Идентификация вируса инфекционной анемии лошадей на основе молекулярно-генетических методов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Герасимова, Надежда Николаевна
Герасимова, Надежда Николаевна
кандидат наук
2014
- Специальность ВАК РФ03.02.02
- Количество страниц 172
Оглавление диссертации кандидат наук Герасимова, Надежда Николаевна
СОДЕРЖАНИЕ..................................................................................................................................................2
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ......................................................................................................................7
1 ВВЕДЕНИЕ..................................................................................................................................................9
1.1 Актуальность темы........................................................................................................................9
1.2 Степень разработанности проблемы..............................................................................10
1.3 Цель и задачи исследований..................................................................................................11
1.4 Научная новизна результатов исследований..........................................................12
1.5 Теоретическая и практическая значимость работы..........................................12
1.6 Степень достоверности и апробация результатов работы........................13
1.7 Публикации..........................................................................................................................................14
1.8 Структура диссертации................................................................................................................14
1.9 Основные положения диссертации, выносимые на защиту......................15
1.10 Личный вклад соискателя в выполнение работы............................................................15
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ..............................................................................................................16
2.1 Общая характеристика ретровирусов............................................................................16
2.2 Определение болезни, история и распространение..........................................17
2.3 Характеристика вируса инфекционной анемии лошадей............................19
2.3.1 Морфология и цикл репродукции вируса ИНАН..........................19
2.3.2 Структурная организация генома и полипептидный состав....................................................................................................................................20
2.3.3 Антигенная вариабельность..............................................................................23
2.4 Эпизоотология вируса ИНАН................................................................................................24
2.5 Патогенез и тропизм вируса ИНАН..................................................................................27
2.6 Диагностика вируса ИНАН......................................................................................................28
2.6.1 Клиническая картина ИНАН................................................................................28
2.6.2 Гематологические исследования......................................................................30
2.6.3 Патологоанатомические и гистологические изменения..........31
2.6.4 Постановка биопробы................................................................................................32
2.6.5 Лабораторная диагностика ИНАН..................................................................32
2.6.5.1 Серологические методы диагностики..................................32
2.6.5.2 Идентификация вируса и молекулярно-генетическая диагностика ИНАН............................................35
2.7 Дифференциальный диагноз..................................................................................................40
2.8 Иммунитет, средства борьбы и профилактики......................................................41
2.8.1 Особенности иммунитета при ИНАН........................................................41
2.8.2 Профилактика и меры борьбы..........................................................................42
2.9 Изучение нуклеотидного состава и филогенетический анализ вируса инфекционной анемии лошадей........................................................................43
2.10 Заключение по обзору литературы....................................................................................48
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..........................................................................51
3.1 Материалы..............................................................................................................................................51
3.1.1 Вирусы....................................................................................................................................51
3.1.2 Образцы клинического и патологического материала..............51
3.1.3 Животные................................................................................................................................51
3.1.4 Культуры клеток................................................................................................................52
3.1.5 Плазмида и бактериальные штаммы..........................................................52
3.1.6 Реактивы....................................................................................................................................52
3.1.7 Лабораторное оборудование................................................................................55
3.2 Методы......................................................................................................................................................56
3.2.1 Подбор праймеров и зондов..............................................................................56
3.2.2 Выделение нуклеиновых кислот....................................................................56
3.2.3 Синтез кДНК....................................................................................................................58
3.2.4 Проведение гнездовой ОТ-ПЦР с детекцией результатов амплификации методом электрофореза....................................................59
3.2.5 Анализ продуктов ПЦР..........................................................................................59
3.2.6 Проведение ОТ-ПЦР в режиме реального времени................................................................................................................................60
3.2.7 Нуклеотидное секвенирование........................................................................60
3.2.8 Компьютерный анализ нуклеотидных
последовательностей и филогенетический
анализ.................................................................. 61
3.2.9 Молекулярное клонирование продуктов ПЦР................. 62
3.2.9.1 Приготовление компетентных клеток Е. coli линии DH5 Invitrogen DH5 а™ F....................... 62
3.2.9.2 Лигирование................................................. 62
3.2.9.3 Трансформация штамма E.coli DH5a................ 62
3.2.10 In vitro транскрипция................................................ 63
3.2.11 Серологические методы............................................ 63
3.2.12 Гематологические исследования................................. 64
3.2.12.1 Подсчет общего количества лейкоцитов............ 64
3.2.12.2 Определение гемоглобина............................ 65
3.2.13 Статистическая обработка результатов исследований....... 65
4 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.................. 66
4.1 Разработка тест-системы для выявления генома вируса ИНАН на основе гнездовой ОТ-ПЦР с детекцией результатов амплификации методом электрофореза............................................................................. 66
4.1.1 Оптимизация состава и условий проведения реакции.................................................................. 66
4.1.2 Конструирование рекомбинантного положительного контроля амплификации к тест-системе для выявления генома вируса ИНАН методом гнездовой ОТ-ПЦР с электрофоретической детекцией.................................. 69
4.1.3 Определение характеристик тест-системы на основе гнездовой ОТ-ПЦР с электрофоретической детекцией................................................................ 71
4.2 Разработка тест-системы для выявления генома вируса ИНАН
методом ОТ - ПЦР в режиме реального времени....................... 76
* <
4.2.1 Подбор специфических олигонуклеотидов и оптимизация условий постановки реакции........................................ 76
4.2.2 Конструирование рекомбинантного положительного контроля амплификации к тест-системе для выявления генома вируса ИНАН методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени..................................................... 79
4.2.3 Определение характеристик тест-системы на основе ОТ-ПЦР в режиме реального времени................................ 81
4.3 Оценка возможности использования разработанных тест-систем на основе ОТ-ПЦР для лабораторной диагностики ИНАН при исследовании клинического и патологического материала от экспериментально зараженной вирусом ИНАН лошади............................................................................ 90
4.3.1 Клинические и патологоанатомические признаки болезни................................................................... 92
4.3.2 Молекулярно-генетические исследования....................... 98
4.3.3 Серологические исследования....................................... 105
4.4 Скрининговые исследования хозяйств на наличие инфекционной анемии лошадей................................................................. 108
4.5 Секвенирование и филогенетический анализ геномов производственного штамма «ЗК-ВНИИТИБП-ВИЭВ» и изолятов вируса ИНАН, выявленных на территории Российской Федерации.........................................................................
4.5.1 Подбор праймеров для амплификации участка gag-гена вируса инфекционной анемии лошадей........................... 111
4.5.2 Филогенетический анализ штаммов и изолятов вируса ИНАН по участку gag-гена.......................................... 116
5 ОБСУЖДЕНИЕ................................................................... 119
6 ВЫВОДЫ........................................................................... 127
7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ..................................................................................128
8 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ................................................................................................................129
9 ПРИЛОЖЕНИЯ......................................................................................................................................150
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АЛО - аденоматоз легких овец
АЧЛ - африканская чума лошадей
АЭК - артрит-энцефалит коз
ВАК - Высшая аттестационная комиссия
ВМ - висна-маеди
ВНИИВВиМ - Всероссийский научно-исследовательский институт
ветеринарной вирусологии и микробиологии
ГАЕ - гемагглютинирующие единицы
ГНУ - Государственное научное учреждение
ГТЦ - гуанидинтиоционат
ДНК- дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксинуклеотид трифосфаты
ИНАН - инфекционная анемия лошадей
ИФА - иммуноферментный анализ
кД - килодальтон
кДНК - комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота
КЛЛ - первичная культура клеток лейкоцитов лошади
мин - минута
мкг - микрограмм
мкл - микролитр
мл - миллилитр
ммоль - миллимоль
МЭБ - Международное эпизоотическое бюро нм - нанометр
ОТ - обратная транскрипция
ОТ-ПЦР - обратно-транскриптазная полимеразная цепная реакция пДНК - провирусная ДНК пмоль — пикомоль п.о. - пар оснований
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция в режиме реального времени
РДП - реакция диффузионной преципитации
РН - реакция нейтрализации
РНК- рибонуклеиновая кислота
РСК - реакция связывания комплемента
РФ - Российская Федерация
сек - секунда
СМК - первичная культура клеток синовиальной мембраны козленка
СМЯ - штамм диплоидных клеток синовиальной мембраны ягненка
ТЕ - трис-ЭДТА буфер
Трис - трис (гидроксиметил) аминометан
ЦПД - цитопатическое действие
шт - штамм
ЭДТА - этилендиаминотетроацетат
СУ-1 - перевиваемая линия клеток почки африканской зеленой мартышки рН - обратный десятичный логарифм концентрации
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Вирусология», 03.02.02 шифр ВАК
Промышленная технология изготовления наборов (тест-систем) для диагностики хламидиоза животных (РСК, ИФА) и ИНАН лошадей (РДП, ИФА)2013 год, кандидат наук Люлькова, Лариса Сергеевна
Дифференциация вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей на основе анализа геномов2013 год, кандидат биологических наук Аронова, Елена Владимировна
Генотипирование серотипов вируса блютанга2012 год, кандидат биологических наук Панферова, Агнеса Владимировна
Разработка средств молекулярно-генетического анализа вируса блютанга 14 серотипа, выделенного в Российской Федерации2017 год, кандидат наук Кольцов, Андрей Юрьевич
Разработка и совершенствование методов молекулярно - генетической диагностики аденоматоза легких овец2013 год, кандидат ветеринарных наук Шобогоров, Николай Михайлович
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Идентификация вируса инфекционной анемии лошадей на основе молекулярно-генетических методов»
1 ВВЕДЕНИЕ 1.1 Актуальность темы
Инфекционная анемия лошадей (ИНАН, болотная лихорадка) - вирусная болезнь однокопытных, характеризующаяся поражением органов кроветворения и проявляющаяся рецидивирующей лихорадкой, анемией, тромбоцитопенией и нарушением функций сердечно-сосудистой системы [34, 67, 122].
Этиологическим агентом данного заболевания является РНК-содержащий вирус семейства Retroviridae, подсемейства Orthoretrovirinae, рода Lentivirus [67, 131]. К ИНАН восприимчивы представители семейства лошадиных (Equidae) [49, 67]. Переболевшие животные остаются пожизненными вирусоносителями и представляют опасность как резервуар возбудителя инфекции [34, 137, 122, 155].
Для ИНАН характерна цикличность репродукции и антигенная изменчивость вируса, в результате чего у лошадей формируется состояние нестерильного иммунитета [122, 158]. Хозяйства, в которых выявлено данное заболевание, несут экономические потери, складывающиеся не только из падежа больных лошадей, но и выбраковки серопозитивных животных.
Пути передачи ИНАН многообразны и достаточно хорошо изучены. При этом следует учитывать, что основные переносчики инфекции - кровососущие насекомые [170, 177], встречаются в большинстве ландшафтно-географических зон России, создавая предпосылки для дальнейшего распространения вируса по территории Российской Федерации (РФ).
За период с 2011 по 2014 гг. в РФ были выявлены сероположительные на ИНАН лошади более чем в 25 субъектах. [24, 65].
На сегодняшний день не разработано эффективных вакцин, позволяющих предотвратить распространение данной инфекции [60]. Поэтому основными методами борьбы с ИНАН являются её ранняя диагностика, изоляция и выбраковка зараженных животных.
Согласно современным руководствам и инструкциям референтным методом в диагностике ИНАН является реакция диффузионной преципитации (РДП, тест Коггинса). Но, наряду с серологическими методами, МЭБ рекомендует
осуществление молекулярно-генетического контроля в случаях расхождения результатов серологических тестов, с целью выявления инфекции до начала сероконверсии и для определения инфекционного статуса жеребят, рожденных от инфицированных кобыл [131]. Актуальность разработки новых средств диагностики ИНАН для РФ связана с обеспечением безопасности при импорте племенных и спортивных лошадей из стран, неблагополучных по заболеванию, так как данная болезнь широко распространена по всему миру [100, 127, 137, 164].
Кроме того, такие молекулярно-биологические методы, как секвенирование ДНК и проведение филогенетического анализа, позволяют определять генетические характеристики вновь выявленных изолятов вируса [67, 131, 137].
Таким образом, неблагополучие по ИНАН многих регионов РФ, стран ближнего зарубежья и стран-экспортеров, отсутствие средств лечения и специфической профилактики обуславливают проблему раннего обнаружения данной инфекции в нашей стране, как весьма актуальную. Следует отметить, что определение молекулярно-генетических характеристик полевых изолятов вируса ИНАН, выделенных при вспышках болезни в РФ, является необходимым аспектом в изучении молекулярной эпизоотологии и эволюции вируса.
1.2 Степень разработанности проблемы
Для лабораторной диагностики ИНАН за рубежом разработаны серологические и молекулярно-генетические методы [59, 64, 72]. С целью генодиагностики ИНАН предложены различные варианты полимеразной цепной реакции (ПЦР) как для обнаружения вирусной РНК, так и провирусной ДНК (пДНК). Разработаны: обратно-транскриптазная ПЦР (ОТ-ПЦР) с электрофоретической детекцией, «гнездовой» вариант ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в режиме реального времени с использованием праймеров на различные участки генома вируса [72, 143, 155]. Изучен нуклеотидный состав РНК и пДНК выделенных за рубежом штаммов и изолятов вируса ИНАН, проведен их филогенетический анализ [67, 137].
В Российской Федерации разработаны серологические средства
лабораторной диагностики ИНАН: РДП и иммуноферментный анализ (ИФА) [16]. Однако, средства для идентификации вируса ИНАН на основе молекулярно-генетических методов на момент проведения исследований в нашей стране отсутствовали. Не была дана характеристика нуклеотидного состава штамма отечественного происхождения и циркулирующих в РФ изолятов вируса, не установлены их филогенетические отношения.
1.3 Цель и задачи исследований
В соответствии с вышеизложенным, целью данных исследований являлась разработка тест-систем на основе ПЦР для выявления генома вируса ИНАН, идентификация и молекулярно-генетическая характеристика изолятов вируса, выявленных на территории Российской Федерации.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1) разработать тест-систему для выявления генома вируса инфекционной анемии лошадей на основе гнездовой ОТ-ПЦР с детекцией результатов амплификации методом электрофореза;
2) разработать тест-систему для выявления генома вируса инфекционной анемии лошадей на основе ОТ-ПЦР в режиме реального времени;
3) оценить возможность использования разработанных тест-систем для лабораторной диагностики ИНАН методом ОТ-ПЦР при исследовании проб клинического и патологического материала;
4) провести скрининговые исследования на наличие вируса ИНАН на территории Российской Федерации;
5) определить молекулярно-генетические характеристики и провести филогенетический анализ штамма «3-К-ВНИИТИБП-ВИЭВ» и изолятов вируса ИНАН, выявленных на территории Российской Федерации.
1.4 Научная новизна результатов исследований
В результате проведенных исследований подобраны оригинальные олигонуклеотидные праймеры и ДНК-зонд, комплементарные фрагменту gag-тена вируса ИНАН, на основе которых разработана тест-система для выявления РНК и провирусной ДНК вируса инфекционной анемии лошадей методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени.
Разработана тест-система для выявления генома вируса инфекционной анемии лошадей методом гнездовой ОТ-ПЦР с детекцией результатов амплификации методом электрофореза.
В ходе скрининговых исследований с 2012 по 2014 гг. выявлены два изолята вируса ИНАН: «Нижний Новгород-2011» и «0мск-2012». Впервые определены нуклеотидные последовательности участков gag-гена и молекулярно-генетические характеристики выявленных изолятов вируса ИНАН и штамма «3-К-ВНИИТИБП-ВИЭВ».
Впервые проведен филогенетический анализ изолятов вируса ИНАН российского происхождения. Установлено, что выявленные нами изоляты относятся к европейской генетической группе, а штамм «3-К-ВНИИТИБП-ВИЭВ» к североамериканской.
1.5 Теоретическая и практическая значимость работы
Проанализированы нуклеотидные последовательности различных штаммов и изолятов вируса ИНАН, представленные в базе данных GenBank, что позволило определить наиболее консервативные участки генома для подбора специфических олигонуклеотидных праймеров и зонда.
Разработаны «Методические положения по выявлению генома вируса болезни инфекционной анемии лошадей методом гнездовой ОТ-ПЦР», утвержденные академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины РАСХН Смирновым A.M. (12.12.2012 г.).
Разработаны «Методические положения по выявлению РНК и пДНК вируса инфекционной анемии лошадей методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени
«ИНАН/ОТ-ПЦР PB/gag», утвержденные академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины РАСХН Смирновым A.M. (25.11.2013 г.).
Разработаны инструкции и Стандарты ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии к «Тест-системе для выявления генома вируса инфекционной анемии лошадей методом гнездовой ОТ-ПЦР» (СТО 004955490106-2014) и «Тест-системе для выявления РНК и пДНК вируса инфекционной анемии лошадей методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени» (СТО 00495549-0105-2014), одобренные ученым советом и утвержденные директором ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии 30.04.2014 г. (Приложения 1,2,3,4)
С помощью разработанных тест-систем на основе различных вариантов ОТ-ПЦР в период с 2012 по 2014 гг. было исследовано 828 проб крови и сывороток крови от однокопытных, из которых было получено 9 положительных результатов.
Выявленные в ходе скрининговых исследований изоляты «Нижний Новгород-2011» и «0мск-2012» депонированы в музее вирусных штаммов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии.
Проведен молекулярно-генетический анализ участков gag-гена штамма «3-К-ВНИИТИБП-ВИЭВ» и 2 изолятов вируса ИНАН, выявленных в период с 2012 по 2014 гг., и изучены их филогенетические взаимоотношения.
Нуклеотидные и соответствующие им аминокислотные последовательности gflg-гена штамма «3-К-ВНИИТИБП-ВИЭВ» и изолята «Нижний Новгород-2011» депонированы в международный банк данных GenBank (№ КМ202106 и № КМ248275).
1.6 Степень достоверности и апробация результатов работы
Достоверность полученных результатов исследований подтверждена статистическими методами и комиссионными испытаниями. Акты комиссионных испытаний утверждены директором ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии 30.08.2012 г. и 08.07.2013 г. Статистическая обработка включала расчёты средних арифметических значений и стандартных отклонений результатов полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.
Основные результаты исследований по теме диссертационной работы были представлены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии в 2012-2014 гг., на научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы инфекционной патологии в ветеринарной медицине» (г. Покров, 2012 г.), в рамках заседания секции «Ветеринарной биотехнологии» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (г. Щелково, 2012 и 2013 гг.), на международной научно-практической конференции «Научные основы производства и обеспечения качества биологических препаратов для АПК» (Щелково, 2012 г.), на 7-ом Международном конгрессе ЕРКОКГЕ (г. Брюссель, Бельгия, 2013 г.), на 8-ом Международном конгрессе ЕРКОЫЕ (г. Копенгаген, Дания, 2014 г.) и на 8-ой Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика 2014» (г. Москва, 2014 г.).
1.7 Публикации
По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 3 -статьи в журналах «Ветеринария», «Ветеринария и кормление», включённых в перечень изданий, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.
1.8 Структура диссертации
Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список использованной литературы, включающий 38 отечественных и 147 иностранных источников; дополнена приложениями. Работа иллюстрирована 12 таблицами и 50 рисунками. В приложении представлены документы, подтверждающие достоверность результатов работы, её научную и практическую значимость.
1.9 Основные положения диссертации, выносимые на защиту
2. Разработанные тест-системы для выявления генома вируса инфекционной анемии лошадей методом гнездовой ОТ-ПЦР с электрофоретической детекцией и ОТ-ПЦР в режиме реального времени обладают специфичностью и высокой чувствительностью.
3. Результаты выявления генома вируса ИНАН с помощью разработанных тест-систем в образцах клинического материала на разных сроках после инфицирования и образцах патологического материала.
4. Результаты скрининговых исследований биологического материала от однокопытных животных из различных хозяйств Российской Федерации с использованием разработанных тест-систем, позволивших выявить геном вируса ИНАН.
5. Результаты определения молекулярно-генетических характеристик и филогенетического анализа штамма «3-К-ВНИИТИБП-ВИЭВ» и двух изолятов вируса ИНАН, выявленных в ходе скрининговых исследований.
1.10 Личный вклад соискателя в выполнение работы
Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно с использованием собственных результатов. Основной объем представленных исследований и анализ результатов, изложенных в диссертации, проведены автором самостоятельно. Консультативную и методическую помощь при выполнении отдельных этапов работы оказывали следующие сотрудники института: к.б.н. Барышникова Е.И., к.б.н. Титов И.А., к.б.н. Сальников Н.И. Патоморфологические и гистологические исследования проведены совместно с сотрудниками ФГОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия им. Д.К. Беляева» д.б.н., зав. кафедрой морфологии, физиологии и ветеринарно-санитарной экспертизы В. В. Прониным и к.в.н., доцентом Г.В. Корневой.
Диссертационная работа выполнена в ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии в 2011-2014 гг.
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Общая характеристика ретровирусов
Семейство Яе1го\тйае - большая группа РНК-содержащих вирусов, обладающая диплоидным геномом, способным образовывать ДНК-копию вирусной РНК, встраивающуюся в геном хозяина [6, 25, 50].
Характерная особенность ретровирусов - наличие в составе вирионов РНК-зависимой ДНК-полимеразы (обратной транскриптазы), обеспечивающей синтез ДНК на матрице вирионной РНК [11, 160].
Известно, что вирусы данного семейства способны трансформировать клетки, не вызывая в них неопластических изменений. Они могут реплицироваться активно, вызывая инфекционный процесс, но кроме того, ретровирусы долгое время могут находиться в латентном состоянии, встраиваясь в геном клеток-хозяина (эндогенный тип), при этом передаваясь трансгенно от поколения к поколению [11, 29, 50, 60, 62, 141].
В настоящее время ретровирусы выделены от множества видов позвоночных и беспозвоночных, что свидетельствует об их убиквитарности и обуславливает проблему их распространения как весьма значимую [25, 29, 50, 60, 109, 122, 141].
Международным комитетом по таксономии вирусов принято деление семейства 11е1гогтс1ае на 2 подсемейства: Orthoretrovirinae и ЪритагеХгоутпае. Подсемейство ОнкоШгохтпае, в свою очередь, подразделяется на 6 родов: альфа- (МркаШгоуггш), бета- {Ве1аге1го\1ги8), дельта- (Ие^аге^оу/Уия), эпсилон-(ЕрзПопгеКоу^ш), гаммаретровирусы (<Эаттаге1гол>1г№) и лентивирусы (ЬеШтгт) [3, 184].
К роду лентивирусов относятся возбудители инфекционной анемии лошадей (ИНАН), лейкоза крупного рогатого скота, медленных инфекций мелких жвачных, синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД) человека, иммунодефицита приматов и кошек [29, 31, 92, 99, 109, 122].
Отличительной особенностью вируса ИНАН является антигенная изменчивость и цикличность динамики репликации, в связи с чем, у большинства животных заболевание протекает в хронической форме с повторяющимися периодами виремии, сопровождающимися лихорадкой, и бессимптомной стадией инфекции [42, 67, 88, 89, 112, 122, 132, 176].
В настоящее время ретровирусные инфекции животных, в частности ИНАН, интенсивно исследуются, так как являются модельными для изучения вируса иммунодефицита человека. Активно изучаются методы борьбы, и диагностики ИНАН [29, 36, 60,67, 92, 99, 113, 169,171].
2.2 Определение болезни, история и распространение
Инфекционная анемия лошадей (ИНАН, болотная лихорадка) - вирусная болезнь однокопытных, характеризующаяся поражением органов кроветворения и проявляющаяся рецидивирующей лихорадкой, анемией, тромбоцитопенией, нарушением функций сердечно-сосудистой системы, отеками, явлениями геморрагического диатеза, а также длительным вирусоносительством [33, 68, 88, 113, 121, 122, 153].
ИНАН имеет огромное значение для промышленного разведения лошадей, и является одним из одиннадцати специфических заболеваний однокопытных, включенных в список Международного эпизоотического бюро (МЭБ), вспышки которых подлежат обязательному информированию [60, 131].
Вирус ИНАН поражает в первую очередь породистых лошадей (аборигенные породы более устойчивы к заболеванию), что, в свою очередь, является угрозой национальному генофонду лошадей страны [33].
Коневодство стран, где регистрируют инфекционную анемию, терпит большой экономический ущерб, так как летальность при первичных вспышках болезни колеблется от 20 до 80 % [2, 5, 12].
Первое документальное упоминание о данной болезни обнаружено в трудах французского исследователя M. Ligne при вспышке ИНАН в 1843 году [34, 609,
126, 172]. Инфекционная же природа заболевания была экспериментально показана в 1859 году ученым Н. Anginiard путем введения крови больных животных здоровым лошадям [12, 33, 172]. Исследованиями Н. Vallee и Н. Carre (1904) установлена вирусная природа данной болезни и доказано, что вирус содержится в крови и органах больных однокопытных [38, 129, 162, 172, 181].
В связи с тем, что болезнь всегда сопровождается резко выраженной анемией, она получила новое название «инфекционная анемия лошадей» [8,181].
В России ИНАН регистрировали в начале XX века, в воинских частях во время русско-японской войны [12, 38].
В настоящее время из года в год инфекционная анемия лошадей регистрируется в Европейских странах (Германия, Франция, Греция, Великобритания и другие), в Северной и Южной Америках, в Австралии, Азии и в некоторых странах Африки [20, 27, 31, 76, 84, 100, 123, 127, 137, 138, 140, 146, 179, 185].
Также ИНАН регистрируют в странах ближнего зарубежья, например таких, как Украина [5, 32], Монголия [164], Казахстан [13]. Инфицированных лошадей в нашей стране выявляют регулярно [28, 65]. По данным Б.Ф. Шуляка (2006) в России в период с 1996 по 2004 гг. произошло 286 вспышек ИНАН, в ходе которых заболело 6223 лошади [31].
За период 2011-2014 года в Российской Федерации выявили сероположительных на ИНАН лошадей в Омской, Челябинской, Нижегородской, Кировской, Иркутской, Свердловской, Ленинградской, Курской и Томской областях, республике Бурятия, Хакасия, республике Коми, Приморском, Красноярском крае и других [24, 65].
2. 3 Характеристика вируса инфекционной анемии лошадей
2.3.1 Морфология и цикл репродукции вируса ИНАН
Возбудитель ИНАН — РНК-содержащий вирус, который по своим морфологическим, физико-химическим свойствам, наличию обратной транскриптазы включен в семейство ретровирусов (Ке&огтс1ае) [15, 34, 46, 47, 91, 131, 139, 160, 162, 184].
Вирионы ИНАН округлой формы, диаметром 90-140 нм. Они состоят из сердцевины, внутренней белковой оболочки (матрикс) и липосодержащей наружной оболочки (мембрана), на которой расположены выступы высотой 6-8 нм. В сердцевине различают капсулу сердцевины (коровая оболочка), конической формы, и оптически плотный нуклеоид, размером 40— 63 нм (рисунок 1) [2, 11, 26, 34, 60, 80].
ЕрЗО
нуклеокапсид вирусная РНК
Рисунок 1 - Схема строения вириона ИНАН [60].
Плавучая плотность вируса в градиенте сахарозы равна 1,15 - 1,18 г/мл, в градиенте хлорида цезия — 1,15 г/мл [2, 11, 146].
Вирус ИНАН содержит обратную транскриптазу, интегразу, РНКазу, протеазу и обладает гемагглютинирующей активностью [5, 25, 36, 37, 99, 160].
Размножение вируса происходит в цитоплазме и ядре клетки. Вирион проникает в клетку путем слияния липопротеидной оболочки с плазматической
мембрана
матрикс интеграза обратная транскриптаза
мембраной клетки, а также в результате эндоцитоза. В клетке происходит синтез двухспиральной линейной ДНК (провирус) на матрице вирионной РНК с помощью обратной транскриптазы. Провирусная ДНК (пДНК) транспортируется в ядро, превращается в ковалентно замкнутую кольцевую форму и встраивается в геном клетки с помощью вирусной интегразы. Вирусная ДНК встраивается во многие участки клеточной ДНК, реплицируется вместе с ней и передается дочерним клеткам. Синтез вирусоспецифической РНК происходит на матрице провирусной ДНК, встроенной в клеточный геном. Синтезированные РНК транспортируются в цитоплазму клетки, где они направляют синтез вирусоспецифических белков, а также участвуют в формировании вирионов. Затем вирусные частицы почкуются от поверхности цитоплазматической мембраны [И, 34, 116, 122,].
2.3.2 Структурная организация генома и полипептидный состав
Геном вируса ИНАН представлен двумя идентичными молекулами линейной одноцепочечной РНК позитивной полярности, соединенными водородными связями в области 5'-концов [11, 25, 60, 122].
В настоящее время известна полная нуклеотидная последовательность генома вируса ИНАН, имеющая длину примерно 8200 нуклеотидов, а так же последовательности многих генов структурных белков [41, 53, 60, 70, 73, 94, 100, 137].
По строению генома вируса ИНАН наибольшая степень гомологии выявлена с вирусами иммунодефицита человека и висна-маеди [43, 144, 146, 169, 171].
Геном вируса ИНАН состоит из 3 основных генов: (5'-3') gag, pol, env [60, 99, 100, 122], каждый из которых кодирует два и более белка: gag-ген кодирует вирионные коровые белки, pol-геи кодирует полипептиды, обладающие ревертазной, специфической РНК-азной и ДНК-эндонуклеазной активностями, а
еиу-ген кодирует поверхностные вирионные гликопротеины [25, 41, 99, 122, 162].
Нуклеотидная последовательность вируса на обоих концах имеет длинные концевые повторы (ЬТЯ), необходимых для встраивания провирусной ДНК в геном клетки (рисунок 2). Они также служат в качестве места проведения инициации транскрипции. Области ЬТЯ состоят из трёх сегментов: Ш, К и и5 [60, 100, 122, 128, 162].
51TR из RU5
pot
gag
rev
env
3'LTR ü3 ru5
I
S2
Рисунок 2 - Схема генома вируса ИНАН [122].
Кроме основных генов gag, pol и env, общих для всех ретровирусов, геном вируса ИНАН содержит три дополнительные открытые рамки считывания, кодирующие небольшие вспомогательные белки, которые участвуют в регуляции синтеза и процессинге вирусной РНК. К ним относятся:
1. трансактиваторный белок, кодируемый геном tat, продуцируется в начале цикла репликации и способствует повышению эффективности трансляции клеточной РНК-полимеразы, главным образом за счет преждевременной остановки транскрипции [11, 99, 122];
2. белок, кодируемый геном rev, играет существенную роль в репликации вируса. Она связана с удлинением РНК транскриптов и их перемещением из ядра в цитоплазму, обеспечивая полноценную трансляцию мРНК [25, 63, 81, 122]. Кроме того, в естественных условиях нуклеотидная последовательность гена сильно варьирует, и изменения в фенотипе rev коррелируют с изменениями в клинических стадиях течения ИНАН [11, 55, 93, 99, 122];
3. вспомогательный белок S2 является уникальным, присущим только вирусу ИНАН. Ген S2 перекрывает кодирующий регион env гена [87]. При изучении эволюции и роли вспомогательного белка S2 вируса ИНАН при экспериментальном заражении пони было показано, что нуклеотидная последовательность гена S2 остается высококонсервативной во время латентной инфекции [87, 174, 175]. Вместе с тем установлено то, что делеция этого гена снижает вирулентность и уровень репликации у аттенуированного вируса, полученного пассированием на культуре клеток макрофагов лошади [87, 114, 142, 174, 175]. Обнаружены антитела к белку S2 как у экспериментально, так и естественно инфицированных животных [87, 174].
Эти данные свидетельствуют о том, что вспомогательный белок S2 является важной детерминантой репликации и патогенных свойств вируса ИНАН in vivo, несмотря на тот факт, что для репликации вируса in vitro его присутствие не является обязательным условием [11, 125, 174, 175].
Входящие в состав вирусной РНК гены кодируют различные гликолизированные и негликолизированные белки. В структуре капсида обнаружено 6 основных белков с молекулярной массой от 9 до 90 кД и 4 минорных полипептида. В состав наружного слоя оболочки вирионов входит 2 гликопротеина — поверхностный gp90 и трансмембранный гликопротеин gp45, не связанные между собой дисульфидными связями [11, 35, 45, 48, 104, 158]. Эти гликопротеины вируса ИНАН гомологичны gpl20 и gp41 вируса иммунодефицита человека [9, 66, 69]. Белки наружной оболочки участвуют в различных взаимодействиях вируса с клеткой хозяина. С ними связаны такие феномены, как круг хозяев, тканевая специфичность, адсорбция вириона и его проникновение в клетку, специфичность интерференции, индукция синтеза нейтрализующих антител и протективные свойства [11, 45]. С-концевой участок gp90 и N-концевой участок gp45 вируса ИНАН являются высококонсервативными и иммунодоминантными областями [60].
В состав сердцевины вирионов входит 4 негликолизированных белка (р26, р15, pli, р9), однако основная масса состоит из белков р26 и р15, которые
играют важную роль в сборке вирусных частиц. Четыре минорных полипептида (р70, р61, рЗО, р23) присутствуют в вирионах в незначительных количествах (около 1%) [5, 11,60, 162].
Мажорный внутренний группоспецифический антиген р26 вируса ИНАН составляет 40% от всех протеинов вириона [57, 149, 162] и может быть определен в реакции диффузионной преципитации (РДП) [9, 67].
2.3.3 Антигенная вариабельность
Штаммы и изоляты вируса ИНАН, выделенные в различных частях земного шара, в антигенном отношении идентичны. Так же известно, что они различаются в реакции нейтрализации (РН) и перекрестной защиты на лошадях, но имеют общий антиген, выявляемый в реакции связывания комплемента (РСК) и РДП [11, 34, 45]. Известно, что вирус ИНАН дает перекрестные серологические реакции с вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), но не дает таких реакций со всеми другими ретровирусами животных [11, 120].
Большое значение в инфекционном процессе имеет антигенная вариабельность вируса ИНАН. Установлено, что в процессе инфекции происходят изменения поверхностных антигенов вируса («антигенный дрейф»), что сопровождается появлением антигенных вариантов. Новые антигенные варианты вируса появляются при каждом рецидиве болезни [46, 47, 86, 102, 112, 113, 158, 162]. Вариабельность гликопротеинов оболочки вируса ИНАН является одним из основных механизмов защиты возбудителя от элиминирующего воздействия факторов иммунитета [42, 60, 113, 122, 158].
R. С. Montelaro et al. (1984) исследовали антигенную изменчивость вируса ИНАН при хронически протекающей инфекции у пони. От животных при каждом рецидиве инфекции выделяли вирус, который значительно отличался в антигенном отношении в реакции нейтрализации. Выявляли различия подвижности гликопротеидов gp90 и gp45 в полиакриламидном геле. В то же
Похожие диссертационные работы по специальности «Вирусология», 03.02.02 шифр ВАК
Молекулярно-генетический анализ и биологическая характеристика полевых изолятов вируса лейкоза птиц, циркулирующих на территории Российской Федерации2014 год, кандидат наук Плотников, Вадим Алексеевич
Выявление герпесвируса сибирского осетра с помощью ПЦР в режиме реального времени и молекулярно-генетическая характеристика изолятов вируса2013 год, кандидат наук Калабекова, Фатима Султанхамидовна
Идентификация возбудителей болезней Шмалленберг и Акабане на основе ПЦР в режиме реального времени2014 год, кандидат наук Никитина, Елена Григорьевна
Молекулярно-генетическая характеристика штаммов вируса миксомы кроликов2013 год, кандидат биологических наук Синдрякова, Ирина Петровна
Инфекционная анемия: разработка диагностических тест-систем РДП и ИФА на основе антигена культурального вируса2001 год, кандидат биологических наук Люлькова, Лариса Сергеевна
Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Герасимова, Надежда Николаевна, 2014 год
8 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
1. Алексеенкова, C.B. Диагностика вирусных болезней лошадей методом ПЦР /
C.B. Алексеенкова, Г.К. Юров, К.П. Юров // Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные. - 2011 - № 3 - С. 37-39.
2. Архипов, Н.И. Медленные инфекции животных / Н.И Архипов, И.А. Бакулов,
Л.И. Соковых. -М.: Агропромиздат, 1987. - 191 с.
3.Белоусова, Р.В. Ветеринарная вирусология / Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская, И.В. Третьякова. - М.: КолосС, 2007. - 424 с.)
4. Беляков, И.М. Диагностики внутренних незаразных болезней
сельскохозяйственных животных / И.М. Беляков. - М.: Колос, 1975. -288с.
5. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А .Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв,
Н.В. Фомина-М.: ВНИТИБП, 1998. - 928 с.
6. Вирусология / под ред. Б. Филдса, Д. Найпа; пер. с англ. - М.: Мир, 1989.- Т 1.
-494 с.
7. Горальский, Л.П. Патоморфологические изменения при латентном течении
инфекционной анемии лошадей / Л.П. Горальский А.Е. Галатюк // Ветеринария. - 2000. - №6. - С. 17-20.
8. Зуев, В.А. Медленные вирусные инфекции человека и животных / В.А. Зуев -
М.: Медицина, 1988. —256 с.
9. Иммунологические методы диагностики инфекционной анемии лошадей /
Г.К. Юров, C.B. Алексеенкова, К.А. Диас Хименес, К.П. Юров // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. - 2013. - № 1. — С. 28-30
10. Инструкция о мероприятиях по предупреждению и ликвидации инфекционной анемии лошадей [Электронный ресурс]. / Управление ветеринарии министерства сельского хозяйства СССР. - М.: 1982. - Режим доступа: http://www.arriah.ru/en/node/1104. - Загл. с экрана.
11. Инфекционная патология животных: в 2 т./ под ред. А .Я. Самуйленко, Б.В.Соловьева, Е.А. Непоклонова, Е.С. Воронина. - М.: ИКЦ «Академкнига», 2006-Т.1. -2006. -1911 с.
12. Инфекционные болезни животных / Б.Ф. Бессарабов, A.A. Ватутин, Е.С. Воронин [и др.]; под ред. А. А. Сидорчука. - М.: КолосС, 2007. - 671 с.
13. Инфекционные болезни лошадей в Казахстане и меры борьбы с ними / А.Р. Сансызбай, А.Б. Бижанов, A.M. Намет, Б.Б. Кайыпбай, А. Жакупбаев // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы Междунар. науч.-практич. конф. - Новосибирск, 2004. - С. 218-220.
14. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин.- М., 1990. - 352 с.
15. Люлькова, Л.С. Изучение серологических, морфологических и некоторых физико-химических свойств культурального вируса инфекционной анемии лошадей // Л.С. Люлькова, А.Я. Самуйленко // Ветеринарный врач. - 2013. -№2.-С. 10-12.
16. Люлькова, Л.С. Инфекционная анемия: разработка диагностических тест-систем РДП и ИФА на основе антигена культурального вируса: дис. ... канд. биол. наук / Люлькова Лариса Сергеевна. - Щелково, 2001. - 166 с.
17. Люлькова, Л.С. Очистка препарата антигена культурального вируса инфекционой анемии лошадей / Л.С. Люлькова, А.Я. Самуйленко // Ветеринарный врач. - 2013.-№1.-С. 17-19.
18. Маниатис, Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование: пер.с англ. / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук - М.: Мир, 1984. - 480 с.
19. Методические рекомендации по борьбе с инфекционной анемией / К.П. Юров, C.B. Алексеенкова, Г.К. Юров, Е.В. Ярных // Современные средства и методы обеспечения ветеринарного благополучия по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел / ГНУ ВИЭВ. - М., 2011,-С.71-87.
20. Методические рекомендации по борьбе с инфекционной анемией лошадей: инструктивно-метод. издание / К.П. Юров, C.B. Алексеенкова, Г.К. Юров, Е.В. Ярных. - М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2010. - 60 с.
21. Орлов, Ф.М. Инфекционные и инвазионные болезни лошадей / Ф.М. Орлов -М.: Колос, 1976-384 с.
22. Подобедов, А.И. Постоянство преципитирующих антител у лошадей-вирусоносителей инфекционной анемии / А.И. Подобедов // Инфекционная патология сельскохозяйственных животных: труды ВИЭВ. - М., 1984. - Т. 61. - С.76-80.
23. ПЦР в реальном времени / Д.В. Ребриков, Г.А. Саматов, Д.Ю. Трофимов [и др.]; под ред. Ребрикова. - М.: Бином. Лаборатория знаний, 2009. - 223 с.
24. Россельхознадзор, 2014 [Электронный ресурс] - Режим доступа: http://www.fsvps.ru/fsvps/press/4175.html. - Загл. с экрана.
25. Сергеев, В А Вирусы и вирусные вакцины / В А. Сергеев, Е.А. Непоклонов, Т.И. Алипер. - М.: Библионика, 2007. - 524 с.
26. Сологуб, В.К. Электронномикроскопическое изучение вируса инфекционной анемии лошадей / В.К. Сологуб, К.П. Юров, Г.И. Надточей // Доклады XX Всемирного ветеринарного конгресса. - Салоники, Греция, 1975. - Т. 3. -С.2123- 2125.
27. Сюрин, В.Н. Инфекционная анемия лошадей / В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина // Диагностика вирусных болезней животных. М., 1991. - С.308-320.
28. Усикова, Т.Н. Инфекционная анемия лошадей в Республике Хакасия / Т.Н. Усикова, М.И. Сергеева // Проблемы развития АПК Саяно-Алтая. - Абакан, 2008.- 4.2.-С. 101 -102.
29. Федосов, Д.В. Исследование ретровирусных инфекций кошек // Молекулярная диагностика-2007. Сб. трудов VI Всероссийской науч.-практ. конф. с междунар. участ. - М., ООО «ИнтерЛабСервис»: - 2007. - Т. II. -0.111-115.
30. Финогенов, А.Ю. Тест-система «ИФА-ИНАН ЛОШАДЕЙ-АТ» для диагностики инфекционной анемии лошадей методом иммуноферментного анализа / А.Ю. Финогенов // Экология и животный мир. - 2012. - № 2. - С. 40-46.
31. Шуляк, Б.Ф. Лентивирусы копытных. Общая характеристика, история и распространение / Б.Ф. Шуляк // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. - 2006. - № 1. - С. 5-8.
32. Эпизоотологический мониторинг, лечение и профилактика заразных болезней лошадей в Украине / А.Е. Галатюк, В.Л. Бегас, А.И. Каневский, Ж.В. Рибачук, Н.Л. Радзиховский, А.В. Абрамов // Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: материалы Международной научно-практической конференции. - Саратов, 2010. - С. 109-113.
33. Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных / А.А. Конопаткин, И.А. Бакулов, Я.В.Нуйкин [и др.]; под ред. А.А. Конопаткина. - М.: Колос, 1984. - 544 с.
34. Юров, К. П. Вирусные болезни лошадей / К.П. Юров, В.Т. Заблоцкий, Н.Е. Косминков. -М.: Зоомедлит, 2010,- 256 с.
35. Юров, К.П. Инфекционная анемия лошадей и ее современная диагностика / К.П. Юров, С.В. Алексеенкова, Г.К. Юров // Ветеринария. - 2013. - № 4 - С. 37.
36. Юров, К.П. / Инфекционная анемия лошадей - модель ретровирусной инфекции // Бюллетень Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии. - 1996. - вып.77. - С. 37-38.
37. Юров, К.П. Инфекционные болезни лошадей / К.П. Юров. - М.: Росагропромиздат, 1991. - 192 с.
38. Юров, К.П. Профилактика вирусных болезней лошадей / К.П. Юров. - М.: Колос, 1984.-143 с.
39. A live attenuated equine infectious anemia virus pro viral vaccine with a modified S2 gene provides protection from detectable infection by intravenous virulent virus challenge of experimentally inoculated horses / F. Li, J.K. Craigo, L. Howe, J.D. Steckbeck, S. Cook, C. Issel, R.C. Montelaro // J.Virol. - 2003. - Vol. 77, № 13. -P.7244-7253.
40. Altara, I. La reaction de fixation du complement appliquee au diagnostic de l'anemie infectieuse des equides / I. Altara, A. Sera, G. Guarini // Bull. Off. Int. Eqiz. - 1953. - Vol. 39. - P. 708-720.
41. Amplification of complete gag gene sequences from geographically distinct equine infectious anemia virus isolates / B. Boldbaatar, T. Bazartseren, R. Koba, H. Murakami, K. Oguma, K. Murakami, H. Sentsui // J. Virol. Methods. - 2013. -Vol. 189, № 1.-P. 41-46.
42. An EIAV field isolate reveals much higher levels of subtype variability than currently reported for the equine lentivirus family / J.K. Craigo, S. Barnes, B. Zhang, S J. Cook, L. Howe, C J. Issel, R.C. Montelaro // Retrovirology. - 2009. -Vol. 6: 95.
43. A new type of retrovirus isolated from patients presenting with lymphadenopathy and acquired immunodeficiency syndrome: structural and antigenic relatedness with EIA virus / L. Montagnier, C. Dauguet, C. Axler, S. Chamaret, J. Gruest, M.T. Nugeyre, F. Rey, F. Barre-Sinoussi, J.C. Chermann // Ann. Virol. - 1984. - Vol. 135, №1.-P. 119-134.
44. An outbreak of equine infectious anaemia in Ireland during 2006: The modes of transmission and spread in the Kildare cluster / S.J. More, I. Aznar, T. Myers, D.P. Leadon, T.A. Clegg // Equine Vet. J. - 2008. - Vol. 40, № 7. - P. 709-711.
45. Antigenic mapping of the envelope proteins of equine infectious anemia virus: identification of a neutralization domain and a conserved region on glycoprotein 90 / K.A. Hussain, C.J. Issel, K.L. Schnorr, P.M. Rwambo , M. West, R.C. Montelaro //Arch. Virol. - 1988. - Vol. 98. - P.213-224.
46. Antigenic variation during persistent infection by equine infectious anemia virus, a retrovirus / R.C. Montelaro, B. Parekh, A. Orrego, C.J. Issel // J. Biol. Chem. -1984.-Vol. 259.-P. 10539-10544.
47. Antigentic variation in lentiviral diseases / J.E. Clements, S.L. Gdovin, R.C. Montelaro, O. Narayan // Annu. Rev. Immunol. - 1988. - Vol 6. - P. 139-159.
48. Application of equine infectious anemia virus core proteins produced in a baculovirus expression system to serological diagnosis / X.G. Kong, H. Pang., T.
Sugiura, H. Sentsui, T. Onodera, Y. Matsumoto, H. Akashi // Microbiol. Immunol. - 1997. - Vol.41, №12. - P. 975- 980.
49. Ataseven, V. S. Equine infectious anemia in mules, donkeys, and horses: Epidemiologic studies in the different geographic regions of Turkey / V. S. Ataseven, H. H. Arslan // Journal of Equine Veterinary Science. - 2005. - Vol. 25, № 10.-P. 439-441.
50. A transitional endogenous lentivirus from the genome of a basal primate and implications for lentivirus evolution / R.J. Gifford, A. Katzourakis, M. Tristem, O. Pybus, M.Winters, R.W. Shafer // Proc Nat Acad Sci USA.- 2008. - Vol. 105, № 51.-P. 20362-20367.
51. Banks, K.L. Quantitation of immunoglobulin-bearing lymphocytes and lymphocyte response to mitogens in horses persistently infected by equine infectious anemia virus / K.L. Banks, J.B. Henson // Infect Immun. - 1973. - Vol. 8, № 4. - P. 679682.
52. Bloodmeal residues on mouthparts of Tabanus fuscicostatus (Diptera: Tabanidae) and the potential for mechanical transmission of pathogens / L.D. Foil, W.V. Adams, J.M. McManus, C.J. Issel // Journal of Medical Entomology. - 1987. - Vol. 24, №6.-P. 613-616.
53. Caij, A.B. Epidemiology and genetic characterization of equine infectious anaemia virus strains isolated in Belgium in 2010 // A.B. Caij, M. Tignon // Transbound. Emerg. Dis. - 2012. - Vol. 61, № 5. - P. 464-468.
54. Carpenter, S. Change in host cell tropism associated with in vitro replication of equine infectious anemia virus / S. Carpenter, B. Chesebro // J. Virol. - 1989. -Vol. 63, № 6. - P. 2492-2496.
55. Carpenter, S. Molecular and biological characterization of equine infectious anemia virus Rev / S. Carpenter, D. Dobbs // Curr. HIV Res. - 2010. - Vol. 8, № 1. -P. 87-93.
56. Characterization of an equine macrophage cell line: application to studies of EIAV infection / I. Fidalgo-Carvalho, J.K. Craigo, S. Barnes, C. Costa-Ramos, R.C. Montelaro // Vet Microbiol. - 2009. -Vol. 136. - P. 8-19.
57. Chevers, W. P. Equine infectious anemia virus: immunopathogenesis and persistence / W.P Cheevers , Т. C. McGuire // Rev. Infect.Dis. - 1985.- Vol. 7. -P. 83-88.
58. Chomczynski, P. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction / P. Chomczynski, N. Sacchi // Anal. Biochem. - 1987. - V.162, № 1. -P.156-159.
59. Coggins, L. Immunodiffusion reaction in equine infectious anemia / L. Coggins, N.L. Norcross // Cornell Vet. - 1970. - Vol. 60, № 2. - P. 330-335.
60. Cook, R.F. Equine infectious anemia and equine infectious anemia virus in 2013: A review // R.F. Cook, C. Leroux, C.J. Issel // Vet. Microbiol. - 2013. - Vol. 167. -P.181-204.
61. Corticosteroid immunosuppression and monoclonal antibody-mediated CD5+ T lymphocyte depletion in normal and equine infectious anaemia virus-carrier horses / D.B. Tumas, M.T. Hines, L.E. Perryman, W.C. Davis, T.C. McGuire // J. Gen. Virol. - 1994. - Vol. 75. - P. 959- 968.
62. Cui, J. Endogenous lentiviruses in the ferret genome / J. Cui, E.C. Holmes // J.Virol. - 2012. - Vol. 86, № 6. - P. 3383-3385.
63. Cullen, B.R. HIV-1 auxiliary proteins: making connections in a dying cell / B.R. Cullen // Cell. - 1998. - Vol. 93, № 5. - P. 685-692.
64. Design and validation of an ELISA for equine infectious anemia (EIA) diagnosis using synthetic peptides / A. Soutullo, V. Verwimp, M. Riveros, R. Pauli, G. Tonarelli // Vet. Microbiol. - 2001. - Vol. 79, № 2. - P. 111-121.
65. Detailed country (ies) disease incidence, 2013 [электронный ресурс]. — Режим доступа: http://www.oie.int/wahis_2/public/wahid.php/ Diseaseinformation/statusdetail. - Загл. с экрана.
66. Detailed mapping of the antigenicity of the surface unit glycoprotein of equine infectious anemia virus by using synthetic peptide strategies / J.M. Ball, K.E. Rushlow, C.J. Issel, R.C. Montelaro // J. Virol. - 1992. - Vol. 66, № 2. - P. 732742.
67. Detection, molecular characterization and phylogenetic analysis of full-length equine infectious anemia (EIAV) gag genes isolated from Shackleford Banks wild horses / S. Capomaccio, Z.A. Willand, S.J. Cook, C.J. Issel, E.M. Santos, J.K. Reis, R.F. Cook // Vet. Microbiol. - 2012. - Vol. 157. - P. 320-332.
68. Detection of equine infectious anaemia virus in native Japanese ponies / K. Murakami, M. Konishi, K. Kameyama, T. Shibahara // Vet. Rec. -2012. - Vol. 171, №3.-P. 72-73.
69. Detection of equine infectious anemia viral RNA in plasma samples from recently infected and long-term inapparent carrier animals by PCR / J.L. Langemeier, S.J. Cook, R.F. Cook, K.E. Rushlow, R.C. Montelaro, C.J. Issel // J. Clin. Microbiol. -1996. - Vol. 34, № 6. - P. 1481-1487.
70. Development and characterization of an in vivo pathogenic molecular clone of equine infectious anemia virus / R.F. Cook, C. Leroux, S.J. Cook, S.L. Berger, D.L. Lichtenstein, N.N. Ghabrial, R.C. Montelaro, C.J. Issel // J. Virol. - 1998. -Vol. 72, №2.-P. 1383-1393.
71. Development, evaluation, and laboratory validation of immunoassays for the diagnosis of equine infectious anemia (EIA) using recombinant protein produced from a synthetic p26 gene of EIA virus / H. Singha, S.K. Goyal, P. Malik, S.K. Khurana, R.K. Singh // Indian. J. Virol. - 2013. - Vol. 24, № 3. - P. 349-356.
72. Development of a multiplex real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction for equine infectious anemia virus (EIAV) / R.F. Cook , S.J. Cook, F.L. Li, R.C. Montelaro, C.J. Issel // J. Virol. Methods. - 2002. - Vol. 105, № 1. - P. 171-179.
73. Development of a nested PCR assay to detect equine infectious anemia pro viral DNA from peripheral blood of naturally infected horses / J.B. Dong, W. Zhu, F.R. Cook, Y. Goto, Y. Horii, T. Haga // Arch. Viro. - 2012. - Vol. 157, № 11. - P. 2105-2111.
74. Diagnosis of equine infectious anaemia during the 2006 outbreak in Ireland / A. Cullinane, M. Quinlivan,; N. M. Patterson, [et al.] // Vet. Rec. - 2007. - Vol. 16, № 19.-P. 647-652.
75. Differential responses of Equus caballus and Equus asinus to infection with two pathogenic strains of equine infectious anemia virus / S J. Cook., R.F. Cook, R.C. Montelaro, C.J. Issel // Vet. Microbiol. - 2001. - Vol. 79, № 2. - P. 93-109.
76. Distribution of equine infectious anemia in horses in the north of Minas Gerais State, Brazil / D.J. Bicout, R. Carvalho, K. Chalvet-Monfray, P. Sabatier // J. Vet. Diagn. Invest. - 2006. - Vol. 18, № 5. - P. 479-482.
77. Dong, J. Equine infectious anemia virus in Japan: Viral isolates V70 and V26 are of North American not Japanese origin / J. Dong, F.R. Cook, W. Zhu // Vet Microbiol.-2014.
78. Early detection of dominant Env-specific and subdominant Gag-specific CD8+ lymphocytes in equine infectious anemia virusinfected horses using major histocompatibility complex class I/peptide tetrameric complexes / R.H. Mealey, A. Sharif, S.A. Ellis, M.H. Littke, S.R. Leib, T.C. McGuire // Virology. - 2005. - Vol. 339, № l.-P. 110-126.
79. Efficacy of inactivated whole-virus and subunit vaccines in preventing infection and disease caused by equine infectious anemia virus / C.J. Issel, D.W. Horohov, D.F. Lea [et al.] // J. Virol. - 1992. - Vol. 66, № 6. - P. 3398-3408.
80. Electron microscopy of a persistent virus, equine infection anemia, grow in an equine dermal cell line (ATCCCI 57) / G.F. Amborski, R.L. Amborski, V. Barta, G. Jeffer, G.J. Issel //In Vitro. - 1977. - Vol.13, № 3. - P. 161 -161.
81. Emerman, M. HIV-1 regulatory/accessory genes: keys to unraveling viral and host cell biology / M. Emerman, M.H. Malim // Science. - 1998. - Vol. 280. - P. 18801884.
82. Enhancement of equine infectious anemia virus virulence by identification and removal of suboptimal nucleotides / R.F. Cook, S.J. Cook, S.L. Berger [et al.] // Virology. - 2003. - Vol. 313, № 2. - P. 588-603.
83. Envelope-specific T-helper and cytotoxic T-lymphocyte responses associated with protective immunity to equine infectious anemia virus / T.L. Tagmyer, J.K. Craigo , S.J. Cook, C.J. Issel, R.C. Montelaro // J. Gen. Virol. - 2007. - Vol. 88. - P. 1324-1336.
84. Equine Infectious Anemia: Active Surveillance in Central Italy 2007-2009 / C. Maresca, E. Scoccia, L. Faccenda, J. Zema, S. Costarelli // Journal of Equine Veterinary Science. - 2012. - Vol. 32, № 9. - P. 596-598.
85. Equine infectious anemia in mules: virus isolation and pathogenicity studies / V. Spyrou, M. Papanastassopoulou, V. Psychas. C. Billinis, M. Koumbati, J. Vlemmas, G. Koptopoulos // Vet. Microbiol. - 2003. - Vol. 95. - P. 49-59.
86. Equine infectious anemia virus (EIAV) humoral responses of recipient ponies and antigenic variation during persistent infection / P.M. Rwambo, C.J. Issel, W.V. Adams Jr., K.A. Hussain, M. Miller, R.C. Montelaro // Archives of virology. -1990.-Vol. 111.-P. 199-212.
87. Equine infectious anemia virus gene expression: characterization of the RNA splicing pattern and the protein products encoded by open reading frames SI and S2 / R.L. Schiltz., D.S. Shih, S. Rasty, R.C. Montelaro, K.E. Rushlow // J. Virol. -1992. - Vol. 66, № 3. - P. 3455-3465.
88. Equine infectious anemia virus genomic evolution in progressor and nonprogressor ponies / C. Leroux, J.K. Craigo, C. J. Issel, R.C. Montelaro // J. Virol. - 2001.- Vol. 75, №10.-P. 4570-4583.
89. Equine infectious anemia virus is found in tissue macrophages during subclinical infection / J.L. Oaks, T.C. McGuire, C. Ulibarri, T.B. Crawford // J.Virol. - 1998. -Vol. 72, № 9. - P. 7263-7269.
90. Experimental Rhodococcus equi and equine infectious anemia virus DNA vaccination in adult and neonatal horses: effect of IL-12, dose, and route / R.H. Mealey, D.M. Stone, M.T. Hines, D.C. Alperin, M.H. Littke, S.R. Leib, S.E. Leach, S.A. Hines // Vaccine. - 2007. - Vol. 25, № 43. - P. 7582-7597.
91. Fenner, F. / The classification and nomenclature of viruses / Fenner F // Virology. - 1976. - Vol. 71, № 2. - P.371-378.
92. Friedman, H. In vivo Models of HIV Disease and Control / H. Friedman, S. Specter, M. Bendinelli. - Springer, 2006-436 p.
93. Genetic and biological variation in equine infectious anemia virus Rev correlates with variable stages of clinical disease in an experimentally infected pony // M.
Belshan, P. Baccam, J.L. Oaks, B.A. Sponseller, S.C. Murphy, J. Cornette, S. Carpenter // Virology. - 2001. - Vol. 279, № 1. - P. 185-200.
94. Genetic characterization by composite sequence analysis of a new pathogenic field strain of equine infectious anemia virus from the 2006 outbreak in Ireland / M. Quinlivan, F. Cook, R. Kenna, J.J. Callinan, A. Cullinane // J. Gen. Virol. - 2013. -Vol. 94.-P. 612-622.
95. Genetic immunization with codon-optimized equine infectious anemia virus (EIAV) surface unit (SU) envelope protein gene sequences stimulates immune responses in ponies / R.F. Cook, S.J. Cook, P.S. Bolin, L.J. Howe, W. Zhou, R.C. Montelaro, C.J. Issel // Vet. Microbiol. - 2005. - Vol. 108. -23-37.
96. Genomic alterations associated with persistent infections by equine infectious anaemia virus, a retrovirus / S. Payne, R.C. Montelaro, C.J. Issel // J. Gen. Virol. -1984. - Vol. 65. - P. 1395-1399.
97. Geographic structuring of global EIAV isolates: a single origin for New World strains? / S. Capomaccio, K. Cappelli , R.F. Cook, F. Nardi , R. Gifford , M.L. Marenzoni, F. Passamonti // Virus. Res. - 2012. - Vol. 163, № 2. - P. 656-659.
98. Hines, R. DH82 cells: a macrophage cell line for the replication and study of equine infectious anemia virus / R. Hines, W. Maury // J. Virol. Methods. - 2001. -Vol. 95.-P. 47-56.
99. Human immunodeficiency virus and AIDS: insights from animal lentiviruses / R.J. Miller, J.S. Cairns, S. Bridges, N. Sarver // J. Virol. - 2000. - Vol. 74, № 16. - P. 7187-7195.
100. Identification of a novel equine infectious anemia virus field strain isolated from feral horses in southern Japan / J.B. Dong, W. Zhu, F.R. Cook, Y. Goto, Y. Horii, T. Haga // J. Gen.l Virol. - 2013. -Vol. 94. - P. 360-365.
101. Immune suppression of challenged vaccinates as a rigorous assessment of sterile protection by lentiviral vaccines / J.K. Craigo, S. Durkin, T.J. Sturgeon, T. Tagmyer, S.J. Cook, C.J. Issel, R.C. Montelaro // Vaccine. -2007. - Vol. 25, № 5. -P.834-845.
102. Insertions, duplications and substitutions in restricted gp90 regions of equine infectious anaemia virus during febrile episodes in an experimentally infected horse / Y.H. Zheng, T. Nakaya, H. Sentsui [et al.] //J. Gen. Virol. - 1997. - Vol. 78. -P. 807-820.
103. Interstitial lung disease associated with Equine Infectious Anemia Virus infection in horses / P.F. Bolfa, M. Nolf, J.L. Cadore, C. Catoi, F. Archer, C. Dolmazon, J.F. Mornex, C. Leroux // Vet. Res. - 2013. - Vol. 44. - P. 113- 121.
104. Isolation and comparative biochemical properties of the major internal polyproteides of equine infectious anemia virus / R.C. Montelaro, N. Lohrey, B. Parekh, E.W. Blakeney, C.J. Issel // J. Virol. - 1982. - Vol. 42, № 3. -P. 10291038.
105. Issel, C.J. A review of techniques for the serologic diagnosis of equine infectious anemia / C.J. Issel, R.F. Cook // J. Vet. Diagn. Invest. - 1993. - Vol. 5, № 1. - P. 137-141.
106. Issel, C.J. Evolution of equine infectious anemia diagnostic tests: recognition of a need for detection of Anti-EIAV glycoprotein antibodies / C.J. Issel, P.M. Rwambo, R.C. Montelaro // Equine Infectious Diseases V. Proceedings of fifth international conference. - Lexington, 1987. - P. 196-200.
107. Issel, C J. Prospective study of progeny of inapparent equine carriers of equine infectious anemia virus / C.J. Issel, W.V. Adams Jr., L.D. Foil // Am. J. Vet. Res. -1985.-Vol. 46, №5.-P. 1114-1116.
108. Issel, C.J. Studies on equine infectious anemia virus transmission by insects / C.J. Issel, L.D. Foil // J. Am. Vet. Med. Assoc. - 1984. - Vol. 184, № 3. - P. 293297.
109. Jaagsiekte Sheep Retrovirus (JSRV): from virus to lung cancer in sheep / C. Leroux, N. Girard, V. Cottin, T. Greenland, J.F. Mornex , F. Archer // Vet. Res. -2007. - Vol. 38, № 2. - P. 211-228.
110. Kemen, M.J. Equine infectious anemia: transmission from infected mares to foals / M.J. Kemen, L. Coggins // J. Am. Vet. Med. Assoc. - 1972. - Vol. 161, № 5.-P. 496-499.
111. Kobayashi, K. Serial passages of equine infectious anemia virus in horse leukocyte culture / K. Kobayashi, Y. Kono // Natl. Inst. Anim. Health Q. - 1967. -Vol. 7, № 1. - P. 1-7.
112. Kono, Y. Antigenic drift of equine infectious anemia virus in chronically infected horses / Y. Kono, K. Kobayashi, Y. Fukunaga // Arch Gesamte Virusforsch. - 1973. -Vol. 41, №. - P. 1-10.
113. Kono, Y. Antigenic variation of equine infectious anemia virus as detected by virus neutralization. Brief report / Y. Kono // Archives of Virology. - 1988. - Vol. 98.-P. 91-97.
114. Kono, Y. Changes in pathogenicity of equine infectious anemia virus during passages in horse leukocyte cultures / Y. Kono, K. Kobayashi // Natl. Inst. Anim. Health Q. - 1970. - Vol. 10, № 3. - P. 106-112.
115. Kono, Y. Development of immunity after immunization with avirulent, attenuated and virulent equine infectious anemia viruses / Y. Kono // Proc 3 rd Int. Conf. Equine Infect. Dis. - Paris, 1972. - P. 242-254.
116. Kono, Y. Growth characteristics of equine infectious anemia virus in horse leukocyte culture / Y. Kono, T. Yochino, Y. Fukunaga // Arch. Gesamte Virusforsch. - 1970. - Vol.30, № 2. - P. 252-256.
117. Kono, Y. Immunization of horses against equine infectious anemia (EIA) with an attenuated EIA virus / Y. Kono, K. Kobayashi, Y. Fukunaga //Natl. Inst. Anim. Health Q.- 1970.-Vol. 10, №3.-P. 113-122.
118. Kono, Y. Lymphocyte responses to specific viral antigen and nonspecific mitogens in horses infected with equine infectious anemia virus / Y. Kono, H. Sentsui, Y .Murakami // Journal of equine medicine and surgery. - 1978. - Vol. 1. -P. 363-374.
119. Kono, Y. Resistance of horses infected chronically with equine infectious anemia virus against reinfection / Y. Kono, Y. Fukunaga, K. Kobayashi // Natl. Inst. Anim. Health Q.- 1973.-Vol. 13, №4.-P. 173-181.
120. Kono, Y. Serological comparison among various strains of equine infectious anemia virus / Y. Kono, K. Kobayashi, Y. Fukunaga // Arch. Gesamte Virusforsch. - 1971. - Vol. 34, № 3. _ p. 202-208.
121. Kono, Y. Viremia and immunological responses in horses infected with equine infectious anemia virus / Y. Kono // Natl. Inst. Anim. Health Q. - 1969. - Vol. 9, № l.-P. 1-9.
122. Leroux, С. Equine Infectious Anemia Virus (EIAV): what has HIV's country cousin got to tell us? / C. Leroux, J.L. Cadoré, R.C. Montelaro // Vet. Res. - 2004. -Vol. 35, №4.-P. 485-512.
123. Leroux, С. Novel and dynamic evolution of equine infectious anemia virus genomic quasispecies associated with sequential disease cycles in an experimentally infected pony / C. Leroux, С J. Issel, R.C. Montelaro // J. Virol. -1997. - Vol.71, № 12. - P. 9627-9639.
124. Lew A.M. A comparison of ELISA, FAST-ELISA and gel diffusion tests for detecting antibody to equine infectious anaemia virus // A.M. Lew, L.M. Thomas, P.J. Huntington // Vet. Microbiol. - 1993. - Vol. 34, № 1. - P. 1-5.
125. Li, F. The S2 gene of equine infectious anemia virus is dispensable for viral replication in vitro / F. Li, В .A. Puffer, R.C. Montelaro // J. Virol. - 1998. - Vol. 72, № 10.-P. 8344-8348.
126. Ligné, M. Mémoire et observations sur une maladie de sang, connue sous le nom d'anhémie hydrohémie, cachexie acquise du cheval / M. Ligné. // Rec. Med. Vet. Ее. Alfort. - 1843. - № 20. - P. 30^*5.
127. List of countries by disease situation, 2013 [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://oie.int/wahis_2/public/wahid.php/Diseaseinformation/ statuslist. -Загл. с экрана.
128. Long terminal repeat sequences of equine infectious anaemia virus are a major determinant of cell tropism / S.L. Payne, K. La Celle, X.F. Pei, X.M. Qi, H. Shao, W.K. Steagall, S. Perry, F. Fuller // J Gen Virol. - 1999.-Vol. 80. - P. 755-759.
129. Lucas, M.H. Equine infectious anaemia / M.H. Lucas, T.H.R. Davies // Equine veterinary Education. -1995. - Vol. 7, № 2. - P. 89-92.
130. Malmquist, W.A. Production of equine infectious anemia antigen in a persistently infected cell line. / W.A. Malmquist, D. Barnett, C.S. Becvar //Arch. Gesamte. Virusforsch. - 1973. - Vol. 42, № 4. - P. 361-370.
131. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals. Chapter 2. 5. 6. Equine infectious anaemia, 2013 [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.oie.int/international-standard-setting/terrestrial-manual/access-online. -Загл. с экрана.
132. Maturation of the cellular and humoral immune responses to persistent infection in horses by equine infectious anemia virus is a complex and lengthy process / S.A. Hammond, S.J. Cook, D.L. Lichtenstein, C.J. Issel, R.C. Montelaro // J.Virol. -1997. - Vol. 71, № 5. - P. 3840- 3852.
133. Maury, W. Equine endothelial cells support productive infection of equine infectious anemia virus / W.Maury, J.L. Oaks, S. Bradley // J. Virol. - 1998. - Vol. 72,№ 11.-P. 9291-9297.
134. McGuire, T.C. Immunofluorescent localization of equine infectious anemia virus in tissue / T.C. McGuire, T.B. Crawford, J.B. Henson // Am. J. Pathol. - 1971. -Vol. 62, №2.-P. 283-294.
135. Mechanical transmission of equine infectious anemia virus by deer flies (Chrysops flavidus) and stable flies (Stomoxys calcitrans) / L.D. Foil, C.L. Meek, W.V. Adams, C.J. Issel. // Am. J. Vet. Res. - 1983. - Vol. 44, № 1. - P. 155-156.
136. MEGA5: molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood, evolutionary distance, and maximum parsimony methods / K. Tamura, D. Peterson, N. Peterson, G. Stecher, M. Nei, S. Kumar // Mol. Biol. Evol. - 2011. - Vol. 28, № 3.-P. 2731-2739.
137. Molecular detection, epidemiology, and genetic characterization of novel european field isolates of equine infectious anemia virus / K. Cappelli, S. Capomaccio, F.R. Cook, M. Felicetti, M.L. Marenzoni, G. Coppola, A. Verini-Supplizi, M. Coletti, F. Passamonti // Journal of Clinical Microbiology. - 2011. -Vol. 4,N. 1.-P. 27-33.
138. Momtaz, H. Detection of pro viral sequences of equine infectious anemia virus in peripheral blood cells of horses in Iran / H. Momtaz, S. Nejat // Bulgarian Journal Of Veterinary Medicin. - 2010. - Vol. 13, № 1. - P. 18-22.
139. Montelaro, R.C. Antigenic reactivity of the major glico- protein of equine infectious anemia virus, a retrovirus / R.C. Montelaro, M. West, C.J. Issel // Virology. - 1984. - Vol. 136, № 2. - P. 368-374.
140. Motie A. An outbreak suspected equine infectious anemia in Guyana / A. Motie // Br. Vet. J. - 1986. - Vol. 142, № 1. - P.37-40.
141. Mullins, C.S. Endogenous retrovirus sequences as a novel class of tumor-specific antigens: an example of HERV-H env encoding strong CTL epitopes / C.S. Mullins, M. Linnebacher // Cancer Immunol. Immunother. - 2012. - Vol. 61, № 7. -P. 1093-1100.
142. Mutations occurring during serial passage of Japanese equine infectious anemia virus in primary horse macrophages / Y.H. Zheng, H. Sentsui, Y. Kono, K. Ikuta // Virus Res. - 2000. - Vol. 68, № 1. - P. 93-98.
143. Nagarajan, M.M. Detection of horses infected naturally with equine infectious anemia virus by nested polymerase chain reaction / M.M. Nagarajan, C. Simard // J. Virol. Methods. - 2001. - Vol. 94. - P. 97-109.
144. Nakajima, H. Demonstration of ribonucleic acid-dependent deoxyribonucleic acid polymerase activity associated with equine infectious anemia virus / H. Nakajima, T. Sugiura, C. Ushimi // 4 Int. Conf. on Equine Infectious Diseases: Equine Infectious anemia Workshop. - Lyon, 1976. - P. 3-9.
145. Nakajima, H. Detection of precipitating antibody in equine infectious anaemia by concentrated virus antigen / H. Nakajima, C. Ushimi // Natl. Inst. Anim. Health Q. - 1972. - Vol. 12, № 2. - P. 47-53.
146. Nakajima, H. Equine infectious anemia - research in Japan on the virology, immunology, pathogenesis and control / H. Nakajima, T. Sugiura // Journal of Equine Science. - 1994. - Vol. 5, №1. - P.l-19.
147. Nakajima, H. Immunodiffusion studies of purified equine infectious anemia virus / H. Nakajima, C. Ushimi // Infect. Immun. - 1971. - Vol. 3, № 3. - P. 373377.
148. National center for biotechnology information, 2014 [Электронный ресурс]. -Режим доступа: http://www.ncbi.nlm.nih.gov. - Загл. с экрана.
149. Nishimura, М. Structural proteins of equine infectious anemia virus and their antigenic activity / M. Nishimura, H. Nakajima //Amer. J. Vet. Res. - 1984. - Vol. 45, № l.-P. 5-10.
150. Norcross, N. L. Characterization of an equine infectious anemia antigen extracted from infected horse spleen tissue / N. L. Norcross, L. Coggins // Infect, immun. - 1971. - Vol. 4, № 5. - P. 528-531.
151. Oaks, J.L. Endothelial cell infection in vivo by equine infectious anaemia virus // J.L. Oaks, C. Ulibarri, T.B. Crawford // J. Gen. Virol. - 1999. - Vol. 80. - P. 23932397.
152. O'Rourke, K. Antiviral, anti-glycoprotein and neutralizing antibodies in foals with equine infectious anaemia virus / K. O'Rourke, L.E. Perryman, T.C. McGuire // J. Gen. Virol. - 1988. - Vol. 69. - P. 667-674.
153. Platelets from thrombocytopenic ponies acutely infected with equine infectious anemia virus are activated in vivo and hypofunctional / K.E. Russell, P.C. Perkins, M.R. Hoffman, R.T. Miller, K.M. Walker, F.J. Fuller, D.C. Sellon // Virology. -1999.-Vol. 259, № l.-P. 7-19.
154. Predictive methods to define infection with equine infectious anemia virus in foals out of reactor mares / R.S. McConnico, C.J. Issel, S.J. Cook, R.F. Cook, C. Floyd, H. Bisson // Journal of Equine Veterinary Science. - 2000. - Vol. 20, № 6. -P. 387-392.
155. Quinlivan, M. Real-time quantitative RT-PCR and PCR assays for a novel European field isolate of equine infectious anaemia virus based on sequence determination of the gag gene / M. Quinlivan, R. F. Cook, A. Cullinane // Veterinary Record. - 2007.-Vol. 160, № 18.-P. 611-618.
156. Raabe, M.R. Equine monocyte-derived macrophage cultures and their applications for infectivity and neutralization studies of equine infectious anemia virus / M.R. Raabe, C.J. Issel, R.C. Montelaro // J. Virol. Methods. - 1998. - Vol. 71, № 1.-P. 87-104.___
157. Rapid and simple method for purification of nucleic acids / R. Boom, S.J.A. Sol, M.M.M. Salimans, C.L. Jansen, P.M.E. Wertheim-van Dillen, J. van der Noordaa // J. .Clin. Microbiol. - 1990. - Vol. 28, № 3. _ p.495-503.
158. Rapid emergence of novel antigenic and genetic variants of equine infectious anemia virus during persistent infection / O. Salinovich, S.L. Payne, R.C. Montelaro, K.A. Hussain, C.J. Issel, K.L. Schnorr // J.Virol. - 1986. - Vol.57, №1. - P.71-80.
159. Recrudescence of equine infectious anemia by treatment with immunosuppressive drugs / Y. Kono, K. Hirasawa, Y. Fukunaga, T. Taniguchi // Natl. Inst. Anim. Health Q. - 1976. - Vol. 16, № 1. - P. 8-15.
160. RNA - depended DNA polymerase associated with equine infectious anemia virus / E.G. Archer, T.B. Growford, T.C. McGuire., M.E. Frazier // J.Virol. - 1977. -Vol. 22, № 1.-P. 16-22.
161. Sambrook, J. Molecular Cloning: a laboratory manual / J. Sambrook, D.W. Russell - Cold Spring Harbor, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 200l.-V. 1.-749 p.
162. Sellon, D.C. The immunopathogenesis of equine infectious anemia virus / D.C. Sellon, F.J. Fuller, T.C. McGuire // Virus Research. - 1994. - Vol. 32, № 2. - P. 111-138.
163. Sentsui, H. Phagocytosis of horse erythrocytes treated with equine infectious anemia virus by cultivated horse leukocytes / H. Sentsui, Y. Kono // Arc. Virol. -1987.-Vol. 95.-P. 67-77.
164. Serological survey of equine viral diseases in Mongolia / O. Pagamjav, K. Kobayashi, H. Murakami, Y. Tabata, Y. Miura, B. Boldbaatar, H. Sentsui // Microbiol Immunol. - 2011. - Vol. 55, № 4. - P. 289-292.
165. Shen, R. Development and use of an equine infectious anemia donkey leucocyte attenuated vaccine / R. Shen, Z. Wang // EIAV: A National Review of Policies, Programs and Future Objectives. American Quarter Horse Association. - 1985. - P. 135-148.
166. Sonoda, A. The appreciation of the complement-fixation test for equine infectious anemia reported by Altara et al. / A. Sonoda, S. Ishii, K. Tanaka // The Japanese Journal of Veterinary Science. - 1959. - Vol. 21, № 1. -P.47-58.
167. Standardization and validation of an agar gel immunodiffusion test for the diagnosis of equine infectious anemia using a recombinant p26 antigen /1. Alvarez, G. Gutierrez, A. Vissani, S. Rodriguez, M. Barrandeguy, K. Trono // Vet Microbiol. - 2007. - Vol. 121. - P. 344-351.
168. Stein, C.D. Evidence of transmission of inapparent (subclinical) forms of equine infectious anemia by mosquitoes (Psorophora columbiae), and by injection of the virus in extremely high dilution / C.D. Stein, J.C. Lotze, L.O. Mott // J. Amer. Vet. Med. Assoc. - 1943. - Vol. 102. - P. 163-169.
169. Stephens, R.M. Equine infectious anemia virus gag and pol genes: relatedness to visna and AIDS virus / R.M. Stephens, J.W. Casey, N.R. Rice // Science. - 1986. -Vol. 231.-P. 589-594.
170. Tabanids: Neglected subjects of research, but important vectors of disease agents / F. Baldacchino, M. Desquesnes, S. Mihok, L.D. Foil, G. Duvallet, S. Jittapalapong // Infect. Genet. Evol. - 2014.
171. Tashijan, R.J. Equine infectious anemia as an AIDS animal model / R.J. Tashijan, T.C. Crusberg, // J. Equine Veter. Sci. - 1989. - Vol. 9, № 2. - P. 105-110.
172. The History of Equine Infectious Anemia [Электронный ресурс]. / D. Clark, W. Jeter. - Режим доступа: http://www.floridahorse.com/EIA. - Загл. с экрана.
173. The persistent infection of a canine thymus cell line by equine infectious anemia virus and preliminary data on the production of viral antigens / A.M.P. Bouillant, K. Nielsen, G.M. Ruckerbauer, B.S. Samagh, W.C. Hare // J. Virol Methods. -1986.-Vol. 13, № 4. - P.309-321.
174. The S2 accessory gene of equine infectious anemia virus is essential for expression of disease in ponies / A.J. Fagerness, M.T. Flaherty, S.T. Perry, B. Jia, S.L. Payne, F.J. Fuller // Virology. - 2006. - Vol. 349, № 1. - P. 220-230.
175. The S2 gene of equine infectious anemia virus is a highly conserved determinant of viral replication and virulence properties in experimentally infected ponies / F. Li, C. Leroux, J.K. Craigo, S.J. Cook, C.J. Issel, R.C. Montelaro // J. Virol. - 2000. - Vol. 74, №1.- P. 573-579.
176. Tissue sites of persistent infection and active replication of equine infectious anemia virus during acute disease and asymptomatic infection in experimentally infected equids / S. M. Harrold, S.J. Cook, R.F. Cook, K.E. Rushlow, C.J. Issel, R.C. Montelaro // J. Virol. - 2000. - Vol. 74, № 3. -P. 3112-3121.
177. Transmission of equine infectious anemia virus by Tabanus fuscicostatus / J.A. Hawkins, W.V. Adams Jr., B.H. Wilson, C.J. Issel, E.E. Roth // J. Am. Vet. Med. Assoc. - 1976. - Vol. 168, № 1. - P. 63-64.
178. Transmission of equine infectious anemia virus from horses without clinical signs of disease / C.J. Issel, W.V. Adams Jr., L. Meek, R. Ochoa // J. Am. Vet. Med. Assoc. - 1982. - Vol. 180, № 3. - P. 272-275.
179. Trujillo, E. PCR for equine infectious anemia virus detection in whole blood from naturally infected horses in Colombia / E. Trujillo, A. Collazos, M. Camargo // Actual. Biol. - 2001. - Vol. 23, № 75. - P. 41 -46.
180. Validation of an indirect ELISA for the detection of antibodies against equine infectious anemia virus (EIAV) in equine sera using gag and env recombinant antigen / R. Nardini, G.L. Autorino, S. Rosati, L. Bertolotti, M. Profiti, R. Frontoso, F. Rosone, A. Caprioli, M.T. Scicluna // 16 International symposium of the World association of veterinary laboratory diagnosticians (WAVLD). - Berlin, 2013.-P. 294-295.
181. Vallée, H. Sur la nature infectieuse de l'anémie du cheval / Vallée H, Carré H // Compt Rend Acad Sci. - 1904. - Vol. 139. - P. 331-333.
182. Viral DNA in horses infected with equine infectious anemia virus / N.R. Rice, A.S. Lequarre, J.W. Casey, S. Lahn, R.M. Stephens, J. Edwards // J. VIROL. -1989. - Vol. 63, № 12. - P. 5194-5200.
183. Viral load and clinical disease enhancement associated with a lentivirus cytotoxic T lymphocyte vaccine regimen / R.H. Mealey, S.R. Leib, M.H. Littke, B. Wagner, D.W. Horohov, T.C. McGuire // Vaccine. - 2009. - Vol. 27, № 18. - P. 2453-2468.
184. Virus Taxonomy: 2013 Release / International committee on taxonomy of viruses [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.ictvonline.org/virusTaxonomy.asp. - Загл. с экрана.
185. WAHID Interface, 2014 [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://web.oie.int/wahis/public. - Загл. с экрана.
9 ПРИЛОЖЕНИЯ
Утверждаю ректор ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии
Д.В. Колбасов
«21» апреля 2014 г.
Инструкция
по применению тест-системы «Тест-системы для выявления генома вируса инфекционной анемии лошадей методом гнездовой ОТ-ПЦР»
(организация-разработчик - ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии)
I. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
1. Тест-система предназначена для выявления генома вируса инфекционной анемии лошадей (ИНАН) методом гнездовой ОТ-ПЦР,
2. Состав тест-системы:
• Набор № I - набор для выделения РНК (на 50 образцов);
• Набор № II - набор для проведения реакции обратной транскрипции (на 50 анализов);
• Набор № III - набор для проведения гнездовой ПЦР;
• Набор № IV - набор для проведения электрофореза.
2.1. Перечень компонентов набора № I для выделения РНК;
• раствор № 1, 40,0 мл - 1 флакон;
• раствор № 2, 15,0 мл - 1 флакон;
• раствор № 3,50,0 мл - 1 флакон;
• буфер для элюции, 1,5 см3 - 2 пробирки;
• отрицательный контроль выделения (ОКВ), 2,0 мл - 1 пробирка;
• сорбент 1,75 мл - 1 пробирка.
2.2. Перечень компонентов набора № II для проведения реакции обратной транскрипции:
• фермент ММЬУ-ревертаза, 0,015 мл - 1 пробирка;
• смесь для денатурации РНК, 0,35 мл - 1 пробирка.
• смесь для обратной транскрипции, 0,500 мл - 1 пробирка;
• положительный контроль ПЦР (ПК), 0,25 мл - 1 пробирка;
• отрицательный контроль ПЦР (ОК), 0,25 мл - 1 пробирка;
• минеральное масло, 2,0 мл —2 пробирки.
2.3. Перечень компонентов набора № III для проведения гнездовой ПЦР:
• фермент ДНК-полимераза, 0,01 мл - 1 пробирка;
• ПЦР-буфер, 1,91 мл-2 мл -1 пробирка;
• праймеры для ПЦР 2,0,125 мл - 1 пробирка;
• минеральное масло, 2,0 мл - 2 пробирки.
2.4. Перечень компонентов набора № IV для проведения электрофореза:
1S~Z
Утверждаю рГНУ ВНИИВВиМ ссельхозакадемии
Д.В. Колбасов
«21» апреля 2014 г.
Инструкция
по применению «Тест-системы для выявления РНК и пДНК вируса инфекционной анемии лошадей методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени
«ИНАН/ОТ-ПЦР PB/gag»
(организация-разработчик - ШУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии)
I. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
1. Тест-система предназначена для выявления РНК и пДНК вируса инфекционной анемии лошадей (ИНАН) методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени «ИНАН/ОТ-ПЦР PB/gag».
2. Состав тест-системы:
• Набор № I - набор для выделения нуклеиновых кислот (на 50 образцов);
• Набор № II - набор для проведения реакции обратной транскрипции (на 50 анализов);
• Набор № III - набор для проведения ПЦР в режиме реального времени (на 50 анализов).
2.1. Перечень компонентов набора № I для выделения нуклеиновых кислот:
• раствор № 1, 40,0 мл - 1 флакон;
• раствор № 2, 15,0 мл - 1 флакон; раствор № 3, 50,0 мл - 1 флакон;
• буфер для элюции, 1,5 мл - 2 пробирки;
• отрицательный контроль выделения (ОКВ), 2,0 мл - 1 пробирка;
• сорбент 1,75 мл - 1 пробирка.
2.2. Перечень компонентов набора № II для проведения реакции обратной транскрипции:
• фермент MMLV-ревертаза, 0,015 мл - 1 пробирка;
• смесь для денатурации, 0,350 мл - 1 пробирка;
• смесь для обратной транскрипции, 0,500 мл - 1 пробирка;
• положительный контрольный образец (ПКО), 0,4 мл - 1 пробирка;
• отрицательный контрольный образец (ОКО), 0,4 мл - 1 пробирка;
• минеральное масло, 2,0 мл - 2 пробирки.
2.3. Набор для проведения ПЦР в режиме реального времени состоит из следующих реактивов:
т
ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии
СОГЛАСОВАНО УТВЕРЖДАЮ
Директор Федерального государственного бюджетного учреждения «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»), председатель ТК 454
А.Н. Пани» 2014 г
СТАНДАРТ ВНИИВВиМ
ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ГЕНОМА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ ЛОШАДЕЙ МЕТОДОМ ГНЕЗДОВОЙ ОТ-ПЦР
Технические условия СТО 00495549-0106-2014
Директор Государственного научного учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и
Россельхозакадемии ШиМ ¡академии)
Д.В. Колбасов 2014 г.
ПОКРОВ 2014
СТО 00495549-0106-2014
ОКП 9388 00 ОКС 11 220
УДК 619:619.98:578.833
Ключевые слова: Тест-система для выявления генома вируса инфекционной анемии лошадей методом гнездовой ОТ-ПЦР»; обратная транскрипция; амплификация; специфические праймеры; фермент ММЬУ-ревертаза; фермент Тац-полимераза; чувствительность и специфичность.
Руководитель разработки:
Заместитель директора по НИР и качест ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии
Ответственные исполнители: ^
Ведущий научный сотрудник Лаборатории ретровирусных инфекций ГНУ ВНИИВВиМ
Аспирант лаборатории Биофизики ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии
»»
ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии СОГЛАСОВАНО УТВЕРЖДАЮ
Директор Федерального государственного бюджетного учреждения «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»), председатель ТК 454
А.Н. Панин 2014 г
Директор Государственного научного учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и
¿и Россельхозакадемии ГИВВиМ ^академии)
Д. В. Колбасов 2014 г.
СТАНДАРТ ВНИИВВиМ
ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ РНК и пДНК ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ ЛОШАДЕЙ МЕТОДОМ ОТ-ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ «ИНАН/ОТ-ПЦР PB/gag»
Технические условия СТО 00495549-0105-2014
ПОКРОВ 2014
СТО 00495549-0105-2014
ОКИ 9388 00
ОКС И 220
УДК 619:619.98:578.833
Ключевые слова: «Тест-система для выявления РНК и пДНК вируса инфекционной анемии лошадей методом ОТ-ГТЦР в режиме реального времени «ИНАН/ОТ-ПЦР PB/gag»; обратная транскрипция; амплификация; специфические праймеры; фермент MMLV-ревертаза; фермент ДНК-' полимераза; чувствительность и специфичность.
Руководитель разработки:
Заместитель директора по НИР и качеству .¿¿/^
ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии /Т1 А.В. Луницин
Ответственные исполнители: Ведущий научный сотрудник Лаборатории ретровирусных инфекций
ГНУ ВНИИВВиМ
О.Л. Колбасова
Аспирант лаборатории Биофизики ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии
Н.Н. Герасимова
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ ВИРУСОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ
комиссионных испытаний «Тест-системы для выявления генома вируса болезни инфекционной анемии лошадей методом гнездовой ОТ-ПЦР»
Акт составлен комиссией в составе: председатель:
- зав. сектора диагностики АЧС, к.б.н. Васильев А.П.; члены комиссии:
- в.н.с. лаб. Диагностики, к.в.н. Балашова Е.А.;
- в.н.с. лаб. Музейных штаммов. Моргунов Ю.П.;
- микробиолог лаб. Биофизики Герасимова Н.Н.;
- м.и.с. лаб. Биофизики Барышникова Е.И.
Комиссия в период с 11 июля по 24 августа 2012 г. провела комиссионные испытания «Тест-системы для выявления генома вируса болезни инфекционной анемии лошадей методом гнездовой ОТ-ПЦР» (далее - Тест-система) в соответствии с распоряжением № 11 от 11 июля 2012 г. и программой комиссионных испытаний, утвержденной директором ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии 11 июля 2012 г.
Комиссионные испытания проведены на базе лаборатории Биофизики ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии.
В ходе комиссионных испытаний были определены аналитическая специфичность и чувствительность Тест-системы, разработанной в ГНУ
АКТ
ШЯЗШ № 8
ЦЕЛЬ ИСПЫТАНИИ
РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Акт комиссионных испытаний «Тест-системы для выявления генома вируса болезни инфекционной анемии лошадей методом гнездовой ОТ-ПЦР» представить на рассмотрение Ученым Советом ГНУ ВНИИВВиМ Россел ьхозакадем и и и утверждение директором института.
2. Разработать и направить на утверждение директором института и в РАСХН методические положения по выявлению РНК вируса болезни инфекционной анемии лошадей методом гнездовой ОТ-ПЦР
3. 3. Разработать НТД для регистрации в Российской Федерации и рекомендовать Тест-систему для межведомственных комиссионных испытаний с целью применения в качестве метода выявления генома возбудителя болезни инфекционной анемии лошадей в пробах патологического материала.
Председатель: Члены комиссии:
А.П. Васильев Е.А. Балашова
Ю.П. Моргунов
H.H. Герасимова
Е.И. Барышникова
Акт рассмотрен на ученом совете ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии, одобрен и рекомендован для утверждения директором института.
Протокол заседания ученого совета № // от « 3tb> (>'» 2012 г.
^ L.SjC'
Ученый секретарь_^jf ''/Балашова Е.А./
Л/ 6гУ
у
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ ВИРУСОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ
академик •
УТВЕРЖДАЮ
секретарь Отделения
-"г^'%ветеринарнои медицины
¿у.'* *
•**•'•* ! . Россельхозакадемии,
льхозакадемии А.М. Смирнов
МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОЛОЖЕНИЯ ПО ВЫЯВЛЕНИЮ ГЕНОМА ВИРУСА БОЛЕЗНИ ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ ЛОШАДЕЙ МЕТОДОМ ГНЕЗДОВОЙ ОТ-ПЦР
Покров 2012
#
Методические положения разработаны в лаборатории Биофизики ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии (ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии).
Методические положения предназначены для работников исследовательских и диагностических учреждений ветеринарного профиля
Разработчики: аспирант H.H. Герасимова, младший научный сотрудник Е.И. Барышникова, ведущий научный сотрудник О Л. Колбасова, заведующий лабораторией Биофизики ГНУ ВНИИВВиМ, профессор С.Ж. Цыбанов
Методические положения рассмотрены и одобрены на секции «Ветеринарной биотехнологии» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (Протокол № 3 от 27 сентября 2012 г.)
Рецензенты: доктор биологических наук, профессор В.И. Еремец (ВНИТИБП) и кандидат биологических наук, зав. сектором Диагностики АЧС А.П. Васильев (ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии).
Ответственный за выпуск: заведующий сектором инфекционной и инвазионной патологии Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, кандидат ветеринарных наук A.B. Суворов.
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ ВИРУСОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ
комиссионных испытаний тест - системы для выявления РНК и пДНК вируса инфекционной анемии лошадей методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени
«ИНАН / ОТ-ПЦР РВ / gag»
Акт составлен комиссией в составе: председатель:
- зав. сектора Диагностики АЧС, к.б.н. Васильев А.П.; члены комиссии:
- к.в.н., зав. НЭО Живодеров С.П.;
- к.б.н., зав. лаб. Молекулярной вирусологии Мапоголовкин A.C.;
- к.б.н., зав. сектора Изучения экологии и серогенотипирования вируса блютанга Панферова A.B.;
- микробиолог лаб. Биофизики Герасимова H.H.
АКТ
oe^ha № Jy
испытаний с целью применения в качестве метода выявления РНК и пДНК возбудителя инфекционной анемии лошадей в пробах биологического материала.
Председатель: Члены комиссии:
А.П. Васильев
.П. Живодеров A.C. Малоголовкин A.B. Панферова ti^j^ H.H. Герасимова
Акт рассмотрен на ученом совете ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии, одобрен и рекомендован для утверждения директором института.
Протокол заседания ученого совета № ЛИЬ от « ОГ» (ШиЛ 2013 г.
SO
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ ВИРУСОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
ПО ВЫЯВЛЕНИЮ РНК И пДНК ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ ЛОШАДЕЙ МЕТОДОМ ОТ-ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ «ИНАН / ОТ-ПЦР РВ / GAG»
УТВЕРЖДАЮ
академик - секретарь Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, ' ^Ш^емй^РоссеЛьхозакадемии
Покров 2013
Методические положения разработаны в лаборатории Биофизики ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии (ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии).
Разработчики: аспирант H.H. Герасимова, младший научный сотрудник A.B. Панферова, ведущий научный сотрудник О.Л. Колбасова, заведующий лабораторией Биофизики ГНУ ВНИИВВиМ, профессор С.Ж. Цыбанов
Методические положения рассмотрены и одобрены на секции «Ветеринарной биотехнологии» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (Протокол № 2 от 22.10.2013 г.)
Рецензенты: доктор биологических наук, профессор В.И. Еремец (ГНУ ВНИТИБП) и кандидат биологических наук, зав. сектором Диагностики АЧС А.П. Васильев (ГНУ ВНИИВВиМ).
Методические положения предназначены для работников исследовательских и диагностических учреждений ветеринарного профиля
Ответственный за выпуск: заведующий сектором Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии кандидат ветеринарных наук A.B. Суворов.
ОТ: ОБЛВЕТЛЙБОРЙТЕРИЯ ТЕЛ: 88314395875 20 МЙЙ 2814 12:83 СТР1
Российская Федерация Комитет государственного »сгерннарного надзор* Нижегородской области
Государственное бюджетное учреждение Нижегородской области
«Областнаяветеринарная лаборатория» IЬУ но «Облветлабораторня»
Ветеринарная ул., д.3, гЛижияП Новгород,б03098 телЛфакс (831) 439-50-74,439-50-75, тел. 434-21 -16, ЕлмШоЫумЙ шЯ,ш ОКПО 01543122, ОГРН1035205279482 ЯНН 5259038890, КПП 52(5201001
Акт производственного испытания тест-систем
Комиссия в составе:
Соболь М.А. - ведущий ветеринарный врач отдела диагностики вирусных болезней, кандидат ветеринарных наук;
Рябинина Е.Б. - заведующая отделом диагностики лептоспироза и серологии, ветеринарный врач;
Девонина О.Ю, - инженер 1 категории отдела диагностики вирусных болезней
Составила настоящий акт о нижеследующем:
В апреле-мае 2014 года было проведено производственное испытание тест-систем производства ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии для диагностики инфекционной анемии лошадей (ИНАН) методом полимеразной - цепной реакции;
1. «ИНАН/ОТ-ПЦР РВ /gag» серия 01-13 - исследовано 47 пробы крови от лошадей
2. Тест-система дня выявления вируса инфекционной анемии лошадей методом гнездовой ОТ-ПЦР серия 01-13 - исследовано 48 проб крови от лошадей.
Было исследовано 95 голов лошадей, принадлежащих жителям и организациям Нижегородской области.
Параллельно было проведено исследование классическим методом согласно Инструкции « по применению набора для диагностики инфекционной анемии лошадей в реакции диффузной преципитации (РДП)» (организация изготовитель ФГУП «Щелковский биокомбинат»).
ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии
Д.В.Колбасову
ОТ:ОБЛВЕТЛЙ60РЯТОРИЯ
ТЕЛ:88314395075
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.