477.

102. Identification and differentiation of the twenty six bluetongue virus serotypes by RT-PCR amplification of the serotype-specific genome segment 2 / N.S. Maan, S. Maan, M.N. Belaganahalli, E.N. Ostlund, D.J. Johnson, K. Nomikou, P.P. Mertens // PLoS One. - 2012. - Vol. 7. - P. 32601.

103. Identification of bluetongue virus VP6 protein as a nucleic acid-binding protein and the localization of VP6 in virusinfected vertebrate cells / P. Roy, A. Adachi, T. Urakawa, T.F. Booth, C.P. Thomas // J. Virol. - 1990. - Vol. 64. - P. 1-8.

104. Infection kinetics, prostacyclin release and cytokine-mediated modulation of the mechanism of cell death during bluetongue virus infection of cultured ovine and bovine pulmonary artery and lung microvascular endothelial cells / C.D. DeMaula, M.A. Jutila, D.W. Wilson, N.J. MacLachlan // J. Gen. Virol. - 2001. - Vol. 82. - P. 787-794.

105. Interactions between the inner and outer capsids of bluetongue virus / E.L. Nason, R. Rothagel, S.K. Murkherjee, A.K. Kar, M. Forzan, B.V. Prasad, P. Roy // Journal of Virology. - 2004. - N. 78. - P. 8059-8067.

106. Involvement of the skin during bluetongue virus infection and replication in the ruminant host / K.E. Darpel, P. Monaghan, J. Simpson, S.J. Anthony, E. Veronesi, et al. // Vet. Res. - 2012. - Vol. 43. P. 40.

107. Isolation of a capsid protein of bluetongue virus that induces a protective immune response in sheep / H. Huismans, N.T. Van der Walt, M. Cloete, B.J. Erasmus // Virology. - 1987. - Vol. 157. - P. 172-179.

108. Kar, A.K. Assembly and intracellular localization of the bluetongue virus core protein VP3 / A.K. Kar, N. Iwatani, P. Roy // J. Virol. - 2005. - Vol.79. - P. 11487-11495.

109. Kar, A.K. Bluetongue virus RNA binding protein NS2 is a modulator of viral replication and assembly / A.K. Kar, B. Bhattacharya, P. Roy // BMC Molecular Biology. - 2007. - N. 8. - P. 4.

110. Kar, A.K. Defining the structure-function relationships of bluetongue virus helicase protein VP6 / A.K. Kar, P. Roy // J. Virol. - 2003. - Vol. 77. - P. 1134711356.

111. Kar, A.K. Mapping the assembly pathway of Bluetongue virus scaffolding protein VP3 / A.K. Kar, M. Ghosh, P. Roy // Virology. - 2004. - Vol. 324. - P. 387399.

112. Kenney, J.L. Transmission of Arthropod-Borne Viruses by Mosquitoes / J.L. Kenney, A.C. Brault // Advances in Virus Research. - 2014. - Vol. 89. - P. 39-83.

113. Kirkland, P.D. Bluetongue viruses, vectors and surveillance in Australia -the current situation and unique features / H.A. Standfast // Vet. Ital. - 2004. - Vol. 40. - P. 47-50.

114. Localization of the non-structural protein NS3 in bluetongue virus infected cells / A.D. Hyatt, A.R. Gould, B. Coupar, B.T. Eaton // Journal of General Virology. -1991. - V. 72. - P. 2263-2267.

115. Maclachlan, J.Clinical signs and pathology. In: Mertens P, Baylis M,

Mellor P, editors. Bluetongue: Academic press. pp. 285-291.

116. MacLachlan, N.J. Bluetongue and equine viral arteritis viruses as models of virus-induced fetal injury and abortion / N.J. MacLachlan, A.J. Conley, P.C. Kennedy // Animal Reproduction Science. - 2000. - N. 60-61. - P. 643-651.

117. MacLachlan, N.J. Bluetongue virus-induced interferon in cattle / N.J. MacLachlan, J. Thompson // American Journal of Veterinary Research. - 1985. - N 46.-P. 1238-1241.

118. MacLachlan, N.J. Bluetongue: pathogenesis and duration of viraemia / N.J. MacLachlan // Veterinaria Italiana. - 2004. - N. 40. - P. 462-467.

119. MacLachlan, N.J. Clinical signs and pathology. In: Mellor P, Baylis M, Mertens PPC (eds.): Bluetongue. / N.J. MacLachlan, G. Gard // Academic Press, London. - 2009. - P. 285-293.

120. MacLachlan, N.J. Global implications of the recent emergence of bluetongue virus in Europe. Veterinary Clinics of North America / N.J. MacLachlan // Food Animal Practise. - 2010. - N. 26. - P. 163-171.

121. MacLachlan, N.J. Humoral immune response of calves to bluetongue virus infection / N.J. MacLachlan, H.W. Heidner, F.J. Fuller // American Journal of Veterinary Research. - 1987. - N. 48. - P. 1031-1035.

122. Maclachlan, N.J. Induced brain lesions in calves infected with bluetongue virus / N.J. Maclachlan, B.I. Osburn // Veterinary Record. - 2008. - N. 162. - P. 490491.

123. MacLachlan, N.J. Reemergence of bluetongue, African horse sickness, and other orbivirus diseases / N.J. MacLachlan, A.J. Guthrie // Vet. Res. - 2010. - P. 41-35.

124. Maclachlan, N.J. The pathogenesis and immunology of bluetongue virus infection of ruminants / N.J. Maclachlan // Comp. Immun. Microbiol. Infect. Dis. -1994. - N. 17. 3/4. - P. 197-206.

125. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals (chapter 2.1.3) // World Animal Health Information [Электронный ресурс]. Режим доступа (URL): http:// www.oie.int (дата обращения: 10.12.2014).

126. Matsuo, E. Bluetongue virus VP6 acts early in the replication cycle and can

form the basis of chimeric virus formation / E. Matsuo, P. Roy // J. Virol. - 2009. - Vol. 83. - P. 8842-8848.

127. Measurement of the Infection and Dissemination of Bluetongue Virus in Culicoides Biting Midges Using a Semi-Quantitative RT-PCR Assay and Isolation of Infectious Virus / E. Veronesi, F. Antony, S. Gubbins, N. Golding, A. Blackwell, et al. // PLoS. ONE. - 2013. - Vol. 8. - P.70800.

128. Mellor, P.S. The replication of bluetongue virus in Culicoides vectors / P.S. Mellor // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 1990. - Vol. 162. - P. 143-161.

129. Mellor, P.S. Bluetongue virus in the Mediterranean Basin 1998-2001 / P.S. Mellor, E.J. Wittmann // Vet. J. - 2002. - Vol. 164. - P. 20-37.

130. Mellor, P.S. Culicoides biting midges: Their role as arbovirus vectors / P.S. Mellor, J. Boorman, M. Baylis // Annual Review of Entomology. - 2000. - N. 45. - P. 307-340.

131. Mellor, P.S. The replication of bluetongue virus in Culicoides vectors, Curr / P.S. Mellor // Top. Microbiol. Immunol. - 1990. - N. 162. - P.143-161.

132. Membrane organization of bluetongue virus nonstructural glycoprotein NS3 / O.B. Bansal, A. Stokes, A. Bansal, D. Bishop, P. Roy // J. Virol. - 1998. -Vol.72. - P. 3362-3369.

133. Mertens, P.P. Assignment of the genome segments of bluetongue virus type 1 to the proteins which they encode / P.P Mertens, F. Brown, D.V. Sangar // Virology. -1984. - Vol. 135. - P. 207-217.

134. Modrof, J. Phosphorylation of bluetongue virus nonstructural protein 2 is essential for formation of viral inclusion bodies / J. Modrof, K. Lymperopoulos, P. Roy // J. Virol. - 2005. - Vol. 79. - P. 10023-10031.

135. Neitz, W.O. Immunological studies on bluetongue in sheep / W.O. Neitz // Onderstepoort J Vet Anim Ind. - 1948. - N. 23. - P. 93-136.

136. Novel bluetongue virus serotype from Kuwait / S. Maan, N.S. Maan, K. Nomikou, C. Batten, F. Antony, M.N. Belaganahalli, A.M. Samy, A.A. Reda, S.A. Al-Rashid, M. El Batel, C.A.L. Oura, P.P.C. Mertens // Emerging Infectious Diseases. -2011. - N. 17. - P. 886-889.

137. Orbivirus, Reoviridae. In Virus Taxonomy, VIII Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV) (C.M. fauquet, M. A. Mayo, J. Maniloff, U. Dseelberger, L.A. Ball, Eds) Elseiver / P.P.C. Mertens, S. Maan, A. Samuel, H. Attoui // Academic Press, London. - 2004. - P. 466-483.

138. Owens, R.J. Role of an arbovirus nonstructural protein in cellular pathogenesis and virus release / R.J. Owens, C. Limn, P. Roy // Journal of Virology. -2004. - N. 78. - P. 6649-6656.

139. Pathogenicity study in sheep using reverse-genetics-based reassortant bluetongue viruses / C.C. Celma, B. Bhattacharya, M. Eschbaumer, K. Wernike, M. Beer, P. Roy // Vet. Microbiol. - 2014. - Vol. 174. - P. 139-147.

140. Pedley, S. Analysis of genome segments from six different isolates of bluetongue virus using RNA-RNA hybridisation: a generalised coding assignment for bluetongue viruses / S. Pedley, M.E. Mohamed, P.P Mertens // Virus Res. - 1988. -Vol. 10. - P. 381-390.

141. Perez de Leon, A.A. Apyrase activity and adenosine diphosphate induced platelet aggregation inhibition by the salivary gland proteins of Culicoides variipennis, the North American vector of bluetongue viruses / A.A. Perez de Leon, W.J. Tabachnick // Vet. Parasitol. - 1996. - Vol. 61. P. 327--338.

142. Peruvian horse sickness virus and Yunnan orbivirus, isolated from vertebrates and mosquitoes in Peru and Australia / H. Attoui, M.R. Mendez-Lopez, S. Rao, A. Hurtado-Alendes, F. Lizaraso-Caparo, et al. // Virology. - 2009. - Vol. 394. -P. 298-310.

143. Pini, A. Study on the pathogenesis of bluetongue: replication of the virus in the organs of infected sheep / A. Pini // Onderstepoort J. Vet. Res. - 1976. - N. 43. - P. 159-164.

144. Prediction of bluetongue vector distribution in Europe and north Africa using satellite imagery / A.J. Tatem, M. Baylis, P.S. Mellor, B.V. Purse, R. Capela, et al. // Vet. Microbiol. - 2003. - Vol. 97. - P. 13-29.

145. Price, D.A. Isolation of the bluetongue virus from Texas sheep-Culicoides shown to be a vector / D.A. Price, W.T. Hardy // J. Am. Vet. Med. Assoc. - 1954. -

Vol. 124. - P. 255-258.

146. Rapid and simple method for purification of nucleic acids/ R. Boom, S.J.A. Sol, M.M.M. Salimans, C.L. Jansen, P.M.E. Wertheim-van Dillen and J. van der Noordaa// J. of Clinical Microbiology. - 1990. - Vol.28, N3. - P.495-503.

147. Rapid cDNA synthesis and sequencing techniques for the genetic study of bluetongue and other dsRNA viruses / S. Maan, S. Rao, N.S. Maan, S.J. Anthony, H. Attoui, A.R. Samuel, P.P. Mertens // J. Virol. Methods. - 2007. - Vol. 143. - P. 132139.

148. Rapid diagnostic PCR assays for members of the Culicoides obsoletus and Culicoides pulicaris species complexes, implicated vectors of bluetongue virus in Europe / D. V. Nolan , S. Carpenter, J. Barber, P.S. Mellor, et al. // Vet. Microbiol. -2007. - Vol. 124. - N. 1-2. - P.82-94

149. Rapid generation of replication-deficient monovalent and multivalent vaccines for bluetongue virus: protection against virulent virus challenge in cattle and sheep / C.C. Celma, M. Boyce, P.A. van Rijn, M. Eschbaumer, K. Wernike, Hoffmann, M. Beer, A. Haegeman, K. De Clercq, P. Roy // J. Virol. - 2013. - V. 87. - N. 17. - P. 9856-9864.

150. Reconstitution of bluetongue virus polymerase activity from isolated domains based on a three-dimensional structural model / J.M. Wehrfritz, M. Boyce, S. Mirza, P. Roy // Biopolymers. - 2007. - Vol. 86. - P. 83-94.

151. Response of the regional lymph node to bluetongue virus infection in calves / S.M. Barratt-Boyes, P.V. Rossitto, B.C. Taylor, J.A. Ellis, N.J. Maclachlan // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 1995. - V. 45. - P. 7384.

152. RGD tripeptide of bluetongue virus VP7 protein is responsible for core attachment to Culicoides cells / B.H. Tan, E. Nason, N. Staeuber, W. Jiang, K. Monastryrskaya, P. Roy // J. Virol. - 2001. -Vol. 75. - P. 3937-3947.

153. Roy, P. Bluetongue virus assembly and morphogenesis. In: Roy P (ed.): Reoviruses: Entry, Assembly and Morphogenesis / P. Roy, R. Noad // Current Topics in Microbiology and Immunology. - 2006. - P. 87-116.

154. Roy, P. Bluetongue virus proteins / P. Roy // J. Gen. Virol. - 1992. - N. 73.

- P. 3051-3064.

155. Roy, P. Bluetongue virus proteins and particles and their role in virus entry, assembly, and release / P. Roy // Adv. Virus Res. - 2005. - Vol. 64. - P. 69-123.

156. Roy, P. Bluetongue virus: dissection of the polymerase complex / P. Roy // J. Gen. Virol. - 2008. - Vol. 89. - P. 1789- 1804.

157. Roy, P. Functional mapping of bluetongue virus proteins and their interactions with host proteins during virus replication / P. Roy // Cell Biochemistry and Biophysics. - 2008. - N. 50. - P. 143-157.

158. Roy, P. Orbiviruses. In: Fields' Virology, 5th edition. D. M. Knipe and P. M. Howley, editors. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA, USA. - 2007

159. Roy, P. Prospects for improved bluetongue vaccines / P. Roy, M. Boyce, R. Noad // Nat. Rev. Microbiol. - 2009. - Vol. 7. - P. 120-128

160. Saegerman, C. Bluetongue epidemiology in the European Union / C. Saegerman, D. Berkvens, P.S. Mellor // Emerg. Infect. Dis. - 2008. -Vol. 14. - P. 539544

161. Saliva proteins of vector Culicoides modify structure and infectivity of bluetongue virus particles / K.E. Darpel, K.F. Langner, M. Nimtz, S.J. Anthony, J. Brownlie, et al. // PLoS. ONE - 2011. - Vol. 6. - P.17545.

162. Salivary gland extracts of Culicoides sonorensis inhibit murine lymphocyte proliferation and no production by macrophages / J.V. Bishop, J.S. Mejia, A.A. Perez de Leon, W.J. Tabachnick, R.G. Titus // Am. J. Trop. Med. Hyg. - 2006. - Vol. 75. - P. 532-536.

163. Seasonal population fluctuations of Culicoides midges in the Smolenskaya, Pskovskaya and Vladimirskaya provinces of Western Russia in 2013 / A. Sprygin, O. Fiodorova, Y. Babin, V. Pavelko, G. Bellis, A. Kononov // Vet. Ital. - 2016

- Vol. 52 (3- 4) - P.231-234

164. Sequence analysis of bluetongue virus serotype 8 from the Netherlands 2006 and comparison to other European strains / S. Maan, N.S. Maan, N. Ross-smith, C.A. Batten, A.E. Shaw, et al. // Virology. - 2008. - Vol. 377. - P.308-318

165. Sequence comparison of the L2 and S10 genes of bluetongue viruses from

the United States and the People's Republic of China / K.R. Bonneau, N. Zhang, J. Zhu, F. Zhang, Z. Li, K. Zhang, L. Xiao, W. Xiang, N.J. MacLachlan // Virus. Res. - 1999. -Vol. 61. - P. 153-160.

166. Sequence specificity in the interaction of Bluetongue virus non-structural protein 2 (NS2) with viral RNA / K. Lymperopoulos, C. Wirblich, I. Brierley, P. Roy // J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 278. - P. 31722-31730.

167. Specific binding of Bluetongue virus NS2 to different viral plus-strand RNAs / K. Lymperopoulos, R. Noad, S. Tosi, S. Nethisinghe, I. Brierley, P. Roy // Virology. - 2006. - Vol. 353. - P. 17- 26.

168. Spreull, J. Malarial catarrhal fever (bluetongue) of sheep in South Africa / J. Spreull // Journal of Comparative Pathology and Therapeutics. - 1905. - N. 18. - P. 321-337.

169. Standfast, H.A. Vectors of bluetongue virus in Australia / H.A. Standfast, A.L. Dyce, M.J. Muller // Prog. Clin. Biol. Res. - 1985. - Vol. 178. - P. 177-186.

170. Structures of orbivirus VP7: implications for the role of this protein in the viral life cycle / A.K. Basak, J.M. Grimes, P. Gouet, P. Roy, D.I. Stuart // Structure. -1997. - Vol. 5. - P. 871-883.

171. Tabachnick, W. J. The genetics of Culicoides variipennis and the epidemiology of bluetongue disease in North America / W. J. Tabachnick // Annual Review of Entomology. - 1996. - N. 45. - P. 20-40.

172. Tabachnick, W.J. Culicoides and the global distribution of bluetongue virus infections / W.J. Tabachnick // Vet. Ital. - 2004. - N. 40. - P. 145-150.

173. Tanaka, S. Synthesis of bluetongue virus chimeric VP3 molecules and their interactions with VP7 protein to assemble into virus core-like particles / S. Tanaka, M. Mikhailov, P. Roy // Virology. - 1995. - Vol. 214. - P. 593-601.

174. Taraporewala, Z.F. Multimers of the bluetongue virus nonstructural protein, NS2, possess nucleotidyl phosphatase activity: similarities between NS2 and rotavirus NSP2 / Z.F. Taraporewala, D. Chen, J.T. Patton // Virology. - 2001. - Vol. 280. - P. 221-231.

175. The 2006 outbreak of bluetongue in northern Europe--the entomological

perspective / R. Meiswinkel, T. Baldet, R. de Deken, W. Takken, J.C. Delecolle et al. // Prev. Vet. Med. - 2008. - Vol. 87. - P. 55-63.

176. The barriers to bluetongue virus infection, dissemination and transmission in the vector, Culicoides variipennis (Diptera: Ceratopogonidae) / H. Fu, C.J. Leake, P.P. Mertens, P.S. Mellor // Arch. Virol. - 1999. - Vol. 144. - P. 747-761.

177. The genome sequence of bluetongue virus type 2 from India: evidence for reassortment between eastern and western topotype field strains / N.S. Maan, S. Maan, K. Nomikou, M. Guimera, G. Pullinger, K.P. Singh, M.N. Belaganahalli, P.P. Mertens // J. Virol. - 2015. - Vol. 86. - P. 5967-5968.

178. The highly ordered double-stranded RNA genome of bluetongue virus revealed by crystallography / P. Gouet, J.M. Diprose, J.M. Grimes, R. Malby, J.N. Burroughs, S. Zientara, D.I. Stuart, P.P Mertens // Cell. - 1999. - Vol. 97. - P. 481-490.

179. The isolation of a bluetongue virus from Culicoides collected in the Northen Territory of Australia / T.D. St. George et al. // Aust. Vet. J. - 1978. - V. 54. -P. 153-154.

180. The isolation of two bluetongue viruses from healthy cattle in Australia / T.D. St. George et al. // Aust. Vet. J. - 1980. - V. 56. - P. 562-563.

181. The membrane trafficking protein calpactin forms a complex with bluetongue virus protein NS3 and mediates virus release / A.R. Beaton, J. Rodriguez, Y.K. Reddy, P. Roy // Proc. Natl. Acad .Sci. - 2002. - Vol. 99. - P. 13154-13159.

182. The MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments/ S.A. Bustin, V. Benes, J.A. Garson, J. Hellemans, J. Huggett, M. Kubista, R. Mueller, T. Nolan, M.W. Pfaffl, G.L. Shipley, J. Vandesompele, C.T. Wittwer // Clinical Chemistry. - 2009. -Vol. 55. - № 4. - P. 611622.

183. The pathogenesis of experimental bluetongue virus infection of calves / N.J. MacLachlan, G. Jagels, P.V. Rossitto, P.F. Moore, H.W. Heidner // Vet. Pathol. -1990. - Vol. 27. - P. 223-229.

184. The Pathology and Pathogenesis of Bluetongue / N.J. MacLachlan, C.P. Drew, K.E. Darpel, G. Worwa // Journal of Comparative Pathology. - 2009. - N. 141. -

P. 1-16.

185. The role of endothelial cell-derived inflammatory and vasoactive mediators in the pathogenesis of bluetongue / C.D. DeMaula, C.M. Leutenegger, K.R. Bonneau, N.J. MacLachlan // Virology. - 2002. - Vol. 296. - P. 330-337.

186. Translocation portals for the substrates and products of a viral transcription complex: the bluetongue virus core / J.M. Diprose, J.N. Burroughs, G.C. Sutton, A. Goldsmith, P. Gouet, R. Malby, I. Overton, S. Zientara, P.P. Mertens, D.I. Stuart, J.M. Grimes // EMBO. J. - 2001. - Vol. 20. - P. 7229-7239.

187. Transmission potential of South African Culicoides species for live-attenuated bluetongue virus / J. Venterg, H. Gerdesg, S. Mellorp & T. Paweskaj // Vet. Ital. - 2004. - N. 40. - P. 198-202.

188. Transplacental and oral transmission of wild-type bluetongue virus serotype 8 in cattle after experimental infection / A. Backx, R. Heutink, E. Van Rooij, P. Van Rijn // Vet. Microbiol. - 2009. - Vol. 138. - P. 235-243.

189. Transplacental transmission of Bluetongue virus serotype 1 and serotype 8 in sheep: virological and pathological findings / M.T. van der Sluijs, D.P. Schroer-Joosten, A. Fid-Fourkour, M.P. Vrijenhoek, I. Debyser, V. Moulin, R.J. Moormann, A.J. de Smit // PLoS ONE8. - 2013. e81429.

190. Transplacentar and oral transmission of wild-type bluetongue virus serotype 8 in cattle after experimental infection / A. Backx, R. Heutink, E. van Rooij, and P. van Rijn // Veterinary Microbiology. - 2009. - V. 138. - P. 235-243.

191. Urakawa, T. Expression of largest RNA segment and synthesis of VP1 protein of bluetongue virus in insect cells by recombinant baculovirus: association of VP1 protein with RNA polymerase activity / T. Urakawa, D.G. Ritter, P. Roy // Nucleic Acids Res. - 1989. - Vol. 17. - P. 7395- 7401.

192. Vaccines against bluetongue in Europe / G. Savini, N.J. MacLachlan, J.M. Sanchez-Vizcaino, S. Zientara // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - 2008. - N. 31. - P. 101-120.

193. Van der Sluijs, M.T. Vector independent transmission of the vector-borne bluetongue virus / M.T. Van der Sluijs, A.J. de Smit, R.J. Moormann // Crit. Rev.

Microbiol. - 2014. - Vol.58. - P.65-69.

194. Van Dijk, A.A. In vitro transcription and translation of bluetongue virus mRNA / A.A. Van Dijk, H. Huismans // J. Gen. Virol. - 1988. - Vol. 69 (Pt 3). - P. 573-581.

195. Vector competence of Culicoides bolitinos and C. imicola for South African bluetongue virus serotypes 1, 3 and 4 / G.J. Venter, J.T. Paweska, A.A. Van Dijk, P.S. Mellor, W.J. Tabachnick // Med. Vet. Entomol. - 1998. - Vol. 12. - P. 378385.

196. Venter, G.J. Geographical distribution and relative abundance of stockassociated Culicoides species (Diptera: Ceratopogonidae) in southern Africa in relation to their potential as viral vectors / G.J. Venter, E.M. Nevill, T.C Van der Linde // Onderstepoort J. Vet. Res. - 1996. - Vol. 63. - P. 25-38.

197. Verwoerd, D.W. Bluetongue / D.W. Verwoerd, B.J. Erasmus // In: Infectious Diseases of Livestock, 2nd Edit., J.A. Coetzer and R.C. Tustin, Eds, Oxford Press, Cape Town. - 2004. - P. 1201-1220.

198. Wechsler, S.J. Detection of bluetongue virus by using bovine endothelial cells and embryonated chicken eggs / S.J. Wechsler, A.J. Luedke // J. Clin. Microbiol. -1991. - V.29. - N. 1. - P. 212-214.

199. Wechsler, S.J. Susceptibility of 14 cell lines to bluetongue virus infection / S.J. Wechsler, L.E. McHolland // Journal of Clinical Microbiology. - 1988. - N. 26. - P. 2324-2327.

200. Wilson, A.J. Bluetongue in Europe: past, present and future / A.J. Wilson, P.S. Mellor // Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. - 2009. - Vol. 364. - P. 26692681.

201. Wilson, A.J. Bluetongue in Europe: vectors, epidemiology and climate change / A.J. Wilson, P.S. Mellor // Parasitology Research. - 2008. - N. 103 (Suppl. 1), -P. 6977.

202. Wirblich, C. Nonstructural protein 3 of bluetongue virus assists virus release by recruiting ESCRT-I protein Tsg101 / C. Wirblich, B. Bhattacharya, P. Roy // Journal of Virology. - 2006. - N80. - P. 460-473.

203. Wittmann, E.J. Effect of temperature on the transmission of orbiviruses by the biting midge, Culicoides sonorensis / E.J. Wittmann, P.S. Mello, M. Baylis // Med. Vet. Entomol. - 2002. - Vol. 16. - P. 147--156.

204. http://oiebtnet.izs.it/oiemaps/

205. http://www.fsvps.ru/fsvps/iac/rf/reports.html

206. http://www.reoviridae.org/dsrna virus proteins/btv-serotype-distribution.htm