Разработка и апробация тест-систем на основе гелевых биочипов для изучения генетического полиморфизма человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Глотов, Андрей Сергеевич

• Глотов, Андрей Сергеевич
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Глотов, Андрей Сергеевич

Оглавление.

Список сокращений.

Введение.

Глава I 1 Обзор литературы.

1.1 Микрочипы в диагностике и научных исследованиях.

1.1.1 Нанотехнологии на основе биологических микрочипов.

1.1.2 Перспективные методы анализа генетического полиморфизма.

1.1.3 Биочипы для изучения генетической предрасположенности.

1.2 Изучение генетического полиморфизма репин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой системы.

1.2.1 Генетический полиморфизм и сердечно-сосудистая система.

1.2.1.1 Определение генетического полиморфизма. Его значение в современной медицинской генетике.

1.2.1.2 Сердечно-сосудистые заболевания.

1.2.1.3 Гены «предрасположенности» к сердечно-сосудистым заболеваниям.

1.2.2 Артериальная гипертензия.

1.2.2.1 Этиология и патогенез.

1.2.2.2 Формирование представлений о генетической природе артериальной гипертензии.

1.2.3 Ренин-ангиотензиповая и кинин-брадикининовая системы.

1.2.4 Гены «предрасположенности» к артериальной гипертензии.

1.2.4.1 Рении.

1.2.4.2 Ангиотензиноген.

1.2.4.3 Ангиотензинпревращающий фермент.

1.2.4.4 Рецептор 1 к аигиотензину II.

1.2.4.5 Рецептор 2 к аигиотензину II.

1.2.4.6 Рецептор 2 к брадикинину.

1.2.5 Комплексное изучение ассоциации полиморфизма генов ренин-ангиотензиновой системы с предрасположенностью к артериальной гипертензии.

Глава II 2 Материалы и методы.

2.1 Характеристика исследуемых групп.

2.2 Синтез олигонуклеотидов и изготовление микрочипов.

2.3 Экстракция геномной ДНК из лимфоцитов периферической крови и клеток буккального эпителия.

2.4 Проведение полимеразной цепной реакции.

2.4.1 Амплификация фрагментов ДНК для анализа методом ПААГ.

2.4.2 Амплификация фрагментов ДНК для анализа методом гибридизации на олигонуклеотидном биочипе.

2.5 Анализ ПЦР продуктов методом ПААГ.

2.6 Визуализация ПЦР продуктов в агарозном геле.

2.7 Гибридизация меченого продукта на микрочипе.

2.8 Регистрация изображения и его обработка.

2.8.1 Анализ "фармакогенетического биочипа".

2.8.2 Анализ "кардиочипа".

2.9 Статистическая обработка данных.

Глава III 3 Результаты и обсуждение.

3.1 Разработка алгоритма создания биочип-тест-систем для анализа генетического полиморфизма человека.

3.1.1 Создание "фармакогенетического биочипа".

3.1.1.1 Выбор генов и полиморфных вариантов.

3.1.1.2 Выбор нуклеотидных последовательностей и длин ПЦР продуктов, последовательностей концевых праймеров и последовательностей иммобилизованных олигонуклеотидных зондов.

4 3.1.1.3 Особенности проведения мультиплексной ПЦР и гибридизации.

3.1.1.4 Конструирование биочипа. Блочный подход.

3.1.1.5 Блочная организация микрочипа.

3.1.1.6 Анализ контрольных и диагностических образцов. Специфичность и чувствительность метода.

3.1.1.7 Алгоритм создания биочипов для анализа генетического полиморфизма.

3.2 Создание "кардиочипа".

3.2.1 Выбор генов и полиморфных вариантов.

3.2.2. Схема и структура микрочипа.

3.2.3 Анализ контрольных и диагностических образцов.

3.3 Сравнение метода гибридизации на биочипах с классическими методами анализа генетического полиморфизма.

3.4 Применение биочипов в медицине и биологии.

3.5. Анализ полиморфизма генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем у больных артериальной гипертензией и в контроле.

3.5.1 Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов у детей, больных артериальной гипертонией, и в контроле.

3.5.1.1 Аиализ соответствия распределений закону Харди-Вайнберга.

3.5.1.2 Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей изученных генов.

3.5.2 Анализ ассоциации показателей ИМТ, САД, ДАД и генотипов изученных генов у детей, больных артериальной гипертонией.

3.5.3 Корреляционный анализ взаимосвязи генотипов изученных генов, 4 ИМТ, САД и ДАД у детей, больных артериальной гипертонией, и в контроле.

3.5.4 Комплексный анализ ренин-апгиотензиновой и кинин-брадикининовой систем у детей, больных артериальной гипертонией, и в контроле.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка и апробация тест-систем на основе гелевых биочипов для изучения генетического полиморфизма человека»

Лавинообразное нарастание интереса к изучению генетической предрасположенности требует разработки новых подходов к идентификации и анализу ДНК-полиморфизма. Современное развитие науки невозможно без создания новых технологий, позволяющих'проводить анализ множества генетических изменений одновременно. Одним из наиболее перспективных методов для решения этой задачи является метод мультиплексной ПЦР с дальнейшей гибридизацией на олигонуклеотидной матрице (Kolchinsky and Mirzabekov, 2001; Nasedkina et al, 2003; Колчинский и др., 2005; Wang et al, 2005).

Сердечно-сосудистая патология является самой распространенной причиной смертности во всем мире. Изучение патогенеза и диагностика генетической предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям имеет большое значение не только для фундаментальной медицинской науки, но и становиться важным инструментом, для решения задач профилактической (предиктивной) медицины. Уже на сегодняшний день для многих социально-значимых заболеваний сердечно-сосудистой системы, таких как артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда, атеросклероз и другие, показана ассоциация определенных полиморфных вариантов некоторых генов с данными болезнями (Нефедова и Шварц, 1998, Баранов и др., 2000, 2003; Иващенко и др., 2004, Babunova et al, 2003). Очевидно, что для более точной оценки роли генетического полиморфизма в этиологии заболевания необходимо использование системного подхода, заключающегося в выборе и анализе генов, продукты которых находятся в биохимически последовательно связанных реакциях. В связи с чем, особый интерес представляет изучение полиморфизма генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем, принимающих участие в регулировании артериального давления и обмене электролитов. Показано, что генетический подиморфизм данных систем существенно меняет их активность, что и является зачастую причиной сердечно-сосудистой патологии (Пузырев, 2003; Chistiakov et al., 1998, 2000; Rupert et al., 2003; Zhu et al., 2003; Naber et al., 2004a,b). С другой стороны большое значение имеет анализ генетического полиморфизма у больных в детском возрасте, где значительно сильнее проявляются внутренние - генетические факторы, накладывающиеся на факторы внешней среды во взрослом состоянии (Obraztsova et al., 1998).

Таким образом, разработка методических (биочипы) и методологических основ современного анализа генетического полиморфизма человека является актуальной проблемой современной молекулярной биологии и медицинской генетики.

Цель работы заключается в разработке тест-систем на основе гелевых биочипов для анализа генетического полиморфизма человека и их использование при изучении генетической предрасположенности к артериальной гипертензии у детей. Достижение этой цели предусматривало решение следующих задач:

1. Разработать алгоритм создания биочип-тест-систем для анализа генетического ч/ — , полиморфизма человека на примере детекции мутаций в генах CYP1A1 (48870А, 4889A>G и 6235Т>С), CYP2D6 (1934G>A и 2637delA), GSTM1 (деления), GSTT1 (делеция), NAT2 (481Т>С, 590A>G и 857A>G), MTHFR (6770Т), CYP2C9 (4300Т и 10750Т) и CYP2C19 (681G>A).

2. Разработать биочип для анализа генетического полиморфизма генов REN (19-83G>A), AGT (М235Т), AGTR1 (1166A>C), AGTR2 (3123C>A), BKR2 (-58T>C), MTHFR (677С>Т), ADRB2 (48A>G и 81C>G) ("кардиочип"). 3. Проанализировать полиморфные варианты генов REN (I9-83G>A), AGT у

М235Т), ACE (I/D), AGTR1 (1166A>C), AGTR2 (3123C>A), BKR2 (-58T>C и I/D) у детей, больных артериальной гипертензией, и в популяционном контроле. N

Провести сравнительный анализ частот генотипов и аллелей генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикиииновой систем в подгруппах больных артериальной гипертензией с различными клиническими проявлениями. Провести комплексную оценку влияния полиморфизма генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем на развитие артериальной ги-пертензии у детей. у .^ ' ' ' ;

Заключение диссертации по теме «Генетика», Глотов, Андрей Сергеевич

Выводы.

1. Предложенный алгоритм создания биочипов позволяет с высокой эффективностью разрабатывать тест-системы для анализа генетического полиморфизма человека.

2. Разработан «кардиочип» для идентификации полиморфных вариантов генов REN, AGT, AGTR1, AGTR2, MTHFR, BKR2, ADRB2.

3. Метод гибридизации на «кардиочипе» обладает высокой специфичностью (99%) и может быть предложен для использования при массовом скрининге образцов ДНК пациентов для изучения заболеваний сердечно-сосудистой системы.

4. Аллели генов BKR2 (С-аллель) и AGTR2 (Л-аллель) ассоциированы с развитием артериальной гипертензии у мальчиков.

5. Наличие вариантов генов REN (А-аллель и А/А генотип), AGT (Г-аллель) и АСЕ (.D-аллель) ассоциировано с формированием стабильной формы артериальной гипертензии у детей.

6. Показатели диастолического АД значимо выше у пациентов с Т/Т гепотипом гена AGT по сравнению с М/М и/или М/Т генотипами.

7. Комплексная оценка полиморфизма генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем подтверждает роль данных каскадов в развитии АГ и формировании стабильного АД.

Заключение.

Лавинообразное нарастание интереса к изучению генетической предрасположенности к развитию социально значимых заболеваний требует разработки новых подходов к идентификации и анализу ДНК-полиморфизма. Современное развитие науки требует создание новых технологий, позволяющих проводить анализ множества генетических изменений одновременно. И в настоящий момент одним из наиболее перспективных методов для решения этой задачи является метод мультиплексной ПЦР с дальнейшей гибридизацией на олигонуклеотидной матрице. Нами предложен алгоритм создания биочипов для анализа генетического полиморфизма на примере детекции мутаций в генах CYP1A1 (4887С>А, 4889A>G и 6235Т>С), CYP2D6 (1934G>A и 2637delA), GSTM1 (делеция), GSTT1 (делеция), NAT2 (481Т>С, 590A>G и 857A>G), MTHFR (677С>Т), CYP2C9 (4300Т и 1075С>Т) и CYP2C19 (681G>A). На основе разработанного алгоритма нами создан биочип для анализа полиморфизма генов REN (I9-83G>A), AGT (М235Т), AGTRl (1166A>C), AGTR2 (31230A), BKR2 (-581>C), MTHFR (677C>T) и ADRB2 (48A>G и 81C>G) с целью изучения генетической предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям (артериальной гипертонии).

Как известно, основной причиной смертности на сегодняшний день является сердечно-сосудистая патология. Наиболее распространенные ее формы - ишемическая болезнь сердца и артериальная гипертония. И хотя в настоящее время достигнут большой прогресс в лечении сердечно-сосудистых заболеваний, разработки ученых, направленные на профилактику данных недугов представляются наиболее актуальным и востребованным направлением современной медицины. Основой его служит исследование генетической предрасположенности к развитию заболевания. Однако, учитывая то, что сейчас известно более 150 генов, полиморфизм которых влияет на развитие патологии сердца и сосудов, существует острая необходимость в разработке новых подходов к идентификации и анализу ДНК-полиморфизма. Разработка, создание и применение "кардиочипа" позволило существенно снизить трудоемкость и себестоимость анализа (в 2-3 раза), а также обеспечить высокий уровень современного исследования.

Наряду с новыми методиками и технологиями, не менее важным для медицинской генетики является разработка методологических основ анализа генетического полиморфизма, которая заключается, прежде всего, в адекватном выборе генов-кандидатов, групп обследуемых пациентов и методов анализа данных. Для выяснения роли генетических факторов в развитии артериальной гипертензии были выбраны полиморфные варианты генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем REN (I9-83G>A), AGT (М235Т), ACE (I/D), AGTR1 (1166A>C), AGTR2 (31230A), BKR2 (-58T>C и I/D), контролирующих уровень АД. Продукты, изученных нами генов, вовлечены в последовательно связанные биохимические реакции. С целью выяснения наследственной составляющей заболевания (и для исключения влияния факторов окружающей среды) наше исследования было проведено на образцах ДНК пациентов в молодом возрасте (9-17 лет).

В результате сравнительного анализа частот аллелей и генотипов изученных генов показано, что наличие АГ у мальчиков ассоциировано с аллелями генов, контролирующих заключительные этапы ренин-ангиотензинового и кинин-брадикининового каскада (BKR2 и AGTR2). Формирование стабильной АГ у детей вне зависимости от пола ассоциировано с аллелями и генотипами генов, контролирующих начальные этапы (REN, AGT и АСЕ). Таким образом, наличие закономерностей, обнаруженных у больных детей, в значительной степени свидетельствует о том, что развитие гипертонии, ее прогрессирование связано с генетическими факторами, а именно, с полиморфизмом ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовых систем.

Для оценки комплексного влияния полиморфизма изученных генов нами предложен подход на основе анализа суммы баллов. Применение данного подхода показало, что полиморфизм генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем оказывает существенное влияние на развитие АГ у мальчиков. С другой стороны, он в большей степени ответственен за формирование стабильно повышенного АД у девочек, чем у мальчиков. Кроме того, существенным плюсом такого подхода является то, что он позволяет сравнивать достаточно небольшие выборки по значительному числу полиморфных генов.

И хотя изучение генетической предрасположенности к различным мультфакториальным заболеваниям как область медицинской генетики быстро и активно развивается, становиться, очевидно, что ее совершенствование в будущем не возможно без развития методической базы, прежде всего, технологии биологических микрочипов, и выработки определенных методологических подходов, позволяющих анализировать полиморфизм по многим генам одновременно.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Глотов, Андрей Сергеевич, 2005 год

1. Александров A.A. Повышенное артериальное давление в детском и подростковом возрасте (ювенильная артериальная гипертония) // РМЖ. 1997. Т. 9. Стр. 559-565.

2. Баранов B.C. Баранова Е.В. Иващенко Т.Э. Асеев М.В. Геном человека и гены «предрасположенности» (Введение в предиктивную медицину) // СПб. Интермедика. 2000.263с.

3. Баранов B.C., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э. Научные основы предиктивной медицины. Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике // Новосибирск. Альта Виста. 2003. Стр. 3-19.

4. Брязгунов И.П. Первичная артериальная гипертензия у детей и подростков // Вопросы современной педиатрии. 2003. Т. 2(3). Стр. 68-71.

5. Глотов A.C., Глотов О.С., Москаленко М.В., Рогозкин В.А., Иващенко Т.Э., Баранов B.C. Анализ полиморфизма генов репин-апгиотепзиновой системы в популяции Северо-западного региона России // Экологическая генетика. 2004. В. 4. Стр. 40-43.

6. Животовский J1.А. Популяционная биометрия // М. Наука. 1991.271с.

7. Коваленко С.П. Персонифицированный подбор лекарственных препаратов при онкологических заболеваниях. Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике // Новосибирск. Альта Виста. 2003. Стр. 158-165.

8. Колчинский A.M., Грядунов Д.А., Лысов Ю.П., Михайлович В.М., Наседкина Т.В., Турыгин А.Ю., Рубина А.Ю., Барский В.Е., Заседателев A.C. 2004. Микрочипы на основе трехмерных ячеек геля: история и перспективы // Молекуляр. биология. Т. 38. Стр. 5-16.

9. Ляхович В.В., Вавилин В.А. 2003. Фармакогенетика сегодня. Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике // Новосибирск. Альта Виста. 2003. Стр. 20-27.

10. Нефедова Ю.Б., Шварц Е. Молекулярно-генетические механизмы развития артериальной гипертензии // Артериальная гипертензия. 1998. Т. 4. №. 1. Стр. 63-71.

11. Пузырев В.П. Генетика артериальной гипертензии (современные исследовательские парадигмы) // Клиническая медицина. 2003. Н. 1. Стр. 12-18.

12. Ратова Л.Г., Дмитриев В.В., Толпыгина С.Н., Чазова И.Е. Суточное мониторирование артериального давления в клинической практике // Клиническая фармакология и терапия Consilium medicum. 2001. Вып. 2. Стр. 3-4.

13. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA // Москва. Издательство Медиа Сфера. 2003. 305с.

14. Фомина И.Г., Брагина А.Е. Достижения и перспективы в изучении генетических аспектов артериальной гипертензии // Кардиоваскулярная терапия и профилактика 2003. Т. 2(5). Стр. 90-92.

15. Шляхто Е.В., Конради А.О. Роль генетических факторов в ремоделировании сердечно-сосудистой системы при гипертонической болезни // Артериальная гипертензия. 2002. Т. 4. Н. 3.

16. Akhmedova S.N., Pushnova Е.А., Anisimov S., Bogdanova L.A., Bova L.K., Schwartz E.I. CYP2D6 genotyping in a Russian population using a novel approach for identification of the CYP2D6A mutation // Biochem. Mol. Med. 1996. V. 58(2). P. 234-236.

17. Benetos A., Safar M.E. Aortic collagen, aortic stiffness, and ATI receptors in experimental and human hypertension // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1996. V. 74(7). P. 862866.

18. Case-Green SC, Mir KU, Pritchard CE and Southern EM: Analysing genetic information with DNA arrays // Curr. Opin. Chem. Bio.l 1998. V. 2. P. 404-410.

19. Chistiakov D.A., Kobalova Zh.D., Tereshchenko S.N., Moiseev S.V., Nosikov V.V. Polymorphism of vascular angiotensin II receptor gene and cardiovascular disorders // Ter. Arkh. 2000. V. 72(4). P. 27-30.

20. Dufour C., Casane D., Denton D., Wickings J., Corvol P., Jeunemaitre X. Human-chimpanzee DNA sequence variation in the four major genes of the renin angiotensin system // Genomics. 2000. V. 1;69(1). P. 14-26.

21. Favis R., Day J.P., Gerry N.P., Phelan C., Narod S., Barany F. Universal DNA array detection of small insertions and deletions in BRCA1 and BRCA2 //Nat Biotechnol. 2000. V. 18(5). P. 561-564.

22. Flynn J.T. Differentiation between primary and secondary hypertension in children using ambulatory blood pressure monitoring // Pediatrics. 2002. V. 110(1 Pt 1). P. 89-93.

23. Fotin, A., Drobyshev A., Proudnikov D., Perov A., Mirzabekov A. Parallel thermodynamic analysis of duplexes on oligodeoxyribonucleotide microchips // Nucleic Acids Res. 1998. V. 26. P. 1515-1521.

24. Fox C.S., Heard-Costa N.L., Vasan R.S., Murabito J.M., D'Agostino R.B. Sr., Atwood L.D. Genomewide Linkage Analysis of Weight Change in the Framingham Heart Study // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2005. V. 15. P. 3197-3201.

25. Frossard P.M., Gonzalez P.A., Fritz L.C., Ponte P.A., Fiddes J.C., Atlas S.A. Two RFLPs at the human renin (ren) gene locus // Nucleic. Acids. Res. 1986. V. 27;14(10). P. 4380.

26. Frossard P.M., Lestringant G.G., Elshahat Y.I., John A., Obineche E.N. An Mbol two-allele polymorphism may implicate the human renin gene in primary hypertension // Hypertens. Res. 1998. V. 21(3). P. 221-225.

27. Frossard P.M., Lestringant G.G., Malloy M.J., Kane J.P. Human renin gene Bgll dimorphism associated with hypertension in two independent populations // Clin. Genet. 1999. V. 56(6). P. 428-433.

28. Gerold D., Rushmore T. and Caskey C.T. DNA chips: promising toys have become powerful tools // Trends. Biochem. Sei. 1999. V. 24. P. 168-173.

29. Giner V., Poch E., Bragulat E., Oriola J., Gonzalez D., Coca A., De La Sierra A. Renin-angiotensin system genetic polymorphisms and salt sensitivity in essential hypertension // Hypertension. 2000. V. 35(1 Pt 2). P. 512-517.

30. Haywood G.A., Gullestad L., Katsuya T., Hutchinson H.G., Pratt R.E., Horiuchi M., Fowler M.B. ATI and AT2 angiotensin receptor gene expression in human heart failure // Circulation. 1997. V. 4;95(5). P. 1201-1206.

31. Heux S., Morin F., Lea R.A., Ovcaric M., Tajouri L., Griffiths L.R. The methylentetrahydrofolate reductase gene variant (C677T) as a risk factor for essential hypertension in Caucasians // Hypertens. Res. 2004. V. 27(9). P. 663-667.

32. Hilgers K.F., Langenfeld M.R., Schlaich M., Veelken R., Schmieder R.E. 1166 A/C polymorphism of the angiotensin II type 1 receptor gene and the response to short-term infusion of angiotensin II // Circulation. 1999. V. 28;100(13). P. 1394-1399.

33. Huber M., Losert D., Hiller R., Harwanegg C., Mueller M.W., Schmidt W.M. Detection of single base alterations in genomic DNA by solid phase polymerase chain reaction on oligonucleotide microarrays // Anal. Biochem. 2001. V. 1;299(1). P. 24-30.

34. Hubert C., Houot A.M., Corvol P., Soubrier F. Structure of the angiotensin I-converting enzyme gene. Two alternate promoters correspond to evolutionary steps of a duplicated gene//J. Biol. Chem. 1991. V. 15;266(23). P. 15377-15383.

35. Hunt C.C., Burley J.E., Chapman C.M, Beilby J.P. A high-throughput MS-PCR method on MADGE gels for ANG II type-1 receptor A1166C polymorphism // Physiol. Genomics. 1999. V. 31;1(2). P. 71-73.

36. Iqbal M.P., Mahmood S., Mehboobali N., Ishaq M., Fatima T., Parveen S., Frossard P. Association study of the angiotensin-converting enzyme (ACE) gene G2350A dimorphism with myocardial infarction // Exp. Mol. Med. 2004. V. 30;36(2). P. 110-115.

37. Jin J.J., Nakura J., Wu Z., Yamamoto M., Abe M., Chen Y., Tabara Y., Yamamoto Y., Igase M., Bo X., Kohara K., Miki T. Association of angiotensin II type 2 receptor gene variant with hypertension // Hypertens. Res. 2003. V. 26(7). P. 547-552.

38. Jones A., Woods D.R. Skeletal muscle RAS and exercise performance // Int. J. Biochem. Cell. Biol. 2003. V. 35(6). P. 855-866.

39. Kolchinsky A., Mirzabekov A. Analysis of SNPs and other genomic variations using gel-based chips // Hum. Mutat. 2002. V. 19(4). P. 343-360.

40. Landi S., Gemignani F., Gioia-Patricola L., Chabrier A., Canzian F. Evaluation of a microarray for genotyping polymorphisms related to xenobiotic metabolism and DNA repair //Biotechniques. 2003. V. 35(4). P. 816-820, 822, 824-827.

41. Landi S., Gemignani F., Gioia-Patricola L., Chabrier A., Canzian F. "MetaboChip" // Biotechniques. 2003. V. 35(4). P. 816-820, 822, 824-827.

42. Lifton R.P., Gharavi A.G., Geller D.S. Molecular mechanisms of human hypertension // Cell. 2001. V. 23; 104(4). P. 545-556.

43. Liljedahl U., Karlsson J., Melhus H., Kurland L., Lindersson M., Kahan T., Nystrom

44. F., Lind L., Syvanen A.C. A microarray minisequencing system for pharmacogenetic profiling of antihypertensive drug response // Pharmacogenetics. 2003. V. 13(1). P. 7-17.

45. Lipshutz R.J., Fodor S.P., Gingeras T.R. and Lockhart D.J. High density synthetic oligonucleotide arrays //Nat. Genet. 1999. V. 21. P. 20-24.

46. Lung C.C., Chan E.K., Zuraw B.L. Analysis of an exon 1 polymorphism of the B2 bradykinin receptor gene and its transcript in normal subjects and patients with CI inhibitor deficiency//J. Allergy. Clin. Immunol. 1997. V. 99(1 Pt 1). P. 134-146.

47. Masharani U., Frossard P.M. Mbol RFLP at the human renin (ren) gene locus // Nucleic. Acids. Res. 1988. V. 25; 16(5). P. 2357.

48. McCarthy J.J. and Hilfiker R. The use of single-nucleotide polymorphism maps in pharmacogenomics //Nat. Biotechnol. 2000. V. 18. P. 505-508.

49. Meyer J.M., Ginsburg G.S. The path to personalized medicine // Curr. Opin. Chem. Biol. 2002. V. 6. P. 434-438.

50. Mondry A., Loh M., Liu P., Zhu A.L., Nagel M. Polymorphisms of the insertion / deletion ACE and M235T AGT genes and hypertension: surprising new findings and metaanalysis of data// BMC. Nephrol. 2005. V. 11;6(1). P. 1-10.

51. Mukae S., Itoh S., Aoki S., Iwata T., Nishio K., Sato R., Katagiri T. Association of polymorphisms of the renin-angiotensin system and bradykinin B2 receptor with ACE-inhibitor-related cough // J. Hum. Hypertens. 2002. V. 16(12). P. 857-863.

52. Naber C.K., Siffert W., Erbel R., Heusch G. Genetics of human coronary vasomotion // Arch. Mai. Coeur. Vaiss. 2004. V. 97(3). P. 255-260.

53. Naber C.K., Siffert W. Genetics of human arterial hypertension // Minerva. Med. 2004. V. 95(5). P. 347-356.

54. Nasedkina T., Domer P., Zharinov V., Hoberg J., Lysov Y., Mirzabekov A. Identification of chromosomal translocations in leukemias by hybridization with oligonucleotide microarrays // Haematologica. 2002. V. 87(4). P. 363-372.

55. Nazarov I.B., Woods D.R., Montgomery H.E., Shneider O.V., Kazakov V.I., Tomilin N.V., Rogozkin V.A. The angiotensin converting enzyme I/D polymorphism in Russian athletes // Eur. J. Hum. Genet. 2001. V. 9. P. 797-801.

56. O'Shaughnessy K.M. The genetics of essential hypertension // Br. J. Clin. Pharmacol. 2001. V. 51(1). P. 5-11.

57. O'Sullivan J.J., Derrick G., Griggs P., Foxall R., Aitkin M., Wren C. Ambulatory blood pressure in schoolchildren // Arch. Dis. Child. 1999. V. 80(6). P. 529-532.

58. Papp F., Friedman A.L., Bereczki C., Haszon I., Kiss E., Endreffy E., Turi S. Renin-angiotensin gene polymorphism in children with uremia and essential hypertension // Pediatr Nephrol. 2003. V. 18(2). P. 150-154.

59. Pastinen T., Kurg A., Metspalu A, Peltonen L. and Syvanen A.C. Minisequencing: a specific tool for DNA analysis and diagnostics on oligonucleotide arrays // Genome. Res. 1997. V. 7. P. 606-614.

60. Pereira A.C., Mota G.F., Cunha R.S., Herbenhoff F.L., Mill J.G., Krieger J.E. Angiotensinogen 235T allele "dosage" is associated with blood pressure phenotypes // Hypertension. 2003. V. 41(1). P. 25-30.

61. Popov V., Fomicheva E., Kovalev J., Schwartz E. Absence of association between the angiotensin-converting enzyme gene polymorphism and borderline hypertension in men of St Petersburg, Russia // J. Hum. Hypertens. 1996. V. 10(8). P. 557-559.

62. Procopciuc L., Popescu T., Jebeleanu G., Pop D., Zdrenghea D. Essential arterial hypertension and polymorphism of angiotensinogen M235T gene // J. Cell. Mol. Med. 2002. V. 6(2). P. 245-250.

63. Rupert J.L., Kidd K.K., Norman L.E., Monsalve M.V., Hochachka P.W., Devine D.V. Genetic polymorphisms in the Renin-Angiotensin system in high-altitude and low-altitude Native American populations // Ann. Hum. Genet. 2003. V. 67(Pt 1). P. 17-25.

64. Sachse C., Brockmoller J., Bauer S., Roots I. Cytochrome P450 2D6 variants in a Caucasian population: allele frequencies and phenotypic consequences // Am. J. Hum. Genet. 1997. V. 60. P. 284-295.

65. Sachse C., Brockmoller J., Bauer S., Roots I. Cytochrome P450 2D6 variants in a Caucasian population: allele frequencies and phenotypic consequences // Am. J. Hum. Genet. 1997. V. 60. P. 284-295.

66. Safar M.E., Lajemi M., Rudnichi A., Asmar R„ Benetos A. Angiotensin-converting enzyme D/I gene polymorphism and age-related changes in pulse pressure in subjects with hypertension // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2004. V. 24(4). P. 782-786.

67. Sambrook J., Fritsch EP., Maniatis. Molecular cloning: a Laboratory Coldspring Harbour Lab. Coldspring Harbour. NY. 1989.

68. Takahashi N., Hagaman J.R., Kim H.S., Smithies O. Minireview: computer simulations of blood pressure regulation by the renin-angiotensin system // Endocrinology. 2003. V. 144(6). P. 2184-2190.

69. Takahashi N., Smithies O. Human genetics, animal models and computer simulations for studying hypertension // Trends. Genet. 2004. V. 20(3). P. 136-145.

70. Tanaka C., Kamide K., Takiuchi S., Miwa Y., Yoshii M., Kawano Y., Miyata T. An alternative fast and convenient genotyping method for the screening of angiotensin converting enzyme gene polymorphisms // Hypertens. Res. 2003. V. 26(4). P. 301-306.

71. Tillib S.V., Strizhkov B.N., Mirzabekov A.D. Integration of multiple PCR amplifications and DNA mutation analyses by using oligonucleotide microchip // Anal. Biochem. 2001. V. 1;292(1). P. 155-160.

72. Wen S.Y., Wang H., Sun O.J., Wang S.Q. Rapid detection of the known SNPs of CYP2C9 using oligonucleotide microarray // World. J. Gastroenterol. 2003. V. 9(6). P. 13421346.

73. Whitcombe D., Newton C.R. and Little S. Advances in approaches to DNA-based diagnostics // Curr. Opin. Biotechnol. 1998. V. 9. P. 602-608.c

74. Yu H., Zhang Y., Liu G. Relationship between polymorphism of the angiotensin-converting enzyme gene and the response to angiotensin-converting enzyme inhibition in hypertensive patients // Hypertens. Res. 2003. V. 26(11). P. 881-886.

75. Zhu X., Chang Y.P., Yan D., Weder A., Cooper R., Luke A., Kan D., Chakravarti A. Associations between hypertension and genes in the renin-angiotensin system // Hypertension. 2003. V. 41(5). P. 1027-34.117. Интернет-ссылки:1. Биочип: www.biochip.ru

76. Интернет сайт молекулярных биологов: www.molbiol.ru

77. Affvmetrix: www.affvmetrix.com

78. Amersham Biosciences: www.amershambiosciences.com

79. Applied Biosystems: www.europe.appliedbiosvstems.com

80. Asper Biotech: www.asperbio.com

81. GeneCards: www.bioinfo.weizmann.ac.il/cards/index.shtml8. Jurilab: www.jurilab.com9. Nanoeen: www.nanocen.com

82. National centre for biotechnology information (NCBI): www.ncbi.nlm.nih.gov1. Благодарности.

83. Говорю отдельное "спасибо" моим коллегам из Санкт-Петербургской педиатрической академии будущему д.м.н. Галине Игоревне Образцовой и Татьяне Степановой - за проведение совместной работы, сбор коллекции ДНК и тесное медико-биологическое сотрудничество.

84. Однако больше всего я благодарен своему брату Олегу, маме Ольге Владимировне, отцу Сергею Александровичу, брату Ярославу и жене Тане, без помощи которых, эта работа просто не состоялась бы, да и не имела бы никакого смысла.