Эндотелио- и кардиопротективные эффекты препарата Мексиприм в комбинации с эналаприлом и лозартаном тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.06, кандидат медицинских наук Бобраков, Константин Евгеньевич

• Бобраков, Константин Евгеньевич
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Бобраков, Константин Евгеньевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Эндотелио- и кардиопротективные эффекты препарата Мексиприм в комбинации с эналаприлом и лозартаном»

ГЛАВА 1. РОЛЬ И МЕСТО ВЕКТОРА КОРРЕКЦИИ ОКСИДАНТ-НОГО СТРЕССА В ФАРМАКОТЕРАПИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА. (Обзор литературы). 17

1.1. Оксидантный стресс и дисфункция эндотелия 17

1.2. Использование антиоксидантной терапии в фармакологической коррекции заболеваний сердечно-сосудистой системы. 30

1.3. Сердечно-сосудистые препараты модулирующие эндогенную биоактивность оксида азота. 51

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. 56

2.1. Моделирование Ь-КАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота и оценка эндотелийзависимых и эндотелийнезависимых сосудистых реакций. 56

2.2. Проведение функциональных проб в острых экспериментах на наркотизированных крысах. 57

2.3. Биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции. 57

2.4. Морфологические методы оценки сердечно-сосудистых изменений при моделировании дефицита оксида азота. 60

2.5. Интегральный векторный анализ гемодинамических, биохимических и морфологических показателей в комплексной оценке эндоте-лио- и кардиопротективных эффектов исследуемых препаратов 60

2.6. Исследуемые химические соединения и дизайн эксперимента. 62

2.7. Статистическая обработка результатов исследования. 70

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 71

3.1. Разработка комплекса методических подходов для количествен- 71 ной оценки развития эндотелиальной дисфункции при Ь-ЫАМЕ-индуцированной модели дефицита N0 в эксперименте с использованием результатов функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

3.2. Исследование эндотелиопротективной активности аскорбиновой кислоты, препаратов Мексидол и Мексиприм, эналаприла, лозартана калия при Ь-№АМЕ- индуцированной модели дефицита N0 с использованием результатов функциональных проб, биохимических маркеров и морфологических исследований. 96

3.3. Изучение эндотелиопротективной активности сочетанного применения препарата Мексиприм и ингибитора АПФ эналаприла при Ь-КАМЕ-индуцированной модели дефицита N0. 108

3.4. Изучение эндотелиопротективной активности сочетанного применения препарата Мексиприм и блокатора АТ]-рецепторов лозартана калия при Ь-КАМЕ-индуцированной модели дефицита N0. 122

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. 136

ВЫВОДЫ. 153

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. 155

ПРИЛОЖЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АГ - артериальная гипертензия АцХ - ацетилхолин АТФ - аденозинтрифосфат ИБС - ишемическая болезнь сердца ЛЖД - левожелудочковое давление dp/dt - максимальная скорость увеличения левожелудочкового давления -dp/dt - максимальная скорость снижения левожелудочкового давления NO - оксид азота

L-NAME - №-нитро-Ь-аргинин метиловый эфир

ЭД - эндотелиальная дисфункция

ЧСС - частота сердечных сокращений

КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции

ГЛЖ - гипертрофия левого желудочка

AT - ангиотензин

АД - артериальное давление

ГМК - гладкомышечная клетка

ЭК - эндотелиальная клетка

РААС - ренин - ангиотензин - альдостероновая система ИАПФ - ингибитор ангиотензинпревращающего фермента АК - антагонист кальция цГМФ - циклический гуанозин - монофосфат мРНК — матричная рибонуклеиновая кислота НАДФ - никотинамидадениндинуклеотидифосфат ЛПНП - липопротеиды низкой плотности ЛПОНП - липопротеиды очень низкой плотности ЛПВП - липопротеиды высокой плотности САД - систолическое артериальное давление ДАД - диастолическое артериальное давление

ВВЕДЕНИЕ

Эндотелий - это тонкий, моноклеточный слой, покрывающий всю внутреннюю поверхность кровеносных сосудов и отделяющий циркулирующую кровь от тканей. В' настоящее время стало очевидным, что эндотелий сосудов* - это активная метаболическая система, поддерживающая сосудистый гомеостаз путём осуществления ряда важнейших функций: модулирования тонуса сосудов; регуляции транспорта растворенных веществ в клетки сосудистой стенки, роста этих клеток; формирования внеклеточного матрик-са; защиты сосудов от возможного неблагоприятного действия циркулирующих клеток и субстанций; регуляции хемотаксических, воспалительных и репаративных процессов в ответ на локальное повреждение.

Эндотелиальные клетки сосудистого русла, осуществляя,, синтез локально действующих медиаторов, морфофункционального ориентированы на оптимальное регулирование органного кровотока [9, 19, 102', 103]. С того момента, как эндотелиальньда слой,был обнаружен в результате микроскопического исследования, он всегда рассматривался как покров, действующий в качестве* барьера, останавливающего внутрисосудистое свёртывание/коагуляцию. Тем не менее, в последние десятилетия изучение его-различных функций показало; что он (эндотелиальный слой) является настоящим регулятором кровотока и тканевого гомеостаза. Хотя эндотелий ^является монослоем, покрывающим внутреннюю поверхность всей сосудистой системы, его общий вес превышает вес печени. Его масса равна массе некоторых сердец. По этой причине, был выдвинут постулат, что он (эндотелий) является самой- крупной и важной ауто- паракринной железой в организме [105, 128, 138, 139, 146].

Он не является1 пассивным органом, а совсем наоборот: он функционирует как рецепторно-эффекторный орган, реагирующий на любой физический или химический стимул/раздражитель с выделением/секрецией соответствующего вещества, с помощью которого он может поддерживать^ вазомоторный баланс и сосудисто-тканевый гомеостаз. Он имеет свойство вырабатывать как агонистические, так и антагонистические вещества, поддерживающие гомеостаз и его функцию. Это не только аутокринные, но и пара-кринные и эндокринные вещества. Таким образом, он модулирует релаксацию или сокращение сосудистых клеток гладкой мышцы, т.е. модулирует процессы вазодилатации и вазоконстрикции. Эндотелий регулирует гомеостаз, осуществляя контроль выработки протромбиновых и антитромботиче-ских компонентов, а также фибринолитических и антифибринолитических агентов. Он также участвует в процессах клеточной пролиферации и миграции, адгезии лейкоцитов и их активации, а также в иммунологических и воспалительных процессах.

Факторы сердечно-сосудистого риска обуславливают оксидантный -окислительный стресс, что вызывает изменение функциональной активности эндотелиальных клеток и приводит к так называемой эндотелиальной «дисфункции» (ЭД), т. е. к снижению способности эндотелия поддерживать гомеостаз, ведущей к развитию патологических, воспалительных процессов и сосудистых заболеваний. В настоящее время дисфункция сосудистого эндотелия рассматривается как один из ведущих факторов патогенеза болезней сердца и сосудов [42, 45, 66, 78, 89, 94, 122]. Этот термин применяется для обозначения таких патологических состояний, как снижение эндотелийзави-симого расширения сосудов, нарушение антикоагулянтных и антивоспалительных свойств эндотелия, регуляция им роста и структуры сосудистой стенки (включая дисрегуляцию процессов ее ремоделирования) и др. [46, 47, 66, 120]. В основе окислительного стресса лежит изменение продукции синтезируемых сосудистыми эндотелиальными клетками (ЭК) биологически активных соединений, среди которых наибольшее значение с точки зрения рассматриваемой проблемы имеют реактивные формы кислорода (РФК) [83, 142]. В эту группу высокореактогенных молекул входят молекулярный кислород и ряд его производных, образующихся во всех аэробных клетках. РФК вызывают дефицит оксида азота в эндотелиальных клетках, опосредованный подавлением биосинтеза и/или биоактивности N0, связанный с торможением экспрессии и активности эндотелиальной Ж)-синтазы (еМЭБ).

Исследования последних лет убедительно свидетельствуют о том, что в небольших концентрациях оксид азота (N0) - представляет уникальный по своей природе и механизмам действия вторичный мессенджер в большинстве клеток организма. Оксид азота (N0) - ведущий гуморальный эндотелиальный модулятор дилатации, релаксирующий сосуды, который вырабатывается эн-дотелиоцитами [66, 93, 94]. Клетки эндотелия выделяют большое количество различных веществ как в кровь, так и в окружающие ткани, поэтому их можно рассматривать как самую большую эндокринную систему [102, 128, 134, 146].

Эндотелиальная дисфункция связана с большинством форм сердечнососудистых заболеваний (таких как артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца, атеросклероз, болезни периферических артерий, диабет и хроническая почечная недостаточность). Как указано выше, к механизмам, участвующим в формировании сниженной вазодилатации (в результате эндотелиальной дисфункции), относятся снижение образования окиси азота, избыточная продукция РФК и пониженная выработка гиперполяризующего фактора. Повышение функциональной активности адгезивных молекул эндотелия, образование химических агентов (хемокинов), например, макрофа-гального аттрактантного пептида-1, и выработка ингибитора-1 активатора плазминогена принимают участие в воспалительных реакциях и способствуют развитию протромбогенных состояний. Вазоактивные пептиды (например, ангиотензин II и эндотелии-1), накопление ассиметричного диметилар-гинина - эндогенного ингибитора оксида азота, гиперхолестеринемия, гипер-гомоцистеинемия, инсулинорезистентность также способствуют нарушению механизмов вазодилатации. При этом отмечается усиление апоптоза эндоте-лиальных клеток, так называемое «старение» эндотелия. Эндотелиальная дисфункция — это важное, начальное явление патогенеза атеросклероза, способствующее возникновению и развитию бляшек (тромбов). Уменьшение количества циркулирующих эндотелиальиых клеток-предшественниц, принимающих участие в регенерации эндотелия, участвует в развитии патогенеза атеросклероза. Степень нарушения структуры и функции эндотелия имеет прогностическое значение для выявления сердечно-сосудистых заболеваний.

Таким образом, коррекция эндотелиальной дисфункции приводит к снижению риска возникновения, а также предупреждению патогенетических механизмов развития и клинических проявлений артериальной гипертонии, атеросклероза, сахарного диабета и их осложнений [5, 19, 38, 53, 64, 197, 115, 129]. Это связано с тем, что при этих заболеваниях дисрегуляторные изменения функции клеток эндотелиальной выстилки сосудов могут являться первопричиной развития данных заболеваний, так как во-первых, обнаруживаются у лиц без повышенного АД; предки которых страдали АГ, во-вторых, отсутствует чёткая корреляция с величиной АД, в третьих, существующая эндотелиальная дисфункция далеко не всегда нормализуется при снижении АД [5, 7, 9, 122]. Дисфункция эндотелия в настоящее время рассматривается также в качестве инициирующего фактора и ранней фазы развития атерот-ромбоза и инсулинорезистентности, а биохимические изменения (избыток свободных радикалов, деградация брадикинина, сниженная активность N0-синтазы), лежащие в основе этого относят к метаболическим нарушениям [22,24, 57, 60, 77, 101, 105].

Нарушения продукции, взаимодействия, разрушения эндотелиальных вазоактивных факторов наблюдаются одновременно с аномальной сосудистой реактивностью, изменениями в структуре и росте сосудов, которым сопутствуют сосудистые заболевания [53, 66, 123].

Кроме вышеперечисленных патогенетическая роль эндотелиальной дисфункции доказана при ряде наиболее распространенных заболеваний и патологических состояний: легочной гипертензии, сердечной недостаточности, дилатационной кардиомиопатии, ожирении, гиперлипидемии, сахарном диабете, гипергомоцистеинемии.[47, 48, 50]. Этому способствуют такие модифицируемые факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний, как курение, гипокинезия, солевая нагрузка, различные интоксикации, нарушения углеводного, липидного, белкового обменов, инфекция и др. [9, 81, 86, 89, 95, 103, 105, 137, 138, 143, 149].

Экспериментальное моделирование дефицита оксида с помощью введения блокатора синтаз N0 N-нитро-Ь-аргинин метилового эфира (L-NAME) в течение 7 дней обнаруживает увеличение маркеров воспалительных (адгезия и инфильтрация моноцитов) и пролиферативных (появление пролифери-рующих и ядерных антиген-позитивных клеток). Одновременно с этим повышается содержание в тканях ангиотензин-конвертирующего фермента и рецепторов к ангиотензину 1-го типа, приводящих к повышению активности ангиотензина II. Кроме того, происходит повышение активности гена, ответственного за экспрессию хемокинов, таких как протеин-I хемотаксиса моноцитов - МСР-1, цитокинов (транформирующий фактор роста (TGF), тканевой фактор [47]. Возникающий оксидантный стресс активирует большое количество оксидантчувствительных факторов транскрипции (таких как нуклеар-ный фактор каппа-В (NF-кВ), которые повышают экспрессию адгезивных молекул эндотелия (ICAM-1, VCAM-1), способствующих развитию воспалительных и других процессов (протекающих, в частности, при атеросклерозе). То есть, данная модель позволяет воспроизвести начальные патофизиологические изменения происходящие при наличии факторов риска или ранних признаках развития атеросклероза.

Для согласованной работы eNOS требуется много совместно действующих факторов, таких как никотинамиддифосфат (NADPH), динуклеоти-даденинрибофлавин (FAD), кальций, кальмодулин и тетрагидробиоптерин. N0 диффундирует в сосудистые гладкомышечные клетки и стимулирует гуанилатциклазу, что приводит к увеличению продукции cGMP и вазодила-тации [107, 108, 112, 115].

При снижении доступности L-аргинина eNOS начинает избыточно продуцировать реактивные формы кислорода (оксидативный стресс), что приводит к нарушениям защитных функций антиоксидантных механизмов клетки и становится сильным патогенным фактором развития эндотелиальной дисфункции. Этот феномен получил название «разобщение» (uncoupling) eNOS и был. убедительно продемонстрирован в опытах с очищенным; ферментом [82, 147, 147, 149]. Нарушение оксидантного" фона может вызываться диетическими факторами, повышением активности аргиназы (фермента, разрушающего L-аргинин) [86], окисленными липопротеидами низкой плотности [24, 46, 49, 50, 90], увеличением присутствия эндогенного ингибитора eNOS - асимметричного диметиларгинина (ADMA) и NG-monomethyl-L-arginine (L-NMMA) [132]. Как следствие, происходит нарушение метаболизма и мембранного транспорта L-аргинина, что в результате приводит к существенным сдвигам в редокс-окислительных компонентах eNOS, при этом1 биосинтез NO резко снижается.

Большое: значение в развитии эндотелиальной дисфункции" и последующего ремоделирования: сердечно-сосудистой системы имеют процессы' свободнорадикального окисления (СРО), активация которых наблюдается при артериальной гипертонии. Усиление СРО ускоряет распад оксида азота, подавляет экспрессию эндотелиальной NO-синтазы,. активирует процессы гиперкоагуляции и апоптоз эндотелиальных клеток [Беленков Ю.Н. и соавт., 2009, Иванов С.Г.и соавт., 2006].

Учитывая, что прогрессирующее рем одел ирование миокарда и сосудистой стенки сопровождаются нарушением внутриклеточного энергетического обмена и активацией свободнорадикальных процессов [Бувальцев В.И. и соавт., 2001, Грацианский Н.А. и соавт., 1998], применение при артериальной гипертензии цитопротекторов и антиоксидантных средств представляется перспективным и оправданным.

В настоящее время широкое применение в кардиологической практике получил цитопротекторы Мексикор и Мексидол (2-этил-6-метил-3-оксипиридина сукцинат). .

В основе действия цитопротекторов лежит способность оптимизировать внутриклеточный митохондриальный энергетический . обмен и уменьшать потребность клетки в кислороде путем переключения энергообмена с окисления жирных кислот на преимущественную утилизацию глюкозы (более выгодный с точки зрения экономии кислорода вариант метаболизма) за счет стимуляции сукцинатдегидрогеназного пути метаболизма глюкозы и элементов цитохромной цепи. При этом 2-этил-6-метил-3-оксипиридина сук-цинат обладает антиоксидантными свойствами, что может позволить уменьшить негативное воздействие окислительного стресса на эндотелий сосудистой стенки [Голиков А.П. и соавт., 2006, Михин В.П. и соавт., 2009].

По предварительным данным, использование отдельных цитопротекто-ров у больных с артериальной гипертензией оказывает позитивное влияние на активность свободнорадикальных процессов, эндотелиальную функцию, уровень АД, СПАД, состояние сердца и сосудов [Голиков А.П. и соавт., 2006, Калвиныи И.Я., 2001, Михин В.П. и соавт., 2009, Хубеева ДМ. и соавт., 2005]. Вместе с тем комплексной оценки влияния цитопротекторов 2-этил-6-метил-3-оксипиридина сукцината в сочетании с традиционной гипотензивной терапией на эндотелиальную дисфункцию и эффективность вторичной профилактики при моделировании L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота не проводилось. При гипертонической болезни ведущими гипотензивными препаратами являются ИАПФ и блокаторы ATI рецепторов. Гипотензивные эффекты данных препаратов, в значительной степени, обусловлены позитивным влиянием препаратов на эндотелиальные механизмы регуляции АД. В связи с этим, можно ожидать аддитивного влияния цитопротекторов на эндотелиотропные эффекты ИАПФ и Р-адреноблокаторов.

Очевидно, что в настоящее время достаточно большое внимание уделяется изучению роли и места 2-этил-6-метил-3-оксипиридина сукцината, повышающего биодотупность NO, в коррекции эндотелиальной дисфункции [88, 109, 110, 124], а вот сравнительное изучение комбинации производного 3-оксипиридина Мексиприм с представителями основных групп гипотензивных препаратов, обладающих эндотелиопротективными эффектами (ингибиторы АПФ, блокаторы АТ1-рецепторов) при экспериментальном моделировании эндотелиальной дисфункции в литературе нами не обнаружено.

Работа выполнена по инициативному плану, включена в программу «Разработка и совершенствование методов ранней диагностики, лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний с целью улучшения качества и увеличения продолжительности жизни больных» на 2007-2012 гг., номер госрегистрации 0120. 0 710379. Номер государственной регистрации диссертационной темы - 0120.0 805726.

Цель исследования: провести оценку фармакологической коррекции метаболического пути Ъ-аргинин/Ж) дополнительным введением препарата Мексиприм и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном, при экспериментальной модели дефицита оксида азота.

Задачи исследования:

1. Изучить эндотелиопротективную активность аскорбиновой кислоты, препаратов Мексидол и Мексиприм, ингибитора АПФ эналаприла, блокатора АТ1-рецепторов лозартана калия при Ь-1ЧАМЕ-индуцированной модели дефицита N0.

2. Изучить эндотелиопротективную активность сочетанного применения препарата Мексиприм и ингибитора АПФ эналаприла при Ь-1ЧАМЕ-индуцированной модели дефицита N0.

3. Изучить эндотелиопротективную активность сочетанного применения препарата Мексиприм и блокатора АТ1-рецепторов лозартана калия при Ь-КАМЕ- индуцированной модели дефицита N0.

4. Проведение интегрального векторного анализа для комплексной оценки функциональных характеристик сосудистой реактивности, нитроксидер-гической системы, показателей сократимости и морфометрии миокарда с последующим расчётом вероятностного коэффициента аддиции препарата Мексиприм в комбинации с эналаприлом и лозартаном при Ь-ИАМЕ- индуцированной модели дефицита N0.

Научная новизна исследования. В работе впервые показано, что препарат Мексиприм 60 мг/кг оказывает эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO при однократном внутримышечном введении в течение 7 суток. Эналаприл 0,5 мг/кг, лозартан калия 6 мг/кг (однократно внутрижелудочно в течение 7 суток) как монотерапия также обладали эндотелиопротективными эффектами на выбранной модели патологии. Сочетанное использование препарата Мексиприм с вышеперечисленными представителями основных групп антигипертензивных препаратов показало аддитивное эндотелиопротективное действие.

Практическая значимость. В работе обоснована эффективность соче-танного применения препарата Мексиприм с ингибитором АПФ эналапри-лом, блокатором ATI-рецепторов лозартаном калия для коррекции L-NAME-индуцированной NO-дефицитной эндотелиальной дисфункции в эксперименте. Показано, что их сочетанное использование позволяет улучшать изменение соотношения сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзави-симая вазодилатация) и нитропруссид (эндотелийнезависимая вазодилата-ция) с уменьшением коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД), который в 5 раз увеличивается при L-NAME-индуцированной NO-дефицитной эндотелиальной дисфункции, предотвратить снижение показателей биохимических маркеров (Total NO, экспрессию эндотелиальной NO-синтазы), а также добиться положительной динамики морфофукциональных показателей сердечно-сосудистой системы (диаметр кардиомиоцитов и прирост давления при пробе на нагрузку сопротивлением, диаметр кардиомиоцитов и адрено-реактивности).

Проведены целенаправленные доклинические исследования эндоте-лиопротективных эффектов препарата Мексиприм при эндотелиальной дисфункции («Протокол доклинического исследования препарата «Мексиприм» раствор для внутривенного и внутримышечного введения 50 мг/мл, производства ОАО «Фармстандарт - УфаВИТА» в сравнении с препаратом «Мек-сидол» раствор для инъекций, производства ООО МЦ «Эллара»).

Внедрение результатов научных исследований. Материалы диссертационного исследования, касающиеся антигипертензивной и эндотелиопро-тективной активности лозартана калия «Блоктран», эналаприла малеата «Ре-ниприл производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», включены в состав документов, поданных на регистрацию в МЗ РФ (РУ № 000084/01-2000).

Материалы диссертационного исследования, касающиеся изучения ан-ти-гипертензивной и эндотелиопротективной активности препарата Мекси-прим производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства» включены в состав регистрационного досье, поданного на регистрацию в МЗ РФ (регистрационный номер препарата Мексиприм Р № 00916-02 от 10.09.2008 г., зарегистрирован на ОАО «Фармстандарт-Томскхимфарм»), Результаты работы используются в лекционных курсах кафедры фармакологии, клинической фармакологии КГМУ, кафедры фармакологии Орловского государственного университета, кафедры фармхимии, фармакогнозии и фармакологии Белгородского государственного университета.

Апробация работы. Материалы работы доложены на итоговых научных сессиях и международных конференциях молодых ученых КГМУ в 2006 -2010 гг., XIV - XVII национальном конгрессе «Человек и лекарство», I национальном конгрессе терапевтов, VII съезде аллергологов и иммунологов СНГ. Апробация диссертации проведена на научно-практической конференции кафедр фармакологии, клинической фармакологии и фармакотерапии, анатомии, гистологии, внутренних болезней № 1, 2 внутренних болезней ФПО, НИИ экологической медицины КГМУ. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, в том числе 4 в журналах, рекомендуемых ВАК для диссертационных работ.

Положения, выносимые на защиту

1. Аскорбиновая кислота (60 мг/кг), Мексидол (60 мг/кг), Мексиприм (60 мг/кг) однократно в течение 7 суток внутримышечно оказывают эндоте-лиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированной N0-дефицитной ЭД. Эналаприл (0,5 мг/кг) и лозартан калия (6 мг/кг) однократно в течение 7 суток внутрижелудочно как монотерапия проявляют эндотелио-протективные эффекты на выбранной модели патологии.

2. Сочетанное использование препарата Мексиприм (60 мг/кг) с энала-прилом (0,5 мг/кг) оказывает выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражается в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов 1ЧОх. При этом достигаются целевые цифры АД, в отличие от монотерапии отдельно препаратом Мексиприм и эналаприлом. Результаты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышение адрено-реактивности. Морфологические исследования кардиомиоцитов обнаружили предотвращение под влиянием комбинации препарата Мексиприм с эналаприлом увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов.

3. Комбинированное использование препарата Мексиприм (60 мг/кг) с лозартаном калия (6,0 мг/кг) оказывает эндотелиопротективное действие на модели Ь-1ЧАМЕ-индуцированного дефицита N0, выражающееся в снижении КЭД, положительной динамики результатов нагрузочных проб и морфологических исследований, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов 1ЧОх. При этом не отмечается предотвращение развития гипер-тензии.

4. Мексиприм потенцирует эндотелиопротективную активность энала-прила и лозартана, и по расчётному значению вероятностного коэффициента аддиции комбинация препарата Мексиприм с эналаприлом является предпочтительнее комбинация препарата Мексиприм с лозартаном в комплекской эндотелио- и кардиопротекции.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 150 источников, из них 79 отечественных и 71 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста, содержит таблиц - 18, рисунков - 42, схем - 2.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Бобраков, Константин Евгеньевич

ВЫВОДЫ

1. Препараты антиокидантной направленности действия аскорбиновая кислота (60 мг/кг), Мексидол (60 мг/кг), Мексиприм (60 мг/кг), ингибитор АПФ эналаприл (0,5 мг/кг), блокатор АТ1-рецепторов лозартан калия (6 мг/кг) однократно в течение 7 суток проявляли эндотелиопротективное действие на модели Ь-КАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражалось в приближении значения КЭД к уровню интактных животных. Препарат Мексиприм по результатам нагрузочных проб проявляет кардиопротективные эффекты, предотвращая повышение адренореактивности и развитие скрытой сердечной недостаточности на фоне повышения реакции на реоксигенацию, сопоставимые с препаратом Мексидол и превосходящие таковые при использовании аскорбиновой кислоты. Эналаприл (0,5 мг/кг) и лозартан калия (6 мг/кг) однократно в течение 7 суток внутрижелудочно как монотерапия проявляют эндотелио- и кардиопротективные эффекты на выбранной модели патологии. Монотерапия каждым препаратом в изученных дозах не позволяла достичь целевых значений артериального давления.

2. Комбинированное использование препарата Мексиприм (60 мг/кг) с. эналаприлом (0,5 мг/кг) оказывало дополнительное эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражалось в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов Шх. При этом достигалось значительное снижение цифр АД, что не наблюдалось при монотерапии отдельно препаратом Мексиприм и эналаприлом. Результаты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышение адренореактивности и развитие скрытой сердечной недостаточности на фоне снижения реакции на реоксигенацию. Морфологические исследования кардиомиоцитов обнаружили предотвращение увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов под влиянием комбинации препарата Мексиприм с эналаприлом.

3. Комбинированное использование препарата Мексиприм (60 мг/кг) с лозартаном калия (6,0 мг/кг) оказывало также дополнительное эндотелиопротективное действие на модели Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита N0, выражающееся в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов Шх. При этом не отмечалось предотвращение развития гипертензии. Сходную и сопоставимую с эналаприлом (0,5 мг/кг) положительную динамику продемонстрировали результаты нагрузочных проб и морфологических исследований.

4. Расчёт вероятностного коэффициента аддиции показал, что препарат Мексиприм, в случае комбинации с эналаприлом, проявляет наиболее выраженное положительное фармакодинамическое взаимодействие в отношение проявления эндотелиопротективного и кардиогемодинамических корригирующих эффектов при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота.

155

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время список заболеваний, имеющих эндотелийзависимое происхождение, обширен и разнообразен. Исходная и развивающаяся «механика» этих болезней связана с нарушением дисбаланса эндотелиальных субстанций — нерегламентируемым усилением роли одних и ослаблением «оппозиционной» работы других. Хорошо известно, что медиатором эндотелий-зависимой вазодилатации является оксид азота (N0), биологическая активность которого у людей с заболеваниями органов кровообращения может снижаться по двум основным путям: 1) нарушение его продукции из-за угнетения активности N0 синтетазы в условиях инсулинорезистентности и гипергликемии; 2) повышенного потребления, так как N0 может вступать в ре2 акцию с О , в результате чего образуется пероксинитрит (ОМЮ ), высокие дозы которого усиливают повреждающие эффекты продуктов свободного радикального окисления.

Исходя из ключевой роли активации свободнорадикального окисления (СРО) в формировании эндотелиальной дисфункции, а опосредованно — в патогенезе заболеваний органов кровообращения, перспективным подходом к профилактике данной патологии является применение антиоксидантов. Широко используемые в клинической практике антиоксиданты: а-токоферол, аскорбиновая кислота, селен, каротин, убихинон — требуют сочетанного и длительного применения для достижения в конечном итоге слабовыраженно-го антиоксидантного и антигипоксантного эффекта. Это дает основания для поиска и изучения новых антиоксидантов.

Изучение эндотелиальной дисфункции, вызванной моделированием дефицита оксида азота, приближенного к условиям оксидантного стресса в эксперименте, требует выбора патофизиологической модели с созданием наиболее приближенных условий к клинической ситуации. Принимая этот факт во внимание, установление взаимосвязи фармакологических изысканий с формированием объективной методологии оценки, явилось начальныым этапом наших исследований, который был посвящен разработке методологических подходов к экспериментальному моделированию дефицита оксида азота.

Так, в ходе наших исследований проведенных в эксперименте на белых крысах линии Wistar был разработан комплекс методических подходов, включающий моделирование патологии, и последующую оценку ее физиологическими, биохимическими и морфологическими методами.

Эндотелиальную дисфункцию, вызванную дефицитом оксида азота моделировали ежедневным в/б введением в течение 7 дней крысам-самцам ингибитора фермента eNOS N-нитро-Ь-аргинин метилового эфира (L-NAME-индуцированная ЭД. Механизм ингибирования выработки NO в случае, использования L-NAME заключается в конкурентном ингибировании фермента eNOS аналогом L-аргинина — L-NNA. L-NAME фактически является проле-карством: в организме этот эфир гидролизуется с участием специальных ферментов — эстераз, давая активный ингибитор — L-NNA. В свою очередь-дефицит сосудистого NO вызывает существенные изменения? функций сис-. темы кровообращения в целом. Эти нарушения включают: снижение эффектов эндотелийзависимых вазодилататоров и повышение; вазоконстрикторных, влияний; рост АД, нарушения системной и региональной гемодинамики, функций сердца, увеличение экспрессии адгезивных молекул эндотелия; аг4 регации тромбоцитов; прилипание их и лейкоцитов к сосудистой стенке; пролиферацию и миграцию гладкомышечных клеток с образованием неоинтимы, синтез внеклеточного матрикса и др;[9, 53, 63, Выданные результаты подтверждают и наши исследования. В/б введение в течение 7 дней крысам-самцам ингибитора фермента eNOS L-NAME приводит к выраженной АГ и эндотелиальной дисфункции. Соответственно АД У животных с патологией составило САД - 190,3 ± 6,7, ДАД - 145,0 ± 3,9 мм рт.ст., тогда как у интактных животных САД - 137,7 ±3,7, ДАД - 101,9 ± 4,3 мм рт.ст.

По данным литературы такой умеренно пролонгированный среднедо-зовый режим введения L-NAME приводит к провоспалительным (увеличение адгезивньтх и инфильтративных эффектов моноцитов) и пролиферативным появление пролиферирующих антигенпозитивных ядерных клеток) изменениям сосудистого русла, характерных для патофизиологических проявлений при развитии раннего первичного атеросклеротического процесса [92]. При этом повышается активность АПФ и AT I рецепторов, приводящая к повышению активности AT II, повышается экспрессия, хемокинов, хемотаксиче-ских пептидов моноцитов, адгезивных молекул эндотелия, транформирую-щего фактора роста [130]. Кроме того, повышается продукция супероксид-анионов и активность факторов транскрипции (нуклеарный фактор каппа В, активатор плазминогена 1) [92]. Кроме того, вышеперечисленные факторы являются взаимообусловленными, запускающими целый каскад механизмов, приводящий к снижению продукции оксида азота. Известно, что хемотакси-ческие пептиды моноцитов (MCP'— 1) способствуют увеличению адгезии моноцитов к эндотелию сосудов, особенно коронарных сосудов, активируя про-воспалительный механизм развития эндотелиальной дисфункции. Увеличение экспрессии MCP — 1, во-первых, может быть обусловлена активацией локальной« ренин-ангиотензиновой системы, что доказано в исследованиях' in vitro и in vivo в условиях введения L-NAME, в которых AT II вызывает повышение экспрессии MCP - 1 [92]. Во-вторых, известно, что ингибирование NO-синтазы в опытах с использованием культуры эндотелиальньгх человеческих клеток, приводит к развитию оксидантного стресса, независимо от цГМФ, вследствие избыточной продукции реактивных форм кислорода, что также увеличивает экспрессию МСР-1. С другой стороны, увеличение количества реактивных форм кислорода приводит к повышению активности нук-леарного фактора транскрипции NF-кВ, запускающего1 каскад образования цитокинов, что также приводит к увеличению экспрессии MCP -1. Кроме того, активация ATII приводит к изменениям в регуляции сигнальной системы гладкомышечных клеток, приводящих к вазоконстрикции [142]. Введение L-NAME снижало продукцию N0,, (общее количество нитратов и нитритов) в сегменте аорты, а совместное введение препарата Мексиприм с L-NAME повышало содержание NOx. Кроме того, Мексиприм препятствует адгезии моноцитов, одним из механизмов данного эффекта является непосредственное, а также обусловленное аутокринными и паракринными эффектами L-аргинина снижение хемотаксической активности эндотелиального слоя [124]. В литературе имеются данные о снижении под влиянием препарата Мекси-прим образования провоспалительных цитокинов - интерлейкина-113, интер-лейкина-6 и фактора некроза опухоли (TNF-a) и металлопротеаз, активированных NF-кВ на модели культуры мышечных клеток мышей [121]. Таким образом, дополнительное введение препарата Мексиприм приводит к нормализации и модулированию каскадных провоспалительных иммунологических ответов, возникающих при введении блокатора синтеза оксида азота L-NAME, аналогичных развитию первичного раннего атеросклероза доклинической фазы развития.

Сравнительное комплексное изучение потенциальных эндотелиотроп-ного аддитива - антиоксиданта - препарата Мексиприм выявило эндотелио-и кардиопротективные эффекты препаратов в эксперименте. Как показали, наши исследования, Мексиприм в дозе 60 мг/кг проявлял выраженное эндо-телиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита N0, что выражалось в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции КЭД. Обнаружено, что антиоксидант Мексиприм 60 мг/кг снижал КЭД до 3,3±0,2, тогда-как в группе животных, получавших L-NAME, он составлял 5,4±0,6.

Проведенные нами морфологические исследования также подтвердили наличие кардиопротективных эффектов исследуемых препаратов. Так, в контрольной группы (L-NAME-индуцированный дефицит NO) обнаружена гипертрофия кардиомиоцитов левого желудочка до 18,5+0,9 (в норме 9,1 ±0,1 мкм), сосудистые изменения в виде спастического состояния арте-риол, утолщения их стенок. При окраске гематоксилином Pero выявлялись очаговые сегментарные или тотальные повреждения кардиомиоцитов кон-трактурного типа.

Мексиприм 60 мг/кг способствовал предотвращению увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов, снижая его до 13 мкм, против 18 мкм в контроле. Отличительной чертой препарата Мексиприм служит его способность тормозить процессы свободнорадикального окисления, что позволяет использовать их для защиты миокарда и сосудистой стенки от последствий окислительного стресса.

Избыток реактивных форм кислорода вызывает существенные изменения функции эндотелия сосудов: торможение эндотелийзависимой вазодила-тации, увеличение синтеза адгезивных молекул, что ведет к прилипанию и проникновению моноцитов в сосудистую стенку, превращению их в макрофаги; увеличение продукции различного рода факторов роста, повышение агрегации тромбоцитов и тромбообразования, активности апоптоза и др. В целом возникает выраженная дисфункция сосудистого эндотелия [104, 132].

Показано, что супероксид-анион обладает способностью тормозить экспрессию и активность е!М08, а также связывать и инактивировать N0, уменьшая его концентрацию в эндотелиальных клетках [104].

В этой связи коррекция свободнорадикальных процессов при ЭД представляется крайне важной, т.к. позволяет предотвратить ускоренную деградацию N0, восстановить активность 1<Ю-синтазы, экспрессию N0 в кровоток и препятствовать развитию эндотелиальной дисфункции [116].

Мексиприм — антиоксидантный препарат, регулирующий метаболиче- -ские процессы в миокарде и сосудистой стенке, уменьшает проявления окислительного стресса, тормозит свободнорадикальное перекисное окисление липидов и повышает активность антиоксидантной системы ферментов [5, 24] (рис. 4.1,4.2).

Большинство используемых в настоящее время кардиопротекторов разными путями блокируют бета-окисление жирных кислот в митохондриях и на альтернативной основе стимулируют окисление глюкозы. Мексиприм является цитопротективным препаратом, стимулирующим ключевые звенья цикла Кребса, сукцинатдегидрогеназный путь окисления, гликолиз, элементы цитохромной цепи, но непосредственно не угнетающим окисление жирных кислот.

Хорошо известно, что медиатором эндотелийзависимой вазодилатации является оксид азота (N0), биологическая активность которого у людей с заболеваниями органов кровообращения может снижаться по двум основным путям: 1) нарушение его продукции из-за угнетения активности N0 синтета-зы в условиях инсулинорезистентности и гипергликемии; 2) повышенного* потребления, так как N0 может вступать в реакцию с О2-, в результате чего образуется пероксинитрит (ОМОСГ), высокие дозы которого усиливают повреждающие эффекты продуктов свободного радикального окисления [7]. Одним из подходов к поддержанию биодоступности N0 является снижение окислительного стресса, поэтому можно полагать, что применение соединений, обладающих свойствами антиоксидантов, в качестве ловушек супероксид-ионов, инактивирующих N0, будет способствовать повышению его биодоступности и улучшению регуляции тонуса сосудов.

В последние годы широко изучается действие янтарной кислоты, ее солей и эфиров; представляющих собой универсальные внутриклеточные метаболиты. Янтарная кислота, содержащаяся во всех тканях и органах, является продуктом 5-й и субстратом 6-й реакции цикла трикарбоновых кислот. Окисление янтарной кислоты в 6-й реакции осуществляется с помощью сукцинат-дегидрогеназы. Выполняя каталитическую функцию по отношению-к циклу Кребса, янтарная кислота снижает в крови концентрацию других продуктов' цикла: лактата, пирувата, цитрата, — продуцируемых и накапливающихся на ранних стадиях гипоксии, и тем самым включается в энергетический обмен, направляя процесс окисления по наиболее экономичному пути. Антиокси-дантное действие янтарной кислоты связано с ее влиянием на транспорт ме-диаторных аминокислот, а также с увеличением содержания в мозге амино-масляной кислоты за счет шунта Робертса [13].

Антигипоксантный эффект янтарной кислоты связан с активацией сук-цинатдегидрогеназного окисления и с восстановлением активности цитохро-моксидазы — ключевого окислительно-восстановительного фермента дыхательной цепи. Янтарная кислота как антиоксидант дезактивирует пероксида-зы в митохондриях, повышает активность МАО зависимых ферментов [13].

Результаты проведенных нами экспериментов свидетельствуют о том, что производное янтарной кислоты Мексиприм обладает выраженным терапевтическим эффектом в отношении восстановления регуляторной функции эндотелия и способствует восстановлению активности eNOS, о чем судили по возрастанию концентрации суммарного нитрат и нитрит- ионов, т.е. конечных метаболитов оксида азота. Более того, так как восстановление NO-продуцирующей функции эндотелия на фоне терапии антиоксидантами сопровождалось улучшением ЭЗВД, можно считать, что это связано с увеличением биодоступности NO, поскольку антиоксиданты, уменьшая окислительный стресс, препятствуют деградации оксида азота.

Исследуемые препараты в изученных дозах не достигали заданных значений артериального давления, и следовательно, не могут рассматриваться 1 в виде монотерапии на модели с L-NAME-индуцированной артериальной гипертензией.

Результаты изучения основных антигипертензивных препаратов, выявили в достаточной степени, как и Мексиприм эндотелио- и кардиопротек-тивную активность на моделях L-NAME, что выражалось в снижении КЭД, предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. Одновременно результаты нагрузочных проб выявили предотвращение повышения адрено-реактивности и развития скрытой сердечной недостаточности. Морфологические исследования кардиомиоцитов обнаружили предотвращение под действием препаратов увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов.

Полученные результаты подтверждают существующие данные об эн-дотелипротективном действии ИАПФ, блокаторов ATI рецепторов.

Так, в опытах на животных и клинических исследованиях показано, что тканевые эффекты ИАПФ восстанавливают функцию эндотелия, подавляют пролиферацию и миграцию гладкомышечных клеток, нейтрофилов и моно-нуклеарных клеток, снижают свободнорадикальное окисление, усиливают , эндогенный фибринолиз, снижают агрегацию тромбоцитов, обладают анти-атерогенным действием и стабилизируют атеросклеротические бляшки у животных [8, 28, 39, 100]. Одна из возможностей воздействия на ЭД связана с восстановлением метаболизма брадикинина, нарушенного при сердечнососудистых заболеваниях. Блокада тканевого АПФ с помощью ИАПФ приводит не только к уменьшению синтеза АТ II, но и замедляет деградацию брадикинина. Одним из возможных механизмов действия этих препаратов могут быть снижение базальной и индуцированной инсулином секреции эн-дотелина-1 и увеличение продукции N0 [98]. Кроме того, доказано положительное действие на функцию эндотелия в результате повышения выработки эндотелиального гиперполяризующего фактора [136]. Экспериментально доказана способность ИАПФ предотвращать ЭД, опосредованную действием недоокисленных липопротеидов низкой плотности. Положительный эффект связывают с накоплением в эндотелии брадикинина, что, в свою очередь, ведет к повышению продукции N0. При изучении способности эналаприла и кандесартана восстанавливать функцию эндотелия артерий брыжейки крыс со спонтанной АГ была выявлена их одинаковая эффективность в отношении, эндотелиальной дисфункции, что в последующем было доказано и в других экспериментах, в частности с каптоприлом и лозартаном [22, 100, 133].

Благоприятное действие на эндотелиальную дисфункцию антагонистов ангиотензиновых рецепторов реализуется, по-видимому, за счет блокады АТ1-рецепторов, что приводит к снижению продукции супероксидных радикалов, уменьшению связывания N0 и его накоплению [32, 33, 54, 67, 80]. Так как стимуляция АТ1-рецепторов способствует образованию супероксидов, инактивирующих N0, а стимуляция АТ2-рецепторов приводит к вазодилата-ции и натрийурезу за счет активации системы брадикинина, N0 и цГМФ, то эффект АТ II (усиление синтеза или инактивация N0) зависит от того, с какими рецепторами он преимущественно взаимодействует. Поэтому очевидно, что на фоне блокады АТ1-рецепторов создаются условия для усиленного функционирования незаблокированных АТ2-рецепторов, что приводит к накоплению N0 [10, 11, 30, 71].

Просвет сосуда

ГР®активные. ' прюдукты

Тромбоциты, (агрегат)

АцетшТ u холин напря- серо- Тромбин жение тонин сдвига ддф / бра^г \\AT-i one \ /y'Hmu4%LMT-IU. лпнп \ /X \Л

V .О

Протеин Gi

L-NAME,7^\ L-NMMA,^ ADMA 1

L-аргинин L-цитруллин

AT-i У%Щ>\ AT-JI t a

Адгезивные модекуяь»

7 / * »(*{>?* В v у

Клетка эндотелия

Схема 4.1. Схема механизма возможных путей реализации эндотелио-протективных эффектов препарата Мексиприм, ингибитора АПФ эналаприла и блокады ATI-рецепторов лозартана.

Обозначения: ATI, ATII- ангиотензин I и II, ATI — ангиотензиновые рцепторы подтипа 1, L-NAME - №-нитро-Ь-аргининметиловый эфир, L-NMMA - №- нитро-L-мономети л аргинин, N0 - оксид азота, Ог' - супероксид-анион, ADMA - асимметричный диметиларгинин, нуклеарный фактор-каппа-В (NF-каррВ), ОксЛПНП - окисление липо-протеидов низкой плотности.

Клинические исследования у больных с эссенциальной АГ показали, что на фоне терапии лозартаном улучшается эндотелиальная функция рези-стивных артерий за счет увеличения синтеза NO [37, 62, 67, 69].

Однако использование всех исследуемых препаратов на модели с L-NAME-индуцированной артериальной гипертензии ни в одном случае не достигали значений по совокупности критериев оценки (АД, КЭД и др.) ЭД у интактных животных. Следовательно, не могут рассматриваться в виде монотерапии.

Сочетанное применение препарата Мексиприм с основными кардио-тропными препаратами с доказанными эндотелиопротективными свойствами оказывало выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-КАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражалось в снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) до уровня, приближающегося к интактным животным, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов Ж)х. При этом отмечалось существенное предотвращение развития гипертензии в сравнении с монотерапией этими препаратами.

Так, сочетанное применение препарата Мексиприм с эналаприлом на фоне снижения КЭД уровень АД приближался к целевым значениям. В комбинации с лозартаном калия не выявлено существенное предотвращение развития гипертензии в сравнении с монотерапией.

Одновременно результаты нагрузочных проб выявили способность комбинаций в большей степени предотвращать повышение адренореактивно-сти и развитие скрытой сердечной недостаточности. Морфологические исследования кардиомиоцитов обнаружили предотвращение под влиянием комбинаций препарата Мексиприм с антигипертензивными препаратами увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов у животных с патологией.

Очевидно, положительное фармакодинамическое взаимодействие со-четанного применения препарата Мексиприм с антигипертензивными препаратами связано с их разными точками приложения действия.

В частности, блокада тканевого АПФ с помощью эналаприла приводит к уменьшению синтеза АТ II, и замедляет деградацию брадикинина. Также одним из возможных механизмов действия эналаприла, по видимому, является снижение базальной и индуцированной инсулином секреции эндотелина-1 и увеличение продукции N0 [133].

Лозартан калия, очевидно, что на фоне блокады АТ1-рецепторов создает условия для усиленного функционирования ^заблокированных АТ2рецепторов, что приводит к накоплению NO [5, 6, 66, 88]. Блокада АТ1-рецепторов, в свою очередь снижает продукцию супероксидных радикалов [27, 28, 47, 59, 79].

Мексиприм в свою очередь при сочетанном применении с вышеуказанными препаратами дополнительно увеличивает синтез NO и увеличивает его биодоступность в эндотелиальных клетках. Механизм данного фармако-динамического эффекта проявляется за счет предотвращения блокады фермента eNOS [25], уменьшения инактивации NO [25], осуществляет кардио-протекцию за счет усиления противоишемических свойств оксида азота [26].

Уникальное сочетание способностей оптимизировать энергообмен клеток и противостоять окислительному стрессу за счет антиоксидантной активности определяет универсальную способность препарата Мексиприм улучшать клеточный метаболизм и восстанавливать функциональную активность тканей в условиях нарушения оксигенации.

Интегральный векторный анализ гемодинамических, биохимических и морфологических показателей в комплексной оценке эндотелио- и кардио-протективных эффектов препарата Мексиприм в комбинации с известными препаратами с эндотелипротективными свойствами эналаприлом и лозарта-ном, показывает эндотелиальную составляющую интегрального протектив-ного эффекта при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота. При всех патогенетических механизмах развития эндотелиальной дисфункции мы считаем, что звено оксидативного стресса при ADMA-подобном ингибирова-нии эндотелиальной NOS, можно вычленить как доминирующее в представлениях о точке приложения фармакологической коррекции данного патофизиологического состояния. В этой связи, представляется, что L-NAME-индуцированная патология в нашей интерпретации жёстко акцентуированной, прагматичной модели (конкретно внутрибрюшинное введение в дозе 25 мг/кг в течение 7 суток), не что иное, как патогенетически программируемое ингибирование eNOS в жёсткой аналогии с механизмом ADMA-индуцированной эндотелиальной дисфункции, описанной ранее.

Дальнейший анализ сочетаний препарата Мексиприм с эналаприлом и лозартаном проводился на основании результирующих площадей, полученный в результате интегрального векторного анализа, значения которых представлены в таблице. Сравнивая площади векторных диаграмм, мы получили выраженные различия между группой интактных животных, животных с моделированием L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота и групп животных с фармакологической коррекцией вышеуказанными препаратами (табл. 4.1.). В группе интактных животных расчётная площадь составляет 5,48±0.30 усл. ед., в группе с моделированием L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота - 10,12± 1.2 усл. ед., что принимается за наибольшую степень выраженности сочетанных сосудистых, гемодинамических, биохимических и морфологических нарушений в условиях данной модели.

Из таблицы видно, что по показателям площадей результирующих диаграмм Мексиприм, как монотерапия, занимает промежуточное (при L-NAME-индуцированном дефиците NO) по интегральной активности в коррекции нарушений метаболического пути Е-аргинин/NO в сравнении с известными препаратами, обладающими эндотелиопротективной активностью. Кроме этого, Мексиприм в обеих комбинациях усиливает интегральную про-тективную активность в отношении L-NAME- индуцированного дефицита оксида азота, что выражается в большем приближении значения площади к группе интактных животных.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Бобраков, Константин Евгеньевич, 2010 год

1. Абидова, K.P. Значение эндотелина 1 в регуляции функций сердечнососудистой системы / K.P. Абидова // Врачеб. дело. 1999. - №7-8. - С. 22-27.

2. Авторское свидетельство СССР N 990226, кл.А 61К 31/44, 1983.

3. Чернобаева Г.Н. и др. Антигипоксические эффекты некоторых производных3.оксипиридинов. Итоги науки и техники. Серия: Фармакология, Химиотерапевтические средства. Т. 27. Антигипоксанты / Под ред. Л.Д.Лукьяновой -М.: 1991, с.26 39.

4. Агафонов, A.B. Влияние арифона на структуру и функцию артерий упожилых больных артериальной гипертензией / A.B. Агафонов, Л.А.

5. Некрутенко, Д.А. Лыкова // Материалы Рос. нац. конгр. кардиологов. СПб., 2002 -.

6. Антиоксидантные свойства производных 3-оксипиридина: мексидола, эмоксипина и проксипина / Г.И.Клебанов, О.Б.Любицкий, О.В.Васильева и др. // Вопросы мед. химии. -2001. №3. - С. 288-300.

7. Бабак, О.Я. Артериальная гипертензия и ишемическая болезнь сердца -эндотелиальная дисфункция: современное состояние вопроса / О.Я. Бабак, Ю. Н. Шапошников,В. Д.Немцова //Укр.терапевт.журн.- .-№1.-С. 14-21.

8. Баркаган, З.С. Метаболически-воспалительная концепция атеротромбоза и новые подходы к терапии больных / З.С. Баркаган, Г.И. Костюченко // Бюл. СО РАМН. 2006. - №2 (120). - С. 132-138.

9. Беленков, Ю.Н. Ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента влечении сердечно-сосудистых заболеваний (Квинаприл и эндотелиальнаядисфункция) / Ю.Н. Беленков, В.Ю. Мареев, Ф.Т. Агеев. М.: ООО "Инсайт полиграфик", 2002. - 86 с.

10. Белоусов, Ю.Б. Эндотелиальная дисфункция как причина атеросклеротического поражения артерий при артериальной гипертензии: методы коррекции / Ю.Б. Белоусов, Ж.Н. Намсараев // Фарматека. 2000. -№6.-С. 62-72.

11. Блокатор AT 1 — ангиотензиновых рецепторов лозартан. Ч. 2: Опыт использования для лечения гипертонической болезни и диабетической нефропатии / Б.А. Сидоренко, Д.В. Преображенский, Т.М. Стеценко и др. // Кардиология. 2003. - Т. 43, №2. - С. 88-95.

12. Блокатор AT 1 — ангиотензиновых рецепторов лозартан. Ч. I: Основы клинической фармакологии / Б.А. Сидоренко, Д.В. Преображенский, Т.М. Стеценко и др. // Кардиология. 2003. - Т. 43, №1. - С. 90-98.

13. Бова A.A. Роль вазоактивных факторов в развитии артериальной гипертензии / A.A. Бова, Е.Л. Трисветова // Кардиология. 2001. - Т.41, №7. -С. 57-58.

14. Бойцов, С.А. Комбинированная терапия артериальной гипертензии с позиций профилактики сердечно-сосудистых осложнений и патогенеза / С.А. Бойцов // CONSILIUM MEDICUM: Системные гипертензии (прил.). 2004. -Вып.2. - С. 23-26.

15. Брошусь В.В. Оксид азота как регулятор защитных и гомеостатичесих реакций организма / В.В. Брошусь // Укр. ревматол. журн. — 2003.— № 4.— С. 3—11.

16. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.,1972. Наука.

17. Влияют ли аскорбиновая кислота, лизин и их сочетание на уровень липопротеида (А) у больных ИБС? / М.В. Ежов, О.И. Афанасьева, О.И. Кононова и др. // Кардиология. 1996. - Т. 36, № 9. - С. 31-33.

18. Воскресенский О. И. Свободнорадикальное окисление, антиоксиданты и атеросклероз / Воскресенский О. И. // Кардиология. — 1981. — № 6. — С. 118-123.

19. Воронина В.А. Отечественный препарат нового поколения. МЕКСИДОЛ® основные эффекты, механизм действия, применение. Москва 2005г.

20. Гомазков, О. А. Молекулярные и физиологические аспекты эндотелиальной дисфункции. Роль эндогенных химических регуляторов. / О. А. Гомазков // Успехи физиол. наук. 2000. - Т. 31, № 4. - С. 48-62.

21. Грацианский, H.A. Предупреждение обострений коронарной болезни сердца. Вмешательства недоказанным клиническим эффектам: ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента и антиоксиданты / H.A. Грацианский // Кардиология 1998. - №6. - С.4-19.

22. Дюмаев K.M., Воронина Т.А., Смирнов Л.Д. Антиоксиданты в профилактике и терапии заболеваний ЦНС. М., 1995, Изд-во НИИ биомедицинской химии.

23. Задионченко, B.C. Дисфункция эндотелия и артериальная гипертония: терапевтические возможности / B.C. Зодионченко, Т.В. Адашева, А.П. Сандомирская // Рус. мед. журн. 2002. - №1. - С. 11-15.

24. Зенков, Н.К. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологические аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меныцикова -М.: МАИК "Наука/Интерпериодика", 2001. 343 с.

25. Зотова, И.В. Синтез оксида азота и развитие атеросклероза /И.В. Зотова, ДА. Затейщиков, Б.А. Сидоренко // Кардиология. 2000.- №4. - С.58-67.

26. Ингибиторы ангиотензин-превращаюш,его фермента в лечении сердечно-сосудистых заболеваний (Квинаприл и эндотелиальная дисфункция) / Ю.Н. Беленков, В.Ю. Мареев, Ф.Т. Агеев. М.: 0 0 0 "Инсайт полиграфик", 2002. - 86 с.

27. Кардиопротективное действие каптоприла и лозартана при инфаркте миокарда у гипертензивных крыс / М.П.Гладченко, М.П. Покровский, Е.Б. Артюшкова и др. // Человек и лекарство: тез. докл. VI Рос. нац. конгр. (19-23 апр. 1999г.).-М., 1999.-С.21.

28. Карпов, Ю.А. Коррекция нарушенной функции сосудистого эндотелия у женщин в период менопаузы: какой препарат лучше? / Ю.А. Карпов, Г.Н. Соболева // Рус. мед. журн. 2001. - Т. 9, №9. - С. 27-31.

29. Кательницкая, Л.И. Влияние эналаприла на функцию эндотелия у больных артериальной гипертонией в разных возрастных группах / Л.И. Кательницкая, Л.А. Хашиева, С.А. Плескачёв // Рос. кардиол. журн. 2005. -№6. -С. 71-76.

30. Кициева, A.A. Функция эндотелия у больных острым инфарктом миокарда пожилого и старческого возраста: автореф. дис. канд. мед. наук: 14.00.06 / A.A. Кициева; НИИ кардиологии им. А.Л. Мясникова. Ростов н/Д., 2004. - 24 с.

31. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Любицкий О.Б., Владимиров Ю.А. 1999, Вестник РАМН, №2, 15-22.

32. Комплексная оценка эффективности лозартана (козаара) у больных мягкой и умеренной гипертонией / Я.И. Коц, П.Ю. Галин, Л.Г. Вдовенко и др. // Клинич. фармакология и терапия. 2001. - №4. - С. 73-75.

33. Красникова, Т.Л. Лозартан блокатор ангиотензин II - рецеторов: новое направление в сердечно-сосудистой фармакотерапии / Т.Л. Красникова // Клинич. медицина. - 1996. - №3. - С. 17-21.

34. Ларина Л.С, Рыбаков Т.В., Перминов С.И., Коженова E.H. Отчет о применении мексидола у больных геронтологического профиля. Психиатрическая больница №3 им. В.А.Гиляровского, М. 2003г.

35. Ланкин, В.З. Свободнорадикальные процессы в норме и при патологических состояниях: Пособие для врачей / В.З. Ланкин, А.К. Тихазе, Ю.Н. Беленков. М., 2001. - 78 с. - РКНПК МЗ РФ.

36. Ланкин, В.З. Свободнорадикальные процессы при заболеваниях сердечно сосудистой системы / В.З. Ланкин, А.К. Тихазе, Ю.Н. Беленков // Кардиология. -2000. № 7. - С. 58-71.

37. Лечение больных артериальной гипертонией антагонистом рецепторов ангиотензина II лозартаном / О.М. Драпкина, А.В. Клименков, Е.Л. Буеверова, В.Т. Ивашкин // Кардиоваскуляр. терапия и профилактика. 2002. -№4. -С. 30-31.

38. Мазуров, В.И. Эндотелиальная дисфункция при метаболическом синдроме / В. И. Мазуров, В. А.Якушева // Эфферентная терапия. 2006. - Т. 12,№3. -С. 19-24.

39. Маколкин, В.И. Новые возможности лечения сердечно-сосудистых заболеваний ингибиторами ангиотензинпревращающего фермента / В.И. Маколкин // Кардиоваскуляр. терапия и профилактика 2005.- №5 - С. 66.

40. Марков X. М. Окись азота и окись углерода новый класс сигнальных молекул / Марков X. М. //Успехи физиол. наук. — 1996. — Т. 27, № 4. - С. 30-43.

41. Марков X. М. О биорегуляторной системе Ь-аргинин оксид азота / Марков X. М. // Пат. физиол. - 1996. - № 1. - С. 34-39.

42. Марков, Х.М. Оксид азота в физиологии и патологии почек / Х.М. Марков //Вести РАМН. 1996. - № 7. - С. 73-78.

43. Марков, X. М. Роль оксида азота в патогенезе болезней детского возраста / Х.М. Марков // Рос. вестн. перинатологии и педиатрии. 2000. - Т. 45, № 4. - С. 43—47.

44. Марков, Х.М. О регуляции деятельности сердца системой Ь-аргинин— оксид азота / Х.М. Марков, С.А. Надирашвили // Патолог, физиология и экс-перим. терапия. 2003. - № 4. - С. 9—11.

45. Марков, Х.М. Оксид азота и сердечно-сосудистая система / Х.М. Марков // Успехи физиолог, наук. 2001. - Т. 32, № 3. - С.9—65.

46. Марков, Х.М. Оксидантный стресс и дисфункция эндотелия / Х.М. Марков // Патолог, физиология и эксперим. терапия . 2005. - №4. - С. 5-9.

47. Марков, X. М. Молекулярные механизмы дисфункции сосудистого эндотелия / X. М. Марков // Кардиология. 2005. - №12. — С. 62-72.

48. Марков, X. М. Оксид азота и сердечно-сосудистая система / Х.М. Марков // Успехи физиолог, наук. 2001. - Т. 32, № 3. - С. 49—65.

49. Марков, X. М. Простаноиды и атеросклероз / Х.М. Марков // Патолог, физиология и эксперим. терапия. 2004. - №1. - С. 2-8.

50. Марков, X. М. Сосудистые эффекты липопротеинов и оксид азота: клеточные и молекулярные механизмы / X. М. Марков // Патолог, физиология и эксперим. терапия. 2006. - №3- С. 2 - 7.

51. Метельская, В.А. Возможности лабораторной оценки NO-продуцирующей функции эндотелия / В.А. Метельская // Клинич. и лаб. диагностика. 2004. - №9. - С. 86.

52. Мексидол. Отечественный препарат нового поколения. Возрождая энергию жизни!. ООО НПК «Фармасофт»., Москва, 2003, 26 с.

53. Микроциркуляция в кардиологии / под ред. В.И.Маколкина. М.: Визарт, 2004. - 136 с.

54. Моисеев, С.В. Антагонисты рецепторов ангиотензина 2: новый подход к лечению гипертонии / С.В. Моисеев // Клинич. фармакология и терапия. — 1995. Т.4, №4. - С. 62-64.

55. Намаканов, Б.А. Эндотелиальная дисфункция при артериальной гипертензии — фактор риска сердечно-сосудистых осложнений / Б.А. Намаканов, М.М. Расулов // Кардиоваскуляр. терапия и профилактика. — 2005.-№6, ч. 2.-С. 98-101.

56. Небиеридзе, Д.В. Клиническое значение дисфункции эндотелия при артериальной гипертонии / Д.В. Небиеридзе // CONSILIUM MEDICUM: Системные гипертензии (прилож.). 2005. - Т.7, №1. - С. 31-38.

57. Небиеридзе, Д.В. Микроциркуляторные расстройства при артериальной гипертонии и перспективы их коррекции / Д.В. Небиеридзе, Е.В. Шилова, С.Н. Толпыгина // Кардиоваскуляр. терапия и профилактика. — 2004. №4. — С. 28-32.

58. Оганов, Р.Г. Метаболические эффекты блокаторов рецепторов ангиотензина II / Р. Г. Оганов, А. В. Небиеридзе // Кардиология. 2002. - Т. 42, №3.-С. 35-39.

59. Оковитый С.В. Клиническая фармакология, антиоксидантов / "ФАРМиндекс-Практик" выпуск 5 2003 стр. 85-111.

60. Ольбинская, Л.И. Блокаторы рецепторов» ангиотензина 1Г при лечении артериальной гипертонии / Л.И. Ольбинская // GONSILIÜM MEDICUM (прилож.). 2005. - №2. - С. 27-28.

61. Ольбинская, Л.И. Эндотелиновая. агрессия.« в патогенезе хронической сердечной недостаточности и подходы к её терапевтической- коррекцииЛ. И: Ольбинская, Ю. И- Найманн // Терапевт, арх. 2005. - №9: - С. 88-93.

62. Остроумова,- О.С. Дисфункция» эндотелия' при сердечно-сосудистых заболеваниях (по материалам XIII Европейской конференции по артериальной^ гипертензии> / О. С. Остроумова, Р: Э: Дубинская. // Кардиология: 2005. - №2. - С. 59 - 62.

63. Пашин,. E.H. Кардиопротективное действие эмоксипина на модели гипоксия-реоксигенация / Е.Н.Пашин // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины и фармации: материалы конф. / КПМУ. Курск, 1993. - С.171.

64. Петрищев, Н.Н; Физиология и патофизиология эндотелия / H.H. Петрищев, Т.Д. Власов // Дисфункция эндотелия. Причины, механизмы. Фармакологическая коррекция. СПб.: СПб ГМУ, 2003. - С. 4-38.

65. Подзолков, В.И. Антагонисты AT 1 рецепторов и состояние микроциркуляции у больных гипертонической болезнью: ещё одна мишеньдля терапии? / В.И. Подзолков, В.А. Булатов, Е.А. Сон // Артериальная гипертензия. -2005. Т. 11, №3. - С. 207-210.

66. Полонский, В.М. Исследование LIFE: новые перспективы применения лозартана / В.М. Полонский // Фарматека- 2002. №7-8. - С.3-9.

67. Сернов Л.Н., Гацура В.В. Элементы экспериментальной фармакологии. М., 2000. 352с.

68. Справочник «Лекарственные средства», М.Д.Машковский, изд. 14, 2000, т.2, С. 186.

69. Тиганов А.С., КонцевойВ.А., Смулевич А.Б. Клинические испытания мексидола в качестве транквилизатора с ноотропнымкомпонентом действия, Научный Центр психического здоровья РАМН, М. 2002.

70. Толстых П.И., Кривихин В.Т., Луцевич Э.В., Калинин М.Р., Доценко Н.М. Лазерное излучение и антиоксиданты в лечении гнойно-некротических процессов нижних конечностей у больных сахарным диабетом. М., 1998. Орбита-М.

71. Федеральное руководство для врачей (формулярная система), выпуск IH, 2002, С. 234, 240.

72. Шестакова, М.В. Дисфункция эндотелия причина или следствие метаболического синдрома? / М.В. Шестакова // РМЖ. - 2001. - Т. 9, № 2. - С. 88.

73. Acute and chronic angiotensin-1 receptor antagonism reverses endothelial dysfunction in atherosclerosis / A. Prasad, T. Tupas-Habib, W.H. Schenke et al. // Circulation. -2000. Vol. 101(20). - P. 2349-2354.

74. Ageing-associated endothelial dysfunction in humans / A. Chauhan, S. More, P.A. Mullins et al. // J. Am. Col. Cardiol. 1996. - Vol. 28. - P. 1796— 1804.

75. Alderton, W. K. Nitric oxide synthases : structure, function and inhibition / W. K. Alderton, С. E. Cooper, R. G. Knowles // Biochem. J. 2001. - Vol. 357. -P. 593-615.

76. Angiotensin II stimulates NADH and NADPH activity in cultured vascular smooth musele cells / K.K. Griendling, J.D. Ollerenchaw, С. K. Minieri, R.W. Alexander // Clin. Res. -1994. Vol. 74. - P. 1141 - 1148.

77. Arginase inhibition restores arteriolar endothelial function in Dahl rats with salt-induced hypertension / F.K. Johnson, R.A. Johnson, K.J. Peyton, W. Durante // Am. J. Physiol. Regul Integr. Comp. Physiol. 2005. - Vol. 288, № 4. - P. R1057-1062.

78. Berry C. E. Xanthine oxidoreductase and cardiovascular disease: molecular mechanisms and pathophysiological implications / Berry C. E., Hare J. M. // 1. Physiol. (Zond.). 2004. -Vol. 555, N 3. - P. 589-606.

79. Boger, R.H. The clinical pharmacology of L-arginine / R.H. Boger, S.M. Bode-Boger // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2001. - Vol. 41. - P. 79-99.

80. Bonetti, P.O. Endothelial dysfunction. A marker of atherosclerotic risk / P.O. Bonetti, L.O. Lerman, A. Lerman // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2003. -Vol. 23.-P. 168-175.

81. Brandes, R. P. Roads to Dysfunction Argininase II Contributes to Oxidized Low-Density Lipoprotein-Induced Attenuation of Endothelial NO Production / R.P. Brandes // Circulation. Research. 2006. - Vol. 99. - P. 918-920.

82. Cardillo C. Xanthine oxidase inhibition with oxypurinol improves endothelial vasodilator function in hypercholesterolemic but not in hypertensive patients / Cardillo C., Kilcoyne C. M., Cannon R. 0. et al. // Hypertension. 1997. - Vol. 30. - P. 57-63.

83. Chronic inhibition of nitric oxide synthesis in rats increases aortic superoxide anion production via the action of angiotensin II / S. Kitamoto, K. Egashira, C. Kataoka et al. // J. Hypertens. 2000. - Vol. 18. - P. 1795 - 1800.

84. Cooke, J.P. Nitric oxide and angiogenesis / J.P. Cooke, D.W. Losordo // Circulation. 2002. - Vol. 105. - P. 2133-2138.

85. Cooke, J.P. Flow, NO and atherogenesis / J.P. Cooke // PNAS. 2003. - Vol. 100, №3.-P. 768—770.

86. Correction of endothelial dysfunction in chronic heart failure: additional effects of exercise training and oral L-arginine supplementation / R. Hambrecht, L. Hilbrich, S. Erbs et al. // J. Am. Coll. Cardiol. 2000. - Vol. 35. - P. 706-713.

87. Diez, J. Angiotensin II and the hypertensive heart: a role for the AT2 receptor? / J. Diez // J. Hypertens. 2004. - Vol. 22, № 5. - P. 879-82 AT2.

88. Dzau, V.J. Tissue Angiotensin and Pathobiology of Vascular Disease

89. Hypertension. -2001. V. 37. - P. 1047.

90. Effects of candesartan cilexetil and enalapril on structural alterations and endothelial function in small resistance arteries of spontaneously hypertensive rats.

91. D. Rizzoni, E. Ported, G. Bettoni et al. // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1998. - Vol. 32.-P. 798-806.

92. Enalapril and quinapril improve endothelial vasodilator function and aorticeNOS gene expression in L-NAME-treated rats / V. De Gennaro Colonna, G.

93. Rossoni, A. Rigamonti et al. // Eur. J. Pharmacol. 2002. - Vol. 450 № 1 - P 61 -66.

94. Endothelial dysfunction, oxidative stress, and risk of cardiovascular events in patients with coronary arteiy disease / T. Heitzer, T. Schlinzig, K. Krohn et al. // Circulation. 2001. - Vol. 104. - P. 2673-2678.

95. Estrogen plus progestin and the risk of coronary heart disease / J.E. Manson, J. Hsia, K.C. Johnson et al. // Engl. J. Med. 2003. - Vol. 349. - P. 523-534.

96. Feletou, M. Endothelial dysfunction: a multifaceted disorder (The Wiggers Award Lecture) / M. Feletou, P.M. Vanhoutte // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 2006. - Vol. 291, № 3. - P. H985-1002. Epub 2006 Apr 21.

97. Ferdinandy P. Nitric oxide, superoxide, and peroxynitrite in myocardial ischaemia-reperfusion injury and preconditioning / Ferdinandy P., Schulz R. // Br. J. Pharmacol. —2003. — Vol. 138. P. 532-542.

98. Forstermann, U.T. Munzel Endothelial Nitric Oxide Synthase in Vascular Disease: From Marvel to Menace / U.T. Forstermann // Circulation. 2006. - Vol. 113(13).-P. 1708- 1714.

99. Glucocorticoidls regulate inducible nitric oxide synthase by inhibiting tetrahydrobiopterin synthesis and L-arginine transport / W. W. Simmons, D. Ungureanu-Longrois, G. K. Smith et al. // J. Biol. Chem. 1996. - Vol.271. - P. 23928-23937.

100. Gokce, N. L-Arginine and Hypertension / N. Gokce // J. Nutr. 2004. - Vol. 134, №10.-P. 2807S - 281 IS.

101. Gornik, H.L. Arginine and endothelial and vascular health / H.L. Gornik, M.A. Creager // J. Nutr. 2004. - Vol.134, №10. - P. 2880-2887.

102. Griendling K. K. NAD(P)H oxidase: role in cardiovascular biology and disease / Griendling K. K., Sorescu D., Ushio-Fukai M. // Circ. Res. — 2000. -Vol. 86.-P. 494-501.

103. Griffits, P.W. Nitric oxide synthases: properties and catalytic mechanism / P.W. Griffits , D. J. Stuehr // Ann. Rev. Physiol. 1995. - Vol. 57. - P. 707—736.

104. Guiik T. J. Vascular superoxide production by NAD(P)H oxidase: association with endothelial dysfunction and clinical risk factors / Guiik T. J., West N. E., Black E. et al. // Circ. Res. 2000.

105. Identification of protein disulfide isomerase as an endothelial hypoxic stress protein / K.K. Graven, C. Molvar, J.S. Roncarati et al. // Am. J. Physiol. Lung^ Cell. Mol. Phvsiol. 2002. - Vol. 282, № 5. - P. L996-L.1003.

106. Impaired nitric oxide synthase pathway in diabetes mellitus: role of asymmetric dimcthylargin-ine dimethylaminohydrolase / K.Y. Lin, A. Ito, T. Asagami et al. // Circulation. 2002. - Vol. 106. - P. 987-992.

107. Ishikawa M. Cerebral microvascular responses to hypercholesterolemia: roles of NADPH oxidase and P-selectin / Ishikawa M., Stokes K. Y., Zhang J. H. et al. // Circ. Res — 2004. Vol. 94, N 2. - P. 239-244.

108. Kojda G. Interactions between NO and reactive oxygen species: pathophysiological importance in atherosclerosis, hypertension, diabetes and heart failure / Kojda G., Harrison D. // Cardiovasc. Res. — 1999. — Vol. 43. P. 562571.

109. Landmesser U. Oxidation of tetrahydrobiopterin leads to uncoupling of endothelial cell nitric oxide synthase in hypertension / Landmesser U., Dicalov S., Price S. R. ct al. // J. Clin. Invest 2003. - Vol. Ill, N 8. - P. 1201-1209.

110. Landmesser, U. Endothelial function: a critical determinant in atherosclerosis? / U. Landmesser, Hornig B, Drexler H. // Circulation. 2004. - Vol. 109, № 1. -P. 27-33.

111. L-arginine decreases inflammation and modulates the nuclear factor-kappaB/matrix metalloproteinase cascade in mdx muscle fibers / K. Hnia, J. Gayraud, G. Hugon et al. // Am. J. Pathol. 2008. - Vol. 172, № 6. - P. 15091519.

112. Lusher, T.F. Vascular protection: current possibilities and future perspectives / T.F. Lusher // Clin. Pract. 2001. - Vol. 17. - P. 3 - 6.

113. Marin, J. Role of vascular nitric oxide in physiological and pathological conditions / J. Marin, M.A. Rodriger-Martinex // Pharmacol. Ther. — 1997. -Vol. 76.-P. 111-134.

114. Maxwell, A.J. Cardiovascular effects of L-arginine / AJ. Maxwell, J.P. Cooke // Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 1998. - Vol. 7. - P. 63—70.

115. Mollinau H. Effects of angiotensin II infusion on the expression and function of NAD(P)H oxidase and components of nitric oxide/cGMP signaling / Mollinau H., Wendt M., Szocs K. et al. // Circ. Res. 2002. -Vol. 90, N 4. - P. 58-65.

116. Moncada S. Molecular mechanisms and therapeutic strategies related to nitric oxide /Moncada S., Higgs E. A. // FASEB J. 1995. - Vol. 9. -P. 1319-1330.

117. Nakazono K. Does superoxide underlie the pathogenesis of hypertension? / Nakazono K., Walanabe N., Matsuno K. et al. // Proc. Natl Acad. Sci. USA. -1991. Vol. 88. - P. 10045-10048.

118. Palmer, R.M.J. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor / R.M.J. Palmer, A.G. Ferringe, S. Moncada // Nature. 1987. - Vol. 327. - P. 524—526.

119. Pathogenic role of oxidative stress in vascular angiotensinconverting enzyme activation in long-term blockade of nitric oxide synthesis in rats / M. Usui, K. Egashira, S. Kitamoto et al. // Hypertension. 1999. - Vol. 34. - P. 546 - 551.

120. Preconditioning ischemia attenuates molecular indices of platelet activation-aggregation / M.D. Linden, P. Whittaker, A.L. Frelinger 3rd et al. // J. Thromb. Haemost. 2006. - Vol. 4, № 12. - P. 2670-2670.

121. Reduced uterine perfusion pressure during pregnancy in the rat is associated with increases in arterial pressure and changes in renal nitric oxide / B.T. Alexander, S.E. Kassab, M.T. Miller et al. // Hypertension. 2001. - Vol.37. -P.1191-1195.

122. Role of endothelial shear stress in the natural history of coronary atherosclerosis and vascular remodeling: molecular, cellular, and vascular behavior

123. Y.S. Chatzizisis, A.U. Coskun, M. Jonas et al. // J. Am. Coll. Cardiol. 2007. -Vol. 49, № 25. - P. 2379-2393.

124. Role of endothelin in the stimulation of NAD(P)H oxydase and superoxyde production in vascular smooth muscle cells following a treatment with angiotensin II / M. Laplante., R. Wu, P. Moreau et al. // J. Hypertension. 2003. - Vol. 2, № 4. -P. 200.

125. Rubanyi, G.M. Effect of cilazapril and indomethacin on endothelial dysfunction in the aortas of spontaneously hypertensive rats / G.M. Rubanyi, K. Kauser, T. Gruser // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1993. - Vol. 22. - P. 23-30.

126. Rueckschloss, U. NADPH oxidase in endothelial cells: impact on atherosclerosis / U. Rueckschloss, N. Duerrschmidt, H. Morawietz // Antioxid. Redox. Signal. -2003. Vol. 5, № 2. -P. 171-180.

127. S-adenosylmethionme and methylation / P.K. Chang, P.K. Gordon, J. Tai et al. // FASEB J. 1996. - Vol. 10. - P. 471-480.

128. Schini, V.B. Indapamide potentiates the endothelium-depend relaxation in isolated canine femoral arteries / V.B. Schini, J. Dewey, P.M. Vanhoutte // Am. J. Card. 1990. - Vol. 65, № 17. - P. 6H-10H.

129. Spillmann, F. Cardioprotective mechanisms of the kallikrein-kinin system in diabetic cardiopathy / F. Spillmann, S. Van Linthout, H.P. Schultheisshope // Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 2006. - Vol. 15, № 1. - P. 22-29.

130. Stuehr D. J. Mammalian nitric oxide synthases / Stuehr D. J. // Biocliim. Biophys. Acta. 1999. - Vol. 1411. - P. 217-230.

131. Taniyama Y. Reactive oxygen species in the vasculature: molecular and cellular mechanisms / Taniyama Y., Griendling K. K. // Hypertension. — 2003. — Vol. 42, N 6. P. 1075—1081.

132. Tentolouris, C. L-arginine "paradox" in coronary atherosclerosis / C. Tentolouris, D. Tousoulis, C. Stefanadis // Circulation. 2004. - Vol. 110, № 7. -P. 71.1. Q ^

133. Touyz, R. M. Reactive Oxygen Species, Vascular Oxidative Stress, and Redox Signaling in Hypertension: What Is the Clinical Significance? / R.M. Touyz // Hypertension. 2004. - Vol. 44, № 3. - P. 248 - 252.

134. Vergnani L. Effect of native and oxidized low-density lipoprotein on endothelial nitric oxide and superoxide production : key role of L-arginine availability / Vergnani L., Hatric S., Ricci F. et al. // Circulation. 2000. -Vol. 101. -P. 1261-1266.

135. Verhaar M. C. Free radical production by dysfunctional eNOS / Verhaar M. C., Westerweet P. E., Zannevelt A. J., Rabelink T. J. // Heart. 2004. - Vol. 90, N 5. - p. 494-495.

136. Vermeersch, P. L-arginine administration reduces neointima formation after stent injury in rats by a nitric oxide-mediated mechanism / P. Vermeersch, Z. Nong, E. Stabile // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2001. - Vol. 21. - P. 16041615.

137. Xia, Y. Inducible nitric-oxide synthase generates superoxide from the reductase domain. / Y. Xia, L. J. Roman, B. S. Masters // J. Biol. Chem. 1998. -Vol. 273.-P. 22635-22639.

138. Xiao S, Circulating endothelial nitric oxide synthase inhibitory factor in some patients with chronic renal disease / S. Xiao, L. Wagner, R.J. Schmidt // Kidney Int.-2001.-Vol. 59.-P. 1466-1472.

139. Yermeersch, P. L-arginine administration reduces neointima formation after stent injury in rats by nitric oxide-mediated mechanism / P. Yermeersch, Z. Nong, E. Stabile // Arterioscler Thromb Vase Biol. 2001. - Vol. 21. - P. 1604-1615.

140. Zalba G. Vascular NADH/NADPH oxidase is involved in enhanced superoxide production in spontaneously hypertensive rats / Zalba G., Beaumont F. J., San Jose G. et al. // Hypertension. 2000. - Vol. 35. - P. 1055-1061.