Экспериментальное изучение эффективности клеточной трансплантации при посттравматической патологии сетчатки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.08, кандидат медицинских наук Купрашвили, Иосиф Тамазович

• Купрашвили, Иосиф Тамазович
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Купрашвили, Иосиф Тамазович

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Современные методы лечения заболевания сетчатки.

1.2. Понятие стволовая клетка

1.3. Классификация СК.

1.4. Свойства СК.

1.5. Возможности и перспективы применения клеточных технологий в офтальмологии.

Глава 2. Материал и методы.

2.1. Трансплантационный материал.

2.2. Характер экспериментального материала.

2.3. Характеристика методов исследования.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Глава 3. Изучение безопасности трансплантации МСПК и НСПК при различных способах введения в глаза экспериментальных животных

Глава 4. Транснлантация МСПК на модели лазерного повреждения сетчатки.

4.1. Интравитреальная трансплантация МСПК на модели лазерного повреждения сетчатки.

4.2. Трансплантация МСПК в супрахориоидальное пространство на модели лазерного повреждения сетчатки.

Глава 5. Изучение воздействия нейрональных стволовых клеток на моделях лазеркоагуляции и ишемии сетчатки.

5.Г. Изучение воздействия интравитреальной-трансплантации НСПК после лазеркоагуляции.

5.2. Трансплантация НСПК в супрахориоидальное пространство на модели* лазерного повреждения сетчатки.

5.3. Супрахориоидальная трансплантация НСПК на модели острой ишемии сетчатки.

Глава 6. Результаты электроретинографических исследований.

6.1. Динамика электрогенеза сетчатки при интравитреальном введении МСПК на фоне лазерной коагуляции сетчатки.

6.2. Динамика электрогенеза сетчатки при супрахориоидальном введении

МСПК на фоне лазерной коагуляции сетчатки.

6.3. Динамика электрогенеза сетчатки при интравитреальном введении НСПК

6.4. Трансплантация НСПК в супрахориоидальное пространство на двух моделях повреждения сетчатки.

6.4.1. Исследования эффектов НСПК на интактную сетчатку.

6.4.2. Исследование динамики ретиналъной функции при моделировании очаговой ретиналъной патологии и ишемии сетчатки без введения НСПК

6.4.3. Влияние НСПК на модели очаговых дистрофических изменений в сетчатке.

6.4.3. Влияние НСПК на модели ретиналъной ишемии (II серия, 3-я подгруппа)

Глава 7. Результаты гистологических исследований трансплантации

МСПК и НСПК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспериментальное изучение эффективности клеточной трансплантации при посттравматической патологии сетчатки»

Патология сетчатки занимает одно из первых мест в мире как причина слабовидения, и слепоты. Это относится к таким заболеваниям как посттравматические и воспалительные изменения сетчатки, поражение глазного дна при гипертонической болезни, тромбоз вен сетчатки, центральная инволюционная хориоретинальная дистрофия, диабетическая ретинопатия, наследственные заболевания сетчатки.

Несмотря на постоянные поиски и усовершенствование медикаментозной терапии, появления лазерного и< современных хирургических методов лечения, патология сетчатки остается; главной причиной» необратимого снижения зрения; в основе которой-лежит снижение обменных и восстановительных процессов, нарушение микроциркуляции, нарушение структурной организации сетчатки.

Ввиду вышесказанного, поиск новых патогенетически обоснованных методов лечения заболеваний сетчатки является ¡актуальным.

Будущее медицины сегодня напрямую связывают с развитием клеточных технологий, позволяющий не меняя поврежденный орган, "обновлять" его клеточный^ состав. Такое "обновление" структурно-функциональных элементов органа решает те же задачи, что и органная трансплантация: Вместе с тем, эта технология намного расширяет возможности трансплантационного лечения, делая его доступным для широкого круга разных категорий пациентов.

Основой для развития клеточных технологии являются стволовые клетки, способные в зависимости от микроокружения превращаться в клетки разных органов и тканей, одна такая клетка может дать множество функционально активных потомков. В настоящее время в мире активно разрабатываются подходы к наращиванию стволовых клеток, а также интенсивно исследуются возможности их генетической модификации. Список болезней, в борьбе с которыми либо трансплантация стволовых клеток уже успешно проводится, либо применение клеточных технологий планируется в ближайшем будущем, быстро растет. В этот список, , по-видимому, войдут все болезни;; медикаментозное лечение которых малоэффективно. Целью трансплантации- стволовых клеток: (СЮ) является: замещение нефункционирующей или дефектной ткани или клеточной популяции;, стимуляция собственных стволовых клеток; организма и усиление репаративной( регенерации; адресная- доставка генетических конструкций, биомолекул: нелекарственных-: средств. В экспериментах показано, что небольшое количеств высокоспециализированных клеток может компенсировать функцию поражённого органа. Будучи трансплантированными, стволовые: клетки5-способны, приживляться? и дифференцироваться' в зависимости, от .микроокружения. Эти; клетки способны, значительно повысить, адаптивные: возможности; организма за*; счет усиления? процессов физиологической т репаративной- клеточной регенерации [28]. При соблюдении определенных,' условий*^ аллогенная трансплантация стволовых:клеток; не вызывает иммунных реакций;, направленных на отторжение донорских клеток. Это подразумевает возможность применения: трансплантационных клеточных- технологий; для? лечения стволовыми; клетками . без; использования иммуносупрессорной; терапии. . "

Представляется* важной с медицинской точки зрения способность, низкодифференцированных клеток тормозить, а в: некоторых случаях: реверсировать развитие грубоволокнистой? соединительной ткани. Такое' торможение создает важные дополнительные предпосылки; для« эффективного; восполнения клеточных потерь организма новыми функционально-полноценными; клетками [64]. Результатом трансплантации стволовых клеток полученныхиз;донорскойшезрелой кроветворноштканюявляется1, значительное повышение: регенераторных и адаптивных возможностей? организма; Вызываемое этими? клетками; "обновление" организма, по-видимому, может; препятствовать, развитию процессов,, ведущих к. старению [28]. Отсюда; перспективность и целесообразность использования клеточных технологий в лечении целого ряда заболеваний, обусловленных старением организма. Трансплантация низкодифференцированных стволовых клеток незрелой кроветворной ткани во взрослый, организм может способствовать восстановлению кровотока в ишемизированных органах и тканях. Этот эффект объясняется наличием в этой ткани незрелых предшественников эндотелиальных клеток, способных генерировать рост новых кроветворных сосудов [90]. Предметом исследования и. клинического применения'является противоопухолевая активность низкодифференцированных кроветворных клеток. Важным компонентом этой активности является способность этих клеток прямо супрессировать опухолевый рост [78,104].

Среди множества, методов и*, направлений, наиболее перспективной для внедрения в» клинику, на наш взгляд, является трансплантация аутологичных (собственных) стволовых/прогениторных клеток пациента, выделенных из' разных тканей и.органов.

Одним из самых перспективных видов аутологичного материала для' клеточной терапии» и тканевой) инженерии считаются мезенхимальные стволовые клетки костного мозга человека (МСПК) и нейрональные стволовые клетки (НСПК), выделенные из обонятельной области слизистой оболочки носа взрослого человека. Опубликованы работы свидетельствующие, что при определенной подготовке МСПК могут быть успешно трансплантированы RCS. крысам: встраиваясь в сетчатку реципиента, клетки дифференцируются в зрелые нейроны; выделяя характерные маркеры:, виментин, калбиндин, родопсин, GFAP.

Мультипотентные нейральные стволовые клетки (НСПК) взрослого организма за последние годы были, выделены из разных тканей и органов, однако степень их пластичности в настоящее время активно дискутируется.

В <2001 году Roistein F.J. и соавт. впервые выделили нейральные стволовые клетки из обонятельной области слизистой оболочки носа взрослого человека, а позже Zhang X. получил аналогичные нейросферы в своей лаборатории.

Отдельную субпопуляцию в обонятельной части слизистой оболочки носа человека образуют так называемые обкладочные нейроэпителиальные клетки (olfactory ensHeathing cells - OECs), обладающие свойствами: нейральных стволовых. Имеются так же указания, что клетки базального слоя «обонятельного эпителия» мыши могут дифференцироваться- и в экстра1 -нейрональном направлении [101,118].

Учитывая вышесказанное, мы остановили свой выбор на МСПК костного мозга- и НСПК обонятельной- области носа, ввиду их пластичности? и малоинвазивного способа их получения из взрослого организма.

Цель работы Изучить, влияние трансплантации мультииотентных мезенхимальных ствол овых/прогениторных. клеток костного мозга (МСПК) и нейрональных ствол овых/прогениторных' клеток (НСПК), выделенных из обонятельной области^слизистой оболочки носа взрослого'человека;,, на; процессы репарации, регенерации и сохранность функциональной; активности сетчатки? после: ее повреждения в эксперименте.

Задачи:

1. Определить способы и дозы введения клеточных культур с последующей оценкой безопасности трансплантации; СК в глаза кроликов.

2. Изучить воздействие МСПК на модели лазерного повреждения сетчатки у кроликов с помощью клинических, электрофизиологических и гистологических методов исследования.

3. Определить: эффективность трансплантации НСПК на моделях лазерного повреждения сетчатки и ретинальной ишемии у кроликов с использованием/, клинических, электрофизиологических и гистологических: методов исследования.

4: Провести анализ полученных результатов, с оценкой перспективности внедрения в клиническую офтальмологию.

Научная новизна: : .

1. Определены безопасные и наиболее эффективные дозы и способы введения нейрональных СК, выделенных из обонятельной области слизистой носаг и культивированных мезенхимальных СК, выделенных, из костного мозга.

2. На фоне лазеркоагуляции сетчатки супрахориоидальная; трансплантация? МСНК и НСПК ведет к статистически достоверному уменьшению размера очагов лазерного поражения сетчатки, а также суммарного (среднего) размера зон первичного лазерного поражения." Меньшая' площадь повреждения в опытных глазах при одинаковых условиях лазеркоагуляции* доказывает, что супрахориоидальная трансплантация: СК стимулируетпрепаративные процессы в сетчатке: и защищает ее от развития вторичных дистрофических изменений.

3. При моделировании , очагового повреждения4 сетчатки лазерной коагуляцией характерна большая выраженность угнетения; функции фоторецепторов, чем пострецёпторных нейронов. Динамика ЭРГ на стимулы различной интенсивности свидетельствует,. что- этот факт может быть связан с нарушением кинетики регенерации зрительных' пигментов, которое выражено значительно в меньшей степени при супрахориоидальном введении МСПК.

4. Сравнительный анализ результатов исследований показал схожие закономерности в развитии влияния на электрогенез сетчатки супрахориоидальной трансплантации СК различного происхождения -мезенхимальных и обкладочных,: которые состоят в защите функции и структуры нейронов сетчатки — нейропротекторном эффекте - в ранний период развития ретинальной патологии и в ускорении процесса восстановления ретинальной функции в отдаленном периоде наблюдения.

5. На ранних сроках после моделирования лазерного повреждения* нейропротекторный эффект при трансплантации МСПК наиболее выражен для функции фоторецепторов,, а при введении НСПК — не только для' функциональной активности фоторецепторов, но и клеток Мюллера.

Практическая значимость:

1. Показано, что для- повышения репаративной и функциональной! активности сетчатки при ее патологии различного генеза целесообразно применение культивированных нейрональных СК, выделенных из обонятельной области слизистой^ носа и культивированных мезенхимальных СК, выделенных из костного мозга.

2. Установлено, что оптимальным методом трансплантации СК является их введение в супрахориоидальное пространство в количестве 500 тыс. в 0,02 мл физиологического раствора.

3. Использование МСПК и,НСПК может служить основой для разработки новых перспективных стратегий в офтальмотравматологии, и целесообразно * дальнейшее изучение их возможностей в качестве средств нейропротекции или» альтернативных терапевтических приемов при лечении последствий заболеваний сетчатки.

Основные положения, выносимые на защиту: 1. Оптимальным методом трансплантации культивированных нейрональных СК, выделенных из обонятельной области слизистой носа (НСПК) и культивированных мезенхимальных СК, выделенных из костного мозга (МСПК), является их введение в супрахориоидальное пространство в количестве 500 тыс. в 0,02 мл физиологического раствора.

2. Супрахориоидальная трансплантация СК стимулирует репаративные процессы в сетчатке и защищает ее от развития вторичных дистрофических изменений при лазерном повреждении, что выражается меньшей площадью повреждения и- меньшей степенью нарушения электрогенеза сетчатки по сравнению с контрольной группой.

3. В результате комплексных электроретинографических и гистологических исследований установлено, что супрахориоидальное введение НСПК и МСПК в указанных дозах оказывает нейропротекторное воздействие, наиболее выраженное для функции фоторецепторов и клеток Мюллера в ранние сроки после моделирования лазерного повреждения: сетчатки кроликов' или ретинальной: ишемии. На отдаленных сроках: трансплантация: стволовых/прогениторных, клеток способствует ускорению, процесса восстановления- функции сетчатки. Большая степень возрастания^ амплитуды ЭРГ и РЭРГ коррелирует с данными гистологических исследований •

Апробация работы:

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях: «Федоровские чтения» (Москва, 2007 и 2008), VII симпозиуме международного общества; по глазной травме, (Рим, Италия; 2006), II Всероссийской научной конференции . молодых ученых (Москва,, 2007);. объединенном конгрессе SOE/AÄO (Вена, Австрия; 2007); в- Британском-посольстве на. конференции: «Стволовые: клетки: законодательство,! исследования, и инновации. Международные перспективы' сотрудничества»;. 2007^ на?Ученом С0вете:МНИИ!ЕБ; май 2007, VIII симпозиз^е международного^ обществапо глазной травме (Вёрсбург,.Германия; 2008)i.

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 12 работ, из них 2 в* центральной:? печати и 4 в зарубежной литературе. Получено положительное решение о ¡ выдаче патента на изобретение от 01.04.09. по заявке №2008121546/14 (приоритет от 29.05.08). Изобретение отобрано в число- «100' лучших, изобретении России».

Структура и объем диссертации.

Заключение диссертации по теме «Глазные болезни», Купрашвили, Иосиф Тамазович

109 ВЫВОДЫ:

1. Для повышения репаративной и функциональной активности сетчатки при ее патологии различного генеза целесообразно применение культивированных мезенхимальных СК, выделенных из костного мозга (МСПК) и нейрональных СК (НСПК), выделенных из обонятельной области слизистой носа. Оптимальным методом трансплантации СК является их введение в супрахориоидальное пространство в количестве 500 тыс. в 0,02 мл физиологического раствора.

2. Трансплантация МСПК и НСПК в соответствующих дозах субконъюнктивально, ретробульбарно и супрахориоидально не вызывает каких либо воспалительных и аллергических реакций. Трансплантированные клетки сохроняют жизнеспособность до 30 дней после инъекции. При интравитреальном введении происходит миграция МСПК в ткань сетчатки.

3. По данным гистологических исследований трансплантация МСПК и НСПК супрахориоидально ведет к статистически достоверному уменьшению размеров очагов лазерного поражения сетчатки и суммарного размера зон первичного лазерного поражения, то есть, стимулирует репаративные процессы и защищает сетчатку от развития вторичных дистрофических изменений.

4. Трансплантация- СК интравитреально на модели лазерного повреждения сетчатки оказывает защитный эффект на функцию ретинальных нейронов: умеренно выраженный для МСПК и статистически значимый для НСПК. Однако наличие витреоретинальной пролиферации и реактивного глиоза в единичных случаях можно рассматривать как ,побочный эффект трансплантации, что ограничивает применение интравитреального способа введения СК и требует дальнейшего его изучения.

5. По данным электроретинографии, при'супрахориоидальном введении. МСПК. побочные эффекты отсутствуют. Более того, на ранних сроках после лазеркоагуляции МСПК защищают функцию нейронов сетчатки, а в отдаленном периоде способствуют лучшему ее восстановлению.

6. Установлено положительное влияние супрахориоидальной трансплантации НСПК на сохранность функции и структуры сетчатки при моделировании лазерного повреждения и ретинальной ишемии. НСПК обладают нейропротекторным эффектом с наиболее выраженным положительным влиянием на функцию фоторецепторов и клеток Мюллера. В ранние сроки после трансплантации НСПК способствуют лучшей сохранности функции сетчатки, а в отдаленном периоде - более быстрому и полному восстановлению ее электрогенеза.

7. Сравнительный анализ эффективности МСПК и НСПК при супрахориоидальном введении показал аналогичный характер их воздействия, который состоит в защите нейронов сетчатки и ускорении восстановления их функции, при более выраженном действии НСПК. Результаты свидетельствуют о перспективности дальнейших исследований возможностей их клинического применения в качестве средств нейропротекции при лечении тяжелой патологии сетчатки.

Практические рекомендации:

1. Учитывая доказанное нейропротекторное действие трансплантации стволовых клеток (МСПК и НСПК) на моделях лазеркоагуляции и лазерной ишемии сетчатки, можно рекомендовать данную методику для клинической апробации при заболеваниях сетчатки различного генеза, особенно при последствиях посттравматической патологии дистрофического характера.

2. Для повышения репаративной и функциональной активности сетчатки целесообразно введение МСПК и НСПК в супрахориоидальное пространство в количестве 500 тыс. в 0,02 мл СФР. Рекомендуемые дозы и способы трансплантации являются безопасными для структуры и функции сетчатки при отсутствии аллергических и воспалительных реакций.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Купрашвили, Иосиф Тамазович, 2009 год

1. Абдулкадыров K.M., Романенко М.А., Старков H.H. Получение и клиническое применение периферических гемопоэтических стволовых клеток из пуповинной крови // Вопросы онкологии. 2000. - № 5, т. 45. -С. 513-520.

2. Александрова М.А., Сабурина H.H., Корочкин Л.И. Поведение- и дифференцировка нейрональных стволовых клеток in vivo // Изв.РАН Сер. Биологии. 2001. - № 6. - С. 656-665.

3. Богословский А.И., Семеновская E.H. Электроретинограмма- и ее клиническое значение // Вест. Офтальмол. — 1960. № 5. — С.44-54.

4. Бызов А.Л. Потенциалы в глиальных клетках // Функции нейроглии. Под ред. Ройтбака А.И. Тбилиси, Мецниереба. 1979. - С. 49-57.

5. Викторов И.В. Стволовые клетки мозга млекопитающих: биология стволовых клеток in vivo и in vitro // Известия АН. Серия биологическая. . 2001.- №6.- С. 646-655.

6. Викторов И.В., Сухих Г.Т. Медико-биологические аспекты применения стволовых клеток // Вестник РАМН. 2002. - № 4. - С. 24-30.

7. Викторов И.В., Савченко Е.А., Ухова О.В., Алексеева Н.Ю., Чехонин В.П. Мультипотентные стволовые и прогениторные клетки обонятельного эпителия // Клеточные технологии в биологии и медицине. 2006. - №4. -С. 185-193.

8. Зуева М.В., Цапенко; И:В. Методика регистрации^ ритмической: ЭРЕ и перспективы ее развития в: клинике глазных болезней; // Клиническая, физиология зрения. М.: АО "Русомед"!- 1993. С.81-98:

9. Зуева М.В. Закономерности изменений! биоэлектрическое активности сетчатки при проникающих ранениях глазного яблока // Дисс.Док. биол. наук, М: 1996.

10. Зуева М.В. Каналы передачи зрительной информации в структуре нейронной сети сетчатки человека // Известия ТРТУ. -2004: № 3: - С. 222226.

11. Зуева М.В., Цапенко И.В. Структурно-функциональная организация клеток Мюллера: роль в развитии и патологии сетчатки // Клиническая физиология зрения. Очерки. Под/ред. проф. Шамшиновой A.M., МБН: М. 2006. - С. 144-205.

12. Кацнельсон Л.А., Аникина Е.Б., Шапиро Е.И. Применение лазерного излучения низкой? энергии с длиной волны 780 нм, при^ инволюционной' центральной хориоретинальной дистрофии сетчатки // Патология сетчатки. -М:- 1990. '

13. Козаченко А.И. Гуревич С.М., Наглер Л. Г. Влияние, аскорбата и а-токоферола на устойчивость а-каротина к окислению // Бюл. эксперим. биол. и-мед. 2000. - Т. 130. - №7. - С. 59-62.

14. Козлов С.А. Хышиктуев Б.С., Логунов H.A. Влияние комплексной терапии с эмоксипином на течение диабетической ретинопатии // Вестн: офтальмол. 2003. - Т. 2 - № 2. - С. 28-30.

15. Нероев В.В., Максимов И.Б., Алексеев В.Н. и др. Применение препарата "ретиналамин" в офтальмологии // СПб. 2002. - С. 20.

16. Нероев В.В., Зуева М.В., Цапенко И.В., Рябина М.В., Лю Хун. Функциональная диагностика ретинальной ишемии: реакция клеток Мюллера на ранних стадиях диабетической ретинопатии // Вестн. офтальмол.-2004-Т. 1. №5-С. 13-14.

17. Нероев В.В., Зуева М.В., Цапенко И.В., Рябина М.В., Хун JI. Функциональная диагностика ретинальной ишемии: 2 роль клеток Мюллера в развитии неоваскуляризации сетчатки при диабетической ретинопатии // Вест. Офтальмол. - 2005. - Т. 121. - №1. - С. 22-24.

18. Нестеров А. П.,. Егоров Е.А, Калабухова JI.B. и др. Новый путь введения лекарственных веществ при заболеваниях заднего / отрезка глаза и использование его для лечения глаукомной оптической нейропатии // Клин, офтальмол. 2000; - Т. 1. - №2. - С. 39-40.

19. Полунин Г.С., Воробьева О. К., Макашова Н.В. и др. Опыт применения препарата "гистохром" в офтальмологической практике // Рефракц. хирургия и офтальмол. 2003. -. Т. 3. - № 2. - С. 23-28.

20. Репин B.C., Сухих Г.Т. Медицинская клеточная биология М.: БЭБиМ, 1998. '

21. Сергеев B.C. Иммунологические свойства мультипотентных мезенхимных стромальных клеток // Клеточная Трансплантология и Тканевая Инженерия. 2005. - №2 - С. 39-42 .

22. Савченко Е.А., Андреева H.A., Дмитриева Т.Б. Чехонин В.П. Культивирование специализированных глиальных клеток (Olfactory Ensheathing Cells) обонятельного эпителия человека // Клеточные технологии в биологии и медицине. 2005. - №2. - С. 95-98.

23. Сосунов A.A., Челышев Ю.А., Мак-Кханн Г. и соавт. Нейрогенез в головном мозгу зрелых млекопитающих. Онтогенез. 2002. - №35. - С. 405-420.

24. Саркисов Д.С. Регенерация и ее клиническое значение. М., Медицина. -1979. С. 284.

25. Трофимова C.B. Возрастные особенности регуляторного действия пептидовпри пигментной дегенерации сетчатки: Автореф. дис. . д-ра мед. наук C.B. Трофимова. СПб. 2003. - С.40.

26. Федоров А.А., Столяренко Г.Е. Патогистологическое исследование субпигментно-эпителиальной новообразованной ткани, у больных с сенильной макулярной дистрофией // Вестн. офтальмол. 1998. - № 5. - С.51.55.

27. Цапенко И.В. Ритмическая ЭРГ: физиологические,особенности и роль в клинике глазных болезней // Дисс.канд.биол.наук, 1996.

28. Шамшинова A.M., Зуева М.В., Цапенко И.В., Яковлев» А.А. Нейрофизиологические особенности сетчатки и возможности клинической электроретинографии // Вестник офтальмологии. -1996. Т. 112. — № 2 . — С.52.55.

29. Шамшинова A.M., Волков В.В. Функциональные методы исследования в офтальмологии. М., Медицина. 1999. - 415с.

30. Шкворченко Д.О., ЩелоковА.М., Сухих Г.Т., Полтавцева Р.А>., Современные аспекты трансплантации компонентов фетальной сетчатки при возрастной макулодистрофии // Новое в офтальмол. 2000. - № 2. - С. 42-48.

31. Южаков А. М. Комплексное лечение больных сенильной центральной хориоретинальной дистрофией сетчатки с применением электромагнитного поля // Вестн. офтальмол. 2000. № 3. - С. 41-44.

32. Abrous D., Koehl М., Le Moal. М. Adult Neurogenesis: From Precursors to-Network and Physiology // hysiol. Rev. 2005. - V.85. - P. 523-569,

33. Aggarwal S., Pittenger M.F. Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses // Blood. 2005; V.105. - P. 1815-1822.

34. Alvarez-Buylla A, Garcia-Yerdugo J.M. Neurogenesis in adult subventricular zone // Neurosci. 2002. - Y. 22. - P. 629-634.

35. Aramant R.B., Seiler M.J. Progress in retinal sheet transplantation // Prog. Retin. Eye Res. 2004. - V. 23, N 5. - P. 475 - 494.

36. Barnett S. C., Riddell J. S., Olfactory ensheathing cells (OECs) and the treatment of CNS injury: advantages and possible caveats // J. Anat. 2004. -V. 204. - P. 57-67.

37. Baron W.S., Boyton R.M. Response of primate cones to sinusoidally flickering homochromatic stimuli // J. Physiol., 1975, 246, 311-331.

38. Bartholomew A., Sturgeon C., Siatskas M. et al. Mesenchymal stem cells suppress lymphocyte proliferation in vitro and prolong skin graft survival in vivo // Exp Hematol. 2002. - V.30. - P. 42-48.

39. Beites C.L., Kawauchi S., Crocker C.E., Calof A.L. Identification and molecular regulation of neural stem cells in the olfactory epithelium // Exp. Cell Res. -2005.- Y. 306. P. 3309-316.

40. Calof A., Mumm J.S., Pim P.C., Shou J. The neuronal stem cells of the olfactory epithelium // J.Neurobiol. 1998. - V. - 36. P. 190-205.

41. Carr R.E., Siegel I.M. Electrodiagnostic Testing of the Visual System // F.A. Davis Co. Philadelphia, 1990.

42. Carter L.A., MacDonald J.L., Roskams A.J. Olfactory horizontal basal cells demonstrate a conservative multipotent progenitor phenotype // J. Neurosci. 2004. V. 24. - N 25. - P. 5670-5683.

43. Chacko D.M., Das A.V, Zhao X., James J., Bhattacharya S., Ahmad I. Transplantation of ocular stem cells: the role of injury in incorporation and differentiation of grafted cells in the retina // Vision Res. 2003 V. 43. -N 8. -P.937-946.

44. Di Nicola M.:, Carlo-Stella C., Magni Ml et all Human* bone marrow stromal cells suppress T-lymphocyte proliferation induced by cellular- or nonspecific; mitogenic stimuli//Blood. 2002. - V.99.-P. 3838-3843.

45. Doucette, Olfactory ensheathing cells: Potential for glial cell transplantation into areas of CNS injury// Histol. Histolopathol. 1995.-V. 10.-P. 503-507.

46. Falsini B., larossi G., Fadda A. et al., Hie fundamental and second harmonic of the photopic flicker electroretinogram: temporal frequency-dependent abnormalities in retinitis pigmentosa // Clin. Neurophysiol. 1999. - V.35. - P. 4282-4290.

47. Fawcett, J. W. and Geller, H. M. Research News: Regeneration in the GNS: optimism mounts// Trends. Neurosci. 1998.- V21-. -P:179-l80.

48. Fcron F., Perry C., Cochrane J. et al. Autologous olfactory en sheathing cells transplantation in human spinal cord injury // Brain. 2005. - V. 128. - P. 2951-2960. ;

49. Fishman G.A.,, Sokal S. Electrophysiologic Testing in Disorders of the Retina, Optic Nerve and Visual Pathway // Amer. Acad:. Ophthalmol., Monograph Scries, 2, 1990.

50. Gage F. Mammalian neural stem cells II Science: 2000. V.28. - P. 1433-1438:

51. Graziadei P.P., Graziadei G.A. Neurogenesis and neuron regeneration in the, olfactory system of mammals. I. Morphological aspects of differentiation and structural organization of the olfactory epithelium// J. Neurocytol. 1979. - V8. -P. 1-18.

52. Henningson C.T.Jr., Stanislaus M.A., Gewirts A.M. Embryonic and adult stem cell therapy// J. Allergy Clin. Immunol. 2003. - V. IIL - P. 745-753.

53. Horwitz E.M, Prockop D.J, Fitzpatrick L.A, ct al. Transplantability and therapeutic effects of bone marrow-derived mesenchymal cells in children with osteogenesis imperfect // Nat Med. 1999. - V. 5. - P. 309-313.

54. Huard J.M.T., Yougentob S.L., Goldstein B.J. Adult olfactory epithelium contains multipotent progenitors that give rise to neurons and non-neuronal cells // J.Comp.Neurol. 1998. - P. 400. - P. 469-486.

55. James J., Das A.V., Bhattacharya S., Chacko D.M., Zhao X., Ahmad I. In vitro generation of early-born neurons from late retinal progenitors // JNeurosci. -2003V.23. N 23. - P.193-203.

56. IwemaC.L., Fang H., Kurtz D.B. et al. Odorant receptor expression patterns are restored in lesion-recovered rat olfactory epithelium // J. Neurosci. 2004*. - V. 24.-P. 356-369.

57. Karwoski C.J., Proenza L.M. A sources and sinks of light-evoked K+.o in the vertebrate retina// Can. J. Physiol. Pharmacol., 1987, 65, 1009-1017.

58. Kicic A., Shen W.Y., Wilson A.S., et a 1. Differentiation of marrow stromal cells into photoreceptors in the rat eye // J. Neurosci. 2003. - V. 23*. - N 21. - P. 7742 - 7749.

59. Kondo M., Sieving P. Primate photopic sine-wave flicker ERG: vector modelling analysis of component origins using glutamate analogs // Invest. Ophthalmol. Vis. Sc. 2001. -V. 42. P. 305-312.

60. Kondo M., Sieving P. Post-photoreceptor activity dominates primate photopic 32-Hz ERG for sine-, square-, and pulsed stimuli // Invest. Ophthalmol. Vis. Sc. 2002. - V. - 43. - P. 2500-2507.

61. Kurimoto Y., Shibuki H., Kaneko Y. et al. Transplantation of adult rat hippocampus-derived neural stem cells into retina injured by transient ischemia. // Neurodci. Lett. 2001. - V. 306. - P. 57- 60.

62. L' Esperanse F.A. Argon and Ruby laser photocoagulation of disciform macular disease // Trans. Amer. Acad. Otolar. Optalmo. 1972.- Vol. 75, N.3- P. 609 -628.

63. Lima C., Patas-Vital J:, Escada P. et al. Olfactory mucosa autografts in human spinal cord injury: a pilot clinical study. J. Spinal Cord Med. 2006. -V.29.-P. 191-203.

64. Liu Zh., Martin L .J. Olfactory bulb core is a rich source of neural progenitor and stem cells in adult rodent and^human // J.Comp. Neurol. 2003. V. 458. P.368-391.

65. Marmor M.F., Holder G.T., Seeliger M.W., Yamamoto S. Standard for clinical electroretinography (2004 update) // Doc. Ophthalmol. 2004. - V. 108. - P. 107-114.

66. Marshall C.T., Lu C., Winstead W. et al. The therapeutic potential of human olfactory-derived stem cells. Histol. Histopathol. 2006. - V 21. - P. 633-643.

67. Murohara T et al. Transplanted cord blood-derived endothelial precursor cells augment postnatal neovascularization // J. Clin. Invest. 2000. - V.-105. - P. 1527-1536.

68. Murrell W., Feron F., Wetzig A. et al. Multipotent stem cells from adult olfactory mucosa // Developmental. Dynamics. 2005. - V. 233. - P. 496-515.

69. Newman E.A., Odette L.L. Model of electroretinogram b-wave generation: test of the K-hypothesis // J. Neurophysiol. 1984. V. 51. P. 164-182.

70. Nishida A., Takahashi M., Tanihara H. et al. Incorporation and Differentiation of • Hippocampus-Derived Neural Stem Cells Transplanted in Injured Adult Rat

71. Retina // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2000. - V. 41. - P. 4268 - 4274.

72. Noort WA, Kruisselbrink AB, in't Anker PS et al. Mesenchymal stem cells promote engraftment of human umbilical cord blood-derived CD34(+) cells in NOD/SCID mice // Exp Hematol/ 2002. - V. 30. - P. 870-878.

73. Phillips B.W, Hentze H, Rust W.L, et al. Directed differentiation of human embryonic stem cells into the pancreatic endocrine lineage // Dunn NR. Stem Cells Dev. -2007.-N 16.-V.4.-P. 561-578.

74. Pittenger M.F., Mackay A.M., Beck S.C.et al. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells // Science. 1999. - V. 284. - P. 143-147.

75. Roisen F.J., Klueber K.M., Lu C.L. et al. Human adult olfactory stem cells // Brain Res.-2001.-V. 890. P. 11-22.

76. Royo P.E., Quay W.B. Retinal transplantation from fetal to maternal mammalian eye // Growth. 1959. V. 23. - P. 313-36.

77. Schwartz R.S., Curfman G., D. Can the heart repair itself?' // N. Engl. J: Med. -2002. V. 346. - P. 2-4.

78. Seledtsov V. I., Avdeev I.V., Prokopenko I.V., Seledtsova G.V., Kozlov V.A. Characteristics of anti-tumor activity of normal bone marrow* cells // Biull Eksp Biol*Med. 1995.-V. 120. - N8.- P.181-183.

79. Silverman M.S., Hughes S.E. Photoreceptor transplantation in inherited and environmentally induced retinal degeneration: anatomy, immunohistochemistry and function. // Prog. Clin. Biol. Res. 1989. - V. 314. - P. 687 - 704: '

80. Sekiya I., Larson B., Smith J. etal. Expansion of human adult stem cells from bone marrow stroma: conditions that maximize the yields of early progenitors and evaluate their quality. // Stem Cells. 2002. - V. 20. - P. 530 - 541.

81. Stockton R., Slaughter M. B-wave of the electroretinogram: A reflection of on bipolar cell activity // J. Gen. Physiol. 1989. - V. 93. - P. 101-122.

82. Takahashi M, Palmer TD, Takahashi J, Gage FH. Widespread integration and survival of adult-derived neural progenitor cells in the developing optic retina // Mol Cell Neurosci. 1998 V12. -N 6. - P. 340-348.

83. Takahashi J., Palmer T.D., Gage F.H., Retinoic acid and neurotrophins collaborate to regulate neurogenesis in adult-derived NSC cultures // J. Neurobiol. -2001 . V. -38. P. 65-81.

84. Tomita M., Adachi Y., Yamada H., et al. Bone marrow-derived stem cells can differentiate into retinal cells in injured rat retina // Stem Cells. 2002. - V. 20. - P. 279-283.

85. Tomita M., Yamada I I., Adachi Y., Gui Y., et al .Choroidal neovascularization is provided by bone marrow cells-// Stem Cells. 2004.-V22, №1 . P. 21-26.

86. Verfaillie C. Medical Promise of Adult Stem Cell Research1 (Present and Projected) // The President's Council on Bioethics 3dMeeting; 2002;

87. Wen R., Oakley B. Muller cell involvement in. electroretinogram generation and pIT regulation in the vertebrate retina // Soc. Neurosci. Abstr. 1987. - V. 13: -P. 1049. *

88. Wobus A.W., Bohelsr K.R. Embryonic stem cells: prospects for development biology and^cell therapy //Physiol;Rev. -2005 V 85.-P. 635-678.

89. Xiao M., Kluebera K.M., Lua C. et al. Human adult olfactory neural progenitors rescue axotomized rodent rubrospinal neurons and promote functional recovery //Exp. Neurol: 2005. - V. - 194.-P. 12- 30:

90. Young H:E., Steele T., Bray R.A. et al, Human reserve pluripotent mesenchymal, stem cells are present in the connective tissue of sceletal muscle and dermis //The Anat. Res. 2001. -V. 264. - P. 51 62.

91. Zueva M., Tsapenko I., Tankovsky V., Ivanov A^, Slivetsova^N;, Mizerova 01 The experimental model of retinal ischemia in rabbits II Doc. Ophthalmol. -2007. V. 115.-P. 54.

92. Zueva M., Neroev V., Tsapenko I., Ryabina M., AzimZadeh A. The dynamics of ERG and OCT data after intravitreal triamcinolone acetonide injection in diffuse diabetic macular edema // Doc. Ophthalmol. 2007.V. 98. - P. 88.