Клинико-генотипический полиморфизм муковисцидоза среди населения Краснодарского края тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Рукавичкин, Дмитрий Васильевич

• Рукавичкин, Дмитрий Васильевич
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Рукавичкин, Дмитрий Васильевич

Список используемых сокращений

Введение (характеристика работы)

Глава 1. Муковисцидоз - общие представления (обзор литературы)

1.1. Исторические аспекты изучения муковисцидоза

1.2. Современные представления о муковисцидозе

1.3. Клинические варианты муковисцидоза

1.4. Молекулярно-генетическая характеристика гена СЕТЯ и его продуктов

1.4.1. Структура гена СЕТЯ и матричной РНК

1.4.2. Структура и функции белкового продукта гена СЕТЯ

1.4.3. Классификация мутаций гена СЕТЯ

1.4.4. Ассоциации полиморфных внутригенных и внегенных маркеров у больных муковисцидозом

1.5. Распространённость мутантных аллелей гена СЕТЯ в разных популяциях

1.6. Мониторинг и прогнозирование муковисцидоза в современный период

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Общая характеристика больных

2.2. Методы исследования

2.2.1. Ретроспективный анализ

2.2.2. Молекулярно-генетическая диагностика мутаций в гене СЕТЯ

2.2.3. Статистическая обработка результатов 52 Результаты и обсуждение

Глава 3. Характеристика популяции и клинический полиморфизм МВ

3.1. Этнодемографическая характеристика краснодарской популяции

3.2. Клинические формы МВ

Глава 4. Генотипический полиморфизм МВ

4.1. Спектр мутаций гена СРТК у больных МВ в Краснодарском крае

4.2. Анализ аллелей внутригенных и внегенных маркеров в выборках мутантных и нормальных хромосом

4.2.1. Распределение частот аллелей и генотипов внутригенных маркеров (1У86аОАТТ, М470У, ТИВ18, ТЦВ20) гена СРТЯ в выборках мутантных и нормальных хромосом

4.2.2. Распределение частот аллелей и генотипов внегенных маркеров (ХУ.2С, КМ. 19, J3.ll, Ме1:Н) в выборках мутантных и нормальных хромосом

Глава 5. Клинико-генотипический анализ МВ в краснодарской популяции

5.1. Клинико-генотипические ассоциации

5.2. Ассоциации генотипов с уровнем хлоридов в поте больных

5.3 Этно-территориальное распределение больных МВ в краснодарской популяции с мутациями в гене СРТЯ

5.4 Оценка частоты МВ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-генотипический полиморфизм муковисцидоза среди населения Краснодарского края»

Актуальность исследования

Муковисцидоз (кистозный фиброз; OMIM 219700) - частое моногенное аутосомно-рецессивное заболевание, характеризующееся поражением экзокринных желез жизненно важных органов и систем и имеющее обычно тяжелое течение и прогноз [The OMIM database http://www.ncbi.nlm.nih.gov/omim]. Ген, связанный с развитием муковисцидоза (MB), был картирован в 1989г. в середине длинного плеча 7-й хромосомы (7q31.2). [J.M.Rommens et al., 1989; J.M.Riordan et al., 1989; B.Kerem et al., 1989]. Он состоит из 27 экзонов и охватывает 250000 пар нуклеотидов. Транскрипция гена CFTR приводит к появлению первичного продукта — мРНК, состоящего из 6129 нуклеотидов.-Белковый продукт включает 1480 аминокислотных остатков. Белок CFTR, функционируя как цАМФ-зависимый хлорный канал, регулирует работу других хлорных и натриевых каналов, участвует в проведении воды и АТФ, является сенсором внутриклеточного уровня АТФ и медиатором транспорта эндоплазматических пузырьков [J.M.Riordan et al., 1989].

К настоящему времени, по данным Консорциума по муковисцидозу, выделено 1546 мутаций гена CFTR [The CF mutation database 02.03.2007 http://www.genet.sickkids.on.ca/cfitr]. Мутации гена CFTR реализуются недостаточной активностью CFTR-белка, что приводит к аномальным концентрациям хлоридов в просвете протоков дистальных отделов бронхолёгочной системы, поджелудочной железы, протоков потовых желез, тонкого кишечника и семенных канатиков. Вследствие указанных изменений развивается прогрессирующее заболевание лёгких - бронхит, пневмония. Специфическими изменениями в тонкой кишке являются: гиперпродукция слизи, повышенное количество бокаловидных клеток, переполненных слизью, очаговая атрофия слизистой оболочки, отёк подслизистого слоя с формированием фиброза, что приводит к снижению выработки ферментов тонкой кишки и играет определённую роль в патогенезе заболевания. Патологические изменения в поджелудочной железе могут сформироваться ещё внутриутробно с развитием панкреатической недостаточности, которая проявляется клинически и морфологически мекониальным илеусом новорожденного с атрофией толстого и расширением тонкого кишечника, заполненного вязким, липким меконием [Л.А.Шабалова и соавт., 2006; C.Bombieri at al., 2000; P.Noone et al., 2001; M.Tzetis et al, 2001; E.Marchand et al., 2001; N.Reiniger et al., 2005; M.Dahl et al., 2005].

По данным Российского центра муковисцидоза, в нашей стране насчитывается более 1800 больных MB, которые занесены в единый Регистр больных РФ. Согласно расчётам Н.И.Капранова ежегодно в Москве должно рождаться до 50, а в России около 750 больных MB. Во Франции, в Англии и Германии - от 500 до 800, в США - около 2 тыс., а в мире - более 45000 детей, больных MB, а число гетерозиготных носителей гена насчитывает многие десятки миллионов. [Н.И.Капранов, 1994; Н.И.Капранов, Н.Ю.Каширская, 1997; Т.Ю.Капустина и соавт., 2005, 2006;].

В большинстве стран Европы и Северной Америки частота МБ составляет от 1:2000 до 1:4000 новорожденных. Частота МБ в разных популяциях РФ существенно варьирует от 1:4860 до 1:12300 живорождённых [Н.В.Петрова, Е.К.Гинтер, 1997, 2001; Н.И.Капранов, 2001,2006].

Спектр различных мутаций и полиморфизмов гена CFTR обладают выраженной популяционной специфичностью [The CF mutation database 2007 http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr]. Выявление особенностей распространения MB в Краснодарском крае, анализ частоты и спектра мутаций, приводящих к данному заболеванию, представляют актуальную научную задачу и имеют важное значение для практического здравоохранения. Анализ внегенных и внутригенных полиморфных маркеров гена СКТЯ открывает новые возможности для исследования генетической структуры популяции.

Целью данного исследования является определение частоты, распространённости, спектра мутаций гена СЕТЛ, источников происхождения мутантных генов муковисцидоза, корреляции между мутациями гена СРТЯ и клиническими формами муковисцидоза среди населения Краснодарского края.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1) Провести ДНК-диагностику и верифицировать спектр генных мутаций у больных муковисцидозом, зарегистрированных на территории Краснодарского края за период 1994-2005г.г.

2) Провести сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов внегенных и внутригенных маркеров гена СКТЯ в выборках нормальных и мутантных хромосом.

3) Провести генотипическое обследование родителей, сибсов и ближайших родственников пробандов с целью установления источников происхождения мутантных генов.

4) Проанализировать зависимость между мутациями гена СКТЯ и клиническими формами муковисцидоза у больных.

5) Сравнить полученные данные с результатами аналогичных исследований в других регионах и популяциях.

6) Создать краевой Регистр семей, отягощенных МВ.

7) Создать банк данных мутаций гена муковисцидоза, зарегистрированных на территории края.

8) Разработать прогностические и медико-профилактические мероприятия на основе молекулярно-генетической диагностики муковисцидоза.

Новизна результатов исследования

Впервые дана характеристика спектра и частоты мутаций гена СЕТЯ среди больных МВ в Краснодарском крае.

Впервые установлено, что спектр мутаций, у больных МВ в крае, отличается своеобразием по сравнению с ранее изученными регионами России; определены диагностически значимые мутации для краснодарского региона.

Впервые у больных МВ из Краснодарского края описаны шесть мутаций, которые ранее не выявлялись на территории Российской Федерации: 085Е (3 экзон), Ы117Н (4 экзон), Ю17С (4 экзон), Е92К (4 экзон), 2183АА—>С (13 экзон) и 4006-Ше13 (20 интрон).

Впервые получены данные об аллельном и генотипическом разнообразии диаллельных внегенных (ХУ.2С, КМ. 19, 13.11, МеШ) и внутригенных (М470У, ТЦВ18, ТЦВ20) маркеров и одного внутригенного микросателлитного (1У86аОАТТ) маркера гена СЕТЯ у больных МВ среди населения Краснодарского края.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. В результате молекулярно-генетического исследования гена СЕТЯ выявлены 16 мутаций, что позволяет идентифицировать 63,7% всех мутантных аллелей. Спектр мутаций гена СЕТЯ у больных МВ из Краснодарского края имеет свои особенности и отличается от такового в других регионах России.

2. Описаны шесть мутаций, которые ранее не обнаруживались на территории Российской Федерации.

3. Анализ частот аллелей и генотипов диаллельных внегенных (ХУ.2С, КМ. 19, 13.11, Мег Н) и внутригенных (М470У, ТиВ18, ТЦВ20) маркеров и одного внутригенного микросателлитного (1У86аОАТТ) маркера гена СЕТЯ выявляет различия между больными и здоровыми по данным полиморфным системам.

4. Определение корреляций между генотипом больного и клиническими особенностями заболевания, позволяет прогнозировать характер течения МВ, более эффективно осуществлять его лечение и профилактику.

5. Разработанный оптимальный алгоритм ДНК-диагностики МВ, основанный на молекулярно-генетическом анализе мутаций гена С7<77?, позволяет осуществлять пренатальную диагностику МВ и выявлять гетерозиготных носителей мутаций гена С7<77? в семьях высокого риска МВ.

Теоретическая значимость исследования. Полученные данные о частоте, спектре, территориальном и этническом разнообразии мутаций гена С7<77? и восьми полиморфных систем предоставляют новый материал, что может служить базой для дальнейших исследований в области популяционной генетики.

Практическая значимость исследования заключается в оптимизации алгоритма выявления гетерозиготных носителей мутаций гена СГТЯ, пресимптоматической и пренатальной диагностики МВ, необходимой для осуществления целенаправленной профилактики этого наследственного заболевания в Краснодарском крае. На основании результатов работы создан краевой Регистр семей, отягощенных муковисцидозом и банк данных мутаций гена СГТЯ, зарегистрированных на территории края. Разработан и внедрён в практику медико-генетической службы Краснодарского края и лаборатории медицинской генетики Ростовского государственного медицинского университета "Алгоритм молекулярно-генетической диагностики муковисцидоза". Материалы работы могут быть использованы в учебном процессе на медицинских и биологических факультетах, а также на курсах повышения квалификации постдипломного обучения врачей общей практики. Результаты исследования введены в рабочую программу по медицинской генетике для студентов 1У-го курса лечебного, педиатрического и медикопрофилактического факультетов на кафедре биологии с курсом медицинской генетики Кубанского государственного медицинского университета. Результаты молекулярно-генетического исследования используются в работе врачей-педиатров Краевой детской клинической больницы. Имеются акты внедрения (приложения 3.1 - 3.3).

Завершая вводную часть диссертации, хочу выразить искреннюю признательность и благодарность своему учителю и наставнику -доктору медицинских наук профессору Голубцову Виктору Ивановичу за помощь и создание всех условий для выполнения диссертации. Одновременно благодарю коллектив кафедры биологии с курсом медицинской генетики Кубанского государственного медицинского университета, а также коллег Кубанской межрегиональной медико-генетической консультации и Краевой детской клинической больницы за помощь в работе и деловое обсуждение полученных результатов. Отдельная благодарность коллективу Лаборатории медицинской генетики Ростовского государственного медицинского университета за помощь в выполнении проведении фрагмента работы на секвенаторе ВескшапСокег БЕС) 8000.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Рукавичкин, Дмитрий Васильевич

выводы

1. Дана оценка частоты муковисцидоза среди новорождённых детей в Краснодарском крае за период 1994-2005г.г., которая составила 1:10888 (54:587946). Полученные результаты сопоставимы с аналогичными исследованиями в российских популяциях.

2. По результатам исследования ДНК больных МВ идентифицировано 16 мутаций: F508del - 39,8%, CFTRdele2,3(21kb) - 5,1%, 3849+10kbC->T -4,5%, 2183АА—>G - 3,4%, 2184insA - 1,7%, N1303K - 1,7%, L138ins -1,1%, 2143delT - 1,1% и W1282X - 1,1%; частота мутаций G85E, R117H, R117C, E92K, R347P, G542X и 4006-19del3 менее 1,0%.

3. Впервые зарегистрированы шесть мутаций, которые ранее не диагностировались у больных МВ на территории Российской Федерации: G85E (3 экзон), R117H, R117C и Е92К (4 экзон), 2183АА—>G (13 экзон), 4006-19del3 (19 интрон).

4. Установлены различия в характере распределения полиморфных аллелей и генотипов внутригенных маркеров гена CFTR (IVS6aGATT, М470У, TUB18, TUB20) и внегенных маркеров (ХУ.2С, КМ.19, J3.ll, MetH) в выборках нормальных и мутантных хромосом.

5. Основной клинической формой МВ у больных в Краснодарском крае является смешанная форма (65,0%), лёгочная составила - 19,0%, а кишечная - 16,0%. По тяжести течения основной являлась средняя степень - 54,0%, тяжёлая отмечена в 31,0%), лёгкая - 15,0%. Установлена корреляция между мутациями в гене CFTR и клиническими формами МВ: у больных, имеющих две "тяжёлые" мутации преобладает смешанная форма (78,0%), а кишечный синдром отмечен у 93,0% пациентов; для больных, имеющих одну "мягкую" мутацию характерна высокая доля лёгочной формы (44,0%).

6. Доля полностью информативных семей при анализе гена СРТЯ и по всем изученным маркерным системам составила 55,0%, что позволяет осуществлять пренатальную диагностику МВ и выявлять гетерозиготных носителей мутаций гена СРТТ? в семьях высокого риска МВ.

7. Создан краевой регистр семей отягощенных муковисцидозом и банк данных мутаций гена СРТЯ зарегистрированных на территории края. Разработан и внедрён в практику медико-генетической службы края алгоритм молекулярно-генетической диагностики муковисцидоза.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Географическое положение Краснодарского края (юг России), значительная численность народонаселения (более 5 млн. человек), многонациональный состав - 126 национальностей (преимущественно русские и украинцы - 89,22%) и своеобразие формирования панмиксной краснодарской популяции (иммигранты из других регионов) - определили необходимость анализа популяционного генетического груза по муковисцидозу среди 587946 новорождённых в крае за период 1994 — 2005 годы.

Всего за указанный период на основании клинико-лабораторных данных (хлориды в поте больных) зарегистрировано 54 ребёнка с диагнозом муковисцидоз. Таким образом, частота МВ среди новорождённых составила 1:10888, что соответствует результатам исследований в других популяциях России и ряда европейских государств [Н.В.Петрова, 1996, 2006; Т.Э.Иващенко, 2000].

С целью изучения спектра и частоты мутаций гена СРТЯ у больных МВ в Краснодарском крае нами проведён молекулярно-генетический анализ 20 наиболее частых в России мутаций гена СРТЯ: 10 экзон -Б508с1е1, 1677ёе1ТА; 2,3 экзоны - СРТЯёе1е2,3(21кЬ), 394сШТ; 13 экзон-2143ёе1Т, 21841пбА; 20 экзон - W1282X, 3944с1е1ТО; 21 экзон - МЗОЗК; 11 экзон - С542Х, С55Ш, Я553Х; 7 экзон - 11334\У, Я347Р; 19 экзон -Б1196Х, 3667ёе1ТСАА, 382Ые1Т; 4 экзон - ЬШшб, 621+Ю->Т; 19интрон -3849+ЮкЬС—>Т, с последующим секвенированием образцов.

Установлено, что частота мутации Р508с1е1 гена СРТЯ у больных МВ из Краснодарского края составила 39,8%. По сравнению с жителями европейской части России, где частота мутации Р508с1е1 по данным нескольких независимых исследований составляет в среднем 50,0% [Н.В.Петрова, 1996; Т.Э.Иващенко, 2000], частота мутации Р508с1е1 в Краснодарском крае оказалась ниже. К диагностически значимым мутациям, приводящим к МВ в крае помимо Р508с1е1 можно отнести мутации СРТ11с1е1е2,3(21кЬ) - 5,1%, 3849+10кЬС-+Т - 4,5%, 2183АА^О -3,4%, 2184тБА - 1,7%, МЗОЗК - 1,7%, 2143с1е1Т - 1,1%, ЫЗвшэ - 1,1%, W1282X - 1,1%. Мутации Я117Н, Ш17С, Е92К, С542Х, С85Е, Я347Р, 4006-19с1е13 являются редкими, так как их частота не превышает 1,0%. В результате секвенирования экзонов гена С/^ТТ? удалось идентифицировать 6 мутаций, которые ранее не встречались в Российских популяциях: 085Е (3 экзон), Я117Н, Ш17С и Е92К (4 экзон), 2183АА-Ю (13 экзон) и 4006-19с1е13 (20 интрон).

В целом в результате анализа спектра мутационных повреждений гена СРТЯ у больных МВ из Краснодарского края было выявлено 16 различных мутаций, что позволило идентифицировать 63,7% всех МВ аллелей. Мутация Р508с1е1 обнаружена на 70 хромосомах, причём у 19 больных (на 38 хромосомах) - 54,3% в гомозиготном состоянии, у 15 больных (на 15 хромосомах) (21,4%) — в компаунде с другой мутацией, а у 17 больных (24,3%) - на вторых хромосомах мутации не идентифицированы. На 42 хромосомах выявлены мутации отличные от Р508с1е1, что составило 23,9% от всех исследованных хромосом. Доля других мутаций, идентифицированных в нашем исследовании оказалась в 1,5-2 раза выше, чем при аналогичных исследованиях в других регионах России [Н.В.Петрова, 1996; Т.Э.Иващенко, 2000]. Вместе с тем, 36,3% мутаций гена СРТЯ нам не удалось идентифицировать. Возможно, что эти мутации являются либо протяжёнными делециями, которые невозможно выявить использованными методами, либо они сосредоточены в других участках гена СРТЯ.

В связи с этим нами исследованы внегенные и внутригенные полиморфные маркерные системы. Установлены различия в характере распределения полиморфных аллелей внутригенных маркеров гена СРТЯ: одного микросателлитного - 1У86аОАТТ и 3-х диаллельных - М470У, ТЦВ18, ТЦВ20 и 4-х диаллельных внегенных систем: ХУ.2С, КМ.19,13.11,

МеШ! в выборках нормальных и мутантных хромосомах с мутацией Р508с1е1 и другими мутациями. Это позволило определить ассоциации мутации Р508с1е1 с различными полиморфными системами.

При анализе встречаемостей аллелей локуса 1У86аОАТТ гена СЕТЯ обнаружено абсолютное сцепление аллеля 6 (100,0%) с мутацией Р508с1е1(+) (Д81=-0,8), что согласуется с данными авторов, изучавших особенности распределения аллелей локуса ¡УБбаОАТТ у больных МВ и здоровых индивидов в популяциях РФ [Н.В.Петрова, 1996, 2006; Т.Э.Иващенко, 2000]. При анализе распределения частот генотипов маркера ГУБбаОАТТ у больных МВ и здоровых индивидов обнаружено достоверно больше гомозигот 6/6 среди больных МВ (29,3%) и гомозигот 7/7 среди здоровых индивидов - 59,5% (% =22,625, р<0,001).

Определяя частоту аллелей полиморфизма М470У гена СЕТЯ обнаружено абсолютное сцепление аллеля 1 (100,0%) с мутацией Р508с1е1(+) (Д81=-0,593). При анализе распределения частот генотипов маркера М470У установлено статистически достоверное (х =17,257, р<0,001) преобладание генотипа 1/1 в группе больных МВ (56,0%) по сравнению с контролем (22,0%).

Анализ частоты аллелей маркера ТЦВ18 установил, что аллель 1 является самым частым как на мутантных (85,0%), так и на нормальных хромосомах (76,0%), но на мутантных хромосомах с мутацией Р508с1е1(+) обнаружено выраженное неравновесие по сцеплению (А81=-0,327). Частота аллеля 1 (98,0%) достоверно выше (х =9,681, р=0,002) на хромосомах с мутацией Р508ёе1(+), нежели на хромосомах без Р508с1е1(-) - 81,0%) (%~=0,719, р=0,396). Статистически достоверных различий частот генотипов 1/1, 1/2 и 2/2 в сравниваемых выборках хромосом не л установлено (х =3,981, р=0,137).

При анализе встречаемости частот аллелей маркера ТЦВ20 установлено, что аллель 2 является самым частым как на мутантных (83,0%), так и на нормальных хромосомах (75,0%о), но на мутантных хромосомах с мутацией Р508с1е1(+) обнаружено выраженное неравновесие по сцеплению (А81=-0,298). Распределение частот генотипов 1/1, 1/2 и 2/2 маркера ТЦВ20 в сравниваемых выборках нормальных и мутантных хромосом статистически значимых различий не выявило (%2=4,312, р=0,116).

Распределение частот аллелей внегенных маркеров показало, что обнаружено выраженное достоверное (^=27,053, р<0,001) неравновесное сцепление аллеля 1 локуса ХУ.2С (95,0%о) с мутацией Р508с1е1(+) (ДБ!— 0,520). Статистически достоверное преобладание генотипа 1/1 наблюдалось в группе больных МВ (41,0%) по сравнению с контролем (22,0%>), а генотип 2/2 достоверно чаще определён в контрольной группе -25,0% по сравнению с группой больных МВ - 10,0% (х2=9,322, р<0,01).

Анализ распределения частот аллелей локуса КМ. 19 показал выраженное достоверное (^=51,769, р<0,001) неравновесное сцепление аллеля 2 (91,0%) с мутацией Р508с1е1(+) (А81=-0,696), что отмечено и в других популяциях РФ [Н.В.Петрова, 1996]. Отмечается преобладание частоты генотипа 2/2 (24,0%) в группе больных МВ по сравнению с контролем (3,0%), а частота генотипа 1/1 достоверно выше в контрольной группе - 59,0% по сравнению с группой больных МВ - 19,0% (%"=27,727, р<0,001).

При оценке распределения частот аллелей локуса 13.11 не выявлено существенных различий на мутантных и нормальных хромосомах. Вместе с тем, отмечено статистически достоверное преобладание частоты генотипа 1/1 (21,0%) в группе больных МВ по сравнению с контролем (4,0%) (х2= 12,281, р=0,002).

Анализ встречаемости аллелей локуса МеШ показал выраженное достоверное (^=9,428, р=0,002) неравновесное сцепление аллеля 1 (81,0%) с мутацией Р508с1е1(+) (Д81=-0,288), а аллель 2 достоверно чаще (46,0%) встречается в контрольной группе. При анализе частоты генотипов маркера МеШ отмечено статистически достоверное преобладание частоты генотипов 2/2 (25,0%) в группе контроля по сравнению с больными МВ (12,0%).

Анализ информативности внутригенных маркеров для 17 полных семей показал, что полностью информативными были только 5,9% семей по системе М470У. 50%-ая (частичная) информативность наблюдалась в 70,6% семей по системе М470У, в 64,7% - по ГУБбаСАТТ и по 47,1% для систем ТЦВ18 и ТЦВ20, соответственно для каждой. При использовании каждой маркерной системы отдельно неинформативными остаются 35,3% семей по системе 1У86аОАТТ, 23,5% - по М470У и по 52,9% для систем ТЦВ18 и ТЦВ20.

При оценке информативности внегенных маркерных локусов в 17 полных семьях установлено, что полностью информативными семьями по системе 13.11 было 35,3%, по системам КМ. 19 и МеШ - 17,6%, соответственно, для каждой, и 11,8% для системы ХУ.2С. 50,0%-ая (частичная) информативность наблюдалась в 88,2% по системе ХУ.2С, в 64,8% - по КМ. 19, 58,8% - по 13.11 и 52,9% - по МеШ. При использовании каждой маркерной системы отдельно неинформативными остаются 29,5% семей по системе МеШ, 17,6% - по КМ. 19 и 5,9% - по 13.11

Итак, для повышения эффективности ДНК-диагностики в семьях с МВ необходимо использовать как прямые, так и косвенные методы выявления мутантных хромосом, т.е. одновременно с анализом мутаций в гене СПЯ проводить молекулярно-генетический анализ маркерных систем. При сочетании данных по всем изученным системам и мутациям гена СПЯ доля полностью информативных семей в краснодарской популяции возрастает с 47,0% до 55,0%, частично информативных сокращается с 29,0% до 27,0% и неинформативных уменьшается с 24,0% до 18,0%.

При изучении клинических форм заболевания нами установлено, что 65,0% больных МВ имели смешанную форму различной степени тяжести, легочная форма составила 18,8%, а кишечная - 16,2%. По тяжести течения 53,8% больных составляла группа со средней степенью тяжести течения, 31,2% - с тяжёлым течением и 15,0% с лёгким течением.

Установлено, что в группе с «тяжёлыми» генотипами преобладают больные со смешанной формой заболевания (78,0%), тогда как в группе с «мягкими» генотипами лёгочная форма встречается у значительной доли пациентов (44,0%) (%"=3,83; р=0,0503; &£=1). Кишечный синдром преобладает в большей мере у пациентов в группе с «тяжёлыми» генотипами (93,0%) по сравнению с группой больных с «мягкими» генотипами (56,0%), различия значимы (х =6,29; р=0,0122; &£=1). В группе больных с «тяжёлыми» генотипами чаще отмечают тяжёлое течение заболевания (59,0%), а лёгкое течение - только у больных из группы с «мягкими» генотипами; но различия не достоверны (%2=1,37; р=0,24; с!.£=1).

Установлено, что частота мутации Р508ёе1 в группе больных со смешанной и лёгочной формами МВ составила практически поровну -59,6%, и 60,0%, соответственно. При изучении корреляции мутаций гена СРТЯ с тяжестью течения заболевания обнаружено, что мутация Р508с1е1 встречается при всех клинических формах МВ: с тяжёлым течением в 76,0%) случаев, со средней степенью тяжести - 51,2%, а с лёгким течением в 16,7%). Больные с неидентифицированными мутациями преобладают при лёгкой тяжести течения заболевания (66,6%) и совсем отсутствует при тяжёлом течении.

При анализе показателей хлоридов в поте больных установлено, что средние и высокие величины показателей имеют по 44,4% пациентов, а минимальные показатели - 11,2% больных. При этом смешанная форма

МВ преимущественно диагностирована при концентрациях хлоридов от 61 и выше ммоль/л, а легочная и кишечная формы при минимальных концентрациях хлоридов (40-60 ммоль/л).

При сопоставлении показателей хлоридов в поте с вариантом мутации установлено, что при значениях хлоридов 61-100 ммоль/л мутация Р508с1е1 встретилась в 57,7% случаев, а при значениях хлоридов от 101 ммоль/л и выше - в 65,4%. Доля больных с двумя идентифицированными мутациями, у которых хлориды составляли 61-100 ммоль/л, составила 42,3%, а при хлоридах более 101 ммоль/л - 51,1%. При показателях хлоридов в диапазоне 40-60 ммоль/л гомозиготных и компаундных состояний не диагностировано.

С целью оценки этнической специфичности в распределении мутаций гена СПЯ, был проведён анализ типов брака родителей пробандов с МВ в зависимости от их национальной принадлежности и мест рождения. Большинство больных МВ являлись потомками родителей из однонациональных браков (79,3%), среди которых преобладали браки между русскими (72,0%). Межнациональные браки составили 20,1%.

Среди больных МВ 21,9% составила доля хромосом с мутацией Р508с1е1, унаследованных в однонациональных браках от русских родителей, от общего числа проанализированных МВ хромосом (176 хромосом), и 10,2% - это доля хромосом с мутацией Р508с1е1, унаследованных в межнациональных браках (русские, украинцы, белорусы). При определении относительной доли мутации Р508с1е1 среди всех хромосом "славянского" происхождения (160 хромосом) - частота её составила 43,1%. Значение частоты меньше, чем в центрально- и североевропейских регионах России [Н.В.Петрова, 2006].

Установлено, что максимальное число больных МВ (78,4%) происходит от родителей одной национальности, из которых большинство русские - 89,9%. При изучении мест рождения родителей, имеющих детей с МВ, установлено, что 47,7%) браков заключены между родившимися в

Краснодарском крае (эндогамные браки), а 52,3% - экзогамные. Среди эндогамных браков более трети (35,5%) составляют русские семьи, где оба родителя происходят из одного района края, что, по-видимому, определяет величину генетического груза по МВ в исследуемой популяции.

Анализ распределения больных МВ по регионам края показал, что в большей степени мутантные гены сосредоточены в Центральном регионе

- 35 случаев (39,7%) (при этом 22 в г.Краснодаре). В Южном-Предгорном и Восточном регионах - 16 (18,2%) и 13 (14,8%), соответственно. И в меньшей степени доля МВ хромосом диагностирована в Причерноморском

- 10 (11,4%), Северном - 8 (9,1%) и Приазовском регионах - 6 (6,8%).

Достоверных различий по распространённости заболевания ' в исследуемых регионах края не выявлено. Существующие отличия в распространённости МВ на территории Краснодарского края, которые наблюдаются между г.Краснодаром и Причерноморским, Восточным и Приазовским регионами - 2,13; 3,894 и 2,08, соответственно, и между Центральным (без г.Краснодара) и Восточным регионами - 1,96, что вероятно является следствием более лучшей организацией диагностики и правильностью постановки клинического диагноза данной патологии у больных Центрального региона, включающий и г.Краснодар, в связи с лучшей организацией работы ЛПУ ближе к краевому центру Кубани.

Установлено, что из 60,2% МВ-хромосом, обладателями которых являются коренные жители края, доля мутации Р508с1е1 составляет 37,7%, редких аллелей — 21,07% и хромосом с не идентифицированными мутациями - 40,6%. Остальные 39,8% МВ-хромосом были привнесены в краснодарскую популяцию в результате иммиграции родителей из-за пределов края. В этой группе частота мутации Р508с1е1 составила 42,8%, редких аллелей - 27,2% и не идентифицированных - 30,0%. Мутации С85Е, Ю17Н, Ш17С, Е92К и 4006-Ше13 ранее не встречались на территории РФ - и возможно являются мутациями, привнесенными в исследуемую популяцию на каком-то этапе её формирования.

Важным практическим итогом работы является диагностическая значимость исследованных мутаций гена СЕТЯ для семейного анализа и пренатальной диагностики. Молекулярный скрининг близких родственников пробандов, с идентифицированными мутациями гена СПЯ, повысит эффективность активного выявления гетерозиготных носителей с последующим их медико-генетическим консультированием, что является эффективным способом профилактики МВ. На основании данных, полученных в ходе исследования спектра и частоты мутаций гена СПЯ у больных МВ в Краснодарском крае, нами оптимизирован алгоритм молекулярно-генетической диагностики гена СРТЯ в крае (табл. 36), что приобретает особую значимость в связи с началом массового скрининга новорождённых детей на муковисцидоз во всех регионах РФ.

АЛГОРИТМ

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ

МУКОВИСЦИДОЗА

I. ДЕТЕКЦИЯ МУТАЦИИ F508del

100% ИНФОРМАТИВНОСТЬ4*

Heteroduplex Analysis

3t)% ИНФОРМАТИВНОСТЬ 0% ИНФОРМАТИВНОСТЬ

II. ДЕТЕКЦИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИ-ЗНАЧИМЫХ МУТАЦИЙ

Ш. ДЕТЕКЦИЯ РЕДКИХ ДИАГНОСТИЧЕСКИ-ЗНАЧИМЫХ МУТАЦИИ

L138ins 2184insA 2143delT W1282X N1303K

0% ИНФОРМАТИВНОСТИ

IV. ДЕТЕКЦИЯ РЕДКИХ МУТАЦИЙ G85E R117H R117C Е92К

R347P

G542X 4006-19del3

50% ИНФОРМАТИВНОСТЬ

0% ИНФОРМАТИВНОСТЬ

V. ПОИСК ДРУГИХ РЕДКИХ МУТАЦИИ

1. SSCP 2.СИКВЕНС

VI. АНАЛИЗ ВНУТРИГЕННЫХ МАРКЕРНЫХ СИСТЕМ fIVS6aGATT, M47QV. TUB18. TUB20)

VI. АНАЛИЗ ВНЕГЕННЫХ МАРКЕРНЫХ СИСТЕМ (XV.2C. КМ.19, J3.ll, MetH)

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Рукавичкин, Дмитрий Васильевич, 2007 год

1. Авдеев С.Н., Самойленко В.А., Амелина E.JL, Чучалин А.Г. Интенсивная терапия при муковисцидозе взрослых. // Пульмонология.-2001.- Т.11, №3.- С. 87-99.

2. Амелина E.JI., Черняк A.B., Черняев A.JI. Муковисцидоз: определение продолжительности жизни. // Пульмонология.- 2001.- Т. 11, №3.- С. 6164.

3. Амелина E.JL, Черняк A.B., Черняев A.JL, Чучалин А.Г. Ретроспективный анализ клинического статуса и легочной функции взрослых больных муковисцидозом за 1993-1997г.г. // Пульмонология.-1998.- Т.8, №2.- С. 42-46.

4. Амелина E.JL, Черняк A.B., Чучалин А.Г. Муковисцидоз взрослых: особенности ведения. // Пульмонология.- 2006.- Приложение.- С. 30-39.

5. Андреев В.В., Клокова H.A., Кулаева H.JL, Сердюкова М.А., Сотникова Т.Е. Итоги всероссийской переписи населения 2002 года по Краснодарскому краю. Численность и размещение населения: официальное издание.- Краснодар, 2004.- Т.1.- 172с.

6. Андреев В.В., Клокова H.A., Кулаева Н.Л., Сердюкова М.А., Сотникова Т.Е. Итоги всероссийской переписи населения 2002 года по

7. П.Баранов B.C., Иващенко Т.Э., Глазков П.Б. Проблемы и достижения генной терапии муковисцидоза. // Пульмонология.- 2001.- Т.11, №3.- С. 107-110.

8. Блистинова З.А., Прошин В.А., Капранов Н.И., Каширская Н.Ю. Медико-социальное обеспечение больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 2001.- Т.11, №3.- С. 20-24.

9. Вишнякова JI.A., Сологуб Т.С., Желенина JI.A. Инфекционный воспалительный процесс при муковисцидозе у детей (этиология и некоторые вопросы патогенеза). // Пульмонология.- 1999.- Т.9, №1.- С. 59-62.

10. Волков И.К., Давыдова И.В., Куличихин В.Г., Симонова О.И., Шаталова A.M., Лукина О.Ф. Эффективность "Дорназы альфы"

11. Пульмозима) у детей с хроническими заболеваниями лёгких. // Пульмонология.- 2003.- Т.13, №3.- С. 79-82.

12. Воронкова А.Ю. Клиническая эффективность и безопасность дорназы альфа в лечении хронического бронхолёгочного процесса у детей, больных муковисцидозом: дис. . канд. мед. наук. (14.00.09).- Москва: Медико-генетический научный центр РАМН, 2004.- 154 с.

13. Воронкова А.Ю., Шмарина Г.В., Дубовик Л.Г., Каширская Н.Ю., Капранов Н.И. Дорназа альфа: клинические и лабораторные эффекты. // Пульмонология.- 2006.- Приложение.- С. 25-29.

14. Гембицкая Т.Е., Желенина Л.А., Ковалёва Л.Ф., Молодцова A.B. Особенности организации помощи и диспансерное наблюдение взрослых больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 2004.- Т. 14, №2.- С. 24-27.

15. Гембицкая Т.Е., Желенина Л.А., Фаустова М.Е., Сесь Т.П., Доценко Е.К., Орлов A.B. Эффективность терапии N-ацетилцистеином (Флуимуцил, "ZambonGroup") бронхообструктивного синдрома при муковисцидозе. // Пульмонология,- 2003.- Т.13, №1.- С. 80-83.

16. Гембицкая Т.Е., Петрова М.А., Куприна Е.А., Воронина О.В. Фенотипические и иммунологические особенности облигатных гетерозиготных носителей гена муковисцидоза. // Пульмонология.-2001.- Т.11, №3.- С. 65-68.

17. Глазков П.Б. Изучение некоторых особенностей экспрессии гена CFTR и разработка экспериментальных подходов к генотерапии муковисцидоза: дис. . канд. биол. наук. (03.00.15).- Санкт-Петербург: Санкт-Петербургский государственный университет, 2000.- 142 с.

18. Глазков П.Б., Иващенко Т.Э., Миткина E.H., Гембицкая Т.Е., Орлов

19. A.B., Черменский А.Г., Баранов B.C. Корреляция результатов иммуноцитохимических, электрофизиологических и молекулярных исследований у больных муковисцидозом. // Генетика.- 2000.- Т.36, №9.- С. 1274-1278.

20. Глазков П.Б., Миткина E.H., Гембицкая Т.Е., Иващенко Т.Э., Сабецкий

21. B.А., Орлов A.B., Баранов B.C. Взаимоотношения генотип-фенотип у больных муковисцидозом и разработка экспериментальных основ генотерапии этого заболевания. // Пульмонология,- 2002.- Т. 10, №1.- С. 6-10.

22. Гланц С. Медико-биологическая статистика.- М.: Практика, 1999.-459с.

23. Горбунова В.Н., Баранов B.C. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний: учебное пособие для студентов медицинских вузов.- СПб.: Специальная литература, 1997.-287с.

24. Горник С.М., Лукоянова Г.М., Цирдава Г.Ю., Успенская И.Д., Егорова

25. C.В., Абрамов С.А., Саралов С.Н., Лобанова Е.В. Возможности хирургической коррекции портальной гипертензии у больного муковисцидозом. // Пульмонология.- 2006.- Приложение.- С. 118-120.

26. Гуськова A.A., Скоблов М.Ю., Баранова A.B. Жизнь и смерть белка CFTR. // Медицинская генетика.- 2007.- Т.6, №2 (56).- С. 3-9.

27. Ефимова Н.С., Желенина JI.A., Орлов A.B., Гембицкая Т.Е., Зайцева М.А. Гиперреактивность бронхов у детей больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 2004.- Т.14, №2.- С. 27-31.

28. Желенина JI.A. Муковисцидоз у детей (клинико-генетические особенности, инфекционный процесс в лёгких, лечение): автореф. дис.д-ра мед. наук. (14.00.43; 14.00.09).- Санкт-Петербург: Государственный научный центр пульмонологии МЗ РФ, 1998.- 43 с.

29. Желенина JI.A., Фаустова М.Е., Доценко Е.К., Булгакова Т.В., Орлов A.B., Гончарова В.А., Вишнякова JI.A., Гембицкая Т.Е. Механизмы бронхиальной обструкции у больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 1998.- Т.8, №4.- С. 27-30.

30. Зорина Е.А., Каширская Н.Ю., Капранов Н.И., Осипова И.А. Современные методы диагностики и диагностические критерии муковисцидоза. // Пульмонология.- 2001.- T.l 1, №3.- С. 124-127.

31. Иващенко Т.Э. Муковисцидоз: молекулярный анализ гена, разработка новых подходов диагностики и генотерпаии: дис. . д-ра. биол. наук. (03.00.15).- Москва: Медико-генетический научный центр РАМН, 2000.- 283 с.

32. Капранов Н.И. Муковисцидоз современное состояние проблемы. // Пульмонология.- 2006.- Приложение.- С. 5-11.

33. Капранов Н.И. Современные проблемы и достижения в области изучения муковисцидоза в России. // Пульмонология.- 1994.- Т.4, №3.-С. 6-16.

34. Капранов Н.И. Успехи и проблемы в диагностике и лечении муковисцидоза в России. // Пульмонология,- 2001.- Т.11, №3.- С. 9-16.

35. Капранов Н.И., Каширская Н.Ю. Актуальные проблемы муковисцидоза на современном этапе в России. // Пульмонология.- 1997.- Т.7, №4.- С. 7-16.

36. Капранов Н.И., Каширская Н.Ю., Петрова Н.В. Муковисцидоз. Достижения и проблемы на современном этапе. // VII национальный конгресс по муковисцидозу: сб. стат. и тез.- Москва, 2005.- С. 3-19.

37. Капранов Н.И., Каширская Н.Ю., Петрова Н.В. Муковисцидоз: достижения и проблемы на современном этапе. // Медицинская генетика.- 2004.- Т.З, №9.- С. 398-412.

38. Капустина Т.Ю., Каширская Н.Ю., Капранов Н.И. Состояние гепатобилиарной системы у детей, больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 2006.- Приложение.- С. 22-24.

39. Капустина Т.Ю., Каширская Н.Ю., Капранов Н.И., Чесноков C.B., Воронкова А.Ю. Российский регистр больных муковисцидозом. // VII национальный конгресс по муковисцидозу: сб. стат. и тез.- Москва, 2005,- С. 48-50.

40. Капустина Т.Ю., Чеснокова C.B., Каширская Н.Ю., Капранов Н.И., Воронкова А.Ю. Российский регистр больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 2006,- Приложение.- С. 78-80.

41. Каширская Н.Ю., Васильева Ю.И., Капранов Н.И. Клиническое значение нутритивного статуса в течении муковисцидоза. // Медицинская генетика.- 2005.- Т.4, №1.- С. 43-47.

42. Каширская Н.Ю., Капранов Н.И. Коррекция экзокринной недостаточности поджелудочной железы микрогранулированными панкреатическими ферментными препаратами у больных муковисцидозом детей. // Вопросы современной педиатрии.- 2002.- Т.1, №5.- С. 74-78.

43. Каширская Н.Ю., Капранов Н.И. Современные подходы к диагностике и лечению муковисцидоза. // Краевая научно практическая конференция "Муковисцидоз у детей": доклад.- Краснодар, 2006.

44. Каширская Н.Ю., Капранов Н.И., Кабанова Н.Ф., Калашникова Е.А. Диагностическое значение непрямого метода определения панкреатической недостаточности эластазы-1 в стуле у больных муковисцидозом. //Пульмонология.- 2001.- Т.11, №3.- С. 57-60.

45. Каширская Н.Ю., Капранов Н.И., Рославцева Е.А., Боровик Т.Э. Вопросы нутрициологии при муковисцидозе. // Пульмонология.- 2006,-Приложение.-С. 17-21.

46. Кащеева Т.К. Некоторые белки амниотической жидкости в пренатальной диагностике врождённых пороков и муковисцидоза плода: автореф. дис. . канд. биол. наук. (03.00.04).- Санкт-Петербург: Институт экспериментальной медицины РАМН, 1995.- 19 с.

47. Келембет H.A., Гембицкая Т.Е., Желенина Л.А., Орлов A.B., Сологуб Т.С. Пятилетняя динамика медианы выживаемости больных муковисцидозом в Санкт-Петербурге. // Пульмонология.- 2006.-Приложение.- С. 61-63.

48. Ковалёва Л.Ф., Гембицкая Т.Е. Пульмозим эффективный препарат для предупреждения лёгочных осложнений послеоперационного периода у больной муковисцидозом. // Пульмонология.- 1999.- Т.9, №3.- С. 88-90.

49. Ковалевская Т.С., Курникова М.А., Черных В.Б., Курило Л.Ф., Тверская С.М., Поляков А.В. Молекулярный анализ гена СГТЯ у мужчин с бесплодием. // 6-ой национальный конгресс по муковисцидозу: тез. докл.- Санкт-Петербург, 2003.- С. 45-47.

50. Корытина Г.Ф., Викторова Т.В., Иващенко Т.Э., Баранов В.С., Хуснутдинова Э.К. Анализ внутригенных полиморфных маркеров гена СЕТЯ у больных муковисцидозом и здоровых доноров из Башкортостана. // Генетика.- 2003.- Т.39, №11.- С. 1542-1549.

51. Корытина Г.Ф., Янбаева Д.Г., Бабенкова Л.И., Викторова Т.В. Ассоциация полиморфных вариантов в генах биотрансформации ксенобиотиков с тяжестью легочной патологии у больных муковисцидозом. // Медицинская генетика.- 2003.- Т.2, №5.- С. 227-232.

52. Корытина Г.Ф., Янбаева Д.Г., Викторова Т.В. Полиморфизм генов глутатион-8-трансфераз М1 и Р1 у больных с муковисцидозом и хроническими заболеваниями дыхательной системы. // Генетика.- 2004.-Т.40, №3.- С. 401-408.

53. Кронина JI.A. Клинико-лабораторная характеристика патологии лёгких и программ лечения у взрослых больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 1996.- Т.6, №3.- С. 30-34.

54. Кронина Л.А., Самойленко В.А. Оптимальная тактика ведения и принципы лечения взрослых больных муковисцидозом в стационарных условиях. //Пульмонология.- 2001.- Т.11, №3.- С. 83-86.

55. Миткина E.H., Гембицкая Т.Е., Желенина Л.А., Черменский А.Г., Орлов A.B., Доценко Е.К. Биоэлектрические свойства эпителия дыхательных путей у больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 2001.- Т.11, №3.-С. 24-26.

56. Миткина E.H., Гембицкая Т.Е., Фокина A.A., Куприна Е.А., Орлов A.B., Глазков П.Б. Измерение разности назальных потенциалов новый информативный тест для диагностики муковисцидоза. // Пульмонология.- 1999.- Т.9, №3,- С. 48-51.

57. Петеркова В.А., Шарова A.A., Капранов Н.И., Каширская Н.Ю. Нарушение роста при муковисцидозе. // Пульмонология.- 2006.-Приложение.- С. 99-105.

58. Петрова Н.В. Анализ четырёх полиморфизмов в гене CFTR в семьях больных муковисцидозом. // Медицинская генетика,- 2006.- Т.5, №12 (54).- С. 27-32.

59. Петрова Н.В. Молекулярно-генетические особенности муковисцидоза в российских популяциях. // Медицинская генетика.- 2006.- Т.5, Приложение 1.- С. 19-24.

60. Петрова Н.В. Определение относительных частот некоторых мутаций гена CFTR и анализ гаплотипов сцепленных с ним ДНК-маркерных локусов в популяциях России: дис. . канд. биол. наук. (03.00.15).-Москва: Медико-генетический научный центр РАМН, 1996.- 139 с.

61. Петрова Н.В., Гинтер E.K. Десятилетний опыт молекулярно-генетической диагностики муковисцидоза в МГНЦ РАМН. // Пульмонология.- 2001.- Т.11, №3.- С. 17-20.

62. Петрова Н.В., Гинтер Е.К. Определение частоты мутации F508del среди новорождённых города Москвы и оценка частоты муковисцидоза в Европейской части России. // Генетика.- 1997,- Т.ЗЗ, №9.- С. 1326-1328.

63. Петрова Н.В., Гинтер Е.К., Капранов Н.И., Ельчинова Г.И. Доля некоторых мутаций гена муковисцидоза и неравновесие по сцеплению между локусом CFTR-гсна и двумя ДНК-маркерными локусами в популяциях России. // Генетика.- 1994,- Т.ЗО, №7.- С. 974-977.

64. Петрова Н.В., Тимковская Е.Е. Анализ частых мутаций и гаплотипов внутригенных маркеров у больных муковисцидозом и в норме. // 6-ой национальный конгресс по муковисцидозу: тез. докл.- Санкт-Петербург, 2003.- С. 80-81.

65. Петрова Н.В., Тимковская Е.Е., Зинченко P.A., Гинтер Е.К. Анализ частоты некоторых мутаций в гене CFTR в разных популяциях России. // Медицинская генетика.- 2006.- №2 (44).- С. 28-31.

66. Придвижкина Т.С., Кондратов И.А., Орлов A.B. Компьютерная томография в оценке лёгочных проявлений муковисцидоза у детей. // Пульмонология.- 2004.- Т. 14, №2.- С. 13-17.

67. Пухальский A.JL, Шабалова JI.A., Шмарина Г.В., Капранов Н.И., Кокаровцева С.Н. Использование нимесулида в лечении больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 2001.- Т.11, №3.- С. 46-50.

68. Пухальский А.Л., Шмарина Г.В., Капранов Н.И. Маркеры воспаления у больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 2002.- Т.12, №5.- С. 3942.

69. Радионович A.M., Каширская Н.Ю., Капранов Н.И. Биофильм и его потенциальная роль в патогенезе хронического бронхолёгочного процесса у больных муковисцидозом, инфицированных Pseudomonas aeruginosa. II Пульмонология,- 2006.- Приложение.- С. 106-112.

70. Радионович A.M., Каширская Н.Ю., Капранов Н.И. Клиническое значение длительного применения субтерапевтических доз макролидов при хронической синегнойной инфекции у больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 2006.- Приложение.- С. 40-46.

71. Ракачёв В.Н., Ракачёва Я.В. Краснодарский край: этносоциальные и этнодемографические процессы (вторая половина 1980-х начало 2000-х гг.). // Краснодар.- КубГУ.- 2003.- С. 239.

72. Роллз К. Международное сотрудничество по проблеме муковисцидоза "Запад-Восток" в области лечения муковисцидоза альтернативная модель. // VII национальный конгресс по муковисцидозу: сб. стат. и тез.- Москва, 2005.- С. 20-22.

73. Сазонова М.А., Амосенко Ф.А., Капранов Н.И., Калинин В.Н. Молекулярно-генетический анализ внутригенных полиморфизмов TUB 18 и TUB20 и некоторых мутаций гена ТРЕМ в Московском регионе. //Генетика.- 1997.- Т.ЗЗ, №9.- С. 1303-1307.

74. Самсонова М.В., Черняев A.JL, Амелина E.JI. Патология лёгких при муковисцидозе. // Пульмонология.- 2006.- Приложение.- С. 113-117.

75. Сенкевич Н.Ю., Амелина E.JI. Качество жизни взрослых больных муковисцидозом: факты и гипотезы. // Пульмонология.- 1999.- Т.9, №3.-С. 51-57.

76. Толстова В.Д., Капранов Н.И., Каширская Н.Ю., Пастухова О.В. Диагностика муковисцидоза на современном этапе. // Пульмонология.-2006.- Приложение.- С. 12-16.

77. Херрингтон С., Макги Дж. Молекулярная клиническая диагностика. Методы.- М.: Мир, 1999.-558 с.

78. Черняев A.JI., Воронина JI.M. Клинико-морфологические особенности муковисцидоза взрослого. // Пульмонология.- 1994.- Т.4, №3.- С. 85-88.

79. Черняк A.B., Авдеев С.Н., Амелина E.JL, Айсанов З.Р. Ограничение воздушного потока при спокойном дыхании у взрослых больных муковисцидозом. //Пульмонология.- 2003.- Т.13, №2.- С. 100-108.

80. Черняк A.B., Амелина E.JL, Каширская Н.Ю., Капранов Н.И., Черняев A.JL, Чучалин А.Г. Оценка выживаемости взрослых больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 2000.- Т. 10, №3,- С. 62-66.

81. Чучалин А.Г., Воронина JI.M., Кронина JI.A., Самсонова М.В. Муковисцидоз у взрослых: этиология, патогенез, перспективы лечения. //Пульмонология.- 1994.- Т.4, №3.- С. 17-23.

82. Шабалова JI.A., Передерко JI.B., Каширская Н.Ю., Капранов Н.И. Аллергический бронхолёгочной аспергиллёз у детей с муковисцидозом. // Пульмонология.- 2006.- Приложение.- С. 52-56.

83. Al-Jader J.N., Meredith A.L., Ryley H.C. Severity of chest disease in cystic fibrosis patients in relation to their genotype. // Med. Genet.- 1992.-Vol.29, №12.- P. 883-887.

84. Anderson M.P., Gregory R.J., Thompson S. Demonstration that CFTR is a chloride channel by alteration of its anion selectivity. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1991.- Vol.88.- P. 6003-6007.

85. Bals R., Weiner D.J., Wilson J.M. The innate immune system in cystic fibrosis lung disease. // J. Clin. Invest.- 1999.- Vol.103.- P. 303-307.

86. Berger A.L., Ikuma M., Welsh M.J. Normal gating of CFTR requires ATP binding to both nucleotide-binding domains and hydrolysis at the second nucleotide-binding domain. // PNAS.- 2005.- Vol.102, №2.- P. 455-460.

87. Blaisdell C.J., Howard T.D., Sterm A., Bamford P., Bleecker E.R., Stern A. CLC-2 single nucleotide polymorphisms (SNPs) as potential modifiers of cystic fibrosis disease severity. // BMC medical genetics.- 2004.- Vol.5, №26.-P. 1710-1722.

88. Bobadilla J.L., Macek M.J., Fine J.P., Farrell P.M. Cystic fibrosis: a worldwide analysis of CFTR mutations correlation with incidence data and application to screening. // Fluman mutation.- 2002.- Vol.19.- P. 575-606.

89. Bombieri C., Benetazzo M., Saccomani A. Complete mutation screening of the CFTR gene in 120 patients with pulmonary disease. // Hum. Genet.-1998.- Yol.103.-P. 718-722.

90. Bombieri C., Giorgi S., Carles S. Anew approach. For identifying non-patogenic mutations. An analysis of the cystic fibrosis transmembrane regulator gene in normal individuals. // Hum. Genet.- 2000.- Vol.106.- P. 172-178.

91. Boyne J., Evans S., Pollitt R.J., Taylor C.J., Dalton A. Many F508del heterozygote neonates with transient hypertrypsinaemia have a second, mild CFTR mutation. //J.Med.Genet.- 2000.- Vol.37.- P. 543-547.

92. Brown C.R., Hong-Brown L.Q., Biwersi J., Verkman A.S., Welch W.J. Chemical chaperones correct the mutant phenotype of the F508del cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein. // Cell stress & chaperones.- 1996.-Vol.1, №2.-P. 117-125.

93. Carbans H.J.B., Gosden C., Brock D.J.H. Microvillar peptidase activity in amniotic fluid: possible use in the prenatal diagnosis of cystic fibrosis. // Lancet.- 1983.- Vol.3.-P. 329-331.

94. Chanson M., Scerri I., Suter S. Defective regulation of gap junctional couping in cystic fibrosis pancreatic duct cells. // The journal of clinical investigation.- 1999.-Vol.103, №12.-P. 1667-1684.

95. Chappe V., Irvine T., Liao J., Evagelidis A., Hanrahan J.W. Phosphotylation of CFTR by PKA promotes binding of the regulatory domain. // The EMBO journal.- 2005.- Vol.24, №15.- P. 2730-2740.

96. Chevalier-Post, Bonardont A., Chazalette J. 40 kilobasedeletion (CF44dele4-10) removes exons 4-10 of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene. // Hum. Mutat.- 1998,- Vol.1.- P. 291-294.

97. Chiba-Falek O., Nissim-Rafinia M., Argaman Z. Screening of CFTR mutations in an isolated population: identification of carriers and patients. // Eur. J. Hum. Genet.- 1998.- Vol.6.- P. 181-184.

98. Chikhi L., Destro-Bisol G., Bertorelle G. Clines of nuclear DNA markers suggest a largery neolitic ancestry of the European gene pool. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1998.- Vol.95.- P. 9053-9058.

99. Cohn J.A., Friedman K.J., Noone P.G., Knowles M.R., Silverman L.M., Jowel P.S. Relation between mutations of the cystic fibrosis gene and idiopathic pancreatitis. // The new England journal of medicine.- 1998.-Vol.339, №10.- P. 653-657.

100. Collins A., Morton N.E. Mapping a disease locus by allelic association. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA.- 1998.- Vol.95, №2.- P. 1741-1745.

101. Cotton C.U., Stutts M.J., Knowles M.R., Gatzy J.T., Boucher R.C. Abnormal apical cell membrane in cystic fibrosis respiratory epithelium. An in vitro electrophysiological analysis. // J. Clin. Invest.- 1987.- Vol.79.- P. 80-85.

102. Dahl M., Tybjaerg-Hansen A., Lange P., Nordestgaard B.G. Asthma and COPD in cystic fibrosis intron-8 5T carriers. A population-based study. // Respiratory research.- 2005.- Vol.113, №60.- P. 1155-1163.

103. Davies J., Alton E., Griesenbach U. Cystic fibrosis modifier genes. // Journal of the royal society of medicine.- 2005.- Vol.98, №45.- P. 47-54.

104. Davies J.C., Geddes D.M., Alton E. Prospects for gene therapy for cystic fibrosis. // Molecular medicine today.- 1998.- №7.- P. 292-299.

105. Dean M., Morag P., Le Beau M. The human onkogen is related to the tyrosine kinase oncogenes. //Nature.- 1998.- Vol.318.- P. 385-388.

106. Delaney S.J., Alton E.W., Smith S.N. Cystic fibrosis mice carrying the missense mutation G551D replicate human genotype-phenotype correlations. //EMBO J.- 1996.-Vol.15.-P. 955-963.

107. Dequeker E., Cuppens H., Dodge J. Recommendations for quality improvement in genetic testing for cystic fibrosis European concerted action on cystic fibrosis. // Europ. J. Hum. Genet.- 2000.- Vol.8.- P. 2-24.

108. Dohle G.R., Halley D.J.J., Hemel J.O.V., Ouweland A.M.W., Pieters M.H.E.C., Weber R.F.A., Govaerts L.C.P. Genetic risk factors in infertile men with severe oligozoospermia and azoospermia. // Human reproduction.-2002.-Vol.17, №1.-P. 13-16.

109. Dork T., Mecus B., Macek J. Characterization of a novel 21-kb deletion, CFTRdele2,3(21kb), in the CFTR gene: a cystic fibrosis mutation of Slavic origin common in Central and East Europe. // Hum. Genet.- 2000.- Vol. 106.-P. 259-268.

110. Eiberg H., Morh J., Schmiegelow K., Nielsen L.S., Williamson R. Linkage relationship of paraoxonase (PON) with other markers: Indication of PON-cystic fibrosis syntheny. // Clin.Genet.- 1985.- Vol.28.- P. 265-271.

111. Estivill X., Bancells C., Ramos C. The biomed CF mutation analysis consortium geographic distribution and regional origin of 272 cystic fibrosis mutations in European populations. // Hum. Mutat.- 1997.- Vol.10.- P. 135154.

112. Gan K.H., Heijerman H.G.M., Bakker W., Augarten A., Kerem B.-S., Kerem E., Gazit E., Yahav .Y, Hamosh A., Corey M. Correlation between genotype and phenotype in patients with cystic fibrosis. // N.Engl J.Med.-1994.- Vol.330.-P. 865-867.

113. Girodon E., Cazeneuve C., Lebargy F. CFTR gene mutations in adults with disseminated bronchiectasis. // Eur.J.Hum.Genet.- 1997.- Vol.5.- P. 149-155.

114. Goodman B.E., Percy W.H. CFTR in cystic fibrosis and cholera: from membrane transport to clinical practice. // Advances in physiology education.- 2005.- Vol.29, №6.- P. 75-82.

115. Green E.D., Olson M.V. Chromosomal region of the cystic fibrosis gene in yeast artificial chromosomes: a model for human genom mapping. // Science.- 1990.- Vol.250.- P. 94-98.

116. Gregory R.J., Cheng S.H., Rich D.R. Expression and characterization of the cystic fibrosis transmembrane regular. // Nature.- 1990.- Vol.347.- P. 382-386.

117. Grygorczyk R., Hanrahan J. Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator and adenosine triphosphate. // Science.- 1997.- Vol.275.- P. 13241326.

118. Harris A., Chalkley G., Goodman S., Coleman L. Ezpression of the cystic fibrosis gene in human development. // Development.- 1991.- Vol.113.- P. 305-310.

119. Hasty P., O'Neal W.K., Liu K.Q. Severe phenotype in mice with termination mutation in exon 2 of cystic fibrosis gene. // Somat.Cell.Mol.Genet.- 1995.-Vol.21.- P. 177-187.

120. Hergersberg M., Balakrishman J., Bettecken T. Anew mutation, 3905insT, accounts for 4.8% of 1173CF chromosomes in Switzerland and causes a severe phenotype. // Hum.Genet.- 1997.- Vol.100.- P. 220-223.

121. Highsmith W.E., Burch L.H., Zhou Z. Identification of a splice site mutation (2789+5G—>A) associated with small amounts of normal CFTR mRNA and mild cystic fibrosis. // Hum. Mut.- 1997.- Vol.9.- P. 332-338.

122. Howell L.D., Borchart R., Kole J., Kaz A.M., Randak C., Cohn J.A. Protein kinase A regulates ATP hydrolysis and dimerization by a CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) domain. // Biochem. J.-2004.-Vol.378.-P. 151-159.

123. Ikuma M., Welsh M.J. Regulation of CFTR CI channel gating by ATP binding and hydrolysis. // PNAS.- 2000.- Vol.97, №15.- P. 8675-8680.

124. Jackson M.S., Canessa C.M., Olsen J.C. CFTR as a cAMP dependent regulator of sodium channels. // Science.- 1995.- Vol.269.- P. 847-850.

125. Jiang C., Finkbeiner W.E., Widdicombe J.H., McCray P., Miller S.S. Altered fluid transport across airway epithelium in cystic fibrosis. // Science.-1993.- Vol.262.- P. 424-431.

126. Jiang Q., Engelhardt J.F. Cellula heterogeneity of CFTR expression and function in the lung: implication for gene therapy of cystic fibrosis. // Eur. J. Hum. Genet.- 1993.-Vol.262.- P. 12-31.

127. Jones A.M., Dodd M.E., Govan R.W., Barcus V., Doherty C.J., Morris J., Webb A.K. Burkholderia cenocepacia and Burkholderia multivorans: influence on survival in cystic fibrosis. // Thorax.- 2004.- Vol.59, №7.- P. 948-951.

128. Kartner N., Augustinsa O., Jensen T.J., Naismith A.L., Riordan J.R. Mislocalization of delta F508 CFTR in cystic fibrosis sweat gland. // Nature Genetics.- 1992.- Vol.1.- P. 321-328.

129. Kerem B., Rommens J.M., Buchanan J.A. Identification of the cystic fibrosis gene: genetic analysis. // Science.- 1989.- Vol.245.- P. 1073-1080.

130. Kerem E., Corey M., Kerem B.S., et al. The relation between genotype and phenotype in cystic fibrosis analysis of the most common mutation (delta F508). //N.Engl.J.Med.- 1990.- V.323.- P.1517-1522.

131. Kostuch M., Rudzki S., Semczuk A., Kulczycki L. CFTR gene mutations in patients suffering from acute pancreatitis. // Med.Sci.Monit.- 2002,- Vol.8, №9.- P. 369-372.

132. Lee T.W.R., Matthews D.A., Blair G.E. Novel molecular approaches to cystic fibrosis gene therapy. // Biochemical journal immediate publication.-2005.-Vol.1.-P. 50.

133. Lerer I., Laufer-Cahana A., Rivlin J. A large deletion mutation in the CFTR gene (3120+lkbdel8, 6kb): a founder mutation in the Palestinian Arabs. // Hum. Mut.- 1999.- Vol.13.- P. 337.

134. Luzardo G., Aznarez I., Crispino B., Mimbacas A., Martinez L., Poggio R., Zielenski J., Tsui L.-C., Cardoso H. Cystic fibrosis in Uruguay. // Genetics and molecular research.- 2002.- Vol.11, №1.- P. 32-38.

135. Lyczak J.B. Commensal bacteria increase invasion of intestinal epithelium by Salmonella enterica serovar typhi. // Infection and immunity.-2003,- Vol.71, №11.- P. 6610-6614.

136. Lyczak J.B., Cannon C.L., Pier G.B. Lung infections associated with cystic fibrosis. // Clinical microbiology reviews.- 2002.- Vol.15, №2.- P. 194-222.

137. Mak V., Jarvi K.A., Zielenski J., Durie P., Tsui L.-C. Higher proportion of intact exon 9 CFTR mRNA in nasal epithelium compared with vas deferens. // Human molecular genetics.- 1997.- Vol.6, №12.- P. 2099-2107.

138. Marx J.L. The cystic fibrosis gene is found. // Science.- 1989.- Vol.245.-P. 19-21.

139. Mastell G., Rainisio M., Harms H.K., Hodson M.E., Koch C., Navarro J., Strandvik B., McKenzie S.G. Allergic bronchopulmonary aspergillosis in cystic fibrosis. A European epidemiological study. // Eur.Respir.J.- 2000.-Vol.16.- P. 464-471.

140. Mateu E., Calafell F., Ramons M.D., Casals T., Bertranpetit J. Can a place of origin of the main cystic fibrosis mutations be identified? // Am.J.Hum.Genet.- 2002.- Vol.70.- P. 257-264.

141. Miller P., Hamosh A., Malec M. Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator {CFTR) gene mutation in allergic bronchopulmonary aspergillosis. // Am. J. Hum. Genet.- 1996.- Vol.59.- P. 45-51.

142. Mishra A., Greaves R., Massie J. The relevance of sweat testing for the diagnosis of cystic fibrosis in the genomic era. // Clin.Biochem.Rev.- 2005.-Vol.26, №11.- P. 135-153.

143. Nicolic A., Divac A., Stancovic M., Dinic J., Tomic В., Ljujic M. Analysis of common CFTR polymorphisms 5T, M470V and R75Q in healthy Serbian population. // Генетика.- 2006.- T.42, №7.- С. 996-998.

144. Noone P., Zhou Z., Silverman L. Cystic fibrosis gene mutations and pancreatitis risk: relation to epithelial ion transport and trypsin inhibitor gene mutations. // Gastroenterology.- 2001.- Vol.6.- P. 1310-1319.

145. Okay T.S., Oliveira W.P., Raiz-Junior R., Rodrigues J.C., Del-Negro G.M.B. Frequency of the F508del mutation in 108 cystic fibrosis patients in Sao Paulo comparison with reported Brazilian data. // Clinics.- 2005.-Vol.60, №2.- P. 131-134.

146. Onay Т., Topaloglu O., Zielenski J. Analysis of the CFTR gene in Turkish cystic fibrosis patients: identification of the three novel mutations (3172delAC, P1013L and M1028I). // Hum. Genet.- 1998.- Vol.102.- P. 224230.

147. Orozko L., Velazquez R., Zielenski J. Spectrum of CFTR mutations in Mexican cystic fibrosis patients: identification of five novel mutations (W1098C, 846delT, P750L, 4160insGGGG and 296-lG->A). // Hum. Genet.- 2000.- Vol.106.- P. 360-365.

148. Pier G., Grout M., Zaidi T. Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator is an epithelial cell receptor for clearance of Pseudomonas aeruginosa from the lung. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.- 1997.- Vol.94.- P. 12088-12093.

149. Pier G., Grout M., Zaidi T. Role of mutant CFTR in hipersusceptibility of cystic fibrosis patients to lung infections. // Science.- 1996.- Vol.271.- P. 6466.

150. Pignatti P., Bombieri C., Marigo C. Increased incidence of cystic fibrosis gene mutations an adults with disseminated bronchiectsis. // Hum. Mol. Genet.- 1995.- Vol.4.- P. 635-639.

151. Pradal U., Castellani C., Delmarco A., Mastella G. Nasal potential difference in congenital bilateral absence of the vas deferens. // Am. J. Respir. Crit. Care. Med.- 1998.- Vol.158.- P. 896-901.

152. Ramsey D.M., Wozniak D.J. Understanding the control of Pseudomonas aeruginosa alginate synthesis and the prospects for management of chronic infections in cystic fibrosis. // Molecular microbiology.- 2005.- Vol.56, №2.-P. 309-322.

153. Reddy M., Quinton P., Haws C. Failure of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator to conduct ATP. // Science.- 1996.-Vol.271.- P. 1876-1879.

154. Riordan J.M., Rommens J.M., Kerem B. Identification of the cystic fibrosis gene: Cloning and characterization of complementary DNA. // Science.- 1989.- Vol.245.- P. 1066-1073.

155. Rodman D.M., Zamudio S. The cystic fibrosis heterozygotes Advantage in surviving cholera? // Med.Hipotes.- 1991.- Vol.36.- P. 253-258.

156. Romano L., Gardella C., Galetta L.J.V. New therapies designed to overcome molecular mechanisms leading to CFTR deficiency in cystic fibrosis. // VII национальный конгресс по муковисцидозу: сб. стат. и тез.- Москва, 2005.- С. 23-26.

157. Romano L., Kapranov N., Kashirskaya N., Zegarra-Moran O., Galietta L.J.V. Корреляция генотипа с фенотипом у больных муковисцидозом. // Пульмонология.- 2001.- Т.11, №3.- С. 115-120.

158. Romeo G., Devoto M., Galietta L.J. Why is the cystic fibrosis gene so frequent? //Hum. Genet.- 1989.- Vol.84, №1.- P. 1-5.

159. Romey M., Tuffery S., Desgeorges M. Transcript analysis of CFTR frameshift mutation in lymphocytes using the reverse transcription-polymerase chain reaction technique and the protein truncation test. // Hum. Genet.- 1996.- Vol.98.- P. 328-332.

160. Rommens J.M., Iannuzzi M.C., Kerem B. Identification of cystic fibrosis gene: Chromosome walking & jumping. // Science.- 1989.- Vol.245.- P. 1059-1065.

161. Rowe S.M., Miller S., Sorscher E.J. Mechanisms of disease cystic fibrosis. // The new England journal of medicine.- 2005.- Vol.352, №10.- P. 1992-2001.

162. Rudmann M.A. 100 лет заместительной панкреатической терапии; история создания препарата PANKREON® (Панкреон®). // Пульмонология.- 2001.- Т.11, №3.- С. 120-124.

163. Schreiber R., Greger R., Nitschke. Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator activates water conductance in Xenopus oocyte. // Eur. J. Physiol.- 1997.- Vol.434.- P. 841-847.

164. Schwarz M., Anuret M., Claustres M., Eiken H.G., Eiklid K., Schaedel C., Stolpel L., Tranebjaerg L. 394delTT: a Nordic CF mutation. // Hum.Genet.-1994.-Vol.93.-P. 157-161.

165. Scoted V., De Braekeleer M., Audrezet M. Prevalence of CFTR mutation in hypertrypsinemia detected through neonatal screening for cystic fibrosis. // Clin. Genet.- 2001.- Vol.59.- P. 42-47.

166. Sharer N., Schwarz M., Malone G., Howarth A., Painter J., Super M., Braganza J. Mutations of the cystic fibrosis gene in patients with chronic pancreatitis. // The new England journal of medicine.- 1998,- Vol.339, №10.-P. 645-652.

167. Sheppard D., Rich D., Ostedgaard L. Mutation in CFTR associated with mild-disease from CI channels withaltered pore properties. // Nature.- 1993.-Vol.362.- P. 160-164.

168. Smith A.E., Cheng S.H., Marshall J. Processing of CFTR. // Pediatric pulmonology.- 1992.- Suppl.8.- P. 187-188.

169. Stern R.C. The diagnosis of cystic fibrosis. // The new England journal of medicine.- 2004.- Vol.336, №7.- P. 487-491.

170. Strandvik B., Bjorck E., Fallstrom M. Spectrum of mutations in the CFTR gene of patients with classical and atypical forms of cystic fibrosis from southwestern Sweden: identification of 12 novel mutations. // Genet.Test.-2001.- Vol.5.-P. 235-242.

171. Stutts J., Canessa C., Olsen J. CFTR as a camp-dependent regulator of sodium channels. // Science.- 1995.- Vol.269.- P. 847-849.

172. The CF mutation database 2007 http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr.

173. The GDB database http://www.gdb.org.

174. The OMIM database http://www.ncbi.nlm.nih.gov/omim.

175. Trezise A., Buchwald M. In vivo cell-specific expression of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator. // Nature.- 1991.- Vol.353.- P. 434-437.

176. Truninger K., Ammann R., Blum H. Genetic aspects of chronic pancreatitis: insights into aetiopathogenesis and clinical implications. // Swiss. Med. Wkly.- 2001.- Vol.131.- P. 565-574.

177. Tsui I.S.M., Yip C.M.C., Hackett J., Morris C. The type IVB pili of Salmonella enterica serovar typhi bind to the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator. // Infection and immunity.- 2003.- Vol.71, №10.- P. 6049-6050.

178. Tsui L.-C. Mutations and sequence variations detected in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene: A report from the cystic fibrosis analysis consortium. // Human mutation.- 1992.- Vol.1, №3.- P. 197203.

179. Tsui L.-C., Buchwald M. Biochemical and molecular genetics of cystic fibrosis. // In: Advances in human genetics 1991. Plenum press. New York & London.- 1991,-P. 153-240.

180. Wainwright B.J., Scambler P.J., Schmidtke J. Localization of cystic fibrosis locus to human chromosome 7-q22. // Nature.- 1985.- Vol.318.- P. 384-385.

181. Wallis C. Atypical cystic fibrosis diagnostic and management dilemmas. // Journal of the royal society of medicine.- 2003.- Vol.96, №43.- P. 2-10.

182. Weber W., Cuppens H., Cassiman J. Capacitance measurements reveal different pathways for the activation of CFTR. II Eur. J. Physiol.- 1999.-Vol.438.- P. 561-569.

183. White R., Woodward S., Leppert M. A closely linked genetic marker for cystic fibrosis. //Nature.- 1985.- Vol.318.- P. 382-384.

184. Wilson G.B., Burdash N.M., Arnaud P., Monsher M.T., Fudenberg H.H. Carcinoembryonic antigen and cystic fibrosis protein in blood from cystic fibrosis homozygotes and heterozygotes carriers. // Scand. J. Immunol.-1976.- Vol.8(6-7).- P. 829-836.

185. Wine J.J. The genesis of cystic fibrosis lung disease. // J. Clin. Invest.-1999.-Vol.103.-P. 309-312.

186. Zeitlin P.L. Novel pharmacologic therapies for cystic fibrosis. // The journal of clinical investigation.- 1999.- Vol.103, №4.- P. 447-452.

187. Zielenski J., Rosmahel R., Bozon D. Genomic DNA sequence of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) gene. // Genomics.- 1991.- Vol.10.- P. 214-228.

188. Zsembery A., Jessner W., Sitter G. Correction of CFTR malfunction and stimulation of Ca-activated CI channels restore HC03 secretion in cystic fibrosis bile ductular cells. // Hepatology.- 2002.- Vol.35.- P. 95-104.