Полиморфизм С/Т-13910 регуляторного участка гена лактазы LCT, ассоциированного с первичной гиполактазией у человека, в популяциях Евразии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Соколова, Мария Викторовна

• Соколова, Мария Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Соколова, Мария Викторовна

Список использованных сокращений.

Введение.

Актуальность проблемы.

Цели и задачи исследования.

Научная новизна.

Практическая значимость.

1. Обзор литературы

1.1. Генетическая детерминация расщепления молочного сахара у 10 человека.

1.1.1. Лактаза и лактоза.

1.1.2. Гиполактазия.

1.1.3. Возрастные изменения уровня синтеза лактазы.

1.1.4. Генетические полиморфизмы, ассоциированные с гиполактазией.

1.2. Эволюционные аспекты гиполактазии.

1.3. Географическое распределение частот гиполактазии.

1.4. Медицинские аспекты гиполактазии

1.5. Методы диагностики первичной гиполактазии.

1.5.1. Клинические методы.

1.5.2. Молекулярные методы диагностики гиполактазии.

2. Материалы и методы.

2.1. Материалы.

2.2. Методы.

2.2.1. Оценка активности лактазы у испытуемых.

2.2.2. Выделение ДНК из цельной крови.

2.2.3. Элюция продукта ДНК-амплификации из агарозных гелей.

2.2.4. Электрофоретический анализ ДНК в горизонтальном агарозном геле.

2. 2. 5. Методы генотипирования.

2.2.6. Статистический анализ данных.

3. Результаты и обсуждение.

3.1. Разработка и характеристика методов генотипирования полиморфизма 60 LCT*C/T-13910.

3.1.1. Секвенирование.

3.1.2. ПЦР-ПДРФ.

3.1.3. LDR-TaqMan.

3.1.4. Аллель-специфичная амплификация в режиме «реального времени».

3.2. Исследование ассоциации генотипа С/С по полиморфизму LCT*C/T

13910 и фенотипом гиполактазии в выборке добровольцев.

3.3. Определение частот аллелей С и Т и генотипов по полиморфизму LCT* С/Т-13910 в выборках, представляющих популяции России и сопредельных стран.

3.4. Сопоставление частот генотипа С/С по полиморфизму Z,CT*C/Tс частотой гиполактазии в соответствующих популяциях.

3.5. Корреляция частот генотипа С/С по полиморфизму £СТ*С/Т-13910 и фенотипа гиполактазии в популяциях Евразии.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Полиморфизм С/Т-13910 регуляторного участка гена лактазы LCT, ассоциированного с первичной гиполактазией у человека, в популяциях Евразии»

Актуальность работы

Генетически детерминированное снижение уровня синтеза фермента лактазы у взрослых (первичная гиполактазия, называемая также непереносимостью лактозы, MIM 223100) ограничивает возможность потребления цельного молока из-за непереносимости молочного сахара. Первичная гиполактазия наследуется по аутосомно-рецессивному типу и обусловлена изменениями последовательности нуклеотидов в регуляторном участке гена лактазы (Enattah et al., 2002; Tishkoff et al., 2007; Ingram et al., 2007). Употребление цельного молока при гиполактазии приводит к нарушениям пищеварения: вздутию кишечника, расстройствам стула, тошноте, головным болям, неспецифическим абдоминальным симптомам, выраженность и частота проявления которых зависит от характера микрофлоры кишечника, особенностей диеты и индивидуальной чувствительности пациента (Козлов, 1996; Шлейп, 2004). Указанная симптоматика исчезает и состояние здоровья нормализуется у большинства пациентов в течение 2-3 недель после исключения из питания молока и других продуктов, содержащих лактозу (Козлов, 1996).

Согласно данным клинико-биохимических исследований, частота гиполактазии сильно варьирует между разными популяциями, будучи минимальной (2-3%) на северо-западе Европы и достигая максимума (>90%) в популяциях Восточной Азии. У народов России частота гиполактазии варьирует от 30-40% у русских до 90% и более у коренных народов Сибири и Дальнего Востока (Козлов, 1996; Козлов, 1998)'.

Первичная гиполактазия рассматривается в настоящее время не как болезнь, а как вариант нормы, не требующей иного вмешательства, кроме корректировки диеты. Тем не менее, совершенствование методов диагностики и дифференциальной диагностики первичной гиполактазии имеет большое значение по ряду причин. Высокая мобильность населения в современном мире приводит к тому, что в регионы с традиционно широким распространением молочных продуктов (и сравнительно малым процентом индивидов с ограниченной активностью лактазы) прибывает большое количество выходцев из областей с преобладанием носителей аллеля, обусловливающего гиполактазию. Болезненная реакция на употребление лактозосодержащих продуктов у заметной части мигрантов требует медицинского контроля. В современной пищевой промышленности молочный сахар (лактоза) активно применяется при производстве кондитерских и мясных изделий, а также блюд быстрого приготовления (каш, пюре). Содержание лактозы в этих продуктах может в несколько раз превышать её концентрацию в цельном молоке (Шлейп, 2004).

Клиническая практика требует проведения дифференциальной диагностики гиполактазии у пациентов с целым рядом заболеваний органов пищеварения, при лечении которых традиционно принято назначать молочную диету, что, в случае первичной гиполактазии у пациента, может существенно ухудшить состояние, затруднить диагностику и лечение основного заболевания.

Наконец, дифференциальная диагностика первичной гиполактазии важна в педиатрической практике при обследовании и лечении детей младшего возраста с ещё не полностью сформировавшимся лактазным фенотипом. Распространенные клинико-лабораторные диагностические методы в последнем случае практически непригодны.

Клиническая диагностика гиполактазии возможна на основе как прямых (анализ активности лактазы в биоптатах стенки тонкой кишки), так и косвенных методов. Наиболее точный метод основан на прямом измерении активности лактазы в биоптатах тонкого кишечника, однако он редко применяется из-за инвазивности и слишком высокой сложности. Большее распространение получили косвенные нагрузочные пробы (Arola, 1994).

Среди последних наиболее распространены нагрузочные пробы: определение изменений содержания глюкозы в крови или галактозы в моче, а также содержания водорода в выдыхаемом воздухе после лактозной нагрузки. Эти методы обладают рядом недостатков, ограничивающих возможности их применения.

Специфичность их варьирует от 77 до 96%, а чувствительность от 69 до 94-100%. Недостатками нагрузочных проб являются опасность ухудшения состояния у чувствительных пациентов и высокий уровень ложнопозитивных результатов при обследовании детей (до 30%) (Козлов, 1996). Поэтому разработка систем молекулярной диагностики гиполактазии весьма актуальна.

Выше точки начала транскрипции этого гена выявлен полиморфизм С/Т -13910 (rs4988235), ассоциированный с гиполактазией. Для генотипа С/С по полиморфизму £СГ* С/Т-13910 показана 100% ассоциация с гиполактазией на выборке финнов (Enattah et al., 2002).

Объектом исследования в диссертации явились выборки, представляющие этнорегиональные группы России и сопредельных стран -русские разных регионов (Костромы, Ростова, Курска, Башкирии, Чукотки), украинцы (Восточная Украина), белорусы (различные регионы Беларуси), саамы (Кольский п-ов), марийцы горные (Мари Эл), удмурты (Игринский район Удмуртии), коми-пермяки, казахи (Алма-Ата), уйгуры (Алма-Атинский район), буряты (Улан Удэ и московские студенты уроженцы Бурятии), чукчи (Анадырский район). Были изучены также две небольшие выборки, представляющие популяции Ближнего Востока — московский студенты уроженцы Ирана (персы, луры, гилянцы, курды, турки) и арабы разных стран (Сирии, Ливана, Палестины, Иордании, Йемена, Израиля, Египта).

В диссертационной работе разработаны методы генотипирования полиморфизма £СГ*С/Т-13910 , для которых оценена их специфичность и возможность использования в популяционных исследованиях и клинической практике. Исследовано распределение аллелей и генотипов по полиморфизму LCT*С/Т-13910 в российских популяциях и установлены частоты генотипа С/С, ассоциированного с гиполактазией. Частоты этого генотипа сопоставлены с опубликованными данными по частоте клинико-биохимически диагностированной гиполактазии для тех же популяций.

Цели и задачи исследования

Целью диссертационной работы является выявление географического распределения частот аллелей и генотипов по полиморфизму С/Т-13910 в регуляторном участке гена лактазы LCT в популяциях Евразии; выявление степени ассоциации генотипа С/С по данному полиморфизму с первичной гиполактазией в населении РФ; оценка генетической гетерогенности первичной гиполактазии в населении Евразии; разработка и оптимизация методов молекулярной диагностики первичной гиполактазии.

Задачи работы

• Разработать и подобрать оптимальные методы для детекции аллелей и генотипов полиморфизма LCT* С/Т -13910.

Определить ассоциацию полиморфизма £СГ*С/Т-13910 с фенотипом гиполактазии/персистенции лактазы в российской выборке.

• В выборках, представляющих популяции народов Евразии, определить генотипы индивидов по полиморфизму LCT* С/Т-13910, установить частоты аллелей и охарактеризовать географическое распределение частот аллелей и генотипов.

Оценить возможную генетическую гетерогенность первичной гиполактазии в российских популяциях, сопоставив частоту предположительно ассоциированного с первичной гиполактазией генотипа

С/С полиморфизма LCT*C/T-13910 и установленную ранее фенотипически частоту гиполактазии в тех же популяциях.

Научная новизна

Показана ассоциация генотипа С/С полиморфизма LCT*C/T-13910 в регуляторном участке гена лактазы с фенотипом первичной гиполактазии в выборке жителей европейской части России.

Подобран оптимальный метод для генотипирования полиморфизма LCT*C/T-13910.

Определены частоты аллелей и генотипов полиморфизма LCT*CIТ-13910 в 18 популяциях, представляющих 14 этнических групп России и сопредельных стран.

Показано, что частоты генотипа С/С в большинстве изученных популяциях близки к опубликованным частотам гиполактазии, установленным в клинико-биохимических исследованиях, у соответствующих народов, тем самым показано, что носительство генотипа С/С является основным генетическим детерминантом развития первичной гиполактазии в популяциях европейской части России.

Практическая значимость

Практическая значимость данной работы определяется необходимостью разработки средств молекулярно-генетической диагностики гиполактазии и высокой частотой гиполактазии в российских популяциях (от 35-50% в различных популяциях русских до 80% и более в популяциях коренных народов Сибири и Дальнего Востока). Разработанные методы могут использоваться для ДНК-диагностики первичной гиполактазии в населении европейской части России.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Генетика», Соколова, Мария Викторовна

ВЫВОДЫ

1. На выборке 12 взрослых жителей европейской части России показана ассоциация генотипа С/С по полиморфизму С/Т -13910 гена LCT с фенотипом гиполактазии: все 8 индивидов, имеющих генотип С/С по этому локусу, обладают фенотипом гиполактазии, все 4 индивида с генотипом С/Т j по этому локусу обладают фенотипом псрсистенции лактазы.

2. Определены частоты аллелей и генотипов по полиморфизму С/Т -13910 гена LCT в 18 выборках, представляющих 14 этнических групп Евразии (всего 1171 индивид). Частота генотипа С/С, ассоциированного с гиполактазией, в изученных популяциях минимальна для населения Севера-Запада России и растет к Югу и Востоку, составляя в выборках русских 36 — 54% ( в т.ч. русские Костромы - 36%, , Чукотки - 46%, Башкирии - 51%, Курска - 54%, Ростова - 54%), белорусов - 40%, украинцев - 42%, коми-пермяков - 42%, саамов - 48%, удмуртов - 55%, марийцев - 74%, казахов -79%, горцев Памира - 88%, чукчей 89%, уйгуров - 90%, бурят - 90%, иранцев - 91%, арабов разных стран - 83%.

3. Показано, что частоты генотипа С/С по полиморфизму С/Т-13910 гена LCT в популяциях европейской части России совпадают с частотами клинически диагностированной гиполактазии в тех же группах, то есть, что генотип С/С по полиморфизму С/Т -13910 регуляторного участка гена LCT является основным, а возможно, и единственным генетическим детерминантом первичной гиполактазии в популяциях европейской части России.

4. Разработаны и проверены 4 метода генотипирования аллельного состояния полиморфизма С/Т -13910 гена LCT. По сочетанию точности и простоты оптимальным для тестирования методом является ПЦР-амплификация "в реальном времени" с флуоресцентно меченными аллель-специфическими праймерами.

БЛАГОДАРНОСТИ

Выражаю благодарность научным руководителям М.М.Асланяну и С.А.Боринской, заведующему лабораторией анализа генома Н.К.Янковскому, А.И.Козлову и сотрудникам лаборатории анализа генома ИОГен РАН и кафедры генетики биологического факультета МГУ за плодотворные дискуссии и постоянную поддержку в работе.

Заключение

Полученные нами данные о распределении частот ассоциированного в европейских популяциях с гиполактазией генотипа С/С по полиморфизму LCT*С/Т-13910 в популяциях России и сопредельных стран хорошо вписываются в общую картину географической изменчивости частот гиполактазии в популяциях Евразии с повышением ее от 2-6% на Северо-Западе Европы у голландцев и датчан до 50-70% на юге Европы и в Волго-Уральском регионе и еще более высокими частотами (до 80% и выше) в коренном населении Сибири и Дальнего Востока (Козлов, 1996, Козлов и др., 1998; Enattah et al., 2007). Для популяций азиатской части России необходимы дополнительные исследования генетических полиморфизмов, ассоциированных с гиполактазией для того, чтобы определить, является ли для них полиморфизм С/Т-13910 по гену LCT единственным или лишь одним из нескольких, ассоциированных с гиполактазией.

Для изученных популяций европейской части России различия между частотами клинически диагностированной гиполактазии в популяциях и установленными нами частотами генотипа С/С находятся в пределах статистической ошибки. Это позволяет заключить, что генотип С/С-13910 по гену LCT в изученных группах является наиболее частым, а возможно единственным, определяющим персистенцию лактазы и способность к усвоению молока взрослыми. Таким образом, ДНК-диагностику на носительство генотипа С/С локуса С/Т -13910 у представителей европейских популяций России можно рассматривать как предиктивный тест в отношении первичной гиполактазии задолго до ее фенотипического проявления.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Соколова, Мария Викторовна, 2008 год

1. Валенкевич Л.Н., Активность лактазы и синдром непереносимости молока//Клинич.Медицина, 1977,55, 66-70г- ,

2. Козлов А.И., Балановская Е.В., Нурбаев С.Д., Балановский О.П. Геногеография первичной гиполактазии в популяциях Старого Света. Генетика1998,34(4), 551-561.

3. Козлов А.И., Гиполактазия: распространенность, диагностика, врачебная тактика//АрктАн-С, Москва, 1996,-70

4. Таммур Р., Непериносимость лактозы среди детей, подростков и в семьях, имеющих гиполактозию// Tartu, 1991, 23-24

5. Шлейп Т., Осторожно: лактоза! // ВЕСЬ, СПб, 2004,

6. Arola II., Diagnosis of hypolactasia and lactose malabsorption//Scand.J.Gastroenterol.Suppl, 1994,202, 26-35

7. Arola H., Koivula Т., Jokela H., Jauhiainen M., Keyrilainen О., Ahola Т., Uusitalo A., and Isokoski M., Comparison of indirect diagnostic methods for hypolactasia//Scand.J.Gastroenterol., 1988,23(3), 351-357

8. Asmawi M.Z., Seppo L., Vapaatalo H., and Korpela R., Hypolactasia & lactose intolerance among three ethnic groups in Malaysia//Indian J.Med.Res., 2006b, 124(6), 697-704

9. Asmawi M.Z., Seppo L., Vapaatalo H., and Korpela R., Hypolactasia & lactose intolerance among three ethnic groups in Malaysia//Indian J.Med.Res., 2006a, 124(6), 697-704

10. Baiter M., Evolutionary genetics. Are humans still evolving?//Science, 2005,309(5732), 234-237

11. Bayless T.M. and Christopher N.L., Disaccharidase deficiency/Mm. J.Clin.Nutr., 1969,22(2), 181-190

12. Bersaglieri Т., Sabeti P.C., Patterson N., Vanderploeg Т., Schaffner S.F., Drake J.A., Rhodes M., Reich D.E., and Hirschhorn J.N., Genetic signatures of strong recent positive selection at the lactase gene//Am.J.Hum.Genet., 2004,74(6), 1111-1120

13. Bhatnagar S. and Aggarwal R., Lactose intolerance//BMJ, 2007b,334(7608), 1331-1332

14. Boll W., Wagner P., and Mantei N., Structure of the chromosomal gene and cDNAs coding for lactase-phlorizin hydrolase in humans with adult-type hypolactasia or persistence of lactase//Am.J.Hum.Genet., 1991,48(5), 889902

15. Borodina T.A., Lehrach H., and Soldatov A.V., Ligation detection reaction-TaqMan procedure for single nucleotide polymorphism detection on genomic DNA//Anal.Biochem„ 2004,333(2), 309-319

16. Buning C., Genschel J., Jurga J., Fiedler Т., Voderholzer W., Fiedler E.M., Worm M., Weltrich R., Lochs H., Schmidt H., and Ockenga J., Introducing genetic testing for adult-type hypolactasia//Digestion, 2005,71(4), 245-250

17. Buning С., Oekenga J., Kruger S., Jurga J., Baier P., Dignass A., Vogel A., Strassburg C., Weltrich R., Genschel J., Lochs H., and Schmidt H., The

18. C/C(-13910) and G/G(-22018) genotypes for adult-type hypolactasia arenot associated with inflammatory bowel disease//Scand.J.Gastroenterol., 2003,38(5), 538-542

19. Burger J., Kirchner M., Bramanti В., Haak W., and Thomas M.G., Absence of the lactase-persistence-associated allele in early Neolithic Europeans//Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 2007b,104(10), 3736-3741

20. Chao C.K. and Sibley E., PCR-RFLP genotyping assay for a lactase persistence polymorphism upstream of the lactase-phlorizin hydrolase gene//Genet.Test., 2004,8(2), 190-193

21. Coelho M., Luiselli D., Bertorelle G., Lopes A.I., Seixas S., stro-Bisol G., and Rocha J., Microsatellite variation and evolution of human lactase persistence//Hum.Genet., 2005b,117(4), 329-339

22. Cook GC, al-Torki MT.High intestinal lactase concentrations in adult Arbs in Saudi Arabia. //Br Med J. 1975 Jul 19;3(5976): 135-6.

23. Cuatrecasas P., LOCKWOOD D.H., and CALDWELL J.R, LACTASE DEFICIENCY IN THE ADULT. A COMMON OCCURRENCE/ZLancet, 1965,13, 14-18

24. Ellestad-Sayed J.J. and Haworth J.C., Disaccharide consumption and malabsorption in Canadian Indians//Am.J.Clin.Nutr., 1977,30(5), 698-703

25. Enattah N., Valimaki V.V., Valimaki M.J., Loyttyniemi E., Sahi Т., andс

26. Jarvela I., Molecularly defined lactose malabsorption, peak bone mass and bone turnover rate in young finnish men//Calcif.Tissue Int., 2004b,75(6), 488-493

27. Enattah N., Valimaki V.V., Valimaki M.J., Loyttyniemi E., Salii Т., and Jarvela I., Molecularly defined lactose malabsorption, peak bone mass and bone turnover rate in young finnish men//Calcif.Tissue Int., 2004a,75(6), 488-493

28. Enattah N.S., Forsblom C., Rasinpera H., Tuomi Т., Groop P.H., and Jarvela I., The genetic variant of lactase persistence С (-13910) T as a risk factor for type I and II diabetes in the Finnish population//Eur.J.Clin.Nutr., 2004b,58(9), 1319-1322

29. Enattah N.S., Kuokkanen M., Forsblom C., Natah S., Oksanen A., Jarvela I., Peltonen L., and Savilahti E., Correlation of intestinal disaccharidase activities with the C/T-13910 variant and age/AVorld J.Gastroenterol., 2007,13(25), 3508-3512

30. Enattah N.S., Sahi Т., Savilahti E., Terwilliger J.D., Peltonen L., and Jarvela I., Identification of a variant associated with adult-type hypolactasia//Nat.Genet., 2002a,30(2), 233-237

31. Enattah N.S., Sulkava R., Halonen P., Kontula K., and Jarvela I., Genetic variant of lactase-persistent C/T-13910 is associated with bone fractures in veiy old age//J.Am.Geriatr.Soc., 2005,53(1), 79-82

32. Escher J.C., de Koning N.D., van Engen C.G., Arora S., Buller H.A., Montgomeiy R.K., and Grand R.J., Molecular basis of lactase levels in adult humans//J.Clin.Invest, 1992,89(2), 480-483

33. Gregory D.Miller, JudithK.Jarvis, and Lois D.McBean., Handbook of daily foods and nutrition// CRC Press LLC, Rosemont, Illinois, 1999,2nd-448

34. Harvey C.B., Fox M.F., Jeggo P.A., Mantei N., Povey S., and Swallow D.M., Regional localization of the lactase-phlorizin hydrolase gene, LCT, to chromosome 2q21//Ann.Hum.Genet., 1993,57(Pt 3), 179-185

35. Harvey C.B., Wang Y., Hughes L.A., Swallow D.M., Thurrell W.P., Sams V.R., Barton R., Lanzon-Miller S., and Sarner M., Studies on the expression of intestinal lactase in different individuals//Gut, 1995,36(1), 28-33

36. Kerber M., Oberkanins C., Kriegshauser G., Kollerits В., senbach-Glaninger A., Fuchs D., and Ledochowski M., Hydrogen breath testing versus LCT genotyping for the diagnosis of lactose intolerance: A matter of age?//Clin.Chim.Acta, 2007a,383(1-2), 91-96

37. Kozlov A. 1995. The phenocline of primary hypolactasia in Finno-Ugrian populations. Papers on Anthropology VI. Univ. of Tartu, Centre of Physical Anthropology. Tartu,. 111-115.

38. Kristensen V.N., Kelefiotis D., Kristensen Т., and Borresen-Dale A.L., High-throughput methods for detection of genetic variation//Biotechniques, 2001,30(2), 318-22, 324, 326

39. Kruse T.A., Bolund L., Grzeschik K.H., Ropers H.H., Sjostrom H., Noren O., Mantei N., and Semenza G., The human lactase-phlorizin hydrolase gene is located on chromosome 2//FEBS Lett., 1988,240(1-2), 123-126

40. Kuokkanen M., Butzow R., Rasinpera H., Medrek K., Nilbert M., Malander S., Lubinski J., and Jarvela I., Lactase persistence and ovarian carcinoma risk in Finland, Poland and Sweden//Int.J.Cancer, 2005b, 117(1), 90-94

41. KuokkaneniVI., Enattah N.S., Oksanen A., Savilahti E., Orpana A., and Jarvela I., Transcriptional regulation of the lactase-phlorizin hydrolase gene by polymorphisms associated with adult-type hypolactasia//Gut, 2003c,52(5), 647-652

42. Kuokkanen M., Kokkonen J., Enattah N.S., Ylisaukko-Oja Т., Komu H., Varilo Т., Peltonen L., Savilahti E., and Jarvela I., Mutations in the

43. Translated Region of the Lactase Gene (LCT) Underlie Congenital Lactase Deficiency//Am.J.Hum.Genet., 2006,78(2), 339-344

44. Lember M., Torniainen S., Kull M., Kallikorm R., Saadla P., Rajasalu Т., Komu H., and Jarvela I., Lactase non-persistence and milk consumption in Estonia//World J.Gastroenterol., 2006b,12(45), 7329-7331

45. Lewinsky R.H., Jensen T.G., Moller J., Stensballe A., Olsen J., and Troelsen J.T., T-13910 DNA variant associated with lactase persistence interacts with Oct-1 and stimulates lactase promoter activity in vitro//Hum.Mol.Genet., 2005,14(24), 3945-3953

46. Liew M., Seipp M., Durtschi J., Margraf R.L., Dames S., Erali M., Voelkerding K., and Wittwer C., Closed-tube SNP genotyping without labeled probes/a comparison between unlabeled probe and amplicon melting//Am.J.Clin.Pathol., 2007,127(3), 341-348

47. Maiuri L., Rossi M., Raia V., Paparo F., Coletta S., Mazzeo F., Breglia A., and Auricchio S., Morphological method for the diagnosis of human adult type hypolactasia//Gut, 1994,35(8), 1042-1046

48. Mamotte C.D., Genotyping of single nucleotide substitutions//CIin.Biochem.Rev., 2006,27(1), 63-75

49. Montalto M., Curigliano V., Santoro L., Vastola M., Cammarota G., Manna R., Gasbarrini A., and Gasbarrini G., Management and treatment of lactose malabsorption//World J.Gastroenterol., 2006,12(2), 187-191

50. Newcomer A.D. andMcGill D.B., Distribution of disaccharidase activity in the small bowel of normal and lactase-deficient subjects//Gastroenterology, 1966,51(4), 481-488

51. Nilsson Т.К. and Johansson C.A., A novel method for diagnosis of adult hypolactasia by genotyping of the -13910 C/T polymorphism with Pyrosequencing technology//Scand.J.Gastroenterol., 2004,39(3), 287-290

52. Nose O., Iida Y., Kai Ii., Harada Т., Ogawa M„ and Yabuuchi H., Breath hydrogen test for detecting lactose malabsorption in infants and children. Prevalence of lactose malabsorption in Japanese children and adults7/Arch.Dis.Child, 1979,54(6), 436-440

53. Olds L.C. and Sibley E., Lactase persistence DNA variant enhances lactase promoter activity in vitro: functional role as a cis regulatory element/ZHum.Mol.Genet., 2003c, 12(18), 2333-2340

54. Piepoli A., Schirru E.,rMastrorilli A., Gentile A., Cotugno R., Quitadamo M., Merla A., Congia M., Usai S.P., and Perri F., Genotyping of the Lactase-Phlorizin Hydrolase C/T-13910 Polymorphism by Means of a New

55. Rapid Denaturing High-Performance Liquid Chromatography-Based Assay in Healthy Subjects and Colorectal Cancer Patients//J.Biomol.Screen., 2007a,

56. Rasinpera H., Kuokkanen M., Kolho K.L., Lindahl H., Enattah N.S., Savilahti E., Orpana A., and Jarvela I., Transcriptional downregulation of the lactase (LCT) gene during childhood//Gut, 2005c,54(11), 1660-1661

57. Rasinpera H., Saarinen K., Pelkonen A., Jarvela I., Savilahti E., and Kolho K.L., Molecularly defined adult-type hypolactasia in school-aged children with a previous history of cow's milk allergy/AVorld J.Gastroenterol., 2006a,12(14), 2264-2268

58. Rasinpera H., Savilahti E., Enattah N.S., Kuokkanen M., Totterman N., Lindahl H., Jarvela I., and Kolho K.L., A genetic test which can be used to diagnose adult-type hypolactasia in children//Gut, 2004,53(11), 1571-1576

59. Ridefelt P. and Hakansson L.D., Lactose intolerance: lactose tolerance test versus genotyping//Scand.J.Gastroenterol., 2005g,40(7), 822-826

60. Sacerdote C., Guarrera S., Smith G.D., Grioni S., Krogh V., Masala G., Mattiello A., Palli D., Panico S., Tumino R., Veglia F., Matullo G., and Vineis P., Lactase Persistence and Bitter Taste Response: Instrumental

61. Variables and Mendelian Randomization in Epidemiologic Studies of Dietary Factors and Cancer Risk//Am.J.Epidemiol., 2007,

62. Sahi Т., Launiala K., and Laitinen H., Hypolactasia in a fixed cohort of young Finnish adults. A follow-up study//Scand.J.Gastroenterol., 1983,18(7), 865-870

63. Sahi Т., The inheritance of selective adult-type lactose malabsorption//Scand.J.Gastroenterol.Suppl, 1974,30, 1-73

64. Sambrook J., Fritsch E.F., and Maniatis Т., Molecular Cloning: A Laboratory manual// Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989,-479

65. Swallow D.M., Poulter M., and Hollox E.J., Intolerance to lactose and other dietary sugars//Drug Metab Dispos., 2001,29(4 Pt 2), 513-516

66. Syvanen A.C., Sajantila A., and Lukka M., Identification of individuals by analysis of biallelic DNA markers, using PCR and solid-phase minisequencing//Am.J.Hum.Genet., 1993,52(1), 46-59

67. The genetic polymorphism of intestinal lactase activity in adult humans// McGraw-Hill, New York, 1989, 2999-3006

68. Troelsen J.T., Olsen J., Moller J., and Sjostrom H., An upstream polymorphism associated with lactase persistence has increased enhancer activity//Gastroenterology, 2003b, 125(6), 1686-1694

69. Wang YG, Yan YS, Xu JJ, Du RF, Flatz SD, Kuhnau W, Flatz G.Prevalence of primary adult lactose malabsorption in three populations of northern China. Hum Genet. 1984;67(1): 103-6.

70. Witte J., Lloyd M., Lorenzsonn V., Korsmo H., and Olsen W., The biosynthetic basis of adult lactase deficiency//J.Clin.Invest, 1990,86(4), 1338-1342

71. Wittwer C.T., Reed G.H., Gundry C.N., Vandersteen J.G., and Pryor R.J., High-resolution genotyping by amplicon melting analysis using LCGreen//Clin.Chem., 2003,49(6 Pt 1), 853-860 "

72. Zheng, J., Z. Gong, L. Xue et al. 1988. Lactose malabsorption and its ethnic differences in Hans and Uygurs. Chin. Med. J. 101:284-286.

73. Zhou L., Myers A.N., Vandersteen J.G., Wang L., and Wittwer C.T., Closed-tube genotyping with unlabeled oligonucleotide probes and a saturating DNA dye//Clin.Chem., 2004,50(8), 1328-1335