ХАРАКТЕР ПРОТИВОВИРУСНОГО ИММУНИТЕТА К СОВРЕМЕННЫМ ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫМ ШТАММАМ <br/>ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА<br/>У ЛИЦ, ПРИВИТЫХ ПРОТИВ ЭТОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат медицинских наук Павленко, Елена Владимировна

• Павленко, Елена Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Павленко, Елена Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Заболеваемость клещевым энцефалитом на Евразийском континенте

1.1. Заболеваемость клещевым энцефалитом в Российской Федерации.

1.2. Заболеваемость клещевым энцефалитом в европейских странах континента.

Глава 2. Вакцинопрофилактика клещевого энцефалита

2.1. Характеристика вакцин против клещевого энцефалита, применяемых в Российской Федерации.

2.2. Эффективность вакцинации против клещевого энцефалита в России и за рубежом.

2.2.1.Иммунологическая активность вакцин против клещевого энцефалита.

2.2.2. Эпидемиологическая эффективность вакцинации против КЭ населения эндемичных регионов в России и за рубежом.

Глава 3. Биологические свойства вируса клещевого энцефалита '

3.1. Морфология и структурная организация генома вируса клещевого энцефалита.

3.2. Антигенная и молекулярно-генетическая характеристика вируса клещевого энцефалита.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 4. Материалы и методы

4.1. Материалы.

4.2. Методы.

Глава 5. Анализ заболеваемости клещевым энцефалитом в Приморском крае

5.1. Некоторые вопросы эпидемиологии клещевого энцефалита в Приморском крае в период с 1990 по 2007 гг.

5.2. Клинико-эпидемиологические особенности клещевого энцефалита у лиц, получивших специфическую вакцинопрофилактику.

Глава 6. Биологические свойства штаммов вируса клещевого энцефалита

6.1. Выявление вирусемии с использованием иммуноферментного анализа, ОТ-ПЦР и изоляция вируса клещевого энцефалита.

6.1.1. Выявление антигенемии с использованием иммуноферментного анализа и изоляция вируса клещевого энцефалита у вакцинированных и невакцинированных лиц.

6.1.2. Сравнительная характеристика изолятов вируса клещевого энцефалита, выделенных от вакцинированных и невакцинированных лиц, на основе ИФА и ОТ-ПЦР.

6.2. Биологические свойства и молекулярно-генетическая характеристика региональных штаммов вируса клещевого энцефалита, использованных для изучения иммунологической эффективности вакцин.

6.2.1. Вирулентность.

6.2.2. Антигенные свойства.

6.2.3. Авидность.

6.2.4. Молекулярно-генетическая характеристика.

Глава 7. Динамика специфического иммунного ответа у лиц, привитых вакциной «Энцепур®» взрослый (Германия)

7.1. Динамика накопления специфических антител класса IgG и вируснейтрализующих антител в серонегативной и серопозитивной группах привитых лиц.

7.2. Характер иммунного ответа в зависимости от пола и возраста привитых лиц.

7.3. Сравнительный анализ иммунного ответа к разным дальневосточным штаммам вируса клещевого энцефалита.

7.4. Зависимость иммунного ответа на введение вакцины «Энцепур®» взрослый от реактивности организма.

7.5. Напряженность иммунного ответа у лиц, привитых вакциной «Энцепур®» взрослый, через три года после завершенного курса вакцинации.

Глава 8. Сравнительная оценка иммунологической активности разных вакцин против клещевого энцефалита

8.1. Показатели иммунного ответа в зависимости от пола и возраста.

8.2. Показатели иммунного ответа в зависимости от сроков вакцинации.

8.3. Авидность антител у лиц, привитых современными вакцинами против клещевого энцефалита.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «ХАРАКТЕР ПРОТИВОВИРУСНОГО ИММУНИТЕТА К СОВРЕМЕННЫМ ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫМ ШТАММАМ <br/>ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА<br/>У ЛИЦ, ПРИВИТЫХ ПРОТИВ ЭТОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ»

Актуальность проблемы

Несмотря на то, что с момента открытия клещевого энцефалита (КЭ) на Дальнем Востоке России прошло уже более 70 лет, актуальность его до настоящего времени не снизилась в связи с возрастающим распространением этой инфекции на территории Российской Федерации (РФ). Это заболевание продолжает занимать одно из ведущих мест среди природноочаговых инфекций. К настоящему времени расширился ареал этой инфекции: 46 субъектов РФ являются эндемичными по КЭ, а в 24-х - регистрируют единичные случаи заболевания [90]. С 1970-х гг. начался подъем уровня заболеваемости КЭ в целом по всей очаговой территории страны. В 1990-х гг. был отмечен ее наиболее высокий рост за всю историю изучения данной нейроинфекции, с максимальным подъемом в 1996 и 1999 гг., когда уровень достиг 7,0 на 100 тыс. населения [91, 75].

В то же время с начала 2000-х гг. в нашей стране наметилась тенденция к снижению заболеваемости КЭ. Однако, по мнению Г.Г. Онищенко с соавт. (2007), эпидемиологическая ситуация по КЭ в РФ остается напряженной. Несмотря на снижение уровня заболеваемости в целом по стране в 2006 г. до 2,44 на 100 тыс. населения, что на 22,7% ниже уровня 2005 г., в некоторых регионах был отмечен ее рост и уровень превышал общероссийские показатели в5-10 раз [90].

Продолжает сохраняться высокая активность природных и антропургических очагов КЭ, с ростом численности основных переносчиков вируса КЭ - клещей, а также происходит расширение ареала их обитания [121, 40, 46, 32].

На протяжении всего периода регистрации заболеваемости КЭ на долю Дальнего Востока приходилось от 2,7% до 6,6% от общей заболеваемости в целом по стране. В последние годы отмечено снижение доли этого региона в структуре общей заболеваемости КЭ в РФ [130].

Следует отметить, что в последнее десятилетие на территории Дальнего Востока регистрируется снижение показателей летальности при КЭ, однако в целом ее уровень превышает общероссийские показатели и остается одним их самых высоких в стране. Так, в Приморском крае в период 1996-2005 гг. показатели летальности колебались от 5,3% в 2005 г. до 17,3% в 1996 г. [128].

Как известно, при многих вирусных инфекциях вакцинопрофилактика является наиболее эффективной и надежной защитой привитых лиц от случаев заболевания, что доказано многолетним мировым опытом [77]. Практика применения противоклещевых вакцин, производимых в нашей стране и за рубежом, показывает, что вакцинация населения является ключевым звеном в плане массовой профилактики КЭ [13]. К сожалению, в нашей стране, многие регионы которой являются высокоэндемичными по КЭ, процент охвата прививками населения до настоящего времени остается невысоким. По данным Г.Г. Онищенко (2000), в РФ прививки против КЭ ежегодно получали от 2,5 до 3 млн. человек. В то же время в протоколе совещания руководителей территориальных органов управления Роспотребнадзора (2005 г.) отмечено, что в последние годы на отдельных эндемичных территориях наблюдается снижение объемов вакцинации [16]. Так, в 2006 г. вакцинацию и ревакцинацию против КЭ получили 2,21 млн. человек, при этом в 2005 г. - только 1,9 млн., из них 68% - жители Уральского и Сибирского федеральных округов [90], на долю которых приходится значительная часть случаев заболевания КЭ в нашей стране.

Многие авторы отмечают необходимость коренным образом пересмотреть стратегию вакцинопрофилактики КЭ в нашей стране, которая раньше была направлена на защиту лиц, профессионально связанных с лесом [90, 62, 75, 21]. Успех специфической профилактики КЭ может быть достигнут только при значительном увеличении охвата вакцинацией населения эндемичных районов и, прежде всего, городских жителей [36].

В последние десятилетия существенно изменилось представление о структуре популяции вируса КЭ. Изучение молекулярно-генети ческой характеристики штаммов вируса КЭ показало, что на территории РФ циркулируют штаммы трех субтипов (дальневосточный, сибирский, западный) этого вируса [2, 87, 99,72].

Наиболее изученной является незначительная часть вирусной популяции, которая вызывает острые формы КЭ с типичной клинической картиной этого заболевания [9]. Однако известно, что большую часть вирусной популяции составляют штаммы вируса КЭ, которые не всегда проявляют вирулентность и иммуногенность [11, 112, 66, 9]. Вопрос о структуре вирусной популяции, попадающей в организм вакцинированных и невакцинированных лиц, до настоящего времени остается не изученным.

Современные вакцины против КЭ приготовлены из штаммов дальневосточного (Софьин и 205) и западного (Neudorfl и К23) субтипов вируса КЭ [22]. Ранее было показано, что эти вакцинные препараты способны защищать человека от географически удаленных штаммов различных субтипов вируса КЭ [25, 81]. Изучение иммунологической эффективности вакцин обычно проводили с одним или двумя представителям каждого субтипа вируса КЭ. Однако известно, что в эндемичных по КЭ регионах штаммовый пейзаж вирусной популяции значительно различается [66, 112, 99, 116]. Кроме того, остается до конца неизученным вопрос о степени иммунологической эффективности при использовании комбинации вакцин российского и западноевропейского производства.

Таким образом, все вышеперечисленное побудило нас на примере вакцины «Энцепур©» взрослый усовершенствовать методологический подход оценки эффективности вакцинопрофилактики КЭ и провести сравнительный анализ иммунологической эффективности вакцин против КЭ по отношению к дальневосточным штаммам вируса КЭ.

Цель работы: дать характеристику иммунологической эффективности современных вакцин, применяемых для специфической профилактики клещевого энцефалита по отношению к гетерогенной популяции дальневосточных штаммов вируса клещевого энцефалита.

Задачи исследования:

1) Изучить в сравнительном плане некоторые вопросы эпидемиологии КЭ в группах лиц, вакцинированных и невакциинрованных против КЭ.

2) Выявить некоторые особенности биологических свойств штаммов вируса КЭ, попадающих в организм вакцинированных и невакцинированных лиц.

3) Изучить биологическую и молекулярно-генетическую характеристику штаммов вируса КЭ, использованных для оценки иммунологической активности вакцин.

4) Усовершенствовать методологический подход к оценке иммунологической активности вакцин на примере вакцины «Энцепур®» взрослый (Германия).

5) Показать иммунологическую активность современных вакцин против КЭ, применяемых на территории Приморского края.

6) Провести сравнительное изучение иммунного ответа с учетом авидности антител к разным штаммам дальневосточного субтипа вируса КЭ у лиц, привитых разными вакцинами против КЭ.

Научная новизна

Дана биологическая и молекулярно-генетическая характеристика дальневосточных штаммов (Р-73, Р-202, Р-69) вируса КЭ, взятых для оценки иммунного ответа у лиц, привитых против КЭ. Эти штаммы, изолированные от людей с разным клиническим течением инфекции (очаговая форма КЭ - штамм Р-73, инаппараптная форма - Р-202 и Р-69), проявили высокую вирулентность для белых мышей, разную степень цитопатической активности на культуре клеток СПЭВ и различия в антигенной структуре. На основе секвенирования и филогенетического анализа этих штаммов показано, что все они относятся к одному дальневосточному субтипу вируса КЭ, но расположены в трех различных субклайдах этого субтипа.

При использовании комплекса серологических реакций (ИФА, РТГА, НМФА, РН) на примере высокоочищенной, инактивированной вакцины

Энцепур®» взрослый (Германия), приготовленной из штамма К23 западного субтипа вируса КЭ, усовершенствован методологический подход к оценке иммунологической эффективности вакцинации против КЭ. Охарактеризована динамика формирования специфического иммунного ответа у привитых лиц по отношению к дальневосточным штаммам вируса КЭ, максимальные показатели выявлены к высоковирулентному и высокоиммуногенному штамму Р-73, вызвавшему у больного летальный исход. Установлено, что слабовыраженная реактогенность высокоочищенной от чужеродных белков вакцины «Энцепур®» взрослый обусловлена реакцией на специфический белок вакцинного штамма вируса КЭ и оказывает положительное влияние на повышение активности иммунного ответа. При сравнительном изучении иммунологической активности вакцин, приготовленных из штаммов дальневосточного и западного субтипов вируса КЭ, дана также оценка показателей авидности антител в разные сроки после вакцинации.

Практическая значимость

На основании сравнительного анализа заболеваемости КЭ на территории Приморского края в 1990-е и 2000-е гг. выявлено снижение1 заболеваемости и тяжести клинического течения этой инфекции среди лиц, привитых против КЭ по сравнению с непривитыми.

Показан высокий иммунный ответ у лиц, привитых современными вакцинами против КЭ, приготовленными из штаммов дальневосточного и западного субтипов вируса КЭ, по отношению к региональным штаммам вируса КЭ. Отмечены высокие показатели иммунного ответа у лиц, привитых комбинированно этими вакцинами, что дает возможность взаимозаменяемости вакцин российского и зарубежного производства. Выявлены особенности течения вакцинального процесса с учетом пола и возраста привитых лиц. Рекомендовано усилить охват вакцинацией лиц старшей возрастной группы и мужского пола.

Сравнительное изучение эффективности иммунного ответа у привитых лиц с учетом авидности антител показало, что даже в год вакцинации не все лица имели авидиые антитела к вирусу КЭ. Установлено, что с течением времени происходит снижение авидности антител. Применение этого метода диагностики позволяет судить о функциональной активности антител у привитых лиц, что важно при решении вопроса о степени защищенности лиц с нарушением схемы вакцинации и длительности протективного ответа у привитых лиц.

По материалам исследования оформлено информационное письмо «Оценка иммунологической активности вакцинации против клещевого энцефалита» от 25.03.2008 г., утвержденное Департаментом здравоохранения Администрации Приморского края.

В международную базу данных GenBank депонированы последовательности трех штаммов фрагмента гена Е вируса КЭ по участку длиной 1-501 и.о.: Р-73 (DQ667008), Р-202 (DQ667009) и Р-69 (DQ667007).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Современные вакцины, приготовленные из штаммов дальневосточного и западного субтипов вируса КЭ, обладают достаточно высокой иммуногенной активностью и способны обеспечивать эффективную иммунную защиту- к разным штаммам дальневосточного субтипа вируса КЭ.

2. Региональные штаммы вируса КЭ, изолированные от больных людей на территории Приморского края и использованные в настоящей работе принадлежат к одному дальневосточному субтипу вируса, но различаются по иммуногенным, антигенным, биологическим свойствам и молекулярно-генетической характеристике, что нашло отражение в различиях иммунного ответа улиц, привитых против КЭ.

3. Активность специфического иммунного ответа зависит от возраста и пола лиц, вакцинированных против КЭ. У привитых лиц молодого возраста, а также у лиц женского пола показатели иммунного ответа выше по сравнению с лицами старшей возрастной группы и лицами мужского пола.

4. Основное значение в оценке иммунологической активности вакцин против КЭ имеют показатели вируснейтрализующих антител, а также авидность антител к разным штаммам вируса КЭ.

Апробация работы Основные положения и результаты работы были представлены на: Научно-практической конференции молодых ученых (ВГМУ, Владивосток, 2002, 2005), Юбилейной конференции, посвященной 65-летию открытия вируса клещевого энцефалита (Владивосток, 2002), IV научно-практической конференции «Инфекционная патология в Приморском крае» (Владивосток, 2004), Всероссийской научно-практической конференции «Современная ситуация и перспективы борьбы с клещевыми инфекциями в XXI веке» (Томск, 2006), Юбилейной конференции, посвященной 70-летию открытия вируса клещевого энцефалита (Владивосток, 2007), Школе-семинаре «Вакцинопрофилактика управляемых инфекций», проводимой в рамках IV Дальневосточного регионального конгресса «Человек и лекарство» с международным участием (Владивосток, 2007).

Основные положения и результаты работы отражены в 15 научных работах, в том числе 1 - соавтор в монографии, 1 - в международной печати, 8 -в журналах, рекомендуемых ВАК для публикации кандидатских диссертаций (за первым авторством 2 статьи), 5 - в сборниках материалов всероссийских конференций.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Павленко, Елена Владимировна

ВЫВОДЫ

1. В период 2000-х гг. на территории Приморского края наблюдается снижение уровня заболеваемости КЭ, по сравнению с 1990-ми гг., а также снижение тяжести клинического течения и летальности при КЭ.

Установлено, что среди лиц, привитых против КЭ, это заболевание t протекает легче, чем у непривитых лиц.

2. Вирусологическое исследование в комплексе с ИФА и ПЦР крови лиц с «укусом» клеща показало, что процесс элиминации антигена вируса КЭ происходит активнее у вакцинированных лиц, по сравнению с невакцинированными.

3.—Установлено,что-региональные-штаммы-Р-73,"Р^202"]т~Р=69^вируса~КЭ," использованные для изучения иммунологической активности разных вакцин, принадлежат к одному дальневосточному субтипу вируса КЭ, но отличаются по иммуногенной, биологической, антигенной и I молекулярно-генетической характеристике.

4. На основании комплекса методов исследования (ИФА, РТГА, НМФА, РН) установлено, что все вакцинные препараты, приготовленные из штаммов, дальневосточного и западного субтипов вируса КЭ, имеют достаточно высокую иммуногенную активность и способны обеспечивать защиту против различных штаммов дальневосточного субтипа вируса КЭ. Наиболее полноценный иммунный ответ у лиц, привитых разными вакцинами против КЭ, сформировался к высоковирулентному и высокоиммуногенному штамму Р-73, г вызвавшему у больного очаговую форму КЭ с летальным исходом. К другим региональным штаммам (Р-202, Р-69) вируса КЭ, изолированным из крови лиц с инаппарантной формой инфекции, показатели иммунного ответа были несколько ниже.

5. Изучение функциональной активности антител показало, что не у всех вакцинированных лиц даже в год вакцинации вырабатываются высокоавидные антитела к разным штаммам вируса КЭ, в отдаленные сроки после вакцинации эти показатели снижаются. Лица, привитые вакцинами из дальневосточных штаммов вируса КЭ, проявили большее сродство по выработке авидных антител к штамму Р-73, а лица, привитые «западными» вакцинами - к штаммам Р-202 и Р-69. Достаточно высокие показатели авидности антител к разным штаммам вируса КЭ были выявлены во все сроки наблюдения при комбинированной вакцинации.

6. Выявлен более выраженный иммунный ответ у лиц с реакциями (в 32%) после введения вакцины «Энцепур®» взрослый, не содержащей чужеродных белков, по сравнению с лицами без реакции, что рассматривается как положительный факт активного специфического действиявирусното антигена ^тих лиц.

7. У лиц молодого возраста, а также у лиц женского пола, привитых разными вакцинами против КЭ, обнаружены более высокие показатели иммунного ответа по сравнению с лицами старшей возрастной группы и лицами мужского пола. t

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В. настоящей работе в сравнительном плане даны некоторые особенности эпидемиологии КЭ у лиц, непривитых и привитых различными вакцинами против КЭ. Известно, что природные очаги КЭ на территории РФ отличаются не только стойкостью и возрастающим уровнем эпидемического проявления, но и способностью к расширению ареала этой инфекции [90, 130, 75]. Несмотря на тенденцию к снижению заболеваемости КЭ в целом по стране, по мнению Г.Г. Онищенко с соавт. (2007), эпидемиологическая ситуация по КЭ в РФ продолжает оставаться напряженной.

На долю Дальнего Востока приходится всего от 2,7% до 6,6% случаев КЭ [130]. Однако высокие показатели летальности при КЭ (до 10-12%) в этом регионе указывают на то, что это заболевание, как и прежде, здесь протекает наиболее тяжело.

При анализе многолетней динамики заболеваемости КЭ в Приморском крае показано, что за изучаемый1 период она расширила свои границы и стала, регистрироваться на территории районов, ранее свободных от КЭ. Однако в целом, в период 2000-х гг., по сравнению с 1990-ми гг., произошло снижение уровня заболеваемости КЭ на всей очаговой территории края. Отмечено также изменение клинической структуры КЭ. В период 2000-х гг., по сравнению с 1990-ми, значительно увеличилась доля лихорадочной формы КЭ, а также снизилась доля очаговых форм. Кроме того, на снижение тяжести клинического течения КЭ в Приморском крае указывают и показатели летальности при КЭ. Выявлено, что в период 2000-х гг. произошло значительное снижение числа летальных исходов при менингеальной и очаговых формах КЭ.

Общеизвестно, что основным и наиболее эффективным средством специфической профилактики КЭ является вакцинация населения эндемичных регионов. Однако случаи заболевания КЭ встречаются и среди привитых лиц [90,76,107].

Анализ заболеваемости среди вакцинированных и невакцинированных лиц показал, что как в период 1990-х гг., так и в 2000-х гг., у лиц, привитых против КЭ, отмечается более легкое течение заболевания, по сравнению с непривитыми. На протяжении последних пяти лет у лиц, привитых современными вакцинами против КЭ, была зарегистрирована только лихорадочная форма заболевания.

В группах вакцинированных и невакцинированных лиц с «укусом» клеща проведено сравнительное вирусологическое исследование антигенположительных в ИФА проб лейкоцитов крови на мышах двухсуточного возраста. Установлено, что при пассажах на белых мышах происходит элиминация антигена вируса КЭ в значительной части проб, причем более активная в пробах крови от вакцинированных лиц.

Известно, что структура—популяции—вируса КЭ неоднородна. По способности проникать в мозг и вызывать клиническую картину КЭ штаммы вируса подразделяют на нейроинвазивные и ненейроинвазивные [66, 11]: Изучение распределения изолятов вируса КЭ от вакцинированных и невакцинированных лиц показало, что при первом пассаже на белых мышах среди проб крови от вакцинированных лиц преобладали ненейроинвазивные изоляты вируса КЭ. В дальнейшем, при втором пассаже, на фоне элиминации вируса КЭ, произошло перераспределение этих проб, и доля нейроинвазивных изолятов среди проб от вакцинированных и невакцинированных лиц стала практически одинаковой. Полученные данные были подтверждены и при сравнительном изучении методом ПЦР изолятов вируса КЭ, выделенных от вакцинированных и невакцинированных лиц. Видимо, это может быть связано с тем, что у привитых лиц при встрече с вирусом происходит более активная элиминация неполноценных вирусных частиц. При этом полноценные вирионы, содержащие РНК вируса КЭ, выявляются в группе вакцинированных лиц чаще как в ИФА, так и в ПЦР.

Как было показано в обзоре литературы, на территории эндемичных по КЭ регионов циркулируют штаммы дальневосточного, сибирского и западного субтипов вируса КЭ, которые различаются по своим антигенным [43, 116, 18, 66] и молекулярно-генетическим свойствам [72, 6, 54]. В то же время, имеются

142 , различия биологических свойств этих штаммов и в пределах одного субтипа вируса КЭ [66, 99]. По данным М.С. Воробьевой с соавт. (2007) в настоящее время в РФ зарегистрированы и разрешены к применению шесть вакцин против КЭ. Вакцины российского производства приготовлены из штаммов дальневосточного субтипа (Софьин и 205), а вакцины зарубежного производства для взрослых и детей - из штаммов Neudorfl и К23 западного субтипа вируса КЭ. Вопрос о спектре защитного действия этих вакцин по отношению к гетерологичным штаммам до конца не изучен.

На примере немецкой вакцины «Энцепур©» взрослый отработан методологический подход к оценке иммунологической активности вакцин .противКЭ.-Для-изучения-иммунологичеекой эффективности этой~вакцины, приготовленной из штамма К23 западного субтипа вируса КЭ, в качестве антигенов были выбраны три штамма вируса КЭ (Р-73, Р-202, Р-69), изолированные на территории Приморского края от больных с разными формами КЭ. Проведено изучение биологических свойств этих штаммов вируса КЭ. Все исследуемые штаммы вируса КЭ в опытах на мышах не выявили существенных отличий в степени вирулентности и инвазивной активности и являлись высоковирулентными и высокоинвазивными. Однако они имели отличия по титру цитопатической активности на культуре клеток СПЭВ. Наиболее низкую цитопатическую активность проявил штамм Р-202.

Кроме того, были показаны различия в антигенной и молекулярно-генетической характеристике этих штаммов вируса КЭ. Судя по антигенной характеристике, штамм Р-73, в сравнении с двумя другими штаммами, был более иммунологически активен, его гомологичные титры антител в РТГА, НМФА и РН были самыми высокими, значит поверхностный белок Е этого штамма в антигенном плане является более полноценным. Высокая специфичность к поли- и моноклональным антителам была обнаружена у штамма Р-202, который по антигенной характеристике занял промежуточное положение. Выраженные отличия по антигенной характеристике выявлены у штамма Р-69. Титры гетерологичных антител к этому штамму были в 4-8 раз слабее гомологичных. Кроме того, штамм Р-69 в РТГА не взаимодействовал с МКА Е4А. В РН штаммы Р-73 и Р-202 показали отсутствие антигенной связи с антителами к штамму Р-69. При этом штамм Р-69 проявил достаточно высокое антигенное родство с антителами к гетерологичными штаммам. Таким образом, наибольшие различия антигенной активности были выявлены у штамма Р-69.

Иммунный ответ у лиц, привитых вакциной «Энцепур®» взрослый, изучали в разных серологических реакциях (ИФА, РН, РТГА, НМФА) к вышеуказанным штаммам вируса КЭ, а также к коммерческому диагностикуму (штамм 139, изолирован из иксодовых клещей на территории Хабаровского края). Установлено, что в ходе курса вакцинации у привитых лиц происходило -динам ичное "накопление- антител в разных серологических реакциях ко всем штаммам вируса КЭ.

В дальнейших исследованиях был проведен сравнительный анализ иммунологической эффективности разных вакцин, применяемых для вакцинации населения эндемичных территорий РФ.

В ходе комплексного исследования установлено, что показатели иммунного ответа к региональным штаммам Р-73, Р-202 и Р-69 вируса КЭ, расположенным в трех разных субклайдах дальневосточного субтипа, различались. Выявлена закономерность, что самые высокие показатели иммунного ответа у лиц, привитых разными вакцинами против КЭ, были к г высоковирулентному штамму Р-73, изолированному из мозга умершего больного с очаговой формой КЭ, ниже - к штамму Р-202 и самые низкие - к штамму Р-69. Два последних штамма были выделены из лейкоцитов крови больного с инаппарантной формой КЭ, и имели, как было показано выше, антигенные и молекулярно-генетические отличия от штамма Р-73. Наиболее полноценный иммунный ответ у лиц, привитых разными вакцинами против КЭ, сформировался к высоковирулентному штамму Р-73, вызвавшему у больного летальный исход. Это дает основание нам говорить о том, что штамм Р-73 является не только высоковирулентным, но и высокоиммуногенным.

При сравнительном анализе иммунного ответа у лиц, привитых против КЭ, в разных возрастных группах нами было выявлено, что у лиц молодого возраста эти показатели выше, по сравнению со старшей возрастной группой. Это указывает на то, что риск заражения КЭ лиц старшей возрастной группы выше, чем у молодых.

Показатели ежегодного мониторинга заболеваемости КЭ среди мужчин й женщин свидетельствуют о том, что на долю мужчин приходится более 70% заболевших КЭ [66, 123]. Ранее это объясняли более частым посещением леса мужчинами. В настоящем исследовании показано, что среди женщин, привитых как вакциной «Энцепур®» взрослый, так и другими вакцинами против КЭ, выявленыболеевысокие показатели иммунологической защиты, по сравнению с лицами мужского пола. Эта особенность позволяет посмотреть на данную проблему с другой точки зрения и понять причины более высокой восприимчивости к вирусу КЭ у мужчин по сравнению с женщинами. Одно из доказательств предрасположенности мужчин к заболеванию КЭ было продемонстрировано в работе В.Ф. Прокофьева с соавт. (1988), где с помощью иммуногенетических маркеров были выявлены факторы риска, чаще встречающиеся и характерные именно для мужчин.

Несмотря на то, что высокоочищенная вакцина «Энцепур®» взрослый лишена стабилизаторов белкового происхождения, консервантов и примесей белка куриных эмбрионов, нами у части привитых лиц была зарегистрированная побочная реакция на чужеродный белок. В проведенном исследовании выявлена особенность, что в группе лиц с реакциями на введение t вакцины показатели иммунного ответа значительно выше, по сравнению с лицами без реакций. Ранее в работе О.Е. Girgsdies et al. (1996) были представлены данные о снижении доли детей с явлениями лихорадки в группе вакцинированных половинной дозой убитого антигена вируса КЭ, содержащейся в вакцине «Энцепур®», по сравнению с полной дозой, что, скорее всего, можно объяснить реакцией на сам антиген. Авторами было высказано мнение, что инактивированный антиген вируса КЭ способен индуцировать лихорадочные проявления. В нашем наблюдении слабовыраженная реакция на введение вакцины была выявлена у 32,4% привитых лиц, которая обусловлена, видимо, специфическим белком антигена вируса КЭ и является необходимым свойством данного вакцинного препарата.

В то же время, следует отметить, что все вакцины, применяемые в настоящее время для вакцинации населения эндемичных по КЭ регионов индуцируют у привитых лиц достаточно высокие показатели иммунного ответа по отношению ко всем дальневосточным штаммам вируса КЭ. Кроме того, р отмечены высокие показатели иммунологической защищенности лиц, вакцинацию которых проводили комбинированно разными вакцинами. Эти данные ещё раз подтверждают рекомендации МГСТВоробьевой (2007) о взаимозаменяемости всех вакцин, комбинации которых дают самые надежные иммунологические показатели ко всем штаммам вируса КЭ.

Известно, что с течением времени происходит постепенное снижение уровня иммунологической защищенности лиц, привитых убитыми- вакцинами. Нами на примере вакцины «Энцепур®» взрослый, а также у лиц, привитых разными вакцинами против КЭ, показано, что, несмотря на достаточно высокий р уровень сероконверсии, напряженность иммунного ответа со временем значительно снижается. Значит, спустя 3 года после вакцинации большинство привитых лиц разными вакцинами, вероятно, будут нуждаться в ревакцинации.

Для более полной характеристики функциональной активности антител и качества иммунного ответа при многих инфекциях стали широко применять определение авидности специфических антител [143, 193, 146, 165, 51]. Изучение защитного действия Денге-вирусных вакцин на экспериментальной модели обезьян, ранее привитых, а затем инфицированных вирусом Денге-2, показало значимость не только вируснейтрализующих антител, но и показателей высокоавидных антител, самые высокие показатели которых были выявлены у животных, привитых убитой вакциной [146]. Нами впервые проведено изучение авидности антител у лиц, привитых разными вакцинами против КЭ. Показано, что не все вакцинированные лица даже в год вакцинации имели авидные антитела, что, вероятно, может сказаться на появлении единичных случаев заболевания КЭ у привитых лиц. Кроме того, нами было установлено, что с течением времени происходит снижение показателей авидности антител у привитых лиц.

Полученные данные по авидитету иммунного ответа.у этих лиц имеют прямую связь с генетически обусловленной характеристикой региональных штаммов вируса КЭ, использованных для изучения иммунитета. Установлено, что у лиц, привитых вакцинами из «дальневосточных» штаммов вируса КЭ, показатели авидности антител выше к высоковирулентному штамму Р-73. При этом у лиц, привитых вакцинами из «западных» штаммов, выявлена более активная выработка авидных-антител ~к штаммам Р-202-И-Р-69, вызвавшим у

I' людей инаппарантную форму КЭ. Группа лиц, привитых в разные сроки комбинированно «западными и восточными» вакцинами, имеет достаточно высокие показатели авидности антител ко всем региональным штаммам вируса КЭ, что указывает на возможность взаимозаменяемости всех вакцин, комбинации которых дают самые надежные иммунологические показатели к этим штаммам дальневосточного субтипа вируса КЭ.

Таким образом, в ходе проведения настоящих исследований установлено, что все вакцинные препараты, применяемые в настоящее время для вакцинации населения эндемичных регионов Евразийского континента, имеют достаточно высокую иммунологическую эффективность и способны защищать от географически удаленных штаммов вируса КЭ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Павленко, Елена Владимировна, 2008 год

1. Аммосов, А.Д. Клещевой энцефалит / А.Д. Аммосов. Кольцово, 2004. - 115 с.

2. Анализ генетической вариабельности штаммов вируса клещевого энцефалита попервичной структуре фрагмента гена белка оболочки Е / В.И. Злобин, Т.В. Демина, Л.В. Мамаев и др. // Вопр. вирусол. 2001. - Т. 46. - № 1. - с. 12-16.

3. Бектимиров, Т.А. Побочное действие вакцин Электронный ресурс./ Т.А. --------Б е кти миров II- Б юл лете нь «Вакцинация», 2000. - №2 (8).-режим -доступа:http://medi.ru/doc/15b08.htm

4. Бектимиров, Т.А. Современные подходы к изучению поствакцинальных реакцийги осложнений Электронный ресурс. / Т.А. Бектимиров // Бюллетень «Вакцинация». 2000. - №4 (Ю). - режим доступа: http://medi.ru/doc/15b 1001 .htm

5. Беликов, С.И. Молекулярно-генетические подходы к изучению РНК-содержащихвирусов на моделях морбилливируса байкальской нерпы и вируса клещевого энцефалита: Автореф. дис. . докт. биол. наук / С.И. Беликов. Владивосток, 2000.-с. 38.

6. Билалова, Г.П. Вакцина клещевого энцефалита «Энцевир»:иммунобиологические и клинические испытания: Автореф. дис. . канд. мед. наук / Г.П. Билалова. Уфа, 2003. - 25 с.

7. Билалова, Г.П. Вакцина клещевого энцефалита «Энцевир®» результатыпрактического применения / Г.П. Билалова, Л.Д. Быстрицкий, Р.Г. Соляник // Сиб. Мед. журн. 2004. - Т. 19. - №2. - С. 15-16.

8. Биологическая и молекулярно-генетическая характеристика дальневосточнойпопуляции вируса клещевого энцефалита и ее патогенетическое значение / Г.Н. Леонова, С.И. Беликов, Е.В. Павленко и др. // Вопр. вирусол. 2007. - №6. - С. 13-17.

9. Борисевич, В.Г. Иммуно-вирусологические аспекты инаппарантной и стертойформ клещевого энцефалита: Автореф. дис. . канд. мед. наук / В.Г. Борисевич.- Владивосток, 2002. 22 с.

10. Борисевич, В.Г. Инфекционный процесс при стертой и инаппарантной формах клещевого энцефалита / В.Г. Борисевич, Г.Н. Леонова // Клещевой энцефалит.---——-Владивостокг2002-- 6:48—59. --——--—--—-

11. Быстрицкий, Л.Д. Анализ заболеваемости клещевым энцефалитом в Томской области. Экономическая оценка профилактики и диагностики клещевого энцефалита / Л.Д. Быстрицкий, Т.Э. Ильченко // Сиб. мед. журн. 2004. - Т. 19.- №2. — С.31-34.

12. Вакцина «Энцевир»: разработка и внедрение в практику / И.В. Красильников,

13. И.А. Мищенко, О.И. Шарова и др.// Биопрепараты. 2004. - №2(14). - С.21- 24.

14. Вакцинопрофилактика клещевого энцефалита на современном этапе ипрепараты для ее реализации / М.С. Воробьева, М.Н. Ращепкина, Л.И. Павлова и др. // Бюл. сиб. мед. 2006. - Том 5. - Приложение 1. - С.63-71.

15. Вальцева, Л.Н. Критерии прогнозирования иммунного ответа доноров навакцину клещевого энцефалита: Автореф. дис. . канд. биол. наук / Л.Н Вальцева. С.-Петербург, 2006. - 22 с.

16. Верета, Л.А. Природная гетерогенность и целенаправленный отбор штаммоввируса клещевого энцефалита/ Л.А. Верета, М.С. Воробьева. М., 1990. - 122 с.

17. Вирусы комплекса клещевого энцефалита / Е.Н. Левкович, В.В. Погодина, Г.Д. Засухина, Л.Г. Карпович. Л. Медицина, 1967. - 245 с.

18. Волкова, Л.И. Клиническая картина острого клещевого энцефалита на Среднем Урале / Л.И. Волкова, Р.Г. Образцова // Клещевой энцефалит. Владивосток, 2002.-С.88 -98.

19. Воробьева, М.С. Вакцины, иммуноглобулины и тест-системы для профилактикии диагностики клещевого энцефалита / М.С. Воробьева, М.Н. Расщепкина, И.П. Ладыженская // Вопр. вирусол. 2007. - №6. - С. 30 - 36.

20. Воробьева, М.С. История создания и развитие производства вакцины противклещевого энцефалита в России и за рубежом / М.С. Воробьева, М.Н.-Рас1цепкина-//Даль!1евосточнв1Й-Журнал'ИнфекционнойПатологии:"^^2007.11.-С.21 -27.

21. Воробьева, М.С. Современное состояние вакцинопрофилактики клещевого энцефалита / М.С. Воробьева // Клещевой энцефалит. Владивосток, 2002. -С.166-169.

22. Вотяков, В.И. Западный клещевой энцефалит / В.И. Вотяков, И.И. Протас, В.М. Жданов. Минск: «Беларусь», 1978. - 256 с.

23. Гайдамович, С.Я. Методические рекомендации / С.Я. Гайдамович // Итоги наукии техники. Серия Вирусология. 1991 - Т.25 - с.113.

24. Генетическое типирование штаммов вируса клещевого энцефалита на основе анализа гомологии фрагмента гена белка оболочки / В.И. Злобин, Т.В. Демина, С.И. Беликов и др. // Вопр. вирусол. 2001. - Т.46. - № 1. - С. 16-21.

25. Географическое распространение вариантов вируса клещевого энцефалита /

26. B.И. Злобин, В.А. Шаманин, Д.А. Дрокин и др. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1992. - №5-6. - С. 252- 256.

27. Гниель, Д. Ситуация по клещевому энцефалиту в мире. Вирус- возбудитель-заболевание и профилактика / Д. Гниель, М. Броекер // Клещевой энцефалит. -2003.-С. 180-186.

28. Грачев, В.П. Разработка и практическое применение вакцин для профилактики --ак-т-уальных-вируеных-инфекций-АВ^Н—Грачсв-/АВопр;-вируеол7—2005г—№3.—1. C. 32-36.

29. Данчинова, Г.А. Экология иксодовых клещей и передаваемых ими возбудителей трансмиссивных инфекций в Прибайкалье и на сопредельных территориях: Автореф. дис. . докт. биол. наук / Г.А. Данчинова. Иркутск, 2006. - с. 45.

30. Динамика формирования специфического иммунитета при вакцинации противклещевого энцефалита / Ю.Ю. Сурова, О.В. Стронин, Р.Г. Соляник, Г.П. Билалова // Клещевой энцефалит. Владивосток, 2002. - С. 170- 179.

31. Жукова, Н.Г. Клещевой энцефалит в Томской области (этиология,эпидемиология, клиника, диагностика, лечение) / Н.Г. Жукова, Н.И. Команденко, JI.E. Подоплекина. Томск, 2002. - 256 с.f

32. Злобин, В.И. Клещевой энцефалит в Российской Федерации: современное состояние проблемы и стратегия профилактики / В.И. Злобин // Вопр. вирусол. -2005. -№3.-С.26-32.

33. Злобин, В.И. Клещевой энцефалит на рубеже веков / В.И. Злобин // Сиб. мед. журн. 2003. - №3. - С.4-7.р

34. Злобин, В.И. Клещевой энцефалит: Этиология, Эпидемиология и профилактикав Сибири / В.И. Злобин, О.З. Горин. Новосибирск: Наука. Сибирская издательская фирма РАН, 1996. - 177 с.

35. Злобин, В.И. Современные аспекты эпидемиологии клещевого энцефалита /

36. Злобин, В.И. Эпидемиологическая обстановка и проблемы борьбы с клещевым энцефалитом в Российской Федерации / В.И. Злобин // Бюл. Сиб. Мед. — 2006. -Т. 5.- Приложение 1.- С. 16-23.

37. Игнатьев, Г.М. Активность цитокинов при иммунизации вакциной против клещевого энцефалита в эксперименте / Г.М. Игнатьев, Е.В. Отрашевская, М.С. Воробьева // Вопр. вирусологии. 2003. - №2. - С.22 - 25.

38. Идентификация отдельных антигенных эпитопов белка оболочки вирусаIклещевого энцефалита с применением моноклональных антител / А.С. Караванов, Л.Э. Матвеев, С.Г. Рубин и др. // Вопр. вирусол. 1990. - №2. 1. C.140- 143.

39. Изучение культуральной концентрированной инактивированной вакциныпротив клещевого энцефалита при иммунизации детей и подростков / Л.И.

40. Павлова, М.А. Горбунов, М.С. Воробьева и др. // Журн.микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1999. - №6. - С.50-53.

41. Иксодовые клещи юга Восточной Сибири и Монголии и их спонтанная зараженность возбудителями природно-очаговых трансмиссмивных инфекций / Г.А. Данчинова, М.А. Хаснатинов, В.И. Злобин и др. // Бюлл. Сиб. Мед. 2006. -Т.5, прил. 1.- С. 137-143.

42. Иммунный ответ вакцинированных и невакцинированных мышей, зараженных вирусом клещевого энцефалита / Г.М. Игнатьев, Е.К. Букин, Е.В. Отрашевская и др. // Вопр. вирусологии. 2006. - №5. - С.22-27.

43. Иммуногенетические маркеры при клещевом энцефалите в Западной Сибири / В.Ф.Лрокофъев,^ЛО^Нерпицина,-А.П. -Иерусалимский,-ВтИт-Конешшв7/-Бюлл.

44. СО АМН СССР. -1988. №5-6. - С. 49-53.

45. Иммунологическая эффективность вакцин против клещевого энцефалита в

46. Иммунологическая эффективность вакцины «Энцевир» при ревакцинации детей / И.В. Ставицкая, О.В. Шкуратова, Л.И. Павлова и др. // Биопрепараты. 2004. -№2(14). -С.34-36.

47. Индекс авидности специфических IgG в диагностике заболеваний, вызванныхвирусами Западного Нила и клещевого энцефалита / В.В. Распопин, И.А.У

48. Разумов, Е.И. Казачинская и др. // Клин. лаб. диагностика. 2007. - №4. - С. 2932.

49. Исследование с помощью моноклональных антител антигенов Е и NS1 штаммов клещевого энцефалита Западной Сибири / В.Н. Бахвалова, А.С. Караванов, Л.Э. Матвеев и др. // Вопр. вирусол. 2001. - №6. - С. 33 - 36.

50. История производства вакцин для профилактики клещевого энцефалита в г. Томске от мозговой вакцины до вакцины ЭнцеВир / Г.П. Билалова, Л.Д.t

51. Быстрицкий, М.С. Воробьева и др.// Бюллетень СО РАМН. 2007. - №4(126). -С.105-110.

52. Карань, JLC. Развитие методов детекции и генотипирования вируса клещевого энцефалита на основе амплификационных технологий / JI.C. Карань, С.И. Браславская, А.Е. Мязин // Вопр. вирусол. 2007. - №6. - С. 17-22.

53. Киселев, Л. Л. Лев Александрович Зильбер: (к 100-летию со дня рождения) / Л.Л. Киселев // Вопр. вирусол. 1994. - № 3. - С. 141-143.

54. Клинико-эпидемиологические аспекты клещевого энцефалита / Т.Г.f

55. Бурмистрова, Е.И. Краснова, Н.П. Толоконская, М.Н. Гридина // Тез. докл. Научн. конф. «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири,

56. ДальнесоВосюка иКрайнепо-Севера».,-! 0- 11-апреля 1998.—Новосибирск,—1998. С.32-33.

57. Количественное определение вирусного белка в вакцине клещевого энцефалита «Энцевир» / О.И. Шарова, И.А. Мищенко, Н.С. Шквыря и др. // Сиб. мед. журн. 2004. - Т.19. - № 2. - С.40-45.

58. Комплексная характеристика сибирского подтипа вируса клещевого энцефалита

59. В.В. Погодина, Н.Г. Бочкова, Л.С. Левина и др. // Клещевой энцефалит.1

60. Владивосток, 2002. С. 72 -87.

61. Концентрированная и очищенная вакцина против клещевого энцефалита,изготовленная методом ультрафильтрации и хроматографии / Л.Б. Эльберт, И.В. Красильников, С.Г. Дроздов и др. // Вопр. вирусол. -1985. №1. - С.307-315.

62. Коренберг, Э.И. Клещевой энцефалит: ретроспективная оценка показателей заболеваемости в России / Э. И. Коренберг, Т.В. Лихачева // Биопрепараты. -2004. №2 (14).-С. 13-17.

63. Кулакова, Н.В. Молекулярно-генетическая характеристика дальневосточныхрштаммов вируса клещевого энцефалита, изолированных от людей с различными формами инфекционного процесса: Автореф. дис. . канд. биол. наук / Н.В. Кулакова. Владивосток, 2003. - 22 с.

64. Лашкевич, В.А. Современные аспекты профилактики клещевого энцефалита // В.А. Лашкевич, Г.Г. Капганова // Вопр. вирусол. 2007. - №5. - С. 31- 32.г

65. Леонова, Г.Н. Вакцинопрофилактика клещевого энцефалита в условияхциркуляции гетерогенной вирусной популяции / Г.Н. Леонова // Тихоок. мед. журн. 2006. - №3. - С. 23-26.

66. Леонова, Г.Н. Изучение вирулентности штаммов вируса КЭ, изолированных на юге Дальнего Востока / Г.Н. Леонова, С.М. Мураткина, С.П. Кругляк // Вопр. Вирусол. 1990. -№5. - С.399-401.

67. Леонова, Г.Н. Исторические этапы изучения клещевого энцефалита на Дальнем Востоке / Г.Н. Леонова // Журн. Микробиол., эпидемиол., и иммунобиол. —---1997.-№5.^С:91-93: -~ ~ ~f

68. Леонова, Г.Н. Клещевой энцефалит в Приморском крае / Г.Н. Леонова. -Владивосток, 1997. 190 с

69. Леонова, Г.Н. Клещевой энцефалит в Приморском крае / Г.Н. Леонова, Г.П. Сомов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1989. - № 7. — С.43 -48.

70. Леонова, Г.Н. Клинико-эпидемиологические особенности клещевого энцефалита в Приморском крае / Г.Н. Леонова, В.Н. Рыбачук, С.П. Кругляк и др. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1987. — № 12. - С. 40 - 45.

71. Леонова, Г.Н. Некоторые вопросы эпидемиологии клещевого энцефалита на

72. Юге Дальневосточного региона России / Г.Н. Леонова // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2004.- №2 (15). - С.23-26.

73. Леонова, Г.Н. Этапы изучения клещевого энцефалита в Приморском крае / Г.Н. Леонова // Клещевой энцефалит. Владивосток, 2002. - С.5-14.

74. Локтев, В.Б. Вирус клещевого энцефалита. Генетические особенности и егоизменчивость в современном мире / В.Б. Локтев / Бюллетень СО РАМН. 2007.- №4. С. 14-21.

75. Локтев, В:Б. Молекулярно-генетическая характеристика, вируса клещевого энцефалита / В.Б. Локтев, В.А. Терновой, С.В. Нетесов // Вопр. вирусол. 2007.5. С. 10 - 16.

76. Медуницин, Н.В. Вакцинология / Н.В. Медуницин. М., «Триада - X». - 1999. -272 с.

77. Медуницин, Н.В. Побочное действие вакцин / Н.В. Медуницин // Биопрепараты. -2001. -№3.~ С. 10-12.

78. Михайлова, Л.Г. Заболеваемость клещевым энцефалитом в Российское Федерации / Л.Г. Михайлова // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. -2004.- №1 (14). С.35-36.

79. Молекулярная характеристика популяции вируса клещевого энцефалита Южно-Сихотэ-Алиньского очагового региона / Г.Н. Леонова, В.Б. Кожемяко, М.П. Исаева, О.С. Майстровская //Вопр. вирусол. 1996. - №4. - С. 154 -158.

80. Молекулярная эпидемиология вируса клещевого энцефалита: перекрестная защита между европейскими и дальневосточными субтипами / X. Хольдман,

81. М.С. Воробьева, И.П. Ладыженская и др. // Эпидемиология и вакцинорофилактика. 2003. - №2(9). - С.37-41.

82. Молекулярная эпидемиология клещевого энцефалита / В.И. Злобин, М.М. Верхозина, Т.В. Демина и др. // Вопр. вирусол. 2007. - №6. - С. 4-12.

83. Молекулярные зонды для генетического типирования вируса * клещевого энцефалита / В.И. Злобин, М.Х. Газо, С.И. Беликов и др. // Вопр. вирусол. -2001.-№2.-С. 43-47.

84. Новая концепция природной генетической вариабельности вируса клещевого энцефалита / В.И. Злобин, С.И. Беликов, Ю.П. Джиоев и др. // Тихоокеанский мед.журн. 2001. - №2 (7). - С. 75-78.

85. Новые перспективы в изучении клещевого энцефалита / Г.Н. Леонова, С.И. Беликов, В.Г. Борисевич, В.Б. Кожемяко // Тихоокеанский мед.журн. 2001. -№2 (7). - С. 95-98.

86. Онищенко, Г.Г. Организация надзора за клещевым вирусным энцефалитом и меры по его профилактике в Российской Федерации / Г.Г. Онищенко, Ю.М, Федоров, Н.Д. Пакскина // Вопр. вирусол. 2007. - №5. - С. 8 - 10.

87. Онищенко, Г.Г. Распространение вирусных природно-очаговых инфекций в Российской Федерации и меры по их профилактике / Г.Г. Онищенко // Эпидемиология и инфекц. болезни. 2000. - №4. - С. 4-8.

88. Патогенетические критерии оценки вирулентности штаммов вируса клещевого энцефалита, изолированных на юге Дальнего Востока / Г.Н. Леонова, Л.М. Исачкова, С.П. Кругляк, О.С. Майстровская // Вопр. вирусол. -1995. №4. — С. 165-170.

89. Плетнев, А.Г. Нуклеотидная последовательность генома и полная аминокислотная последовательность полипротеина вируса клещевого энцефалита / А.Г. Плетнев, В.Ф. Ямщиков, В.М. Блинов // Биоорг. химия. -1989.- 15. -№11.-С. 1504- 1521.f

90. Погодина, В.В. Воспоминания о Елизавете Николаевне Левкович / В.В. Погодина. М.: Наука , 2001. -201 с.

91. Погодина, В.В. Мониторинг популяции вируса клещевого энцефалита и этиологической структуры заболеваемости за 60-летний период / В.В. Погодина // Вопр. вирусол. 2005. - № 3. - С. 7-13.

92. Погодина, В.В. Хронический клещевой энцефалит / В.В. Погодина, М.П.

93. ФроловагБгА—Врманг-Т1овосибирскгНаука,~1986.

94. Получение и изучение свойств антиидиотипических антител, несущих на своей поверхности паратопы вируса КЭ / Е.В. Протопопова, А.Д. Хусаинова, С.Н. Коновалова, В.Б. Локтев // Вопр. вирусол. 1996. - №2. - С. 50-53.

95. Применение молекулярно-генетических методик для изучнения структуры штаммов вируса клещевого энцефалита / Л.С. Карань, Г.В. Маленко, Н.Г. Бочкова и др. // Бюллетень СО РАМН. 2007. - №4(126). - С. 34-40.

96. Пространственно-временная характеристика заболеваемости ' клещевым энцефалитом в Приморском крае / Е.Е. Румянцева, В.М Воронок, Г.В. Андреева и др. // Дальневосточный Журнал Инфекционной Патологии. 2007. -№11.-С.111 - 112.

97. Реактогенность и иммунологическая эффективность концентрированной, очищенной вакцины против клещевого энцефалита / М.С. Воробьева, Л.Б. Эльберт, В.П. Грачев и др. // Вопр. вирусол. 19836. - №5. - С. 622-626.

98. Романенко, В.В. Заболеваемость клещевым энцефалитом в Свердловской области в условиях проведения массовой иммунизации населения / В.В.

99. Романенко, В.В. Опыт реализации программы массовой иммунизацииiнаселения против клещевого энцефалита в Свердловской области / В.В.

100. Романен1т,-М.С.-Есюнина^А^С.'Килячина/АВопр.'Вирусологииг-2007Г-"№6Г1. С.22-25.

101. Российская инактивированная сухая вакцина против клещевого энцефалита / М.Ф. Ворович, Ю.Х. Хапчаев, Н.С. Прилукова и др. // Биопрепараты. 2004. -№2 (14).-С. 17-20.

102. Сибирский и дальневосточный подтипы вируса клещевого энцефалита вгевропейских и азиатских регионах России: генетическая и антигенная характеристика штаммов / В.В. Погодина, Н.Г. Бочкова, JI.C. Карань и др. // Вопр. вирусол. 2004. - №1. - С. 20-23.

103. Смородинцев, А.А. Клещевой энцефалит и его вакцинопрофилактика / Смородинцев А.А., Дубов А.В. Л., 1986. - 230 с.

104. Соколова, Е.Д. Перспективы разработки живой вакцины против клещевогоэнцефалита на основе виркса Лангат ТР-21 (экспериментальное и клинико-эпидемиологические исследования): Автореф. дис. . докт. биол. наук /Е.Д. Соколова. СПб., 1997. - 44 с.

105. Сравнительный анализ- вирулентности сибирского и дальневосточного подтипов вируса клещевого энцефалита / В.В. Погодина, Н.Г. Бочкова, Л.С. Карань и др. // Вопр. вирусол. 2004. - № 6. - С. 24-30.

106. Татаринова, Л.Г. Характеристика очагов клещевого энцефалита в Приморском крае: Автореф. дис. . канд. мед. наук / Л.Г. Татаринова. Ленинград, 1962. 24 с.

107. Таточенко, В.К. Неблагоприятные события после вакцинации Электронный ресурс. / В.К. Таточенко // Бюллетень «Вакцинация». 2000. - №4 (10). -http://medi.ru/doc/l 5b 1006.htm

108. Хайнц, Ф. Молекулярные аспекты в изучении вируса клещевого энцефалита / Ф. Хайнц // Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2005. - №1 (20). - С. 317 34.

109. Характеристика современного состояния эпидпроцесса при клещевом энцефалите в Хабаровском крае / Г.М. Воронкова, Н.В. Кожевникова, Р.Н. Либерова и др. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. — 2005.- №6 (25). -С.6-Г2: ' ~

110. Цинкернагель, P.M. Открытые вопросы иммунологии / P.M. Цинкернагель // Избранные статьи. Екатеринбург: УрО РАН. - 2003. - С. 24-29.

111. Шаповал, А.Н. Клещевой энцефаломиелит / А.Н. Шаповал. Л.: Медицина, 1980.-256 с.

112. Эколого-генетический анализ региональной популяции вируса клещевого энцефалита в Восточной Сибири / М.М. Верхозина, В.И. Злобин, И.В. Козлова и др. // Бюллетень СО РАМН. 2007. - №4. - С. 53 - 59.

113. Эльберт, Л.Б. Сравнительный анализ тестов in vitro и in vivo количественной оценки иммуногенности вакцины клещевого энцефалита / Л.Б. Эльберт, М.Ф. Ворович, А.В. Тимофеев // Вопр. вирусологии. 1998. - №5. - С.236-237.

114. Эпидемиологическая характеристика клещевого энцефалита в Приморском крае / В.М. Воронок, Е.Е. Румянцева, Г.В. Андреева и др. // Дальневосточный Журнал Инфекционной Патологии. 2007. - № 11. - С. 110. '

115. Этиология и эпидемиология новой нейровирусной инфекции двухволнового вирусного менингоэнцефалита / А.А. Смородинцев, А.И. Дробышевская, В.И. Ильенко и др. // Нейровирусные инфекции. - Медгиз, 1954. - С.6-34.

116. Ястребов, В.К. Клещевой энцефалит в Сибири: эпидемиология, сочетанность природных очагов / В.К. Ястребов // Бюлл. СО РАМН. 2007. - №4. - С.89 - 93.

117. Ястребов, В.К. Сравнительная эпидемиология / В.К. Ястребов. Омск, 1998. -56 с.

118. Ястребов, В.К. Структура нозоареалов и особенности эпидемиологии клещевого энцефалита и клещевого риккетсиоза в Сибири / В.К. Ястребов // Клещевой энцефалит. Владивосток, 2002. - С. 130-136.

119. A case of tick-borne encephalitis in Japan and isolation of the virus /1. Takashima, K. Morita, M. Chiba et al. // J. Clin. Microbiol. 1997. - Vol. 35. - P. 1943-1947.

120. A new vaccine against tick-borne encephalitis: initial trial in man including a dose response study / H.L. Bock, U. Klockmann, C. Jiingst et al. // Vaccine. 1990. -Vol.8. - P.22 - 24.

121. A randomized phase II study of a new tick-borne encephalitis vaccine using three different doses and two immunization regimens / I. Harabacz, H. Bock, Ch. Jiingst et al.//Vaccine. 1992.-Vol. 10.-P. 145- 150.

122. A single amino acid substitution in envelope protein of tick-borne encephalitis virus leads to attenuation in the mouse model / H. Holzmann, F.X. Heinz, C.W. Mandl et al.//J. Virol. 1990.-Vol. 64.-P. 5156-5159.

123. An attempt to elucidate the increased incidence of tick-borne encephalitis and its spread to higher altitudes in the Czech Republic / M. Daniel, V. Danielova, B. Kriz, I. Kott // Int. J. Med. Microbiol. 2004. - Vol. 293. - Suppl. 37. - P. 55-62.

124. Antigenic relationships between flaviviruses as determined by cross-neutralization tests with polyclonal antisera / C.H. Calisher, N. Karabatsos, J.M. Dalrymple et al. // J. Jen. Virol. 1989. - Vol. 70. - Pt.l - P. 37-43.

125. Attenuation of tick-borne encephalitis virus by structure-based site-specific mutagenesis of a putative Flavivirus receptor binding site / C.W. Mandl, S.L. Allison, H. Holzmann et al. // J. Virol. 2000. - Vol. 74. - P. 9601-9609.

126. Barret, P.N. History of TBE vaccines / P.N. Barret, S. Schober-Bendixen, H.J. Ehrlich // Vaccine. 2003. -Vol. 21. - Suppl. l.-P. Sl/41 - Sl/49.

127. Broker, M. New foci of tick-borne encephalitis virus in Europe: Consequences for travellers from abroad / M. Broker, D. Gniel // Travel Medicine and Infection Disease. 2003. - № 1. - P. 181-184.

128. Changes in Antibody Avidity After Virus Infections: Detection by an Immunosorbent Assay in Which a Mild Protein-Denaturing Agent is Employed / S. Inouye, A. Hasegawa, S. Matsuno, SH. Katow //J. Clin. Microbiol. 1984. - Vol.20. -№3. - P.525-529.

129. Characterisation of human tick-borne encephalitis virus from Sweden / M. Haglund, S. Vene, M. Forsgren et al. // J. Med. Virol. 2003. - Vol.71. - P. 610-621.

130. Gharacterization ~and ^complete-genome sequences of High- and low-virulence variants of tick-bome encephalitis virus / G. Wallner, C.W. Mandl M. Ecker, et al. // J. Jen. Virol. 1996. - Vol. 77. - P. 1035-1042.

131. Characterization of monoclonal antibody-escape of tick-bome encephalitis virus with reduced neuroinvasiveness in mice / H. Holzmann, K. Stiasny, M. Ecker et al. // J. Jen. Virol. 1997. - Vol. 78. - P. 31-37.

132. Characterization of tick-bome encephalitis virus from Estonia / I. Golovljova, Sp. Vene, K.B. Sjolander et al. // J. Med. Virol. 2004. - Vol.74. - Issue 4. - P.580-588.

133. Clarke, D. H. Technique for hemagglutination and hemagglutination-inhibition with arthropod-borne viruses / D. H. Clarke, J. Casals // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1958. -Vol.7.-P. 561-563.

134. Cleavage of protein prM is necessary for BHK-21 cells by tick-bome encephalitis virus / S. Elshuber, S.L. Allison, F.X. Heinz, C.W. Mandl // J. Jen. Virol. 2003. -Vol. 84.-P. 183-191.t

135. Clinical evalution of a poligeline-free tick-borne encephalitis vaccine for an adolescents and adults / O. Zent, J. Beran, W. Jilg et al. // Vaccine. 2003. -Vol. 21. -Suppl.l. - P.738 - 741.

136. Comparison of six different commercial IgG-ELISA kits for the detection of TBEV-antibodies / M. Niedrig, D. Vaisviliene, A. Teichmann et al. // J. Clin. Virol. 2001. -Vol. 20.-P. 179-182.

137. Correlation between ELISA, hemagglutination inhibition, and neutralization tests after vaccination against tick-borne encephalitis / H. Holzmann, M. Kundi, K. Stiasny et al. // J. Med. Virol. 1996. - Vol. 48. - P. 102-107.

138. Distribution and characterization of tick-borne encephalitis viruses from Siberia and far^eastern Asia / D. Hayasaka, L. Ivanov, G. Leonova et al. // J. Gen. Virol. 2001. -Vol. 82. - P. 1319-1328.

139. Evaluation of European tick-borne encephalitis virus vaccine against recent Siberian ^ and far-eastern subtype strains / D. Hayasaka, A. Goto, K. Yoshii et al. // Vaccine. -2001.-Vol. 19.-P.4774-4779. V

140. Evidence for antigenic stability of tick-borne encephalitis virus by the analysis of natural isolates / F. Guirackhoo, A.C. Radda, F.X. Heinz, C. Kunz // J. Jen. Virol. -1987.-Vol. 68.-P. 859-864.

141. Flavivirus Genome Organization, Expression, and Replication / T.J. Chambers, C.S. Hahn, R. Galler, C.M. Rice // Annu. Rev. Microbiol. 1990. - Vol.44. - P. 650-688.»

142. Girgsdies, O.E. Tick-borne encephalitis: development of a pediatric vaccine. A controlled, randomized, double-blind and multicentre study / O.E. Girgsdies, G.Rosenkranz // Vaccine. 1996. - Vol. 14. - P.1421-1428.

143. Gritsun, T.S. The degree of attenuation of tick-borne encephalitis virus depends on the cumulative effects of point mutations / T.S. Gritsun, A. Desai, E.A. Gould // J. Gen. Virol. 2001. - Vol.82. - P. 1667 -1675.167 с

144. Gritsun, T.S. Tick-borne Flaviviruses / T.S. Gritsun, P.A. Nuttall, E.A. Gould // Adv. Virus.Res. 2003. - Vol.61. - P.317-371.

145. Hangartner, L. Antiviral antibody responses: the two extremes of a wide spectrum / L. Hangartner, R.M. Zinkernagel, H. Hengartner // Nature Rev.Immunol. 2006. -Vol. 6.-P. 231 -243.

146. Heinz, F.X. Epitope mapping of flavivirus glycoproteins / F.X. Heinz // Adv. Virus. Res. 1986. - Vol.31.-P.103-168.

147. Humoral immunity against tick-borne encephalitis vims following manifest disease and active immunization / U. Klockmann, H.L. Bock, H. Kwasny et al. // Vaccine. 1 1991.-Vol.9.-P.42-46.165т11шШШз|г1оЬиШТТГ7^^ between Early and Late Antibody

148. Responses to West Nile Virus / J.L. Fox, S.L. Hazell, L.H. Tobler, M.P. Busch // Clin. Vaccine Immunol. 2006. - Vol. 13. - №.1. - P.33-36.

149. Isolation of tick-borne encephalitis virus from wild rodents and a seroepizootiologic survey in Hokkaido, Japan / T. Takeda, T. Ito, M. Osada et al. // Am. J.' Trop. Med. Hyg. 1999. - Vol. 60. - № 2. - P. 287-291.

150. Juceviciene, A. Prevalence of tick-borne encephalitis virus antibodies in Lithuania / A. Juceviciene, O. Vapalahti, A. Laiskonis et al. // J. Clin. Virol. 2002. - Vol.25. -P. 23-27.

151. Kofler, R. M. Capsid Protein С of Tick-Borne Encephalitis Virus Tolerates Large Internal Deletions and Is a Favorable Target for Attenuation of Virulence / R. M. Kofler, F.X. Heinz, C.W. Mandl // J. Virol. 2002. - Vol. 76. - P. 3534-3543.

152. Kunz, С. TBE vaccination and the Austrian experience / C. Kunz // Vaccine. 2003. -Vol. 21. - Suppl.l. - P. 50-55.

153. Lindenbach, B.D. Flaviviridae / B.D. Lindenbach, C.M. Rice // Fields Virology / D.M. Knipe, P. Howley, D.E. Griffin et al. Lippincott Williams & Wilkins: Piladelphia, Pa, 2001. - P. 991-1041.

154. Macrenzie, J.M. Immunolocalization of the dengue virus nonstructural glycoprotein NS1 suggests a role in viral RNA replication / J.M. Macrenzie, M.K. Jones, P.R. Young // Virology. 1996. - Vol. 220. - P. 232-240.

155. Mandl, C.W. Steps of the tick-borne encephalitis virus replication cycle that affect neuropathogenesis / C.W. Mandl // Virus Res. 2005. - Vol. 110. - P. 161-174.

156. McMinn, P.C. The molecular basis of virulence of the encephalogenic flaviviruses / P.C. McMinn // J. Gen. Virol. 1997. - Vol. 78. - P. 2711-2722.

157. Novel variant of tickborne encephalitis virus, Russia / V.A. Temovoi, E.V. Protopopova, E.V. Chausov et al. // Emerg. Infect. Dis. 2007. - .Vol. 13. - № 10. -P.533 — 534.

158. Phylogenetic and virulence analysis of tick-bome encephalitis viruses from Japan and far-eastern Russia / D. Hayasaka, Y. Suzuki, H. Kariwa et al. // J. Gen. Virol.1999.-Vol. 80.-P. 3127 -3135.

159. Prevalence of antibodies against tick-borne encephalitis among residents of NorthEastern Poland / D. Prokopowicz, E. Bobrowska, M. Bobrowski, D. Grzeszczuk // Scand. J. Infect. Dis. 1995. - Vol.27. - P. 15-16.

160. Protection against European isolates of tick-borne encephalitis virus after vaccination with a new tick-bome encephalitis vaccine / U. Klockmann, K. Krivanec, J.R. Stephenson, J. Hilfenhaus // Vaccine. 1991. -Vol. 9. - P.210- 212.

161. Protection against tick-borne encephalitis virus isolated in Japan by active and passive immunization / N. Chiba, M. Osada, K. Komoro et al. // Vaccine. 1999. -Vol. 17.-P.1532 - 1539.

162. Randolph, S.E. Evidence that climate change has caused 'emergence' of tick-borne disease in Europe? / S.E. Randolph // Int. J. Med. Microbiol. 2004. - Vol. 293. -Suppl. 37.-P. 5- 15.

163. Randomized, phase II dose-finding studies of a modified tick-borne encephalitis vaccine: evaluation of safety and immunogenicity / H.J. Ehrlich, B.G. Pavlova, S. Fritsch et al. // Vaccine. 2003. -Vol. 22. - P.217 - 223.

164. Roehrig, J.T. Antigenic structure of flavivirus proteins / J.T. Roehrig // Adv. Virus. Res. 2003. - Vol.59. - P.141-175.

165. Safety, immunogenicity and tolerability of a new pediatric tick-borne encephalitis (TBE) vaccine, free of proteine-derived stabilizer / O. Zent, A. Banzhoff, A.K. Hi lbertetal.7/Vaccine. 2003. -Vol. 21. - P. 3584-Ш

166. Sequence analysis and genetic classification of tick-borne encephalitis viruses from Europe and Asia / M. Ecker, S.L. Allison, T. Meixner, et al. // J. Jen. Virol. 1999. -Vol. 80.-P. 179-185.

167. Seroepidemiologic study on tick-borne encephalitis among forestry' wocers and fanners from the Lublin region (Eastern Poland)/ E. Cisak, J.Sroka, J. Zwolinski, J. Uminski//Ann. Agric. Environ. Med. 1998. -Vol.5. -P. 177-181.

168. Seroprevalence of tick-borne infections in forestry rangers from northeastern Italy / M. Cinco, F. Barbone, M. Grazia Ciufolini et al. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. -Vol. 10. - Vol. 12. - P. 1056-1061.

169. Siiss, J. Epidemiology and ecology of TBE relevant to the production of effective vaccines / J. Suss // Vaccine. 2003. - № 21. - Suppl. 1. - P. 19-35.

170. Takeda, T. Isolation of tick-borne encephalitis virus from Ixodes ovatus (Acari:f1.odidae) in Japan / T. Takeda, M. Chiba, K. Takahashi et al. // J. Med. Entomol. -1998. -№35 (3). P. 227-231.

171. The role of antibody concentration and avidity in antiviral protection / M.F. Bachmann, U. Kalinke, A. Althage et al. // Science. 1997. - Vol. 276 - №5321. -P.2024-2027.

172. Tick-borne encephalitis in Southern Norway / P. A. Csango, E. Blakstad, G. C. Kirtz et al. // Emerg. Infect. Dis. 2004. - Vol.10. - № 3. - P.533 - 534.

173. Tick-borne encephalitis virus in Lithuania / A. Mickiene, S. Vene, I. Golovljova etal. /ГЁш\ I Clin. Microbiol Infect. Dis. 2001. - Vol.20. - №12. - P. 886-888.

174. Tick-Borne Encephalitis with Hemorrhagic Syndrome, Novosibirsk Region, Rassia, 1999 / V.A. Ternovoy, G.P. Kurzhukov, Y.V. Socolov, et al. // Emerg: Inf. Dis. -2003.-Vol. 9.-P. 743 -746.

175. Tick-borne virus disease of human interest in Europe / R.N. Charrel, H. Attoui, A.M. Butenko et al. // Clin. Microbiol. Inf. 2004. - Vol. 10. - P. 1040 - 1055.

176. Zeman, P. A tick-borne encephalitis ceiling in Central Europe has moved upwards during the last 30 years: possible impact of global warming? / P. Zeman, C. Benes // Int. J. Med. Microbiol. 2004. - Vol. 293. - Suppl. 37. - P. 48-54.