Изучение встречаемости папилломавирусной инфекции в Санкт-Петербурге тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Александрова, Юлия Николаевна

• Александрова, Юлия Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Александрова, Юлия Николаевна

1. ВВЕДЕНИЕ.2

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.10

2.1. Структурная организация генома HPV.

2.2. Белки HPV и их функции.

2.3. Классификация HPV.

2.4. Биологические основы патогенеза HPV-инфекции.

2.5. Формы HPV-инфекции.

2.6. Современные подходы в диагностике HPV-инфекции.

2.6.1. Основные направления диагностики HPV-инфекции.

2.6.2. Методы детекции HPV на основе гибридизации.

2.6.3. Методы детекции HPV на основе ПЦР.

2.6.4. Клиническая значимость HPV-mecmoe.

2.7. Эпидемиологические аспекты HPV-инфекции.

2.7.1. Встречаемость HPV-инфекции среди здоровых женщин различных этнико-географических регионов.

2.7.2. Распределение HPV по типам среди здоровых женщин различных этнико-географических регионов.

2.7.3. Факторы риска HPV-инфекции.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.36

3.1 Материал исследования.

3.2 Методы исследования.

3.2.1. Приготовление сорбента для выделения ДНК.

3.2.2. Выделение ДНК.

3.2.3. Полимеразная цепная реакция.

3.2.4. Обратная дот-блот гибридизация.

3.2.5. Рестрикционное картирование.

3.3. Статистическая обработка результатов.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.48

4.1. Детекция и типирование генитальных HPV.

4.2. Анализ встречаемости HPV-инфекции среди здоровых женщин Санкт-Петербурга.

4.3. Анализ распределения HPV по типам в группе HPV-положительных женщин.

4.4. Встречаемость различных типов HPV среди здоровых женщин Санкт-Петербурга.

4.5. Анализ связи HPV-инфекции с особенностями репродуктивного анамнеза женщин.

4.5.1. Анализ связи HPV-инфекции с возрастом на момент обследования.

4.5.2. Анализ связи HPV-инфекции с возрастом начала половой жизни и общей продолжительностью половой жизни.

4.5.3. Анализ связи HPV-инфекции с числом абортов.

4.6. Апробация тест-системы для ПЦР-диагностики HPV в широкой клинической практике.

4.6.1. ПЦР-детекция HPV с типоспецифической парой праймеров.

4.6.2. Сравнительный анализ выявляемости ДНК HPV по результатам MY 09/11 и GP 4/5 ПЦР.

4.6.3. Сравнительный анализ результатов генотипирования в реакции обратной дот-блот гибридизации и GP 4/5 ПЦР.

5. ОБСУЖДЕНИЕ.68

5.1. молекулярно-генетический алгоритм диагностики hpv-инфекции.

5.2. ПЦР-диагностика HPV в условиях клинической практики.

5.3. Распространенность HPV-инфекции в здоровой популяции женщин Санкт-Петербурга: основные характеристики и сравнение с данными других популяционных групп.

5.4. Особенности распределения HPV по типам в здоровой популяции женщин Санкт-Петербурга.

5.5. Оценка связи HPV-инфекции с факторами риска в популяции здоровых женщин Санкт-Петербурга.

6. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение встречаемости папилломавирусной инфекции в Санкт-Петербурге»

Достигнутые за последние годы успехи в изучении папилломавирусов (human papillomaviruses, HPV) во многом связаны с применением современных технологий, основанных на высокоразрешающих методах диагностики. К настоящему времени установлена ведущая роль папилломавирусов в патогенезе рака шейки матки (РШМ) ( Киселев Ф.Л. и др., 1990; Zur Hausen H. and de Villiers E.-M., 199; Zur Hausen H., 1996). Многочисленные исследования последних лет доказали, что не менее 95% неоплазм шейки матки содержат разновидности HPV, принадлежащие к т.н. типам "высокого риска" (HPV16, HPV18, HPV31, HPV33, HPV45 и т.д.) (Muñoz N. et al., 1992; Bosch F.X. et al., 1993; Eluf-Neto J. et al., 1994; Herrington C.S., 1994; Holly E.A., 1996; Van Muyden R.C. et al., 1999; Ferrera A. et al., 1999; Rolon P.A. et al., 2000). Более того, многие специалисты склонны относить редкие случаи HPV-негативных PLUM скорее к диагностическим артефактам, а не к биологической разновидности заболевания (Chan P.K. et al., 1999). В пользу активной роли HPV в развитии цервикальных карцином говорят и модельные эксперименты, продемонстрировавшие трансформирующие свойства некоторых генов папилломавирусов (Barbosa M.S. et al., 1991; Zur Hausen H., 1994; ScheffnerM. et al., 1994).

Несмотря на высокую потенциальную опасность, HPV являются условными патогенами. Действительно, папилломавирусы достаточно часто (примерно в 10%-30%) выявляются у здоровых женщин (эпителий шейки матки без морфологических изменений) (De Sanjose S. et al., 1992; Liaw K.L. et al., 1999; Hopman E.H. et al., 2000). Таким образом, носительство HPV свидетельствует не о злокачественном процессе как таковом, а о многократно повышенном риске возникновения последнего. Факторы, модифицирующие патогенность HPV и, как следствие, провоцирующие опухолевый рост у инфицированных женщин, остаются неизвестными (Muñoz N. et al., 1996).

Диагностика HPV-инфекции обладает высокой клинической значимостью, так как позволяет очертить группу онкологического риска, т.е. выявить среди здоровых женщин тех, кому в первую очередь необходимо проведение активных, комплексных мер, направленных на профилактику и раннюю диагностику РШМ. На сегодняшний день детекция HPV широко используется в гинекологических клиниках Европы и США в рамках программы по профилактике онкологических заболеваний. Большинство существующих техник основано на высокоразрешающем методе полимеразной цепной реакции (ПЦР) (Evander M. et al., 1991; Gravitt P.E. et al., 1992; Gravitt P.E. et al., 1998). Согласно накопленным эпидемиологическим сведениям, встречаемость HPV в здоровых популяциях значительно варьирует в различных этнико-географических регионах и во многом определяется поведенческими, социально-экономическими, медицинскими и гигиеническими стандартами. Как правило, локальные показатели инфицированности папилломавирусами тесно взаимосвязаны с таковыми для других генитальных инфекций (сифилиса, гонореи, хламидиоза, урогенитального микоплазмоза и т.д.) (Тихонова Л.И., 1999; Franco E.L. et al., 1995; Karlsson R. et al., 1995; Herrero R. et al., 2000; Sellors J.W. et al., 2000; Montes M.B. et al., 2000). Географичекие колебания характерны не только для встречаемости HPV-инфекции, но и для распределения HPV-носительства. Например, HPV16 и HPV18 чаще выявляются в Европе, тогда как для некоторых азиатских стран показано преобладание HPV52 и HPV58 (Hagmar В. et al., 1995; Lin Q.Q. et al., 1998; Svare E.l. et al., 1998). Географические особенности эпидемиологии папилломавирусной инфекции непременно должны учитываться при разработке региональных скрининговых диагностических программ, а в недалёком будущем - и для формулирования стратегий HPV-вакцинации.

Несмотря на очевидную социальную значимость сведений о распространённости папилломавирусов, HPV-носительство в России ни разу не подвергалось объективным оценкам. Более того, в случае нашей страны даже приближённое прогнозирование картины HPV-эпидемиологии представляется крайне затруднительным. Действительно, с одной стороны, многие медико-социальные особенности Российской Федерации (высокий образовательный уровень, общедоступность здравоохранения, активное планирование семьи, относительно поздний возраст первых родов и т.д.) сходны с таковыми в Европе и США. С другой стороны, хотя в отношении России абсолютно отсутствуют какие-либо научные сведения об особенностях репродуктивного поведения, косвенные факты указывают на высокий риск передачи генитальных инфекций (Тихонова Л.И., 1999). Многочисленные газетные публикации и отдельные медицинские статьи справедливо упоминают тот факт, что обсуждение проблем сексуального воспитания долгое время считалось "неуместным" для образовательных, медицинских и научно-исследовательских сфер. Исследования, выполненные в соответствии с требованиями современной науки, стали появляться лишь совсем недавно. В частности, опросы небольших групп городских подростков показали низкий уровень знаний о репродуктивной гигиене, сочетающийся со значительным промискуитетом (Шинский Г.Э. и др., 1999; Westhoff W.W. et al., 1996). Однако эти публикации не могут быть экстраполированы на всё общество в целом, так как они концентрировались лишь на определённых категориях населения. Значительно более достоверными представляются выводы об игнорировании современных способов контрацепции, основанные на исключительно высокой частоте абортов в Российской Федерации (Popov A.A., 1991). Подобные факты косвенно свидетельствуют о пренебрежении к репродуктивному здоровью. Сочетание перечисленных особенностей позволяет предположить высокую встречаемость бессимптомных генитальных инфекций, включая HPV-носительство. Однако адекватные лабораторные исследования, посвященные этому вопросу, до сих пор не проводились.

Цель и задачи исследования:

Целью настоящей работы явилось изучение встречаемости HPV-инфекции в популяции здоровых женщин Санкт-Петербурга. В соответствии с целью исследования были сформулированы следующие задачи:

1. Разработать молекулярно-генетический метод детекции и типирования HPV-инфекции.

2. Оценить встречаемость HPV-инфекции среди здоровых женщин Санкт-Петербурга.

3. Оценить возможную корреляцию между присутствием HPV в цервикальных соскобах и некоторыми особенностями репродуктивного анамнеза женщин: возраст на момент обследования, возраст начала половой жизни, общая продолжительность половой жизни до момента обследования и число абортов.

4. Изучить распределение типов HPV среди здоровых женщин Санкт-Петербурга.

Научная новизна:

В ходе выполнения диссертационного исследования получены следующие приоритетные данные:

1. Показана целесообразность использования метода обратной дот-блот гибридизации для генотипирования HPV.

2. Впервые исследованы особенности HPV-инфекции (встречаемость HPV-инфекции, распределение HPV по типам) у здоровых женщин в российской популяции на примере женщин Санкт-Петербурга.

3. Установлена ассоциация между присутствием в цервикальных соскобах HPV и повышенным числом абортов. Показано, что присутствие HPV не коррелирует с другими особенностями репродуктивного анамнеза женщин, а именно: возрастом при обследовании, возрастом начала половой жизни, общей продолжительностью половой жизни до момента обследования.

Практическая значимость:

Диссертация имеет научно-практический характер. Ее практическая значимость заключается в следующем:

Разработан и апробирован молекулярно-генетический метод диагностики HPV-инфекции. Данный подход может широко использоваться в клинической практике для первичного скрининга женщин в рамках программы по профилактике и ранней диагностике РШМ и для мониторинга HPV-инфекции в группе бессимптомных носительниц.

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на Российско-французском семинаре "Молекулярные основы канцерогенеза" 5-6 июня 1999 г.; на научном семинаре "Генетические исследования в геронтологии" 29 июня 2000г.; на семинаре лаборатории молекулярной онкологии им. проф. H.H. Петрова.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 97 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных и выводов. Работа иллюстрирована 9 таблицами и 10 рисунками. Список литературы включает 134 публикации.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Александрова, Юлия Николаевна

6. ВЫВОДЫ.

1. Техника обратной дот-блот гибридизации является эффективным методом типирования HPV и может быть рекомендована для широкого использования в отечественной клинической практике.

2. Встречаемость HPV-инфекции в популяции здоровых женщин Санкт-Петербурга составляет 29%.

3. Установлено, что частота HPV-инфицированности достоверно выше у женщин, имевших в анамнезе 2 аборта и более (Р=0,005). Возраст на момент обследования, возраст начала половой жизни, и общая ее продолжительность не коррелируют с HPV-инфицированностью здоровых женщин.

4. Среди идентифицированных типов HPV 58% (включая смешанные инфекции) относятся к группе "высокого риска", 26% - к группе "низкого риска" (включая смешанные инфекции) и 16% HPV относятся к "неизвестным" типам. Наиболее распространенным является HPV16, частота обнаружения которого составляет 26%. Встречаемость HPV-инфекции смешанного типа составляет 5%.

5. Встречаемость и распределение по типам генитальных папилломавирусов в популяции здоровых женщин Санкт-Петербурга существенно не отличаются от таковых в большинстве европейских стран.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Александрова, Юлия Николаевна, 2001 год

1. Киселев Ф.Л., Павлиш O.A., Татосян А.Г. Молекулярные основы канцерогенеза у человека // М., "Медицина". 1990.

2. Киселев Ф.Л. Вирусы папиллом человека как этиологический фактор рака шейки матки: значение для практики здравоохранения // Вопр. Вирусол. -1997. т.42. -N 6. - с.248-251.

3. Тихонова Л.И. Общий обзор ситуации с инфекциями, передаваемыми половым путем. Анализ заболеваемости врожденным сифилисом в Российской Федерации // Вест.Дермат.Венерол. 1999. - N.2 - с.4-7.

4. Шинский Г.Э., Мерзляков В.А., Тимофеева С.Б. Эпидемические аспекты хламидийной инфекции // Вест.Дермат.Венерол. 1999. - N.1 - с.11-13.

5. Agorastos Т., Bontis J., Lambropoulos A.F. et al. Epidemiology of human papillomavirus infection in Greek asymptomatic women // Eur. J. Cancer Prev. -1995.-vol. 4. -p. 159-167.

6. Badaracco G., Venuit A., Morello R., Muller A., Marcante M.L. Human papillomavirus in head and neck carcinomas: prevalence, physical status and relationship with clinical/pathological parameters // Anticancer Res. -2000. -vol.20(2B). -p.1301-1315.

7. Barasso R. Colposcopic diagnosis of HPV cervical lesions // In: Munoz N., Bosch F.X., Shah K.V., Meheus A. The epidemiology of cervical and human papillomavirus. Lyon, France: IARC. -1992. -p.67-74.

8. Barbosa M.S., Vass W.C., Lowy D.R., Schiller J.T. In vitro biological activities of the E6 and E7 genes vary among human papillomaviruses of different oncogenic potential // J.Virol. -1991. -vol.65, -p.292-298.

9. Bauer H.M., Hildesheim A., Schiffman M.H., et al. Determinants of genital human papillomavirus infection in low-risk women in Portland, Oregon // Sex.Transm.Dis. -1993. -vol.20, -p.274-278.

10. Bauer H.M., Manos M.M. PCR detection of genital human papillomavirus // in: D.H. Persing (Ed.), Diagnostic Molecular Microbiology. Washington DC, 1993. -pp. 407-419.

11. Bauer H.M., Ting Y., Greer C.E. et al. Genital human papillomavirus infection in female university students as determined by a PCR-based method // JAMA. -1991. -vol.265, -p.472-477.

12. Becker T.M., Wheeler C.M., McGough N.S., et al. Sexually transmitted diseases and other risk factors for cervical dysplasia among southwestern Hispanic and non-Hispanic white women//JAMA. -1994. -vol.271, -p. 1181-1188.

13. Boom R., Sol C.J., Salimans M.M., Jansen C.L., Wertheim-van Dillen P.M., van der Noordaa J. Rapid and simple method for purification of nucleic acids // J. Clin. Microbiol. 1990. - vol. 28. - p. 495-503.

14. Bosch F.X., Manos M.M., Munoz N. et al. Prevalence of Human papillomavirus in cervical cancer a worldwide perspective // J.Natl.Cancer Inst. -1995. -vol.87 -p.796-802.

15. Bosch F.X., Munoz N., de Sanjose S., et al. Human papillomavirus and CIN III: a case-control study in Spain and Colombia // Cancer. Epidemiol. Biomarker. Prev. -1993. -vol.2, -p.423-431.

16. Burk R.D., Ho G.Y., Beardsley L., Lempa M., Peters M., Bierman R. Sexual behavior and partner characteristics are the predominant risk factors forgenital human papillomavirus infection in young women // J. Infect. Dis. 1996. - vol. 174. - p. 679-689.

17. Chan P.K., Li W.H., Chan M.Y., Ma W.L., Cheung J.L., Cheung A.F. High prevalence of human papillomavirus type 58 in Chinese women with cervical cancer and precancerous lesions // J. Med. Virol. -1999. -vol.59(2). -p.232-238.

18. Chan S.Y., Delius H., Halpern A.L., Bernard H.-U. Analysis of genomic sequences of 95 papillomavirus types: uniting typing, phylogeny and taxonomy // J.Virol. -1995. -vol.69, -p.3074-3083.

19. De Villiers E.-M. Human pathogenic papillomavirus types: an update // Curr.Top.Microbiol.Immunol. -1994. -vol.186, -p.1-12.

20. De Villiers E.-M. Hybridization method other then PCR: an update // In: Munoz N., Bosch F.X., Shah K.V., Meheus A. The epidemiology of cervical and human papillomavirus. Lyon, France: IARC. -1992. -p.111-119.

21. De Villiers E.M. Minireview: heterogeneity of the human papillomavirus group // J.Virol. -1989. -vol.63, -p.4898-4903.

22. De Villiers E.-M., Wagner D., Schneider A., et al. Human papillomavirus DNA in women without and with cytological abnormalities: results of 5-year follow-up study // Gynecol.Oncol. -1992. -vol.44. -p.33-39.

23. Delius H., Hofmann B. Primer-directed sequencing of human papillomavirus types //Curr. Top. Microbiol. Immunol. -1994. -vol.186, -p. 13-31.

24. Dyson N., Howley P.M., Munger K., Harlow E. The human papillomavirus 16 E7 oncoprotein is able to bind to the retinoblastoma gene product // Science (Washington DC). -1989. -vol.243, -p.934-937.

25. Elfgren K., Kalantari M., Moberger B., Hagmar B., Dillner J. A population-based five-year follow-up study of cervical human papillomavirus infection //Am. J. Obstet. Gynecol. -2000. -vol.183(3). -p.561-567.

26. Eluf-Neto J., Booth M., Munoz N. Bosch F.X., Meijer C.J.L.M., Walboomers J.M.M. Human papillomavirus and cervical cancer in Brazil // Br.J.Cancer. -1994. -vol.69, -p.114-119.

27. Evander M., Edlund K., Gustafsson A., Jonsson M., Karlsson R., Rylander E., Wadell G. Human papillomavirus infection is transient in young women: a population-based cohort stady//J.Infect.Dis. -1995. -vol.171, -p.1026-1030.

28. Evander M., Wadell G. A general primer pair for amplification and detection of genital human papillomavirus types // J.Virol.Methods. -1991. -vol.31. -p.239-250.

29. Figueroa J.P., Ward E., Luthi T.E., Vermund S.H., Brathwaite A.R., Burk R.D. Prevalence of human papillomavirus in Jamaica: association of younger age ang increased sexual activity // Sex.Transm.Dis. -1995.

30. Franco E.L., Rohan T.E., Villa L.L. Epidemiologic evidence and human papillomavirus infection as a necessary cause of cervical cancer // J. Natl. Cancer Inst. -1999. -vol.91 (6). -p.506-511.

31. Franco E.L., Villa L.L., Ruiz A., Costa M.C. Transmission of cervical human papillomavirus infection by sexual activity: differences between low and high oncogenic risk types // J. Infect. Dis. 1995. - vol. 172. - p. 756-763.

32. Galloway D. Serological assays for the detection of HPV antibodies // In: Munoz N., Bosch F.X., Shah K.V., Meheus A. The epidemiology of cervical and human papillomavirus. Lyon, France: IARC.-1992.-p.147-161.

33. Goodman A. Role of routine human papillomavirus subtyping in cervical screening // Curr. Opin. Obstet. Gynecol. -2000. -vol.12(1). -p.11-14. Review.

34. Gravitt P.E., Peyton C.L., Apple R.J., Wheeler C.M. Genotyping of 27 human papillomavirus types by using L1 consensus PCR products by a singlehybridization, reverse line blot detection method // J. Clin. Microbiol. 1998. - Vol. 36. - P. 3020-3027.

35. Hagmar B., Kalantari M., Skyldberg B., Moberger B., Johansson B., Walaas L., Warleby B. Human papillomavirus in cell samples from Stockholm gynecologic health screening //Acta Cytologica. -1995. -vol.39, -p.741-745.

36. Hawley N.P., Vousden K.H., Hubbert N.L., Lowy D.R., Schiller J.T. HPV16 E6 and E7 proteins cooperate to immortalize human foreskin keratinocytes // EMBO J. -1989. -vol.8, -p.3905-3910.

37. Herrington C.S. Human papillomaviruses and cervical neoplasia. 1. Classification, virology, pathology, and epidemiology // J.Clin.Pathol. -1994. -vol.47, -p. 1066-1072.

38. Hildesheim A., Gravitt P., Schiffman M.H., et al. Determinants of genital human papillomavirus infection in low-income women in Washington // D.C.Sex.Transm.Dis. -1993. -vol.20, -p.279-285.

39. Hildesheim A., Schiffman M.H., Gravitt P.E. et al. Persistence of type-specific human papillomavirus infection among cytoiogically normal women. J.infect.Dis., 1994, pp. 235-240.

40. Ho G.Y., Burk R.D., Klein S., et al. Persistent genital human papillomavirus infection as a risk factor for persistent cervical dysplasia // J.Natl.Cancer Inst. -1995. -vol.87, -p. 1365-1371.

41. Ho G.Y.F., Bierman R., Beardsley L., Chang N.P., Burk R.D. Natural history of cervicovaginal papillomavirus infection in young women // N.Engl.J.Med. -1998. -vol.338, -p.423-428.

42. Holly E.A. Cervical intraepithelial neoplasia, cervical cancer and HPV // Annu.Rev.Public.healf. -1996. -vol.17, -p.69-84.

43. Huang S., Afonina I., Miller B.A., Beckmann A.M. Human papillomavirus types 52 and 58 are prevalent in cervical cancers from Chinese women // Int.J.Cancer. -1997. -vol.70, -p.408-411.

44. Hwang T. Detection and typing of human papillomavirus DNA by PCR using consensus primers in various cervical lesions of Korean women // J. Korean. Med. Sci. -1999. -vol. 14(6). -p.593-599.

45. Jewers R.J., Hildebrandt P., Ludlow J.W., Kell B., McCance D.J. Regions of human papillomavirus type 16 E7 oncoprotein required for immortalization of human keratinocytes// J.Virol. -1992. -vol.66, -p. 1329-1335.

46. Karlsson R., Jonsson M., Edlund K. et al. Lifetime number of partners as the only independent risk factor for human papillomavirus infection: a population-based study. Sex.Transm.Dis., 1995, -vol.22.-p.119-127.

47. Kiviat N.B., Koutsky L.A., Paavonen J.A. et al. Prevalence of genital papillomavirus infection among women attending a college student healf clinic or a sexually transmitted disease clinic//J.Infect.Dis. -1989. -vol.159, -p.293-302.

48. Kjaer S.K. and Jensen O.M. Comparison studies of HPV detection in areas at different risk for cervical cancer//In: Munoz N., Bosch F.X., Shah K.V., Meheus A. The epidemiology of cervical and human papillomavirus. Lyon, France: IARC. -1992. -p.243-249.

49. Koutsky L. Epidemiology of genital human papillomavirus infection // Am.J.Medicine. -1997. -vol.102 (5A). -p.3-8.

50. Lin Q.Q., Yu S.Z., Qu W., Cruz Y., Burk R.D. Human papillomavirus types 52 and 58 // Int. J. Cancer. 1998. - Vol. 75. - P. 484-485.

51. Lorincz A.T. Detection of human papillomavirus DNA without amplification: prospects for clinical utility // In: Munoz N., Bosch F.X., Shah K.V., Meheus A. The epidemiology of cervical and human papillomavirus. Lyon, France: IARC. -1992. -p.135-145.

52. Lorincz A.T., Reid R., Jenson A.B. et al. Human papillomavirus infection of the cervix: relative risk association of 15 common anogenital types // Obstet.Gynecol. -1992. -vol.79, -p.328-337.

53. Maehama T., Asato T., Kanazawa K. Prevalence of HPV infection in cervical cytology-normal women in Okinawa, Japan, as determined by a polymerase chain reaction // Int. J. Gynaecol. Obstet. -2000. -vol.69(2). -p. 175-176.

54. Manos M.M., Ting Y., Wright D.K., Lewis A.J., Broker T.R., Wolinsky S.M. Use of polymerase chain reaction for detection of genital human papillomavirus // Cancer Cells. -1989. -vol.7 -p.209-214.

55. Melkert P.W.J., Hopman E., Van den Brule A.J.C., et al. Prevalence of HPV in cytomorphologically normal cervical smears, as determined by the polymerase chain reaction, is age-dependent // Int. J. Cancer. -1993. -vol.53, -p.919-923.

56. Montes M.B., Ferreira A.C., Fenolio J.C., Toloi M.R.Effects of oral contraceptives in vaginal cytology// Pathologica. -2000. -vol.92(3). -p. 185-188.

57. Morrison E.A.B., Ho G.Y.F., Vermund S.H., et al. Human papillomavirus infection and other risk factors for cervical neoplasia: A case-control study // Int.J.Cancer. -1991. -vol.49, -p.6-13.

58. Moscicki A.B., Broering J., Powell K., et al. Comparison between colposcopy, cytologic, and histologic findings in women positive and negative for human papillomavirus DNA // J.Adolesc. Health. -1993. -vol.14, -p.74-79.

59. Moscicki A.-B., Palefsky G.M., Gonzales J., Schoolnik G.K. Human papillomavirus infection in sexually active adolescent females: Prevalence and risk factors // Pediatr. Res. -1990. -vol.28, -p.507-513.

60. Munger K., Werness B.A., Dyson N. Phelps W.C., Harlow E., Howley P.M. Complex formation of human papillomavirus E7 proteins with the retinoblastoma tumor suppressor gene product// EMBO J. -1989. -vol.8, -p.4099-4105.

61. Munoz N., and Bosch F.X. HPV and cervical neoplasia: review of case-control and cohort studies II In: Munoz N., Bosch F.X., Shah K.V., Meheus A. The epidemiology of cervical and human papillomavirus. Lyon, France: IARC. -1992. -p.251-261.

62. Munoz N., Bosch F.X., de Sanjose S. et al. The causal link between human papillomavirus and invasive cervical cancer: a population-based case-control study in Colombia and Spain // Int. J. Cancer. -1992. -vol.52, -p.743-749.

63. Munoz N., Kato I., Bosch F.X. et al. Risk factor for HPV DNA detection in middle-aged women. Sex. Transm.Dis., 1996, pp. 504-510.

64. Neuman R.J., Huettner P.C., Li L., Mardis E.R., Duffy B.F., Wilson R.K., Rader J.S. Association between DQB1 and cervical cancer in patients with human papillomavirus and family controls// Obstet.Gynecol. -2000. -vol.95(1). -p. 134-140.

65. Ngelangel C., Munoz N., Bosch F.X. et al. Causes of cervical cancer in the Philippines: a case-control study// J. Natl. Cancer Inst. 1998. - Vol. 90. - P. 43-49.

66. Palefsky G.M. and Holly E.A. Molecular virology and epidemiology of human papillomavirus and cervical cancer //.-1995. -vol.4, -p.415-428.

67. Pao C.C., Kao S.M., Tang G.-C., Lee K., Si J., Ruan S. Prevalence of human papillomavirus DNA sequences in an area with very high incidence of cervical carcinoma // Br.J.Cancer. -1994. -vol.70, -p.694-696.

68. Paraskevaidis E., Kalantari S.N., Georgiou I., Koliopoulos G., Pappa L., Malamou-Mitsi V., Lolis D.E. Spontaneous evolution of human papillomavirus infection in the uterine cervix//Anticancer. Res. -1999. -vol.19(4C). -p.3473-3478.

69. Persson E., Holzberg M., Edgardh K. Sexual experience, abortion and sexually trasmitted disease among young women at a contraceptive clinic // Acta.Obstet.Gynecol.Scand. -1991. -vol.70, -p.63-67.

70. Popov A.A. Family planning and induced abortion in the USSR: basic health and demographic characteristics // Stud. Fam. Plann. 1991. - Vol. 22. - P. 368-377.

71. Richardson H., Franco E., Pintos J., Bergeron J., Arella M., Tellier P. Determinants of low-risk and high-risk cervical human papillomavirus infections in Montreal University students // Sex. Transm. Dis. -2000. -vol.27(2). -p.79-86.

72. Rohan T., Mann V., McLaughlin J, et al. PCR-detection genital papillomavirus infection: prevalence and association with risk factors for cervical cancer // Int.J.Cancer. -1991. -vol.49, -p.856-860.

73. Rolon P.A., Smith J.S., Munoz N., Klug S.J., Herrero R., Bosch X., Llamosas F., Meijer C.J., Walboomers J.M. Human papillomavirus infection and invasive cervical cancer in Paraguay// Int. J. Cancer. -2000. -vol.85(4). -p.486-491.

74. Romanczuk H., Howley P.M. Disruption of either the E1 or E2 regulatory gene of human papillomavirus type 16 increases viral immortalization capacity // Proc.Natl. Acad.Sci.USA.-1992.-vol.89.-p.3159-3163.

75. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., et al. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase // Science. -1988. -vol.239, -p.487-491.

76. Saiki R.K., Walsh P.S., Levenson C.H., Erlich H.A. Genetic analysis of amplified DNA with immobilized sequence-specific oligonucleotide probes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. - Vol. 86. - P. 6230-6234.

77. Sasagava T., Minemoto Y., Basha W., Yamazaki H., Nakamura M., Yoshimoto H., Sakaike J., Inoue M. A new PCR-based assay amplifies the E6-E7 genes of most mucosal human papillomaviruses (HPV) // Virus. Res. -2000. -vol.67(2). -p. 127-139.

78. Sasieni P.D. Human papillomavirus screening and cervical cancer prevention //J. Am. Med. Womens Assoc. -2000. -vol.55(4). -p.216-219.

79. Scheffner M., Romanczuk H., Munger K., Huibregtse J.M., Mietz, Howley P.M. Function of human papillomavirus proteins // Curr.Top.Microbiol.Immunol. -1994. -vol.186, -p.83-96.

80. Scheffner M., Werness B.A., Huibregtse J.M., Levine A.J., Howley P.M.The E6 oncoprotein encoded by human papillomavirus types 16 and 18 promotes the degradation of p53 // Cell. -1990. vol.63, -p. 1129-1163.

81. Schiffman M.H. Epidemiology of cervical human papillomavirus infection // Curr.Top.Microbiol.Immunol. -1994. -vol.186, -p.55-81.

82. Schneider A., Koutsky L. Natural history and epidemiology features of genital HPV infection // In: Munoz N., Bosch F.X., Shah K.V., Meheus A. The epidemiology of cervical and human papillomavirus. Lyon, France: IARC. -1992. -p.25-52.

83. Shah K.V. Human papillomavirus and other biological markers in cervical cancer // In: Munoz N., Bosch F.X., Shah K.V., Meheus A. The epidemiology of cervical and human papillomavirus. Lyon, France: IARC. -1992. -p.211-218.

84. Smith H.L., Bollen L.J.M., Vonk J., van derVelden J., Kaan J.A., Mol B.W., Schegget J.T. Intermethod variation in detection of human papillomavirus DNA in cervical smears // J.Clin.Microbiol. -1995. -vol.33, -p.2631-2636.

85. Southern S.A., Herrington C.S. Molecular events in uterine cervical cancer // Sex. Transm. Infect. 1998. - Vol. 74. - P. 101-109.

86. Stewart A-C. M., Eriksson A.M., Manos M.M., Munoz N., Bosch F.X., Peto J., Wheeler C.M. Intratype variation in 12 human papillomavirus types: a worldwide perspective // J.Virol. -1996. -vol.70, -p.3127-3136.

87. Storey A., Pirn D., Murray A., Osborn K, Banks L., Crawford L. Comparison of the in vitro transforming activities of human papillomavirus types // EMBO J. -1988. -vol.7, -p. 1815-1820.

88. Svare E.I., Kjaer S.K., Smits H.L., Poll P., Tjong-A-Hung S.P., ter Schegget J. Risk factors for HPV detection in archival Pap smears. A population-based study from Greenland and Denmark // Eur.J.Cancer. -1998. -vol.34, -p. 12301234.

89. Svare E.I., Kjaer S.K., Worm A.M. et al. Risk factors for HPV infection in women from sexually transmitted disease clinics: comparison between two areas with different cervical cancer incidence // Int. J. Cancer. 1998. - Vol. 75. - P. 1-8.

90. Syrjanen K. Human papillomavirus in genital carcinogenesis // Sex.Transm.Dis. -1994. -vol. 21. -p.S86-89.

91. Syrjanen K., Syrjanen S. Epidemiology of human papillomavirus infection and genital neoplasia // Scand.J.lnfect.Dis. Suppl. -1990. -vol.69, -p.7-17.

92. Torroella-Kouri M., Morsberger S., Carrillo A., Mohar A., Meneses A., Ibarra M., Daniel R.W., Ghaffari A.M., Solorza G., Shah K.V. HPV prevalence among mexican women with neoplastic and normal cervixes // Gynecol.Oncol. -1998. -vol.70.-p.115-120.

93. Tyring S.K. Human papillomavirus infections: epidemiology, pathogenesis, and host immune response // J. Am. Acad. Dermatol. -2000. -vol.43. -p.S18-26. Review.

94. Van Ranst M.A., Tachezy R., Delius H., Burk R.D. Taxonomy of human papillomavirus // Papillomavirus Rep. -1993. -vol.4, -p.61-65.

95. Villa L.L. Human papillomaviruses and cervical cancer//Adv. Cancer Res. 1997. - Vol. 71. - P. 321-341.

96. Werness B.A., Levine A.J., Howley P.M. Association of human papillomavirus types 16 and 18 E6 proteins with p53 II Science (Washington DC). -1990. -vol.248, -p.76-79.

97. Westhoff W.W., Klein K., McDermott R.J., Schmidt W.D., Holcomb D.R. Sexual risk-taking by Muscovite youth attending school // J. Sch. Health. 1996. -Vol. 66. - P. 102-105.

98. Wheeler C.M., Parmenter C.A., Hunt W.S., et al. Determinants of genital human papillomavirus infection among cytologically normal women attending the University of New Mexico Student Health Center // Sex.Transm.Dis. -1993. -vol.20, -p.286-289.

99. Wick M.J. Diagnosis of human papillomavirus gynecologic infections // Clin. Lab. Med. -2000. -vol.20(2). -p.271-287, Review.97

100. Womack S.D., Chirenje Z.M., Gaffikin L, Blumental P.D., McGrath J.A., Chipato T., Ngwalle S., Munjoma M., Shah K.V. HPV-based cervical cancer screening in a population at high risk for HIV infection // Int. J. Cancer. -2000. -vol.85(2). -p.206-210.

101. Zur Hausen H. and de Villiers E.-M. Human papillomaviruses // Annu.Rev.Microbiol. -1994. -vol.48, -p.427-447.

102. Zur Hausen H. Papillomavirus infection a major cause of human cancer // Biochim.Biophys.Acta. -1996. -vol.1288, -p.55-78.