Идентификация вируса болезни Акабане на основе методов анализа генома тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат биологических наук Хан, Евгения Олеговна

• Хан, Евгения Олеговна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Хан, Евгения Олеговна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

Список сокращений

1 ВВЕДЕНИЕ

1.1 Актуальность темы

1.2 Степень разработанности проблемы

1.3 Цель и задачи исследования

1.4 Научная новизна работы

1.5 Теоретическая и практическая значимость работы

1.6 Соответствие диссертации паспорту научной специальности

1.7 Публикации результатов

1.8 Степень достоверности и апробация работы

1.9 Структура и объем диссертационной работы

1.10 Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1.11 Личный вклад автора в выполнение работы

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Общая характеристика семейства Випуаутёае

2.2 Распространение и пути передачи вируса болезни Акабане

2.3 Характеристика возбудителя болезни Акабане

2.3.1 Этиология болезни Акабане

2.3.2 Структура и физико - химические свойства вируса болезни Акабане

2.3.3 Структура генома и особенности репликации вируса болезни Акабане

2.3.4 Изучение нуклеотидного состава и филогенетический анализ буньявирусов и вируса болезни Акабане

2.4 Диагностика болезни Акабане

2.4.1 Клинико-эпизоотологческая диагностика

2.4.2 Выделение вируса болезни Акабане

2.4.3 Серологические методы диагностики

2.4.4 Полимеразная цепная реакция

2.5 Заключение по обзору литературы

3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Материалы

3.1.1 Вирусы

3.1.2 Животные

3.1.3 Плазмиды и бактериальные штаммы

3.1.4 Культуры клеток

3.1.5 Реактивы

3.1.6 Лабораторное оборудование

3.2 Методы

3.2.1 Культивирование клеток

3.2.2 Заражение животных

3.2.3 Выделение РНК

3.2.4 Синтез кДНК

3.2.5 Постановка полимеразной цепной реакции

3.2.6 Анализ продуктов ПЦР

3.2.7 Выделение и очистка продуктов ПЦР

3.2.8 Нуклеотидное секвенирование

3.2.9 Клонирование фрагментов генов

3.2.10 Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей

3.2.11 Статистическая обработка полученных результатов

3.3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.3.1 Изучение репродукции вируса болезни Акабане в перевиваемой культуре клеток VERO

3.3.2 Разработка тест-системы для выявления генома вируса болезни Акабане методом ОТ - ПЦР с электрофоретической детекцией

3.3.3 Разработка тест-системы для выявления генома вируса болезни Акабане методом ОТ - ПЦР в реальном времени

3.3.4 Выявление генома вируса болезни Акабане в пробах крови от экспериментально зараженных овец и морских свинок и в пробах

мозга инфицированных мышей-сосунков

3.3.5 Секвенирование нуклеотидных последовательностей и филогенетический анализ вируса болезни Акабане, депонированного

в музее ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии

4 ОБСУЖДЕНИЕ

5 ВЫВОДЫ

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

7 СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

8 ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

а.а. - аминокислотный остаток;

ВНИИВВиМ - Всероссийский научно-исследовательский институт;

ветеринарной вирусологии и микробиологии;

ГНУ - государственное научное учреждение;

ГТЦ - гуанидина тиоцианат;

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;

дНТФ - дезоксирибонуклеозидтрифосфат;

Да - дальтон;

ИФА - иммуноферментный анализ; КРС - крупный рогатый скот;

кДНК - комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота; кДа - килодальтон;

МЛД50 _ 50% -ная мышиная летальная доза вируса;

мкл - микролитр;

MPC - мелкий рогатый скот;

ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией;

ОРС - открытая рамка считывания;

об/мин - обороты в минуту;

ПЦР - полимеразная цепная реакция;

п.о. - пара оснований;

ПС - перевиваемая культура клеток почки сайги;

ПСГК - перевиваемая культура клеток почки сибирского горного козерога; РФ - Российская Федерация;

ТЦД5о - 50%-ная тканевая цитопатогенная доза вируса;

Трис - N,N,N-Tpnc (гидроксиметил)-аминометан;

РНК - рибонуклеиновая кислота;

ФИТЦ - флуоресцеинизотиоцианат;

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота;

ВНК-21 - культура клеток почки новорожденного сибирского хомяка; VERO - перевиваемой линии клеток почки африканской зеленой мартышки; CV-1 - перевиваемая культура клеток почки зелёной мартышки; ПСГК - перевиваемая культура клеток почки сибирского горного козерога; рН - обратный десятичный логарифм концентрации ионов Н+.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Идентификация вируса болезни Акабане на основе методов анализа генома»

1 ВВЕДЕНИЕ

1.1 Актуальность темы

Болезнь Акабане - зоонозная, арбовирусная болезнь крупного и мелкого рогатого скота, характеризующаяся абортами, мертворождениями и различными пороками развития. Первую вспышку болезни Акабане регистрировали в Японии, в селении Акабане в 1959 г. [57]. Этиологический агент - вирус болезни Акабане, являющийся представителем рода Orthobunyavirus семейства Bunyaviridae - впервые изолирован в Японии от Aedes vexans и Culex triaeniorhynchus в 1960 и 1964 гг., соответственно. О спорадических вспышках болезни Акабане сообщалось из Японии, Тайваня, Австралии и Израиля. В Корее первая вспышка болезни Акабане произошла в 1980 г. [1, 5].

Инцидентность и распространение болезни Акабане связаны с насекомыми - переносчиками вируса, вспышки болезни происходят с хорошо выраженной сезонностью. Вирус переносится кровососущими насекомыми - обычно мелкими комарами рода Culicoides: в Африке -С. milne и С. imicola, в Японии - С. oxystoma, в Австралии - С. brevitarsis и С. wadei. Также вирус был выделен от Anopheles fenestus в Кении и от Aedes vexans и Culex triaeniorhynchus в Японии [72, 74].

В течение раннего или среднего периодов беременности животных, инфицированных вирусом болезни Акабане, заболевание проявляется в виде абортов, мертворождения или рождения потомства с комплексом пороков развития, объединяемых под общим названием артрогрипоз -гидроэнцефалического синдрома. Степень поражения плода зависит от срока стельности или суягности, на котором произошло инфицирование, и от штамма вируса. В стадах КРС наибольшие потери (25-30 %) наблюдаются, когда животные инфицированы на 3-6 месяцах стельности. У овец и коз наиболее тяжелые поражения плода происходят при инфицировании на 28 -50 сутки суягности [72, 74].

В случае запоздалой диагностики болезни Акабане возможны экономические потери сельскохозяйственным комплексам страны из-за недополучения поголовья скота, мясных и молочных продуктов, шерсти.

В последние годы интерес к болезни Акабане резко возрос в связи с возникновением в Европе нового заболевания - болезни Шмалленберг, вызывающей у MPC и КРС болезнь с клиническими признаками, схожими с таковыми при болезни Акабане. Возбудитель болезни Шмалленберг, так же как и вирус болезни Акабане, относится к роду Orthobunyavirus семейства Bunyaviridae. Нуклеотидные последовательности S - сегментов геномов этих вирусов характеризуются 69 % идентичностью [78].

Своевременная и точная лабораторная диагностика болезни Акабане и особенно экспресс-диагностика этой экзотической для РФ болезни остается актуальной для ветеринарии, т.к. является решающей в предупреждении болезни и ее искоренении.

В настоящее время наиболее чувствительным и специфичным методом выявления возбудителя болезни Акабане является ПЦР [35]. В связи с вышеизложенным, разработка методов идентификации возбудителя Акабане на основе ПЦР имеет важное эпизоотологическое и диагностическое значение.

1.2 Степень разработанности проблемы

Для лабораторной диагностики болезни Акабане зарубежными исследователями используются различные серологические и молекулярно-генетические методы [35, 40]. В нашей стране разработаны серологические средства лабораторной диагностики болезни Акабане на основе реакций гемадсорбции, связывания комплемента (РСК), диффузионной преципитации (РДП), твердофазного иммуноферментного анализа (ТФ ИФА), метод флуоресцирующих антител (МФА) [4, 7, 8].

В Российской Федерации отсутствовали средства выявления генома вируса болезни Акабане методом ОТ-ПЦР.

1.3 Цель и задачи исследования

Основной целью исследований являлась разработка тест-систем на основе ОТ-ПЦР с электрофоретической детекцией и ОТ-ПЦР в реальном времени для идентификации генома вируса болезни Акабане.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. разработать тест-систему на основе ОТ-ПЦР с электрофоретической детекцией для выявления генома вируса болезни Акабане.

2. разработать тест-систему на основе ОТ-ПЦР в реальном времени для выявления генома вируса болезни Акабане.

3. определить характеристики разработанных тест-систем и возможность их использования для лабораторной диагностики болезни Акабане.

4.определить нуклеотидные последовательности гена

нуклеокапсидного белка (14) музейных штаммов вируса болезни Акабане и провести их филогенетический анализ.

1.4 Научная новизна работы

Впервые в Российской Федерации определены нуклеотидные последовательности гена N двух штаммов («Р», «В8935») вируса болезни Акабане, депонированных в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии. Установлено, что геном штамма «Р» филогенетически близок геномам штаммов «1аОАг-39» и «Р0-90-3», выделенных в Японии (степень нуклеотидной идентичности составляет 99,3 - 99,5 %), а геном штамма «В 893 5» филогенетически близок геному штамма «117949»,

выделенного в Австралии (степень нуклеотидной идентичности составляет 99,9 %).

Впервые в Российской Федерации разработаны тест-системы для выявления генома вируса болезни Акабане методами ОТ-ПЦР с электрофоретической детекцией и ОТ-ПЦР в реальном времени.

1.5 Теоретическая и практическая значимость работы

Разработаны «Методические положения по выявлению РНК вируса болезни Акабане методом полимеразной цепной реакции», утвержденные директором ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии Колбасовым Д.В. (28.01.2011 г.), и «Методические положения по выявлению РНК вируса болезни Акабане методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени», рассмотренные на секции «Биотехнология» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии и утвержденные академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии Смирновым A.M. (10.11.2011 г.). Указанные методические положения пригодны для лабораторной диагностики болезни Акабане.

Определены нуклеотидные последовательности гена N музейных штаммов вируса болезни Акабане и проведен их филогенетический анализ.

1.6 Соответствие диссертации паспорту научной специальности

В соответствии с формулой специальности 03.02.02, вирусология -область науки, занимающаяся исследованием вирусов, генетикой, молекулярно-генетическими аспектами, разработкой диагностики вызываемых вирусами заболеваний, включающей область исследований проблем генетики вирусов, структурной организации генома вирусов, проблем генной инженерии, разработкой диагностики вирусных заболеваний. В диссертационной работе проведены исследования по созданию тест-систем на основе ПЦР и ее модификаций, позволяющие

проводить лабораторную диагностику болезни Акабане. Для данных тест-систем разработаны рекомбинантные конструкции, используемые в качестве положительных контролем амплификации. Проведено нуклеотидное секвенирование гена N двух штаммов («Р», «В8935») вируса болезни Акабане, депонированных в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии. На основании нуклеотидной последовательности гена N проведен филогенетический анализ и получены молекулярно-генетические паспорта данных штаммов.

Результаты научного исследования соответствуют пунктам паспорта специальности - 4, 5, 10.

1.7 Публикации результатов

По теме диссертации опубликовано 4 научные работы, в том числе 1 статья в журнале «Научный журнал КубГАУ», рекомендованном ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации.

1.8 Степень достоверности и апробация работы

Степень достоверности результатов проведенных исследований подтверждена статистическими исследованиями и комиссионными испытаниями. Статистическая обработка включала расчеты средних арифметических значений, достоверности статистической разницы между средними величинами, регрессивный и корреляционный анализ данных, расчет стандартных отклонений результатов с помощью пакета прикладных программ Microsoft Office Excel 2007, обработку результатов с помощью пакета прикладных программ STATGRAPHICS, версия 2.1. Научные положения и выводы диссертационной работы аргументированно отражают содержание работы.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии (2009-

2011 гг.). Материалы диссертации доложены на Всероссийской научно -практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010» (г. Москва, 2010 г.), Международной научно-практической конференции «Высокие технологии, прикладные и фундаментальные исследования в фармакологии, физиологии и медицине» (Санкт - Петербург, 2011 г.), Международном конгрессе ЕР КОКЕ (г. Сент-Мало, Франция, 2010 г).

1.9 Структура и объем диссертационной работы

Диссертация изложена на 80 страницах машинописного текста и состоит из разделов: введение, обзор литературы, материалы, методы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список использованной литературы, включающий 14 отечественных и 93 иностранных источников, дополнена приложениями. Диссертация содержит 8 таблиц и 20 рисунков. В приложении представлены документы, подтверждающие достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.

1.10 Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Тест-системы для выявления генома вируса болезни Акабане методами ОТ-ПЦР с электрофоретической детекцией и ОТ-ПЦР в реальном времени чувствительны и специфичны.

2. Тест-система на основе ОТ-ПЦР в реальном времени позволяет выявлять РНК вируса болезни Акабане в инфицированных культурах клеток, крови экспериментально зараженных овец, морских свинок и мозге белых мышей.

3. Нуклеотидные последовательности гена N и филогенетический анализ штаммов «Р» и «В8935» вируса болезни Акабане.

1.11 Личный вклад автора в выполнение работы

Основной объем исследований проведен автором самостоятельно. Консультативную и методическую помощь при выполнении отдельных этапов работы оказывали следующие сотрудники института: к.б.н., научный сотрудник лаборатории Биофизики Сальников Н.И., (освоение молекулярно-биологических методов), аспирант лаборатории Биофизики Никитина Е.Г. (эксперименты по культивированию вируса, заражению животных).

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Хан, Евгения Олеговна

5 ВЫВОДЫ

1. Разработана тест-система для выявления генома вируса болезни Акабане методом ОТ-ПЦР с электрофоретической детекцией с аналитической чувствительностью 1,5 ± 0,5 ^ МЛД50/см3 при исследовании мозгового мышиного материала и 1,0 ± 0,5 ^ ТЦД50/см3 при исследовании культурального материала.

2. Разработана тест-система для выявления генома вируса болезни Акабане методом ОТ-ПЦР в реальном времени с аналитической чувствительностью 1,5 ± 0,5 МЛД50/см3 при исследовании мозгового мышиного материала и 1,0 ± 0,5 ^ ТЦД50/см3 при исследовании культурального материала.

3. На основе данных нуклеотидного секвенирования фрагмента 8 -сегмента генома штамма «Р» вируса болезни Акабане и филогенетического анализа установлена его гомология с геномами японских штаммов «1аОАг-39» и «Р0-90-3» (степень нуклеотидной идентичности составляет 99,3 - 99,5

4. На основе данных нуклеотидного секвенирования фрагмента Б -сегмента генома штамма «В 893 5» вируса болезни Акабане и филогенетического анализа установлена его гомология с геномом австралийского штамма «К7949» (степень нуклеотидной идентичности составляет 99, 9 %).

5. Разработанные тест-системы на основе ОТ-ПЦР с электрофоретической детекцией и ОТ-ПЦР в реальном времени пригодны для лабораторной диагностики болезни Акабане у чувствительных животных.

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Культура клеток VERO пригодна для накопления вируса болезни Акабане (штаммы «Р» и «В8935»).

Специфические олигонуклеотидные праймеры могут быть использованы для определения нуклеотидных последовательностей гена N вируса болезни Акабане, проведения генетической характеристики его штаммов и изолятов, создания генетических паспортов и рекомендуются для практического применения в научно-исследовательских и диагностических лабораториях.

Методические положения по выявлению РНК вируса болезни Акабане методом полимеразной цепной реакции», утвержденные директором ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии Д.В. Колбасовым, а также «Методические положения по выявлению РНК вируса болезни Акабане методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени», рассмотренные на секции «Биотехнология» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (23.09.2011г.) и утвержденные академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии A.M. Смирновым, предлагаются для лабораторной диагностики болезни Акабане в специализированных ветеринарных учреждениях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Хан, Евгения Олеговна, 2013 год

7 СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Арбовирусы и арбовирусные инфекции / Д.К. Львов [и др.]. - Москва: Медицина, 1989.

2. Арбовирусы и заболевания человека / Доклад научной группы ВОЗ (технический доклад № 369) // - Женева, 1968. - С.30-3.

3. Архипов, Н.И. Карантинные и малоизвестные болезни животных / Н.И. Архипов, И.А. Бакулов, В.А. Балабанов и др. - М.: Колос, 1983.- 350 с.

4. Балашова, Е.А. Разработка средств и методов лабораторной диагностики болезни Акабане: дисс. ... к.б.н.: 03.00.06 / Е.А. Балашова, -Покров. ВНИИВВиМ, 1993. - 114 с.

5. Вирусные болезни животных / Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина И.В. - М.: ВНИТИБП, 1998. - 928 с.

6. Вишняков, И.Ф. Дисс. доктора ветеринарных наук. - Покров, 1987. Хранится во ВНИИВВиМ.

7. Вишняков, И.Ф. Диагностика болезни Акабане методом флюоресцирующих антител / Информационный бюллетень // И.Ф. Вишняков, Е.А. Балашова. - Харьков: ИЭКВМ, 1994. - 52 с.

8. Изучение цитопатического эффекта, вызываемого вирусом Акабане, в перевиваемой культуре клеток СУ-1 / Н.В. Черных, Е.А. Балашова, И.Ф. Вишняков, С.А.Витина, С.Ф. Чевелев // Материалы научной конференции ВНИИВВиМ. - Покров, 1992.-Т. 1. - С. 140-141.

9. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. - М., 1990. - 352 с.

10. Маниатис, Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование: пер.с англ. / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук. - М.: Мир, 1984.-480 с.

11. Номенклатура вирусов позвоночных / В.Ю. Луговцев, Д.А. Васильев. -Ульяновск, - 2002. -268 с.

12. ПЦР в реальном времени / Д.В. Ребриков, Г.А. Саматов, Д.Ю. Трофимов, П.А. Семенов, A.M. Савилова, И.А. Кофиади, Д.Д. Абрамов // -М.: Бином. Лаборатория знаний, 2009.- 223 с.

13. Чувствительность перевиваемых линий культур клеток к вирусу болезни Акабане / Балашова Е.А., Вишняков, И.Ф., Чурбанова, Г.Н., Витина, С.А. // Материалы научной конференции ВНИИВВиМ. - Покров, 1992. - Т. 1. - С. 142.

14. Эрнст, Л.К. Иммуноферментная диагностика в животноводстве и ветеринарии / Л.К. Эрнст, Г.Ф. Коромыслов, А.К. Гавдаров // Ж. Всеросс. хим. о-ва. - Москва, 1989. - Т. 34. -№ 1. - С. 86-90.

15. Akabane virus, a new arbovirus isolated in Japan / Oya A. T. Okuno [et al.] // Jpn. J. Med. Sci. Biol. - 1961. - № 14. - P. 101-108.

16. A serological survey of Akabane virus infection in cattle and sheep in northwest China / Q. Jun [et al.] // Trop. Anim. Health. Prod. - 2012. - Vol. 44, № 8.-P. 1817-1820.

17. A survey of antibodies to arthropod-borne viruses in Indonesian castle / Y. Miura [et al.] // Nippon Juigaku Zasshi. - 1982. - Vol. 44. - P. 857-863.

18. Absence of viraemia in cattle after experimental infection with Japanese encephalitis virus / M.A. llkal MA [et al.] // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. -1988,-Vol. 82.-P. 628-631.

19. Aino virus, a new member of Simbu group of arbovirus from mosquitoes in Japan / K. Takahashi [et al.] // Jpn. J. Med. Sci. Biol. - 1968. - Vol. 21. - P. 95101.

20. Akabane virus // The universal virus database, version 4 [online], - New York : Columbia University, 2006.

21. Akabane virus in Israel: a new virus lineage / Y. Stram [et al.] // Virus. Res. -2004.-Vol.104.-P. 93-97.

22. An attenuated strain of Akabane virus: a candidate for live virus vaccine / H. Kurogi [et al.] // Nat. Inst. Anim. Hlth. Quart. - 1979. - Vol. 19. - P. 12-22.

23. Antigenic and genetic comparisons of Japanese and Australian Simbu serogroupviruses: evidence for the recovery of natural virus reassortants / H. Akashi [et al.] // Virus Res. - 1997. - Vol.50. - P.205-213.

24. Anderson,A.A. Experimental placental transfer of Akabane virus in the hamster/A.A. Anderson, C.H. Campbell //Amer. J. vet. Res. - 1978. - Vol. 39. - P. 301-304.

25. Billecocq, A. NSs protein of Rift Valley fever virus blocks interferon production by inhibiting host gene transcription / A. Billecocq [et.al.] // J. of Virology. -2004. - Vol. 78, № 18. -P. 9798-9806.

26. Boom, R. Rapid and simple method for purification of nucleic acids / R.Boom [et al.] // J.ofCl. Microbiology. - 1990. - Vol. 28. -№ 3. - P. 495 - 503.

27. Bouloy, M. Characterization of the 5' and 3' ends of viral messenger RNAs isolated from BHK21 cells infected with Germiston virus (Bunyavirus) / M.Bouloy //Virology. - 1990. -Vol.175. -P.50-5 8.

28. Bovine epizootic encephalomyelitis caused by Akabane virus infection in Korea / J.K. Oem [et.al.] J.Comp. Pathol. - 2012. - Vol. 147, № 2-3. - P. 101 -105.

29. Bridgen, A. Bunyamwerabunyavirus nonstructural protein NSs is a nonessential gene product that contributes to viral pathogenesis / A. Bridgen [et al.] //Proc. Natl. Acad. Sci.USA. -2001. - Vol. 98. - P. 664-669.

30. Blakqori, G. Efficient cDNA-based rescue of La Crosse bunyaviruses expressing or lacking the nonstructural protein NSs / G.Blakqori, F. Weber // J. Virol. - 2005. - Vol.79. - P. 10420-10428.

31. Bridgen, A.Rescue of a segmented negative-strand RNA virus entirely from cloned complementary DNAs / A.Bridgen, R.M.Elliott // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1996.-Vol. 93.-P. 15400-15404.

32. Charles, J.A. Akabane virus / J.A. Charles // Vet. Clin. North. Am. Food Anim. Pract. - 1994. - Vol. 10. - P. 525-546.

33. Chomczynski, P. Single-step method of RNA isolation by acid guanidiniumthiocyanate-phenol-chloroform extraction / P. Chomczynski, N. Sacchi//Anal. Biochem. - 1987. - Vol. 162.-№ 1. - P.156-159.

34. Detection of antiarboviral immunoglobulin G by using a monoclonal antibody-based capture enzyme-linked immunosorbent assay / A.J.Johnson [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 2000. - Vol. 38. - P. 1827-1831.

35. Detection and quantitation of Akabane and Aino viruses by multiplex realtime reverse-transcriptase PCR / Y.Stram [et al.] // J. of V. M. - 2004. - Vol. 116. - P.147-154.

36. Elliott, R.M. Nucleotide sequence analysis of the small (S) RNA segment of Bunyamwera virus, the prototype of the family Bunyaviridae / R.M.Elliott // J. Gen. Virol. - 1989.-Vol. 70. -P.1281-1285.

37. Elliott, R.M. Family Bunyaviridae/ R.M.Elliott [et al.]//Virus Taxonomy. -SanDiego: Academic Press, 2000.

38. Elliott, R.M. Molecular biology of the Bunyaviridae/ R.M. Elliott//J.Gen.Virol. - 1990. - Vol. 71. - P. 501-522.

39. Encephalitis of cattle caused by Iriki isolate, a new strain belonging to Akabane virus / S. Miyazato [et al.] // Nihon JuigakuZasshi. - 1989. - Vol. 51. -№ l.-P. 128-136.

40. Encephalomyelitis associated with Akabane virus infection in adult cows / J.K. Lee [et al.] // Vet. Pathol. - 2002. - Vol. 39. - P. 269-273.

41. Epidemiology, molecular virology and diagnostics of Schmallenberg virus, an emerging orthobunyavirus in Europe/ V. Doceul[et al.]//Vet. Res. - 2013. -Vol. 44. -№1 - Зір.

42. Flick, R. Reverse genetics system for Uukuniemi virus (Bunyaviridae): RNA polymerase I-catalyzed expression of chimeric viral RNAs / R. Flick, R.F. Pettersson//J. Virol.-2001.-Vol. 75.-P. 1643-1655.

43. Functional L polymerase of La Crosse virus allows in vivo reconstitution of recombinant nucleocapsids / G. Blakqori [et al.] // J.Gen.Virol. - 2003. - Vol.84. -P.207-1214.

44. Functional analysis of the noncoding regions of the Uukuniemi virus (Bunyaviridae) RNA segments / K. Flick [et al.] // J. Virol. - 2004. -Vol.78. -P.11726-11738.

45. Garner, G. Akabane [Электронный ресурс] / G. Garner, P. Saville, A. Fediaevsky // Food and Agriculture Organization of the United Nations [FAO]-2003. - Режимдоступа: http://www.spc.int/rahs, свободный. - Загл. сэкрана.

46. Genetic diversity and reassortments among Akabne virus field isolates / T. Kobayashi [et al.] // Virus Res. - 2007. - Vol.130. - P. 162-171.

47. George, T. Isolation or Akabane virus from sentinel cattle and Culicoidesbrevitaris /Т. George [et al.] // Austral. Vet. J. - 1978. - Vol.54. -P.558-581.

48. Growther, I.R. Application of the enzime-linked immunosorbent assay to the detection and identification of foot-and-mouth disease virus / I.R.Growther, Abu E.M.E. Elsain // J. Hyg. - 1979. - Vol. 83.-P. 513-519.

49. History, classification, and taxonomy of viruses in the family Bunyaviridae/ C. Calisher // The Bunyaviridae /ed. R.M. Elliott. - NewYork: Plenum Press, 1996.- 340 p.

50. Ikegami, T. Rescue of infectious Rift valley fever virus entirely from cDNA, analysis of virus lacking the NSs gene, and expression of a foreign gene / T. Ikegami [et al.] // J.Virol. - 2006. - Vol.80. - P.2933-2940.

51. Improved hemagglutination of Simbu group arboviruses with higher sodium chloride molarity diluent / Y. Goto [et al] // Vet. Microbiol. - 1976. - Vol.1. - P. 449-458.

52. Inaba, Y. Akabane virus/Y.Inaba, M. Matsumoto// Virus infections of ruminants. -Amsterdam: Elsevier, 1990. - P. 467-480.

53. Isolation of Akabane virus from the biting midge Culicoidesoxystoma in Japan / H. Kurogi [et al.] // Vet. Microbiol. - 1987. - Vol. 15. - P. 243-248.

54. Isolation of Aino virus from an aborted bovine fetus / Y.Uchinuno [et al.] // J. Vet. Med. Sc. - 1998. - Vol. 60. - P. 1139-1140.

55. Isolation of arboviruses from mosquitoes collected in northern Vietnam / J.E.Bryant [et al.] // Am. J.Trop. Med. Hyg. - 2005. - Vol. 73. -№ 2. - P. 470-473.

56. Isolation of bovine arboviruses from Culicoides biting midges (Diptera: Ceratopogonidae) in southern Japan: 19851-2002 / T.Yanase [et al.] // J.Med. Entomol. - 2005. - Vol.42. - P. 631-667.

57. Isolation of arbor viruses from mosquitoes collected at live-stock pens in Gumma Prefecture in 1959 / T. Matsuyama [et al.] // Jap. J. Med. Sei. Biol. - 1960. -Vol. 13.-P. 191-198.

58. Kahn, C.M. Akabane virus infection [Электронный ресурс] / C.M. Kahn, S. Line// The Merck veterinary manual[online].Whitehouse Station, NJ: Merck and Co, 2006. - Режим доступа: http://www.merckvetmanual.com/mvm/index.jsp. cfile=h tm/bc/50804.html, свободный. - Загл. с экрана.

59. Kahrs, R.F. Akabane and bunyaviruses causing bovine fetal wastage / R.F. Kahrs, I.A. Ames // Viral diseases of cattle. - Iowa State University Press, 2001. -2nd ed. -P.257-261.

60. Kirkland, P.Akabane disease / P.Kirkland, E. Macarthur // Foreign animal diseases. - Boca Raton, FL : United States Animal Health Association, 2008. - 7th edition. - P. 117-123.

61. Kirkland, P.D. Akabane and bovine ephemeral fever virus infections / P.D. Kirkland // Vet. Clin. North. Am. Food Anim. Pract. - 2002. - Vol. 18. - № 3. - P. 501-514.

62. Kitano, Y. A congenital abnormality of calves, suggestive of a new type of arthropod-borne virus infection / Y. Kitano [et al.] // J. Comp. Pathol. - Vol.11. -1994. - P. 427-437.

63. Kurogi, H. Epizootic congenital arthrogryposis-hydranencephaly syndrome in cattle: isolation of Akabane virus from affected fetuses / H.Kurogi // Arch. Virol. - 1976.-Vol. 51.- P. 61-74.

64. Kurogi, H. Experimental infection of calves with Akabane virus/H. Kurogi [et al.]//Bull. Natl. Inst. Anim. Health. - 1977. - Vol.75. - P. 1-8.

65. Kono, R. Bovine epizootic encephalomyelitis caused by Akabane virus in southern Japan [Электронный ресурс] / R. Kono [et al.] // BMC Vet Res. - 2008. -Уо1.4.-режим доступа: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2443122, свободный. - Загл. с экрана.

66. Konno, S. Akabane disease in cattle: congenital abnormalities caused by viral infection. Experimental disease / S. Konno, M. Nakagawa // Vet. Pathol. -Vol.19. - 1982.-P. 267-279.

67. Konno, S. Akabane disease in cattle: congenital abnormalities caused by viral infection. Spontaneous disease / S.Konno [et al.] // Vet Pathol. - 1982. - Vol. 19.-P. 246-266.

68. Key Golgi factors for structural and functional maturation of bunyamwera virus / R.R. Novoa // J. Virol. - 2005. - Vol.79. - P.l0852-10863.

69. Localized conserved regions of the S RNA gene products of bunyaviruses are revealed by sequence analyses of the Simbu serogroupAino virus / H.Akashi [et al.] // Virus Res. - 1984. - Vol. 1. - P.51 -63.

70. Matumoto, M. Akabane disease and Akabane virus / M. Matumoto, Y. Inaba //Kitisato. Arch of Exp. Med. - 1980.- Vol. 53. -№ 1-2.-P. 1-21.

71. Mellor, J.M. Culicoides: biological vectors of Akabane virus / J. M. Mellor [et al.] // Vet. Microbiol. - 1989. - Vol. 21. № 2. - P. 125-131.

72. Metselaar, D. Akabane virus isolated in Kenya / D. Metselaar, Y. Robin // The Veterinary Record. - 1976. - Vol. 99. - P. 86.

73. Myopathy and encephalopathy in chick embryos experimentally infected with Akabane virus / S. Konno [et al.] // Vet. Pathol. - Vol.25. - 1988. - P.l-8.

74. Murray, M.D. Akabane epizoonotis in New South Wales: Evidence for the long-distance dispersal of the biting midge Culicoidesbrevitarsis / M.D. Murray // Australian Veterinary Journal. - 1987. - Vol. 64. -№10. - P. 305-308.

75. Natural infections of pigs with akabane virus / C.C.Huang [et al.] // Vet. Microbiol. - Vol. 94. - 2003. - P. 1-11.

76. Neutralising antibodies to Akabane virus in free-living wild animals in Africa/Al-Busaidy S.M. [et al.]. //- 1987. - Vol.19. - P. 197-202.

77. Notes on the transoceanic insects- captured on East / K.Hayashi [et al.] // Virus infections of ruminants. - Amsterdam : Elsevier, 1979. - P. 467-480.

78. Novel orthobunyavirus in cattle, Europe [Электронныйресурс] / B.Hoffmann [et al.] // Emerg. Infect. Dis. [serial on the Internet]: Centers for diseases control and prevention, 2012 r. - Vol.18, №3. - Режим доступа: http://www.nc.cdc, свободный. - Загл. с экрана.

79. Olson, К.Е. Developing arbovirus resistance in mosquitoes/ K.E.Olson [et al.] //Insect Biochem. Mol. Bio. -2002.-Vol. 32. -№ 10. - P.1333-1343.

80. Outbreaks of Akabane disease of cattle in Korea/U.B. Bak [et al.]// Korean J Vet Res. - 1980. - Vol.20. - P. 65-78.

81. Parsonson, I.M. Bunyavirus pathogenesis / I.M.Parsonson, D.A. McPhee // Adv. Virus. Res. - 1985. - Vol. 30. - P. 279-316.

82. Peaton virus: a new Simbu group arbovirus isolated from cattle and Culicoides brevitarsis in Australia / T.D. George [et al.] // Aust. J. Biol. Sc. - 1980. -Vol.33. - P. 235-243.

83. Physicochemical properties of Akabane virus, a member of the Simbu arbovirus group of the family Bunyaviridae / Takahashi E. [et al.] // Vet. Microbiol. - 1978. -P.45-54.

84. Rift valley fever virus noncoding regions of L, M and S segments regulate RNA synthesis / N. Gauliard [et al.] //Virology.-2006.-Vol.351.-P.170-179.

85. Sambrook, J. Molecular cloning. A laboratory manual / J.Sambrook, D.W.Russell // Cold Spring Harbor, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press.-2001.-P. 132-134.

86. Sequence determination and functiona analysis of the Akabane virus L RNA segment/Y.Ogawa [et al.] // Arch.Virol. - 2007. - Vol. 152. - P.971 - 979.

87. Sequence determination and phylogenetic analysis of the Akabane bunyavirus S RNA genome segment / H. Akashi [et.al.] // J. Gen. Virol. - 1997. -Vol. 78.-P. 2847-2851.

88. Serological evidence for the association of Akabane virus with epizootic bovine congenital arthrogryposis and hydranencephaly syndromes in New South Wales / W.J. Hartley [et al.] //Aust. Vet. J. - 1975. - Vol. 51. - P. 103-104.

89. Serological evidence of Akabane virus infection in northern Israel in 2001 / J. Brenner [et al.] // J. Vet. Med Sc. - 2004. - V. 66. - P.441- 443.

90. Study of Akabane infection is Saudi Arabia by the use of sentinel ruminants / Abu Elzein E.M. [et al.] // J. Comp. Pathol. - 1998. - Vol. 119. - P. 473-478.

91. Smith, M.C. Akabane disease / M.C. Smith, D.M.Sherman // Goat medicine. - Philadelphia: Lea &Febige, 1994. - P. 82-84.

92. Shimshony, S. An epizootic of Akabane disease in bovines, ovines and carprines in Israel, 1969-70: epidemiological assessment / S. Shimshony // ActaMorphol. Acad. Sei. Hung. - 1980. - Vol. 28. - P. 197-199.

93. Schmaljohn, C.S. Bunyaviridae / C.S. Schmaljohn // In Fields Virology. -Philadelphia, P.A.: Lippincott Williams & Wilkins, 2007. - 5th edition. - P. 17411789.

94. Temperature and the persistence of viruses in Culicoides spp. during adverse conditions / R.F. Sellers, P.S. Mellor // Rev. Sei. Tech. OIE. - 1993. - Vol.12. -P. 7331-755.

95. The development of Akabane virus-induced congenital abnormalities in cattle / P.D. Kirkland [et al.] // Vet. Ree. - 1988. - Vol. 122. - P. 582-586.

96. The unique architecture of Bunyamwera virus factories around the Golgi complex / J. Fontana [et al.] // Cell. Microbiol. - 2008. - Vol. 10. - P. 2012-2028

97. The isolation of Akabane virus (Iriki strain) from calves in Taiwan / Y.K. Liao // J. Basic. Microbiol. - 1996. - Vol.36. - P.33-39.

98. Transcription of a recombinant bunyavirus RNA template by transiently expressed bunyavirus proteins / E.F. Dunn [et al.] // Virology. - 1995. - Vol. 211. -P. 133-143.

99. Uchida, K. Detection of Akabane viral antigens in spontaneous lymphohistiocytic encephalomyelitis in cattle / K.Uchida [et al.] // J. Vet. Diagn. Invest. - 2000. - Vol. 12.-№6.-P. 518-524.

100. Ungar-Waron, H. ELISA test for the serodiagnosis of Akabane virus infection in cattle / H. Ungar-Waron, A. Gluckman, Z.Trainin // Trop. Anim. Hlth. Prod. - 1989.-Vol. 21. -№ 3. -P.205-210.

101. Walter Ch.T. Recent advances in the molecular and cellular biology of bunyaviruses / Ch. T. Walter, J. N. Barr // Journal of General Virology. - 2011. -Vol. 92.-P. 2467-2484.

102. Weber, F. Antigenic drift, antigenic shift and interferon antagonists: how bunyaviruses counteract the immune system / F.Weber, R.M.Elliott // Virus Res. -2002.-Vol. 88.-P. 129-136.

103. Yamakawa, M. Chronological and geographical variations in the small RNA segment of the teratogenicAkabane virus / M.Yamakawa [et al.] // Virus Res. -2006.-Vol. 121. -№ l.-P. 84-92.

104. Yanase, T. Isolation of bovine arboviruses from Culicoides biting midges in Southern Japan: 1985-2002 / T.Yanase // J. Med. Entomol. - 2005. - Vol. 42. - P. 63-67.

105. Yanase, T. Sequence analysis of the medium RNA segment of three Simbu serogroup viruses, Akabane, Aino and Peaton viruses / T.Yanase [et al.] // Virus. Res. - 2003. - Vol. 93. - P. 63-69.

106. Yoshida, K. Rapid detection of antigenic diversity of Akabane virus isolates by dot immunobinding assay using neutralizing monoclonal antibodies / K. Yoshida, T. Tsuda// Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 1998. - Vol. 5. - P. 192-198.

107. Yoshida, K. Comparison of intertypic antigenicity of Aino virus isolates by dot immunobinding assay using neutralizing monoclonal antibodies / K.Yoshida [et al.] //J.Clin. Microbiol. -2000. - Vol. 38. - P.4211-4214.