Фармакогностическое изучение и стандартизация иглицы шиповатой и сухого экстракта на ее основе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат фармацевтических наук Томашевская, Ольга Юрьевна

• Томашевская, Ольга Юрьевна
• кандидат фармацевтических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Томашевская, Ольга Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ВЕНОЗНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ. ИГЛИЦА ШИПОВАТАЯ - ПЕРСПЕКТИВНЫЙ ИСТОЧНИК ПОЛУЧЕНИЯ ФИТОПРЕПАРАТА ВЕНОТОНИЗИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ.

1.1 Хроническая венозная недостаточность: этиология, патогенез и современные направления .терапии.

1.2 Номенклатура венотонизирующих средств растительного происхождения и их стандартизация.

1.3 Ботаническое описание, химический состав и применение в народной и научной медицине сырья иглицы шиповатой.

1.4 Характеристика, методы выделения и анализа стероидных сапонинов.

1.5 Современные аспекты технологии и стандартизации сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ I.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ. ПОЯСНЕНИЕ К ЭКСПЕРИМЕНТУ

ГЛАВА II. ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЫРЬЯ ИГЛИЦЫ ШИПОВАТОЙ И РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА.

2.1 Исследование морфологических признаков сырья.

2.2 Исследование микроскопических признаков сырья.

2.2.1 Анатомическое строение корневища.

2.2.2 Анатомическое строение корня.

2.3 Установление номенклатуры и норм числовых показателей.

2.4 Определение критериев подлинности сырья.

2.5 Разработка методики количественного определения стероидных сапонинов в сырье.

2.6 Изучение стабильности в процессе хранения.

2.7 Разработка нормативной документации на сырье.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ II.

ГЛАВА III. ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ КОРНЕВИЩ И КОРНЕЙ ИГЛИЦЫ ШИПОВАТОЙ.

3.1 Определение рускогенина в сырье иглицы.

3.2. Определение фенольных соединений.

3.3Определение свободных Сахаров.

3.4. Определение аминокислот.

3.5 Определение микро- и макроэлементы.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ III.

ГЛАВА IV. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ПОЛУЧЕНИЯ СУХОГО ЭКСТРАКТА

ИГЛИЦЫ ШИПОВАТОЙ.

4.1. Подбор оптимальных параметров экстракции.

4.2 Изложение технологического процесса получения сухого экстракта иглицы шиповатой.

4.3 Изучение физических свойств сухого экстракта.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ IV.

ГЛАВА V. ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА СУХОГО ЭКСТРАКТА

И РАЗРАБОТКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЕГО КАЧЕСТВА.

5.1 Изучение качественного и количественного состава биологически активных веществ сухого экстракта.

5.1.1 Определение рускогенина.

5.1.2 Определение фенольных соединений.

5.1.3 Определение свободных Сахаров.

5.1.4 Определение аминокислот.

5.1.5 Определение содержания микро- и макроэлементов.

5.2 Разработка методик стандартизации сухого экстракта иглицы.

5.2.1 Определение подлинности сухого экстракта.

5.2.2 Количественное определение суммы стероидных сапонинов.

5.3 Изучение фармакологических свойств сухого экстракта иглицы.

5.4 Разработка нормативной документации на сухой экстракт.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ V.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое изучение и стандартизация иглицы шиповатой и сухого экстракта на ее основе»

Актуальность темы. Хроническая венозная недостаточность (ХВН) нижних конечностей — одно из наиболее часто встречаемых в повседневной медицинской практике патологических состояний, характеризующихся прогрессивным и часто осложненным течением, существенным социально-экономическим значением. По данным статистики в Российской Федерации данной патологией страдают от 30-50% трудоспособного населения, причем прослеживается зависимость частоты венозной патологии от возраста, которая начинает существенно увеличиваться после 40 лет и у людей старше 60 лет частота различных поражений венозного русла нижних конечностей достигает 80%.

В настоящее время номенклатура венотонизирующих средств представлена в основном препаратами растительного происхождения зарубежного производства на основе конского каштана обыкновенного и его сочетаний с другими компонентами.

Данное обстоятельство диктует необходимость поиска нового вида сырья и создания на его основе эффективного отечественного фитопрепарата для профилактики и лечения венозной недостаточности.

Перспективным объектом изучения, на наш взгляд, являются подземные органы иглицы шиповатой Rvscus aculeatus L., (семейство Liliaceae) используемые в производстве биологически активных добавок к пище, а также в получении лекарственных препаратов венотонизирующего действия Цикло-3 крем и Цикло-3 форт, капсулы (Франция).

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является фармакогностическое изучение подземной части иглицы шиповатой, разработка технологии получения сухого экстракта и их стандартизация.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

- провести фармакогностическое изучение подземных органов иглицы шиповатой, установить диагностически значимые признаки в макро- и микроскопическом строении сырья;

- разработать методики качественного и количественного определения основных групп биологически активных веществ (БАВ) в подземных органах иглицы шиповатой; установить закономерности выхода БАВ из лекарственного растительного сырья в зависимости от основных факторов, влияющих на процесс экстракции;

- разработать рациональную технологическую схему получения сухого экстракта, позволяющую проводить максимальное извлечение БАВ;

- исследовать химический состав, технологические свойства и разработать показатели качества сухого экстракта иглицы шиповатой, провести валидацию методик анализа;

- по результатам исследований оформить технические условия (ТУ) на новый вид лекарственного растительного сырья - корневища и корни иглицы шиповатой, разработать проект фармакопейной статьи (ФС) на иглицы шиповатой экстракт сухой, оформить лабораторный регламент на получение сухого экстракта, оформить протокол валидации методик анализа.

Научная новизна работы. Информационно-аналитическими исследованиями показана необходимость разработки отечественного лекарственного средства венотонизирующего действия.

На основании макро- и микроскопического анализа установлены диагностически значимые признаки в морфологическом и анатомическом строении корневищ и корней иглицы шиповатой.

Подобраны условия анализа БАВ в сырье иглицы с помощью физико-химических методов: хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ), высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), спектрофотометрии. Изучен качественный и количественный состав основных групп БАВ (стероидные сапонины, фенольные соединения, органические кислоты, сахара, аминокислоты), состав микро- и макроэлементов.

Установлены закономерности выхода экстрактивных веществ и стероидных сапонинов из растительного сырья в зависимости * от степени его измельченности, типа, экстрагента, соотношения сырье/экстрагент, гидродинамических условий, кратности экстракции, температуры, позволяющих разработать рациональный способ получения сухого экстракта иглицы шиповатой.

Подобраны условия анализа стероидных сапонинов в растительном сырье и сухом экстракте и разработаны методики их стандартизации.

Показана возможность разработки отечественного лекарственного средства венотонизирующего действия на основе иглицы шиповатой.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- Технические условия ТУ 9377-170-04868244-2008 «Корневища и корни иглицы шиповатой»;

- Проект ФС «Иглицы шиповатой экстракт сухой» (Акт внедрения методики количественного определения суммы стероидных сапонинов в иглице шиповатой экстракте сухом в Государственном учреждении здравоохранения «Центр сертификации и контроля качества лекарств Департамента здравоохранения г. Москвы» (ГУЗ «ЦСиККЛ ДЗ»);

- Лабораторный регламент ЛР 04868244-01-09 на производство иглицы шиповатой экстракта сухого.

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских - работ ВИЛАР РАСХН по «Программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ на 2006 — 2010 гг.», задание 04, шифр 04.13 «Разработка технологий производства высокоэффективных лечебных и профилактических препаратов из растительного сырья».

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты фармакогностического изучения сырья иглицы шиповатой;

- результаты исследований качественного состава и количественной оценки БАВ иглицы шиповатой;

- результаты исследований по установлению закономерности выхода БАВ в зависимости от степени измельченности сырья, вида экстрагента, соотношения сырье/экстрагент, кратности экстракции, температуры, гидродинамических условий и разработки технологии сухого экстракта;

- результаты разработки методик контроля качества сырья и сухого экстракта иглицы шиповатой, обеспечивающих сквозную стандартизацию от источника к лекарственному средству, результаты валидации методик анализа.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Томашевская, Ольга Юрьевна

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Впервые проведено фармакогностическое изучение корневищ и корней иглицы шиповатой. Установлены числовые показатели, диагностически значимые признаки, дана качественная и количественная характеристика действующих веществ в сырье.

2. С применением различных физико-химических методов анализа подтверждено наличие в подземных органах иглицы шиповатой стероидных сапонинов, фенольных соединений, свободных Сахаров, органических кислот, аминокислот, микро- и макроэлементов.

3. Подобраны оптимальные условия анализа и разработаны методики количественного определения в сырье суммы стероидных сапонинов в пересчете на рускогенин; суммы фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту; суммы моносахаридов после гидролиза в пересчете на глюкозу методом спектрофотометрии (относительные ошибки методик не превышают соответственно ±5,46 %, ±2,71 % и ±3,19 %) и рускогенина методом ВЭЖХ (относительная ошибка методики не превышает ±3,86 %).

4. Определены основные параметры экстракции БАВ из растительного сырья, позволяющие получить готовый продукт со стабильными показателями качества, на основании чего разработана рациональная схема получения сухого экстракта.

5. С использованием качественных реакций, метода хроматографии в тонком слое сорбента и ВЭЖХ установлено наличие основных групп БАВ в сухом экстракте, присущих исходному сырью.

6. Определены критерии подлинности сухого экстракта иглицы шиповатой; разработана методика количественного определения суммы стероидных сапонинов в пересчете на рускогенин методом спектрофотометрии (относительная ошибка методики не превышает ±3,86 %); оформлен протокол валидации методик анализа.

7. Исследован аминокислотный состав сырья и сухого экстракта иглицы шиповатой; доминирующими для сырья являются аспарагиновая и глутаминовая кислоты, метионин и аланин; преобладающими в экстракте являются лейцин и изолейцин. Установлен микро- и макроэлементный состав в изучаемых объектах: превалирующими элементами являются кальций и магний.

8. В результате проведенных исследований разработаны и оформлены ТУ 9377-170-04868244-2008 «Корневища и корни иглицы шиповатой», составлен проект ФС «Иглицы шиповатой экстракт сухой», оформлен и утвержден лабораторный регламент JIP 04868244-01-09 на производство иглицы шиповатой экстракта сухого.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Томашевская, Ольга Юрьевна, 2009 год

1. Андрияшкин А.В., Черкашин М.А. Варикозная болезнь нижних конечностей. Общие вопросы диагностики и лечения// РМЖ. Хирургия. Урология. История медицины

2. Беликов В.В., Точкова Т.В., Колесник Н.Т. Проблемы стандартизации и контроль качества лекарственных средств. — М, 1991. —Е.2, ч.2. - С.13-14.

3. Беликов В.Г., Калашникова Е.А. Гравиметрический и хроматографический анализ полисахаридов, содержащихся в чаге / Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. трудов. Пятигорск, 2007. - Вып. 62. - С. 249-250.

4. Белоусов Ю. Б., Моисеев В. С., Лепахин В. К. Клиническая фармакология и фармакотерапия.— М.: Медицина, 1993.— 398 с ,

5. Беляков К.В. Методические подходы к определению биологически активных веществ в лекарственном растительном сырье спектрофотометрическим методом. — М., 2004. — 186 с

6. Биологически активные вещества растительного происхождения. (В трех томах)./Головкин Б.Н., Руденская Р.Н., Трофимова И.А., Шретер А.И. -М.,2001. -Т.1. 350с. (Т.2. - 764с. -2002, Т.З. -216с. -2002).

7. Биологически активные добавки в питании человека. / Тутельян В.А., Суханов Б.П., Австриевских А.Н., Поздняковский В.М. Томск, 1999. — С. 64-70.

8. Биохимические методы анализа растений / под. ред. М.Н. Запрометова.-М.: Иностранная литература, 1960. — 592 с.

9. Богачев В.Ю.Хроническая венозная недостаточность нижних конечностей: современные принципы лечения// Consilium medicum. — 2003. —т.5. №5.

10. Богданец Л.И., Девятых Е.А., Березина С.С. Пентоксифиллин ретард 600 (вазонит) при лечении хронической венозной недостаточности в стадии трофических расстройств // Врач.- 2005.- № 8.- с.43-44

11. Бубенчикова В.Н., Дроздова И.Л. Изучение состава фенольных соединений донника лекарственного методом ВЭЖХ // Хим.-фарм. журнал — 2004. т.38. - №4. - С.24-27.

12. Венозные трофические язвы и сахарный диабет. Особенности клиники, диагностики и лечения / Богданец Л.И., Девятых Е.А., Березина С.С., Кириенко А.И. // Диабетография. Медицинский Вестник.- 2005.-№3 (23).-с.13-16.

13. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Под ред. Сироткиной Е.Е. Томск.: Изд. Томского унивесит., 1987. - 184 с.

14. Георгиевский В.П. Применение хроматографии в тонком слое сорбента для идентификации и количественного определения биологически активных веществ растительного происхождения. М.: Наука, 1975. - 68 с.

15. Гидрогелевые раневые покрытия в лечении венозных трофических язв /Богданец Л.И., Девятых Е.А., Калинина Е.В., Аркадан Н.Р.// Труды V конференции ассоциации флебологов России.- Москва, 2004, с. 15.

16. Гомеопатия и фитотерапия в лечении сердечно сосудистых болезней // Под. ред. Киселевой Т.Л. и Карпеева А. А. М.: Мосгорпечать. — 1997. - т. 1. — С. 279, т. 2. - С. 967 .

17. Государственная фармакопея РФ XII изд. ч. 1.М.: Медицина, 2008. 336с.

18. Государственная фармакопея СССР XI изд. вып. 1.М.: Медицина, 1987. -336 с.

19. Давыдова В.Н. Современные технологии получения сухих экстрактов и их ассортимент // Новая аптека. Аптечный ассортимент. — 2002. № 4. — С.67-71.

20. Дорогойченков В.Н., Чушенко В.Н. Количественное определение восстанавливающих Сахаров в полисахаридном комплексе из цветков липы сердцелистной// Фармация. -1988.-№4.-С. 39-40.

21. Еремина А.В., Решетняк В.Ю., Везиришвили М.О. Определение полифенольного состава сухого экстракта гребней винограда методом ВЭЖХ // Хим.-фарм. журнал 2004. - т.38. - №3. - С.26-28.

22. Жизнь растений: в 6-ти т. Т.6. Цветковые растения /под ред. А.Л.Тахтаджяна М.: Просвещение, 1982.-С.155-167.

23. Жуковский П.М. Ботаника. М.: «Сельхозгиз». 1938.-С. 141; 408-417.

24. Запрометов М.Н. Основы биохимии природных соединений. — М., 1974. 214 с.

25. Запрометов М.Н. Фенольные соединения. — М., 1993. — 271с.

26. Кемертелидзе Э.П., Георгиевский В.П. Физико-химические методы анализа некоторых биологически активных веществ растительного происхождения. — Тбилиси, 1976. 80 с.

27. Кинтя П.К., Лазурьевский Г.В. Стероидные гликозиды ряда спиростана (строение и свойства). — Кишенев, 1979. 146 с.

28. Кириенко А.И., Григорян Р.А., Золотухин И.А. Современные принципы лечения хронической венозной недостаточности // Consilium medicum. — 2003. — т.5. №6.

29. Кияшко В.А. Хроническая венозная недостаточность — диагностика и принципы консервативного лечения// РМЖ. Хирургия. Урология. История медицины. 2006. - т. 14. - № 12. - С.875-877

30. Клифар — госреестр». Государственный реестр лекарственных средств. — М., 2007.

31. Ковганко Н.В., Ахрем А.А. Стероиды. Экологические функции. Мн., 1990.-224 с.

32. Копытько Я.Ф., Костенникова З.П., Тимохина Е.А. Исследование аминокислотного состава настоек гомеопатических матричных мяты перечной, мелиссы лекарственной, душицы обыкновенной и шалфея лекарственного // Фармация. 1997. - № 6. - С. 31-34.

33. Кочетков, Н.К. Химия биологически активных природных соединений. — М.: Химия, 1970. 378 с.

34. Кричевская А.А., Лукаш А.И., Шугалей B.C. Аминокислоты и их производные в регуляции метаболизма. — Ростов, 1983. 135 с.

35. Крюкова И.В., Луке Ю.А., Привалова Л.А. Заповедные растения Крыма: Справочник. Симферополь: Таврия, 1980,-С. 34

36. Куликов А.Ю., Верушкин А.Г. Высокоэффективная жидкостная хроматография в фармацевтическом анализе. (Сообщ. 2). К вопросу о допустимых изменениях в хроматографической системе. // Фармаком. — 2002. — №4. С. 59-68.

37. Куцик Р. В., Зузук Б. М., Дьячок В. В. Каштан конский (Aesculus hippocastanum L.) // Провизор. 2002. —№4.

38. Лекарственные средства растительного происхождения в терапии хронической венозной недостаточности / Майнсков А.В., Киселева Т.Л.,

39. Колхир В.К., Черных Д.С., Быков В.А. М.: Изд-во МОКБ «Марс», 1999. - 42 с.

40. Лесные травянистые растения, М.:ВО "Агропромиздат",. 1988. с.207, рис.73,1)

41. Лечение хронической венозной недостаточности препаратом венза /Богданец Л.И., Аракелян B.C., Сапелкин С.В., Калинина Е.В. // Ангиология и сосудистая хирургия. 2005. — т.11. - №3. — С.55-59

42. Майстер А. Биохимия аминокислот. М., 1961. - 492 с.

43. Методы биохимического исследования растений / А.И.Ермаков, В.В.Арасимов, Н.П.Ярош Л.: Агропромиздат, 1987.-43Ос.

44. Минина С.А., Каухова И.Е. Химия и технология фитопрепаратов. М.: Гэотар-мед., 2004. - 560 с.

45. Настойки, экстракты эликсиры и их стандартизация / Под. Ред. проф. В.Л. Багировой, проф. В.А.Северцева. СПб.: СпецЛит, 2001. - 223 с.

46. Новые возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе лекарственных средств / Бараш Г.И., Рейхарт Д.В., Гольдберг Е.Д. и др. // Фарматека. 2002. -№11.- С.71-74.

47. Особенности влияния степени измельчения растительного сырья на процесс экстракции БАВ / Баев О.М., Шепель Ф.Г., Сорочинская Т.Г. и др. //Тез.докл. VI Росс. нац. конгресса «Человек и лекарство» М., - 1999. - С.384.

48. ОФС 42-0013-03 «Правила приемки лекарственного растительного сырья и отбора проб».

49. ОФС 42-0011-03 «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье».

50. Перспективы использования растительных полисахаридов в качестве лечебных и лечебно-профилактических средств / Криштанова Н.А., Сафонова М.Ю., Болотова В.Ц. и др. // Вестник ВГУ. Серия Химия. Биология. Фармация. 2005.-№3.-С. 212-221.

51. Пилат Т. П., Иванов А. А. Биологически активные добавки к пище (Теория, производство, применение). -М. 2002. - С. 364-365.

52. Племенков, В.В. Введение в химию природных соединений. Казань, 2001.-376 с.

53. Плеханова Т.И., Хасанова С.Р., Галиахметова Э.Х. Поиск рациональных лекарственных форм на основе растительного сырья // Сб. научн. трудов «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». Вып.59. Пятигорск, 2004. - С. 110-111

54. Покровский А.В., Сапелкин С.В. Хроническая венозная недостаточность нижних конечностей — современные проблемы диагностики, классификации, лечения // ангиология и сосудистая хирургия. — 2003. —т.9. №1. С.13-16.

55. Принцип влажного заживления — основа местного лечения венозных язв Богданец Л.И., Калинина Е.В., Девятых Е.А. и др. // Труды V конференции ассоциации флебологов России. М., 2004. - С. 158

56. Раневое покрытие Гелепран в лечении венозных язв / Кириенко А.И., Шулутко A.M., Богданец Л.И., и др. // Хирургия. 2006. - №4. - С.71-72.

57. Растительные лекарственные средства / Н.П. Максютина, Н.Ф. Комисаренко, А.П. Прокопенко и др.; К.: здоровье. — 1985. — 280 с.

58. Роль рН среды в заживлении венозных трофических язв / Богданец Л.И., Девятых Е.А., Пашкин И.И. и др. // Международный хирургический конгресс. Новые технологии в хирургии. Сборник научных трудов. — Ростов-на-Дону, 2005.-С.265

59. Руководство по стандартизации лекарственных средств / под ред. Р. У. Хабриева, В. Л. Багировой, В. Б. Герасимова. М., 2006 г. - С 219-286.

60. Савельев B.C. Современные направления в хирургическом лечении хронической венозной недостаточности // Флеболимфология. 1996. - С.5-8.

61. Самылина И.А. Проблемы стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов // Мат. 1-ого Междунар.конгр. «Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты». — М.1994. — С.361.

62. Самылина И.А., Баландина И.А. Пути использования лекарственного растительного сырья и его стандартизации // Фармация. 2004. - № 2. - С. 3940.

63. Стойко Ю. М., Ермаков Н. А. Флеботоники в терапии хронической венозной недостаточности нижних конечностей // Лечащий врач. 2005. - №8. С.21-23

64. Стойко Ю.М., Замятина А.В.Патогенетические аспекты консервативной терапии хронической венозной недостаточности у беременных// Consilium medicum. — 2007. -т.9. №6.

65. Строение и биологическая активность стероидных гликозидов ряда спиростана и фуростана / Кинтя П.К., Лазурьевский Г.В., Балашова Н.Н., и др. -Кишенев, 1987.- 142 с.

66. Сухие экстракты из лекарственного растительного сырья / Степанова Л.И., Янулис В.П., Нагаслаева Л.А. и др. // Тез. докл. XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». М., 1992. - С. 198.

67. Химический анализ лекарственных растений / Под ред. Н.И.Гринкевич. М.: Высшая школа, 1983. — с.

68. Химия и биохимия углеводов. (Полисахариды) / Б.Н. Степаненко. — М., 1978.-С. 332.

69. Химия спиростанолов / Камерницкий А.В., Абубариков Н.К., Горовиц М.Б. идр.-М., 1986.-176 с.

70. Хроническая венозная недостаточность нижних конечностей как общемедицинская проблема / Савельев B.C., Кириенко А.И., Богачев В.Ю. и др.// CONSILIUM MEDICUM.- 2004.-том 6.-№6,- с. 433-436.74. Флора СССР

71. Черепанов К.С. Сосудистые растения России и сопредельных государств. СПб. 1995 .

72. Черепанов С.К. Сосудистые растения СССР. JL: Наука, 1981. - С. 433.

73. Шаршунова М., Шварц В., Михалец Ч. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии. М.: Мир, 1980. - 606 с.

74. Шашков В. С., Модин А. Ю. Проблемы экспериментальной и клинической фармакологии венотонизирующих веществ // Фармакол. и токсикол.— 1990.— Т. 53, N 4.— С. 9-13,

75. Шумская В.В. Ультрасонографическая оценка венозного рефлюкса в выборе метода хирургического лечения хронической венозной недостаточности нижних конечностей. /Автореф.дисс.канд.мед.наук. Краснодар, 2004. -23 с.

76. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения. Учеб. пособие / под ред. Г.П. Яковлева и К. Ф. Блиновой. -СПб.: Специальная Литература.-1999.

77. Яблоков Е.Г., Кириенко А.И., Богачев В.Ю. Хроническая венозная недостаточность. -М., 1999. — 126 с.

78. Agraval Р.К., Jain D.K., Gupta R.K. Carbon-13 NMR spectroscopy of steroidal sapogenins and steroidal saponins/ Phytochemistry. — 1985. V. 24. — P.2479-2496.

79. Benson J.R. Some recend advances in amino acid analisis / Instrumentation in amino acid sequence analisis. — London, San-Francisco. 1985. P.l-140.

80. Blunt J.W. Murno M.H. Carbon-13 NMR Spectra of some tetra- M pentacyclie triterpentmethyl ethers/ Org.Mag.Res. 1980. Y.13. h.26-27

81. British Pharmacopea. 2005. - V.2. - №1. - P. 1538.

82. Callam M. J. Epidemiology of varicose veins // Br. J. Surg. 1994; 81: 167— 173.

83. Carpentier P. H., Cornu-Thenard A., Uhl J. F. et al. Appraisal of the information content of the С classes of CEAP clinical classification of chronic venous disorders: a multicenter evaluation of 872 patients // J. Vase. Surg. 2003; 37: 827833.

84. Chiesa R., Marone E. M., Limoni C. et al. Demographic factors and their relationship with the presence of CVI signs in Italy: the 24-cities cohort study // Eur. J. Vase. Endovasc. Surg. 2005, dec; 30 (6): 674-680.

85. Cimpan G., Gocan S. Analysis of medicnal plants by HPLC: recent aproaches // J.Log. Chromatogr. And Ralat. Technol. 2002. - Vol. 25, N 13-15. - P. 22252292.

86. Dormandy J.A. Pathophysiology of venous leg ulceration:an update. // Angiology. 1997. - № 48. - P. 71 - 75.

87. Eberhardt R. Т., Raffetto J. D. Chronic venous insufficiency // Circulation. -2005, may 10; 111 (18): 2398-2409.

88. Ernst E., Saradeth T. Konservative Therapie der chronisch venosen Insuffizienz. //Wien.Med.Wochenschr. 1992. V.I42. № 1. p. 16-22.11 ^

89. German Homoeopathic Pharmacopoeia 5th Supplement tob 1978 editon., Berlin. 1998.-P. 219.

90. Golledge J., Quigley F. G. Pathogenesis of varicose veins // Eur. J. Yasc. Endovasc. Surg. 2003, apr; 25 (4): 319-324.

91. Gschwandtner M. E., Ehringer H. Microcirculation in chronic venous insufficiency // Vase. Med. 2001; 6: 169-179.

92. Guillaume M., Padioleau F. Yeinotonic effect, vascular protection, antiinflammatory and free radical scavenging properties of horse chestnut extract // Arzneimittelforschung. 1994, jan; 44 (1): 25-35.

93. Homeopathic pharmacopoeia of India (H.P.I.) vol. 6. - 1990.

94. Hostettman K., Marston A, Saponins. Cambridge university press: Cambridge, 1995.

95. Kahn S. R., Ginsberg J. S. Relationship between deep venous thrombosis and the postthrombotic syndrome // Arch. Intern. Med. 2004, jan 12; 164 (1): 17-26.

96. Lacaille-Dubois M.A., Warner H.H. Bioactive saponins from plants, Studies in natural products chemistry Series. — Elsevier Science. — 2000. — P.633-687.

97. Maybeny J. С., Moneta G. L. et al. Fifteen-year results of ambulatory compression therapy for chronic venous ulcers// Surgery.-1991; 109:575-581.

98. Myszka HY., Bedmrczyk D. Steroidal saponins/ Wiadomosci Chemiczne. -2005. V.59. -P.275-303.

99. Nicolaides A.N., Hussein MX., Szendro G., et al. The relation of venous ulceration with ambulatory venous pressure measurement//J. Vase. Surg.-1993.-№ 17.-P. 414-419.

100. Noel A. A., Gloviczki P., Cherry K. J. et al. Surgical treatment of venous malformations in Klippel-Trenaunay syndrome // J. Vase. Surg. 2000; 32: 840-847.

101. Olezek W.A. Chromatographic determination of plant saponins. Journal of Chromatography A. 2002. - V.967(l). -p. 147-162.

102. Pharmacopee Francaise X edition, 6 Supplement: Monographies de soushes pour preparation homeopathiques: Paris, 1989.

103. Phillips Т., Stanton В., Provan A., et al. A study of the impact of leg ulcers on quality of life: financial, social,, and psychologic implications. // J. Am. Acad. Dermatol. 1994. - № 31. - P. 49 - 53.

104. Pittler M. H., Ernst E. Horse chestnut seed extract for chronic venous insufficiency // Cochrane Database Syst Rev. 2004; (2): CD003230.

105. Prandoni P., Lensing A. W., Cogo A. et al. The long-term clinical course of acute deep venous thrombosis // Ann. Intern. Med. 1996; 125: 1—7.

106. Rejan T. J. The epidemiology of leg ulcers. In: Westerhof W. , editor. Leg Ulcers: Diagnosis and Treatment. Amsterdam: Elsevier Science Publishers BV; 1993.-P. 19-27.

107. Rucley C.V. Socioeconomic impact of chronic venous infficiency and leg ulcer. // Angiolog. 1997. - № 48. - P. 67 - 69

108. Seach for molluscicidal and antifungal saponins from tropical plants. / Hotettman K., Marston A, Maillard M., Wolfender J-L. // Saponins Used in Traditional and modem Medicine. Plenum Press: New York, 1996/

109. Sirtori C. R. Aescin: Pharmacology, Pharmacokinetics and Therapeutic Profile//Pharmacol Res. -2001; 44 (3): 183-193. doi: 10.1006/phrs. 2001.0847.

110. US pharmacopia 1997. - ed.XIII.