Карбоксилсодержащие полимерные микросферы для изучения трехмерного строения сосудистого русла экспериментальных животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.06, кандидат химических наук Левшенко, Елена Николаевна

• Левшенко, Елена Николаевна
• кандидат химических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат химических наук Левшенко, Елена Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1 Использование полимерных микросфер в биотехнологии.

1.2 Методы изучения строения сосудов.

1.3. Методы окрашивание полимерных микросфер флуоресцентными красителями.

ГЛАВА 2. ЭКСШРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

Исходные вещества.

Методы исследования.

2.1. Дилатометрический метод исследования кинетики полимеризации.

2.2 Проведение затравочной полимеризации.

2.3. Измерение межфазного натяжения на границе раздела фаз.

2.4. Определение молекулярных масс полимеров.

2.5. Определение размера частиц в суспензии.

2.6. Определение сухого остатка суспензии.

2.7. Подбор концентрации красителя.

2.8. Определение агрегативной устойчивости микросфер.

2.9. Окрашивание ПММА и ПС микросфер.

2.10. Перфузия.

2.11. Просветление препаратов.

2.12. Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Синтез полистиролметакриловых суспензий.

3.2. Синтез карбоксилсодержащих полистирольных суспензий.

3.3. Синтез карбоксилсодержащих полиметилметакрилатных суспензий.

3.4. Синтез карбоксилсодержащих полистирольных суспензий методом затравочной полимеризации.

3.5. Разработка метода анализа трехмерной организации сосудистого русла с помощью полимерных микросфер.

ВЫВОДЫ:.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Карбоксилсодержащие полимерные микросферы для изучения трехмерного строения сосудистого русла экспериментальных животных»

Полимерные микросферы с узким распределением по размерам нашли широкое применение в различных областях биологии и медицины. К полимерным суспензиям, применяемым в этой области, предъявляются следующие требования: они должны иметь заданный диаметр и узкое распределение частиц по размерам, определенную природу поверхности и быть устойчивыми при хранении и в растворах электролитов. Области применения полимерных микросфер постоянно расширяются. В частности, их предложено использовать для изучения ангиогенеза, что необходимо для ранней диагностики опухолевого роста, так как известно, что по мере развития раковая опухоль прорастает новыми кровеносными сосудами.

Для исследования развития сосудистого русла используют метод флуоресцентной конфокальной микроскопии. Его применение требует заполнения сосудов флуоресцентными метками, в качестве которых перспективно использовать полимерные микросферы, окрашенные люминесцентным красителем. К ним предъявляется ряд специфических требований: они должны обладать высокой интенсивностью флуоресценции, низкой адгезивной активностью к внутренней поверхности сосуда, что исключит их прилипание к стенкам сосуда, и не образовывать коньюгатов друг с другом и с биологическими молекулами.

Полученные результаты можно использовать для построения трехмерной модели сосудов и капилляров. Эта модель позволит последовательно изучать закономерности ветвления сосудов, что необходимо для понимания их функционального состояния.

Целью данной работы являлся синтез карбоксилсодержащих полимерных суспензий с узким распределением частиц по размерам, содержащих флуоресцентные метки, для создания метода визуализации трехмерного строения сосудистого русла экспериментальных животных для изучения ангиогенеза.

Научная новизна:

1. Определены условия синтеза карбоксилсодержащих полимерных микросфер разной природы с узким распределением по диаметрам, что позволило выбрать тип и природу полимерных микросфер, позволяющих плотно заполнять сосудистое русло экспериментальных животных для изучения его строения.

2. На основании данных по изучению кинетических закономерностей полимеризации стирола и метилметакрилата и сополимеризации стирола с метакриловой кислотой в присутствии нерастворимых в воде ПАВ разработаны рецептуры синтеза полимерных микросфер разного диаметра с узким распределением по размерам, устойчивых в физиологических растворах.

3. Впервые для синтеза карбоксилсодержащих полистирольных и полиметилметакрилатных суспензий использовано кремнийорганическое гемини-ПАВ - а, со-бис[10-карбоксидецил]полидиметилсилоксан, и показано, что оно проявляет высокие поверхностно-активные свойства на границе мономер/вода (с1,2 = 28,1 мДж/м2) и образует прочные межфазные слои на поверхности ПМЧ/вода.

4. Разработана методика визуализации трехмерного строения сосудистого русла экспериментальных животных с помощью набора флуоресцентно меченных полимерных микросфер. Этот метод позволяет избирательно блокировать заполнение сосудов заданного внутреннего диаметра и последовательно анализировать их ветвление.

5. Показано, что разработанный метод визуализации трехмерного строения сосудистого русла экспериментальных животных с помощью набора флуоресцентно меченных полимерных микросфер позволяет получить информацию о характере контура просвета сосуда для анализа наличия или отсутствия препятствий току крови и степени извитости стенки сосуда.

6. Разработанная методика визуализации трехмерного строения сосудистого русла экспериментальных животных с помощью набора флуоресцентно меченных полимерных микросфер опробована и рекомендована для использования медицинским учреждениям.

7. Показаны перспективы использования полистирольных и полиметилметакрилатных микросфер для создания иммунодиагностических тест-систем.

Практическая значимость работы. Разработанная методика опробована в

ФГЪУН Научно-исследовательский институт физико-химической медицины

ФМБА России, выдана рекомендация по ее, использованию медицинским учреждениям.

Автор защищает:

• Кинетические закономерности полимеризации стирола и метилметакрилата, а также сополимеризации стирола с метакриловой кислотой в отсутствие ПАВ и в присутствии нерастворимых в воде ПАВ различной природы.

• Рецептуры синтеза полимерных микросфер с узким распределением по размерам и средними диаметрами в интервале 0,37 - 1,6 мкм.

• Новое карбоксилсодержащее ПАВ с двумя полярными группами (гемини-ПАВ) а,со - бис[10-карбоксидецил]полидиметилсилоксан в качестве стабилизатора полимерных суспензий при гетерофазной полимеризации мономеров.

• Методологию, позволяющую с помощью набора флуоресцентно меченных полимерных микросфер разного размера изучать строение сосудистого русла экспериментальных животных.

• Перспективы использования полистирольных и полиметилметакрилатных микросфер для создания иммунодиагностических тест-систем.

Личное участие автора являлось основополагающим на всех этапах работы и состояло в постановке цели исследования, разработке экспериментальных и теоретических подходов при выполнении эксперимента и обобщении полученных результатов.

Апробация работы. Результаты исследований и основные положения диссертации докладывались и обсуждались на Международной научно-практической конференции «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии» (Москва, 2008), XVI Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва, 2009), Международном молодежном научном форуме «ЛОМОНОСОВ-2010» (Москва, 2010), Научной секции ПАВ Научного совета по коллоидной химии и физико-химической механике РАН «Поверхностно-активные вещества в технологических процессах» (Москва, 2011).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе 5 статей по теме диссертационной работы, опубликованных в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Материалы диссертации изложены на 107 страницах машинописного текста, включая 14 таблиц, 39 рисунков. Список литературы содержит 98 наименований.

Заключение диссертации по теме «Высокомолекулярные соединения», Левшенко, Елена Николаевна

ВЫВОДЫ:

1. Синтезированы карбоксилсодержащие полимерные микросферы различной природы с диаметрами частиц в интервале 0,3 - 1,6 мкм и 6,2 мкм с узким распределением по размерам, и на их основе создана методика анализа архитектуры сосудистого русла.

2. Для создания метода анализа структуры сосудистого русла с различным диаметром синтезированы полимерные суспензии трех типов: полистиролметакриловые, полистирольные и полиметилметакрилатные. Все полимерные суспензии имели узкое распределение по диаметрам, не содержали ассоциатов, были устойчивы в буферных растворах и при хранении.

3. Впервые в качестве ПАВ для синтеза полистирольных и полиметилметакрилатных суспензий использован новый тип кремнийорганического функционального ПАВ - а,оо-бис[10-карбоксидецил]полидиметилсилоксан. Изучены его коллоидно-химические свойства.

4. Предложен новый подход к созданию методики анализа сосудов, позволяющий с помощью конфокальной микроскопии построить трехмерную модель сосудистого русла.

5. На примере полистирольных микросфер с диаметром 6 мкм, окрашенными люминесцентным красителем, показана возможность с помощью конфокальной микроскопии увидеть архитектуру артериального русла.

6. Полученные полимерные микросферы были рекомендованы для создания диагностических тест-систем медицинского назначения.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Левшенко, Елена Николаевна, 2012 год

1. Bangs L.B. New developments in particle-based immunoassays // Pure and Appl. Chem.-1996.-v.68.-N 10.-p.l873-1879.

2. Каральник Б.В. Эритроцитарные диагностикумы // Алма-Ата: Наука, 1982.

3. Каральник Б.В., Царевский Ю.П., Шамардин В.А. Эритроцитарные белковые диагностикумы // Алма-Ата: Наука, 1982.

4. Сюрин В.Н., Самойленко А .Я., Соловьев В.Б. и др. Вирусные болезни животных // Москва, ВНИТИБП, 1998.

5. Красота А.Ю. Технология тест-системы для серодиагностики парагриппа-3 крупного рогатого скота методом РНГА // Автореф. канд. веет, наук: М., 2003.

6. Singer, J.M, С.М. Plotz. The Latex Fixation Test: Application to the serologic diagnosis of rheumatoid arthritis // Am J Med. 1956. - № 21 - P. 888

7. Макаров В.В. Реальная эпизоотология бешенства. // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 2002.

8. Малеев В.В., Сологуб Т.В., Ершов Ф.И., Романцов М.Г. Современный взгляд на вирусные гепатиты. М.: Миклош, 2010. 168с.

9. Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я. Инфекционные болезни. М., 2003.

10. И. Тертон М., Бангхем Д.Р., Колкотт К.А. Новые методыиммуноанализа. М.: Мир, 1991. - 116с.

11. Ugelstad J., Futakama H.R., Mork P.C., Ellingsen Т., Berge R., Holm L., ect. Preparation and characterization of monodisperse polymer particles // J. Polym. Sci., Polym. Symp. 1985. - v. 72. - p. 225-240.

12. Черкасов B.P. Полимерные суспензии, модифицированные серусодержащими аминокислотами, для иммунохимических исследований // Автореф.дис. .канд.хим.наук. М. - 1992. - с.138.

13. Richardson I.R. Latex 34 Legionella pneumoplua species inentification using a commercial latex agglutination kit a potential gross-reaction problem with serogroup-12 // Med.Lab.Sci. 1992. - v.49. - №2. - p. 144-146.

14. Крашенинникова И.Г. Полимерные суспензии медико-биологического назначения с узким распределением частиц по размерам // Автореф.дис.док.тех.наук.-М., 2007.

15. Прокопов Н.И. Синтез полимерных суспензий с узким распределением частиц по размерам методом гетерофазной полимеризации полимеризации // Автореф.дис. .докт.хим.наук. М., 1999.

16. Лобанов А.Н. Синтез полимерных суспензий медико-биологического назначения // Автореф.дис.канд.хим.наук. М., 2003.

17. Суспензионная полимеризация метилметакрилата // Сб. обзорной информации. М.: НИИТЭХИМ.-1975. -с.59.

18. Егоров В.В. Радикальная полимеризация поверхностно-активных мономеров // Автореф. дисс. в форме научного доклада на соискание уч. степ, д.х.н.- Москва. 1992.

19. Cochin, D. Emulsion polymerization of styrene using conventional, polymerizable, and polymeric surfactants. A comparative study /D. Cochin, A. Laschewsky // Macromolecules. -1997. Vol. 30. -P. 2278- 2287.

20. Напер Д. Стабилизация коллоидных дисперсий полимерами: Пер. с англ. // Привалко В.П., Липатов Ю.С. М.: Мир. - 1986. - с.448.

21. Чекина Н.А. Синтез носителей иммунореагентов на основе полиметилметакрилата и его сополимеров методами радикальной эмульсионной полимеризации // Автореф. дис.канд.хим.наук. СПб. -2003.

22. Скуркис Ю.О. Формирование поверхностной структуры монодисперсных микросфер на основе полистирола и сополимеров стирола с акролеином // Автореф.дис.канд.хим.наук. СПб. -2005.

23. Stubbs, J. The dynamics of morphology development in multiphase latex particles / J. Stubbs, D.C. Sundberg // Prog. Org. Coat. 2008. - Vol. 61, - P. 156-165.

24. Schulz, D.N. Polymers as rheology modifiers. / D.N. Schulz, J.E. Glass // Eds. ACS Symposium series 462. American Chemical Society. Washington. DC. 1991.

25. Shalaby, S.W. Water-soluble polymers. Synthesis, solution properties and applications /S. Shalaby, C.L. McCormick, G.B. Butler // Eds. ACS Symposium series 467. American Chemical Society. Washington. DC. -1991.

26. Абрамзон, A.A. Поверхностно-активные вещества: Свойства и применение / А.А. Абрамзон.- JL: Химия, 1981.- 58 с.

27. Грицкова, И. А. Полимеризация стирола в присутствии неионогенных эмульгаторов. Автореф.дис. канд. хим. наук/ Грицкова Инесса Александровна.- Москва. 1964.- 158 с.

28. Таубман, А. Б. Роль взаимодействия ПАВ с твердыми эмульгаторами в образовании и стабилизации эмульсий / А. Б. Таубман, А. Ф. Корецкий // Доклады АН СССР, 1961. Т. 144. № 5. С. 1128 - 1129.

29. Дудукин, В.В. Исследование эмульсионной полимеризации стирола и метилметакрилата в присутствии неионных эмульгаторов. Дис. канд. хим. наук/ Дудукин В.В.- Москва. 1967.- 153 с.

30. Симакова, Г.А. Микроэмульгирование в процессе эмульсионной полимеризации/ Г.А. Симакова, В.А. Каминский, И.А. Грицкова, А.Н. Праведников. Докл. АН СССР.- 1984.-Т. 276.-Вып.1. С. 151-153.

31. Симакова, Г.А. Микроэмульгирование и его роль в процессе эмульсионной полимеризации гидрофобных мономеров. Автореф. дис.докт. хим. наук / Симакова Галина Александровна,- Москва.- 1990.- 24 с.

32. Gan, L.M. Effects of surfactant concentration on polymerizations of methyl methacrylate and styrene in emulsions and microemulsions/ L.M. Gan, K.C. Lee, C.H. Chew// Langmuir.- 1995.- Vol. 11.- P.449.

33. Хаддаж, M. Эмульсионная полимеризация стирола при низком содержании мономера в системе/ М. Хаддаж, Г.И. Литвиненко, И.А. Грицкова, В.А. Каминский, А.Н. Праведников// Высокомолек. соед.- Сер. Б.-1983.- Т. 25.- № 2.- С. 139 -142.

34. Адебайо, Г.Б. Синтез полистирольных суспензий с узким распределением частиц по размерам для иммуннохимических исследований: Автореф. дис.канд. хим. наук/Адебайо Габриэль Балогун.- Москва, 1996, 24 с.

35. Roe, С.Р. Surface chemistry aspects of emulsion polymerization / C.P. Roe // Ind Eng Chem. -1968. Vol. 60. - P. 20 - 33.

36. Antonietti, M. 90 years of polymer latexes and heterophase polymerization: more vital than ever / M. Antonietti, K. Tauer // Macromol. Chem. Phys. 2003. - Vol. 204. - P. 207 - 219.

37. Чирикова, O.B. Синтез функциональных полимерных суспензий в присутствии кремнийорганических ПАВ: Автореф. дис. . .канд. хим. наук/ Чирикова Ольга Владимировна.- Москва, 1994. -24 с.

38. Hill, R.M. Silicone surfactants: Surfactant science series/ R.M. Hill// Marcel Dekker Inc. -1999. P. 112-117.

39. Грицкова, И.А.Физико-химические свойства оксиэтилированных неионных поверхностно-активных веществ/ И.А. Грицкова, P.M. Панич // Успехи химии.- 1965. -Т.34.-№ 11.- С.1989-2019.

40. Уклонский, Д.А. Синтез и свойства кремнийорганических ПАВ для ПГТУУ/Д.А. Уклонский, В.В. Северный, JI.C. Лысенко Л.С.//Свойства и применение вспененных пластмасс, Владимир.- 1974.- С. 9-14.

41. Kondo A., Kawano T., Itoh F., Higashtani К. Immunological agglutination kinetics of latex particles particles with physically adsorbed antigen // J. Immunol. Methods, -1990.-v.135. -p.111-119.

42. Шкарлат П.Е. Латексная тест-система для экспресс-диагностики лептоспирозной инфекции у собак // Автореф. дисс.канд.биол.наук: М., 2003.

43. Madhusudana S.N., Saraswati S. Development and evaluation of a latex agglutination test for rabies antibodies // Journal of Clinical Virology. 2003. -v.27. -pp.129-135.

44. Марков А.Г. Полимерные микросферы для получения биотест-систем на С-реактивный белок// Автореф. дисс.канд.биол.наук: М.: 2005.

45. Быков В.А., Грицкова И.А., Станишевский Я.М., Прокопов Н.И. Лабораторный практикум по курсу «Полимерные микросферы в диагностике» М., 2003.

46. Григорьевская И.И. Антительные тест-системы на основе полимерных суспензий для мониторинга биополлютантов и биологически важных соединений // Автореф. дисс. .канд.хим.наук М.: 2005.

47. Сапунова О.О. Тест-системы для индикации антител к брюшнотифозному ВИ-антигену на основе полимерных микросфер латексов //Автореф. дисс.канд.мед.наук. М., 2001.

48. Гаспарян В.К. Полистирольные латексы в реакции агглютинации, приготовление и сенсибилизация // Клиническая лабораторная диагностика. Москва. 2001. - №1. - с.43-45.

49. II-Hoon Cho, Eui-Hwan Paek, Haiwon Lee, Ji Yoon Kang, Tae Song Kim, Se-Hwan Paek. Site-directed biotinylation of antibodies for controlled immobilization on solid surfaces // Analytical Biochemistry. 2007. - v.365. -pp. 14-23.

50. Цинкернагель Рольф. Основы иммунологии. -М.: «Мир», 2008.-с.135.

51. Ковальчук JI.B., Ганковская JI.B., Мешкова Р.Я. Клиническая иммунология и аллергология с основами общей иммунологии. -М., «ГЭОТАР-Медиа», 2011. 640с.

52. Станишевский Я.М., Грицкова И.А., Прокопов Н.И. // Способ получения антительной тест-системы для постановки реакции латексной агглютинации. Пат.№2380708, РФ от 24.02.2010г.

53. Станишевский Я.М. Диагностические тест-системы на основе конъюгатов «полимерная микросфера-биолиганд» медико-биологического назначения // Автореф.дисс.докт.хим.наук. М., 2012.

54. Генералова А.Н. Получение биоаналитических реагентов на основе полимерных дисперсий // Автореф.дисс.канд.хим.наук. М., 2000.

55. Gunter Mistlberger, Ingo Klimant. Luminescent magnetic particles: structures, syntheses, multimodal imaging, and analytical application. Bioanal. Rev. - 2010.-p.101.

56. Феофанов А.В. Спектральная лазерная сканирующая конфокальная микроскопия в биологических исследованиях. Успехи биологической химии. - т.47. - 2007. - с.371-410.

57. Волкова Е.В. Разработка полимерных микросфер для иммунофлуоресцентного анализа / Е.В. Волкова, И.А. Грицкова, С.А. Гусев, А.Д. Лукашевич, А.А. Гусев, Е.Н. Левшенко, Л.А. Злыднева, К.О. Сочилина // Биотехнология. 2012. - №4. - С.74-77.

58. В. Прозоровский. Кровеносные сосуды и рак. // Наука и жизнь. -№ 9. 2006.

59. Ole Goertz et al. Burn model for in vivo investigations of microcirculatory changes.// Open access journal of plastic surgery.- 3.- 2009.

60. Shinya Higuchi et al. Gut hyperpermiability after ischemia and reperfusion: attenuation with adrenomedullin and its binding protein treatment. // International Journal of Clinica and Experimental Pathology. 2008. - №1(5) -p409^18.

61. Yonca A. Akova. Роль флуоресцентной ангиографии. // EuroTimes January 2008.

62. G. Zacharakis, H. Kambara, H. Shih, J. Ripoll, J. Grimm, Y. Saeki, R. Weissleder, V. Ntziachristos Volumetric tomography of fluorescent proteins through small animals in vivo // PNAS.- 2005.- V. 102.- N. 51.- P. 18252-18257.

63. W. Cai, A. R. Hsu, Z. Li, X. Chen Are quantum dots ready for in vivo imaging in human subjects? // Nanoscale Res Lett/ 2007/- №2. - p265-281.

64. Ballou В., Fisher G., Waggoner A., et al. Tumor labeling in vivo using cyanine-conjugated monoclonal antibodies // Cancer Immunology. Immunother. 1995. -v/41 -№4 - p257-263.

65. S. Miltenyi, W. Muller, W. Weichel, A. Radbruch, Cytometry.- 1990. №11. - p231.

66. P. M. Lackie, Histochem. Cell Biol. 1996. - v. 106. p9.

67. С. В. Murray, D. J. Noms, M. G. Bawendi, ibid. 1993.-v.115. -p8706.

68. A. Waggoner, Methods Enzymol. -1995.-v.246.- p362.

69. X. G. Peng, J. Wickham, A. P. Alivisatos, ibid. -1998. -v.120.-p5343.

70. M.B. Ширманова, M.A. Сироткина, M.C. Клешнин, И.В. Балалаева, Е.В. Загайнова. Прижизненная флуоресцентная визуализация экспериментальных опухолей. // Нижегородская государственная медицинская академия, проект № 02.522.11.2002.

71. W.-B. Wu et al. Fluorescent polystyrene microspheres with large Stokes shift / Journal of Physics and Chemistry of Solids. 2008. - v.69. -pp76-82.

72. G.E. Johnson, Macromolecules.-1980. v.13. - ppl45-152.

73. M. Sivakumar, K.P. Rao, React. Funct. Polym.-2000.- v.46. p29-37.

74. D.T. Birnbaum, J.D. Kosmala, D.B. Henthorn, L. Brannon-Peppas, J. Controlled Release. -2000. -v.65. pp375-387.

75. A.J. Paine, J. Polym. Sei. Part A.-1990. v.28. -pp2485-2490.

76. A. Tuncel, R. Kahraman, J. Appl. Poly. Sei. 1993. - v.50. -ррЗОЗ-307.

77. J.T. Braunholtz, F.G. Mann, J. Chem. Soc. -1952.- p3046-3051.

78. P.I. Ittyeeah, F.G. Mann, J. Chem. Soc. -1956.- p3179-3183.

79. J.R. Lakowicz, Principles of Fluorescence Spectroscopy, Plenum Press, New York.- 1999.- pp. 425-442.

80. A. Imhoff, M. Megens, J.J. Engelberts, D.T.N, de Lange, R. Sprik, W.L. Vos, J. Phys. Chem. B.-1999.- v.103.- ppl408-1415.

81. P.K.J. Kinnunen, A.-P. Tulkki, H. Lemmetyinen, J. Paakkola, J.A. Virtanen, Chem. Phys. Lett. 1987.-v.136. -pp539-545.

82. G.Z. Chen, Z.Q. Huang, Z.Z. Zheng, Fluoroimmunoassay, Science Press, Beijing.- 1990.- pp. 64-81.

83. J.J. Kelly, J.R. Ewen, S.L. Bernard, R.W. Glenny, C.H. Barlow, Rev. Sci. Instrum. -2000.-V.71 ,-pp228-234.

84. M.F.M. Van Oosterhout, H.M.M. Willigers, R.S. Reneman, F.W. Prinzen, Am. J. Physiol. -1995.-v.269.-ppH725-H733.

85. L. Wang, C.Y. Yang, W.H. Tan, Nano Lett. -2005. -v.5.-pp37^3.

86. U.S. Pat. No. 5,952,131 to Kumaceheva et.al.

87. U.S. Pat. No. 5,267,235 to Rembaum et.al.

88. U.S. Pat. No. 5,073,498 to Schwartz et.al.

89. Sukhorukov GB, Rogach AL, Garstka M et al.: Multifunctionalized polymer microcapsules: novel tools for biological and pharmacological applications. Small 3(6). - 2007. - p 944-955.

90. Nida DL, Nitin N, Yu WW, Colvin VL, Richards-Kortum R: Photostability of quantum dots with amphiphilic polymer-based passivation strategies. -Nanotechnology. №19. - 2008. - pl-6.

91. Patra MK, Manoth M, Singh VK et al.: Synthesis of stable dispersion of quantum dots in aqueous medium showing visible emission from bluish green to yellow. J. Luminescence. - 2008. - p320-324.

92. Li QA, Chen XJ, Xu Y et al.: Photoluminescence properties of the CdSe quantum dots accompanied with rotation of the defocused wide-field fluorescence images. J. Phys. Chem. C. - 2010. - pi 14.

93. Kettenbach, J.; -Stadler, A.; Katzler, I.; Schernthaner, R.; Blum, M.; Lammer, J.; Rand, T. Drug-loaded microspheres for the treatment of liver cancer: review of current results. Cardiovasc. Intervent. Radiol. - 2008. - v.31 - p468-476.

94. УТВЕРЖДАЮ» Директор ФГБУН Научно-исследовательский институт ¿теской медицины ФМБА России Сергиенко В. И.вбября 2012 г.

95. Полученные модельные диагностикумы показали высокую чувствительность и специфичность. Данные полимерные суспензии могут быть рекомендованы для создания диагностических тест-систем на различные заболевания.

96. Также на основе полимерных микросфер создана методика визуализации трехмерного строения сосудистого русла экспериментальных животных.

97. Старший научный сотрудник лаборатории морфологии, кандидат медицинских наук

98. Подпись ст.н.с. Е.И. Гоуфмана

99. Ученый секретарь ФГБУН «НИИ ФХМ ФМБ, к.б.н.1. Е.И.Гоуфман/1. Васильева Л.Л.