Разработка методологии химико-токсикологического и судебно-химического определения нейролептиков производных бензамида тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, доктор фармацевтических наук Калёкин, Роман Анатольевич

• Калёкин, Роман Анатольевич
• доктор фармацевтических наук
• 2012

Оглавление диссертации доктор фармацевтических наук Калёкин, Роман Анатольевич

Содержание

стр.

Введение

Список использованных сокращений

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1 Обзор литературы

1.1 Применение нейролептиков в медицине

1.2 Классификация психотропных средств

1.3 Токсикологическая и фармакологическая характеристика нейролептиков, производных бензамида

1.4 Взаимодействие производных бензамида с другими лекарственными веществами

1.5 Исследования в области химико-токсикологического и судебно-химического анализа производные бензамида

1.6 Перспективы развития химической группы лекарственных

средств нейролептиков производных бензамида

Выводы по главе 1

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2 Изучение актуальности проблемы разработки научно-методического подхода к судебно-химическому и химико-токсикологическому исследованию нейролептиков производных бензамида

2.1 Применение нейролептиков производных бензамидов в медицинской практике

2.2 Побочные эффекты нейролептиков производных

бензамида

Выводы по главе 2

Глава 3 Изучение токсичности нейролептиков производных бензамида

и определение некоторых показателей фармакокинетики

3.1 Токсикологическое изучение производных бензамида

3.1.1 Изучение острой токсичности и определение смертельной дозы нейролептиков производных бензамида

3.1.2 Исследование общего действия нейролептиков производных бензамида при острой интоксикации

3.2 Изучение распределения нейролептиков нейролептиков производных бензамида во внутренних органах

(фармакокинетика)

3.3 Исследование динамики изменения концентрации нейролептиков производных бензамида в биологических жидкостях

3.3.1 Исследование динамики изменения концентрации нейролептиков производных бензамида в крови

3.3.2 Исследование динамики изменения концентрации нейролептиков производных бензамида в моче

3.3.3 Исследование динамики изменения концентрации нейролептиков производных бензамида в слюне

Выводы по главе 3

Глава 4 Разработка качественного анализа нейролептиков производных

бензамидов в извлечениях из биологических объектах и в

лекарственных формах

4.1 Качественные реакции обнаружения

4.1.1 Хромогенные реакции

4.1.2 Микрокристаллоскопические реакции

4.2 Метод хроматографии в тонком слое сорбента

4.3 Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

4.4 Метод УФ-спектрофотометрии

4.5 Метод ИК-спектрофотометрии

4.5.1 Метод ИК-спектрофотометрии в ближней области

4.5.2 Метод ИК-спектрофотометрии в средней области

4.6 Метод хромато-масс спектрометрии

!

1

4.7 Метод газо-жидкостной хроматографии

Выводы по главе 4

Глава 5 Разработка способов количественного определения

нейролептиков производных бензамидов в извлечениях из

биологических объектов и в лекарственных формах

5.1 Метод тонкослойная хроматография (полуколичественное определение)

5.2 Качественные реакции

5.3 Микрокристаллоскопические реакции

5.4 Метод УФ-спектрофотометрии

5.5 Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

5.6 Валидационная оценка разработанных методик

Выводы по главе 5

Глава 6 Разработка методик изолирования нейролептиков производных

бензамида из биологического материала

6.1 Определение констант ионизации нейролептиков производных бензамида

6.2 Изучение оптимальных условий экстракции нейролептиков производных бензамида из водных растворов

6.3 Изолирование нейролептиков производных бензамида из биологических жидкостей

6.3.1 Изолирование нейролептиков производных бензамида из мочи

6.3.2 Изолирование нейролептиков производных бензамида из крови

6.3.3 Изолирование нейролептиков производных бензамида из слюны

6.3.4 Изолирование нейролептиков производных бензамида из желчи

6.4 Изолирование нейролептиков производных бензамида из биологического материала

6.4.1 Изолирование нейролептиков производных бензамида из печени

6.4.2 Разработка способа изолирования нейролептиков производных бензамида из биологического материала

6.5 Разработка способа очистки извлечения из биологических объектов с помощью ТСХ

6.5.1 Выбор оптимальной подвижной фазы

6.5.2 Выбор оптимального элюента

6.5.3 Методика очистки извлечения из биологических объектов

6.6 Сохраняемость нейролептиков производных бензамида в

трупном материале

Выводы по главе 6

Глава 7 Судебно-медицинская оценка и рекомендации к проведению судебно-химических и химико-токсикологических исследований на нейролептики производные бензамида

7.1 Подход к проведению исследования на нейролептики производные бензамида

7.2 Клиническая симптоматика побочных эффектов и острых отравлений нейролептиками производными бензамида

7.3 Рекомендации к выбору внутренних органов трупа в случае отравления нейролептиками производными бензамида

7.4 Методологический системный подход к проведению судебно-химического и химико-токсикологического исследования на нейролептики производные бензамида

7.5 Интерпретация результатов судебно-химического исследования

Выводы по главе 7

Общие выводы

Библиографический список

Приложение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка методологии химико-токсикологического и судебно-химического определения нейролептиков производных бензамида»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В связи со значительным ростом числа психических заболеваний в медицинской практике растет и потребность в психотропных препаратах, в том числе в нейролептиках. Вместе с тем нейролептики при передозировке, взаимодействии с другими лекарственными средствами, злоупотреблении ими, повышенной чувствительности организма могут привести к отравлениям.

Отравления нейролептиками, в том числе производными бензамида, антипсихотического действия прочно занимают 3-4 место среди отравлений лекарственными препаратами. В медицинской практике отравления лекарственными препаратами этой группы занимают 10-15%. Отравления у детей младшего возраста являются случайными, подростки часто применяют антипсихотические нейролептики в смесях с целью получения наркотического эффекта, так как они потенцируют действие наркотических анальгетиков, снотворных и других седативных средств.

К нейролептикам также относится группа производных бензамида. К этой группе относятся такие лекарственные препараты - амисульприд, сульпирид и тиаприд. В настоящее время группа производных бензамида является перспективным направлением для разработки новых лекарственных средств для целей и задач современной медицины и производится их синтез. Группы новых синтезируемых производных лежат в сфере ангиотензивного направления. Ангиотензивные лекарственные средства обладают широкими побочными эффектами и иногда приводящими к летальному исходу. Таким образом группа лекарственных средств производных бензамида постоянно расширяется.

Бесконтрольное и длительное применение производных бензамида сопровождается развитием побочных действий. При употреблении лекарственных препаратов этой группы в больших дозах (передозировка) наблюдаются: выраженный седативный эффект; нарушение сознания (вплоть до комы); экстрапирамидальные расстройства, остановка сердца, приводящая

к так называемому синдрому «внезапной смерти». В связи, с этим сульпирид и тиаприд включен в «Перечень наименований токсичных веществ, наиболее часто встречающихся при острых отравлениях» - приказ МЗ РФ №460 от 29 декабря 2000 г. «Об утверждении учетной документации токсикологического мониторинга».

Анализ отечественной и зарубежной литературы свидетельствует о том, что не были произведены систематические исследования по разработке методик изолирования, идентификации и количественного определения производных бензамида в биологических объектах. Имеются разрозненные работы по исследованию производных бензамида в области судебно-химического или химико-токсикологического анализа. В работе E.H. Степановой и В.В. Бажанова изложены данные по идентификации эглонила, содержащегося в извлечении из трупного материала, по сопоставлению его ИК-спектров поглощения с образцом сравнения. Опубликованы тезисы (Скрипниковой Н.В. с соавторами), в которых приведены подходы по судебно-химическому анализу тиаприда в трупном материале хроматографическими и спектральными методами, с установлением факта летального исхода специалистами Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области исследуемым лекарственным средством. В работе Ю.П. Калинина, Р.Г. Мансуровой и C.JI. Шашина описан способ идентификации хромато-масс-спектрометрическим методом большой группы наркотических и психотропных веществ, в том числе и производных бензамида. Также данная проблема не осталось без внимания зарубежных коллег - судебных токсикологов. Французскими экспертами научной лаборатории полиции Марселя Рок P. Rop, Marie H. Sournac, Isabelle Elie, Joëlle Burle и Monique Fornaris приведен случай летального исхода сульпиридом при исследовании в трупной крови методом газовой хроматографии-масс-спектрометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии. Также полицией Европы (Франции и Великобритании) установлен факт употребления тиаприда Анри Полем водителем принцессы

Дианы и является одной из официальных версий в причине автоаварии машин Дианы «Мерседес» и «Фиат Уно» папарацци Джеймса Андансона, в которой погибли принцесса и Доди Аль-Файед.

Отсутствуют данные о систематическом подходе к исследованию группы нейролептиков производных бензамида и их дифференциация между собой в условиях проведения судебно-химического и химико-токсикологического исследования.

Судебно-химическое исследование нейролептиков производных бензамида позволит точно установить факт отравления (смертельное) вышеуказанными лекарственными средствами, а химико-токсикологический анализ, в том числе в области аналитической диагностики, таких средств позволяет своевременно диагностировать отравление (острое, хроническое) и является одним из способов борьбы с наркоманией, токсикоманией, так как клиническая картина течения отравлений, результаты патологоанатомических, гистологических и других исследований не позволяют установить и дифференцировать отравления соединениями относящиеся к психотропным лекарственным средствам производным бензамида. Для этого необходима разработка и проведения судебно-химических и химико-токсикологических исследований биологического и трупного на наличие этих соединений для целей и задач судебно-химической практики.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является разработка методологического подхода в плане систематического анализа к изолированию, обнаружению и количественному определению амисульприда, сульпирида и тиаприда для проведения анализа с использованием современных физико-химических методов.

Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

• установить на основании социологических и медицинских исследований частоту использовании в медицинской практике нейролептиков

производных бензамида, частоту злоупотреблений пациентами, как часто и какие побочные эффекты встречаются и с какими препаратами других групп они совместно применяются;

• предложить на основе практических результатов и теоретического обоснования рекомендации к выбору биологических объектов исследования;

• разработать методологический подход к стадии пробоподготовки и изолированию производных бензамида, основываясь на результатах практических исследований и теоретических обоснований;

• разработать методологический подход к систематическому анализу амисульприда, сульпирида и тиаприда на стадии качественного определения в извлечениях из биологических жидкостей и объектов;

• разработать методологический подход к систематическому анализу амисульприда, сульпирида и тиаприда на стадии количественного определения в извлечениях из биологических жидкостей и объектов.

• предложить на основе методологический системный подход к общей схеме судебно-химического химико-токсикологического и анализа данных лекарственных средств, так как клиническая картина течения отравлений, результаты патологоанатомических, гистологических и других исследований не позволяют установить и дифференцировать отравления нейролептиками производным бензамида.

Научная новизна работы. Впервые теоретически обоснованы условия экстракции производных бензамида из водных растворов (значение рН среды, природа органического растворителя, присутствие электролита, продолжительность экстракции).

Впервые рекомендованы в порядке приоритета биологические объекты на основе практических и теоретических исследований.

Установлены оптимальные условия изолирования и разработаны методики для всей группы нейролептиков производных бензамида для изолирования из биологических объектов.

Впервые предложен коэффициент для расчетов ориентировочного истинного содержания исследуемых веществ в биологических жидкостях и объектах.

Впервые предложен методологический подход к судебно-химическому и химико-токсикологическому исследованию всей группы нейролептиков производных бензамида.

Предложены условия идентификации амисульприда, сульпирида и тиаприда в извлечениях из биологических жидкостей и объектов и их последующая дифференциация между собой различными химическими методами - хромогенными и микрокристаллоскопическими реакциями, физико-химическими методами анализа - тонкослойной хроматографией, газожидкостной, высокоэффективной жидкостной хроматографией, оптическими методами (УФ-, ИК-спектрофотометрии), а также при использовании современного метода хромато-масс-спектрометрии. Также разработаны условия количественного определения современными физико-химическими методами для всей группы нейролептиков производных бензамида.

Установлена степень токсичности для изученных нейролептиков группы производных бензамида, дозы ЛД50 и ЛДюо при пероральном введении мышам. Впервые описана картина интоксикации производными бензамида на животных.

Впервые экспериментальными методами установлены рекомендации к выбору внутренних органов в качестве биологических объектов при проведении судебно-химического исследования на производные бензамида.

Практическая значимость работы и внедрение результатов исследования. Теоретически обоснованы и экспериментально подтверждены методики изолирования, идентификации и количественного определения группы нейролептиков производных бензамида (амисульприд, сульпирид и тиаприд) в биологических жидкостях (кровь, моча, желчь, слюна) и биологическом материале (печень), которые позволили разработать

методологический системный подход к исследованию данной группы лекарственных средств при проведении судебно-химического и химико-токсикологического анализа.

Использование данных схем анализа производных бензамида позволяет диагностировать острые отравления в плане оказания своевременной помощи пострадавшим или установить факт отравления при летальном исходе.

Результаты экспериментальных исследований использованы в подготовке новой медицинской технологии, методических рекомендациях, а также легли в основу цикла лекций для ординаторов ФГБУ РЦ СМЭ Минздравсоцразвития РФ по теме «Судебно-медицинская диагностика отравлений», использованы в подготовке монографии «Судебная медицина» раздел «Химическая травма», а также опубликована монография «Судебно-медицинская (химическая) оценка нейролептиков».

Материалы внедрения. По результатам проведенных экспериментальных исследований и теоретически обоснованных и разработанных методик изолирования производных бензамида из биологических объектов, их идентификации и количественного определения составлены новые медицинские технологии. На наиболее распространенный нейролептик группы производных бензамида - тиаприд получено разрешение к применению новой медицинской технологии (ФС №2009/057 от 31.03.2009) - «Определение тиаприда в биологических объектах при проведении химико-токсикологического и судебно-химического анализа», разработаны и опубликованы методические указания — «Определение нейролептиков производных бензамида (амисульприда, сульпирида и тиаприда) при проведении судебно-химического и химико-токсикологического исследований».

Результаты разработанного методологического подхода к судебно-химическому и химико-токсикологическому исследованию нейролептиков производных бензамида внедрены в учебный процесс цикла лекций для ординаторов ФГБУ РЦ СМЭ Минздравсоцразвития РФ по теме «Судебно-

медицинская диагностика отравлений» и в практику работы судебно-химического отделения ФГБУ РЦ СМЭ Минздравсоцразвития РФ.

Одна монография опубликована «Судебно-медицинская (химическая) оценка нейролептиков», а вторая монография подготовлена к печати «Судебная медицина» раздел «Химическая травма» и сдана ответственному за издание заведующему кафедрой судебной медицины Первого Московского Государственного Медицинского Университета им. И.М. Сеченова, Член-корр. РАМН, профессору Ю.И. Пиголкину.

Связь задач с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена по плану научно-исследовательских работ Федерального государственного бюджетного учреждения "Российский центр судебно-медицинской экспертизы" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации в рамках НИР Лаборатории судебно-химических и химико-токсикологических исследований «Совершенствование методов судебно-химического исследования наркотических и психотропных веществ в биологическом и трупном материале» (номер государственной регистрации №01200961795).

Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 326 страницах компьютерного текста, содержит 58 рисунков и 102 таблицы, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (6 глав), общих выводов, списка литературы, включающего 367 источников, из которых 105 иностранных.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 75-летию Российского центра судебно-медицинской экспертизы «Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики на современном этапе» (г.Москва, 2006г.); Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы медико-криминалистических, судебно-химических и химико-токсикологических экспертных исследований» (г.Москва, 2007г.); 15-ом

Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (г.Москва, 2008г.); научно-практической конференции «Материалы Всероссийского совещания судебно-медицинских экспертов по применению правил и медицинских критериев определения степени тяжести вреда, причиненного здоровью человека» (г.Москва, 2008г.); 16-ом Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (г.Москва, 2009г.); межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы теории и практики судебно-химической экспертизы» (г.Санкт-Петербург, 2009г); Всероссийской научно-практической конференции «О проблемных вопросах в организации производства судебно-медицинских экспертиз» (г.Москва, 2009г.); в виде стендового доклада на 48-й Ежегодной конференции Международной Ассоциации Судебных Токсикологов (Т1АРТ) (Германия, г.Бонн, 2010г.); 18-ом Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (г.Москва, 2011г.); Научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы судебно-медицинской экспертизы» (г.Москва, 2012г.); II Международной научной конференции «Наука в современном обществе» (г.Ставрополь, 2012г.).

Разработанные методики апробированы на базе химико-токсикологической лаборатории Республиканского наркологического диспансера РСО-Алания в г.Владикавказе; судебно-химического отделения Бюро судебно-медицинской экспертизы Ставропольского края в г.Ставрополь и в химико-токсикологической лаборатории в г.Ростове-на-Дону.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 28 научных работ, из них 10 работ в журналах рекомендованных ВАКом.

Основные положения, выносимые на защиту. • Результаты изучения актуальности разработки методологии химико-токсикологического и судебно-химического определения нейролептиков производных бензамида в современное время и реальных условиях.

• Данные по изучению токсичности нейролептиков группы производных бензамида, установлению некоторых фармакокинетических показателей, рекомендации по целесообразности исследования органов для целей и задач судебно-химического и химико-токсикологического анализа на амисульприд, сульпирид и тиаприд в качестве биологических объектов.

• Результаты теоретического и экспериментального обоснования условий экстракции нейролептиков производных бензамида из водных растворов с учетом влияния следующих факторов: значения рН среды, природы органического растворителя, присутствия электролита и времени экстракции.

• Результаты разработки методик пробоподготовки биологических жидкостей (кровь, моча, желчь, слюна) и трупного материала (печень) для изолирования амисульприда, сульпирида и тиаприда.

• Результаты экспериментальных исследований по разработке методик идентификации и количественного определения амисульприда, сульпирида и тиаприда в извлечениях из биологических жидкостей и тканей трупа с использованием различных физико-химических методов анализа.

• Схема и принципы методологии химико-токсикологического и судебно-химического определения нейролептиков производных бензамида.

Список использованных сокращений

К - радикал;

МКБ-10 - международная классификация болезней 10 пересмотра;

ЦНС -центральная нервная система;

НПВС - нестероидные противовоспалительные средства;

АПФ - ангиотензин-превращающий фермент;

ГФ - государственная фармакопея;

УФ - ультрафиолет;

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография; ИК - инфракрасный;

ЛД50 - летальная доза, вызывающая смерть в 50% случаях; ДДюо - летальная доза, вызывающая смерть в 100% случаях; ТСХ - тонкослойная хроматография; ГЖХ - газо-жидкостная хроматография.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия, фармакогнозия», Калёкин, Роман Анатольевич

Общие выводы

1. Установлено по результатам проведенных социологических и медицинских исследований, что нейролептики производные бензамида широко используются в современной медицинской практике, довольно часто встречаются побочные эффекты на фоне приема с необходимостью отмены в связи с угрозой для жизни пациента. Описана симптоматика побочных эффектов при употреблении нейролептиков данной группы.

2. Предложены на основе практических результатов и теоретического обоснования рекомендации к выбору биологических объектов исследования. Установлено, что оптимальными в качестве объектов исследования являются внутренние органы трупа: печень, почки, желудок с содержимым, тонкий кишечник, селезёнка, лёгкие и сердце. Изучены некоторые фармакокинетические параметры данных соединений, необходимые для целей и задач при проведении судебно-химических и химико-токсикологических исследований.

3. Разработан методологический подход к стадии пробоподготовки и изолированию производных бензамида, основываясь на результатах практических исследований и теоретических обоснований. Разработаны по результатам теоретических и экспериментальных исследований методики изолирования из биологических жидкостей (крови, мочи, желчи, слюны) и трупного материала с оптимальным выходом. Проведена сравнительная оценка изолирования амисульприда, сульпирида и тиаприда классическими методами: Стаса-Отто, A.A. Васильевой и В.Ф. Крамаренко.

4. Разработан методологический подход к систематическому анализу амисульприда, сульпирида и тиаприда на стадии качественного определения в извлечениях из биологических жидкостей и объектов. На основании теоретических и экспериментальных исследований разработаны методики качественного исследования с возможностью их дифференциации между собой амисульприда, сульпирида и тиаприда современными химическими и физико-химическими методами методами, как хромогенные реакции, микрокристаллоскопические реакции, тонкослойная хроматография, высокоэффективная жидкостная хроматография, УФ-спектрофотометрия, ИК-спектроскопия в ближней и средней области, хромато-масс-спектрометрия и газожидкостная хроматография. Установлены пределы обнаружения нейролептиков производных бензамида при использовании данных методом.

5. Разработан методологический подход к систематическому анализу амисульприда, сульпирида и тиаприда на стадии количественного определения в извлечениях из биологических жидкостей и объектов. Разработаны методики количественного определения амисульприда, сульпирида и тиаприда в извлечениях из биологических объектов с помощью методов тонкослойной хроматографии (полуколичественное определение), УФ-спектрофотометрией и высокоэффективной жидкостной хроматографией. Валидационная оценка разработанных методик количественного определения нейролептиков производных бензамида в биологических объектах показала, что они дают воспроизводимые и достоверные результаты.

6. Предложен методологический системный подход к проведению судебно-химического и химико-токсикологического исследования на нейролептики производные бензамида, рекомендации к проведению экспертного исследования и судебно-медицинская оценка результатов.

Список литературы диссертационного исследования доктор фармацевтических наук Калёкин, Роман Анатольевич, 2012 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Клиническая токсикология детей и подростков / Под ред. И.В. Марковой [и др.] - СПб.: Интермедика, 1998. -Т.1.-302 с.

2. Регистр лекарственных средств в России. Энциклопедия лекарств: Ежегодный сборник / Под ред. Г.Л. Вышковского. - М.: ООО "РЛС", 2004. -Вып. 19.- 1368 с.

3. Бабаян, Э.А. Правовые аспекты оборота наркотических, психотропных, сильнодействующих, ядовитых веществ и их прекурсоров: Государственные и ведомственные акты. Методические материалы. Комментарии. Ответы на вопросы: в 3 ч. / Э.А. Бабаян, A.B. Гаевский, Е.В. Бардин - М.: МЦФЭР, 2003.-3 ч.

4. Залялова, З.А. Острые лекарственные экстрапирамидные нарушения / З.А. Залялова, Э.И. Богданов // Журнал неврологии и психиатрии — 2003. — №4. — С. 48-54.

5. Залялова, З.А. Экстрапирамидные нарушения, обусловленные приемом нейролептиков / З.А. Залялова, Э.И. Богданов // Неврологич. вестн. - 2000. -Т.32. № 3-4. - С. 52-59.

6. Калёкин, P.A. Дифференциация нейролептиков группы производных бензамидов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) / P.A. Калёкин, Е.М. Саломатин, В.А. Калёкина, A.A. Волкова // Материалы Всероссийского совещания судебно-медицинских экспертов по применению правил и медицинских критериев определения степени тяжести вреда, причененного здоровью человека, и итоговой научно-практической конференции Российского центра судебно-медицинской экспертизы - М.: РИО ФГУ РЦСМЭ Минздравсоцразвития России, 2008. - С. 226-228.

7. Andrey, R.E. An eight peak index of spectra of compounds of forensic interest / R.E. Andrey. - Edinburgh: Great Britain by Clark Constable, 1983. - 282 p.