Критерии прогнозирования иммунного ответа доноров на вакцину клещевого энцефалита тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.29, кандидат биологических наук Вальцева, Людмила Николаевна

• Вальцева, Людмила Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Вальцева, Людмила Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. КЛЕЩЕВОЙ ЭНЦЕФАЛИТ, СОВРЕМЕННЫЕ СРЕДСТВА ИММУНОПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ (обзор литературы).

1.1 Эпидемиология клещевого энцефалита

1.2 Этиология, патогенез и диагностика клещевого энцефалита.

1.3 Противовирусный иммунитет. Основные средства профилактики и терапии клещевого энцефалита.

1.4 Определение потенциального иммунного ответа индивида на введение антигена.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Получение образцов иммунной плазмы.

2.2 Методы определения содержания специфических антител в образцах иммунной плазмы.

2.3 Иммуногематологические исследования.

2.4 Метод медицинской статусметрии.

2.5 Статистический анализ.

ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУННОГО ОТВЕТА ДОНОРОВ НА ВАКЦИНЫ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА.

3.1 Активность гуморального иммунитета у вакцинированных.

3.2 Сравнительное исследование титров антител к вирусу клещевого энцефалита у вакцинированных доноров методом РТГА и ИФА.

ГЛАВА 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОТЕНЦИАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА ИНДИВИДА НА ВАКЦИНУ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА.

4.1 Факторы, влияющие на активность иммунного ответа у доноров при вакцинации.

4.2 Ассоциация активности гуморального иммунного ответа на вакцину КЭ с HLA - фенотипом.

4.3 Особенности иммунного ответа индивида на вакцину клещевого энцефалита в зависимости от HLA-аллелей класса II (локусов DR и DQ).

4.4 Выявление потенциально активных антителопродуцентов на основе учета комплекса присущих организму признаков.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Критерии прогнозирования иммунного ответа доноров на вакцину клещевого энцефалита»

Актуальность проблемы.

Согласно рекомендациям ВОЗ (1982) одной из важнейших областей применения иммуноглобулинов является профилактика и лечение вирусных инфекций, резистентных к химиопрепаратам [74].

Актуальность проблемы профилактики и терапии КЭ определяется высоким уровнем заболеваемости, тяжелыми последствиями болезни и высокой летальностью (до 40%) [19, 50, 82, 110, 138]. Заболевание широко распространено на территории 27 стран, от Франции до Японии [23, 62, 142, 144, 171, 177, 179, 181]. В странах Европы ежегодно регистрируют до 3 тыс. случаев КЭ, при этом отмечают высокий уровень заболеваемости детей и подростков (до 70%) [130, 132, 168, 178]. В России во второй половине XX века ареал КЭ расширился, сложились благоприятные условия для повышения эпидемиологического потенциала природных очагов инфекции. Если до 1984 года показатель заболеваемости составлял 1,5-2,5 случая на 100 тыс. населения, то в последующий период он принимал значения от 3,5 до 7 случаев на 100 тыс. населения, что соответствует 5-10 тыс. случаев заболеваний КЭ в год [35, 36, 37, 62, 81]. Треть заболевших составляют дети [19, 20, 49, 62, 86]. Практически повсеместное распространение природных очагов КЭ на территории нашей страны указывает на необходимость создания эффективных мер профилактики и терапии этого заболевания [19,20, 73, 82, 85].

Практическое здравоохранение располагает двумя отечественными и тремя зарубежными вакцинами против КЭ, зарегистрированными в Федеральном агентстве по здравоохранению и социальному развитию [10,13,15,100]. Вместе с тем, ежегодно проводимая вакцинация охватывает лишь 2-3 млн. человек, что составляет около 2% населения РФ. По этой причине снижения общей заболеваемости КЭ не происходит [10, 48, 62, 73, 85]. Следовательно, необходимы препараты, которые могут обеспечить надежную защиту населения от клещевого энцефалита [15,19, 75,76].

На сегодняшний день основным средством терапии КЭ является донорский иммуноглобулин, содержащий антитела к вирусу клещевого энцефалита (ВКЭ) и предназначенный для внутримышечного или внутривенного введения [48, 61, 75, 76, 86, 99, 110]. Иммуноглобулин с высокими титрами специфических антител (более 1:320) используют для экстренной профилактики КЭ. Своевременное применение специфических иммуноглобулинов позволяет снизить заболеваемость КЭ более, чем в 5 раз, а в случае заболевания избежать осложнений и летальности [65, 87, 110]. Однако потребности здравоохранения в этих препаратах удовлетворены далеко не полностью [10, 45, 62, 99, 110, 132, 133]. Производство иммуноглобулинов против КЭ затруднено тем, что при использовании серологического скрининга плазмы невакцинированных доноров не удается заготовить необходимый объем иммунного сырья. Кроме того, причиной дефицита и высокой стоимости аллогенных иммунных препаратов крови является ограниченность кадров доноров, их большой отсев в процессе обследования и иммунизации [9, 66,93 17, 64, 66,93, 94^5].

Существующая система комплектования групп иммунных доноров не предусматривает учет генетически обусловленных особенностей иммунного'' ответа индивида на конкретную вакцину. При этом вакцинации подвергается значительная часть ареактивных в отношении продукции специфических? антител лиц. Плазма этих доноров не может быть использована для производства иммуноглобулинов, а антигенные нагрузки на организм донора оказываются неоправданными.

Заготовить необходимые объемы плазмы крови для производства иммуноглобулинов, повысить специфическую активность препаратов и одновременно рационально использовать донорский контингент позволяет новый подход к комплектованию групп иммунных доноров, а именно -целенаправленный отбор доноров, у которых предполагается активная выработка специфических антител [17, 55].

Иммунный ответ на вакцину трудно прогнозировать, однако это возможно. Необходимый эффект при вакцинации, по-видимому, в существенной мере определяется антигенным составом тканей организма [16, 17, 55, 64, 107]. Для ряда вакцин показана ассоциация иммунного ответа с антигенами лейкоцитов и эритроцитов [17, 55, 89]. В частности, разработан способ определения потенциальной активности антителопродукции индивида на стафилококковый и столбнячный анатоксины, в основу которого положена идентификация HLA-фенотипа у вакцинированных [17]. Исходя из сказанного, можно полагать, что перспективы иммунного донорства во многом связаны с решением проблемы целенаправленного отбора лиц с предположительно активной выработкой специфических антител, т.е. изучение критериев определения потенциального иммунного ответа доноров на вакцины весьма актуально.

Цель исследования - разработка критериев прогнозирования активности антителопродукции у доноров, иммунизированных вакциной клещевого энцефалита.

Задачи исследования:

1. Оценить иммунный ответ доноров на «Вакцину клещевого энцефалита ■ культуральную очищенную концентрированную инактивированную сухую» производства Института полиомиелита и вирусных энцефалитов, им. М.П. Чумакова РАМН (г. Москва) по титру специфических антител в реакции торможения гемагглютинации и по длительности сохранения титра. Сравнить активность антителопродукции у доноров в зависимости от схемы вакцинации.

2. Сопоставить титры специфических антител в образцах иммунной плазмы доноров при исследовании в реакции торможения гемагглютинации и иммуноферментном анализе.

3. Изучить характер распределения антигенов систем HLA, АВО, Резус у вакцинированных с разной активностью антителопродукци; исследовать выраженность иммунного ответа доноров в зависимости от пола и возраста.

4. Разработать функциональную модель для прогнозирования активности гуморального иммунного ответа индивида на вакцину КЭ.

5. Апробировать функциональную модель при вакцинации доноров на станции переливания крови ФГУ «КНИИГиПК Росздрава» и ГУЗ «Свердловская ОСПК».

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Интенсивность выработки специфических антител у лиц, вакцинированных против КЭ, ассоциирована с лейкоцитарными антигенами. Существует положительная и отрицательная ассоциация активности продуцирования специфических антител к вирусу КЭ с HLA-фенотипом. Комплектование групп иммунных доноров целесообразно осуществлять с учетом выявленных ассоциаций.

2. Активность гуморального иммунного ответа индивида на вакцину КЭ зависит от возраста и пола вакцинированного. Функциональная модель, построенная на основе количественного учета комплекса присущих индивиду признаков, в числе которых пол, возраст, антигены системы HLA, АВО, Резус, позволяет повысить точность прогнозирования выраженности иммунного ответа индивида на вакцину КЭ.

Научная новизна.

Впервые показана возможность прогнозирования иммунного ответа индивида на вакцину клещевого энцефалита. Выявлены факторы, влияющие на активность антителопродукции у доноров при вакцинации. Установлена связь интенсивности выработки специфических антител с HLA-фенотипом индивида. Разработана функциональная модель, позволяющая прогнозировать иммунный ответ на вакцину КЭ путем учета комплекса присущих организму признаков. Подана заявка на предполагаемое изобретение (уведомление о положительном результате формальной экспертизы от 4.04.2005 г., МКИ G01 №33/50).

Практическая значимость.

Представляется практически важным привлекать к иммунизации с целью производства специфических препаратов потенциально активных антителопродуцентов, тем самым создаются условия для рационального распределения ограниченных донорских ресурсов. Отказ от иммунизации ареактивных индивидов позволяет избежать неоправданных антигенных нагрузок на организм донора. Рекомендуемый способ прогнозирования иммунного ответа доноров на вакцину КЭ обеспечивает достаточную для практических нужд точность прогноза. Его применение позволяет повысить процент иммуноактивных лиц среди вакцинированных с 67,4±6,6% до 80±3,02%, что способствует увеличению объемов заготовки плазмы специфической направленности. Модуль для прогнозирования иммунного ответа, разработанный на Delphi (Приложение), позволяет использовать полученные в результате исследования данные в работе учреждений службы крови, занимающихся направленной иммунизацией доноров. Способ прогнозирования иммунного ответа доноров на вакцину КЭ используется при отборе доноров для иммунизации в отделе комплектования доноров СПК института и ГУЗ «Свердловская ОСПК», что позволило повысить эффективность вакцинации и увеличить титр специфических антител в иммуноглобулинах против клещевого энцефалита.

Апробация работы.

Основные положения и результаты работы доложены на научно-практической конференции «Клиника, диагностика, профилактика, лечение клещевого энцефалита» (Киров, 1999 г.), итоговых научных конференциях Кировского НИИ гематологии и переливания крови (2000 г., 2002 г.), заседании^ областного общества гематологов и трансфузиологов (2001 г., 2005 г.), научно-практической конференции "Трансфузиология - проблемы перехода к компонентному донорству" (ГНЦ РАМН, Москва, 2002 г.). По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 2 в центральной печати.

Объем и структура работы.

Диссертация изложена на 104 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием объектов и методов, двух глав с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Библиография включает 187 источников, из них 111 отечественных и 76 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 9 рисунками и 19 таблицами.

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Вальцева, Людмила Николаевна

выводы

1. Разработаны критерии прогнозирования активности антителопродукции у лиц, иммунизированных вакциной клещевого энцефалита. Значимым для прогнозирования иммунного ответа оказалось наличие в фенотипе антигенов системы HLA A3, В7, В13, В14 и комбинаций А2-В13, АЗ-В7, А9-В13, А19-В13. Активность гуморального иммунного ответа индивида на вакцину КЭ зависит от возраста и пола.

2. Предложена функциональная модель для отбора потенциально активных антителопродуцентов при иммунизации вакциной КЭ, основанная на количественном учете комплекса присущих индивиду признаков, в числе которых пол, возраст, антигены системы HLA, АВО, Резус.

3. Вакцинация доноров против клещевого энцефалита является необходимым условием для обеспечения сырьевой базы производства специфических иммуноглобулинов. При этом количество серопозитивных доноров достигает 67,4%, что значительно превышает результаты серологического скрининга' плазмы невакцинированных доноров на наличие антител к вирусу (7,6%).

4. Применение рекомендуемых инструкцией схем вакцинации не выявило статистически значимых различий в гуморальном иммунном ответе доноров. Для иммунизации с целью производства иммуноглобулинов предпочтительнее использовать трехкратную схему вакцинации, поскольку она позволяет в более короткие сроки получить требуемый уровень антител в плазме доноров.

5. Тактика лабораторного исследования плазмы доноров для производства и иммуноглобулинов против КЭ должна основываться преимущественно на использовании ИФА, позволяющего выявить на 5% больше образцов с необходимым для производства иммуноглобулинов титром антител.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одной из опасных нейровирусных инфекций, широко распространенных на территории нашей страны, является клещевой энцефалит, отличающийся тяжестью и длительностью течения, грубыми остаточными явлениями после перенесенного заболевания, высоким процентом летальных исходов (более 40% в районе Дальнего Востока) [10,23,108,133 ].

Основным средством профилактики и терапии этой инфекции является донорский специфический иммуноглобулин [46, 48, 61, 65, 76, 86, 87, 110, 111]. Введение иммуноглобулина позволяет создать в крови оптимальную концентрацию антител к ВКЭ, что необходимо для нейтрализации возбудителя. Однако потребности здравоохранения в этом препарате удовлетворяются далеко не полностью.

Производство иммуноглобулинов против КЭ затруднено тем, что при использовании серологического скрининга плазмы невакцинированных доноров не удается заготовить необходимый объем иммунного сырья. Кроме того, причиной дефицита аллогенных иммунных специфических препаратов крови является ограниченность кадров иммунных доноров, их большой отсев в процессе обследования и иммунизации. Известно, что далеко не каждый донор отвечает на вакцинацию выработкой антител в титре, достаточном для производства иммуноглобулинов. Поэтому представляется практически важным привлекать к иммунизации лиц с предположительно активной выработкой антител. Такой подход к комплектованию групп иммунных доноров позволяет рационально использовать донорский контингент, заготовить необходимые объемы иммунной плазмы и избежать неоправданных антигенных нагрузок на организм доноров.

В настоящее время доказано, что активность иммунного ответа обусловлена генетически, и в значительной мере определяется антигенным составом тканей организма [16, 55, 89, 103, 105, 107]. Для ряда вакцин разработаны критерии прогнозирования индивидуальной активности гуморального иммунного ответа [17, 55, 89].

Целью настоящего исследования явилась разработка критериев прогнозирования активности антителопродукции у доноров, иммунизированных вакциной клещевого энцефалита.

Для достижения поставленной цели требовалось решить следующие задачи:

1. Оценить иммунный ответ доноров на «Вакцину клещевого энцефалита культуральную очищенную концентрированную инактивированную сухую» производства Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН (г. Москва) по титру специфических антител в реакции торможения гемагглютинации и по длительности сохранения титра. Сравнить активность антителопродукции у доноров в зависимости от схемы вакцинации.

2. Сопоставить титры специфических антител в образцах иммунной плазмы доноров при исследовании в реакции торможения гемагглютинации и иммуноферментном анализе.

3. Изучить характер распределения антигенов систем HLA, АВО, Резус у вакцинированных с разной активностью антителопродукци; исследовать выраженность иммунного ответа доноров в зависимости от пола и возраста.

4. Разработать функциональную модель для прогнозирования активности гуморального иммунного ответа индивида на вакцину КЭ.

5. Апробировать функциональную модель при вакцинации доноров на станции переливания крови ФГУ «КНИИГиПК Росздрава» и ГУЗ «Свердловская ОСПК».

Важнейшей характеристикой препаратов иммуноглобулина против вируса КЭ является содержание в них специфических антител, которое определяет эффективность препарата как лечебного средства и зависит от наличия соответствующих антител в исходном сырье - плазме крови доноров [55, 64, 99, 110, 111]. Традиционным методом заготовки сырья для получения специфических иммуноглобулинов является использование серологического скрининга донорской плазмы на наличие естественных антител к возбудителю. Скрининг 1160 образцов плазмы доноров из различных районов Кировской области, проведенный в 1996-1998 гг., показал, что количество лиц с содержанием антител к ВКЭ в плазме не менее 1:10 составляет в среднем 7,6% [54]. В результате исследования сделан вывод, что при использовании серологического скрининга плазмы невакцинированных доноров не удается заготовить необходимый для производства иммуноглобулина объем иммунного сырья.

В связи с вышесказанным уже в 1996 году на СПК института внедрили метод иммунизации доноров вакциной КЭ с целью обеспечения сырьевой базы производства. Для иммунизации использовали «Вакцину клещевого энцефалита культуральную очищенную инактивированную сухую концентрированную производства ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН». Инструкция по применению вакцины предусматривает использование двух схем иммунизации (двукратная и трехкратная) и ревакцинацию через 1 год после завершения первичного курса вакцинации. Вакцинировали 51 донора по схеме 1 и 283 , доноров по схеме 2.

Иммунный ответ индивида на вакцину клещевого энцефалита оценивали по содержанию в плазме специфических антител методом РТГА с диагностикумом клещевого энцефалита сухим производства НПО «Вирион» (г. Томск). Активность специфического гуморального иммунитета исследовали в динамике на протяжении периода сохранения необходимого для производства препарата титра антител. Среди вакцинированных доноров выделили две группы: первая - доноры со слабым гуморальным ответом с титром АТ-ВКЭ ниже 1:10 и продолжительностью сохранения титров менее 60 дней, вторая -доноры с активным иммунным ответом с титром АТ-ВКЭ не ниже 1:10 и продолжительностью сохранения титра не менее 60 дней. При этом титр 1:10 считали низким, 1:20- средним, 1:40 и более - высоким.

Провели сравнение эффективности схем иммунизации. На вакцинацию по схеме 1 активной выработкой антител ответили 32 (62,7 %) донора, иммунизация по схеме 2 вызвала активный иммунный ответ у 193 (68,2%) доноров. Длительность циркуляции антител была прямо пропорциональна величине титра. Продолжительность сохранения титра в случае выявления у доноров низких титров АТ-ВКЭ - в среднем 8 нед., в случае средних титров -16-17 нед., высоких титров -21-25 нед.

В результате ревакцинации активными антителопродуцентами оказались при двукратной иммунизации 23 (74,2 %) донора, после трехкратной иммунизации - 85 (70,2%) доноров. Положительный иммунный ответ на повторную ревакцинацию наблюдали у 9 (81,8%) доноров и у 46 (85,1%) доноров соответственно для иммунизации по схеме 1 и схеме 2. Различия в иммунном ответе доноров, вакцинированных по схемам 1 и 2, не были статистически значимы, как в случае первичной иммунизации (%2 =0,36, р>0,05), так и при ревакцинации I и II (%2 =0,04, р>0,05; %2 =0,03, р>0,05 соответственно). Предпочтение отдали трехкратной вакцинации, которая позволяет в более короткие сроки заготовить иммунную плазму.

Многолетняя практика иммунизации свидетельствует, что определенная часть привитых лиц не отвечает активной антителопродукцией на введение антигена. Действительно, при иммунизации 334 доноров СПК института вакциной КЭ у 109 человек (32,6%) отметили слабый иммунныйответ. В результате иммунизации 216 доноров ГУЗ «Свердловская ОСПК» активной выработкой антител ответили 119 (55,1%) доноров, слабой антителопродукцией - 97 (44,9%) доноров.

Таким образом, опыт иммунизации доноров показал, что более, чем у 30% вакцинированных титр антител к вирусу КЭ не достигает 1:10 в РТГА. Плазма этих доноров не может быть использована для производства иммуноглобулинов против КЭ. Привлекать этих доноров к намеренной вакцинации нецелесообразно.

Одной из причин высокого процента доноров с отсутствием протективного титра специфических антител может быть низкая чувствительность метода исследования. При отборе иммунной плазмы для производства иммуноглобулинов против КЭ используют метод РТГА согласно утвержденной документации. В настоящее время одним из альтернативных диагностических тестов стал твердофазный иммуноферментный анализ. С целью изучения преимуществ применения метода твердофазного ИФА для выявления уровня серологической активности донорской плазмы, исследовали 178 образцов сыворотки крови в параллельных опытах методом РТГА с диагностикумом КЭ производства НПО «Вирион» (г. Томск) и методом ИФА с использованием тест-системы «ВектоВКЭ-^-стрип».

Титры антител к ВКЭ менее 1:10 в РТГА и не более 1:400 в ИФА расценивали как низкую специфическую активность плазмы, титры АТ-ВКЭ 1:10 и выше в РТГА и выше 1:400 в ИФА считали выраженной специфической активностью. Специфическая активность охарактеризована как низкая в 53 образцах плазмы (29,8%) по результатам РТГА, и в 44 образцах плазмы (24,7 %) в ИФА.

Методом РТГА выраженная специфическая активность плазмы выявлена в 70,2% образцов (125 проб). Титр АТ-ВКЭ 1:10 выявили в 56 образцах (31,5 % ), титр 1:20 — в 45 образцах (25,3 %), с титром 1:40 - 9 % (16 проб), с титром 1:80 - 1,7 % (3 пробы), с титром 1:160 - 2,3 % (4 пробы), с титром 1:320 - 0,6% (1 проба). Специфическая активность охарактеризована как низкая в 53 образцах плазмы (29,8%).

Использование метода ИФА позволило отнести к группе с выраженной спецической активностью 75,3% образцов (134 пробы): ): титр 1:800 зарегистрировали в 47 образцах (26,4 %), титр 1:1600 - в 42 образцах (23,6 %), титр 1:3200 - в 27 образцах (15,2 %), титр 1:6400 - в 9 образцах (5,0 %), титр 1:12800 - в 3,4 % (6 проб), титр 1:25600 - в 1,7% (3 пробы). Низкую специфическую активность выявили в 15 образцах (8,40%) с титром антител менее 1:400 и в 29 образцах (16,30%) с титром 1:400.

Таким образом, показана более высокая чувствительность и специфичность ИФА при выявлении АТ-ВКЭ по сравнению с РТГА. Учитывая большую информативность метода ИФА, сделали вывод, что тактика лабораторного исследования плазмы доноров с целью заготовки сырья для производства иммуноглобулинов против КЭ должна быть основана преимущественно на использовании ИФА. Вместе с тем, сравнение результатов титрования плазмы двумя методами показало, что высокий процент доноров с отсутствием протективного титра специфических антител, по-видимому, связан не только с чувствительностью метода исследования, а в большей степени с индивидуальными особенностями организма.

На сегодняшний день получены убедительные свидетельства того, что активность гуморального иммунного ответа обусловлена генетически. Для многих вакцин показана ассоциация активности иммунного ответа с биологическими параметрами, в том числе и с тканевыми антигенами, в частности с антигенами лейкоцитов и эритроцитов. Таким образом, научно обоснована и практически доказана возможность прогнозирования иммунного ответа на антиген.

У 334 доноров, иммунизированных вакциной КЭ, проанализировали зависимость активности гуморального иммунитета от пола, возраста, групповой (АВО), резус-принадлежности. Доноры были разделены на три возрастные группы: I - от 20 до 29 лет (107 человек), II - от 30 до-39 лет (161 человек), III -40 лет и старше (66 человек).

В выделенных группах процент активно ответивших на вакцину КЭ доноров составил 72,9% (78 человек), 70,2% (113 человек), 51,5% (34 человека) соответственно в первой, второй и третьей группах. Доля доноров со слабым иммунным ответом составила 27,1% (29 человек), 29,8% (48 человек) и 48,5% (32 человека) соответственно. Доноры III группы достоверно чаще отвечали на ВКЭ слабой выработкой специфических антител.

Среди 209 вакцинированных женщин активно на вакцину КЭ ответили 157 (75,1%), среди 125 мужчин - 68 (54,5%). Расчеты показали, что женщины достоверно чаще отвечали активно на вакцину КЭ.

Среди вакцинированных с разной активностью иммунного ответа рассчитали частоту встречаемости групп крови (АВО) и антигена D системы Резус. Произведенные расчеты не позволили установить ассоциацию активности иммунного ответа с наличием эритроцитарных антигенов

Таким образом, при изучении иммунного ответа доноров на вакцину КЭ удалось выявить признаки (возраст и пол индивида), ассоциирующиеся с разной активностью иммунного ответа. Наибольший эффект иммунизации может быть достигнут при вакцинации женщин молодого возраста. Однако учет лишь этих параметров недостаточен для эффективного отбора доноров для намеренной вакцинации.

Для разработки критериев прогнозирования иммунного ответа индивида на вакцину КЭ у 200 вакцинированных сопоставили активность антителопродукции с HLA-фенотипом. Группа доноров с активной антителопродукцией включала 110 человек, со слабо выраженным иммунным ответом - 90 человек. В результате исследования выявили положительную и отрицательную ассоциацию активности продуцирования специфических антител к вирусу КЭ с HLA-антигенами. Статистическую значимость различий полученных результатов оценивали, используя критерий %2, уровень значимости а=0,05 (р<0,05) при df=l. Полученные данные убедительно свидетельствуют, что активный иммунный ответ доноров на вакцину КЭ ассоциирован с антигенами A3 (х2= 14,08; р=0,00018), В7 (х-5,41; р=0,02014), В14 (х2=7,70; р=0,00560) и сочетаниями антигенов АЗ-В7, АЗ-В15; слабый иммунный ответ - с антигенами А19 (х2=5,09; р=0,0253), В13 (х2=19,17; р=0,00001), В40 (х2=7,71; р=0,00580) и сочетаниями антигенов В13-В27 (х2=4,20; р=0,04042), А2-В13, А9-В13, А9-В40; А11-В15, А19-В13.

Чтобы оценить силу ассоциативной связи между способностью индивида к специфической антителопродукции и HLA-фенотипом, сопоставили частоту встречаемости HLA- антигенов в группах доноров с активной и слабой антителопродукцией с таковой в группе сравнения (795 интактных доноров). Определили показатель относительного риска (RR) и величину этиологической фракции (EF). Величина EF показывает, что активный иммунный ответ у 15-19% доноров ассоциирован с антигенами HLA - A3, В7, а слабый ответ у 19% доноров связан с HLA - В13. Показатель RR позволил отметить, что в случае присутствия в фенотипе донора антигенов и сочетаний антигенов, с которыми ассоциируется выраженный иммунный ответ, вероятность активной антителопродукции увеличивается в 1,7-2,4 раза. При наличии в фенотипе донора антигенов и сочетаний антигенов, с которыми ассоциируется слабый иммунный ответ, доля лиц, отвечающих низкими титрами на вакцину КЭ, увеличивается в 1,6 - 6,6 раза.

Проанализировав характер иммунного ответа 122 доноров на ревакцинацию в зависимости от HLA-фенотипа, установили, что активный вторичный иммунный ответ ассоциирован с антигеном HLA-B14 (% =7,36, р= 0,00660, RR=2,93, EF=0,08), слабо выраженный вторичный иммунный ответ обусловлен присутствием в фенотипе донора антигена

HLA-B16 х2 =12,35, р=0,00050, RR =4,19; EF=0,16) и сочетания антигенов А9-В13 (RR= 8,84; EF=0,05).

Исходя из вышеизложенного, разработали способ прогнозирования иммунного ответа донора на вакцину КЭ по наличию в фенотипе указанных антигенов. Для этого у донора берут 3-5 мл дефибринированной или гепаринизированной крови и выделяют из нее лимфоциты путем центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографина. Определяют антигенный состав лимфоцитов в стандартном микролимфоцитотоксическом тесте по коллекции типирующих сывороток. При выявлении у донора антигенов^ В13, В16 или комбинации антигенов В13-В27, А2-В13, А9-В13, А9-В40, А11-В15, А19-В13 рекомендуется отклонять его от иммунизации, т.к. у носителей ? указанных антигенов зарегистрирован слабый первичный и вторичный иммунный ответ на вакцину КЭ. Лица, имеющие в фенотипе антигены A3, В7, В14 или сочетания антигенов АЗ-В7, АЗ-В15, отвечают более активной выработкой антител к вирусу КЭ, и поэтому при комплектовании групп иммунных доноров целесообразно привлекать этих лиц к иммунизации. Предложенный способ считали предварительным.

Из данных литературы известна связь генов локусов DR и DQ системы HLA с активностью антителообразования при инфицировании различными агентами. У 40 вакцинированных доноров определяли аллели генов локусов DR и DQ и исследовали активность выработки специфических антител. Активно на вакцинацию ответили 19 человек (титр АТ-ВКЭ >1:10), слабый иммунный ответ зарегистрировали у 21 донора (титр АТ-ВКЭ <1:10). Отметили различие в частоте встречаемости специфичностей HLA- DRB1*07, HLA-DRB1*10, HLA-DRB1*12, HLA-DRB1*17, HLA-DQB 1*0201, HLA-DQB 1*0302, HLA-DQB1*301,*501 в группах доноров с разным иммунным ответом. Однако ввиду небольшой выборки обследованных, не удается констатировать ассоциацию активности иммунного ответа с наличием аллелей генов локусов DR и DQ. Сложность и высокая стоимость определения аллелей генов HLA класса II ограничивает возможность их использования в качестве маркеров прогнозирования иммунного ответа.

Чтобы повысить точность прогнозирования выраженности иммунного ответа, разработана функциональная модель на основе количественного учета комплекса присущих индивиду признаков. В результате многочисленных сопоставлений показателей, свойственных донорам с разным иммунным ответом на вакцину, выделили 21 информативный показатель: HLA-антигены Al, А2, A3, А9, А10, Al 1, А19, А28, В7, В12, BI3, В14, В21, В27, В40, группы крови В, АВ, отрицательный резус-фактор, возраст в интервале 20-29 лет ( W1), возраст в интервале 30-39 лет (W2), мужской пол (М). Перечисленные показатели вошли в качестве переменных в функциональную модель, связывающую значение дискриминантной функции (Z) - интегральный показатель активности антителопродукции - с набором информативных признаков.

Способ определения потенциальной индивидуальной иммунореактивности осуществляется следующим образом. У донора определяют HLA-фенотип в стандартном микролимфоцитотоксическом тесте по набору типирующих сывороток, группу крови, резус-принадлежность, учитывают возраст и пол.

По формуле вычисляют интегральный показатель активности антителопродукции.

Z = - 0,8074 + 0,2608 х А1 + 0,1993 х А2 + 1,3890 х A3 + 0,2842 х А9 + 0,7759 х А10 - 0,3302 х Al 1 - 0,2933 х А19 + 1,802 х А28 + 0,3659 х В7 + 0,5806х хВ12- 1,514х В13+ 1,6456хВ14+ 1,8221 хВ21 +0,2853 хВ27- 1,7906 хВ40-- 1,1993 х В - 1,5116 х АВ - 0,3640 х М + 0,7729 х d + 0,5610 х W1 + 0,5286 х xW2

Признаки принимают значение 1, если они имеются у тестируемого лица, и 0 - если отсутствуют. Величина - 0,8074 служит вводным коэффициентом.

По разработанному правилу прогнозируют иммунный ответ донора: если Z > 0,220, прогнозируется активный иммунный ответ, если Z < - 0,210, прогнозируется слабый иммунный ответ, если - 0,210 < Z< 0,220 , решение неопределенное. Лиц с предположительно активным иммунным ответом рекомендуется включать в группу для иммунизации вакциной КЭ. При применении решающего правила уровень доверительной вероятности составляет 80%. Способ определения потенциальной иммунореактивности индивида на вакцину КЭ апробирован у 36 типированных иммунных доноров СПК института и у 139 доноров ГУЗ «Свердловская ОСПК» (г. Первоуральск).

В группе доноров института правильный прогноз иммунного ответа констатировали у 31 человека (86,1%) и неверный - у 5 человек (13,9%). Среди доноров ГУЗ «Свердловская ОСПК» прогноз осуществлен правильно у 109 человек (78,4%) и неверно - у 30 человек (21,6%). В целом правильно прогнозировали активность иммунного ответа у 80% доноров. У больных с диагнозом КЭ прогноз иммунореактивности был корректен в 9 случаях из И (81,8 %). По-видимому, целесообразно использовать предложенный способ прогнозирования иммунного ответа на основе учета комплекса присущих организму признаков не только для вакцинированных доноров, но и для инфицированных вирусом КЭ. Разработанная модель прогнозирования иммунного ответа доноров на вакцину КЭ может быть рекомендована для практического использования в учреждениях службы крови, осуществляющих вакцинацию доноров с целью получения плазмы или препаратов специфической направленности.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Вальцева, Людмила Николаевна, 2006 год

1. Анализ генетической вариабельности штаммов вируса клещевого энцефалита по первичной структуре фрагмента гена белка оболочки Е / В. И. Злобин, Т.В. Демина, Л.В. Мамаев и др. //Вопр. вирусологии. -2001. - Т. 46, №1. - С. 12 -16.

2. Апоптоз как механизм цитопатического действия вируса клещевого энцефалита / М.П. Исаева, Г.Н. Леонова, В.Б. Кожемяко и др. // Вопр. вирусологии. 1998. - № 4. - С. 182 - 186.

3. Большев Л.Н., Смирнов Н.В. Таблицы математической статистики. М.: Наука, 1983.-415 с.

4. Верета Л.А., Воробьева М.С. Природная гетерогенность и целенаправленный отбор штаммов вируса клещевого энцефалита. М.: Медицина, 1990. - 128 с.

5. Взаимодействие РНК вируса клещевого энцефалита с белками / О.В. Морозова, Н.А. Фоменко, Ю.В. Бугрышева и др. // Вопр. вирусологии. -2001. -№2.-С. 13-17.

6. Волегова Г.М. Иммунная плазма в терапии клещевого энцефалита / Г.М. Волегова, С.А. Леонтьев, Э.Э. Эйхнер // Иммунопрофилактика, иммунодиагностика, иммунокоррекция. Омск, 1994.-С. 16-18.

7. Воробьева М.С. Современное состояние вакцинопрофилактики клещевого энцефалита / М.С. Воробьева // Мед. кафедра. 2003. - №2 (6). - С. 24 - 26.

8. Генетическое типирование штаммов вируса клещевого энцефалита на основе анализа уровней гомологии фрагмента гена белка оболочки / В.И. Злобин, Т.В. Демина, С.И. Беликов и др. // Вопр. вирусологии. 2001. - №1. - С. 17-22.

9. Грачев В.П. Разработка и практическое применение вакцин для профилактики актуальных вирусных инфекций / В.П. Грачев // Вопросы вирусологии. 2005. -№3.-С. 32 -35.

10. Дроздов С.Г. Пятидесятилетие Института полимиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН / С.Г. Дроздов, В.А. Лашкевич // Вопр.вирусологии. 2005. - №3. - С. 4 - 7.

11. Железникова Г.Ф. Резистентность к возбудителю инфекции и. иммунный ответ / Г.Ф. Железникова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2005. - №2. - С. 104 - 112.

12. Зайцева Г.А. Иммуногенетические маркеры крови и состояние противоинфекционного иммунитета: Дис. . докт. мед. наук. Киров, 1990. -327 с.

13. Злобин В.И. Клещевой энцефалит в Российской Федерации: современное состояние проблемы и стратегия профилактики / В.И. Злобин // Вопр. вирусологии. 2005. - №3. - С. 27 - 32.

14. Злобин В.И., Современные проблемы эпидемиологии и профилактики клещевого энцефалита в Российской Федерации / В.И. Злобин // Биопрепараты. -2004.-№2(14). -С. 2-6.

15. Игнатьев Г.М. Активность цитокинов при иммунизации вакциной против клещевого энцефалита в эксперименте / Г.М. Игнатьев, Е.В. Отрашевская, М.С. Воробьева // Вопр. вирусологии. 2003. - №3. - С. 22 - 25.

16. Идентификация отдельных антигенных эпитопов белка оболочки вируса клещевого энцефалита с применением моноклональных антител / А.С. Караванов, Л.Э. Матвеев, Г.Г. Рубин и др. // Вопр. вирусологии. 1990. - №2. - С. 140 - 143.

17. Иерусалимский А.П. Клещевой энцефалит. Новосибирск, 2001. - 360 с.

18. Инструкция по определению резус-принадлежности крови / Приказ МЗ РФ №2 от 09.01.98 г. «Об утверждении инструкций по иммуносерологии». М., 1998.-С. 94- 109.

19. Инструкция по применению анти D IgM моноклонального реагента для определения резус-принадлежности крови человека (цоликлона анти-D Супер) / Приказ МЗ РФ №2 от 09.01.98 г. «Об утверждении инструкций по иммуносерологии». М., 1998. - С. 125 - 127.

20. Инструкция по применению Цоликлона анти D диагностического жидкого для определения D антигена системы резус (Антитела моноклональные анти-D)/ Приказ МЗ РФ №2 от 09.01.98 «Об утверждении инструкций по иммуносерологии». - М., 1998. - С. 122 - 124.

21. Инструкция по применению диагностикума клещевого энцефалита сухого для РТГА, РСК, РРГ и РИГА / Утв. МЗ СССР 19.04.1990 г. М., 1990. - 31 с.

22. Инструкция по определению группы крови системы АВО при помощи изогемагглютинирующих сывороток / Приказ МЗ РФ №2 от 09.01.98 «Об утверждении инструкций по иммуносерологии. М., 1998. - С. 50 - 61.

23. Инструкция по применению иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита / Утв. гл. гос. сан. врачом РФ 8.09.1999 г. М., 1999. - 1 с.

24. Инструкция по применению компонентов крови №363 / Приказ МЗ РФ №363 от 25.11.2002 г. М., 2002. -29 с.

25. Инструкция по применению тест-системы D-1156 «ВектоВКЭ-Ig». -Новосибирск, 2002. 14 с.

26. Инфекционная заболеваемость в Российской Федерации в 2001-2002 гг.: Информационный сборник статей и аналитических материалов ФЦГСЭН МЗ РФ. -Ч.2.-М., 2003.-С.160- 163.

27. Инфекционная заболеваемость в Российской Федерации в 2002-2003 гг.: Информационный сборник статей и аналитических материалов ФЦГСЭН МЗ РФ. -Ч.2.-М., 2004.-С. 159- 162.

28. Ионова А.И. Влияние аппаратного плазмацитафереза на состояние иммунной системы и некоторые другие показатели гомеостаза доноров: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Л., 1991. - 19 с.

29. Исаева Н.В. Статус активных доноров крови и ее компонентов по иммунологическим критериям: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 2000. -24 с.

30. Исследование с помощью МКА антигенов Е и NS1 штаммов вируса клещевого энцефалита Западной Сибири / В.Н. Бахвалова, Н.С. Караванов, Л.Э. Матвеев и др. // Вопр. вирусологии. 2001. - № 6. - С. 33 - 36.

31. Кветкова Э.А. Вирусологические и иммунологические аспекты патогенеза клещевого энцефалита: Автореф. дис. д. м. н. Л., 1984.-С. 1 -35.

32. Клинико-иммунологическая эффективность вакцины «Энцепур®» при вакцинации против клещевого энцефалита жителей Приморского края / Г.Н. Леонова, К.С. Мизеров, Н.В. Крылова, и др. // Биопрепараты. 2004. -№2(14).-С. 24-28.

33. Козлов А.А. О медицинском обследовании системы гемостаза у доноров / А.А. Козлов, Н.Д. Качалова, Т.М. Простакова // Новое в трансфузиологии. -2005. -Вып41.-С. 58-70.

34. Короткое Ю.С. Постепенная изменчивость паразитарной системы клещевого энцефалита / Ю.С. Короткое // Вопр. вирусологии. 2005. - №3. - С. 52 - 56.

35. Кострова О.М. Иммуноглобулиновая терапия вирусных инфекций / О.М. Кострова, В.А. Алешкин // Рос. мед. журн. 1995. - № 1. - С. 52 - 54.

36. Крылова Н.В. Сравнительное изучение in vitro эффективности различных иммуномодулирующих препаратов при клещевом энцефалите / Н.В. Крылова, Г.Н. Леонова // Вопр. вирусологии. 2001. - Т.46, №1. - С. 25 - 28.

37. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. - 293 с.

38. Леонова Г.Н. Антигенемия у людей, инфицированных вирусом клещевого энцефалита / Г.Н. Леонова, О.С. Майстровская, В.Б. Борисевич // Вопр. вирусологии. 1996. - № 6. - С. 260 - 263.

39. Мазуров Д.В. Возрастные изменения Т-лимфоцитов человека, несущих маркеры CD45RO и HLA-DR / Д.В. Мазуров, Ю.А. Мастернак, Б.В. Пинегин // Иммунология. -2002. №5. - С. 268 - 271.

40. Мальцева О.В. Разработка технологии получения и изучение свойств иммуноглобулина против клещевого энцефалита для внутривенного введения: Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 2002. - 23 с.

41. Медуницын Н.В. Вакцинология. М.: Триада -X, 2004. - 446 с.

42. Минеева Н.В. Группы крови человека: Основы иммуногематологии. С-Пб., 2004.- 185 с.

43. Мониторинг популяции вируса клещевого энцефалита в европейских и азиатских регионах России. Практические аспекты проблемы / В.В. Погодина, Н.Г. Бочкова, Л.С. Карань и др. // Биопрепараты. 2004 - №2 (14). - С. 7 -13.

44. Некоторые аспекты современной вакцинопрофилактики клещевого энцефалита с использованием вакцины «Энцевир©» / Г.П. Билалова, Т.Э. Ильченко, Л.Д. Быстрицкий и др. / Тез. I Всерос. конф. по вакцинологии. М., -2004.-С. 11.

45. О Концепции развития службы крови в Российской Федерации // Трансфузиология. -№1 (5). 2004. - С-Пб. - С. 107 - 114.

46. Оленев О.Г. Динамика некоторых показателей иммунитета у больных клещевым энцефалитом и возможности их коррекции / О.Г. Оленев // Природноочаговые болезни человека. Омск, 1988. - С. 26 - 32.

47. Онищенко Г.Г. Некоторые проблемы реализации государственной политики в области иммунопрофилактики / Г.Г. Онищенко // Кафедра. 2003. - №4 (8). -С. 24-31.

48. Организация сбора сырья при изготовлении иммуноглобулина для профилактики и терапии клещевого энцефалита: (Метод, рекомендации) / Хабаровский НИИ эпидемиологии и микробиологии; Сост. JT.A. Берета,

49. A.С. Песков, С.В. Пичугин и др.. Хабаровск, 1987. - 16 с.

50. Особенности эпидемиологии клещевого энцефалита в Кировской области / Е.О. Утенкова, В.К. Ястребов, A.J1. Бондаренко и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2005. №2. - С. 113 -114.

51. Пакет прикладных программ Statgraphics на персональном компьютере: Практическое пособие по обработке результатов медико-биологических исследований / С.Г. Григорьев, В.В. Левандовский, A.M. Перфилов,

52. B.И. Юнкеров. С-Пб., 1992. - 104 с. - .

53. Патоморфология лимфатических узлов у человека при остром клещевом энцефалите / А.А. Рычков, А.А. Зиновьев, Э.А. Кветкова и др. // Природноочаговые болезни человека. Омск, 1989. - С. 79 - 83.

54. Певницкий Л.А. Статистическая оценка ассоциаций HLA-антигенов с заболеваниями // Вестн. АМН. 1988. - №7. - С. 48 - 51.

55. Плетнев А.Г. Нуклеотидная последовательность генома и полная аминокислотная последовательность полипротеина вируса клещевого энцефалита / Л.А. Плетнев В.Ф. Ямщиков, В.М. Блинов // Биоорган, химия. 1989. -№11.1. C. 1504- 1521.

56. Погодина В.В. Мониторинг популяций вируса клещевого энцефалита и этиологической структуры заболеваемости за 60-летний период / В.В. Погодина // Вопросы вирусологии. 2005. - №3. - С. 7 -13.

57. Правильное использование иммуноглобулинов человека в клинической практике: выводы и рекомендации совещания МСИО / ВОЗ // Бюллетень ВОЗ. -1982. -Т.60, №1. -С. 20-24.

58. Приказ МЗ СССР № 141 от 9 04 1990г. «О дальнейшем совершенствовании мероприятий по профилактике клещевого энцефалита». М., 1990. - 70 с.

59. Приказ МЗ РСФСР № 217 от 17.12.90г. «Об увеличении производства и упорядочении применения иммуноглобулина против клещевого энцефалита». -М„ 1990.-32 с.

60. Приказ МЗ РФ №364 от 14,09.2001г. «Об утверждении порядка медицинского обследования донора крови и его компонентов» № 3009 от 31.10.2001. М., 2001. -16 с.

61. Протективная активность бактериальной плазмиды, несущей ген неструктурного белка NS1 вируса клещевого энцефалита / А.В. Тимофеев, Я.Ю. Кондратьева, Г.Г. Карганова и др. // Вопросы вирусологии. 2001. - Т.46, №1.-С. 22-24.

62. Протопопова Е.В. Выделение клеточного рецептора для вируса клещевого энцефалита при помощи антиидиотипических антител / Е.В. Протопопова, С.Н. Коновалова, В.Б. Локтев // Вопр. вирусологии. 1997. - № 6. - С. 264 - 268.

63. Рагимов А.А., Дашкова Н.Г. Основы трансфузионной иммунологии. М., 2004: МИА, 2004.-280 с.

64. Разоренов Г.И., Поддубский Г.А. Автоматизированная количественная оценка и анализ состояния организма (медицинская статусметрия): Репринт ЛИИАН СССР.-Л, 1985.

65. Реактогенность вакцины против клещевого энцефалита «Энцепур® взрослый» и иммунный ответ на ее введение / Г.Н. Леонова, Н.В. Крылова, Е.В. Павленко и др. // Клинич. иммунология. -2005. Т.7, №4. - С. 391 - 396.

66. Рекомбинантные антитела к вирусу клещевого энцефалита / Г.Н. Николенко, Е.В. Протопопова, А.А. Ильичев и др. // Вопр. вирусологии. 2002. - №5. -С. 31 -36.

67. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл. Иммунология. М.: Мир, 2000. - 581 с.

68. Русанов В.М., Левин И. Лечебные препараты крови. М.: ИД Медпрактика -М, 2004.-284 с.

69. Секреция гетерокомплекса гликопротеинов Е и NS1 вируса клещевого энцефалита на поздней стадии инфекции / В.А. Матвеева, Ю.В. Бугрышева, В.Н. Бахвалова и др. // Вопр. вирусологии. 1997. - № 4. - С. 179 - 182.

70. Серова Л.Д. Биологические основы формирования ассоциаций антигенов системы HLA и предрасположенности к заболеванию / Л.Д. Серова, В.Н. Шабалин // Вестн. АМН. 1988. - № 7. - С. 17 - 23.

71. Сибирский и дальневосточный подтипы вируса клещевого энцефалита в европейских и азиатских регионах России: генетическая и антигенная характеристики штаммов / В.В. Погодина, Н.Г. Бочкова, Л.С. Карань и др.// Вопр. вирусологии. 2004. - №4. - С.20 - 25.

72. Сизякина Л.П., Андреева И.И. Справочник по клинической иммунологии. -Ростов-на-Дону: Феникс, 2005.-446 с.

73. Скудицкий А.Е. Некоторые аспекты антиэритроцитарной аллоиммунизации доноров / А.Е. Скудицкий // Вестн. службы крови России. 2005. - № 3. -7 - 8.

74. Смирнова А.И. Социальные, эпидемиологические и организационно-методические основы получения иммунных антибактериальных препаратов из донорской крови: Автореф. Дис. докт. мед. наук. Л.,1990. - 47 с.

75. Сравнение иммунного ответа, индуцированного ДНК или инактивированной вакциной против клещевого энцефалита / Морозова О.В., Попова Р.В., Максимова Т.Г. и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. - № 2. - С. 54-57.

76. Сравнительная характеристика вируса клещевого энцефалита, адаптированного к клещам и млекопитающим / Г.Г. Карганова, Т.И. Дживанян,

77. Д.В. Бахмутов и др.// Материалы VIII съезда Всерос. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М.: Росинэкс, 2002. - С. 333 - 334.

78. Сравнительный анализ вирулентности сибирского и дальневосточного подтипов вируса клещевого энцефалита на основе экспериментальных и клинических данных. В.В. Погодина, Н.Г. Бочкова, Л.С. Карань и др. // Вопр. вирусологии. 2004. - №6. - С. 24 - 30.

79. Специфическое определение флавивирусов методом молекулярной гибридизации с синтетическими дезоксиолигонуклеотидными зондами /

80. B.И. Злобин, В.В. Погодина, Д.А. Дрокин и др. //Вопр. вирусологии. 2003. -№3. - С. 23 - 27.

81. Стронин О.В. Индикация антигена вируса клещевого энцефалита в крови инфицированных людей методами РИГА и ИФА / О.В. Стронин, Н".Б. Черный, Л.Е. Подоплекина // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1997.-№3.-С. 115-116.

82. Тимофеев А.В. Новый вариант вакцины против клещевого энцефалита / А.В. Тимофеев // Мед. кафедра. 2003. - №2 (6). - С. 35 - 37.

83. Уманский К.Г. Полиморфизм и патогенетическое единство клинических форм клещевого энцефалита / К.Г. Уманский, Е.П. Деконенко // Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и профилактики клещевого энцефалита. -Иркутск, 1990.-С. 126- 127.

84. Физиология человека / Н.А. Агаджанян., Л.З. Тель., В.И. Циркин.,

85. C.А. Чеснокова. М.: Медицинская книга, 2001. - 527 с.

86. Хаитов P.M. Геномика главного комплекса гистосовместимости: клинические аспекты / P.M. Хаитов, Л.П. Алексеев II Мед. кафедра. 2003. -№1(5).-С. 4-9.

87. Хаитов P.M. Геномика HLA: новые возможности молекулярной генетики человека в диагностике и терапии / P.M. Хаитов, Л.П. Алексеев // Молекулярная медицина.- 2003. -№1.~ С. 17-30.

88. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М., 2000. -432 с.

89. Черницина Л.О. Клинико-иммуногенетическая разнородность различных форм и вариантов течения клещевого энцефалита / Л.О. Черницына,

90. B.И. Коненков // Тез. докл. I съезда иммунологов России. Новосибирск, 1992.1. C. 531 532.

91. Шаповал А.Н. Клещевой энцефаломиелит. М.: Медицина, 1980.;- 256 с.

92. Эльберт Л.Б. Сравнительный анализ тестов in vitro и in vivo количественной оценки иммуногенности вакцины клещевого энцефалита / Л.Б. Эльберт, М.Ф. Ворович, А.В. Тимофеев // Вопр. вирусологии. 1998. - №5. - С. 235 - 238.

93. Эпидемиология, этиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика клещевого энцефалита: (Метод, указания) сост. Л.И. Волкова, В.В. Романенко, Н.Л. Струнин и др. . Екатеринбург, 2004. - 62 с.

94. A 10-year follow-up study of tick-borne encephalitis in the Stockholm area and a review of the literature: need for a vaccination strategy / M. Haglund, M. Forsgren, G. Lindh et al. // Scand. J. Infect. Dis. 1996. - Vol. 28, № 3. - P. 217 - 224.

95. Ahmed R. Immunological memory and protective immunity: understending their relation / R. Ahmed, D. Gray // Science. 1996. - Vol. 272 (5258). - P. 54 - 60.

96. Antigenic Structure and Function of the Flavivirus Envelope Protein E / F.X. Heinz, C. Mandl, H. Holzmann et al. // New Aspects of Positive-Strand RNA Viruses. -Am. Soc. Microbiol., Washington, 1990. P. 294 - 300.

97. Antigenic structure of flavivirus envelope protein E at the molecular level usting tick-borne encephalitis as a model / C. Mandl, F. Guirakhoo, H. H. Holzmann et al. // J. Gen. Virol. 1989. - Vol. 63. - P. 564 - 571.

98. A study of systems for delivering antigens and plasmid DNA for intranasal immunization against tick-borne encephalitis virus / E.P. Goncharova, A.B. Ryzhikov, L.E. Bulychev et al. // Wien Klin. Wochenschr. 2002. - Vol. 114 (13-14). - P. 630 -635.

99. Barrett P.N. History of TBE vaccines / P.N. Barrett, S. Schober-Bendixen, H.J. Ehrlich //Vaccine. 2003. - Vol. 21. - P. 41 - 49.

100. Bobrowska E. Vaccination against tick-borne encephalitis-distant evaluation / E. Bobrowska, A. Grzeszczuk, D. Prokopowicz // Rocz. Akad. Med. Bialymst. 1996. -Vol.41,№ l.-P.44-50.

101. Characterization and complete genome sequences of high- and low virulence variants of tick-borne encephalitis virus / G. Wallner, C.W. Mandl, M. Ecker et al. // J. Gen. Virol. -1996. - Vol. 77, № 5. - P. 1035 - 1042.

102. Characterization of tick-borne encephalitis (TBE) foci in Germany and Latvia (1997-2000) / J. Suss, C. Schrader, U. Abel et al. IIInt. J. Med. Microbiol. 2002. -Vol. 291.-Suppl 33.-P. 34-42

103. Clinical evaluation of a polygeline-free enctphalitis vaccine for adolescnts and adults / O. Zent, J. Beran, W. Jilg et al. // Vaccine. 2003. - Vol. 21. - P. 738 - 746.

104. Correlation between ELISA, hemagglutination inhibition, and neutralization tests after vaccination against tick-borne encephalitis / H. Holzmann, M. Kundi, K. Stiasny et al. // J. Med. Virol. 1996. - Vol. 48, № 1. - P. 102 - 107.

105. Detection of tick-borne encephalitis (TBE) virus in Liechtenstein / C. Aberham, A. Radda, H. Holzmann et al. // Int. J. Med. Microbiol. Virol. Parasitol. Infect. Dis. -1992. Vol. 277, № 4. - P. 554 - 560.

106. Eder G. Antigenic dependent adverse reactions and seroconvetrsion of a tick-borne encephalitis vaccine children / G. Eder, H. Kollaritsch //Vaccine. 2003. - Vol. 21.-P. 3575 -3583.

107. Evidence for antigenic stability of tick-borne encephalitis virus by the analysis of natural isolates / F. Guirakhoo, A.C. Radda, F.X. Heinz et al. // J. Gen. Virol. 1987. -Vol. 68, № 3. - P. 859 - 864.

108. Folding and dimerization of tick-borne encephalitis virus envelope proteins pr M and E in the endoplasmic reticulum / I.C. Lorenz, S.L. Allison, F.X. Heinz et al. // J. Virol. 2002. - Vol. 76(11). - P. 5480 - 5489.

109. Genetic and biological comparison of tick-borne encephalitis viruses from Hokkaido and far-eastern Russia / A. Goto, D. Hayasaka, K. Yoshii et al. // Jpn. J. Vet. Res. 2002. - Vol. 49(4). -P. 297 - 307.

110. Gritsun T.S. Tick-borne encephalitis / T.S. Gritsun, V.A. Lashkevich, E.A. Gould //Antiviral Res.-2003.-Vol.57.-P. 129- 146.

111. Gustafson R. Epidemiological studies of lyme borreliosis and tick-born encephalitis / R. Gustafson // Scand. J. Infect. Dis. -1994. Suppl. 92. - P. 224 - 229.

112. Haglund M. Tick-borne encephalitis-pathogenesis, clinical course and long-term follow-up / M. Haglund, G. Gunther // Vaccine. 2003. - Vol. 21. - Suppl 1. - P. 11 -18.

113. Heinz F.X. Family Flaviviridae / F.X. Heinz, M.S. Collett, Purcell // Virus Taxonomy: 7-th International Committee for the Taxonomy of viruses. San-Diego. -2000.-P. 859- 878.

114. Heinz F.X. Molecular aspects of TBE virus research / F.X. Heinz //Vaccine 2003. -Vol.21.- Suppl l.-P. 3-10.

115. Heinz F.X. Tick-borne encephalitis and the impact of vaccination / F.X. Heinz, C. Kunz // Archives of Virology. 2004. - Vol.18. - Suppl. - P. 201 - 205.

116. Heinz F.X. The molecular biology of tick-borne encephalitis virus / F.X. Heinz, C. Mandl // APMIS. 1993. - Vol. 101. - P. 735 - 745.

117. Herzig R. An uncommon severe clinical course of European" tick-borne encephalitis / R. Herzig, C.M. Patt, T. Prokes // Biomed Pap. Med. Fac. Univ. Palacky Olomouc. Czech Repub. 2002. - Vol. 146(2). - P. 63 - 70.

118. Holzmann H.D. Diagnosis of tick-borne encephalitis /H.D. Holzmann //Vaccine. -2003.-Vol.21,№ l.-Suppl.l.-P. 36 -40. гм.

119. Humoral immunity against tick-borne encephalitis virus following manifest disease and active immunization / U. Klockmann, H.L. Bock, H. Kwasny et al. // Vaccine.-1991.-Vol. 9, № l.-P. 42-46.

120. Immunogenicity and safety of a booster vaccination against tick-borne encephalitis more than 3 years following the last immunization / P.R. Wagner, M. Kundi, O. Zent et al. // Vaccine. -2004. Vol. 23, Issue 4. - P. 427 - 434.

121. Infection a virus TBE: donnees cliniques et epidemiologiques / Y. Hansmann, J.P. Gut, V. Remy et al. // Medecine et Maladies Infectieuses. 2004. - Vol. 34. -Suppl.-P. 28-30. : .

122. Insufficient protection for healthy elderly adults by tetanus and TBE vaccines / U. Hainz, B. Jenewein, E. Asch et al. // Vaccine. 2005. -Vol. 23, Issue 25. - P. 3232 -3235.

123. Isolation of tick-borne encephalitis virus from wild rodents and a seroepizootiologic servay in Hoccaido / T. Takeda, T. Ito, M. Osada et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1999. - Vol. 60. - P. 287 - 291.

124. Kaiser R. Tick-borne encephalitis (TBE) in Germany and clinical course of the disease / R. Kaiser // Int. J. Med. Microbiol. 2002. - Vol. 291. Suppl 33. - P. 58 - 61.

125. Kofler R.M. Capsid protein С of tick-borne encephalitis virus tolerates large internal deletions and is a favorable target for attenuation of virulence / R.M. Kofler, F.X. Heinz, C.W. Mandl // J. Virol. 2002. - Vol. 76(7). - P. 3534 - 3543.

126. Krech T. TBE foci in Switzerland / T. Krech // Int. J. Med. Microbiol. 2002. -Vol. 291.-Suppl 33.-P. 30-33.

127. Kreil T. Pre- and postexposure protection by passive immunoglobulin but no enhancement of infection with a flavivirus in a mouse model / T. Kreil, M. Eibl // J. Virol.- 1997.-Vol.71, №4.-P.2921 -2927.

128. Kunz C. TBE vaccination and the Austrian experience / C. Kunz // Vaccine. -2003.-Vol. 21.-Suppl 1.-P. 50- 55.

129. Kunze M. Social marketing and the establishment of the ISW-TBE / M. Kunze, U. Kunze // Vaccine. 2003. - Vol. 21. - Suppl 1. - P. 62 - 65.

130. Long-term immunity after vaccination against tick-borne encephalitis with Encepur® using rapid vaccination schedule / J. Beran, P. Gauda, D. Gniel et al. // Int. J. Med. Microbiol.-2004.-Vol. 293, Suppl. 37.-P. 130- 133.

131. Marth E. Stimulation of the immune system by different TBE-virus vaccines / E. Marth, B. Kleinhappl, S. Jelovcan // Int. J. Med. Microbiol. Supplements. 2004. -Vol. 293. - Suppl. 37, - P. 139 - 144.

132. Minar J. Natural foci of tick-borne encephalitis in central Europe and the relationship of the incidence of Ixodes ricinus to original ecosystems / J. Minar // Cent. Eur. J. Public Health. 1995. - Vol. 3, № 1. - P. 33 - 37.

133. Monoclonal antibodies directed against tick-borne encephalitis virus with neutralizing activity in vivo / M. Niedrig, U. Klockmann, W. Lang et al. // Acta Virol. 1994. - Vol.38, № 3. - P. 141 -149.

134. Mosmann T. The expending universe of T-cells subsets: Thl, Th2 and more / T. Mosmann, S. Sad//Immunol, today.-1996.-Vol. 17(3).-P. 138- 146.

135. Pancewicz. Evaluation of serum levels of tick-borne encephalitis • (TBE) virus antibodies after administration of FSME inject vaccine / S.A. Pancewicz, T. Hermanowska-Szpakowicz // Przegl. Epidemiol. 2002. - Vol. 56. - Suppl 1. -P. 116-121.

136. Persistence of protective immunity following vaccination against tick-borne encephalitis longer than expected? / P. Rendi-Wagner, M. Kundi, O, Zent et al. // Vaccine. - 2004. - Vol. 22. - P. 2743 - 2749.

137. Plasma proteins and lymphocyte phenotypes in long term plasma donors / S.L. Levis, S.G. Kutvirt, P.N. Bonner et al. // Transfusion. 1994. - Vol. 39. - P. 1150 -1151.

138. Randolph S.E. Evidence that climate change has caused "emergence" of tick-borne diseases in Europe / S.E. Randolph //Int. J. Med. Microbiol. Supplements.2004. Vol. 293. - Suppl. 37, - P. 5 -15.

139. Rogers P. Peptide dose, affinity, and time of differentiation can contribute to the Thl/Th2 cytokine balanse / P. Rogers, M. Croft // J. Immunol. '1999. - Vol. 163. -P. 1205 - 1211.

140. Role of the N-linked glycans of the prM and E envelope proteins in tick-borne encephalitis virus particle secretion / A. Goto, K.Yoshii, M. Obara et al. // Vaccine.2005.-Vol.23.-P. 3043 3052.

141. Saftty, immunogenicity and tolerability of a new pediatric tick-borne encephalitis (TBE) vaccine, free of protein-derived stabilizer / O. Zent, A. Banzhoff, A.K. Hilbert et al.//Vaccine. 2003. - Vol. 21.-P. 3584 - 3592.

142. Sequence analysis and genetic classification of tick-borne encephalitis virus from Europ and Asia / M. Ecker, S.L. Allison, T. Meixner et al. // J. Gen. Virol. 1999. -Vol. 80.-P. 179- 185.

143. State-of-the-art serological techniques for detection of antibodies against tick-borne encephalitis virus / K. Sonnenberg, M. Niedrig, K. Steinhagen et al. // Int. J. Med. Microbiol. Supplements. 2004. - Vol. 293. - Suppl. 37. - P. 148 -151.

144. Suss J. Epidemiology and ecology of TBE relevant to the production of effective vaccines / J. Suss //Vaccine. 2003. - Vol. 21. - P. 19 - 35.

145. TBE booster immunization according to the rapid immunization schedule: are 3-year booster intervals really necessary? / O. Zent, A. Plentz, T. F. Schwarz et al. //Vaccine. 2004. - Vol. 23. - P. 312 - 315.

146. The envelope glucoprotein from tick-borne encephalitis virus at 2 A resolution / Rey F.A., Heinz F.X., Mandl C. et al. //Nature. 1995. - Vol. 375. - P. 291 - 298.

147. The importance of tick-borne encephalitis virus RNA detection for early differential diagnosis of tick-borne encephalitis / A. Saksida, D. Duh, S. Lotric-Furlan et al. // J.Clin. Virol. 2005. - Vol. 33, Issue 4. - P. 331 - 335.

148. Tick borne encephalitis in an area of high endemicity in Lithuania: disease severity and long-term prognosis / A. Mickiene, A. Laiskonis, G. Gunther, et al.// Clin. Infect. Dis. 2002. - Vol. 35(6). - P. 650 - 658.

149. Tick borne encephalitis in childhood: Conference report and consensus of the International Scientific Working Group on tick-borne encephalitis (ISW-TBE) / U. Kunze, L. Asokliene, A. Busse et al // Vaccine. 2004. - Vol.21. - P. 729 - 731.

150. Tick-borne encephalitis in Norway / T. Skarpaas, A. Sundoy, A.L. Bruu et al. // Tidsskr. Nor. Laegeforen. 2002. - Vol. 122(1). - P. 30 - 32.

151. Tick-borne encephalitis in the Russian Far East / G.N. Leonova, V.G. Borisevich, E. Pavlenko et al. // VII International Potsdam symposium on tick-borne diseases. Berlin (Germany), 13-14 March. 2003. - P. 110 -111.

152. Tick-borne encephalitis in the Saarland and the Rhineland-Palatinate / J. Treib,

153. A. Haass, N. Mueller-Lantzsch et al. // Infection. 1996. - Vol. 24, № 3. - P. 242 -244.

154. Tomazic J. Flow cytometric analysis of lymphocytes in cerebrospinal fluid in patients with tick-borne encephalitis / J. Tomazic, A. Ihan // Acta Neurol. Scand. -1997. Vol. 95, №1,-P. 29-33.

155. Ultrastructural pathology of the lymph nodes in tick-borne encephalitis /

156. B.A. Erman, L.G. Tulakina, V.P. Konev et al. // Arkh. Patol. 1996. - Vol. 58, № 2. -P. 37-41.

157. Vectors of tick-borne diseases and epidemiological situation in Latvia in 1993 -2002 / A. Bormane, I. Lucenko, A. Duks et al. // Int. J. Med. Microbiol. Supplements. -2004. Vol. 293. - Suppl.37. - P. 36 - 47.

158. Zeman P., A tick-borne encephalitis ceiling in Central Europe has moved upwards during the last 30 years: Possible impact of global warming? / P. Zeman, C. Benes // Int. J. Med. Microbiol. Supplements. 2004. Vol. 293. - Suppl. 37. - P. 48 - 54.

159. Zent 0. Post-marketing surveillance of immediate allergic reactions: polygeline-based versus polygeline-free pediatric TBE vaccine / 0. Zent, R. Hennig // Vaccine. -2004. Vol. 23, Issue 5. - P. 579 - 584.