Дифференциация вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей на основе анализа геномов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат биологических наук Аронова, Елена Владимировна

• Аронова, Елена Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Аронова, Елена Владимировна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

1. ВВЕДЕНИЕ

1.1 Актуальность

1.2. Степень разработанности проблемы

1.3 Цели и задачи исследования

1.4 Научная новизна работы

1.5 Теоретическая и практическая значимость работы

1.6 Публикация результатов исследований

1.7 Степень достоверности и апробация работы

1.8 Соответствие содержания диссертации паспорту специальности, по которой она рекомендуется к защите

1.9 Структура и объём диссертационной работы

1.10 Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1.11 Личный вклад автора в выполнение работы

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Краткая характеристика вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки

2.1.1 Краткая характеристика вируса эпизоотической геморрагической 17 болезни оленей

2.1.2 Краткая характеристика вируса болезни Ибараки

2.2 Источники и пути передачи орбивирусных инфекций

2.3 Эпизоотическая ситуация по эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки в мире

2.3.1 Эпизоотическая ситуация по эпизоотической геморрагической болезни оленей в мире

2.3.2 Эпизоотическая ситуация по болезни Ибараки в мире

2.4 Строение вирионов вирусов эпизоотической геморрагической бо-

лезни оленей

2.4.1 Морфология и химический состав вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки

2.4.2 Строение геномов вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки

2.5 Использование полимеразной цепной реакции для обнаружения геномов вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки

2.6 Изучение нуклеотидного состава и филогенетический анализ геномов штаммов вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей

2.7 Заключение по обзору литературы

3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Материалы

3.1.1 Вирусы

3.1.2 Животные

3.1.3 Культуры клеток

3.1.4 Кровь и сыворотки

3.1.5 Плазмида и бактериальные штаммы

3.1.6 Реактивы

3.1.7 Лабораторное оборудование

3.2 Методы

3.2.1 Выделение рибонуклеиновой кислоты

3.2.2 Постановка реакции обратной транскрипции

3.2.3 Постановка полимеразной цепной реакции с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени

3.2.4 Постановка классического варианта полимеразной цепной реакции

3.2.5 Проведение электрофореза

3.2.6 Нуклеотидное секвенирование

3.2.7 Филогенетический анализ

3.2.8 Клонирование продуктов полимеразной цепной реакции

3.2.9 Искусственное заражение животных

3.2.10 Заражение эмбрионов кур

3.2.11 Исследование проб сывороток крови от заражённого пятнистого оленя в реакции нейтрализации

3.2.12 Программное обеспечение и интернет-ресурсы

3.2.13 Критерии оценки разработанных тест-систем

3.2.14 Статистическая обработка результатов исследований

3.3 Результаты собственных исследований

3.3.1 Разработка тест-системы для выявления рибонуклеиновой кислоты вируса болезни Ибараки методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени

3.3.2 Конструирование рекомбинантного контроля амплификации к тест-системе для выявления рибонуклеиновой кислоты вируса болезни Ибараки методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени

3.3.3 Разработка тест-системы для выявления геномов вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки на основе мультиплексного варианта полимеразной цепной реакции

в режиме реального времени

3.3.4 Конструирование рекомбинантного контроля амплификации комплементарной дезоксирибонуклеиновой кислоты вируса эпи-

зоотической геморрагической болезни оленей к тест-системе для выявления геномов вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки на основе мультиплексного ва-

рианта полимеразной цепной реакции в режиме реального времени

3.3.5 Экспериментальное заражение телят отечественной чёрно-пёстрой породы вирусом болезни Ибараки (штамм Susaki)

3.3.6 Экспериментальное заражение пятнистого оленя вирусом эпизоотической геморрагической болезни оленей (штамм New Jersey)

3.3.7 Секвенирование и филогенетический анализ геномов изолята Приморский-91 и штаммов вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей, депонированных в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии

3.3.8 Секвенирование и филогенетический анализ геномов штаммов вируса болезни Ибараки, депонированных в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии

4 ОБСУЖДЕНИЕ

5 ВЫВОДЫ

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

7 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

8 ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ЭГБО - эпизоотическая геморрагическая болезнь оленей ВЭГБО - вирус эпизоотической геморрагической болезни оленей БИ - болезнь Ибараки ВБИ - вирус болезни Ибараки ВБ - вирус блютанга

BA4JI - вирус африканской чумы лошадей ^ КРС - крупный рогатый скот КЭ - эмбрионы кур

СПФ-КЭ - эмбрионы кур, свободных от патогенной микрофлоры

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

РФ - Российская Федерация

США - Соединённые Штаты Америки

ВНИИВВиМ - Всероссийский Научно-Исследовательский Институт Ветеринарной Вирусологии и Микробиологии

ГНУ - государственное научное учреждение

NAQS - Северо-Австралийская карантинная стратегия (Northern Australian Quarantine Strategy)

NAMP - Национальная программа по мониторингу арбовирусов (National Arbovirus Monitoring Programm)

MKTB - Международный комитет по таксономии вирусов

МЭБ - Международное эпизоотическое бюро

IPCC - Межгосударственный комитет по изменению климата

НК - нуклеиновая кислота

РНК - рибонуклеиновая кислота

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

к-ДНК - комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота

ОРС - открытая рамка считывания

п.о. - пар оснований

ЫТЯ-область - нетранслируемая область РН - реакция нейтрализации МФА - метод флуоресцирующих антител РСК - реакция связывания комплемента ИФА - иммуноферментный анализ ПЦР - полимеразная цепная реакция

ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени С( - пороговый цикл

ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией ВНК-21/13 - перевиваемая культура клеток почки новорожденного сирийского хомячка

Ь-клетки — перевиваемая линия клеток подкожной клетчатки мыши ПС - перевиваемая линия клеток почки сайги ПСГК - перевиваемые клетки почки сибирского горного козерога ПЭАК - перевиваемая линия клеток почки эмбриона африканской козы СУ-1 — перевиваемая линия клеток почки африканской зелёной мартышки (Сегсорикесш аеМорэ)

ПТ - перевиваемая линия клеток почки телёнка ГуГОВК - перевиваемая линия клеток почки телёнка ГТЦ - гуанидин тиоцианат

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Дифференциация вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей на основе анализа геномов»

1 ВВЕДЕНИЕ

1.1 Актуальность

Наблюдаемая в последние десятилетия тенденция к расширению ареала трансмиссивных инфекций делает актуальным вопрос разработки методов диагностики возбудителей данных болезней. Сложившаяся ситуация усугубляется мировым изменением климатических условий, способствующим распространению векторов-переносчиков на новые территории и увеличению численности насекомых. Следствием этого может быть проникновение патогенов в умеренные климатические пояса обоих полушарий и рост количества вспышек в эндемических очагах [Githeko, А.К., 2000; Gould, Е.А., 2009].

В число трансмиссивных болезней входят и такие неконтагиозные вирусные болезни парнокопытных жвачных, как эпизоотическая геморрагическая болезнь оленей (ЭГБО) и болезнь Ибараки (БИ). Возбудители данных инфекций - вирус эпизоотической геморрагической болезни оленей (ВЭГБО) и вирус болезни Ибараки (ВБИ), соответственно, - относятся к роду Orbivirus семейства Reoviridae и имеют сегментированные геномы, представленные двухцепочечной рибонуклеиновой кислотой (РНК) [Сюрин, В.Н., 1998а; Сю-рин, В.Н., 19986].

Спектр животных, восприимчивых к вирусу эпизоотической геморрагической болезни оленей, достаточно широк, но на евразийском континенте вспышки данной болезни регистрировали только у крупного рогатого скота (КРС), также являющегося хозяином и для вируса болезни Ибараки [Temizel, Е.М., 2009; Yadin, Н., 2008; Omori, Т., 1970]. Причём, заражение КРС вирусами эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки вызывает развитие сходных симптомов. Это затрудняет постановку диагноза на основании общей картины течения болезни и приводит к необходимости разработки эффективных методов лабораторной диагностики возбудителей перечисленных инфекций. Аналогичными признаками при ЭГБО и БИ являются анорексия, наличие язв на морде и в ротовой полости, избыточное слюноотде-

ление, хромота, дисфагия, гиперемия, отёк конъюнктивы, нарушение репродуктивной функции Гhttp://www.cfsph. iastate.edu; Теггпге!, Е.М., 2009; Отоп, Т., 1969; ОЬаэЫ, Б., 1999].

До конца XX в. эпизоотическую геморрагическую болезнь оленей на территории нашей страны не регистрировали. Однако в 1991 г. вирус эпизоотической геморрагической болезни оленей был выделен в Приморском крае из крови пятнистого оленя [Чичикин, А.Ю., 2004]. Несмотря на отсутствие болезни Ибараки в Российской Федерации (РФ) распространённость возбудителя названной инфекции в пограничных государствах (Северная Корея, Япония) создаёт угрозу заноса вируса на территорию нашей страны.

Риск возникновения эпизоотий данных болезней в РФ возрастает и в связи с активным импортом восприимчивого к вирусам ЭГБО и БИ крупного рогатого скота, проводимым в рамках Государственной программы развития сельского хозяйства и регулирования рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия на 2013 - 2020 гг. [тсх.ш>ёосише^8/й1е с1оситеп1/8110ш/19570.77.htm]. Так, только до 2016 г. программой предусмотрен импорт племенного скота в объёме 72 тыс. голов.

Распространение ЭГБО и БИ на новые территории может привести к серьёзным экономическим последствиям в сфере животноводства. Так, страны, неблагополучные по указанным инфекциям, несут материальные потери, складывающиеся из прямых убытков от гибели животных и косвенных затрат. Последние связаны с ограничением на международную торговлю и спортивную охоту, низким приростом стада; снижением упитанности оленей и качества кожевенно-мехового и пантового сырья; снижением удоя и ухудшением качества молочной продукции, а также потерей веса у крупного рогатого скота. Только в штате Небраска (США) за лето - осень 2012 г. от эпизоотической геморрагической болезни оленей погибло около 6000 белохвостых оленей [http://www.promedmail .org/direct■php?id==20121220.1461864]. В результате эпизоотии болезни Ибараки, зарегистрированной в 1959 г. в Японии, было инфи-

цировано более 30 тыс. голов крупного рогатого скота; причём летальный исход наблюдался у 4000 животных [Reed, С., 2009].

Таким образом, перекрывающийся спектр восприимчивых животных, сходные клинические признаки протекания болезней у крупного рогатого скота, возможность заноса вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей в Российскую Федерацию из приграничных стран, а также в результате торгово-экономического сотрудничества со странами, неблагополучными по данным инфекциям, создают необходимость разработки методов идентификации и дифференциации указанных вирусов.

1.2 Степень разработанности проблемы

В Российской Федерации и за рубежом разработаны различные варианты полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющие идентифицировать рибонуклеиновую кислоту вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей, а также дифференцировать серотипы данного вируса [Снетков, К.А., 2003; Aradaib, I.E., 1994а; Harding, M.J., 1996; Aradaib, I.E., 1998; Aradaib, I.E., 2003; Wilson, W.C., 2009; Wilson, W.C., 2009a; Clavijo A., 2010; Maan, N.S., 2010]. Для обнаружения генома вируса болезни Ибараки используют классическую ПЦР (стандартную или гнездовую, с детекцией продуктов амплификации методом электрофореза или с проведением последующего анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов) [Ohashi, S., 1999; Shin, Y.-K., 2009].

Отсутствие в доступной литературе информации о разработке тест-систем на основе ПЦР с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени (ПЦР-РВ) для дифференциации вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки, а также полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, позволяющей выявлять РНК вируса болезни Ибараки, свидетельствует о необходимости и своевременности проведения исследований по их разработке.

1.3 Цели и задачи исследования

В связи с вышеизложенным, основной целью исследований являлась дифференциация возбудителей эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки на основе анализа геномов.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Разработать тест-систему для выявления рибонуклеиновой кислоты вируса болезни Ибараки методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, определить её специфичность и чувствительность.

2. Разработать тест-систему для выявления геномов вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей на основе мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, определить её специфичность и чувствительность.

3. Провести экспериментальное заражение животных, восприимчивых к вирусам эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки, с целью получения клинического материала, а также изучения характера течения инфекционного процесса у представителей отечественной фауны.

4. Определить нуклеотидные последовательности различных участков гена 810 трёх штаммов и одного изолята вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей, а также шести штаммов вируса болезни Ибараки, имеющихся в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии.

5. Провести филогенетический анализ трёх штаммов и одного изолята вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей, а также шести штаммов вируса болезни Ибараки, депонированных в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии, с целью определения степени филогенетического родства.

1.4 Научная новизна работы

Впервые разработана тест-система для выявления рибонуклеиновой кислоты вируса болезни Ибараки методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, позволяющая идентифицировать геном указанного возбудителя и обладающая аналитической чувствительностью 1,5 ^ ТЦЦ50/см3.

Впервые разработана тест-система для выявления геномов вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей на основе мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с аналитической чувствительностью 2,0 ^ ТЦДбо/см для вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей и 3,0 ^ ТЦД5о/см для вируса болезни Ибараки.

Впервые определён нуклеотидный состав фрагмента гена 810 изолята Приморский-91 вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей, выделенного на территории Российской Федерации в 1991 г., и установлена гомологичность данной последовательности с аналогичными последовательностями штаммов вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей 2 серотипа.

Определены нуклеотидные последовательности участка гена Б10 шести штаммов вируса болезни Ибараки (Бшакл (инв. № 1791а), Хпшгигш (инв. № 17916), Пэагакл (инв. № 261), В0501 (инв. № 1711), Ибараки вакцинный (инв. № 602) и Вакцина (инв. № 415)), депонированных в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии, и установлено, что геномы данных штаммов филогенетически более близки геному вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей 2 серотипа австралийского происхождения.

1.5 Теоретическая и практическая значимость работы

Разработаны «Методические положения по выявлению

рибонуклеиновой кислоты вируса болезни Ибараки методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени» и «Методические положения по

выявлению геномов вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей на основе мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени», утверждённые академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии A.M. Смирновым 30.11.2011 г. и 15.08.2013 г., соответственно.

Определены нуклеотидные последовательности участка 10 сегмента генома штаммов вируса болезни Ибараки, депонированных в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии, и фрагмента 10 сегмента генома изолята Приморский-91 вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей, выделенного на территории РФ в 1991 г.

1.6 Публикация результатов

По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах «Биотехнология», «Ветеринария» и «Российский ветеринарный журнал», включённых в перечень изданий, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.

1.7 Степень достоверности и апробация работы

Степень достоверности результатов проведённых исследований подтверждена статистическими исследованиями и комиссионными испытаниями. Акты комиссионных испытаний утверждены директором ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии 13.10.2011 г. и 05.07.2013 г. Статистическая обработка включала расчёты средних арифметических значений, стандартных отклонений результатов полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, вычисления эволюционных дистанций с помощью программы «MEGA 5.0». Научные положения, выводы и практические предложения диссертационной работы аргументировано отражают содержание диссертации.

Результаты диссертационной работы представлены и обсуждены на Международной научно-практической конференции «Задачи ветеринарной науки в реализации доктрины продовольственной безопасности Российской Федерации» (Покров, 2011 г.), а также в рамках заседания секций «Инфекци-

онная патология животных» и «Ветеринарная биотехнология» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (Москва, 2011 и 2013 гг.).

1.8 Соответствие содержания диссертации паспорту специальности, по которой она рекомендуется к защите

В соответствии с формулой специальности 03.02.02 Вирусология, охватывающей проблемы исследования вирусов, генетики, биохимических и моле-кулярно-генетических аспектов, разработки мер диагностики вызываемых вирусами заболеваний, включая области исследований: проблемы генетики вирусов, структурной организации генома вирусов, проблемы генной инженерии, разработки мер диагностики вирусных заболеваний, совершенствование лабораторных диагностических систем, в диссертационной работе описано проведение исследований по созданию тест-систем на основе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, использование которых позволяет идентифицировать рибонуклеиновую кислоту вируса болезни Ибараки и дифференцировать вирусы эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки. Также представлены результаты разработки рекомбинант-ных конструкций на основе плазмидного вектора, применяемых в качестве положительных контролей амплификации в данных тест-системах. Проведено секвенирование участка 10 сегмента генома штаммов вируса болезни Ибараки, депонированных в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии. Определён нуклеотидный состав фрагмента 10 сегмента генома изолята Приморский-91 вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей, выделенного на территории Российской Федерации, и штаммов вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей, депонированных в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии. Проведён филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей, полученных в данной работе, а также последовательностей штаммов вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей, взятых из базы данных ОепВапк.

Результаты научного исследования соответствуют пунктам паспорта специальности 4, 5, 10.

1.9 Структура и объём диссертационной работы

Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения, список использованной литературы, включающий 19 отечественных источников и 152 иностранных источника; дополнена приложениями. Диссертация содержит 12 таблиц и 26 рисунков. В приложении представлены документы, подтверждающие достоверность результатов работы, её научную и практическую значимость.

1.10 Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Тест-система для выявления рибонуклеиновой кислоты вируса болезни Ибараки методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени позволяет идентифицировать геном указанного вируса и обладает

л

аналитической чувствительностью 1,5 ^ ТЦД5о/см .

2. Тест-система для выявления геномов вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей на основе мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени позволяет дифференцировать данные вирусы и обладает аналитической чувствительностью 2,0 ^ ТЦД50/см для вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей и 3,0 ^ ТЦД50/см3 для вируса болезни Ибараки.

3. Экспериментальное заражение телят отечественной чёрно-пёстрой породы и пятнистого оленя вирусами болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей, соответственно, вызывает бессимптомное течение болезни.

4. В результате определения нуклеотидных последовательностей участка 10 сегмента генома и филогенетического анализа выявлено

филогенетическое родство изолята Приморский-91 и штаммов вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей 2 серотипа, депонированных в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии (New Jersey, Alberta, А496).

5. В результате определения нуклеотидных последовательностей фрагмента 10 сегмента генома и филогенетического анализа установлено филогенетическое родство штаммов вируса болезни Ибараки, депонированных в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии (Susaki (инв. № 1791а), Imaizumi (инв. № 17916), Ibaraki (инв. № 261), В0501 (инв. № 1711), Ибараки вакцинный (инв. № 602) и Вакцина (инв. № 415)), и вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей 2 серотипа австралийского происхождения.

1.11 Личный вклад автора в выполнение работы

Основной объём исследований проведён автором самостоятельно. Консультативную и методическую помощь при выполнении отдельных этапов работы оказывали следующие сотрудники института: к.б.н., ст.н.с. лаб. Биофизики И.М. Калабеков (освоение компьютерных программ, используемых для анализа нуклеотидных последовательностей); к.в.н., н.с. лаб. Биофизики А.Ю. Чичикин (эксперименты по заражению животных); к.б.н., н.с. лаб. Молекулярной вирусологии Г.С. Бурмакина (освоение молекулярно-биологических методов исследования); научный сотрудник НЭО Н.В. Малоголовкина (освоение вирусологических и серологических методов исследования). Патоморфо-логические исследования проведены совместно с сотрудниками ФГОУВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия им. Д.К. Беляева» д.б.н., зав. кафедрой нормальной патологической анатомии и ветсанэкс-пертизы В. В. Прониным и к.в.н., доцентом Г.В. Корневой.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Краткая характеристика вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки

2.1.1 Краткая характеристика вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей

Эпизоотическая геморрагическая болезнь оленей — неконтагиозная трансмиссивная вирусная болезнь копытных жвачных, характеризующаяся сильным угнетением, лихорадкой и общим геморрагическим диатезом с отёком подкожных тканей [Сюрин, В.Н., 1998а].

Спектр восприимчивых к ВЭГБО животных. Наиболее восприимчивыми к данному вирусу животными являются белохвостый олень (Odocoileus virginianus) и вилорогая антилопа (Antilocapra americana), у которых болезнь обычно протекает в виде сверхострой инфекции с летальностью 90 % [Shope, R.E., 1960; Karstad, L., 1961; Brannian, R.E., 1983; Nettles, V.F., 1992a; Dubay, S.A., 2006b]. Однако вирус эпизоотической геморрагической болезни оленей обладает патогенностью и для других представителей дикой фауны, а именно для чернохвостого оленя (Odocoileus hemionus) [Chomel, В.В., 1994; Noon, Т.Н., 2002b; Dubay, S.A., 2004; Dubay, S.A., 2006a], снежного барана (Ovis canadensis) [Noon, Т.Н., 2002а]. Антитела к ВЭГБО были обнаружены в сыворотках крови аравийского орикса (Oryx leucoryx) [Frolich, К., 2005], серого ма-замы (Mazama gouazoubira) [Deem, S.L., 2004], барибала ([Ursus americanus flo-ridanus) [Dunbar, M.R., 1998], чёрного носорога {Diceros bicornis) и белого носорога {Ceratotherium simum) [Fischer-Tenhagen, C., 2000]. При изучении восприимчивости к ВЭГБО европейских видов копытных Е.Р. Gibbs и M.J.P. Lawman зарегистрировали виремию у благородного оленя (Cervus elaphus), лани (Dama dama), европейской косули {Capreolus capreolus), овец породы Suffolk cross, крупного рогатого скота голштино-фризской и джерсейской пород [Gibbs, Е.Р., 1977]. Однако в результате исследования проб крови от благородных оленей, косуль и ланей, проведённого в шести национальных парках

Германии в период с 2000 по 2002 гг., не удалось обнаружить антитела к ВЭГБО [Frölich, К., 2006]. Восприимчивость к ВЭГБО благородного оленя, обитающего также на территории Российской Федерации, была подтверждена и в результате экспериментального заражения данного вида животных 1 и 2 серотипами ВЭГБО [Луницин, A.B., 1992; Чичикин, А.Ю., 2002]. У крупного рогатого скота, овец и коз ЭГБО протекает субклинически, с незначительными симптомами [Gibbs, Е.Р., 1977; Tomori, О., 1980; Aradaib, I.E.,1994].

Основная информация о восприимчивых к ВЭГБО животных представлена в таблице 1.

Таблица 1 - Виды животных, восприимчивых к ВЭГБО

[http ://www. efsa. europa. ей/fr/efsaj ournal/doc/1418. pd f]

Название вида / название семейства Ареал вида Тип инфицирования Наличие (+) / отсутствие (-) клинических признаков Источник информации

Белохвостый олень (Ойосойет у^гтапш) / сем. Оленевые Северная Америка, Южная Америка, Новая Зеландия, Чехия, страны Скандинавии естеств. естеств. естеств. + + + Gaydos et al., 2004 Murphy et al., 2006 Allison et al., 2009

Чернохвостый олень (ОйосоИет кетюпт) / сем. Оленевые Северная Америка естеств. естеств. + + Dubay et al., 2004 Noon et al., 2002b

Благородный олень {Сегчт е1аркш) / сем. Оленевые Северная Америка, Австралия, Новая Зеландия, Южная Скандинавия, Западная Европа, Юго-восточный Китай, Монголия, Россия (Липецкая, Воронежская области, Сихотэ-Алинь, Саяны) эксперим. эксперим эксперим + + Gibbs et al., 1977 Луницин, A.B., 1992 Чичикин, А.Ю., 2002

Серый мазама (Магата gouazoubira) / сем. Оленевые Южная Америка естеств. неизвестно Deem et al., 2004

Продолжение таблицы 1

Название вида / название семейства Ареал вида Тип инфицирования Наличие (+) / отсутствие (-) клинических признаков Источник информации

Пятнистый олень (Cervus nipporí) / сем. Оленевые Северо-восточный Китай, о. Тайвань, Корея, Япония, Вьетнам, Россия (Приморский край, Кавказ) естеств. неизвестно Чичикин, А.Ю., 2002

Лань (Dama dama) / сем. Оленевые Европа, Ближний Восток эксперим. Gibbsetal., 1977

Европейская косуля (Capreolus capreolus) / сем. Оленевые Европа, Ближний Восток, Россия (Кавказ, Московская, Воронежская области) эксперим. Gibbsetal., 1977

Вилорогая антилопа (Antilocapra americana) / сем. Вилороговые Северная Америка естеств. естеств. неизвестно неизвестно Dubay et al., 2006a Dunbar et al., 1999

Снежный баран (Ovis canadensis) / сем. Полорогие Северная Америка, Россия (Прибайкалье, Сибирь, Камчатка, Дальний Восток) естеств. + Noon et al., 2002a

Аравийский орикс(Огух leucoryx) / сем. Полорогие Западная Азия естеств. Frolich et al., 2005

Горный козёл ('Capra hircus) / сем. Полорогие Европа, Северная Африка, Средняя и Южная Азия естеств. Al-Busaidy et al., 1991

Дикий бык (Bos taurus), подвид Домашний бык (Bos taurus taurus) / сем. Полорогие Повсеместно естеств. естеств. естеств. естеств. естеств. естеств. естеств. естеств. i i i + +11 + House et al., 1998 Pasick et al., 2001 Dulacetal., 1989 Temizel et al., 2009 Yadin et al., 2008 Sendow et al., 1991 Gard et al., 1992 Weir et al., 1997

Домашняя овца (Ovis aries) / сем. Полорогие Повсеместно эксперим. эксперим. - Gibbs et al., 1977 Tomori, O., 1980

Продолжение таблицы 1

Название вида / название семейства Ареал вида Тип инфицирования Наличие (+) / отсутствие (-) клинических признаков Источник информации

Барибал, или чёрный медведь (иг$т атепсапт Аопс1апш) / сем. Медвежьи Северная Америка естеств. Dunbar etal., 1998

Белый носорог (>СегаШЪепит этит) / сем. Но-сороговые Южная Африка естеств. Fischer-Tenhagen et al., 2000

Чёрный носорог {Э1сегон ЫсотЫ) / сем. Носорого-вые Центральная, Восточная и Южная Африка естеств. Fischer-Tenhagen et al., 2000

Таким образом, к ВЭГБО восприимчив широкий круг диких и домаш-

них жвачных. Однако патогенность вируса подтверждена только для белохвостого и чернохвостого оленей, вилорогой антилопы, снежного барана, КРС и овец. О восприимчивости других видов имеются единичные сообщения, поэтому требуется дальнейшее изучение данного вопроса.

Клинические признаки ЭГБО и регистрируемые патологоанатомиче-ские изменения. ЭГБО у белохвостых оленей может протекать в 3 формах: сверхострой, острой (классической) и хронической (бессимптомной) [http://www.efsa.europa.eu/fr/efsaiournal/doc/1418.pdf; http•.//www.cfsph. 1аБ-tate.edu]. Сверхострая форма сопровождается лихорадкой, отсутствием или снижением аппетита, слабостью, нарушением дыхания и развитием отёков в области головы и шеи; также наблюдается опухание языка и конъюнктивит. Олени со сверхострой формой болезни, как правило, быстро умирают (в течение 8-36 часов), иногда без развития клинических признаков. У животных с острой (или классической) формой болезни выше перечисленные симптомы сопровождаются появлением кровоизлияний на кожном покрове, а также во многих тканях и органах, включая сердце и желудочно-кишечный тракт (ЖКТ). Кроме того, часто наблюдается гиперемия конъюнктивы и слизистой

оболочки ротовой полости, избыточное слюноотделение и выделения из носа иногда с кровью. У животных с острой формой болезни могут развиваться язвы на языке, нёбе. При сверхострой и острой формах ЭГБО уровень смертности, как правило, высок. Хроническая форма болезни сопровождается общим недомоганием в течение нескольких недель, заканчивающимся постепенным выздоровлением. После выздоровления в связи с задержкой развития на копытах появляются кольца, трещины или струпья и может наблюдаться хромота, вследствие чего животное опирается на коленные суставы или на грудную клетку. К гистопатологическим изменениям, регистрируемым при ЭГБО, относятся васкулиты; тромбозы; отёчность эндотелия; кровоизлияния, дегенеративные изменения, некрозы во многих тканях и органах, особенно на эпителии языка, в слюнных железах, аорте и сосочковых мышцах левого желудочка [http://www.cfsph.iastate.edu; Maclachlan, N.J., 2004]. При острой и хронической формах течения ЭГБО у белохвостых оленей также могут развиваться язвы, шрамы или эрозии на рубце и сычуге; причём, обширные поражения внутренней оболочки данных отделов желудка могут быть причиной кахексии при отсутствии дефицита корма.

С целью изучения восприимчивости к ВЭГБО благородного оленя и

клинической картины течения болезни у данного вида A.B. Лунициным со_ __г

вместно с сотрудниками ВНИИВВиМ было проведено экспериментальное заражение животных путём введения суспензии мозгового материала, либо частично очищенного вируса, размноженного в перевиваемой культуре клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК). При инокуляции вируссодержа-щей суспензии из мозга мышей-сосунков отмечали следующие клинические признаки болезни: повышение температуры до 41,0° С, гиперемию и набухание слизистых оболочек ротовой и носовой полостей, отказ от корма, угнетение, плохую свёртываемость крови, гиперемию и кровоизлияния на конъюнктиве. Заражение животных частично очищенным вирусом не привело к развитию каких-либо симптомов [Луницин, A.B., 1993]. Аналогичную картину на-

блюдали при экспериментальном воспроизведении ЭГБО на 4 благородных оленях путём введения суспензии мозгового материала, содержащей ВЭГБО 1, либо 2 серотипов. В ходе исследования наблюдали повышение температуры тела до 41,1° С (6, 12 сутки после заражения); появление отдышки; гиперемию и набухание слизистых оболочек носовой и ротовой полостей, гиперемию конъюнктивы; отсутствие аппетита; угнетение; плохую свёртываемость крови. Отмечали поражение кожи в виде синюшных пятен и алопеций в области холки и крестца, на месте которых затем развивались эрозии. Кроме того, регистрировали бурсит локтевых суставов. На основании наблюдаемых симптомов был сделан вывод о развитии у заражённых животных острой формы течения болезни [Чичикин, А.Ю., 2002].

К типичным симптомам ЭГБО у КРС относятся лихорадка, наличие язв в ротовой полости, избыточное слюноотделение, хромота, потеря веса. У стельных коров происходит резорбирование плодов или развитие у последних гидроэнцефалии, если корова была инфицирована в сроки до 70-120 дня стельности [http://www.cfsph. iastate.edu].Уровень заболеваемости для КРС при ЭГБО варьирует в пределах от 1 до 18 %, а показатели смертности обычно находятся ещё ниже rhttp://www.efsa.europa.eu/fr/efsaiournal/doc/1418.pdf1. На данный момент установлено, что только представители 2 (вирус болезни Иба-раки), 6 и 7 серотипов ВЭГБО способны вызывать инфекцию с клиническими признаками болезни у КРС [efsa.europa.eu>de/scdocs/doc/20e.pdf.]. Клиническая картина, характерная для ЭГБО, как правило, не воспроизводится у экспериментально зараженного КРС; хотя у животных регистрируется виремия и в некоторых случаях могут отмечаться очень незначительные или слабые проявления симптомов болезни. Так, экспериментальное заражение КРС североамериканскими штаммами ВЭГБО не привело к развитию симптомов болезни [Abdy, MJ.,1999; Aradaib, I.E.1994а]; однако, С. House et al. наблюдали появление везикулярных поражений у КРС, серопозитивного по ВЭГБО-2 [House, С., 1998].

При аутопсии снежного барана Т.Н. Noon et al. зарегистрировали подкожный отёк, наличие жидкости жёлтого цвета в грудной клетке и околосердечной сумке, зеленоватые выделения из носа, кровь вокруг ануса. Также сообщалось о множественных кровоизлияниях на эпикарде и сосочковой мышце левого желудочка сердца, бляшках серого цвета на оболочке желчного пузыря. Кровоизлияния были обнаружены и на конъюнктиве, серозной оболочке рубца и кишечника [Noon, Т.Н., 2002а].

Овцы также чувствительны к инфекции и у них обнаружена виремия, хотя болезнь протекает субклинически [Tomori, О., 1980; Gibbs, Е.Р., 1977; Thompson, L.H., 1988].

Роль коз как хозяев для ВЭГБО окончательно не доказана. Однако с помощью метода иммунодиффузии в агарозном геле у коз, обитающих на территориях распространения ВЭГБО, были обнаружены антитела к данному вирусу и, возможно, у них развивается очень низкий уровень виремии [А1-Busaidy, S.M., 1991]. При исследовании сывороток от коз в Индонезии только у одной из 88 животных в реакции нейтрализации были выявлены антитела к ВЭГБО 5 серотипа. Таким образом, требуется дополнительное изучение роли коз как возможных хозяев для ВЭГБО.

Установлено, что свиньи не чувствительны к ВЭГБО [Gibbs, Е.Р., 1977] и недостаточно данных о чувствительности собак. Серологическое обследование, проведённое на территориях обитания белохвостых оленей, показало отсутствие серопозитивных по ВЭГБО собак, хотя для вируса блютанга (ВБ) случаи серопозитивности собак были доказаны [Howerth, E.W., 1995].

Следует отметить, что характер течения ЭГБО у животных, относящихся к одному виду, может варьировать в зависимости от возраста особи, генетических особенностей конкретного животного, ареала популяции. Так, в результате исследования восприимчивости к ВЭГБО разных возрастных групп белохвостых оленей было установлено, что наиболее восприимчивыми к данному вирусу являются особи в возрасте от 10 недель до 2 лет [Чичикин, А.Ю.,

2002]. В 2002 г. J.K. Gaydos et al. при экспериментальном заражении белохвостых оленей, обитавших на разных территориях, установили взаимосвязь между чувствительностью животных и местом обитания. В ходе исследования у особей из Техаса наблюдали слабое проявление симптомов болезни, тогда как белохвостые олени из Пенсильвании пали после инфицирования [Gaydos, J.К., 2002]. Высокий уровень восприимчивости к ВЭГБО регистрировали и у чернохвостых оленей, обитающих на территории Kaibab (Северная Аризона), свободной от ЭГБО. Популяции чернохвостых оленей развивались здесь без воздействия ВЭГБО и, поэтому, животные являются более чувствительными к вирусу [Dubay, S.A., 2006а].

Таким образом, ЭГБО характеризуется разнообразием форм протекания. Причём, наблюдаемые клинические признаки напоминают блютанг и болезнь Ибараки, что затрудняет постановку диагноза на основании симптомов болезни. Кроме того, сложностью диагностики является и возможное протекание ЭГБО и блютанга как смешанной инфекции. Поэтому при постановке диагноза следует опираться не только на клиническую картину, но и на результаты серологических и молекулярно-биологических исследований.

Серотипы ВЭГБО. С.Н. Campbell и T.D. George опираясь на данные, полученные в результате серологических исследований, установили наличие 8 серотипов ВЭГБО (таблица 2) [Campbell, С.Н., 1986]. В текущем восьмом отчёте Международного комитета по таксономии вирусов (МКТВ) также сообщалось о делении ВЭГБО на 8 серотипов [Mertens, Р.Р.С., 2005]. Однако в последующие годы было доказано, что 3 серотип ВЭГБО (Ib Ar 22619) следует объединить вместе с 1 серотипом в один серотип ВЭГБО-1 [Anthony, S.J., 2009а; Anthony, S.J., 2009b] и, таким образом, количество серотипов ВЭГБО составило семь.

Таблица 2 - Серотипы ВЭГБО [Campbell, С. Н., 1986]

Серотип ВЭГБО Прототип Референс-штамм

1 New Jersey (США) USA1955/01

2 Alberta (Канада), Ibaraki (Япония), CSIRO 439 (Австралия) CAN1962/01 JAP1959/01 (ВБИ)

3 lb Аг 22619 (Нигерия) NIG1967/01

4 lb Аг 33853 (Нигерия) NIG1968/01

5 CSIRO 157 (Австралия) AUS1977/01

6 CSIRO 753 (Австралия) AUS198I/07

7 CSIRO 775 (Австралия) AUS1981/06

8 DPP 59 (Австралия) AUS1982/06

Примечание: в настоящий момент 3 серотип ВЭГБО объединён с 1 серотипом.

Подобная генетическая вариабельность и наличие сегментированного генома создают предпосылки для возможной реассортации сегментами генома между штаммами, относящимися к различным серотипам ВЭГБО, и возникновению новых вариантов вируса. Следует также отметить, что в результате серологических исследований ко второму серотипу ВЭГБО наряду со штаммом Alberta был отнесён вирус болезни Ибараки, который также является объектом нашего исследования [Sugiyama, М., 1989; Ohashi, S., 1999; Ohashi, S., 2002; Iwata, H., 2001; Uchinuno, У., 2003; Малоголовкин, С.А., 1996; Луницин, A.B., 1995].

2.1.2 Краткая характеристика вируса болезни Ибараки

Вирус болезни Ибараки вызывает остропротекающую трансмиссивную болезнь КРС, характеризующуюся лихорадкой, анорексией, язвенным поражением ротовой полости и нарушением глотательного рефлекса. Кроме того, доказана слабая патогенность указанного вируса для овец.

Летальность у КРС при данном заболевании варьирует в пределах 510%, а при развитии такого симптома болезни, как затруднённое глотание, 3040% животных погибают или подвергаются вынужденному убою. Нарушение глотания возникает у животных в связи с поражением поперечнополосатой мускулатуры глотки, гортани, пищевода и языка. Это приводит к обезвоживанию, истощению организма и развитию аспирационной пневмонии. В ротовой

полости, на губах, вокруг венчика копыт могут появляться кровоизлияния, эрозии, язвы. Животные становятся малоподвижными, хромают, местами на коже появляются уплотнения и развиваются подкожные отёки [Ошоп, Т., 1969; Ошоп, Т., 1970; Архипов, Н.И., 1987; Сюрин, В.Н., 19986].

Во время эпизоотии 1997 года, охватившей западную Японию, наряду с типичными признаками болезни были отмечены многочисленные аборты и мертворождение у клинически здорового КРС [ОИазЫ, 8., 1999].

2.2 Источники и пути передачи орбивирусных инфекций ВЭГБО и ВБИ передаются между чувствительными животными через укусы насекомых, что определяет сезонный характер эпизоотий (конец лета -осень). Основными переносчиками данных вирусов являются мокрецы из рода СиИсо1с1е8. Причём, видовой состав мокрецов отличается на разных территориях: главным вектором в Южной Африке являются виды комплекса С. ¡тгсо-1а, в Австралии - С. бгеуйаг.^, в Северной Америке — С. яопогетгя (рисунок

1) [\№оп, 1991].

С зопогепзк С /оЬй'е

«с ~

С 1т1со1а и С С*135С>1&1и5 С ■ С ¡Их Т/С I С ¡ГНИИ

С 1т1со1а и С ЬокЬпов С БсЬиШе: и возможно ар

Рисунок 1 - Ареал векторов, участвующих в передаче вирусов серо-группы ЭГБО ^Ба.еигора.ешёе/зсёосз/ёос^Ое.рс!:!]

Следует отметить, что в распространении вирусов могут участвовать и новые виды Culicoides, ранее не рассматриваемые как векторы. Подобная ситуация, скорее всего, стала причиной расширения ареала ВБ в Европе от южных границ к северо-западным. Одной из возможных причин миграции ВБ считается появление новых чувствительных видов насекомых-переносчиков: С. scoticus, С. pulicaris и видов комплекса С. obsoletus в северных странах Евросоюза.

На территории РФ виды мокрецов, относящихся к роду Culicoides, распространены во всех ландшафтно-географических зонах, кроме типичной тундры [Гуцевич, A.B., 1973; Мирзаева, А.Г., 1984]. Для ряда данных видов доказана способность переносить вирусы серогруппы ЭГБО между восприимчивыми животными, в том числе для: С. obsoletus, С. schultzei, С. pulicaris [Mullen, G.R., 1985; Lee, V.H., 1979; Yanase, Т., 2005]. Следовательно, на территории России существуют потенциальные векторы ВЭГБО и ВБИ, что в совокупности с другими факторами (наличие чувствительных жвачных, оптимальные климатические условия) создаёт предпосылки для заноса и распространения указанных вирусов в РФ.

Наличие вируса на конкретной территории определяется также и климатическими условиями, от которых зависит возможность обитания мокрецов в данной области и их численность [Gould, Е.А., 2009]. Значение температуры определяет общую продолжительность жизненного цикла Culicoides и его отдельных стадий, количество гонотрофических циклов за один сезон, ареал мокрецов, продолжительность внешнего инкубационного периода [Гуцевич, A.B., 1973; Wittmann, E.J., 2002].

По предварительному прогнозу, составленному Межгосударственным комитетом по изменению климата (IPCC), к 2100 г. ожидается повышение средней температуры на Земле на 1,0-3,5° С, в результате чего инфекционные заболевания, распространение которых связано с участием векторов-переносчиков, могут проникнуть в умеренные климатические пояса обоих по-

лушарий и усилиться в эндемических очагах [Githeko, А.К., 2000]. Так, потепление климата рассматривается как вторая возможная причина распространения близкородственного ВБ из южной Европы к её северо-западным границам в 2006-2007 гг. [Gould, Е.А., 2009].

Кроме того, имеется сообщение об обнаружении ВЭГБО 1 серотипа в фекалиях и смывах с ротовой полости белохвостого оленя [Gaydos, J.K., 2002а], но эпидемиологическая роль данного пути передачи инфекции скорее всего незначительна.

Е.Р. Gibbs и M.J.P. Lawman выделили ВЭГБО из мазка с половых органов оягнившейся овцы [Gibbs, Е.Р., 1977]. Трансплацентарная передача ВБИ была доказана при его обнаружении во внутренних органах абортированных плодов [Ohashi, S., 1999].

Хотя сообщалось о выделении ВБ из спермы [Howard, Т. , 1985], экспериментальное заражение овцы путём введения спермы барана, инфицированного ВЭГБО-2, -5 и -7, не привело к развитию болезни [Gard, G.P., 1989].

2.3 Эпизоотическая ситуация по эпизоотической геморрагической болезни оленей и болезни Ибараки в мире

2.3.1 Эпизоотическая ситуация по эпизоотической геморрагической болезни оленей в мире

Эпизоотическая геморрагическая болезнь оленей распространена в Северной Америке, Австралии, Азии, Африке, странах Средиземноморского бассейна, таких как: Марокко, Алжир, Тунис, Израиль и Турция (рисунок 2). С 2008 г. ЭГБО включена в Статью 1.2.3 списка болезней Международного эпизоотического бюро (МЭБ) как эмерджентная болезнь из-за частоты сообщений из стран, ранее свободных от данной инфекции.

fl

-ч

>i

Серотзот ВЭГБО 1 ВЭГБО 1 2 ВЭГБО 1 2 6 [___ ВЭГБО 12.5! 21 ВЭГБО 2 ВЭГБО 2.6 ГП ВЭГБО 3 4 ВЭГБО 4 « ВЭГБО 5 ВЭГБО 6 ВЭГБО ^ есть ттоатренн»

V• л

Т> J

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Аронова, Елена Владимировна

5 ВЫВОДЫ

1. Разработана специфичная тест-система для выявления рибонуклеиновой кислоты вируса болезни Ибараки методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, позволяющая идентифицировать геном указанного вируса и обладающая аналитической чувствительностью 1,5 Ig ТЦДзо/см3.

2. Разработана специфичная тест-система для выявления рибонуклеиновых кислот вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей на основе мультиплексного варианта полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, позволяющая дифференцировать друг от друга геномы указанных вирусов с аналитической чувствительностью 2,0 lg ТЦДзо/см3 для ВЭГБО и 3,0 lg ТЦД50/см3 для ВБИ.

3. Экспериментальное заражение телят отечественной чёрно-пёстрой породы вирусом болезни Ибараки (штамм Susaki) вызывает бессимптомное течение болезни, о чём свидетельствует выделение вируса на эмбрионах кур и выявление специфичного фрагмента генома с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени при отсутствии клинических признаков.

4. При экспериментальном заражении пятнистого оленя вирусом эпизоотической геморрагической болезни оленей (штамм New Jersey) наблюдали скрытую (бессимптомную) форму течения болезни, о чём свидетельствует наличие патоморфологических изменений в тканях и органах, а также обнаружение специфичного фрагмента генома в пробах крови, отобранных на разные сутки после инфицирования, при отсутствии клинической картины.

5. Данные нуклеотидного секвенирования фрагмента гена S10 изоля-та Приморский-91 вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей, выделенного на территории Российской Федерации в 1991 г., и проведённого на его основе филогенетического анализа соответствуют результатам реакции нейтрализации, позволившим отнести его ко 2 серотипу вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей.

6. На основании данных нуклеотидного секвенирования участка гена S10 шести штаммов вируса болезни Ибараки ((Susaki (инв. № 1791 a), Imaizumi (инв. № 17916), Ibaraki (инв. № 261), В0501 (инв. № 1711), Ибараки вакцинный (инв. № 602) и Вакцина (инв. № 415)), депонированных в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии, и филогенетического анализа установлена гомология геномов данных штаммов с геномом вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей 2 серотипа австралийского происхождения.

4 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Специфичные оригинальные олигонуклеотидные праймеры и зонды предлагаются для использования в целях идентификации рибонуклеиновой кислоты вируса болезни Ибараки и дифференциации геномов вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей, а также для изучения генетической изменчивости последовательности 10 сегмента генома штаммов и изолятов вируса болезни Ибараки.

Разработанная методика выявления рибонуклеиновой кислоты вируса болезни Ибараки методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени рекомендуется для обнаружения генома данного вируса с аналитической чувствительностью 1,5 lg ТЦД5о/см .

Разработанная методика выявления геномов вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей на основе мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени рекомендуется для дифференциации указанных вирусов с аналитической чувствительностью 2,0 lg ТЦД50/см для вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей и 3,0 lg ТЦД50/СМ для вируса болезни Ибараки.

В качестве руководства по применению разработанных тест-систем предлагаются «Методические положения по выявлению рибонуклеиновой кислоты вируса болезни Ибараки методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени» и «Методические положения по выявлению геномов вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей на основе мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени», утверждённые академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии A.M. Смирновым 30.11.2011 г. и 15.08.2013 г., соответственно.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Аронова, Елена Владимировна, 2013 год

7 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Архипов, Н.И. Патологоанатомическая диагностика болезней КРС / Н.И. Архипов, В.М. Апатенко, A.B. Акулов. - М.: Агропромиздат, 1987. - С. 180-182.

2. Биоценотические связи и черты адаптации кровососущих двукрылых в тундрах Ямала / А.Г. Мирзаева, J1.B. Петрожицкая, Н.П. Глущенко, Л.П. Кухарчук // Двукрылые фауны СССР и их роль в экосистемах. - Л.: ЗИН АН СССР, 1984. - С.76-78.

3. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв, Н.В. Фомина. - М.: ВНИТИБП, 1998а. - С. 39-41.

4. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв, Н.В. Фомина, H.B. -М.: ВНИТИБП, 19986. - С. 41-43.

5. Воспроизведение ЭГБО на благородных оленях / A.B. Луницин, А.Ю. Чичикин, A.A. Стрижаков, И.Ф. Вишняков, А.Л. Семенихин // Вопросы вет. вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: материалы научной конференции / ВНИИВВиМ. - Покров, 1992. - Ч. 2. - С. 254.

6. Выделение вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей / А.Ю. Чичикин, A.A. Стрижаков, С.Ж. Цыбанов, A.B. Луницин, Ю.О. Селянинов, К.А. Снетков, В.В. Кормилицина // Ветеринария. - 2004. - № 9.-С. 22-25.

7. Государственная программа развития сельского хозяйства и регулирования рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия на 2013-2020 годы / Министерство сельского хозяйства Российской Федерации [Электронный ресурс]. - Режим доступа: mcx.ru>documents/file_document/show/19570.77.htm. - Загл. с экрана.

8. Гуцевич, A.B. Фауна СССР: насекомые двукрылые. Т. 3, вып. 5. Кровососущие мокрецы (Ceratopogonidae) / A.B. Гуцевич. - Л.: Наука, 1973. -270 с.

9. Изучение антигенного родства вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей с помощью моноклональных антител / С.А. Малоголовкин, М.Б. Новикова, A.B. Луницин, И.Ф. Вишняков // Состояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней с/х животных и птиц: материалы научной конференции Краснодарской НИВС. - Краснодар, 1996. - Ч. 1. — С. 72-73.

10. Луницин, A.B. Изучение степени антигенного родства между вирусами эпизоотической геморрагической болезни оленей, блютанга и болезни Ибараки / A.B. Луницин, М.Б. Новикова, И.Ф. Вишняков // Вирусные болезни с/х животных: тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции / ВНИИЗЖ. - Владимир, 1995. - С. 199.

11. Луницин, A.B. Разработка средств и методов лабораторной диагностики эпизоотической геморрагической болезни оленей : дис. ... канд. вет. наук : 16.00.03 / Луницин Андрей Владимирович. - Покров, 1993. - 144 с.

12. Обзор мировой ситуации по вирусу ЭГБО и оценка эпизоотологического риска на территории Российской Федерации / К.А. Снетков, A.B. Книзе, А.Ю. Чичикин, Е.В. Аронова, A.B. Луницин // Задачи ветеринарной науки в реализации доктрины продовольственной безопасности Российской Федерации: материалы Международной научно-практической конференции / ВНИИВВиМ. - Покров, 2011. - С. 57-65.

13. Получение моноклональных антител и их использование для выявления антител, специфичных к вирусу болезни Ибараки / М.Б. Новикова, С.А. Малоголовкин, A.A. Черных, И.Ф. Вишняков // Институт эксперим. клин.вет. мед. // Информ. бюл. - Харьков, 1995. - С. 56.

14. Руководство по лабораторной диагностике вирусных болезней животных / под общ. ред. A.M. Смирнова, А .Я. Самуйленко, И.М. Донник, Я.Б. Бейкина. - М.: РАСХН, 2008. - С. 253-256.

15. Снетков, К. А. Идентификация возбудителей блютанга и эпизоотической геморрагической болезни оленей с помощью полимеразной цепной реакции : дис. ... канд. биол. наук : 03.00.06 / Снетков Константин Анатольевич. - Покров, 2003. - 116 с. 4

16. Черно-пестрая [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://meatinfo.ru/info. - Загл. с экрана.

17. Чичикин, А.Ю. Степень напряжённости предпосылок возникновения эпизоотической геморрагической болезни оленей у северного оленя в Якутии / А.Ю. Чичикин, А.А. Стрижаков, К.А. Снетков // Роль аграрной науки в развитии с/х науки Крайнего Севера: материалы научно- практической конференции. - Якутск, 2007. - С. 274-277.

18. Характеристика моноклональных антител к вирусам ЭГБО и БИ / С.А. Малоголовкин, А.В. Луницин, М.Б. Новикова, И.Ф. Вишняков // Вестник Российской академии с/х наук. - 1996. - № 1. - С. 56-59.

19. Чичикин, А.Ю. Эпизоотическая геморрагическая болезнь оленей: эпизоотология и меры борьбы : дис. ... канд. вет. наук : 16.00.03 / Чичикин Алексей Юрьевич. - Покров, 2002. - 99 с.

20. Abdy, M.J. Experimental infection of calves with epizootic haemorrhagic disease virus / M.J. Abdy, E.E. Howerth, D.E. Stallknecht // American J. of Vet. Res. - 1999. - vol. 60. - P. 621-626.

21. Al-Busaidy, S.M. Epidemiology of bluetongue and related orbiviruses in the Sultanate of Oman / S.M. Al-Busaidy, P.S. Mellor // Epidemiology and Infection. - 1991. - vol. 106.-P. 167-178.

22. A multiplex real-time reverse transcription polymerase chain reaction assay for detection and differentiation of Bluetongue virus and Epizootic hemorrhagic disease virus serogroups / W.C. Wilson, B.J. Hindson, E.S. О Hearn, S. Hall, C. Tellgren-Roth, C. Torres, P. Naraghi-Arani, J.O. Mecham, R.J. Len-hoff// J. Vet. Diagn. Invest. - 2009. - vol. 21. - P. 760-770.

23. Analysis of guanylyltransferase and transmethylase activities associated with bluetongue virus cores and recombinant baculovirus-expressed core-like particles / P.P.C. Mertens, J.N. Burroughs, A.M. Wade-Evans, H. le Blois, S. Oldfield, A. Basak, P. Loudon, P. Roy // Bluetongue, African Horse Sickness and related orbiviruses / T.E. Walton, B.I. Osburn // Proceedings of the Second International Symposium. - Paris, 1992. - P. 404-415.

24. Analysis of intratypic variation evident in an Ibaraki virus strain and its epizootic hemorrhagic disease virus serogroup / S. Ohashi, K. Yoshida, T. Ya-nase, T. Tsuda // J. Clin. Microbiol. - 2002. - vol. 40, № 10. - P. 3684-3688.

25. Analysis of the roles of bluetongue virus outer capsid proteins VP2 and VP5 in determination of virus serotype / P.P.C. Mertens, S. Pedley, J. Cowley, J. Burroughs, A.H. Corteyn, M.H. Jeggo, A.M. Jennings, B.M. Gorman // Virology. - 1989. - vol. 170.-P. 561-565.

26. An improved real-time polymerase chain reaction for the simultaneous detection of all serotypes of Epizootic hemorrhagic disease virus / A. Clavijo, F. Sun, T. Lester, D.C. Jasperson, W.C. Wilson // J. Vet. Diagn. Invest. - 2010. -vol. 22.-P 588-593.

27. An outbreak of Ibaraki disease in Kagoshima Prefecture in 1997 and properties of the virus isolated from bovine aborted and stillborn fetuses / Y. Wata-nabe, H. Makiuchi, T. Imafuji, K. Yamasaki, T. Onitsuka, S. Ohashi // J. of the Japan Vet. Med. Ass. - 2000. - vol. 53, № 5. - P. 302-306.

28. An outbreak of Ibaraki disease in Korea / U.B. Bak, C.K. Cheong, H.I. Choi, C.W. Lee, H.S. Oh, Y.O. Rhee, M.R. Cho, Y.I. Lim // Korean J. Vet. Res. -1983.-vol. 23, № l.-P. 81-89.

29. Antigenic relationship among strains of Ibaraki virus and epizootic haemorr-hagic disease virus studied with monoclonal antibodies / M. Sugiyama, N. Hi-rayama, H. Sasaki, T. Sugimura, N. Minamoto, T. Kinjo // Res. Vet. Sci. -1989. - vol. 46, № 2. - P. 283-285.

.30. Antibodies against certain bluetongue and epizootic haemorrhagic disease viral serotypes in Indonesian ruminants /1. Sendow, P.W. Daniels, D.H. Cy-binski, P.L. Young, P. Ronohardjo // Vet. Microbiol. - 1991. - vol. 28, № 1. -P. 111-118.

31. Antibody prevalence of 8 ruminant infectious-diseases in California mule and black-tailed deer (Odocoileus hemionus) / B.B. Chomel, M.L. Carniciu, R.W. Kasten, P.M. Castelli, T.M. Work, D.A. Jessup // J. of Wildl. Dis. - 1994. -vol. 30.-P. 51-59.

32. Antibodies to bluetongue and epizootic hemorrhagic disease viruses in a barrier island white-tailed deer population / D.E. Stallknecht, M.L. Kellogg, J.L. Blue, J.E. Pearson // J. of Wildl. Dis. - 1991. - vol. 27, № 4. - P. 668-674.

33. Aradaib, I. E. Detection of epizootic hemorrhagic disease virus serotypes 1 and 2 in cell culture and clinical samples using polymerase chain reaction / I.E. Aradaib, G.Y. Akita, B.I. Osburn // J. Vet. Diagn. Invest. - 1994a. - vol. 6. - P. 143-147.

34. Aradaib, I.E. Experimental infection of calves with epizootic hemorrhagic disease virus: virologic and serologic studies / I.E. Aradaib, M.M. Sawyer, B.I. Osburn // J. Vet. Diagn. Invest. - 1994. - vol. 6. - P. 489-492.

35. A serological survey of ruminant livestock in Kazakhstan during post-soviet transitions in farming and disease control / M. Lundervold, E.J. Milner-Gulland, C.J. O'Callaghan C. Hamblin, A. Corteyn, A.P. Macmillan // Acta. Vet. Scand. - 2004. - vol. 45. - P. 211-224.

36. A survey of antibodies to arthropod-borne viruses in Indonezian cattie / Y. Muira, Y. Inaba, T. Tsuda, S. Tokuhisa, K. Sato, H. Akashi, M. Matsumoto // J. Vet. Med. Sci. - 1982. - vol. 44. - P. 857-863.

37. Australian-Indonesian collaboration in veterinary arbovirology a rewiew / P.W. Daniels, I. Sendow, E. Soleha, Sukarsih, N.T. Hunt, S. Bahri // Vet. Microbiol. - 1995. - vol. 46, № 1-3.-P. 151-174.

38. Barber, T.L. Serotyping bluetongue and epizootic haemorrhagic disease virus strain / T.L. Barber, M.M. Jochim // Proc. 18th Ann. Meet. Am. Assoc. Vet. Lab. Diagn., 1975. - P. 352-359.

39. Basic Local Alignment Search Tool / NCBI [Электронный ресурс]. - Режим доступа: blast.ncbi.nlm.nih.gov. - Загл. с экрана.

40. Blacksell, S.D. Identification of epizootic haemorrhagic disease of deer virus serotypes using a fluorescence inhibition test / S.D. Blacksell, R.A. Lunt, K.M. Newberry // J. Virol. Methods. - 1994. - vol. 46, № 2. - P. 251-254.

41. Boom, R. Rapid and simple method for purification of nucleic acids / R. Boom [et al.] // J. of CI. Microbiology. - 1990. - vol. 28, № 3. - P. 495 - 503.

42. Campbell, C.H. A preliminary report of a comparison of epizootic haemorrhagic disease viruses from Australia with others from North America, Japan and Nigeria / C.H. Campbell, T.D. George // Australian Vet. J. - 1986. - vol. 6, №7.-P. 233.

43. Characterization of virus inclusion bodies in bluetongue virus-infected cells / S.M. Brookes, A.D. Hyatt, B.T. Eaton // J. Gen. Virol. - 1993. - vol. 74. - P. 525-530.

44. Chomczynski, P. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction / P. Chomczynski, N. Sacchi // Anal. Biochem.- 1987.-vol. 162, № 1. - P. 156-159.

45. Climate change and vector-borne diseases: a regional analysis / A.K. Githeko, S.W. Lindsay, U.E. Confalonieri, J.A. Patz // Bulletin of the World Health Organization. - 2000. - vol. 78, № 9. - P. 1136-1147.

46. Competitive ELISA for the detection of antibodies against epizootic haemorrhagic disease of deer virus / J.A. Thevasagayam, P.P. Mertens, J.N. Burroughs, J. Anderson // J. Virol. Methods. - 1995. - vol. 55, № 3. - P. 417425.

47. Detection and differentiation of epizootic haemorrhagic disease of deer and bluetongue viruses by serogroup-specific sandwich ELISA / J.A. Thevasa-

gayam, M.P. Wellby, P.P. Mertens, J.N. Burroughs, J. Anderson // J. Virol. Methods. - 1996a. - vol. 56, № 1. - P. 49-57.

48. Detection of all eight serotypes of Epizootic hemorrhagic disease virus by real-time reverse transcription polymerase chain reaction / W.C. Wilson, E.S. O Hearn, C. Tellgren-Roth, J.O. Mecham, D.E. Staiiknecht, D.G. Mead // J. Vet. Diagn. Invest. - 2009a. - vol. 21, № 2. - P. 220-225.

49. Detection of a novel reassortant epizootic hemorrhagic disease virus in the United States containing RNA segments derived from both exotic and endemic serotypes / A.B. Allison, G.H. Goekjian, C. Potgieter, W. Wilson, D. Johnson, P.P. Mertens, D. Staiiknecht // J. of General Virology. - 2010. - vol. 91. -P. 430-439.

50. Determining prevalence of bluetongue and epizootic hemorrhagic disease viruses in mule deer in Arizona (USA) using whole blood dried on paper strips compared to serum analyses / S.A. Dubay, S.S. Rosenstock, D.E. Staiiknecht, J.C. Devos // J. of Wildl. Dis. - 2006a. - vol. 42. - P. 159-163.

51. Development and evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay for detection of bovine antibodies to epizootic hemorrhagic disease of deer viruses / A. Afshar, P.F. Wright, L.A. Taylor, J.L. Shapiro, G.C. Dulac // Can. J. Vet. Res. - 1992. - vol. 56, № 2. - P. 154-160.

52. Development of PCR-based tests for the identification of North American isolates of epizootic haemorrhagic disease virus / M.J. Harding, I. Prudhomme, J. Rola, G.C. Dulac // Canadian J. of Vet. Res. - 1996. - vol. 60. - P. 59-64.

53. Diagnosis of bluetongue and epizootic hemorrhagic diseases / J.E. Pearson, G.A. Gustafson, A.L. Shafer, A.D. Alstad // Bluetongue, African horse sickness and related Orbiviruses / Walton, T.E., Osburn, B.I. - CRC Press, Inc., Boca Raton, Fla, 1992. - P. 533-546.

54. Differences in Ibaraki virus RNA segment 3 sequences from three epidemics / Y. Uchinuno, T. Ito, Y. Goto, Y. Miura, K. Ishibashi, T. Itou, T. Sakai // J. Vet. Med. Sci. - 2003. - vol. 65, № 11.-P. 1257-1263.

55. Disease Caused by the Epizootic Hemorrhagic Disease Virus Serogroup / OiE [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.cfsph. ias-tate.edu. - Загл. с экрана.

56. Disease Images: Epizootic Hemorrhagic Disease / CFSPH [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.cfsph.iastate.edu/DiseaseInfo/disease-

images.php?name-epizootic-hemorrhagicdisease&lang=en. - Загл. с экрана.

57. Disease information / OIE [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://web.oie.int/eng/info/hebdo/AIS_72.HTM. - Загл. с экрана.

58. Disease information / OIE [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://web.oie.int/eng/info/hebdo/AIS 65.HTM. - Загл. с экрана.

59. Disease survey of free-ranging grey brocket deer (Mazama gouazoubira) in the Gran Chaco, Bolivia / S.L. Deem, A.J. Noss, R. Villarroel, M.M. Uhart, W.B. Karesh // J. of Wildlife Diseases. - 2004. - vol. 40. - P. 92-98.

60. Disease taking heavy toll on deer population in Salem County this fall / NJ com [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://blog.ni.com/salem impact/print.html?entry=/2010/10/disease taking h eavy toll on d.html. - Загл. с экрана.

61. Doyle, К.A. An overview and perspective on Orbivirus disease prevalence and occurrence of vector in Australia and Oceania / K.A. Doyle // Bluetongue, African horse sickness and related orbiviruses / T.L. Walton, B.I. Osburn. -CRC Press, Inc., Boca Raton, Fla, 1992. - P. 44-57.

62. Dunbar, M.R. Servalence of selected disease agents from free-ranging black bears in Florida / M.R. Dunbar, M.W. Cunningham, J.C. Roof // J. of Wildl. Dis. - 1998. - vol. 34. - P. 612-619.

63. EHDV-1, a new Australian serotype of epizootic haemorrhagic disease virus isolated from sentinel cattle in the Northern Territory / R.P. Weir, M.B. Harmsen, N.T. Hunt, S.D. Blackseil, R.A. Lunt, L.I. Pritchard, K.M. Newber-

ry, A.D. Hyatt, A.R. Gould, L.F. Melville // Vet. Microbiol. - 1997. - vol. 58, №2-4.-P. 135-143.

64. Epidemiology of epizootic hemorrhagic disease in wildlife in the USA / V.F. Nettles, S.A. Hylton, D.E. Stallknecht, W.R. Davidson // Bluetongue, African horse sickness, and related orbiviruses: Proceedings of the Second International Symposium, 1992a. - P. 238-248.

65. Epizootic haemorrhagic disease / OiE [Электронный ресурс]. - Режим доступа:

http://www.oie.int/wahis/public.php?page=single_report&pop==l&reportid=::9 643. - Загл. с экрана.

66. Epizootic haemorrhagic disease virus type 7 infection in cattle in Israel / H. Yadin, J. Brenner, V. Bumbrov, Z. Oved, Y. Stram, E. Klement, S. Perl, S. Anthony, S Maan, C. Batten, P.P. Mertens // Veterinary Record. - 2008. -vol. 162, №2.-P. 53-56.

67. Epizootic hemorrhagic disease, bovine - Reunion / OiE [Электронный pe-сурс]. - Режим доступа: http://www.oie.int/wahid-prod/public.php?page=weekly_report_index&admin=Q. - Загл. с экрана.

68. Epizootic hemorrhagic disease, bovine - USA (OHIO) / OiE [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.promedmail.org/pls/apex/f?p=2400:1202:1819826667078688: :N Q::F2400 P1202 CHECK DISPLAYJF2400 PI202 PUB MAIL ID:X,391 47. - Загл. с экрана.

69. Epizootic hemorrhagic disease, cattle - Israel / OiE [Электронный ресурс].

Режим доступа:

http://www.promedmail.org/pls/apex/f?p=2400:1001:181982666707868 8::: :F 2400 PI001 BACK PAGE,F2400 PI001 ARCHIVE NUMBER,F2400 P 1001 USE ARCHIVE: 1202,20060925.2739,Y. - Загл. с экрана.

70. Epizootic hemorrhagic disease, cattle - Israel / OiE [Электронный ресурс].

Режим доступа:

http://www.promedmail.org/pls/apex/f?p=2400:1202:1819826667078688: :N Q::F2400 PI202 CHECK DISPLAY,F2400 P1202 PUB MAIL ID:X,355 12. - Загл. с экрана.

71. Epizootic hemorrhagic disease, Cervids - USA (23): (Nebraska) / ProMED-mail [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.promedmail.org/direct.php?id=:20121220.1461864. - Загл. с экрана.

72. Epizootic hemorrhagic disease, cervid, bovine - USA (PA) / OiE [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.promedmail.org/pls/apex/f7p-240Q: 1202:1819826667078688: :N Q::F2400 PI202 CHECK DISPLAY,F2400 PI202 PUB MAIL 1D:X,396 91. - Загл. с экрана.

73. Epizootic hemorrhagic disease in cattle, Western Turkey / E.M. Temizel, K. Yesilbag, C. Batten, S. Senturk, N.S. Maan, P.P. Mertens, H. Batmaz // Emerging Infectious Diseases Journal. - 2009. - vol. 15, № 2. - P. 317-319.

74. Epizootic hemorrhagic disease in white-tailed deer from Missouri / R.E. Brannian, N. Giessman, W. Porath, G.L. Hoff// J. of Wildl. Dis. - 1983. -vol. 19, №4.-P. 357-358.

75. Epizootiology of an epizootic hemorrhagic disease outbreak in West Virginia / J.K. Gaydos, J.M. Crum, W.R. Davidson, S.S. Cross, S.F. Owen, D.E. Stallknecht // J. of Wildlife Diseases. - 2004. - vol. 40, № 3. - P. 383-393.

76. Epizootiology of hemorrhagic disease in mule deer in central Arizona / S.A. Dubay, J.C. Devos, Т.Н. Noon, S. Вое // J. of Wildl. Dis. - 2004. - vol. 40. -P. 119-124.

77. Etiological and epidemiological studies on Ibaraki disease in Taiwan / Y. Liao, Y. Lu, S. Huang, S. Lee // J. of the Chinese of Vet. Sei. - 1996. - vol. 22, № 1-3.-P. 183-191.

78. Evaluation of a competitive ELISA for detection of antibodies to epizootic hemorrhagic disease virus of deer / A. Afshar, J. Anderson, K.H. Nielsen, J.E.

Pearson, H.C. Trotter, T.R. Woolhouse, J.A. Thevasagayam, D.E. Gall, J.M. Lapointe, G.A. Gustafson // J. Vet. Diagn. Invest. - 1997. - vol. 9, № 3- P. 309-311.

79. Expression and functional characterization of bluetongue virus VP5 protein: role in cellular permeabilization / S.H. Hassan, C. Wirblich, M. Forzan, P. Roy//J. of Virology.- 2001. -vol. 75.-P. 8356-8367.

80. Feldner, T.J. Epizootic hemorrhagic disease virus in Montana: isolation and serologic survey / T.J. Feldner, M.H. Smith // Am. J. Vet. Res. - 1981. - vol. 42, № 7.-P. 1198-1202.

81. Gard, G.P. Arboviruses recovered from sentinel cattle using several virus isolation methods / G.P. Gard, R.P. Weir, S.J. Walsh // Vet. Microbiol. - 1988. -vol. 18, №2.-P. 119-125.

82. Gard, G.P. Investigations of bluetongue and other arboviruses in the blood and semen of naturally infected bulls / G.P. Gard, L.F. Melville, J.E. Short-hose//Vet. Microbiol. - 1989.-vol. 20.-P. 315.

83. Gard, G.P. Results of a decade's monitoring for orbiviruses in sentinel cattle pastured in an area of regular arbovirus activity in Northern Australia / G.P. Gard, L.F. Melville // Bluetongue, African horse sickness, and related orbiviruses: Proceedings of the Second International Symposium, 1992. - P. 85-89.

84. Gibbs, E.P. Infection of British deer and farm animals with epizootic hemorrhagic disease of deer virus / E.P. Gibbs, M.J.P. Lawman // J. Comp. Pathol. -1977.-vol. 87.-P. 335-343.

85. Gould, E.A. Impact of climate change and other factors on emerging arbovirus diseases / E.A. Gould, S. Higgs // Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. - 2009. - vol. 103. - P. 109-121.

86. Hemorrhagic disease in bighorn sheep in Arizona / T.H. Noon, S.L. Wesche, D. Cagle, D.G. Mead, E.J. Bicknell, G.A. Bradley, S. Riplog-Peterson, D. Ed-sall, C. Reggiardo // J. of Wildl. Dis. - 2002a. - vol. 38. - P. 172-176.

87. Hemorrhagic disease in deer in Arizona / T.H. Noon, S.L. Wesche, J. Heffel-finger, A. Fuller, G.A. Bradley, C. Reggiardo // J. of Wildl. Dis. - 2002b. -vol. 38.-P. 177-181.

88. Hemorrhagic Disease in Kansas: Enzootic Stability Meets Epizootic Disease / G.L. Flacke, M.J. Yabsley, B.A. Hanson, D.E. Stallknecht // J. of Wildl. Dis. - 2004. - vol. 40, № 2. - P. 288-293.

89. Hemorrhagic disease in white-tailed deer in Texas: a case for enzootic stability / D.E. Stallknecht, M.P. Luttrell, K.E. Smith, V.F. Nettles // J. of Wildl. Dis. - 1996. - vol. 32, № 4. - P. 695-700.

90. House, C. Serological diagnosis of epizootic hemorrhagic disease in cattle in the USA with lesions suggestive of vesicular disease / C. House, L.D. Ship-man, G. Weybright, G. // Tropical Vet. Medicine. - 1998. - vol. 849. - P. 497-500.

91. Huismans, H. Characterization of tubules associated with the replication of the different orbiviruses / H. Huismans, H.J. Ele // Virology. - 1979. - vol. 92.-P. 397-406.

92. Huismans, H. Protein synthesis in bluetongue virus-infected cells / H. Huismans // Virology. - 1979. - vol. 92. - P. 385-396.

93. Howard, T. Isolation of bluetongue virus from bull semen / T. Howard, R.A. Bowen, B. Pickett // Prog. Clin. Biol. Res. - 1985. - vol. 178. - P. 127-134.

94. Identification and PCR-restriction fragment length polymorphism analysis of a variant of the Ibaraki virus from naturally infected cattle and aborted fetuses in Japan. / S. Ohashi, K. Yoshida, Y. Watanabe, T. Tsuda // J. Clin. Microbiol. - 1999. - vol. 37. - P. 3800-3803.

95. Incursion of bluetongue virus type 11 and epizootic hemorrhagic disease of deer type 2 for two consecutive years in the Okanagan Valley / G.C. Dulac, C. Dubuc, M.J. Myers, A. Afshar, E.A. Taylor, D. Ward, W. Sterritt // Canadian Vet. J. - 1989. - vol. 30, № 4. - P. 351.

96. Incursion of epizootic hemorrhagic disease into the Okanagan Valley, British Columbia in 1999 / J. Pasick, K. Handel, E.M. Zhou, A. Clavijo, J. Coates, Y. Robinson, B. Lincoln // Canadian Vet. J. - 2001. - vol. 42. - P. 207-209.

97. Inapparent bluetongue in free-ranging white-tailed deer / A. Kocan, A.E. Castro, B. Espe, R.T. Doyle, S.K. Olsen // J. of the American Vet. Med. Association. - 1982. - vol. 181.-P. 1415-1416.

98. Innate resistance to epizootic hemorrhagic disease in white-tailed deer / J.K. Gaydos, W.R. Davidson, F. Elvinger, D.G. Mead, E.W. Howerth, D.E. Stallknecht // J. of Wildl. Dis. - 2002. - vol. 38. - P. 713-719.

99. Interest for molecular tools for identification and typing of orbiviruses / S. Zientara, C. Sailleau, E. Breard, C. Viarouge, K. Gorna, A. Relmy, A. De-sprata // Rene. Rech. Ruminants. - 2010. - № 17. - P. 83-86.

100. Isolation and identification of Ibaraki virus in the 1991 epidemics of acute febrile disease of cattle in Korea / B.K. Park, C.H. Chang, C.W. Chung, J.C. Rhee, D.S. Son, K.W. Lee // RDA. J. Agri. Sci. - 1994. - vol. 36, № 1. - P. 558-561.

101. Isolation of bovine arboviruses from Culicoides biting midges (Diptera: Cera-topogonidae) in southern Japan: 1985 - 2002 / T. Yanase, T. Kato, T. Fubo, K. Yoshida, S. Ohashi, M. Yamakawa, Y. Miuray, T. Tsuda // J. of Med. En-tomol. - 2005. - vol. 42, № 1. - P. 63-67.

102. Jensen, M.J. A model for the membrane topology of the NS3 protein as predicted from the sequence of segment-10 of epizootic hemorrhagic-disease virus serotype-1 / M.J. Jensen, W.C. Wilson // Archives of Virology. - 1995. -vol. 140.-P. 799-805.

103. Karstad, L. Pathology of epizootic hemorrhagic disease of deer / L. Karstad, A. Winter, D.O. Trainer // J. Vet. Res. - 1961. - vol. 22. - P. 227-230.

104. Kitano, Y. Ibaraki disease in cattle / Y. Kitano // Infectious Disease of livestock / Coetzer, J.A.W., Tustin, R.C. - Oxford: Oxford University Press, 2004. -P. 1221-1226.

105. Kocan, A. Bluetongue and epizootic hemorrhagic disease in white-tailed deer in Oklahoma: Serological evaluation and virus isolation / A. Kocan, M.G. Shaw, S.J. Rogers // American J. of Vet. Res. - 1987. - vol. 48. - P. 10481050.

106. Lee, V.H. Isolation of viruses from field population of Culicoides (Diptera: Ceratopogonidae) in Nigeria / V.H. Lee // J. of Med. Entomol. - 1979. - vol. 16.-P. 76-79.

107. Localisation of the non-structural protein NS3 in bluetongue infected cells /

A.D. Hyatt, A.R. Gould, B. Coupar, B.T. Eaton // J. of Gen. Virol. - 1991. -vol. 72. - P. 2263-2267.

108. Low-prevalence of antibodies to bluetongue and epizootic hemorrhagic disease viruses in dogs from Southern Georgia / E.W. Howerth, M. Dorminy, D.W. Dreesen, E.A. Spires, D.E. Stallknecht // J. of Vet. Diagn. Invest. -1995.-vol. 7.-P. 393-394.

109. Luo, L. Production of a recombinant major inner capsid protein for serological detection of epizootic hemorrhagic disease virus / L. Luo, M.I. Sabara // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 2005. - vol. 12, № 8. - P. 904-909.

110. Lu, Y. Aetiological and epidemiological studies on Ibaraki disease in Taiwan / Y. Lu, Y. Li, P. Liou // Proceedings of the First Southeast Asia and Pacific Regional Bluetongue Symposium. - Cnina, 1996. - P. 91.

111. Maclachlan, N.J. Epizootic haemorrhagic disease of deer / N.J. Maclachlan,

B.I. Osburn // Infectious Diseases of Livestock / Coetzer, J.A.W., Tustin, R.C. - Southern Africa: Oxford University Press., 2004. - 2nd edition. - P. 1227-1230.

112. McConnell, P.A. The 1975 outbreak of hemorrhagic disease among white-tailed deer in northwestern New Jersey / P.A. McConnell, R.C. Lund, N.R. Boss // Transactions of Northeast Section of the Wildlife Society, 1977. - vol. 33.-P. 35^44.

113. Mecham, J.O. Antigen capture competitive enzyme-linked immunosorbent assays using baculovirus-expressed antigens for diagnosis of bluetongue virus and epizootic hemorrhagic disease virus / J.O. Mecham, W.C. Wilson // J. Clin. Microbiol. - 2004. - vol. 42, № 2. - P. 518-523.

114. Mecham, J.O. Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of antibody to epizootic hemorrhagic disease of deer virus / J.O. Mecham, M.M. Jochim // J. of Vet. Diagn. Invest. - 2000. - vol. 12, № 2. -P. 142-145.

115. Mecham, J.O. Protein coding assignment for the genome of epizootic hae-morrhagic disease virus / J.O. Mecham, V.C. Dean // J. Gen. Virol. - 1988. -vol. 69.-P. 1255-1262.

116. Mecham, J.O. The S7 gene and VP7 protein are highly conserved among temporally and geographically distinct American isolates of epizootic hemorrhagic disease virus / J.O. Mecham, D. Stallknecht, W.C. Wilson // Virus. Res. - 2003. - vol. 94, № 2. - P. 129-133.

117. Membrane organization of bluetongue virus nonstructural glycoprotein NS3 / O.B. Bansal, A. Stokes, A. Bansal, D. Bishop, P. Roy // J. of Virology. -1998. - vol. 72. - P. 3362-3369.

118. Molecular characterization of epizootic hemorrhagic disease virus serotype 1 associated with a 1999 epizootic in white tailed deer in the eastern United States / M.D. Murphy, B.A. Hanson, E.W. Howerth, D.E. Stallknecht // J. of Wildl. Dis. - 2006. - vol. 42, № 3. - P. 616-624.

119. Monitoring of five bovine arboviral diseases transmitted by arthropod vectors in Korea / Y.-K. Shin, J.-K. Oem, S. Yoon, B.-H. Hyun, I.-S. Cho, S.-S. Yoon, J.-Y. Song // J. of Bacteriology and Virology. - 2009. - vol. 39, № 4,-P. 353-362.

120. Monoclonal antibody based competitive ELISA for the detection of antibodies against epizootic haemorrhagic disease of deer virus / J.A. Thevasa-

gayam, T.R. Woolhouse, P.P. Mertens, J.N. Burroughs, J. Anderson // J. Virol. Methods. - 1996. - vol. 57, № 2. - P. 117-126.

121. Mullen, G.R. Potential vectors of bluetongue and epizootic hemorrhagic disease viruses of cattle and white-tailed deer in Alabama / G.R. Mullen, M.E. Hayes, K.E. Nusbaum // Prog. Clin. Biol. Res. - 1985. - vol. 178. - P. 201206.

122. Nettles, V.F. History and progress in the study of hemorrhagic disease or deer / V.F. Nettles, D.E. Stallknecht // Transactions of the North American Wildlife and Natural Resources Conference, 1992c. - vol. 57. - P. 499-516.

123. Nettles, V.F. Surveillance for hemorrhagic disease in white-tailed deer and other wild ruminants, 1980-1989 / V.F. Nettles, W.R. Davidson, D.E. Stallknecht // Proceedings of the annual conference of the Southeastern Association of Fish and Wildlife Agencies, 1992b. - vol. 46. - P. 138-146.

124. Nucleotide: EHDV NSI, NS2, NS3 [Электронный ресурс] / NCBI. - Режим доступа:

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore?term=EHDV+NS 1 .+NS2.+NS3. Загл. с экрана.

125. Nucleotide: Ibaraki virus / NCBI [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/?term=lbaraki+virus. - Загл. с экрана.

126. Omori, Т. Bluetongue-like disease in Japan / T. Omori // Bull. Off. Int. Epi-zoot.-1961.-vol. 55.-P. 1109.

127. Orbivirus Reoviridae / P.P.C. Mertens, S. Maan, A. Samuel, H. Attoui // Virus Taxonomy VHIth Report of the ICTV Elsevier / Fauquet, C.M., Mayo, M.A., Maniloff, J., Desselberger, U., Ball, L.A. - London: Academic Press., 2005.-P. 466-483.

128. Outbreak of epizootic haemorrhagic disease on the island of Reunion / E. Breard, C. Sailleau, C. Hamblin, S. Graham, J. Gourreau, S. Zientara // Vet. Rec. - 2004. - vol. 155, № 14.-P. 422-423.

129. PCR detection of North American and Central African isolates of Epizootic hemorrhagic disease virus (EHDV) based on genome segment 10 of EHDV serotype 1 / I.E. Aradaib, W.C. Wilson, C.E. Schore, M.E.H. Mohammed, T.D. Yilma, J.S. Cullor, B.I. Osburn // J. of Clin. Microbiol. - 1998. - vol. 36, № 9. - P. 2604-2608.

130. Recent experiences with the monitoring of sentinel herds in Northern Australia / L.F. Melville, R. Weir, M. Harmsen, S. Walsh, N.T. Hunt, I. Pritchard, P.W. Daniels // Proceedings of the First Southeast Asia and Pacific Regional Bluetongue Symposium. - China, 1996. - P. 100-105.

131. Reed, C. Import risk analysis: cattle germplasm from all countries / C. Reed. -New Zealand: MAF Biosecurity New Zealand, 2009. - P. 57-59.

132. Scientific Opinion on Epizootic Hemorrhagic Disease; EFSA Panel on Animal Health and Welfare (AHAW) / EFSA [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.efsa.europa.eu/fr/efsajournal/doc/1418.pdf. - Загл. с экрана.

133. Scientific Review on Epizootic Hemorrhagic Disease / Istituto Zooprofilatti-co Sperimentale deH'Abruzzo e del Molise «G. Caporale», [Электронный ресурс]. - Режим доступа: efsa.europa.eu>de/scdocs/doc/20e.pdf. - Загл. с экрана.

134. Serological Survey for Potential Disease Agents of Free-ranging Cervids in Six Selected National Parks from Germany / K. Frolich, C. Hamblin, S. Parida, E. Tuppurainen, E. Schettler // J. of Wildl. Dis. - 2006. - vol. 42, № 4. -P. 836-843.

135. Serologic surveillance for selected viral agents in captive and free-ranging populations of Arabian oryx (Oryx leucoryx) from Saudi Arabia and the United Arab Emirates / K. Frolich, C. Hamblin, S. Jung, S. Ostrowski, J. Mwan-zia, W.J. Streich, J. Anderson, R. M., Armstrong, S. Anajariyah // J. of Wildl. Dis.-2005.-vol. 41.-P. 67-79.

136. Serologic survey for pathogens potentially affecting pronghorn (Antilocapra americana) fawn recruitment in Arizona, USA / S.A. Dubay, T.H. Noon, J.C.Jr. deVos, R.A. Ockenfels // J. of Wildl. Dis. - 2006b. - vol. 42. - P. 844-848.

137. Serosurvey for selected infectious disease agents in free-ranging black and white rhinoceros in Africa / C. Fischer-Tenhagen, C. Hamblin, S. Quandt, K. Frolich // J. of Wil. Dis. - 2000. - vol. 36. - P. 316-323.

138. Shope, R.E. A virus induced epizootic hemorrhagic disease of the Virginia white-tailed deer (Odocoileus virginianus) / R.E. Shope, L.G. Macnamara, R. Mangold//J. Exp. Med.- 1960.-vol. 111. - P. 155-170.

139. Shope, R.E. Report on the deer mortality, epizootic hemorrhagic disease of deer / R.E. Shope, L.G. MacNamara, R. Mangold. - NJ Outdoors, 1955. - vol. 6.-P. 17-21.

140. Simultaneous detection and identification of epizootic hemorrhagic disease virus serotypes 1 and 2 using a multiplex RT PCR / I.E. Aradaib, M.E.H. Mohamed, M.A. Abdalla, A.E. Karrar, A.A. Majid, R.A. Omer, S.M.M. Ela-min, M.M. Salih, S.H. Idress // J. of Animal and Veterinary Advances. -2003. - vol. 2, № 10. - P. 585-589.

141. Stallknecht, D.E. Epidemiology of bluetongue and epizootic hemorrhagic disease in wildlife: surveillance methods / D.E. Stallknecht, E.W. Howerth // Bluetongue. Proceedings of the third International Symposium. - Veterinaria italiana, 2004. - vol. 40, № 3/4. - P. 203-207.

142. Stallknecht, D.E. Hemorrhagic disease in white-tailed deer: Our current understanding of risk / D.E. Stallknecht, E.W. Howerth, J.K. Gaydos // Transactions of the North American Wildlife and Natural Resources Conference, 2002. - vol. 67. - P. 75-86.

143. Synthesis and characterization of chimeric particles between epizootic hemorrhagic disease virus and bluetongue virus: functional domains are con-

served on the VP3 protein / H. Le Blois, B. Fayard, T. Urakawa, P. Roy // J. Virol. - 1991.-vol. 65, №9.-P. 4821-4831.

144. The atomic structure of the bluetongue virus core / J. Grimes, J.N. Burroughs, P. Gouet, J. Diprose, R. Malby // Nature. - 1998. - vol. 395. - P. 470-478.

,, 145. The complete nucleotide sequences of L3 and S7 segments of Ibaraki virus

encoding for the major inner capsid proteins, VP3 and VP7 / H. Iwata, S. Ma-nabe, A. Yoshida, E.M. Pereira, T. Inoue // J. Vet. Med. Sci. - 2001. - vol. 63, № l.-P. 73-78.

146. The complete nucleotide sequences of L3 and S7 segments of Ibaraki virus encoding for the major inner capsid proteins, VP3 and VP7 / H. Iwata, S. Ma-nabe, A. Yoshida, E.M. Pereira, T. Inoue // J. Vet. Med. Sci. - 2001. - vol. 63, № l.-P. 73-78.

147. The complete sequence of the group-specific antigen, VP7, of African horse-sickness disease virus serotype 4 reveals a close relationship to bluetongue / P. Roy, T. Hirasawa, M. Fernandez, V.M. Blinov, J.M. Sanchez-Vixcain Ro-drique // J. of Gen. Virol. - 1991. - vol. 72. - P. 1237-1241.

148. The membrane trafficking protein calpactin forms a complex with bluetongue virus protein NS3 and mediates vims release / A.R. Beaton, J. Rodriguez, Y.K. Reddy, P. Roy // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. - 2002.

149. The pGEM-T and pGEM-T Easy Vector Systems / Promega Corporation [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.promega.com. -Загл. с экрана.

150. Theron, J. Identification of a short domain within the non-structural protein NS2 of epizootic haemorrhagic disease virus that is important for single strand RNAbinding activity / J. Theron, H. Huismans, L.H., Nel // J. Gen. Virol. - 1996a. - vol. 77, pt. l.-P. 129-137.

ч

151. Theron, J. Site-specific mutations in the NS2 protein of epizootic haemorrhagic disease virus markedly affect the formation of cytoplasmic inclusion

bodies / J. Theron, H. Huismans, L.H. Nel // Arch. Virol. - 1996. - vol. 141, №6.-P. 1143-1151.

152. The smallest gene of the orbivirus, epizootic hemorrhagic disease, is expressed in virus-infected cells as two proteins and the expression differs from that of the cognate gene of bluetongue virus / M.J. Jensen, I.W. Cheney, L.H. Thompson, J.O. Mecham, W.C. Wilson, M. Yamakawa, P. Roy, B.M. Gorman // Virus. Res. - 1994. - vol. 32, № 3. - P. 353-364.

153. Thomas, L. Disease outbreak in West Virginia / L. Thomas // The Market Bulletin, West Virginia Department of Agriculture. - 1993. - vol. 77, № 11.- P. 12.

154. Thompson, L.H. Isolation and characterization of epizootic hemorrhagic disease virus from sheep and cattle in Colorado / L.H. Thompson, J.O. Mecham, F.R. Holbrook // American J. of Vet. Res. - 1988. - vol. 49. - P. 1050-1052.

155. 3-D reconstruction of bluetongue virus tubules using cryo electron microscopy / E.A. Hewat, T.F. Booth, R.H. Wade, P. Roy // J. of Structural Biology. -1992.-vol. 108.-P. 35-48.

156. Tomori, O. Bluetongue and related viruses in Nigeria: Experimental infection of West African dwarf sheep with Nigeria strains of the viruses of epizootic hemorrhagic disease of deer and bluetongue / O. Tomori // Vet. Microbiol. -1980.-vol. 5.-P. 177-185.

157. Occurrences of Ibaraki disease in two successive years: possibly caused by virus overwintering / Y. Uchinuno, K. Ishibashi, A. Yokoyama, M. Kawanabe, E. Takagi // J. of the Japan Vet. Med. Ass. - 2000. - vol. 53, № 6. - P. 372376.

158. Omori, T. Ibaraki disease: A bovine epizootic disease resembling bluetongue / T. Omori // Nat. Inst. Anim. Health Quart. - 1970. - vol. 10. - P. 45-55.

159. Omori, T. Ibaraki virus, an agent of epizootic disease of cattle resembling bluetongue. I. Epidemiologic, clinical and pathologic observations and experimental transmission to calves / T. Omori, Y. Inaba, T. Morimoto, Y. Tana-

ka, R. Ishitani, H. Kurogi, K. Munakata, K. Matsuda, M. Matumoto // Japan J. Microbiol. - 1969.-vol. 13.-P. 139-157.

160. Oral and fecal shedding of epizootic hemorrhagic disease virus, serotype 1 from experimentally infected white-tailed deer / J.K. Gay dos, A.B. Allison, B.A. Hanson, A.S. Yellin // J. of Wildl. Dis. - 2002. - vol. 38. - P. 166-168.

161. Orbivirus [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://en.wikipedia.org/wiki/Orbivirus. - Загл. с экрана.

162. Purified recombinant bluetongue virus VP1 exhibits RNA replicase activity / M. Boyce, J. Wehrfritz, R. Noad, P. Roy // J. of Virology. - 2004. - vol. 78. -P. 3994-4002.

163. Rossmann, M.G. Courageous science: structural of bluetongue virus core / M.G. Rossmann, Y. Tao // Structure. - 1999. - vol. 7, № 3. - P. 43-46.

164. RT-PCR assay for seven serotypes of Epizootic haemorrhagic disease virus and their use to type strains from the Mediterranean region and North America / N.S. Maan, S. Maan, K. Nomikou, D.J. Johnson, M.E. Harrak, H. Mada-ni, H. Yadin, S. Incoglu, K. Yesilbag, A.B. Allison, D.E. Stallknecht, C. Batten, S.J. Anthony, P.P.C. Mertens // PLoS ONE. - 2010. - vol. 5, issue 9.

165. Viruses - dsRNA viruses - Reoviridae / NCBI [Электронный ресурс] / NCBI. - Режим доступа : http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/GenomesGroup.cgi7taxid=689832. Загл. с экрана.

166. VP7: an attachment protein of bluetongue virus for cellular receptors in Culi-coides variipennis / G. Xu, W. Wilson, J. Mecham, K. Murphy, E. Zhou, W. Tabachnick // J. of Gen. Vir. - 1997. - vol. 78. - P. 1617-1623.

167. Wilson, W.C. Detection of epizootic hemorrhagic disease virus in Culicoides variipennis (Diptera: Ceratopogonidae) / W.C. Wilson // J. Med. Entomol. -1991. - vol. 28, № 5. - P. 742-744.

168. Wittmann, E.J. Effect of temperature on the transmission of orbiviruses by the biting midge, Culicoides sonorensis / E.J. Wittmann, P.S. Mellor, M. Baylis // Medical and Veterinary Entomology. - 2002. - vol. 16. - P. 147-156.

169. Genetic and phylogerietic analysis of the outer capsid proteins VP2 and VP5 of epizootic haemorrhagic disease virus (EHDV) / S.J. Anthony, N. Maan, S. Maan, G. Sutton, H. Attoui, P.P.C. Mertens // Virus Research. - 2009a. - vol. 145.-P. 200-210.

170. Genetic and phylogenetic analysis of the core proteins VP1, VP3, VP4, VP6 and VP7 of epizootic haemorrhagic disease virus (EHDV) / S.J. Anthony, N. Maan, S. Maan, G. Sutton, H. Attoui, P.P.C. Mertens // Virus Research. -2009b.-vol. 145, №2.-P. 187-199.

171. Wilson, W.C. Sequence analysis of the non-structural protein 2 from epizootic hemorrhagic disease viruses/ W.C. Wilson // Virus Research. - 1994. - vol. 34, № l.-p. 63-68.