Идентификация возбудителей болезней Шмалленберг и Акабане на основе ПЦР в режиме реального времени тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Никитина, Елена Григорьевна

  • Никитина, Елена Григорьевна
  • кандидат науккандидат наук
  • 2014, Вольгинский
  • Специальность ВАК РФ03.01.06
  • Количество страниц 151
Никитина, Елена Григорьевна. Идентификация возбудителей болезней Шмалленберг и Акабане на основе ПЦР в режиме реального времени: дис. кандидат наук: 03.01.06 - Биотехнология (в том числе бионанотехнологии). Вольгинский. 2014. 151 с.

Оглавление диссертации кандидат наук Никитина, Елена Григорьевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

стр.

Оглавление

Список сокращений

1 ВВЕДЕНИЕ

1.1 Актуальность темы

1.2 Степень разработанности проблемы

1.3 Цель работы и задачи исследования

1.4 Научная новизна результатов исследования

1.5 Теоретическая и практическая значимость

1.6 Степень достоверности и апробация работы

1.7 Публикации по теме диссертации

1.8 Структура и объем диссертационной работы

1.9 Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту

1.10 Личный вклад соискателя

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Краткая характеристика семейства Випуаутс1ае

2.2 Краткая характеристика болезни Акабане

2.2.1 Структура вируса

2.2.2 Устойчивость вируса в объектах внешней среды

2.2.3 Эпизоотологические данные

2.2.4 Вирулентные свойства вируса болезни Акабане

2.2.4.1 Патогенез

2.2.4.2 Клинические признаки

2.2.4.3 Патологоанатомические изменения

2.2.5 Диагностика болезни Акабане

2.2.5.1 Вирусологические методы диагностики

2.2.5.2 Серологические методы диагностики

2.2.5.3 Генодиагностика

2.2.6 Меры борьбы и профилактика

2.3 Краткая характеристика болезни Шмалленберг

2.3.1 Структура вируса

2.3.2 Устойчивость вируса в объектах внешней среды

2.3.3 Эпизоотологические данные

2.3.4 Вирулентные свойства вируса болезни Шмалленберг

2.3.4.1 Патогенез

2.3.4.2 Клинические признаки

2.3.4.3 Патологоанатомические изменения

2.3.5 Диагностика болезни Шмалленберг

2.3.5.1 Вирусологические методы диагностики

2.3.5.2 Серологические методы диагностики

2.3.5.3 Генодиагностика

2.3.6 Меры борьбы и профилактика

2.4 Дифференциальная диагностика болезней Шмалленберг и Акабане

2.5 Филогенетический анализ вирусов

2.6 Заключение по обзору литературы

3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Материалы

3.1.1 Вирусы

3.1.2 Животные

3.1.3 Плазмиды

3.1.4 Культуры клеток

3.1.5 Химические реактивы

3.1.6 Лабораторное оборудование

3.2 Методы

3.2.1 Культивирование вируса болезни Акабане, получение и

титрование вируссодержащего материала

3.2.2 Заражение животных

3.2.3 Выделение нуклеиновых кислот

3.2.4 Выделение и очистка ПЦР - продукта

3.2.5 Постановка реакции обратной транскрипции

3.2.6 Постановка ПЦР с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени

3.2.7 Анализ продуктов ПЦР

3.2.8 Клонирование ПЦР-продукта в плазмидный вектор

3.2.9 Компьютерный анализ и сравнение нуклеотидных повледовательностей, расчет олигонуклеотидов

4 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1 Разработка тест-системы для выявления генома вируса болезни Шмалленберг методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени

4.1.1 Подбор специфических праймеров

4.1.2 Оптимизация условий постановки ПЦР

4.1.3 Конструирование рекомбинантного контроля амплификации к тест-системе для выявления генома вируса болезни Шмалленберг методом ОТ-ПЦР в реальном времени

4.1.4 Подбор внутреннего контроля к тест-системе для выявления генома вируса болезни Шмалленберг методом ОТ-ПЦР в реальном времени

4.1.5 Определение специфичности и чувствительности метода ПЦР

4.2 Разработка тест-системы для выявления геномов вирусов болезней Шмалленберг и Акабане методом мультиплексной ОТ-ПЦР в режиме реального времени

4.2.1 Подбор праймеров

4.2.2 Оптимизация реакции обратной транскрипции

4.2.3 Оптимизация условий постановки ПЦР

4.2.4 Конструирование рекомбинантного контроля амплификации к тест-системе для выявления геномов вирусов болезней Шмалленберг иАкабане методом мультиплексной ОТ-ПЦР в режиме реального времени

4.2.5 Определение специфичности и чувствительности метода ПЦР

4.3 Выявление генома вируса болезни Акабане в крови и пробах органов от экспериментально зараженных животных

4.4 Проведение мониторинговых исследований на наличие болезни Шмалленберг на территории отдельных субъектов Российской Федерации

5 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

6 ВЫВОДЫ

7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

8 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Приложения

Список принятых сокращений и обозначений

АГС - артрогрипоз-гидроцефалический синдром

БА - болезнь Акабане

БШ - болезнь Шмалленберг

ВАК - Высшая аттестационная комиссия

ВБА - вирус болезни Акабане

ВБШ - вирус болезни Шмалленберг

ВНИИВВиМ - Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной

вирусологии и микробиологии

ГНУ - Государственное научное учреждение

ГТЦ - гуанидинтиоцианат

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

дНТФ (dNTP) - дезоксирибонуклеозидтрифосфат

ИФА - иммуно ферментный анализ

кДНК - комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота

КРС - крупный рогатый скот

КС - культура клеток насекомых

ЛДР - лихорадка долины Рифт

мин - минута

мкг - микрограмм

мкл - микролитр

мл - миллилитр

ммоль - миллимоль

пмоль (рМ) - пикамоль

MPC - мелкий рогатый скот

МФА - метод флюоресцирующих антител

МЭБ - Международное эпизоотическое бюро

ОТ-ПЦР - обратная транскрипция - полимеразная цепная реакция

п.н. / п.о. - пара нуклеотидов / пара оснований

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ПС - перевиваемая линия клеток почки сайги

ПСГК - перевиваемая линия клеток почки сибирского горного козерога

ПЯ - перевиваемая линия клеток почки ягненка

РАСХН - Российская академия сельскохозяйственных наук

РДП - реакция диффузионной преципитации

РЗГА - реакция задержки гемагглютинации

РН - реакция нейтрализации

РНК - рибонуклеиновая кислота

РСК - реакция связывания комплемента

РФ - Российская Федерация

сек - секунда

ТФ ИФА - твердофазный иммуноферментный анализ

i л

ТЦД50/см - 50 %-ная тканевая цитопатогенная доза вируса в 1 см

УФ-облучение — ультрафиолетовое облучение

ЦНС - центральная нервная система

ЦПД - цитопатическое действие

ч - час

шт. - штамм

ЭГБО - эпизоотическая геморрагическая болезнь оленей ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

ВНК-21/13 - перевиваемая линия клеток почки новорожденного хомячка CV-1 - перевиваемая линия клеток почки африканской зеленой мартышки HmLu-1 - культура клеток легких хомяка lg - логарифм с основанием

рН - обратный десятичный логарифм концентрации ионов Н+

VERO - перевиваемая линия клеток почки африканской зеленой мартышки

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», 03.01.06 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Идентификация возбудителей болезней Шмалленберг и Акабане на основе ПЦР в режиме реального времени»

1 ВВЕДЕНИЕ

1.1 Актуальность темы

Для успешного развития животноводства в России большое значение имеют меры, направленные на разработку и совершенствование средств и методов диагностики инфекционных болезней животных.

В связи с многообразием экономических, туристических и культурных связей с ближним и дальним зарубежьем не исключается возможность заноса и распространения на территорию Российской Федерации (РФ) возбудителей экзотических инфекций.

Семейство Bunyaviridae — это большая группа вирусов, поражающая позвоночных, членистоногих и растения; отдельные представители этого семейства, такие как лихорадка долины Рифт, Тягиня, Конго-крымская геморрагическая лихорадка вызывают опасные заболевания у животных и человека. В состав семейства входит более 300 вирусов, которые классифицированы в 5 родов (Tospovirus, Phlebovirus, Hantavirus, Nairovirus и Orthobunyavirus) и передаются кровососущими насекомыми и грызунами.

Одним из значимых представителей семейства Bunyaviridae является род Orthobunyavirus, объединяющий вирусы, патогенные для крупного и мелкого рогатого скота. Представителями данного рода являются близкородственные вирусы болезней Акабане, Айно, Шамонда, Дуглас, которые циркулируют в Юго-Восточной Азии, а также новый вирус болезни Шмалленберг, недавно выделенный в Европе.

Болезнь Акабане (БА) — зоонозная, арбовирусная болезнь крупного и мелкого рогатого скота, характеризующаяся абортами, мертворождениями и различными пороками развития, объединяемыми под общим названием артрогрипоз-гидроцефалический синдром (АГС). Антитела к вирусу болезни Акабане были обнаружены у буйволов, лошадей, верблюдов, свиней и обезьян [5, 41]. Этиологический агент — вирус болезни Акабане — является представителем рода Orthobunyavirus семейства Bunyaviridae [5, 41, 93]. У стельных животных,

инфицированных вирусом Акабане, обычно не развивается каких-либо клинических симптомов.

Вирус переносится кровососущими насекомыми - обычно мелкими

комарами и мокрецами родов Culi со ides ~Aedesи Си/ехГ Также вирус может быть-------

выделен от москитов рода Anopheles. Болезнь Акабане широко распространена в странах Азии, Африки и Австралии [5,41].

В августе 2011 года было зарегистрировано массовое заболевание дойных коров в районе Северной Рейн-Вестфалии (Германия) и на северо-западе Нидерландов. Заболевание проявлялось диареей, повышением температуры тела (до 40°С и выше), снижением молочной продуктивности (более чем на 50 %), отказом от корма и абортами. В пораженных стадах в течение нескольких недель заболевало 20-70 % поголовья. Клинические признаки исчезали через несколько суток после начала заболевания [8, 80].

В ноябре 2011г. сотрудниками Института Фридриха Леффлера (Германия) был выделен вирус неизвестной этиологии [78, 80]. В результате метагеномного анализа был сделан вывод о наличии в исследованных образцах генома с высокой степенью гомологии к геномам представителей рода Orthobunyavirus семейства Bunyaviridae. Дальнейшие исследования выявили наибольшую степень гомологии обнаруженного вирусного генома с геномами вирусов болезней Акабане и Айно (60-95%). В соответствии с географическим расположением ферм, из которых поступил биоматериал, возбудитель был назван вирусом болезни Шмалленберг (ВБШ) [80, 94].

Спустя месяц диагноз на болезнь Шмалленберг был поставлен и в других странах Европы. Так, например, в декабре 2011 года в научно-исследовательском эпидемиологическом институте здоровья животных имени Фридриха Леффлера (FLI) в Германии были исследованы образцы органов от нескольких абортированных ягнят с такими пороками развития, как артрогрипоз, искривление шеи, сколиоз, гидроцефалия и гипоплазия. Методом ПЦР в реальном времени геном вируса болезни Шмалленберг обнаружен в образцах из 5 различных ферм Восточной Фландрии (Бельгия).

Вирус Шмалленберг вызывает болезнь у КРС, овец и коз с клиническими признаками, аналогичными симптомам при болезни Акабане [80]. Антитела к вирусу были обнаружены у косуль, оленей, альпака, муфлона и бизона. В настоящее время болезнь зарегистрирована более чём ¿"двадцати странах Европы [8, 66, 78, 80, 131].

В связи со сходством клинической картины, патологических изменений и родства вирусов болезней Шмалленберг и Акабане актуальным становится вопрос их дифференциации. Немаловажной причиной разработки методов ПЦР-диагностики этих инфекций является тот факт, что на территории РФ широко распространены основные векторы-переносчики болезней Шмалленберг и Акабане (Culicoides obsoletus, Culicoides dewulfi, Culicoides brevitarsis и Culicoides punctatus), а значит нельзя исключать вероятность распространения возбудителей этих болезней на территории нашей страны [5,8].

1.2 Степень разработанности проблемы

Изучению вирусов болезней Шмалленберг и Акабане посвящено большое количество работ зарубежных и отечественных исследователей [1, 2, 3, 4, 5, 8, 47, 60, 63,73,75,78, 119, 122].

Для лабораторной диагностики болезни Акабане за рубежом используются различные молекулярно - генетические и серологические методы [1, 2, 14,16].

В России также разработаны средства ПЦР-диагностики болезни Акабане (БА) [3, 4, 5, 41]. Так, Е.О. Хан с соавторами при создании тест-систем для идентификации генома вируса болезни Акабане (ВБА) на основе ОТ-ПЦР с электрофоретической детекцией и ОТ-ПЦР в реальном времени были подобраны олигонуклеотидные праймеры, фланкирующие фрагменты S - сегмента гена нуклеокапсидного белкаМ [41].

Для диагностики болезни Шмалленберг разработаны и применяются два основных метода: непрямой вариант ИФА и ОТ-ПЦР в реальном времени [66, 78]. Также вирус можно выделять на культуре клеток VERO; на культуре клеток

насекомых Culicoides variipennis larvae cells (КС - клетки) с последующим пересевом на культуру клеток ВНК-21/13 [4, 19].

Отсутствие в научной литературе данных о создании в РФ способа диагностики болезни Шмалленберг методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени, а также метода дифференциальной диагностики болезней Шмалленберг и Акабане на основе мультиплексной ОТ-ПЦР в режиме реального времени, свидетельствует о необходимости и своевременности их разработки.

1.3 Цель и задачи исследования

Целью данной работы являлась разработка тест-систем на основе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени для идентификации возбудителей болезней Шмалленберг и Акабане.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Подобрать оригинальные олигонуклеотидные праймеры для амплификации фрагмента генома вируса болезни Шмалленберг.

2. Разработать тест-систему для выявления генома вируса болезни Шмалленберг методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, определить её специфичность и чувствительность.

3. Разработать тест-систему для выявления и дифференциации геномов вирусов болезней Шмалленберг и Акабане на основе мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, определить её специфичность и чувствительность.

4. Оценить возможность использования разработанных тест-систем для выявления геномов вирусов болезней Шмалленберг и Акабане в крови и пробах органов от животных.

1.4 Научная новизна результатов исследования

Подобраны оригинальные праймеры и разработана отечественная тест-

.t

система на основе ОТ-ПЦР в реальном времени для выявления генома вируса болезни Шмалленберг, научная новизна которой подтверждена патентом на изобретение. Бюл. № 14 от 20.05.2014 г.

Впервые в Российской Федерации разработана тест-система на основе мультиплексной ОТ-ПЦР в режиме реального времени для выявления и дифференциации геномов вирусов болезней Шмалленберг и Акабане.

1.5 Теоретическая и практическая значимость

Подобранная система из четырех олигонуклеотидных праймеров и двух ДНК-зондов, меченных разными красителями, позволяет одновременно выявлять и дифференцировать геномы близкородственных вирусов болезней Шмалленберг и Акабане.

Разработаны «Методические положения по выявлению генома вируса болезни Шмалленберг методом обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции в реальном времени», которые утверждены академиком-секретарем Смирновым A.M. 15.08.2012 г.

Разработаны «Методические положения по выявлению геномов вирусов болезней Шмалленберг и Акабане методом мультиплексной ОТ-ПЦР в режиме реального времени», которые утверждены директором института 31.03.2014 г.

Разработан Стандарт ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии «Тест-система для выявления генома вируса болезни Шмалленберг методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени» (СТО 00495549-0102-2013). Данный стандарт одобрен ученым советом и утвержден директором института 01.05.213 г.

С помощью «Тест-системы для выявления генома вируса болезни Шмалленберг методом ОТ-ПЦР в реальном времени» за 2012 - 2014 гг. было исследовано более 700 проб крови от животных из различных областей Российской Федерации.

1.6 Степень достоверности и апробация работы

Степень достоверности результатов проведённых исследований подтверждена статистическими исследованиями и комиссионными испытаниями. Акты комиссионных испытаний утверждены директором ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии 22.05.2012 г. и 17.03.2014 г. Статистическая обработка включала расчёты средних арифметических значений и стандартных отклонений результатов ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Научные положения, выводы и практические предложения диссертационной работы аргументированно отражают содержание диссертации.

Основные результаты исследований по теме диссертационной работы были доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии в 2012-2014 гг.; научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы инфекционной патологии в ветеринарной медицине» ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии (г. Покров, 2012 г.); на выездном заседании секции «Ветеринарной биотехнологии» ВНИТИБП (г. Щелково, 2012 г.); на 2-м конгрессе Европейской ассоциации ветеринарной лабораторной диагностики (EAYLD) (Польша, 2012 г.); на 7-ой Ежегодной Встрече EPIZONE "Nothing permanent, except change" (Бельгия, 2013 г.) и на 7-ой всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика-2014» (г. Москва, 2014 г.).

1.7 Публикации по теме диссертации

По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ в соавторстве, в том числе 4 в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ: «Ветеринария» и «Сельскохозяйственная биология».

1.8 Структура и объем диссертационной работы

Диссертация изложена на 133 страницах машинописного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения и список литературы, который включает 139 источников, в том числе 43 на русском языке и 96 зарубежных авторов; дополнена приложениями. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 41 рисунками. В приложении представлены документы, подтверждающие достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.

1.9 Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту

1. Тест-система для выявления генома вируса болезни Шмалленберг методом ОТ-ПЦР в реальном времени обладает высокой чувствительностью и специфичностью и позволяет выявлять РНК вируса болезни Шмалленберг.

2. Мультиплексный вариант ОТ-ПЦР с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени чувствительный и специфичный метод, который позволяет выявлять и дифференцировать между собой РНК геномов вирусов болезней Шмалленберг и Акабане.

3. Результаты исследований по использованию разработанных вариантов ПЦР для идентификации генома вируса болезни Акабане в крови и пробах органов от экспериментально зараженных животных и генома вируса болезни Шмалленберг в образцах биоматериала от импортированного КРС и КРС хозяйств Российской Федерации.

1.10 Личный вклад соискателя

Основной объем представленных в диссертационной работе исследований, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены

автором самостоятельно. Отдельные этапы экспериментальных работ выполнены совместно с сотрудниками лабораторий Биофизики и Диагностики (ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии), а также Референтной лаборатории болезней крупного рогатого скота (ФГБУ «ВНИИЗЖ»).

В выполнении исследований по разделам 3 и 4 диссертации консультативную помощь оказывали: ведущий научный сотрудник лаборатории Диагностики, кандидат биологических наук Балашова Е.А. (освоение серологических методов); зав. лабораторией Арбовирусных инфекций, кандидат биологических наук Сальников Н.И. (освоение молекулярно-биологических методов, эксперименты по заражению животных), старший научный сотрудник Референтной лаборатории болезней крупного рогатого скота, кандидат биологических наук Спрыгин A.B. (предоставление панели положительных образцов), за что автор выражает им глубокую признательность.

Диссертационная работа выполнена в ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии в 2011-2014 гг.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Краткая характеристика представителей семейства Bunyaviridae

Семейство Bunyaviridae — это большая группа вирусов, поражающая позвоночных, членистоногих и растения. Отдельные представители этого семейства, такие как лихорадка долины Рифт, Тягиня, Конго-Крымская геморрагическая лихорадка, болезнь Найроби, вызывают опасные заболевания у животных и человека [9, 31, 37, 41, 48, 67, 120].

В состав семейства входит более 300 вирусов, которые передаются кровососущими насекомыми и грызунами (рисунок 1).

Vectors of the Bunyaviridae

Orthobunyavirus

^alifornie / Bunyamwera Simbu

Nairovirus

ш

Schmalfenberg

Tospovirus 4

г ■""""" «

Рисунок 1 — Переносчики Буньявирусов (S. Zientara, 2012)

Семейство Bunyaviridae состоит из пяти родов: Tospovirus, Phlebovirus, Hantavirus, Nairovirus и Orthobunyavirus [15,22,48,66,71,120]. За исключением представителей рода Hantavirus, передача вируса происходит при помощи векторов - переносчиков (москиты, клещи, комары) (рисунок 1, таблица 1).

Таблица 1 - Характеристика семейства Bunyaviridae [5, 7, 15, 22, 31, 37, 41,48, 72]

Род Представители Переносчики Распространение

Phlebovirus (23 вируса) Вирус лихорадки долины Рифт, сицилийской москитной лихорадки и др. москиты рода Phlebotomus, мокрецы рода Aedes Африка, Америка, Азия, Европа

Hantavirus (6 вирусов) Вирус геморрагической лихорадки с почечным синдромом, Каньона Муэрто и др. мышевидные грызуны Европа, Америка, Азия

Nairovirus (33 вируса) Вирус Найроби, Конго-Крымской геморрагической лихорадки и др. иксодовые клещи рода Hyalomma Африка, страны Ближнего Востока, Центральной Азии, Балканы, Китай, юг России

Orthobunyavirus (170 вирусов) Вирус Акабане, Айно, Шмалленберг, Шамонда и др. мокрецы и мелкие комары родов Aedes, Culicoides Африка, Азия, Европа

Вирионы буньявирусов представляют собой округлые или плеоморфные частицы диаметром 80 - 120 нм. Они состоят из нукпеокапсида спиральной симметрии и липопротеиновой оболочки, на поверхности которой имеются выступы длиной 5-10 нм. Нуклеокапсид представлен тремя спиральными нитями диаметром 2,0 - 2,5 нм и длиной 0,2 - 3,0 мкм. Плавучая плотность вирионов в хлориде цезия составляет 1,2 г/см3, коэффициент седиментации 350 -500 S. Вирусы чувствительны к жирорастворителям и детергентам [5, 9, 14, 37, 41].

Геном представлен тремя различными по размеру фрагментами однонитчатой РНК негативной полярности, обозначаемых, в зависимости от размера, как L (long; 2,2 - 4,9 мД), М (medium; 1,0 - 2,3 мД) и S (short; 0,28 - 0,8 мД) (рисунок 2). Кольцевые формы образуются за счет комплементарных

последовательностей нуклеотидов на 5'- и 3'- концах РНК. Коэффициенты седиментации фрагментов РНК: Ь-фрагмент-23-288, М-фрагмент - 24 - 26 Б и 8-фрагмент - 14 - 16 в [5, 9, 31, 41, 71].

^ Быстр! 5-10 в»

Лкпидкая оболочка

Нуклеокапсид 10 -12 км,

«шральиый, с шириной тяжа •• 3 ш(

Рисунок 2 - Схематическое изображение структуры буньявируса. Нуклеокапсиды (внутренние, спиральные, кольцевые): 1—Ь-РНК + (К + Ь) - белки; 2 — М-РНК + (вп + вс) -белки; 3 — 8-РНК + (И + Ь) - белки (V. Эосеи! [ег а1.], 2013)

Буньявирусы распространены практически повсеместно на всех материках и имеют широкий круг позвоночных хозяев (рисунок 3). Более 50% их связано с грызунами и зайцеобразными, около 25 % - с птицами, около 25% - с жвачными и другими домашними животными, ряд вирусов - с сумчатыми, летучими мышами, приматами и др. [37].

Одним из значимых представителей семейства Випуау1Шае является род ОпкоЬипуауггиз, объединяющий вирусы патогенные для крупного и мелкого рогатого скота. Представителями данного рода являются близкородственные вирусы болезней Акабане, Айно, Шамонда, Дуглас, которые циркулируют в Юго-Восточной Азии, а также новый вирус болезни Шмалленберг, недавно выделенный в Европе.

Schmallenberg

Akabarte

Aino/Akabane

Sathuperi

Shuni

go ä? Mk Shamonda

Akabane

Simbu

Douglas

Рисунок 3 - Распространение вирусов рода Orthobunyavirus семейства BUNYAVIRIDAE в мире (В. Hoffmann, М. Beer [et al.], 2013)

2.2 Краткая характеристика болезни Акабане

Болезнь Акабане - вирусная трансмиссивная болезнь крупного и мелкого рогатого скота, характеризующаяся абортами, рождением нежизнеспособных и уродливых телят или мертвых плодов [33, 44, 65, 104, 107]. У нестельных коров болезнь протекает в субклинической форме [5, 41].

Ареал распространения болезни до сих пор не установлен окончательно. С 1959 г. болезнь регистрируют в Японии, с 1972 г. — в Австралии и Новом Южном Уэльсе, с 1969 - 70 гг. - в Израиле, Корее и Кении [15, 41, 79, 100, 129]. Болезнь протекает в виде обширных эпизоотии с охватом большого поголовья, характеризуется географической приуроченностью, выраженной сезонностью (август - октябрь, февраль) и периодичностью возникновения с интервалом в несколько лет [33, 65, 98, 100,132].

Возбудителем является вирус серогруппы БтЬи рода ОмкоЬипуаУ1гт семейства ВипуюШае (таблица 2) [1, 38, 44, 53, 90, 98, 104, 117, 119, 132].

Таблица 2 - Географическое распределение вирусов серогруппы Simbu [75, 124]

Серо-группа Представители Аббревиатура Переносчики Распространение

Simbu Akabane AKA Aedes, Culicoides Австралия, Израиль, Япония, Индия, Корея, Кения, Судан

Aino AINO Aedes, Culicoides Австралия, Япония, Корея

Douglas DOU Aedes, Culicoides Австралия

Sathuperi SAT Aedes, Culicoides Индия, Япония, Нигерия

Shamonda SHA Aedes, Culicoides Япония, Нигерия

Schmallenberg SBV Aedes, Culicoides Страны Европы

Поражение большого числа продуктивных животных, сопровождающееся абортами, преждевременными родами и патологическими явлениями у

новорожденных, свидетельствует о значительных экономических потерях [56, 57, 129, 139].

В связи с многообразием туристических и культурных связей со странами, где зарегистрирована данная болезнь и схожими климатическими условиями не исключается возможность заноса на территорию Российской Федерации (РФ) возбудителя данной экзотической инфекции.

2.2.1 Структура вируса

Электронно-микроскопическое изучение негативно окрашенных, очищенных препаратов вируса и ультратонких срезов инфицированных клеток и тканей показало, что вирус Акабане (ВА) по морфологии и морфогенезу сходен с представителями семейства Bunyaviridae, в частности с вирусами Уукуниеми и лихорадки долины Рифт (ЛДР) и репродукция вируса происходит в цитоплазме [5,41].

Вирус болезни Акабане в отличие от других РНК-содержащих оболочечных буньявирусов с негативным геномом не имеет мембранного или матриксного белка, а белок нуклеокапсида непосредственно прилегает к внутренней поверхности двуслойной липидной оболочки [1, 38, 54].

Форма вирионов БА сферическая с диаметром от 90 до 100 нм. Отдельные вирионы имеют диаметр 130 нм. Вирион содержит 58 - 70% белка, 20 - 33% липидов, 7% углеводов и 1 - 3 % РНК. Молекулярная масса составляет 280 - 400 мД, а коэффициент седиментации 450 S. Вирионы состоят из двуслойной липидной оболочки толщиной 10-12 нм, на поверхности которой имеются выступы длиной 5 — 10 нм. При обработке вирионов протеолитическими ферментами эти выступы удаляются, при этом инфекционность вирионов резко падает [1, 2, 33, 82, 84, 102]. Центральное место в вирионе занимает одноцепочечная минус-нитевая сегментированная РНК.

Геном вируса болезни Акабане состоит из 3 различных по размеру сегментов РНК, обозначаемых как L (long) - большого, кодирующего РНК-

полимеразу (транскриптазу); М (medium) - среднего, кодирующего поверхностные гликопротеины (Gi и G2), и S (short) - малого, кодирующего нуклеокапсидный белок (N) и неструктурный протеин (NSm) (рисунок 4). При более детальном изучении структуры генома установлено, что сегменты редко оказываются в равном соотношении и обычно преобладает S - сегмент [41].

У РНК L - сегмента коэффициент седиментации составляет 29 S и размер 6765 нуклеотидов; у РНК М - сегмента - 23 S и 4212 нуклеотидов; у S - сегмента РНК - 17 S и 702 нуклеотидов [2, 9, 38, 41,48, 104].

. 6765 nt (2254 аа>

L.ORF

!

wd , 4212 nt (1403 аа) , wc

М Gn/NSmKSc ORF " . I J 3'

h

702 nt (233 aa)

N ORF

s

NC I NSs ORF L«rJ

276 nt <91 аа>

Рисунок 4 - Структура генома вируса болезни Акабане (V. Doceul, 2012)

2.2.2 Устойчивость вируса в объектах внешней среды

Все буньявирусы чувствительны к колебаниям температуры, поэтому для сохранения вируссодержащего материала важно быстрое его охлаждение до минус 80 - 120 °С. В крайнем случае, для кратковременного хранения или транспортировки проб, можно использовать 50%-ый глицерин в щелочном буфере при 4 °С. Лучшему хранению способствует добавление к вирус-содержащей суспензии 20%-го сывороточного белка или 25%-ой кроличьей сыворотки крови [5,20].

Вирус болезни Акабане относительно стабилен при значениях рН от 7 до 9, быстро инактивируется при рН = 3 и при + 56 °С, УФ - облучении, чувствителен к жирорастворителям и детергентам [5, 20, 16, 22, 31].

2.2.3 Эпизоотологические данные

Вирус болезни Акабане широко распространен в странах Азии, Африки и Австралии [110]. В естественных условиях болеют КРС, овцы и козы [83, 108]. Антитела к вирусу болезни Акабане были обнаружены у буйволов, лошадей, верблюдов, свиней и обезьян [5, 104, 129]. Впервые вирус был выделен от комаров, выловленных летом 1959 года в Японии [54, 111]. Затем в разные годы он был выделен от животных в Южной Африке, Кении, Израиле, Корее, Кипре, Тайвани, Северной Сирии. В Австралии вирус был обнаружен у клинически здорового буйвола [33, 53, 56, 57, 83, 104, 129, 132].

За последние 14 лет были зарегистрированы 2 вспышки болезни Акабане: первая - в сентябре 2000 г. в Корее (при исследовании проб головного и спинного мозга от КРС с симптомами болезни), вторая - в августе 2006 г. в Японии, где было выделено 12 изолятов [97, 101].

Заболевание характеризуется приуроченностью к определенным территориям, сезонностью и периодичностью проявления с интервалом в несколько лет, протекает в форме обширных эпизоотий с охватом большого поголовья [5,41].

Вирус болезни Акабане распространяется двумя путями: трансмиссивным и трансплацентарным. Основной путь распространения вируса болезни Акабане -это заражение взрослых животных через укус инфицированных переносчиков. Установлено, что основными векторами являются мокрецы рода Culicoides [79, 87,98, 53].

В качестве переносчиков вируса в Японии зарегистрированы комары и мокрецы Culicoides oxistoma, Aedes vexans и Culex tritaeniorhynchus, в Австралии - Culicoides brevitarsis, Culicoides nubeculosus, Culicoides variipennis [44, 56, 67, 69, 104, 110, 129, 130].

При исследовании большого количества насекомых других видов в конце XX - начале XXI века (Япония, 1972 г; Турция, 1977 г; Сирия, 1979 г; Корея, 1980 г; Япония, 2006 г), вирус не удалось выделить [5, 22, 41]. Также не удалось

заразить вирусом в лабораторных условиях комаров родов Culex annulirostis и Aedes vigilax [5].

Японские исследователи Matumoto и Inaba также не смогли инфицировать в экспериментальных условиях комаров Culex tritacnorhynchus, хотя от этого вида был выделен вирус в эпизоотическом очаге [130].

Другой путь передачи вируса вертикальный — через плаценту от инфицированных матерей к эмбрионам. У инфицированных самок (нетели, овцематки) вирус поражает плод, и как следствие развиваются уродства, приводящие к внутриматочной смерти. Такая персистирующая инфекция обеспечивает длительное сохранение вирусной популяции даже при отсутствии чувствительных позвоночных хозяев [56, 67, 68, 111, 129].

В настоящее время не установлено, где сохраняется вирус в межэпизоотический период, способны ли насекомые к трансовариальной передаче или роль резервуаров выполняют позвоночные животные [84, 99, 102].

2.2.4 Вирулентные свойства вируса болезни Акабане 2.2.4.1 Патогенез

Патогенез болезни Акабане достаточно хорошо изучен. Вирус попадает в организм стельных коров через укусы кровососущих насекомых. Затем он проникает через плаценту в плод, обусловливая поражение центральной нервной системы в виде негнойного энцефаломиелита, полимиозита, приводящих к аборту, рождению нежизнеспособных плодов [33].

Основные особенности патогенеза вируса зависят от срока стельности коров на момент заражения. При заражении на ранних сроках у плода развивается слабый паралич и отмечается наибольшее число абортов, на 5-6 месяце - артрогрипоз, на 3 - 4 месяце - гидроцефалия. У овец и коз наблюдается артрогрипоз и гидроцефалия плода. Если заражение у

КРС происходит на более поздних сроках, то поражается главным образом головной и спинной мозг плода [26].

2.2.4.2 Клинические признаки

Заболевание характеризуется сезонностью и периодичностью проявления с интервалом в несколько лет, протекает в форме эпизоотий с охватом большого поголовья [53, 54,100].

Инкубационный период болезни Акабане в естественных условиях точно не определен. При экспериментальном заражении стельных коров (62 - 96 дни стельности) вирус был выделен из тканей плода уже на 18 день после заражения, при этом все новорожденные телята были поражены вирусом [33, 44, 57, 89, 92]. У нестельных коров болезнь протекает в субклинической форме.

Клиническая картина болезни у чувствительных животных является сходной. У инфицированного крупного и мелкого рогатого скота появляются плоды с врожденными уродствами: изменения в обеих височных долях головного мозга, водянка головного мозга, артрогрипоз, желтуха, иногда слепота, незначительные вывихи ног с неустойчивой походкой, слабое развитие, у некоторых паралич языка [33, 67, 75].

Похожие диссертационные работы по специальности «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», 03.01.06 шифр ВАК

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Никитина, Елена Григорьевна, 2014 год

8 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Арбовирусы и арбовирусные инфекции / Д.К. Львов, С.М. Клименко, С.Я. Гайдамович [и др.]. - М.: Медицина, 1989. - 336 с.

2. Бакулов, И.А. Эпизоотология с микробиологией: учеб. пособие. - 2-е изд., стер. / И.А. Бакулов, В.А. Ведерников, А.Л. Семенихин. - М.: Колос, 2000. -480 с.

3. Балашова, Е.А. Идентификация вируса болезни Акабане с помощью серологических методов исследований / Е.А. Балашова // Ветеринария. -2012.-№ 10.-С. 56-57.

4. Балашова, Е.А. Перспектива использования лабораторных животных и куриных эмбрионов для выделения вируса болезни Акабане / Е.А. Балашова, Н.И. Сальников, Е.О. Жабон // Молекулярная диагностика - 2010: сборник трудов VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - М., 2010. - Т. II. - С. 56.

5. Балашова, Е.А. Разработка средств и методов лабораторной диагностики болезни Акабане: дис. ... канд. биол. наук: 03.00.06 / Балашова Елена Алексеевна; ВНИИВВиМ. - Покров, 1993.- 123 с.

6. Биология вирусов животных. В 2-х томах: Т. 1 / Ф. Феннер, Б. Мак -Ослен, С. Миме [и др.].- М.: Мир, 1977. - 447 с.

7. Болезни, вызываемые вирусами: болезнь Акабане [электронный ресурс]. -Режим доступа: http://diseasecattle.ru/bolezni-vyzyvaemye-virusami/bolezn-akabane.html, свободный. - Загл. с экрана.

8. Болезнь Шмалленберга: молекулярно-биологические особенности и клиническая картина / A.B. Спрыгин, A.B. Кононов, Ю.Ю. Бабин, В.А. Мищенко // Сельскохозяйственная биология. - 2012. - № 6. - С. 24-34.

9. Букринская, А.Г. Вирусология / А.Г. Букринская. - М.: Медицина, 1986. -336 с.

10. В Азербайджане число зараженного вирусом скота продолжает снижаться [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.trend.az/ capital/ business/2195286.html, свободный. - Загл. с экрана.

11. В Северном Казахстане были уничтожены триста коров, зараженных вирусом Шмалленберга, а в Западном Казахстане они гибнут от бешенства [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://russian.china.org.cn/ international/txt/2013-02/19/content_27991998.htm, свободный. - Загл. с экрана.

12. В Тверской области появились первые очаги болезни [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://rg.ru/2013/04/08/reg-cfo/infekciya-anons.html, свободный. - Загл. с экрана.

13. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А .Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина. - М.: ВНИТИБП, 1998. - 928 е.: ил.

14. Вирусология. В 3-х томах: Т. 1 / под ред. Б. Филдса [и др.]; пер. с англ. - М.: Мир, 1989.-494 с.

15. Вирусология. В 3-х томах: Т. 2 / под ред. Б. Филдса [и др.]; пер. с англ. - М.: Мир, 1989.-494 с.

16. Гайдамович С.Я. Арбовирусы: классификация и таксономия // Арбовирусы. -М., 1986.-С. 5-15.

17. Жданов, В.М. Общая и частная вирусология. В 2-х томах: Т. 1 / В.М. Жданов, С.Я. Гайдамович. - М.: Медицина, 1982. - 494 с.

18. Заболевание крупного рогатого скота "болезнь Шмалленберг" выявлено на территории Нижегородской области [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.niann.ru/?id=432255, свободный. - Загл. с экрана.

19. Изучение цитопатического эффекта, вызываемого вирусом Акабане, в перевиваемой культуре клеток CV-1 / Н.В. Черных, Е.А. Балашова, И.Ф. Вишняков [и др.]. // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: материалы научной конференции ВНИИВВиМ, 13-18 апреля 1992 г.-Покров, 1992. -4.1. - С. 140-141.

20. Информационный бюллетень Института Экспериментальной Клинической Ветеринарной медицины / В.А. Бусол, В.Ф. Бабкин, В.В. Герман [и др.]. - Харьков: Украинская академия аграрных наук, 1995. -352 с.

21. Карантинные и малоизвестные болезни животных / Н.И. Архипов, И.А. Бакулов, В.А. Балабанов [и др.]. -М.: Колос, 1983. - 351 с.

22. Классификация и номенклатура вирусов позвоночных: учебное пособие для студентов высших учебных заведений по специальности 31.08.00 «Ветеринария» / Д.А. Васильев, В.Ю. Луговцев, A.A. Колонцов [и др.]. -Ульяновск, 2002. - 268 е.: ил.

23. Контроль персистенции вируса болезни Акабане в культуре клеток VERO с помощью прямого метода иммунофлюоресценции / О.Ю. Котова, Е.О. Хан, С.Д. Кушнир [и др.] // Научный журнал КубГАУ. - 2012. - № 83 (09). -С. 37-46.

24. Львов, Д.К. Буньявирусы / Д.К. Львов // Успехи современной биологии, 1981. - Т. 92. - С. 223 - 242.

25. Лярски, Э. Диагностика вирусных болезней животных / Э. Лярски. - М.: Колос, 1980. - гл. 7. - С. 196-202.

26. Малахова, М.С. Морфологическая характеристика вируса Акабане / М.С. Малахова, Е.А. Балашова // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: тез. докл. науч. конф. / ВНИИВВиМ. — Покров, 1990.-С. 83 - 84.

27. Маниатис, Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фриг, Дж. Сэмбрук; пер. с англ. - М.: Мир, 1984.-480 с.

28. Методические положения по выявлению РНК вируса болезни Акабане методом полимеразной цепной реакции / Д.В. Колбасов, С.Ж. Цыбанов, Ю.О. Селянинов, Е.А. Балашова, Е.О. Жабон, Н.И. Сальников; ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии. - Покров, 2011. - Юс.

29. Методические положения по выявлению генома вируса болезни Шмалленберг методом полимеразной цепной реакции в реальном времени / Д.В. Колбасов, С.Ж. Цыбанов, Н.И. Сальников, Е.Г. Никитина; ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии. - Покров, 2012. - 15 с.

30. Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных / В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина. - М.: Агропромиздат, 1986.- 351 с.

31. Молекулярная биология вирусов / В.И. Агол, И.Г. Атабеков, В.Н. Крылов, Т.Н. Тихоненко. -М.: Наука, 1971.-298 с.

32. Нахмансон, В.М. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. Справочник / В.М. Нахмансон, Л.Г. Бурба. - М.: РОСАГРОПРОМИЗДАТ, 1990. - 254 с.

33. Патологоанатомическая диагностика болезней крупного рогатого скота / A.B. Акулов, В.М. Апатенко, Н.И. Архипов [и др.]. - М.: Агропромиздат, 1987.-399 с.

34. ПЦР в реальном времени / Д.В. Ребриков, Д.В. Саматов, Д.Ю. Трофимов [и др.]; под ред. Д.В. Ребрикова. - 2-е изд., испр. и доп. - М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2009. - 223 е.: ил.

35. Разработана эффективная вакцина против вируса Шмалленберга [электронный ресурс] / 2013 г. - Режим доступа: http://foodcontrol.ru/ news/5533, свободный. - Загл. с экрана.

36. Руководство по индикации возбудителей особо опасных болезней сельскохозяйственных животных в объектах ветеринарного надзора и окружающей среды / H.A. Лагуткин, В.Н. Смирнов, В.В. Куриннов, С.Ж. Цыбанов [и др.]; ВНИИВВиМ, РАСХН. - М., 2000. - С. 49-51.

37. Сальников, Н.И. Выявление и филогенетический анализ геномов возбудителей болезни Найроби и Лихорадки Долины Рифт: дис. ... канд. биол. наук: 03.02.02 / Сальников Николай Игоревич; ВНИИВВиМ. -Покров, 2012.-111 с.

38. Сергеев, В.А. Структура и биология вирусов животных / В.А. Сергеев, В.Г. Орлянкин. - М.: Колос, 1983. - 335 с.

39. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. - 3-е изд., перераб. и доп / М.О. Биргер, Е.А. Ведьмина, В.В. Влодавец [и др.]; под ред. М.О. Биргера. - М.: Медицина, 1982. - 616 с.

40. Чувствительность перевиваемых линий культур клеток к вирусу болезни Акабане / Е.А. Балашова, И.Ф. Вишняков [и др.]. // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: материалы научной конференции ВНИИВВиМ, 13-18 апреля 1992 г. - Покров, 1992. -4.1.-С.142.

41. Хан, Е.О. Идентификация вируса болезни Акабане на основе методов анализа генома: дис. ... канд. биол. наук: 03.02.02 / Хан Евгения Олеговна; ВНИИВВиМ. - Покров, 2013. - 87 с.

42. Эпизоотическая ситуация: информационное сообщение № 109 от 27.06.2013 г. / Информационно-аналитический центр Россельхоз-надзора [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru/ fsvps/iac, свободный. - Загл. с экрана.

43. Эпизоотическая ситуация: информационное сообщение № 155 от 23.08.2013 г. / Информационно-аналитический центр Россельхоз-надзора [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru/ fsvps/iac, свободный. - Загл. с экрана.

44. Ahuwhenua, М. Import Risk Analysis: Live sheep and goats from Australia // Draft for public consultation / Manatu Ahuwhenua. - Ministry of Agriculture and Forestry, Wellington, New Zealand, 2008. -P. 14-17.

45. Aly Balsom. Scientists reveal Schmallenberg virus study findings [электронный ресурс] / Aly Balsom. - 2013 г [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.fwi.co.uk/articles/11/01/2013/137132/scientists-reveal-schmal-lenberg-virus-study-findings.htm, свободный. - Загл. с экрана.

46. Anonymous, Friedrich-Loeffler-Institut: Schmallenberg-Virus erstmals-sichtbargemacht. Available from [электронный ресурс]. - Режим доступа: <http://idw-online.de/pages/de/ news467026> (accessed 25.04.2012).

47. Beer, M. Transmission of Schmallenberg virus during winter, Germany / Martin Beer//Emerging Infectious Disease.-2013.-Vol. 19,№ 10.-P. 1701-1703.

48. Bishop, D.H.L. Bunyaviridae / D.H.L. Bishop [et al.] // Intervirology. - 1980. -Vol. 14.-P. 125-143.

49. Boom, R. Rapid and simple method for purification of nucleic acids / R. Boom [et al.] // J. of CI. in Microbiology. - 1990. - Vol. 28, № 3. - P. 495-503.

50. Brenner, J. Serological and clinical evidence of a teratogenic Simbu serogroup virus infection of cattle in Israel, 2001-2003 / J. Brenner [et al.] // Vet. Ital. -2004. - Vol. 40, № 3. - P. 119-123.

51. Calzolari, M. Could drought conditions trigger Schmallenberg virus and other arboviruses circulation? / M. Calzolari, A. Albieri // International Journal of Health Geographies. - 2013. - Vol. 12. - P. 7.

52. Causey, O.R. Isolations of Simbu-group viruses in Ibadan, Nigeria 1964-69, including the new types Sango, Shamonda, Sabo and Shuni / O.R. Causey, G.E. Kemp [et al.] // Ann. Trop. Med. Parasitol. - 1972. - Vol. 66. - P: 357-362.

53. Characterization of Akabane virus (KV0505) from cattle in Korea / D.-K. Yang, Y.-H. Kim, B.-H. Kim [et al.] // Veterinary Research. - 2008. - Vol. 48. - P. 6166.

54. Charles, J.A. Akabane virus / J.A. Charles // Vet. Clin. North Am. Food Anim. Pract. - 1994. - Vol. 10. - P. 525-546.

55. Chomczynski, P. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction / P. Chomczynski, N. Sacchi // Anal. Biochem.- 1987.-Vol. 162,№ l.-P. 156-159.

56. Congenital abnormalities in foetal lambs after inoculation of pregnant ewes with Akabane virus / I.M. Parsonson, AJ. Deila-Porta, M.D. Murray [et al.] //Australian Veterinary Journal. - 1975. - Vol. 51. - P. 585-586.

57. Congenital abnormalities in newborn calves after inoculation of pregnant cows with Akabane virus / H. Kurogi, Y. Inaba, E. Takahashi [et al.] // Infection and Immunity. - 1977 (b). - Vol. 17. - P. 338-343.

58. Crandell, R.A. Laboratory investigation of a naturally occurring outbreak of arthrogryposis-hydranencephaly in Texas sheep / R.A. Crandell [et al.] // J. Vet. Diagn. Invest. - 1989. - Vol. 1 - P. 162-165.

59. Culicoids as vectors of Schmallenberg virus / L.D. Rasmussen, B. Kristensen, C . Kirkeby [et al.] // Emerg. Infect. Disease. - 2012. - Vol. 18. - P. 1204-1206.

60. De Regge, N. Detection of Schmallenberg virus in different Culicoides spp. by real time RT-PCR / N. De Regge [et al.] // Transbound Emerg Dis. - 2012. -Vol. 59.-P. 471-475.

61. Della-Porta, A. Akabane disease: histopathology, virology and serology / A. Della-Porta [et al.]. - Australian standard diagnostic techniques for animal diseases / A. Della-Porta [et al.], eds. CSIRO Information Services. - Melbourne, 1993.-P. 1-17.

62. Detection and differentiation of Aino and Akabane Simbu serogroup bunyaviruses by nested polymerase chain reaction / H. Akashi, S. Onuma, H. Nagano [et al.] // Archives of Virology. - 1999. - Vol. 144. - P. 2101-210.

63. Development of a pan-Simbu real-time reverse transcriptase PCR for the detection of Simbu serogroup viruses and comparison with SBV diagnostic PCR systems / M. Fischer, M. Beer, B. Hoffmann [et al.] // Virology Journal. - 2013. -Vol. 10.-P. 327.

64. Development of a virus neutralisation test to detect antibodies against Schmallenberg virus and serological results in suspect and infected herds / W. Loeffen, S. Quak, Wim van der Poel [et al.] // J. Acta Veterinaria Scandinavica. -2012.-Vol. 54.-P. 44-51.

65. Development of inactivated vaccine for Akabane disease / H. Kurogi, Y. Inaba, E. Takahashi [et al.] // National Institute of Animal Health Quarterly (Tokyo).-1978.-Vol. 18, №3-4. -P. 97-108.

66. Doceul, V. Epidemiology, molecular virology and diagnostics of Schmallenberg virus, an emerging orthobunyavirus in Europe / V. Doceul [et al.] // Veterinary Research. - 2013. - Vol. 44. - P. 31.

67. Doherty, R.L. Arbovirus infection of sentinel cattle in Australia and New Guinea / R.L. Doherty [et al.] // Australian Veterinary Journal. - 1973. - Vol. 49. -P. 574-579.

68. Doherty, R.L. Virus strains isolated from arthropods during an epizootic of bovine ephemeral fever in Queensland / R.L. Doherty [et al.] // Australian Veterinary Journal. - 1972. - Vol. 48. - P. 81-86.

69. Dolf, G. A DNA fingerprinting band associated with the susceptibility to CAE virus-induced arthritis in goats / G. Dolf, G. Ruff// Brit. Vet. J. - 1994. -Vol. 150.-P. 349-353.

70. Elliott, R. M. Establishment of a reverse genetics system for Schmallenberg virus, a newly emerged orthobunyavirus in Europe / R. M. Elliott [et al.] // Journal of General Virology. - 2013. - Vol. 94. - P. 851-859.

71. Elliott, R. M. Molecular biology of the Bunyaviridae / R. M. Elliott // Journal of General Virology. - 1990. - Vol. 71.-P. 501-522.

72. Fauquet, C.M. Bunyviridae family / C.M. Fauquet [et al.] // 8th Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. Academic Press, 2005. - P. 1162 [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.ncbi. nlm.nih.govACTVdWIctv/index.htm, свободный.

73. Genetic reassortment between Sathuperi and Shamonda viruses of the genus Orthobunyavirus in nature: implications for their genetic relationship to Schmallenberg virus / T. Yanase, T. Kato, M. Aizawa [et al.] // Arch. Virol. - 2012 г. [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://dx.doi.org/10.1007/s00705-012-1341-1348, свободный.

74. Gibbens, N. Schmallenberg virus: a novel viral disease in northern Europe / N. Gibbens // Vet. Ree. - 2012. - Vol. 170, №2. - P. 58.

75. Goller, K.V. Schmallenberg virus as possible ancestor of Shamonda virus / K.V. Goller [et al.] [электронный ресурс] // Emerg. Infect. Dis. - 2012. -Режим доступа: 10.3201/eidl810.120835

76. Goto, Y. Hemagglutination - inhibition test applied to the study of Akabane virus infection in domestic animals / Y. Goto, Y. Inaba, M. Motumoto // Veterinary Microbiology. - 1978. - Vol. 3. - P. 89-99.

77. Hechinger, S. Evaluating the protective efficacy of a trivalent vaccine containing Akabane virus, Aino virus and Chuzan virus against Schmallenberg virus infection / S. Hechinger, K. Wernike and M. Beer // J. Veterinary Research. -2013.-Vol. 44.-P. 114-118.

78. Herder, V. Characterization of Schmallenberg virus - induced pathology in aborted and neonatal ruminants / Vanessa Herder; Department of Pathology University of Veterinary Medicine. - Hannover, 2013. - 62 p.

79. Hewlett, M.J. Circular forms of Uukuniemi virion RNA: an electron microscopic study / M.J. Hewlett, R.F. Pettersson, D.J. Baltimore // Journal of Virology. -1977.-Vol. 21, №3.-P. 1085-1093.

80. Hoffmann, B. Novel orthobunyavirus in cattle, Europe, 2011 / B. Hoffmann [et al.] // Emerg. Infect. Dis. [serial on the Int]. - 2012. - Vol. 18, №3 / Centers for diseases control and prevention [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.nc.cdc., свободный. - Загл. с экрана.

81. Inactivated Schmallenberg virus prototype vaccines / К. Wernike, V. Nikolin, S. Hechinger, B. Hoffmann, M. Beer // J. Vaccine. - 2013. - Vol. 31, № 35.-P. 3558-3563.

82. Inaba, Y. Akabane disease: epizootic abortion, premature birth, stillbirth and congenital arthrogryposis-hydranencephaly in cattle, sheep and goats caused by akabane virus / Y.Inaba, H.Kurogi, T. Omori // Australian Veterinary Journal. -1975.-Vol. 51.-P. 584-585.

83. Inaba Y. Akabane disease: congenital arthrogryposis-hydranencephaly syndrome in cattle, sheep and goats caused by Akabane virus / Y. Inaba // Proc. Symp. Iron. Res. Tsukuba. - 1979. - Vol. 3. - P. 7.

84. Inaba, Y. Akabane virus / Y. Inaba, M. Matumoto. Edited by Z. Dinter and B. Morein // Virus Infections of Ruminants. - 1990. - P. 467-480.

85. Inaba, Y. Congenital Arthrogryposis-Hydranencephaly Syndrome, in Virus Diseases of Food Animals / Y. Inaba, M. Matumoto // Disease Monographs: academic press. - 1981. - Vol. II. - P. 653-671.

86. Institute for Public Health and the Environment (RIVM). Risk profile for human of Schmallenberg virus, 19 December 2011 [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.rivm.nl/dsresource?objectid=rivmp:60483&type=org& disposition=inline. - Загл. с экрана.

87. Kim, Y.H. Development of inactivated trivalent vaccine for the teratogenic Aino, Akabane and Chuzan viruses / Y.H. Kim [et al.] //Biologicals. - 2011. - Vol. 39, № 3. - P. 152-157.

88. Kirkeby, C. The range of attraction for light traps catching Culicoides biting midges (Diptera: Ceratopogonidae) / C. Kirkeby [et al.] // Parasites & Vectors. -2013.-Vol. 6.-P. 67.

89. Kirkland, P.D. The economic impact of Akabane virus and the cost effectiveness of vaccination in New South Wales / P.D. Kirkland, R.D. Barry // Proc. 4th Symp. Arbovirus Res. Australia, 1986. - Vol. 4. - P. 229-232.

90. Kono, R. Bovine epizootic encephalomyelitis caused by Akabane virus in southern Japan / R. Kono [et al.]//BMC Veterinary Research. -2008.-P. 110 [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www. biomedcentral.com/1746-6148/4/20, свободный. - Загл. с экрана.

91. Konno, S. Pathology of Akabane disease, congenital abnormality in cattle / S. Konno [et al.] // Jpn. J. Anim. Reprod. - 1977. - Vol. 22. - P. 39-55.

92. Kurogi, H. Experimental infection of pregnant goats with Akabane virus / H. Kurogi, Y. Inaba, E. Takahashi [et al.] // National Institute of Animal Health Quarterly (Tokyo). - 1977 (a). - Vol. 17. - P. 1-9.

93. Kurogi, H. Serologic evidence for etiologic role of Akabane virus in epizootic abortion arthrogryposis-hydranencephaly in cattle in Japan, 1972-1974 / H. Kurogi [et al.] // Archives of Virology. - 1975. - Vol. 47. - P. 71-83.

94. Laloy, E. Schmallenberg Virus Infection among Red Deer, France, 2010-2012 / E. Laloy [et al.] // Emerging Infectious Diseases. - 2014. - Vol. 20. - P.l 31-134.

95. Larska, M. First report of Schmallenberg virus infection in cattle and midges in Poland / M. Larska [et al.] // Transboundary and Emerging Diseases. - 2013. -Vol. 60.-P. 97-101.

96. Latest posts on ProMed - mail / ProMed - mail. International society for infectious diseases, 2011-2012 [электронный ресурс]. — Режим доступа: http://www.promedmail.org/index.html, свободный. - Загл. С экрана.

97. Lee, J.K. Encephalomyelitis Associated with Akabane Virus Infection in Adult Cows / J.K. Lee [et al.] // Vet. Pathol. - 2002. - Vol. 39. - P. 269-273.

98. Matumoto, M. Akabane disease and Akabane virus / M. Matumoto [et al.] // Archiv of Experimental medicine. - 1980. - Vol. 98. - P. 898.

99. Meroc, E. Large-scale cross-sectional serological survey of Schmallenberg virus in Belgian cattle at the end of the first vector season / E. Meroc [et al.] // Transboundary and Emerging Diseases. - 2013. - Vol. 60. - P. 4-8.

100. Metselaar, D. Akabane virus isolated in Kenya / D. Metselaar, Y. Robin // The Veterinary Record. - 1976. - Vol. 99. - P. 86.

101. Monitoring of five bovine arboviral diseases transmitted by arthropod vectors in Korea / Yeun-Kyung Shin, Jae-Ku Oem, Sora Yoon [et al.] // Journal of Bacteriology and Virology. - 2009. - Vol. 39, №. 4. - P.353-362.

102. Murray, M.D. Akabane epizoonotis in New South Wales: Evidence for the long-distance dispersal of the biting midge Culicoides brevitarsis / M.D. Murray // Australian Veterinary Journal. - 1987. - Vol. 64, № 10. - P. 305-308.

103. Muskens, J. Diarrhea and loss of production on Dutch dairy farms caused by the Schmallenburg virus / J. Muskens [et al.] // Tijdschr Diergeneeskd. - 2012. -Vol. 137.-112 p.

104. Natural infections of pigs with akabane virus / C.-C. Huang, T.-S. Huang, M.-C. Deng [et al.] // Veterinary Microbiology. - 2003. - Vol. 94. - P. 73-83.

105. New Orthobunyavirus detected in cattle in Germany / News / Friedrich-Loeffler institute, 2011 [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.fli.bund.de/en, свободный. - Загл. с экрана.

106. Noad, R. Schmallenberg virus: continuing a trend? / Rob Noad, Joe Brownlie // Virus Adaptation and Treatment. - 2013. - Vol. 5. - P. 11-19.

107. Ogawa, Y. Rescue of Akabane virus (family Bunyaviridae) entirely from cloned cDNAs by using RNA polymerase I / Yohsuke Ogawa [et al.] // Japan: Journal of General Virology. - 2007. - Vol. 88. - P. 3385-3390.

108. Ogawa, Y. Sequence determination and functional analysis of the Akabane virus L RNA segment / Y. Ogawa [et al.] // Arch Virol. - 2007. - Vol. 152. - P. 971-979.

109. OIE (2012) Schmallenberg virus. OIE technical factsheet on SBV. May 2012 [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.oie.int, свободный. -Загл. с экрана.

110. Omori, Т. Viral abortion, arthrogryposis-hydranencephaly syndrome in cattle in Japan, 1972-1974 / T. Omori [et al.] // Bulletin de I 'office International des Epizooties.- 1974.-Vol. 81.-P. 447-458.

111. Oya, A. Akabane, a new arbovirus isolated in Japan/ A. Oya [et al.] // Japanese Journal of Medical Science and Biology. - 1961. - Vol. 14. - P. 101-108.

112. Parsonson, I. M. Bunyavirus pathogenesis / I. M. Parsonson, D. A. McPhee // Advances in Virus Research. - 1985. - Vol. 30. - p. 279-316.

113. PCR identification of culicoid biting midges (Diptera, Ceratopogonidae) of the Obsoletus complex including putative vectors of bluetongue and Schmallenberg viruses / K. Lehmann, D. Werner, B. Hoffmann, H. Kampen // J. Parasites & Vectors. - 2012. - Vol. 5. - P. 213-221.

114. Porterfield, J.S Bunyaviruses and Bunyaviridae / Porterfield J.S. [et al.] // Ihtervirology. - 1976. - Vol. 6. - P. 13-24.

115. ProMED-mail. Schmallenberg virus - Europe (26): vector, morphology. ProMED-mail. - 2012. - Mar., 11 [cited - 2012, Mar 30] [электронный

ресурс]. - Режим доступа: http://www.promedmail.org, article по. 20120311.1066949, свободный.

116. ProMED-mail. Schmallenberg virus - Europe (36): Netherlands, no human infection. ProMED-mail. - 2012. - May, 1 [cited - 2012, May 9] [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.promedmail.org, article no. 20120501.1119639, свободный.

117. Rapid detection of Akabane virus by a novel reverse transcription loop-mediated isothermal amplification assay (RT-LAMP) / J. Qiao, J. Wang, Q. Meng [et al.] // Virology Journal. - 2013. - Vol. 10. - P. 288-292.

118. Sambrook, J. Molecular Cloning: a laboratory manual / J. Sambrook, D.W. Russell. - Cold Spring Harbor Laboratory Press. - Cold Spring Harbor, New York, 2001.-Vol. 1.-749 p.

119. Sequence determination and phylogenetic analysis of the Akabane bunyavirus S RNA genome segment / H. Akashi, Y. Kaku, X.-G. Kong, H. Pang // Journal of General Virology. - 1997. - Vol. 78. - P. 2847-2851.

120. Schmaljohn, C.S. Bunyaviridae / C.S. Schmaljohn, S.T. Nichol; Edited by D.M. Knipe, P.M. Howley // In Fields Virology 5th edition. Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins, 2007. - P. 1741-1789.

121. Schmallenberg Virus - News and updates - 2013 [электронный ресурс]. -Режим доступа: http://www.flutrackers.com/forum/showthread.php? р=481177# post481177, свободный. - Загл. с экрана.

122. Schmallenberg virus: a new Shamonda/Sathuperi-like virus on the rise in Europe / M. Garigliany, C. Bayrou, D. Kleijnen [et al.] // Antiviral Res, 2012. - Vol. 95.-P. 82-87.

123. Schmallenberg virus: Analysis of the epidemiological data and Impact assessment / European Food Safety Authority//EFS A Journal.-2012.-Vol. 10.-P. 2768-2856.

124. Schmallenberg virus: preliminary risk assessment of pathways for introduction into the United States. USDA: APHIS: VC: Center for Epidemiology and Animal Health. Fort Collins, CO. - June 2012. - 30 p.

125. Schmallenberg virus challenge models in cattle: infectious serum or culture-grown virus? / K. Wernike, B. Hoffmann, M. Beer [et al.] // J. Veterinary Research. - 2012. - Vol. 43. - P. 84-87.

126. Schmallenberg virus in domestic cattle, Belgium, 2012 / M. Garigliany, C. Bayrou, D. Kleijnen [et al.] // Emerg Infect Disease, 2012. - Vol. 18. - P. 15121514.

127. Schmallenberg virus RNA in bovine semen / 2013 г. [электронный ресурс]. -Режим доступа: http://www.wageningenur.nl/en/show/ Schmallenberg-virus-RNA-in-bovine-semen-l.htm, свободный. - Загл. с экрана.

128. Stram, Y. Detection and quantitation of Akabane and Aino viruses by multiplex real-time reverse-transcriptase PCR / Y. Stram [et al.] // J. of Virological Methods. - 2004. - Vol. 116.-P. 147-154.

129. St. George, T. D. The isolation of Akabane virus from a normal bull / T.D. St. George, D.H. Cybinski, N. Paull // Australian Veterinary Journal. - 1977. - Vol. 53.-P. 249.

130. St. George, T. D. Isolation of Akabane virus from sentinel cattle and Culicoides brevitarsis / T.D. St. George, H. Strandfast, D.H. Cybinski // Australian Veterinary Journal. - 1978. - Vol. 54. - P. 558-561.

131. Sweeney, S.J. Bison species affected with Schmallenberg virus in Germany / S.J. Sweeney, R. Harris // EFSA Journal. - 2012.

132. The isolation of Akabane virus (Iriki strain) from calves in Taiwan / Y.K. Kiao, Y.S. Lu, Y. Goto, Y. Inaba // Exp. Rep. TAHRI. - 1995. Vol. - 31. - P. 13-21.

133. The resurgence of Shamonda virus, an African Simbu group virus of the genus Orthobunyavirus, in Japan / T. Yanase, K. Maeda, T. Kato [et al.] // Arch. Virol. -2005.-Vol. 150.-P. 361-369.

134. Toussaint, J.F. Bluetongue virus detection by two real-time RT-qPCRs targeting two different genomic segments / J.F. Toussaint, C. Sailleau, E. Breard [et al.] // Journal of Virological Methods. - 2007. - Vol. 140. - P. 115-123.

135. Ungar-Waron, H. ELISA test for the serodiagnosis of Akabane virus infection in cattle / H. Ungar-Waron, A. Gluckman, Z.Trainin // Trop. Anim. Hlth. Prod. -1989. - Vol. 21. -№ 3. - P. 205-210.

136. Varela, M. Schmallenberg Virus Pathogenesis, Tropism and Interaction with the Innate Immune System of the Host / M. Varela [et al.] // J. PLOS Pathogens.-2013.-Vol. 9.-P. 1-13.

137. Walter, C.T. Recent advances in the molecular and cellular biology of bunyaviruses / C.T. Walter, J.N. Barr // J. Gen. Virology. - 2011. - Vol. 92. - P. 2467-2484.

138. Weekly disease information / WAHID Interface / OIE, 2011-2012 [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.oie.int, свободный. -Загл. с экрана.

139. Yandoko, Е. N. Molecular characterization of African orthobunyaviruses / Yandoko [et al.] // J. Gen. Virology. - 2007. - Vol. 88. - P. 1761-1766.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.