Фармакогностическое исследование первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат фармацевтических наук Романова, Земфира Рашитовна

• Романова, Земфира Рашитовна
• кандидат фармацевтических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Романова, Земфира Рашитовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Современное состояние исследований первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

1.1. Ботанико- морфологическая характеристика первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

1.2. Химический состав первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

1.3. Применение первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного в научной и народной медицине.

ГЛАВА 2. Объекты и методы исследований.

2.1. Объекты исследования, их характеристика.

2.2. Методы фитохимических исследований.

2.2.1. Приготовление водных экстрактов для проведения качественых реакций и хроматографического анализа.

2.2.2. Углеводы.

2.2.2.1. Свободные сахара.

2.2.2.2. Связанные сахара. . .'.

2.2.2.3. Количественное определение водорастворимых полисахаридных комплексов.

2.2.3. Аминокислоты.

2.2.3.1. Качественное обнаружение.

2.2.3.2. Количественное определение.

2.2.4. Органические кислоты.

2.2.4.1. Качественное обнаружение.

2.2.4.2. Изучение органических кислот методом ВЭЖХ.

2.2.4.3. Количественное определение.

2.2.5. Дубильные вещества.

2.2.5.1. Качественное обнаружение.

2.2.5.2. Количественное определение.

2.2.6. Тритерпеновые сапонины.

2.2.6.1. Качественное обнаружение.

2.2.6.2. Количественное определение.

2.2.7. Приготовление спирто-водных извлечений и фракционирование фенольных соединений органическими растворителями.

2.2.8. Изучение фенольных соединений.

2.2.8.1. Арбутин.

2.2.8.2. Кумарины.

2.2.8.3. Фенолкарбоновые кислоты.

2.2.8.4. Флавоноиды.

2.2.8.5. Изучение фенольных соединений методом ВЭЖХ.

2.2.8.6. Количественное определение суммы флавоноидов.

2.2.9. Макро- и микроэлементный состав.

2.3. Методики стандартизации сырья.

2.3.1. Методы отбора проб для анализа.

2.3.2. Морфолого-анатомический анализ.

2.3.3. Определение числовых показателей качества сырья.

2.3.4. Определение микробиологической чистоты сырья.

2.3.5. Определение содержания радионуклидов.

2.3.6. Определение сроков хранения сырья.

2.4. Статистическая обработка данных.

2.5. Методы токсико-фармакологических исследований.

2.5.1. Изучение острой токсичности.

2.5.2. Исследование антиоксидантной активности.

2.5.2.1. Методика исследования хемилюминесценции на приборе «ХЛМ

003».

2.5.3. Изучение антигипоксантного действия.

2.5.4. Изучение влияния на проницаемость капилляров.

2.6. Методика определения ресурсных запасов лекарственного растительного сырья.

ГЛАВА 3. Изучение качественного и количественного состава биологически активных веществ первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

3.1. Качественный анализ основных групп биологически активных соединений.

3.1.1. Углеводы.

3.1.1. 1. Свободные сахара.

3.1.1.2. Связанные сахара.

3.1.1.3. Количественное определение водорастворимых полисахаридных комплексов.

3.1.2. Аминокислоты.

3.1.2.1. Качественное обнаружение.

3.1.2.2. Количественное определение.

3.1.3. Органические кислоты.

3.1.3.1. Качественное обнаружение.

3.1.3.2. Количественное определение.

3.1.4 . Дубильные вещества.'.

3.1.4.1. Качественное обнаружение.

3.1.4.2. Количественное определение.

3.1.5. Тритерпеновые сапонины.

3.1.5.1. Качественное обнаружение.

3.1.5.2. Количественное определение.

3.1.6. Изучение фенольных соединений.

3.1.6.1. Арбутин.

3.1.6.2. Кумарины.

3.1.6.3. Фенолкарбоновые кислоты.

3.1.6.4. Флавоноиды.

3.1.6.5. Изучение фенольных соединений методом ВЭЖХ.

3.1.6.6. Количественное определение суммы флавоноидов.

3.1.7. Макро- и микроэлементный состав.

Выводы по главе 3.

ГЛАВА 4. Стандартизация и разработка нормативной документации на лекарственное растительное сырье «Первоцвета листья».

4.1. Морфологическое исследование листа первоцвета весеннего.

4.2. Микроскопическое исследование листа первоцвета весеннего.

4.3. Разработка методики качественного обнаружения флавоноидов в листьях первоцвета весеннего.

4.4. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в листьях первоцвета весеннего.

4.5. Разработка методики количественного определения аскорбиновой кислоты в листьях первоцвета весеннего.

4.6. Установление числовых показателей и сроков годности сырья.

Выводы по главе 4.

ГЛАВА 5. Ресурсно-биологические исследования травы первоцвета.

5.1. Морфолого-анатомическое изучение травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

5.2. Определение сроков заготовки травы первоцвета крупночашечного

5.3. Определение ресурсных запасов сырья травы первоцвета крупночашечного в разных районах республики Башкортостан. . ■.

Выводы по главе 5.

ГЛАВА 6. Разработка технологии и изучение фармакологической активности фитопрепарата на основе травы первоцвета весеннего.

6.1. Получение фитопрепаратов первоцвета весеннего.

6.1.1. Разработка технологии и стандартизации ГЭТПВ.

6.1.2. Разработка технологии и стандартизации гранул СЭТПВ.

6.2. Изучение острой токсичности ГЭТПВ.

6.3. Изучение влияния ГЭТПВ при повторном введении.

6.4. Исследование антиоксидантной активности ГЭТПВ.

6.5. Изучение антигипоксантного действия ГЭТПВ.

6.6. Изучение влияния ГЭТПВ на проницаемость капилляров.

Выводы по главе 6.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое исследование первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного»

Актуальность темы. Одной из актуальных задач российской фармацевтической науки и практики является расширение арсенала эффективных и безопасных отечественных лекарственных средств, в том числе растительного происхождения.

Растительные препараты, содержащие природный комплекс полифе-нольных соединений, полисахаридов, органических кислот и других биологически активных веществ (БАВ), обладают широким спектром фармакотерапев-тического действия: антиоксидантным, антигипоксантным, ангиопротектор-ным, антиатеросклеротическим и многими другими.

В качестве импортозамещающих отечественных сырьевых источников комплекса БАВ, содержащего полифенольные соединения, органические кислоты и тритерпеновые сапонины, представляют интерес широко распространенные на территории РФ растения рода Primula - первоцвет весенний (Primula veris L., или P. officinalis (L.) Hill.) и его подвид первоцвет крупночашечный (P. macrocalyx Bunge). В отечественной официнальной медицинской практике разрешено к применению 10 зарубежных препаратов на основе корневищ первоцвета весеннего в качестве отхаркивающих средств. Листья первоцвета весеннего применяются в качестве поливитаминного пищевого растительного сырья. Первоцвет крупночашечный широко используется в народной медицине. Однако в химическом отношении надземная часть первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного изучена недостаточно. Существующая отечественная нормативная документация (НД) на листья первоцвета весеннего (ГОСТ 3166-76) не позволяет объективно оценивать качество лекарственного растительного сырья (ЛРС), поскольку не предусматривает определение содержания действующих веществ.

Таким образом, изучение отдельных представителей рода Primula, произрастающих на территории РФ, первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного как сырьевых источников для расширения арсенала отечественных эффективных и безопасных препаратов, определение их химического состава, спектра фармакологического действия, критериев оценки качества сырья, изучение сырьевой базы является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования. Фармакогностическое изучение первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного с целью расширения номенклатуры официнального импортозамещающего лекарственного растительного сырья и препаратов на его основе.

Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

- провести анализ результатов современных исследований по биологическим, химическим и фармакологическим свойствам первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного;

- изучить химический состав исследуемых видов рода Primula и разработать методики определения содержания основных групп БАВ;

- провести морфолого-анатомическое изучение сырья двух видов первоцвета в сравнительном аспекте и установить его диагностические признаки;

- разработать характеристики подлинности и показатели качества сырья;

- провести ресурсные исследования травы первоцвета крупночашечного в некоторых районах республики Башкортостан;

- разработать технологию получения густого экстракта из травы первоцвета весеннего (ГЭТПВ) и гранул сухого экстракта из травы первоцвета весеннего (СЭТПВ);

- изучить специфическую фармакологическую активность ГЭТПВ.

Научная новизна. Впервые проведено фармакогностическое изучение травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного в сравнительном аспекте, обоснована целесообразность использования сырья обоих видов производящих растений в качестве источников соединений фенольной природы и органических кислот.

Хроматографически (тонкослойной хроматографией (ТСХ), высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ)) идентифицировано:

- в траве первоцвета весеннего - 17 соединений фенольной природы, из которых 14 обнаружены впервые: арбутин, умбеллиферон, галловая, хлороге-новая, кофейная, цикориевая, феруловая, коричная кислоты, рутин, апигенин, лютеолин-7-гликозид, дигидрокверцетин, витексин, байкалин;

- в траве первоцвета крупночашечного - 23 соединения фенольной природы, обнаруженных впервые: арбутин, катехин, галловая, хлорогеновая, о-кумаровая, кофейная, цикориевая, феруловая, неохлорогеновая, салициловая, коричная кислоты, кверцимеритрин, дигидрокумарин, о-метоксикумарин, рутин, гиперозид, витексин, кумарин, байкалин, яцеин, кверцетин, дигидрокверцетин, апигенин.

Впервые в сырье обоих видов первоцвета методом ВЭЖХ обнаружены свободные органические кислоты: щавелевая, лимонная, винная, маликовая, янтарная, фумаровая; определено количественное содержание их суммы; обнаружены полисахариды, дубильные вещества, тритерпеновые сапонины; впервые количественно определено содержание урсоловой кислоты.

Впервые изучен аминокислотный состав травы первоцвета весеннего и крупночашечного, установлено наличие 13 аминокислот, из них 8 незаменимых; проведено исследование макро- и микроэлементного состава, определено количественное содержание 10 элементов.

Впервые проведено морфолого-анатомическое изучение травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного в сравнительном аспекте и установлены диагностические признаки сырья. Разработаны критерии оценки и числовые показатели, регламентирующие его качество. Полученные данные включены в проект фармакопейной статьи (ФС) «Первоцвета листья».

Впервые разработана технология получения отечественных растительных препаратов на основе травы первоцвета весеннего (ГЭТПВ и СЭТПВ); установлена антиоксидантная активность, ангиопротекторное и антигипоксант-ное действие ГЭТПВ. Таким образом, в результате комплекса проведенных исследований разработаны научно обоснованные составы, технология, критерии и методы оценки качества новых отечественных препаратов и исходного сырья отечественных представителей рода Primula - первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

Практическая значимость. Полученные результаты позволили обосновать возможность и целесообразность расширения отечественной номенклатуры официнального сырья за счет двух представителей рода Primula - первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного, а также расширить сведения об их морфолого-анатомическом строении, химическом составе, биологической активности. Результаты выполненных фармакологических исследований являются экспериментальным обоснованием для проведения дальнейшего комплекса исследований с целью создания современных импортозамещающих препаратов на основе сырья первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- проект ФС «Первоцвета листья» подготовлен и принят к рассмотрению в установленном порядке;

- разработанные ТУ «Трава первоцвета весеннего», утверждены в установленном порядке и включены в ТУ «Сырье растительное» № 9700-01426795008-2005 (ООО «Травы Башкирии», г. Уфа);

- методики количественного определения суммы флавоноидов (акты внедрения - № 35 от 18.11.2009 г. - ОКК ООО «Травы Башкирии»; № 25 от 20.11.2009 г. - «Центр контроля качества лекарственных средств» ГОУ ВПО БГМУ) и аскорбиновой кислоты (соответственно, акты № 36 от 18.11.2009 г. и № 26 от 20.11.2009 г.) в траве первоцвета весеннего;

- методики и результаты анализа сырья «Трава первоцвета весеннего» по морфолого-анатомическим признакам и критериям оценки качества (Акт ОКК ООО «Травы Башкирии» № 34 от 18.11.2009 г.);

- патент на изобретение № 2342942 «Средство растительного происхождения, обладающее антиоксидантной активностью» от 10.01.2009 г.

Положения, выдвигаемые на защиту:

- результаты изучения фитохимического состава травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного;

- результаты исследований по разработке методик количественного определения суммы флавоноидов и аскорбиновой кислоты;

- результаты морфолого-анатомических исследований и диагностические признаки сырья первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного;

- результаты исследований и обоснование показателей качества с целью стандартизации ЛРС изучаемых видов;

- результаты проведенных ресурсных исследований травы первоцвета крупночашечного;

- результаты фармакологических исследований ГЭТПВ и обоснование возможности создания новых лекарственных форм (ГЭТПВ и СЭТПВ).

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на итоговых научных конференциях молодых ученых и студентов, итоговых научных сессиях БГМУ и отделения медико-биологических наук Уфимского филиала НЦ РАМН «Химия и медицина» (Уфа, 2006, 2008 г.г.); на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.Н. Березнеговской (Томск, 2006 г.); на научно-практической конференции с международным участием, посвященной 25-летию фармацевтического факультета ЯГМА (Ярославль, 2007 г.); на VI Всероссийском научном семинаре с молодежной научной школой «Химия и медицина» (Уфа, 2007 г.); на V Всероссийской конференции-школе «Химия и технология растительных веществ» (Уфа, 2008 г.).

Публикации. Основные положения диссертации отражены в 18 научных работах, из них 1 - в журнале, рекомендуемом ВАК, и одном патенте на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Объекты и методы исследования», экспериментальной части (4 глав), общих выводов, списка литературы и приложений. В тексте содержится 35 таблиц, 16 рисунков. Список цитируемой литературы включает 158 источников, из них 31 - на иностранных языках.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия, фармакогнозия», Романова, Земфира Рашитовна

ВЫВОДЫ

1. Проведено сравнительное фитохимическое изучение травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного. С применением современных физико-химических методов установлено наличие фенольных соединений (в том числе флавоноидов, дубильных веществ, кумаринов), тритерпеновых сапонинов, органических кислот (в том числе аскорбиновой кислоты, аминокислот), углеводов, макро- и микроэлементов.

2. С использованием различных видов хроматографии (ТСХ, ВЭЖХ) в изученных растениях установлено наличие 13 аминокислот (из них 8 — незаменимых); идентифицировано 23 фенольных соединения, из которых 14 - в первоцвете весеннем, 23 - в первоцвете крупночашечном. Фенольные соединения представлены кумаринами: кумарином, о-метоксикумарином, умбелли-фероном; производными фенолкарбоновых кислот: галловой, хлорогеновой, кофейной, цикориевой, о-кумаровой, феруловой, коричной кислотами; флаво-ноидами - кверцетином, кемпферолом, гиперозидом, рутином и др.

3. Проведено морфолого-анатомическое изучение и выявлены диагностические признаки, позволяющие провести дифференциальную диагностику сырья первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного. Для первоцвета крупночашечного характерны более длинные пластинки листа по сравнению с первоцветом весенним, постепенно суженные в крылатый, часто, зубчатый черешок; чашечка широко-колокольчатая, вздутая до цветения; у первоцвета весеннего чашечка перепончатая, трубчато-колокольчатая, угловато-гранистая, вздувается после цветения. Анатомически: у первоцвета весеннего железистые волоски с шаровидными одноклеточными головками, зачастую заполненными серовато-бурой массой, у первоцвета крупночашечного головки железистых волосков не заполнены.

4. Разработаны спектрофотометрические методики количественного определения суммы флавоноидов и аскорбиновой кислоты в сырье первоцвета (ошибка единичного определения с 95 % вероятностью соответственно 3,25 и

4,48 %); проведена валидация методик по следующим характеристикам:- правильность, прецизионность, специфичность, линейность.

5. Разработаны критерии оценки качества сырья первоцвета (содержание суммы флавоноидов, аскорбиновой кислоты, влажность, сумма экстрактивных веществ, извлекаемых водой и 70 % спиртом этиловым, содержание золы общей и нерастворимой в 10 % растворе кислоты хлористоводородной и др.) и предложены нормы числовых показателей; определена микробиологическая чистота для цельного, измельченного и порошкованного сырья, содержание радионуклидов. Обоснован срок годности сырья - 2 года.

6. Определены запасы травы первоцвета крупночашечного и объем возможных ежегодных заготовок в некоторых районах республики Башкортостан с учетом природоохранных мероприятий. Объемы возможных ежегодных заготовок составляют от 0,038 до 0,263 т в пересчете на воздушно-сухую массу сырья. Обоснованы рациональные сроки заготовки сырья - начало цветения.

7. Разработана технология получения и методы стандартизации густого экстракта из травы первоцвета весеннего с содержанием суммы флавоноидов в пересчете на рутин 6,6-7,3 %. На его основе разработаны технология получения и методы стандартизации гранул сухого экстракта с содержанием суммы флавоноидов в пересчете на рутин 7,8-8,2 %.

8. В результате предварительных доклинических исследований для густого экстракта из травы первоцвета весеннего впервые установлено наличие ан-тиоксидантного, антигипоксантного и ангиопротекторного видов действия; водный раствор густого экстракта отнесен к классу практически нетоксичных соединений.

9. Результаты проведенных исследований включены в проект ФС «Первоцвета листья» и ТУ «Трава первоцвета весеннего» № 9700-014-267950082005 (ООО «Травы Башкирии», г. Уфа)

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Романова, Земфира Рашитовна, 2010 год

1. Александрова, А.Е. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация /

2. A.Е. Александрова, А.П. Арзамасцев, В.Л. Багирова. СПб.: СпецЛит, 2001. - 223с.

3. Алексеев, Ю.Е. Определитель высших растений Башкирской АССР / Ю.Е. Алексеев, А.Х. Галеева, И.А. Губанов. -М.: Наука, 1989. 375с.

4. Ареалы лекарственных и родственных им растений СССР (Атлас) / Под ред. В.М. Шмидта. 2-е изд., испр. Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1990. - 224 с.

5. Арзамасцев, А.П. Оценка показателей антиоксидантной активности препаратов на основе лекарственного растительного сырья / А.П. Арзамасцев, Е.И. Шкарина, Т.В. Максимова//Хим. фармац. журн. - 1999. - № 11. - С. 17-20.

6. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР / Под ред. П.С. Чикова. М.: Изд-во ГУК, 1976. - 340с.

7. Атлас лекарственных растений СССР / Под ред. Н.В. Цицина. М.: Госкомиздат, 1962. - С. 420-421.

8. Багирова, В.Л. О стандартизации лекарственных средств на современном этапе / В.Л. Багирова, Е.Л. Ковалева, Н.П. Садчикова // Хим.-фарм. журн.-2000. Т.34, №5. - С. 47-48.

9. Баева, В.М. Изучение полифенольного состава водных извлечений травы некоторых видов манжетки / В.М. Баева, A.M. Можайский // Фармация. 2001. -№ 5. - С. 25-26.

10. Бакин, О.В. Сосудистые растения Татарстана / О.В. Бакин, Т.В. Рогова, А.П. Ситников. Казань: Изд-во Казанского ун-та, 2000. - 496 с.

11. Бандюкова, В.А. Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды /

12. B.А. Бандюкова//Химия природ, соединений. 1983. - № 3. -С. 263-273.

13. Барнаулова, С.О. Пищевые лекарственные растения как ангиопротек-торы / С.О. Барнаулова, О.Д. Барнаулов // Юбилей. X науч.-практ. конф. «Ней-роиммунология» (28-31 мая 2001 г., г. Москва). Т. 2, СТ. 49 - С. 223-297.

14. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М.Л. Беленький. Л.: Наука, 1963. - С. 435-436.

15. Беликов, B.B. Методы анализа флавоноидных соединений / В.В. Беликов, М.С. Шрайбер // Фармация. 1970. - № 1. - С. 68-72.

16. Беликов, В.В. Реакции комплексообразования в анализе флавоноидов / В.В. Беликов, Т.В. Точкова // Фенольные соединения и их физиологические свойства. Алма-Ата, 1973.-С. 168-172.

17. Биологически активные вещества растительного происхождения / Б.Н. Головнин, Р.Н. Руденская, И.А. Трофимова, А.И. Шретер; отв. ред. В.Ф. Семихов. М.: Наука, 2001. - 350 с.

18. Брезгин, Н. Лекарственные растения центральной части России / Н. Брезгин. М.: Медицина, 1993. - 320 с.

19. Бубенчиков, P.A. Флавоноиды фиалки трехцветной / P.A. Бубенчиков, И.Л. Дроздова // Фармация. 2004. - № 2. - С. 11-12.

20. Виноградова, Р.П. Физико-химические методы анализа в биохимии / Р.П. Виноградова, Б.Л. Цидзевич, С.Н. Храпунов. Киев: Наука Думка, 1983. - 387 с.

21. Гаммерман, А.Ф. Дикорастущие лекарственные растения СССР / А.Ф. Гаммерман, И.И. Гром. М.: Медицина, 1976. - С. 132.

22. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е Дмитрук. Новосибирск: Наука, 1990. - 333 с.

23. Гонтарь, Э.М. Витаминоносность некоторых видов Primula L. Алтая / Э.М. Гонтарь // Эколого-морфологические и биологические особенности полезных растений дикорастущей флоры Сибири. Новосибирск: Медицина, 1970.-С. 262-264.

24. ГОСТ 17768-90. Средства лекарственные. Упаковка, маркировка, транспортировка и хранение. М., 1990. - 24 с.

25. ГОСТ 3166-76. Листья первоцвета весеннего. Технические требования на продукцию, поставляемую на экспорт. Взамен ГОСТ 3166-46; введ. 01.07.1977.-М., 1977.-С. 51-53.

26. Государственная фармакопея СССР. Вып. 1: Общие методы анализа/ МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 336 с.

27. Государственная фармакопея СССР. Вып. 2: Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989.-400 с.

28. Государственная фармакопея Российской Федерации/ Минздравсоц-развития России. 12-е изд. - М.: Научный центр экспертизы средств применения, 2008. - 704 с.

29. Государственный реестр лекарственных средств М.: Минздравмед-пром РФ, 1996.-608 с.

30. Государственный реестр лекарственных средств М.: Минздрав России, 2001.-Т. 1.-1247 с.

31. Дикорастущие полезные растении России / Отв. ред. А.Л. Буданцев, Е.Е. Лесиовская. СПб.: Изд-во СПХФА, 2001. - 663с.

32. Дремина, Е.С. Определение антиоксидантной активности биологических и лекарственных препаратов: методологические аспекты / Е.С. Дремина,

33. B.C. Шаров, Ю.А. Владимиров // Пульмонология. 1995. - № 1. - С. 73-75.

34. Жукович, E.H. Стандартизация густого экстракта каштана конского / E.H. Жукович, Л.А. Шарикова, Т.Ф. Прибыткова // Фармация. 2005. - № 2.1. C. 12-14.

35. Запрометов, М.Н. Основы биохимии фенольных соединений / М.Н. Запрометов. М.: Высш. Шк., 1974. - 214с.

36. Зенкевич, И.Г. Обзор физико-химических методов стандартизации настоек, экстрактов и эликсиров в ведущих странах Европы и Америки / И.Г. Зенкевич, В.Л. Багирова, Т.А. Сокольская // Фармация. 2002. - № 1. -С. 43-45.

37. Зенкевич, И.Г. Обзор физико-химических методов стандартизации настоек, экстрактов и эликсиров в ведущих странах Европы и Америки (продолжение) / И.Г. Зенкевич, В.Л. Багирова, Т.А. Сокольская // Фармация. — 2002.-№2.-С. 45-48.

38. Зенкевич, И.Г. Обзор физико-химических методов стандартизации настоек, экстрактов и эликсиров в ведущих странах Европы и Америки (продолжение) / И.Г. Зенкевич, В.Л. Багирова, Т.А. Сокольская // Фармация. — 2002.-№3.-С. 45-46.

39. Ильясова, С.М. Выявление флавоноидов в листьях калины / С.М. Ильясова, Д.М. Попов // Фармация. 2005. - № 5. - С. 12-15.

40. Исследование микроэлементного состава объектов растительного происхождения / Д.А. Муравьева и др.. // Юбилей, науч.-практ. конф. «Достижения современной фармацевтической науки и образования практическому здравоохранению». - Пермь, 1997. - С. 224.

41. Касумханлы, P.A. Клиническое испытание местного Primula macro-calyx как отхаркивающего средства / P.A. Касумханлы // Науч. тр. / Азерб. пед. ин-т.- 1945.-Т. 1.-С. 165-166.

42. Клебанов, Г.И. Оценка антиоксидантной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов / Г.И. Клебанов, М.В. Бабенкова, Ю.О. Теселкин // Лаб. Дело. 1988. - № 5. - С. 59-62.

43. Клеопов, Ю.Д. Анализ флоры широколиственных лесов европейской части СССР / Ю.Д. Клеопов. Киев: Наукова думка, 1990. - 352 с.

44. Колесова, В.Г. Антиоксидантная терапия растениями / В.Г. Колесова,

45. B.А. Дадали, В.И. Лойко // Эфферентная терапия. 1996. - Т.2, № 1. - С. 67-70.

46. Коломиец, Н.Э. Вопросы стандартизации травы хвоща полевого / Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина // Фармация. 2007. - № 1. - С. 11-14.

47. Косман, В.М. Информационное обеспечение для идентификации фе-нольных соединений в обращенно-фазовой ВЭЖХ. Флавоны, флавонолы и их гликозиды / В.М. Косман, И.Г. Зинкевич // Раст. ресурсы. 1997. - Т. 33, вып. 2. - С. 14-26.

48. Костюк, В.А. Антиокислительная активность флавоноидов в различных системах перекисного оксиления липидов / В.А. Костюк, А.И. Потапович,

49. C.М. Терещенко // Биохимия. 1988. - Т. 53, № 8. - С. 1365-1370.

50. Кочетков, Н.К. Химия биологически активных природных соединений / Н.И. Кочетков. М.: Химия, 1970. - 378 с.

51. Крикова, A.B. Биологическая активность растительных источников флавоноидов / A.B. Крикова, Н.С. Ляхова, B.C. Давыдов // Фармация. 2006. -№3.-С. 36-37.

52. Куликов, П.В. Конспект флоры Челябинской области (сосудистые растения) / П.В. Куликов. Екатеринбург-Миасс: «Геотур», 2005. - 537с.

53. Куркин, В.А. Определение флавоноидов в траве чистотела большого /

54. B.А. Куркин, Е.С.Артамонова // Фармация. 2007. - № 5. - С. 10-12.

55. Кучеров, Е.В. Дикорастущие пищевые растения и их использование / Е. В. Кучеров. Уфа: РИО Госкомиздата БССР, 1990. - 160 с.

56. Кучеров, Е.В. Полезные растения Южного Урала / Е. В. Кучеров, Г.К. Байков, И.Б. Гуфранова. М.: Наука, 1976. - 264 с.

57. Кучеров, Е.В. Ресурсы основных видов дикорастущих лекарственных растений в Башкирии / Е.В. Кучеров, А.Х. Галеева. Уфа: Башкирский Науч. Центр Урал. отд. АН СССР, 1991. - 114 с.

58. Кучеров, Е.В. Целебные растения и их применение / Е.В. Кучеров, Д.Н. Лазарева. Уфа, 1993. - 287 с.

59. Лавренов, В.К. Важнейшие лекарственные растения / В.К. Лавренов, Г.В. Лавренова. М.: «Издательство Аст», 2004. - 510 с.

60. Ладынина, Е.А. Фитотерапия / Е.А. Ладынина, Р.С. Морозова. Л., 1990.-304 с.

61. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия: учеб. пособие / под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. СПб.: СпецЛит., 2004. - 765 с.

62. Листья подорожника большого // Государственная фармакопея СССР. Вып. 2: Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье // МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - С. 264-268.

63. Лужников, Е.А. Клиническая токсикология. / Е.А. Лужников. М.: Медицина, 2000. - 416 с.

64. Лукманова, К.А. Аминокислотный и минеральный состав фитопрепарата люцерон / К.А. Лукманова, В.А. Рябчук, Н.Х. Салихова // Фармация. -2000.-№ 1.-С. 25-27.

65. Лысенко, Т.А. Эколого-биологические особенности Primula veris L. В лесостепи Украины / Т.А. Лысенко // Раст. ресурсы. 1994. - вып. 3.1. C. 15-24.

66. Макарова, М.Н. Антирадикальная активность флавоноидов и их комбинаций с другими антиоксидантами / М.Н. Макарова, В.Г. Макаров, И.Г. Зенкевич // Фармация. 2004. - № 2. - С. 30-32.

67. Манолова, Н. Лечебни растения инхибитори на вируси / Н. Маноло-ва, В. Максимова. София, 1988. - 148 с.

68. Мараховский, Ю.Х. Значение биофлавоноидов в медицине / Ю.Х. Мараховский // Здравоохранение Минск. 1999. - № 7. - С. 33-35.

69. Матющенко, Н.В. Стандартизация плодов рябины / Н.В. Матющенко, Т.А. Степанова // Фармация. 2003. - № 5. - С. 16-18.

70. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. -15-е изд., перераб., испр. и доп. М.: Новая волна, 2005. - 1200 с.

71. Меньшикова, Е.Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окси-лительных процессов / Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков // Успехи соврем, биологии. 1993. - Т. ИЗ, вып. 4. - С. 442-455.

72. Методика определения запасов лекарственных растений: учеб. пособие / А.И. Шретер, И.Л. Крылова, H.A. Борисова и др. М., 1986. - 51 с.

73. Методические рекомендации по санитарному контролю за содержанием радиоактивных веществ в объектах внешней среды. М., 1980. - 12 с.

74. Мичник, О.В. Разработка технологии сухого гранулированного напитка с экстрактом примулы / О.В. Мичник // 49-я регион, конф. «Фармация». Пятигорск, 1994. - С. 51.

75. Мичник, О.В. Химический состав первоцвета крупночашечкового / О.В. Мичник // Раст. ресурсы . 1976. - Т. 12, вып. 3. - С. 391-394.

76. Мичник, О.Ю. Методы получения сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья / О.Ю. Мичник // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. Пятигорск, 2004. -Вып. 59.-С. 101.

77. Муравьев, И.А. Спектрофотометрический метод количественного определения урсоловой кислоты / И.А. Муравьев, В.В. Шатило, В.Ф. Семен-ченко // Химия природ, соед. 1972. - № 6. - С. 738.

78. Муравьева, В.И. Исследования растений, применяемых в народной медицине, на содержание аскорбиновой кислоты / В.И. Муравьева, А.И. Баньковский // Науч. тр. / ВНИИ лек. и аром. раст. 1974. - Вып. 9. -С. 39-118.

79. Никонов, Г.К. Основы современной фитотерапии / Г.К. Никонов, Б.М. Мануйлов. М.: Медицина, 2005. - 520 с.

80. Определитель высших растений Башкирской АССР. М.: Наука, 1989.-375 с.

81. Определитель сосудистых растений Среднего Урала. М.: Наука, 1994.-525 с.

82. ОСТ 91500.05.001-00. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения. М., 2000. - 55 с.

83. ОФС 42-0011-03. Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье. Стронций-90, цезий-137. Отбор проб, анализ, оценка результатов. М., 2003. - 27 с.

84. ОФС 42-0013-03. Правила приемки лекарственного растительного сырья и методы отбора проб // Фармация. 2003. - № 6. - С. 3-8.

85. ОФС 42-0067-07 «Методы микробиологического контроля лекарственных растительных средств, состоящих из одного вида сырья или нескольких (сборов) фасованная продукция, а также растительного сырья «ангро».

86. Оценка безопасности лекарственного растительного сырья в БАДах и фитопрепаратах / В.А. Тутельян, И.А. Самылина, С.А. Хотимченко и др.// Фармация. 2009. - № 1. - С. 3-5.

87. Пастушенков, JI.B. Растения антигипоксанты / JI.B. Пастушенков, Е.Е. Лесиовская. СПб.: Наука, 1991. - С. 26-27.

88. Пахомов, В.П. Определение in vitro фитоантиоксидантного потенциала лекарственных растений / В.П. Пахомов, А.В. Копейкина, А.А. Макарян // Рос. Аптеки. 2003. - №5. - С. 64-66.

89. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Paeoniaceae Thimelaeaceae. / Отв. ред. П.Д. Соколов. - Л.: Наука, 1986. - С. 175-176.

90. Растительные ресурсы России и сопредельных государств / под ред. Л.М. Беленовской, Л.И. Медведева. СПб: Мир и семья - 95, 1996. - 571 с.

91. Регистр лекарственных средств России. 9-е изд., перераб. и доп. -М.: «РЛС-2002», 2002. - 1504 с.

92. Редченкова, В.Н. Анализ требований некоторых фармакопей, предъявляемых к экстрактам / В.Н. Редченкова, О.М. Хишова // Хим.-фармац. журн. 2006. - Т. 40, № 1. - С. 37-40.

93. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева М.: Медицина, 2005.-832 с.

94. Самылина, И.А. Пути использования лекарственного растительного сырья и его стандартизация / И.А. Самылина, И.А. Баландина // Фармация. — 2004.-№2.-С. 39-41.

95. Самылина, И.А. Современное состояние и перспективы стандартизации лекарственного растительного сырья / И.А. Самылина, В.А. Ермакова // Хим.-фармац. вестн. 1999. - №6. - С. 19-22.

96. СанПиН 2.3.2.1078-01. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. Введ. 01.09.2002. // Новая аптека. -2008.-№ 8.-С. 21-23.

97. Селиванчикова, И.Б. Изучение компонентного состава флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в гомеопатических настойках методом ВЭЖХ. Сообщение 2. / И.Б. Селиванчикова, З.П. Костенникова // Фармация. 2001. -№4.-С. 21-22.

98. Селиванчикова, И.Б. Количественное определение флавоноидов в гомеопатических настойках туи методом спектрофотометрии. Сообщение 3. / И.Б. Селиванчикова, М.Н. Лякина, З.П. Костенникова // Фармация. 2001. -№6.-С. 14-16.

99. Сергеев, П.В. Влияние антиоксидантов на быструю вспышку Бе24" " индуцированной хемилюминесценции / П.В. Сергеев, А.Г. Белых, С.А. Чукаев // Эксперим. и клинич. фармакология. 1992. - Т. 55., №2. - С. 60-62.

100. Сернов, Л.М. Элементы экспериментальной фармакологии / Л.М.Сернов, В.В. Гацура. М., 2000. - 352 с.

101. Смирнов, Л.П. Особенности применения стандартного образца рутина в анализе растительного сырья, витаминных и фитопрепаратов / Л.П. Смирнова, С.С. Николаева, В.А. Быков // Хим. фармац. журн. - 2000. - Т. 34, № 1. - С. 29-31.

102. Современные аспекты стандартизации лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов, содержащих флавоноиды / В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, В.Б. Браславский // Всерос. съезд фармац. работников (5-7 июня 2005 г., г. Сочи). Сочи, 2005. - С. 95-96.

103. Современная фитотерапия / под ред. чл-корр. проф. д-ра Веселина Петкова. София: Медицина и физкультура, 1988. - 503с.

104. Содержание тритерпеновых гликозидов в некоторых видах сем. Pri-mulaceae флоры Средней Азии и Кавказа / A.M. Захаров, Д.А. Пакалин, О.И. Захарова, К.И. Боряев // Растит, ресурсы. - 1974. - Т. 10, № 3. - С. 375-379.

105. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия) / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. М.: Недра, 1987. - 512с.

106. Сорокин, В.В. Применение направленной экстракции при получении препаратов травы зверобоя /В.В. Сорокин, И.Е. Каухова, В.А. Вайнштейн // Фармация. 2007. - № 4. - С. 34-35.

107. Стандартизация густого экстракта водяники черной / Е.В. Ермилова, Т.В. Кадырова, Е.А. Краснов, A.A. Блинникова // Хим.-фарм. журн. 2002. -Т. 36, №9-С. 40-43.

108. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (Полисахариды) / Б.Н. Степаненко. М.: Высш.шк., 1978. - 256 с.

109. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (Моносахариды) / Б.Н. Степаненко. М.: Высш.шк., 1977. - 222 с.

110. Трава зверобоя // Государственная фармакопея СССР. Вып. 2: Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье // МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - С. 323-325.

111. ТУ 9161-037-46865780-03. БАД таблетки «Виратон», per. уд. 77.99.02.916.Б.000641.0803.

112. Тюкавкина, H.A. Природные флавоноиды как пищевые антиокси-данты и биологически активные добавки / H.A. Тюкавкина, И.А. Руленко, Ю.А. Колесник // Вопр. питания. 1996. - № 2. С. 33-38.

113. Удельнова, Т.Н. Микроэлемент, экология и здоровье человека / Т.Н. Удельнова, С.Г. Торгин, В.А. Ягодин // Успехи современной биологии. -1990.-Вып. 2.-С. 279.

114. Фархутдинов, P.P. Клинические аспекты применения метода регистрации хемилюминесценции крови /P.P. Фархутдинов // Терапевт, арх. -1984. Т. 56, № 8. - С. 150-153.

115. Фархутдинов, Р. Р. Метод регистрации хемилюминесценции в клинической практике / P.P. Фархутдинов, Х.С. Бикмухаметова, Р.Г. Фатихов // Совр. медицина. -1986. № 3. - С. 86-89.

116. Фархутдинов, P.P. Хемилюминесцентные методы исследования свободно-радикального окисления в биологии и медицине / P.P. Фархутдинов, В.А. Лиховских. Уфа, 1995. - 92с.

117. Фитотерапия ожирения и сахарного диабета / Под ред. K.M. Дьяченко. Киев.: Наука Думка, 1993. - 96 с.

118. Фитотерапия с основами клинической фармакологии / под ред. В.Г. Кукеса. -М.: Медицина, 1999. 192 с.

119. Флавоноиды как гепатопротекторы и антиоксиданты / В.А. Куркин // IX Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (7-11 апр. 2002 г., г. Москва). М., 2002.-С. 164.

120. Флавоноиды как государственные стандартные образцы и их значение для целей стандартизации сырья и препаратов / В.А. Куркин // X Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (7-11 апр. 2003 г., г. Москва). М., 2003. - С. 728.

121. Флавоны и жирные кислоты надземной части Primula macrocalix Bge. / Ю.С. Косенкова, М.П. Половинка, Н.И. Комарова и др. // V всерос. науч. конф. «Химия и технология растительных веществ» (8-12 июня 2008 г., г. Уфа) -Уфа,2008.-С. 162.

122. ФС 42-2508-87. Рутин стандартный образец. - М., 1987.

123. Хазиев, Р.Ш. Совершенствование технологии настоев из травы горца птичьего / Р.Ш. Хазиев, А.Г. Фролов // Фармация. 2001. - № 4. - С. 24-26.

124. Химический анализ лекарственных растений. / под ред. Н.И. Грин-кевич и Л.Н. Сафронич. М.: Высш.шк., 1984. - 176 с.

125. Хроматография в тонких слоях / Под ред. Э. Шталя. М.: Мир, 1968.-352 с.

126. Хроматография на бумаге / под ред. И.М. Хайца, К. Мацека. — М.: Изд-во иностр. лит-ры, 1962.- 851 с.

127. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения: учеб. пособие / под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. 2-е изд., испр. и доп. - СПб.: СпецЛит, 2002. - 407 с.

128. Юрьев, Д.В. Анализ флавоногликозидов в препаратах и БАД на основе Ginkgo Biloba/ Д.В. Юрьев, К.И. Эллер, А.П. Арзамасцев // Фармация. -2003.-№2.-С. 7-9.

129. Accumulation of Pb, Cd, Cu and Zn in plants and hypercumulator choice in Lanping lead-zinc mine area, Chine / Zu Yanqun, Li Yuan, Christian Schvartz, Laurent Lahglade, Lui Fan // Environment International. 2004. - Vol. 30, № 4. - P. 567-576.

130. Arti, A. Structure-activity relationships for antioxidant activities of a si-ries of flavonoids in a liposomal system / A. Arti, G.N. Muraleedharan, M. Gale // Free Radic. Biol. And Med. 1998. - Vol. 24, № 9. - P. 1355-1363.

131. Bahorun, T. Phenolic constituents and antioxidant capacities of Crataegus monogyna (Hawthorn) callus extracts / T. Bahorun, E. Aumjaud, H. Ramphul // Nahrung. 2003. -Vol. 47, № 3. - P. 191-198.

132. Benson, J.R. Some recend advances in amino acid analisis / J.R. Benson // Instrumentation in amino acid seguence analisis. London: New York, 1975. - P. 1-40.

133. Bohm, H. Flavonols, flavone and anthocyanins as natural antioxidants of food and their possible role in the prevention of chronic disesses / H. Bohm, H. Boeing, J. Hempel // Z. Ernahrungswiss. 1998. - Vol. 37, № 2. - P. 47-63.

134. Bors, W. Flavonoids as antioxidants: determinations of ragical-scavenging effeciens / W. Bors, W. Heller // Metods Ensimol. San Diego: Acad. Press, 1990. - Vol. 186. - P. 343-355.

135. British Pharmacopoeia. London: The Stationery Office, 2001. -Vol. 1.- 855 p.

136. Burda, S. Antioxidant and Antiradical Activities of Flavonoids / Stanislaw Burda, Weislaw Oleszek // J. Agric. Food Chem. 2001. - Vol. 49. P. 277Ф-2779.

137. Calis, I. Saponin and sapogenol: comparative stady on the sapogenol constituents of three Primula species / I. Calis // Doga: Tip Eczacilic, 1987. -Vol. 11, №2.-P. 206-215.

138. Chevallier, A.M. The Encyclopedia of Medicinal Plants / A.M. Chevallier. London, 1996. - 336 p. .

139. Economic Botany. New York, 1962. - Vol. 16. - P. 22.

140. European Pharmacopoeia. 3-rd edition. - Paris: Maisonneuve S.A., 2001.-948 p.

141. Halliwell, B.A. Antioxidant characterization. Methodology and mechanism / B. A. Halliwell // Biochem. Pharmacol. 1995. - Vol. 49, № 10. - P. 1341-1348.

142. Harborn, J.B. The flavonoids. / J.B. Harborn, T.J. Mabry, H. Mabry. -New York: Charman and Hall, 1975. 1200 p.

143. Herdan, J. Antioxidanti. / J. Herdan, M. Giurginca, M. Merghea. Bucu-resti: Ed. Tehnica. -1995. - P. 43-59.

144. HPLC separation and wavelength area rations of more than 50 phenolic acids and flavonoids / W.L. Banwart, P.M. Porter, T.C. Granato, I.I. Hassett // J. Chem. Ecol. 1985. - Vol. 11, №3. - P. 383-395.

145. Mabry, T.J. The systematic identification of flavonoids. / T.J. Mabry, K.R. Markham, M.B. Thomas. New York: Springer, 1970. - 354 p.

146. Marica Medic-Saric. Application of numerical methods to the TLC analysis of flavonoids and Phenolic acids of Rosmarini folium / Marica Medic-Saric, Zeljan Males // J. of Planar Chromatogr. 1997. - Vol.10. - P. 182-186.

147. Merck, E. Dyeing Reagents for Thin Layer and Paper Chromatography / E. Merk. Darmstadt, 1980. - 114 p.

148. Paris, R. Sur les flavonoides des primeveres indigenes: Presence d'un he-teroside du kaempferol dans les fleurs de Primula officinalis Jacq. / R. Paris // Ann. pharm. franc. 1957. - T. 17, № 5. - P. 331.

149. Phillipson, D. Herbal Drugs and Phytopharmaceutical / D. Phillipson. -Medpharm, 1994. P. 206-207.

150. Rice-Evans, C. Structure antioxidant activity relationships of flavono-ids and isoflavonoids / C. Rice:Evans, N.J. Miller //Flavonoids in health and diseases. - Ch. 5. - 1999. - P. 199-219.

151. The flavonoids as the bioantioxidants / V.A. Kurkin at al. //21 International conference on polyphenols «Polyphenols Communications 2002». Marra-kech-Morocco, 2002. - P. 285-286.

152. Trease, G.E. Pharmacognosy / G.E. Trease. London: WB Saunders, 1996.-812 p.

153. Triterpene saponins from Primula veris subsp. Macrocalyx and Primula elatior subsp. Meyeri / Qali§ Ihsan, Yürüker Ay§en, Rue"gger Henz and others // J. Natur. Prod. 1992. - Vol. 55, № 9. - P. 1299-1306.

154. Volak, J. Plants Medicinalis / J. Volak, J. Stodola. Paris: Grund, 1983. - 320 s.

155. Wulf, L.W. Analisis of phenolic acids and flavonoids by high pressure liquid chromatography / L.W. Wulf, C.W. Nagel // J. Chromatogr. 1976. -Vol. 116,№2.-P. 271-279.