Влияние фактора пигментного эпителия (PEDF) на состояние сетчатки, процессы неоваскуляризации в эксперименте тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат медицинских наук Тищенко, Ольга Евгеньевна

• Тищенко, Ольга Евгеньевна
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Тищенко, Ольга Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современные методы лечения патологической неоваскуляризации.

1.2. Стимуляторы и ингибиторы ангиогенеза.

1.2.1. Эндотелиальный сосудистый фактор роста - VEGF.

1.2.2. Препараты, блокирующие VEGF.

1.2.3. Фактор пигментного эпителия - PEDF.

1.3. Экспериментальные модели в офтальмологии: органотипические культуры сетчатки и модель ретинальной неоваскуляризации у животных.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Экспериментальные исследования на органотипических культурах сетчатки (первый раздел).

2.1.1. Характеристика экспериментального материала.

2.1.2. Методы исследования органотипических культур сетчатки.

2.2. Экспериментальные исследования на животных.

2.2.1. Характеристика экспериментального материала.

2.2.2. Методы исследования.

2.2.3. Компьютерный анализ цифровых изображений сосудов сетчатки.

ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ PEDF НА СОСТОЯНИЕ СЕТЧАТКИ И ПРОЦЕССЫ НЕОВАСКУЛЯРИЗАЦИИ.

3.1. Влияние PEDF на органотипические культуры сетчатки.

3.2. Влияние PEDF на состояние сетчатки экспериментальных животных.

3.2.1. Оценка экспериментальной модели ретинальной неоваскуляризации.

3.2.2. Влияние PEDF на состояние сетчатки животных с экспериментальной моделью ретинальной неоваскуляризации.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние фактора пигментного эпителия (PEDF) на состояние сетчатки, процессы неоваскуляризации в эксперименте»

Актуальность проблемы. В настоящее время одной из важнейших медико-социальных проблем в отечественной и зарубежной офтальмологии является патология сетчатки, связанная с патологической неоваскуляризацией, которая приводит к значительному снижению зрения, слепоте и инвалидности. Функциональная реабилитация сетчатки при данной патологии в настоящее время остается актуальной задачей.

Несмотря на совершенствование лазерных и хирургических методов коррекции этих заболеваний, лечение не всегда является эффективным.

Для определения новых стратегических направлений в лечении офтальмологических заболеваний, связанных с развитием неоваскуляризции, необходимо иметь четкое представление о механизмах развития патологического ангиогенеза. Регуляция процессов формирования новообразованных сосудов, с точки зрения современных представлений, осуществляется благодаря наличию системы, связанных между собой, стимулирующих и ингибирующих факторов. Нарушение баланса в этой системе - между ангиогенными и антиангиогенными факторами приводит к развитию патологического ангиогенеза (Merimee Т.J., 1990; McAvoy J.W. et al., 1990; Klagsbrun M. et al., 1991; D'Amore P.A., 1994; Mocanu C., 2003; Peter A., 2006; Simo R. et al., 2006).

Ключевым ангиогенным фактором в норме и патологии, благодаря его биологическим свойствам, принято считать эндотелиальный сосудистый фактор роста (Vascular Endothelial Growth Factor-VEGF) (Ferrara N. et al., 1989; Aiello L.P. et al., 1994; Aiello L.P. et al., 1995; Stone J. et al., 1995; Ferrara N., 2001; Ferrara N., 2004). Большое количество экспериментальных работ подтверждают тесную связь VEGF с развитием неоваскуляризации сетчатки (Aiello L. P. et al., 1995; Alon Т. et al., 1995; Shima D.T. et al., 1996).

Учитывая, что VEGF играет роль одного из ведущих факторов в развитии патологической неоваскуляризации, в настоящее время используются несколько лекарственных препаратов, блокирующих его действие. К ним относятся: пегаптаниб (Макуджен) - селективный ингибитор VEGF-165, ранибизумаб (Луцентис) и бевацизумаб (Авастин) - блокаторы всех изоформ VEGF.

Многочисленные научно-клинические исследования, посвященные применению этих препаратов у пациентов с пролиферативной диабетической ретинопатией и экссудативной формой возрастной макулярной дегенерации, выявили их высокую эффективность: происходил быстрый регресс новообразованных сосудов сетчатки, и отмечалось повышение зрительных функций (Gragoudas Е. et al., 2004; Avery R.L., 2006; Davidorf F.H. et al., 2006; Chen C.Y. et al., 2007; Kourlas H. et al., 2007).

Однако, несмотря на высокую эффективность, препараты, блокирующие сосудистый эндотелиальный фактор роста, особенно все его изоформы, продолжают вызывать некоторые опасения, связанные с их механизмом действия.

Из вышеизложенного следует актуальность изучения и разработки новых подходов в подавлении нежелательных патологических эффектов VEGF, что может стать значимым прорывом в лечении данных заболеваний.

В последнее время большой интерес вызывает антиангиогенный фактор с нейротрофическим действием - фактор пигментного эпителия (Pigment Epithelium-Derived Factor-PEDF). Он обладает мощной антиангиогенной активностью, ингибирует миграцию и пролиферацию эндотелиальных клеток, которые играют основную роль в развитии патологической васкуляризации.

При применении PEDF на изолированных культурах эндотелиальных клеток было показано его ингибирующее действие на вызванную миграцию и пролиферацию данных клеток (Stellmach V. et al., 2001; Duh E.J. et al., 2002).

В ходе экспериментальных работ при применении PEDF на моделях ретинальной и хориоидальной неоваскуляризации было выявлено подавление роста патологических сосудов (Duh E.J. et al., 2002; Apte R. et al., 2004).

На основании проведения клинических исследований было показано снижение уровней PEDF в водянистой влаге у пациентов с пролиферативной диабетической ретинопатией (Boehm В.О. et al., 2003) и в стекловидном теле у пациентов с хориоидальной неоваскуляризацией при возрастной макулодистрофии (Holekamp N.M. et al., 2002). Кроме этого, выявлено увеличение VEGF и уменьшение PEDF в стекловидном теле у пациентов с пролиферативной диабетической ретинопатией (Ogata N., Nishikawa М. et al., 2002; Funatsu H. et al., 2006; Patel J.I. et al., 2006).

Помимо антиангиогенных свойств, PEDF обладает выраженными нейротрофическими и нейропротективными эффектами.

Было установлено, что PEDF является индуктором нейрональной дифференцировки клеток в культуре клеток ретинобластомы (Tombran-Tink J., 1989, 1991). Далее было установлено, что PEDF значительно увеличивает клеточную жизнеспособность в культурах нормальных мозжечковых гранулярных клетках, не оказывая влияния на митотическую активность (Taniwki Т. et al., 1995). Помимо этого, PEDF способствует дифференцировке и выживанию развивающихся спинных моторных нейронов (Houenou L. et al., 1999).

PEDF обладает достаточно высокими нейротрофическими свойствами, как при хроническом, так и при остром нейротоксическом повреждении: активно защищает мозжечковые гранулярные клетки при глутаматном токсическом повреждении (Tanawaki Т. et al., 1997), поддерживает клеточную жизнеспособность за счет уменьшения апоптоза, вызванного перекисью водорода, в культуре крысиных ретинальных нейронов (Cao W. et al., 1999).

PEDF поддерживает выживание фоторецепторов при наследственной дегенерации сетчатки у мышей (Cayouette М. et al., 1999) и на модели повреждения фоторецепторов, связанной с потерей пигментного эпителия (Jablonski М.М. et al., 2000), а также после воздействия повреждающих уровней освещенности (Pang I.H. et al., 2007).

При проведении клинических исследований было выявлено снижение уровня содержания PEDF в тканях глаза у пациентов с нейроретинальными дистрофическими заболеваниями (Ogata N. et al., 2004) и миопией высокой степени, особенно с хориоретинальной дистрофией (Ogata N. et al., 2005).

Поскольку PEDF является естественным антагонистом VEGF, представляется перспективным изучить применение именно этого фактора для лечения патологической неоваскуляризации. Однако, мы не нашли в литературе обоснования целесообразности и преимущества использования PEDF по сравнению с широко применяемым в настоящее время анти-VEGF препаратом - Авастином, также не было сравнений с нейротрофическим фактором головного мозга - BDNF, который играет важную роль в развитии зрительного анализатора и регуляции функциональной активности нейронов зрительного центра (Peinado-Ramon P. et al., 1996; Lodovichi С. et al., 2000; Quigley H.A. et al., 2000; Paskowitz Daniel M. et al., 2004).

В связи с этим, актуально проведение сравнительного анализа влияния PEDF, Авастина и BDNF на состояние сетчатки и процессы неоваскуляризации в эксперименте.

Цель исследования: на основании сравнительного анализа оценить влияние PEDF, Авастина и BDNF на состояние сетчатки и процессы неоваскуляризации в эксперименте.

Задачи исследования: 1. Изучить влияние рекомбинантного PEDF на состояние органотипических культур сетчатки и сравнить в условиях культивирования его нейротрофические и нейропротективные свойства с BDNF.

2. На органотипических культурах сетчатки провести сравнительный анализ антиангиогенных свойств рекомбинантного PEDF и анти-VEGF препарата - Авастина.

3. Разработать количественный метод морфометрического анализа экспериментальной модели ретинальной неоваскуляризации для выявления ее формирования, определения степени ее выраженности и оценки эффективности применения PEDF.

4. На модели ретинальной неоваскуляризации провести сравнительный анализ антиангиогенных свойств рекомбинантного PEDF и Авастина.

5. Оценить достоинства рекомбинантного PEDF для применения в клинической офтальмологии.

Научная новизна. Впервые проведен сравнительный анализ влияния рекомбинантных факторов PEDF, BDNF и анти- VEGF препарата - Авастина на свойства органотипических культур сетчатки животных. Установлено, что PEDF также как BDNF обладает выраженными нейротрофическими и нейропротективными свойствами:PEDF в дозе 0,5 p,g/ml и BDNF в дозе 0,1 jag/ml культуральной среды увеличивают зону роста эксплантатов и клеточную жизнеспособность, активизируют процессы клеточноймиграции и роста J3III- тубулин иммунопозитивных аксоноподобных отростков нейрональной природы; PEDF в дозе 0,5 (xg/ml также как Авастин в дозе 50 |1§/ш1обладает в культуральных условиях выраженной антиангиогенной активностью, так как снижается экспрессия фактора фон - Виллибранта.

На экспериментальной модели ретинальной неоваскуляризации разработан морфометрический метод количественного определения средней площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя и среднего диаметра магистральных сосудов в центральной зоне сетчатки. На основании корреляционного анализа результатов количественной морфометрии средней площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя и иммуногистохимического анализа пролиферативной активности клеток сосудов сетчатки (определение индекса пролиферативной активности клеток сосудов сетчатки) установлено, что система морфометрического анализа может служить объективным методом количественной оценки степени выраженности патологической неоваскуляризации сетчатки в эксперименте.

На экспериментальной модели ретинальной неоваскуляризации проведен сравнительный анализ антиангиогенных свойств рекомбинантного PEDF и анти- VEGF препарата - Авастинаи установлена высокая эффективность PEDF. Показано, что интравитреальное введение PEDF в дозе 0,5 jixg также как и Авастина в дозе 50 fig вызывает выраженное уменьшение средней площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя, без статистически значимых различий.

Теоретическая и практическая значимость.

Полученныеэкспериментальные данные позволяют дополнить представления о PEDF - факторе пигментного эпителия и его значительной роли в механизме развития патологического ангиогенеза.

Показано, что метод количественного анализа результатов моделирования ретинальной неоваскуляризации может использоваться для оценки формирования и степени выраженности ретинальной неоваскуляризации в эксперименте.

Установлено, что PEDF имеет преимущества перед анти-VEGF препаратом — Авастином, так как проявляет антиангиогенные свойства в значительно меньшей концентрации и дополнительно обладает нейротрофическими и нейропротективными функциями. Поэтому PEDF может найти в дальнейшем применение в клинической практике для лечения тяжелых заболеваний сетчатки, связанных с патологической неоваскуляризацией.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Рекомбинантный PEDF в дозе 0,5 jj.g/ml также как BDNF в дозе 0,1 (ig/ml обладает выраженными нейротрофическими и нейропротективными свойствами в органотипических культурах сетчатки животных: наблюдается увеличение зоны роста эксплантатов, высокий уровень жизнеспособности клеток, а также активация процессов клеточной миграции и формирования (З-Ш-тубулин иммунопозитивных аксоноподобных отростков нейрональной природы.

2. Рекомбинантный PEDF в дозе 0,5 |ig/ml также как Авастин 50 ng/ml в органотипических культурах сетчатки животных обладает выраженными антиангиогенными свойствами о чем свидетельствует снижение уровня экспрессии фактора фон - Виллибранта.

3. Использование морфометрического метода количественной оценки ретинальной неваскуляризации путем определения средней площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя и среднего диаметра магистральных сосудов в центральной зоне сетчатки может служить достоверным методом выявления формирования и определения степени выраженности патологической неоваскуляризации сетчатки в эксперименте.

4. Рекомбинантный PEDF в дозе 0,5 jxg также как Авастин в дозе 50 jig при интравитреальном введении животным оказывает значительный антиангиогенный эффект, выражающийся в существенном уменьшении средней площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя на модели ретинальной неоваскуляризации.

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Тищенко, Ольга Евгеньевна

выводы

1. На основании результатов экспериментальных исследований на органотипических культурах сетчатки установлено, что PEDF в дозе 0,5 |a.g/ml обладает выраженным нейротрофическим и нейропротекторным эффектом: при добавлении его в культуральную среду активно развиваютсяпроцессы клеточной миграции и роста pill- тубулин иммунопозитивных аксоноподобных отростков нейрональной природы; происходит увеличение в 3 раза зоны роста эксплантатов и в 2 раза клеточной жизнеспособности по сравнению с культурами при добавлении Авастина. При культивировании с PEDF в дозе 0,5 jag/ml зона роста эксплантатов соответствует зоне роста эксплантатов при культивировании с BDNF, а жизнеспособность клеток меньше в 1,2 раза.

2. На органотипических культурах сетчатки установлено, что PEDF в дозе 0,5 p.g/ml обладает выраженным антиангиогенным эффектом, сопоставимым с Авастином в дозе 50 jig/ml - при добавлении их в культуральную среду в 2 раза больше снижается экспрессия фактора фон - Виллибранта по сравнению с контролем.

3. Разработанный морфометрический метод оценки состояния сетчатки позволяет проводить объективную количественную оценку формирования и степени выраженности экспериментально индуцированной ретинальной неоваскуляризации: средней площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя и среднего диаметра магистральных сосудов в центральной зоне сетчатки.

4. На модели ретинальной неоваскуляризации установлено, что PEDF в дозе 0,5 |xg и Авастин в дозе 50 p.g при интравитреальном введении обладают выраженным антиангиогенным действием - достоверно уменьшается средняя площадь васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя р<0,001), различия между PEDF и Авастином по степени выраженности их антиангиогенных свойств отсутствуют (р>0,05).

5. Наличие у PEDF нейротрофических и нейропротективных свойств, не уступающих BDNF, а также наличие антиангиогенных свойств, сопоставимых с Авастином, и установленная безопасность его интравитреального введения позволяет обеспечить при использовании PEDF более полный и патогенетически оправданный подход в лечении патологической неоваскуляризации при офтальмологических заболеваниях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Пролиферативные заболевания сетчатки являются первой причиной слепоты и слабовидения во всем мире, самыми распространенными из которых являются пролиферативная диабетическая ретинопатия и экссудативная форма возрастной макулярной дегенерации.

Несмотря на выдающиеся достижения в лечении этой патологии благодаря применению лазерного и хирургического лечения, эти состояния продолжают оставаться одной из ведущих причин необратимой слепоты в развитых странах.

Применение препаратов, блокирующих сосудистый эндотелиальный фактор роста, позволяет добиться быстрого регресса новообразованных сосудов сетчатки и повышения или стабилизации зрительных функций (Gragoudas Е. et al., 2004; Avery R.L., 2006; Davidorf F.H. et al., 2006; Kourlas H. et al., 2007; Chen C.Y. et al., 2007). Однако, несмотря на их высокую эффективность, требуется проведение дополнительных экспериментальных и клинических исследований, которые позволят определить не только положительные, но и возможные отрицательные побочные эффекты, связанные с механизмом действия данных препаратов (Lieth Е. et al., 2000; Marneros A.G. et al., 2005; Nishijima K. et al., 2007).

Актуальность проблемы патологической неоваскуляризации в современной офтальмологии обуславливает высокую практическую значимость изучения и разработки новых подходов, направленных на коррекцию патологических механизмов образования неососудов и нейроретинальных • повреждений. Большой интерес вызывает антиангиогенный фактор с нейротрофическим действием - фактор пигментного эпителия (Pigment Epithelium-Derived Factor-PEDF). Он обладает мощной антиангиогенной активностью, ингибирует миграцию и пролиферацию эндотелиальных клеток, которые играют основную роль в развитии патологической васкуляризации.

PEDF поддерживаетантиангиогенные свойства стекловидного тела и роговицы. В сетчатке физиологическое действие PEDF регулируется концентрацией кислорода: фактор пигментного эпителия создает условия для формирования сосудов, когда концентрация кислорода снижена, и ингибирует ангиогенез при высокой его концентрации (Dawson D.W. et al., 1999; Ogata N., Wada M. et al., 2002).

При применении PEDF на изолированных культурах эндотелиальных клеток было показано его ингибирующее действие на вызванную миграцию и пролиферацию данных клеток (Stellmach V. et al., 2001; Duh E.J. et al., 2002).

В ходе экспериментальных работ при применении PEDF на моделях ретинальной и хориоидальной неоваскуляризации было выявлено подавление роста патологических сосудов (Duh E.J. et al., 2002; Apte R. et al., 2004).

На основании проведения клинических исследований было показано снижение уровней PEDF в водянистой влаге у пациентов с пролиферативной диабетической ретинопатией (Boehm В.О. et al., 2003) и в стекловидном теле у пациентов с хориоидальной неоваскуляризацией при возрастной макулодистрофии (Holekamp N.M. et al., 2002). Кроме этого, выявлено увеличение VEGF и уменьшение PEDF в стекловидном теле у пациентов с пролиферативной диабетической ретинопатией (Ogata N., Nishikawa М. et al., 2002; Patel J.I. et al., 2006; Funatsu H. et al., 2006).

Помимо антиангиогенных свойств, PEDF обладает выраженными нейротрофическими и нейропротективными эффектами.

Было установлено, что PEDF является индуктором нейрональной дифференцировки клеток в культуре клеток ретинобластомы (Tombran-Tink J., 1989, 1991). Далее было установлено, что PEDF значительно увеличивает клеточную жизнеспособность в культурах нормальных мозжечковых гранулярных клетках, не оказывая влияния на митотическую активность (Taniwki Т. et al., 1995). Помимо этого, PEDF способствует дифференцировке и выживанию развивающихся спинных моторных нейронов (Houenou L. et al., 1999).

PEDF обладает достаточно высокими нейротрофическими свойствами, как при хроническом, так и при остром нейротоксическом повреждении; активно защищает мозжечковые гранулярные клетки при глутаматном токсическом повреждении (Tanawaki Т. et al., 1997), поддерживает клеточную жизнеспособность за счет уменьшения апоптоза, вызванного перекисью водорода, в культуре крысиных ретинальных нейронов (Cao W. et al., 1999).

PEDF поддерживает выживание фоторецепторов при наследственной дегенерации сетчатки у мышей (Cayouette М. et al., 1999) и на модели повреждения фоторецепторов, связанной с потерей пигментного эпителия (Jablonski М.М. et al., 2000) и после воздействия повреждающих уровней освещенности (Pang I.H. et al., 2007).

При проведении клинических исследований было выявлено снижение уровня содержания PEDF в тканях глаза у пациентов с нейроретинальными дистрофическими заболеваниями (Ogata N. et al., 2004) и миопией высокой степени, особенно с хориоретинальной дистрофией (Ogata N. et al., 2005).

Поскольку PEDF является естественным антагонистом VEGF, представляется перспективным изучить применение именно этого фактора для лечения патологической неоваскуляризации. Однако, мы не нашли в литературе обоснования целесообразности и преимущества использования PEDF по сравнению с широко применяемым в настоящее время анти-VEGF препаратом - Авастином, также не было сравнений с нейротрофическим фактором головного мозга - BDNF, который играет важную роль в развитии зрительного анализатора и регуляции функциональной активности нейронов зрительного центра (Peinado- Ramon P. et al., 1996; Lodovichi С. et al., 2000; Quigley H.A. et al., 2000; Paskowitz Daniel M. et al., 2004).

В связи с этим, актуально проведение сравнительного анализа влияния PEDF, Авастина и BDNF на состояние сетчатки и процессы неоваскуляризации в эксперименте.

Целью работы явилось на основании сравнительного анализа оценить влияние PEDF, Авастина и BDNF на состояние сетчатки и процессы неоваскуляризации в эксперименте.

Достижение цели осуществлялось путем решения следующих задач:

1. Изучить влияние рекомбинантного PEDF на состояние органотипических культур сетчатки и сравнить в условиях культивирования его нейротрофические и нейропротективные свойства с BDNF.

2. На органотипических культурах сетчатки провести сравнительный анализ антиангиогенных свойств рекомбинантного PEDF и анти-VEGF препарата - Авастина. 3. Разработать количественный метод морфометрического анализа экспериментальной модели ретинальной неоваскуляризации для выявления ее формирования, определения степени ее выраженности и оценки эффективности применения PEDF.

4. На модели ретинальной неоваскуляризации провести сравнительный анализ антиангиогенных свойств рекомбинантного PEDF и Авастина.

5. Оценить достоинства рекомбинантного PEDF для применения в клинической офтальмологии.

Работа состояла из двух экспериментальных разделов. Первый раздел -изучение влияния PEDF на органотипические культуры сетчатки, второй -насостояние сетчатки экспериментальных животных.

1. Экспериментальные исследования на органотипических культурах сетчатки

В работе использовались семидневные крысы породы albino Wistar. Цельную сетчатку сразу после выделения высаживали на малые чашки Петри (35мм) в 1 мл среды для культивирования. Для культивирования использовалась модифицированная среда следующего состава: DMEM (НПП ПанЭко, С420) / F12 (НПП ПанЭко, С600) 1:1; FCS 10% ( HyClone, SH30109.03); bFGF 10 нг/мл (Sigma); EGF 10 нг/мл (Sigma); Heparin 150 мкл на 100 мл (НПП ПанЭко); Pen-strep 1% (Sigma); L-глютамин ЮОмкл на 50мл (Sigma, G-8540); инсулин-трансферин-селенит (ITC) 1:50 (НПП ПанЭко); гентамицин 5мкл на 1мл. Чашки помещали в инкубатор (Cell live) +37°С, 5% С02, 98% влажности. Смену среды производили каждые 2-3 суток, PEDF добавляли в среду в концентрации 0,5 (ig/ml, Авастин 50 jag/ml, BDNF 0,1 (j,g/ml. Культивирование производилось в течение 30 суток, далее образцы фиксировали и хранили в забуференном растворе антифриза до окрашивания антителами.

С помощью микроскопического морфологического анализа производили количественную оценку роста культивируемых эксплантатов с использованием индекса площади (ИП) - отношение площади эксплантата, вместе с зоной выселяющихся клеток к исходной площади эксплантата.

Анализ на жизнеспособность клеток эксплантата сетчатки проводился с помощью окраски йодидом пропидия (PI) для выявления погибших клеток, а также использовали акридиновый оранжевый, который окрашивает живые клетки. Посредством флуоресцентного микроскопа производили прямой подсчет жизнеспособных клеток и погибших клеток на равновеликих участках.

На 30-е сутки проводили иммуногистохимическую окраску эксплантатов сетчатки, для чего использовали метод непрямого иммуногистохимического окрашивания с использованием первичных моноклональных антител к (3-III тубулину и GFAP и вторичных антител с флюуорохромнымиметками - техасский красный и Су2. Для анализа иммуногистохимических препаратов применяли метод конфокальной микроскопии.

Для анализа антиангиогенных свойств был проведен Вестерн - блот анализ.

Анализ индекса площади эксплантатов сетчатки выявил достоверное увеличение индекса площади в эксплантатах, культивируемых с PEDF и BDNF по сравнению с контролем и с эксплантатами, культивируемыми с Авастином как на 14, 21 так и на 30 сутки. Таким образом, на 30 сутки культивирования зона роста эксплантатов, культивируемых с PEDF увеличивается в 3 раза, по сравнению с контролем и эксплантатами, культивируемыми с Авастином, и соответствует зоне роста эксплантатов при культивировании с BDNF (р<0,05).

По результатам анализа клеток сетчатки на жизнеспособность на 14, 21 и 30 сутки в эксплантатах контроля было выявлено наличие обширных очагов клеточной гибели, как внутри, так и на поверхности эксплантатов. В эксплантатах, культивируемых cPEDF и BDNF, очаги клеточной гибели были значительно меньше. Очаги клеточной гибели в культурах, культивируемых с Авастином, были меньше по сравнению с контролем, но больше, чем в культурах с PEDF и BDNF. Таким образом, на 30 сутки культивирования с PEDF в эксплантатах сетчатки остаются жизнеспособными в 3,3 раза больше клеток по сравнению с контролем, и в 2,5 раза больше - по сравнению с эксплантатами, культивируемыми с Авастином, по сравнению с BDNF — в 1,2 раза меньше (р<0,05).

После иммуногистохимической окраски на 30 сутки культивирования в зоне расселения клеток из эксплантатов, культивируемых с PEDF и BDNF, обнаружено большое количество GFAP-иммунонегативных-рШ-тубулин иммунопозитивных клеток с аксоноподобными тубулинпозитивными отростками, распространяющимися за пределы тела эксплантата и образующими разветвленную сеть. В контроле и в эксплантатах, культивируемых с Авастином происходило расселение GFAP-позитивных клеток. Клетки, экспрессирующие pill-тубулин, в контроле и в культурах, культивируемых с Авастином, были выявлены только в глубине эксплантатов, в небольшом количестве. Таким образом, иммуногистохимическое исследование показало, что в органотипических культурах сетчатки, при культивировании с PEDF, также как и с BDNF, наблюдается развитие активных процессов клеточноймиграции и роста pill-тубулин иммунопозитивных аксоноподобных отростков нейрональной природы в отличие от контроля и эксплантатов, культивируемых с Авастином, где происходит расселение в основном только GFAP-позитивных клеток.

При проведении Вестерн-блот анализа было выявлено, что в контроле экспрессия фактора фон-Виллибранда в 2 раза выше, чем при действии PEDF и Авастина в течение 30 суток культивирования эксплантатов сетчатки, что свидетельствует о том, что PEDF обладает выраженными антиангиогенными свойствами, которые сопоставимы с Авастином.

2. Влияние PEDF на состояние сетчатки экспериментальных животных

Работа проведена на 44 крысах (88 глаз) породы albino Wistar. Животные были разделены на 4 группы, в каждой по 11 крыс, три - с воспроизведенной экспериментальной моделью патологической неовасакуляризации и контрольная группа - без экспериментальной модели (контрольная группа -1). В первой экспериментальной группе животным было произведено интравитреальноевведениеРЕОР в дозе 0,5 jag, во второй-авастина в дозе -50 |ig, третья группа являлась второй контрольной - с экспериментальной моделью патологической неоваскуляризации контрольная группа -2). В контрольный глаз в первой и второй экспериментальных группах вводили объем сбалансированного физиологического раствора (СФР), эквивалентный используемому опытному объему.

Создание экспериментальной модели патологической неоваскуляризации проводили следующим образом: животных в возрасте 7 суток вместе с кормящими матерями помещались на 5 суток в герметичный инкубатор (размером 70 х 50 х 30), к которому был подключен кислородный концентратор. Насыщенность потока кислородом, поступающего в инкубатор составляла 93±3%. Открывали инкубатор ежедневно не более чем на 5 минут, вынужденно - для подмены самок, очистительных работ и подкорма. Замену суррогатных матерей производили во избежание у них респираторного дистресс синдрома. Через 5 дней экспериментальные животные были переведены в комнатные условия на 3 дня, после чего проводили интравитреальные инъекции PEDF или Авастина.

Выведены из эксперимента животные были на 12 день, в экспериментальных группах - 4 день после интравитреального введения PEDF или Авастина,декапитированы, глаза энуклеированы, сетчатки извлечены.

В результате проведения патоморфологического исследования переднего и заднего отрезка глаза экспериментальных животных после интравитреального введения PEDF в дозе 0,5 fig, каких-либо признаков воспалительной или аллергической реакции выявлено не было, нетипично расположенных клеток не обнаружено, нарушений структуры сетчатки и пигментного эпителия в месте введения не выявлено.

Проводился метод непрямого иммуногистохимического окрашивания препаратов сетчатки с использованием лектина и биотин-стрептавидинового комплекса для визуализации сосудистой сети.

Затем проводили количественный морфометрический анализ изображений сетчатки, полученных с помощью инвертированного микроскопа Olimpus КХ-100 с цифровой камерой Delta Pix 5000 и объективами 10х, 20х, 40х.

С помощью разработанного морфометрического метода были проведены следующие исследования: • количественная оценка средней площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя; калиброметрия - посредством измерения среднего диаметра магистральных сосудов в 1{ентралыюй зоне сетчатки.

Для подтверждения возникновения патологической ретинальной неоваскуляризации у экспериментальных животных с помощью морфометрического метода были проведены следующие исследования:

1. Количественная оценка ■ площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя в контрольной группе -1 и контрольной группе -2.

2. Измерение среднего диаметра магистральных сосудов в центральной зоне сетчатки в контрольной группе -1 и контрольной группе -2.

А также, проведена оценка парафиновых полутонких срезов сетчатки, окрашенных маркером Ki-67 на пролиферативную активность клеток сосудов в этих группах (индекс пролиферативной активности). Для определения статистической взаимосвязи между показателями индекса пролиферативной активности сосудов и средней площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя использовали расчет коэффициента корреляции в контрольной группе - 2 (с экспериментальной моделью).

При проведении морфометрического анализа цифровых изображений сетчатки для количественной оценки площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя были получены следующие результаты: контрольная группа -1 - 1,227±0,066 (пиксели); контрольная группа -2 - 2,405±0,079 (пиксели).

При проведении морфометрического анализа цифровых изображений сетчатки для измерения диаметра магистральных сосудов в центральной зоне сетчатки были получены следующие результаты: контрольная группа -1 — 11,629±0,338 (пиксели); контрольная группа -2 - 15,465±0,58 (пиксели).

В результате проведенного анализа окраски ядер эндотелиальных клеток сосудов сетчатки, при определении индекса пролиферативной активности, были получены результаты: контрольная группа -1 - 2,2±0,99%; контрольная группа -2 - 15,6±1,09%.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что после резкой отмены высоких концентраций кислорода в контрольной группе -2 на 7 сутки пребывания животных в условиях нормоксии наблюдается 2-х кратное увеличение средней площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя (р<0,001) и 7-ти кратное увеличение пролиферативной активности клеток сосудов сетчатки (р<0,001) по сравнению с интактными животными из контрольной группы -1. Увеличение диаметра магистральных сосудов в контрольной группе -2 (р<0,001) является подтверждением наличия патологического состояния, приводящего к возникновению патологической неоваскуляризации.

Между показателями индекса пролиферативной активности сосудов и средней площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя выявлена значимая положительная взаимосвязь в контрольной группе — 2 (г=0,814). Таким образом, эти данные позволяют использовать разработанный морфометрический метод количественной оценки средней площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя для выявления формирования ретинальной неоваскуляризации и определения степени ее выраженности.

Влияние PEDF на состояние сетчатки животных с экспериментальной моделью патологической неоваскуляризации

При проведении морфометрического анализа цифровых изображений сетчатки для количественной оценки площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя получены следующие результаты: экспериментальная группа -1-OD - 1,370±0,088 (пиксели), экспериментальная группа -1-OS - 2,056±0,097 (пиксели), экспериментальная группа -2-OD -1,560±0,091 (пиксели) и экспериментальная группа -2-OS - 2,192±0,069 (пиксели).

Таким образом, на основании сравнительного морфометрического анализа установлено, что при интравитреальном введении PEDF или Авастина в опытные глаза животным с экспериментальной моделью происходит статистически достоверное снижение средней площади васкуляризации в пределах поверхностного ретинального слоя, как по сравнению с контрольными глазами в этих группах (р<0,001), так и с группой животных с патологической неоваскуляризацией, которым не проводилось лечения (р<0,001). Причем статистически достоверной разницы между данными, полученными при введении PEDF или Авастина, установлено не было (р>0,05). На основании чего, можно говорить о наличие у PEDF выраженных антиангиогенных свойств, сопоставимых с Авастином.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Тищенко, Ольга Евгеньевна, 2010 год

1. Богданович В.Л. Сахарный диабет.// Нижний Новгород 1997.-С.56-70.

2. Беляева М.И. Профилактическая лазертерапия при диабетической ретинопатии // Тез. докл.У Всесоюзного съезда офтальмологов.- М., 1979.-Т.З.- С. 112-114.

3. Габель В.П. Фотодинамическая терапия: показания и результаты.// Тез. докл. Первый Всероссийский семинар «круглый стол».- Ростов-на-Дону, 2004.- С. 104-107.

4. Глинчук Я.И. Витрэктомия как метод профилактики и лечения ряда заболеваний стекловидного тела и сетчатки //Сб. научн.стат.:Трансцилиарная хирургия хрусталика и стекловидного тела.- М., 1982.- С.102-107.

5. Глинчук Я.И. Хирургическое лечение гемофтальмов и помутнений стекловидного тела методом закрытой витрэктомии. // Автореф. дисс. канд. мед. наук.- М., 1975. 146 с.

6. Глинчук Я.И., Югай А.Г., Деев, Л.А. Результаты витрэктомии и лазерных вмешательств при осложненных формах пролиферативной диабетической ретинопатии //Материалы Болгаро-советской конференции «Диабет и око».-Албена, Болгария, 1988. С.39-40.

7. Григорян Э.Н., Иванова И.П., Поплинская В.А. Обнаружение новых, внутренних источников регенерации нейральной сетчатки после ее отслойки у тритонов. I. Морфологическое и количественное исследования // Изв. АН. Сер. биол. 1996. - № 3. - С. 319-332.

8. Григорян Э.Н., Поплинская В.А. Обнаружение внутренних источников регенерации нейральной сетчатки после ее отслойки у тритонов. II. Радиоавтографическое исследование // Изв. АН. Сер. биол. 1999. - № 5. - С. 583-591.

9. Ефимов А.С. //Проблемы эндокринологии.- 1985.- № 5.- С.55-59.

10. Иванишко Ю.А. «Классические» субфовеолярные неоваскулярные мембраны: возможности и перспективы лечения.// Тез. докл. Первый Всероссийский семинар круглый стол».- Ростов-на-Дону, 2004 - С. 96-103.

11. Иванишко Ю.А. Лазерные методы лечения заболеваний макулярной области сетчатки.// Автореф. дисс. д.м.н. Ростов-на-Дону, 1992 — 450 с.

12. Измайлов А.С., Балашевич Л.И. Хориоидальная неоваскуляризация (диагностика и лечение).// Учебное пособие СПб, 2001. - С. 9-13.

13. Кацнельсон Л.А., Форофонова Т.И., Бунин А.Я. Сосудистые заболевания глаза.//М. Медицина, 1990. С.182-196.

14. Кашинцева Л.Т. Офтальмоскопические изменения глазного дна у больных сахарным диабетом и их классификация. //Офтальмологический журнал.- 1980. -№ i. С.108-112.

15. Краснов М.М., Акопян B.C. Достижения лазеротерапии на современном этапе развития офтальмологии.// Сб. научн. трудов: Лазерные методы лечения в офтальмологии /Под ред. Краснова М.М.- М., 1984.- С.3-17

16. Краснов М.М., Архангельский В.В. Возможности применения витреофага в офтальмохирургии. //Вестник офтальмологии.- 1976. № 4.-С.48-53.

17. Либман Е.С., Шахова Е.В. Состояние и динамика слепоты и инвалидности вследствие патологии органа зрения в России.// Матер. VII съезда офтальмологов России М., 2000. - С.209-214.

18. Лазеры в офтальмологии /Под ред. Сапрыкина П.И.- Изд. Саратовского университета, 1982.- С. 206-210.

19. Мазунин И.Ю. Транспупиллярная термотерапия различных видов субретинальных неоваскулярных мембран. // Тезисы докладов. Первый Всероссийский семинар-«круглый стол».- Ростов-на-Дону, 2004. С. 115— 118.

20. Марголис М.Г. Малькович В.К. О дифференциально-диагностических признаках изменений глазного дна при сахарном диабете. //Вестник офтальмологии.- 1980. № 2.- С.31-33.

21. Мухина М.А., Сотникова Е.В., Кутенова О.М. Социальная значимость и актуальность проблемы лечения макулодистрофии.// Матер. VTI съезда офтальмологов России. М., 2000. - С.220-225.

22. Родин А.С., Болынунов А.В. Результаты фотодинамической терапии при субфовеолярных субретинальных неоваскулярных мембранах. // Вестник офтальмологии.-2003 №2 - С. 11-13.

23. Сапрыкин П.И., Симонова К.К., Беляева М.И. Применение аргонового лазера в лечении диабетической ретинопатии (Предварительное сообщение). //Вестник офтальмологии.- 1974. № 2.- С.78-81.

24. Семенов А.Д., Плюхова О.А., Ромашенков Ф.А. Ангиографическая характеристика и лазерное лечение ранних форм диабетичекой ретинопатии //Патология сосудистой и сетчатой оболочек глаза: Тез.докл.- Кишинев, 1981.- С.125-126.

25. Симонова К.К. Аргоновый лазер в лечении диабетической ретинопатии. // Офтальмоэндокринология: Сб.научн.трудов.- М., 1978.-С.156-157.

26. Федоров С.Н., Глинчук Я.И., Захаров в.Д., Зуев В.К. Удаление и замена стекловидного тела физиологическим раствором при помощи витреотома. //Вестник офтальмологии.- 1974. № 3.- С.24-27.

27. Федоров С.Н., Глинчук Я.И., Семенов А.Д. Витрэктомия и лазер в лечении тяжелых форм диабетической ретинопатии. //Офтальмоэндокринология: Сб.науч.трудов.- М., 1978,- С. 165-167.

28. Шульпина Н.Б., Алиева З.А., Нудьга Л.И. Заболевания органа зрения при сахарном диабете. //Терапевтическая офтальмология /Под ред.Краснова М.М., Шульпиной Н.Б.- М., 1985.- С.510-536.

29. Adamis А.Р., Miller J.W., Bernal М.Т., D'Amico D.J., Folkman J., Yeo Т.К., Yeo K.T. Increased vascular endothelial growth factor levels in the vitreous of eyes with proliferative diabetic retinopathy. // Am. J. Ophthalmol. 1994. - Vol. 118.-P.445-450.

30. Aiello L.P., Avery R.L., Arrigg P.G. et al. Vascular endothelial growth factor in ocular fluid of patients with diabetic retinopathy and other retinal disorders. // N. Eng. J. Med. 1994. - Vol. 331. - P. 1480-1487.

31. Alon Т., Hemo I., Itin A. et al. Vascular endothelial growth factor acts as a survival factor for newly formed retinal vessels and has implications for retinopathy of prematurity. //Nat. Med. 1995. - Vol. 1. - P.1024-1028.

32. Apte R., Barreiro R.A., Duh E., Volpert O., Ferguson T.A. Stimulation of neovascularization by the anti-angiogenic factor PEDF. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2004. - Vol. 45 (12). - P.4491-4497.

33. Araki Т., Tanawaki Т., Becerra S., Chader G., Schwartz J.

34. Pigment epithelium-derived factor (PEDF) differentially protects immature but not mature cerebellar granule cells against apoptotic cell death. // J. Neurosci. Res. 1998.-Vol. 53.-P.7-15.

35. Ashton N. Retinal vascularisation in health and disease. // Am. J. Ophthalmol. 1957. - Vol. 44. - P.7-17.

36. Avery R.L. Regression of retinal and iris neovascularization after intravitreal bevacizumab (Avastin) treatment. // Retina. 2006. - Vol. 26. - P.352-354.

37. Avery R.L., Pearlman J., Pieramici D.J. et al. Intravitreal bevacizumab (Avastin) in the treatment of proliferative diabetic retinopathy.// Ophthalmology. -2006.-Vol. 113(10).-P.1695-1715.

38. Avery R.L., Pieramici D.J., Rabena M.D. et al. Intravitreal bevacizumab (Avastin) for neovascular age-related macular degeneration. // Ophthalmology. -2006. Vol. 113. - P.363-372.

39. Barakova M., Khobelich, Tanev V. Area coagulated retina depending on the extent of the retinal ishemia in eyes with proliferative diabetic retinopathy. //Acta. Medica Bulgaria. 1994. - Vol. XII. - P.29-34.

40. Barnstable С .J., Tombran-Tink J. Neuroprotective and antiangiogenic actions of PEDF in the eye: molecular targets and therapeutic potential. // Prog. Retin. Eye Res. 2004. - Vol. 23(5). - P.561-77.

41. Barondes M.J., Pagliarini S., Chisholm I.H. et al. Controlled trial of laser photocoagulation of pigment epithelial detachments in the elderly: 4 year review. // Br. J. Opthalmol. 1992. - Vol. 76. - P.5-7.

42. Bashshur Z.F., Bazarbachi A., Schakal A. et al. Intravitreal bevacizumab for the management of choroidal neovascularization in age-related macular degeneration. // Am. J. Ophthalmol. 2006. - Vol. 142. - P. 1-9.

43. Becerra S.P. Adv. Structure-function studies on PEDF: A noninhibitory serpin with neurotrophic activity. // Exp. Med. Biol. 1997. - Vol. 425. - P.223-237.

44. Becerra S.P., Fariss R.N., Wu Y.Q., Montuenga L.M. et al. Pigment epithelium-derived factor in the monkey retinal pigment epithelium and interphotoreceptor matrix: apical secretion and distribution. // Exp. Eye Res. -2004. Vol. 78(2). - P.223-234.

45. Berkow J.W., Orth D.H., Kelley J.S. Fluorescein Angiography: Techniques and Interrelation (Monograph N5). 1991. - P.65-93.

46. Bienkowski J. An overview of the progression of diabetic retinopathy with treatment recommendations. //Nurse Pract. 1994. - Vol. 19(7). -P.50-58.

47. Bilak M., Corse A., Lehar M., Tombran-Tink J., et al. Pigment epithelium-derived factor (PEDF) protects motor neurons from chronic glutamate-mediated neurodegeneration. // J. Neuropath. Exp. Neurol. 1999. - Vol. 58. - P.719-725.

48. Boyd S., Zachary I., Chakravarthy U. et al. Correlation of increased vascular endothelial growth factor with neovascularization and permeability in ischemic central vein occlusion. // Arch. Ophthalmol. 2002. - Vol. 120. - P.1644-1650.

49. Bressler N.M, Bressler S.B. Photodynamic Therapy with Verteporfin (Visudyne): Impact on Ophthalmology and Visual Sciences. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2000. - Vol. 41. - P.624 -628.

50. Browning J., Wylie C., Gole G. Quantification of oxygen-induced retinopathy in mouse. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1997. - Vol. 38. - P. 11681174.

51. Cao W., Tombran-Tink J., Chen W., McGinnis J. Pigment epithelium-derived factor protects retinal neurons against hydrogen peroxide-induced ceel death. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1999. - Vol. 40. -P.160-165.

52. Cao W., Tombran-Tink J., Elias R., Sezate S., Mrazek D., McGinnis J.F. In vivo protection of photoreceptors from light damage by pigment epitheliumderived factor. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2001. 1. Vol. 42(7). -P.1646-1652.

53. Cayouette M., Smith S.B., Becerra S.P., Gravel C. Pigment epithelium-derived factor delays the death of photoreceptors in mouse models of inherited retinal degenerations. // Neurobiol. Dis. 1999. - Vol. 6(6). - P.523-532.

54. Chalam К. V., Gupta S. et al. // 24-th Annual ASRS Meeting/ 6-th Annual EVRS Meeting. Cannes, 2006. - P. 173-174.

55. Chen C.Y., Wong T.Y., Heriot W.J. Intravitreal bevacizumab (Avastin) for neovascular age-related macular degeneration: a short-term study. // Am. J. Ophthalmol. 2007. - Vol. 143(3). -P.510-512.

56. Chun D.W., Heier J.S. et al. A pilot study of multiple intravitreal injections of ranibizumab in patients with center-involving clinically significant diabetic macular edema. // Ophthalmology. 2006. - Vol. 113(10). - P.1706-1712.

57. Ciulla T.A., Danis R.P., Criswell M., Pratt L.M. Changing therapeutic paradigms for exudative age-related macular degeneration: antiangiogenic agents and photodynamic therapy. // Expert Open Investing Drugs. 1999. - Vol. 8(12). -P.2173-2182.

58. Corcostequi B. Clinical experience with the diode laser in the management of diabetic retinopathy. // Symposium: New dimensions in retina. Chicago, Illinois. - 1993.-P.323-325.

59. Costa R.A., Jorge R., Calucci D. et al. Intravitreal bevacizumab for choroidal neovascularization caused by AMD (IBeNA Study): results of a phase 1 dose-escalation study. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2006. - Vol. 47. - P.4569-4578.

60. D'Amore P.A. Mechanisms of retinal and choroidal neovascularization. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1994. - Vol. 35. -P.3974-3979.

61. Davidorf F.H., Mouser J.G., Derick RJ. Rapid improvement of rubeosis iridis from a single bevacizumab (Avastin) injection. // Retina. 2006. - Vol. 26. -P.354-356.

62. Dawson D.W., Volpert O.V., Gillis P., Crawford S.E., Xu H., Benedict W., Bouck N.P. Pigment epithelium-derived factor: a potent inhibitor of angiogenesis. // Science. 1999. -Vol. 285. -P.245-248.

63. DRVSRG. Early vitrectomy for severe vitreous hemorrage in diabetic retinopathy: DRVS report № 5. //Arch.Ophthalmol. 1990. - Vol. 108. - P.958-964.

64. DRSRG. Fundus photohgraphic risk factors for progression diabetic retinopathy. //Ophthalmology. 1991. - Vol. 98. - № 5.- supplement.

65. Early photocoagulation for diabetic retinopathy. Early Treatment Diabetic Retinopathy Study Research Group //Ophthalmology. - 1991. - Vol. 98. - P.741.-supplement.

66. Early vitrectomy for severe proliferative diabetic retinopathy in eyes with useful vision. The Diabetic Retinopathy Vitrectomy Study Research Group //Ophthalmology. - 1988. - Vol. 95. - P. 1307-1320.

67. Early vitrectomy for severe vitreous hemorrhage in diabetic retinopathy. -The Diabetic Retinopathy Study Research Group //Arch.Ophthalmol. 1990. - Vol. 108. -P.958-963.

68. ETDRS Photocoagulation treatment of proliferative diabetic retinopathy. Clinical application of Diabetic retinopathy study findings Report № 8 // Ophthalmology. 1981. - Vol. 88. - P.583-600.

69. Federman J.L., Gouras P., Schubert H., Slusher M.M., Vrabec T.R. Retina and vitreous. // Textbook of ophthalmology. 1994. - Vol. 9 /Ed. by Podos S.M., Yanoff M.- St.Louis: C.V. Mosby.

70. Ferrara N., Henzel W. J. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding growth factor specific for vascular endothelial cells. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1989. - Vol. 161. - P.851-858.

71. Ferrara N. Role of vascular endothelial growth factor in regulation of physiological angiogenesis. // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2001. - Vol. 280. -P. 1358-1366.

72. Ferrara N. Vascular endothelial growth factor: basic science and clinical progress. // Endocr. Rev. 2004. - Vol. 25. - P.581-611.

73. Finlay D., Wilkinson G., Kypta R., et al. Retinal cultures // Methods Cell Biol. -1996.-Vol. 51. P.265-283.

74. Fleischman J.A., Swartz M., Dixon J.A. Argon laser endophotocoagulation. An intraoperative trans-pars plana technique. //Arch. Ophthalmol. 1981. - Vol. 99. - P.1610-1613.

75. Francois I., Cambic E., De Laev I. Photocoagulation in diabetic retinopathy focal treatment or partial retinal ablation. //Arch.Ophthalmol. 1975. - Vol. 7(2). -P.183-189.

76. Frederick L.F. The results of twenty years of reseach in treatment of diabetic retinopathy. //New dimentions in retina. Chicago, Illinois. - 1993. - P. 11-13.

77. Freyler H., Klemen U., Prscavec F., Egerer I. Treatment of advanced proliferative diabetic retinopathy. Pothocoagulation of vitrectomy. //Metab. Pediatr. Ophthalmol. 1980. - Vol. 4. - P. 129-132.

78. Gao G., Li Y., Zhang D., Gee S., Crosson C., Ma J. Unbalanced expression of VEGF and PEDF in ischemia-induced retinal neovascularization. // FEBS Lett. -2001. Vol. 489(2-3). - P.270-276.

79. Garcia C.A., Ruiz R.S. Ocular complications of diabetes.// Clin. Symp. -1992. Vol. 44(1). - P.22-32.

80. Gaudreault J., Fei D., Rusit J. et al. Preclinical pharmacokinetics of Ranibizumab (rhuFabV2) after a single intravitreal administration. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2005. - Vol. 46. - P.726-733.

81. Goldberg M., Herbst R. Acute complications of argon laser photocoagulation. //Arch.Ophthalmol. 1973. - Vol. 89. - P.311-316.

82. Gragoudas E., Adamis A., Cunningham E. T. et al. Pegaptanib for neovascular age-related macular degeneration. // N. Engl. J. Med. — 2004. -Vol. 351.-P.2805-2816.

83. Grant M., Russel В., Fitzgerald C., Merimee T. J. Insulin-like growth factors in vitreous. Studies in control and diabetic subjects with neovascularization. // Diabetes. 1986. -Vol.35. - P.416-420.

84. Grisanti S., Biester S., Peters S. et al. Intracameral bevacizumab for iris rubeosis. // Am. J. Ophthalmol. 2006. - Vol. 142(1). - P.158-160.

85. Grunwald J. E., Haripsarad S. M., DuPont J. et al. Foveolar choroidal blood flow in age-related macular degeneration. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1998. -Vol. 39. -P.385-390.

86. Hoff A., Hammerle H., Schlosshauer B. Organotypic culture system of chicken retina // Brain Res. Brain Res. Protoc. 1999. - Vol. 4(3). - P.237-248.

87. Holekamp N.M., Bouck N., Volpert O. Pigment epithelium-derived factor is deficient in the vitreous of patients with choroidal neovascularization due to age-related macular degeneration. // Am. J. Ophthalmol. 2002. - Vol. 134(2). -P. 200-207.

88. Houenou L., D'Costa A., Turgeon V., Enyadike C., Alberti E., Becerra S. Pigment epithelium-derived factor promotes the survival and differentiation of developing spinal motor neurons. //J. Сотр. Neurol. 1999. - Vol. 412. - P.506-514.

89. Husain D, Ambati B, Adamis AP. Mechanisms of age-related macular degeneration. // Ophthalmol. Clin. North. Am. 2002. - Vol. 15(1). - P.87-91.

90. Inan U.U., Avei В., Kusbeci T. Preclinical safety evaluation of intravitreal injection of full-length humanized vascular endothelial growth factor antibody in rat eyes. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2007. - Vol. 48. - P. 1773-1781.

91. Ito Y., Sodeyama Т., Mori K., Anzail K., Takita Y., Imai D., Shibuya M., Yoneya S., Moshfeghi DM, Peyman G.A. Comparative Study of Visible and1.frared Light in Transpupillary Thermotherapy. // Invest

92. Ophthalmol. Vis. Sci. 2002. - Vol. 43. - P. 4419-4424.

93. Jaworowski A., Fang Z., Khong T.F., Augusteyn R.C. Protein synthesis and secretion by cultured pigment epithelia // Biochim. Biophys. Acta. 1995. - Vol. 1245(1).-P.121-129.

94. Joussen A.M., Murata Т., Tsujikawa A. et al. Leukocyte-mediated endothelial cell injury and death in the diabetic retina. // Am. J. Pathol. 2001. -Vol. 158.-P.147-152.

95. Kahook M.Y., Schuman J.S., Noecker R.J. Needle bleb revision of encapsulated filtering bleb with bevacizumab.// Ophthal. Surg. Lasers. 2006. -Vol. 37. -P.148-150.

96. Karakousis P.C., John S.K., Behling K.C. et al. Localization of pigment epithelium derived factor (PEDF) in developing and adult human ocular tissues. // Mol. Vis. 2001. - Vol. 7. — P.154-163.

97. KatsuraY., Okano Т., Noritake M., et al. Hepatocyte growth factor in vitreous fluid of patients with proliferative diabetic retinopathy and other retinal disorders. // Diabetes Care. 1998. - Vol. 21. - P.1759-1763.

98. Khan S., Beer P.M., Falk N. et al. // 24-th Annual ASRS Meeting/ 6-th Annual EVRS Meeting. Cannes, 2006. - P.80-85.

99. Kim I., Ryan A.M., Rohan R. et al. Constitutive expression of VEGF, VEGFR-1, and VEGFR-2 in normal eyes. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1999. -Vol. 40.-P.2115-2121.

100. Kim J.E., Perkins S.L., Schwiesow Т., Connor T.B., Han D.P. Transpupillary thermotherapy of occult choroidal neovascularization in age-relatedmacular degeneration.//Seminars in Ophthalmology. 2001. - Vol.16(2). -P.86-89.

101. Klagsbrun M., D'Amore P.A. Regulators of angiogenesis. //Ann. Rev. Physiol. 1991.-Vol. 53.-P.217-239.

102. Klaver C.C., Wolfs R.C., Vingerling J.R., Hofman A. Age-specific prevalence and causes of blindness and visual impairment in an older population: the Rotterdam Study. // Arch. Ophthalmol. 1998. - Vol. 116(5). - P.653-658.

103. Klein R. Diabetic retinopathy. // Ann. Rev. Publ. Health. 1996. - Vol. 17. - P.137-158.

104. Klein R., Klein B.E.K., Lee K.E., et al. Changes in visual acuity in a population over a 10-year period. The Beaver Dam Study. // Ophthalmology. -2001.-Vol. 108. P.1757-1766.

105. Kojima K., Susuki M., Harada T. et al. Xenon photocoagulation in juvenile diabetic retinopathy (author's transl.). // Acta. Soc. Ophthalmol. Jap. 1978. - Vol. 82(6). - P.457-463.

106. Kong Y.C., Han M., Zhao K.X. Expression of vascular endothelial growth factor and pigment epithelium derived factor in mouse oxygen-induced retinopathy and its significance. // Zhonghua Yan Ke Za Zhi. 2008. - Vol. 44(8). - P.734-740.

107. Kourlas H, Abrams P. Ranibizumab for the treatment of neovascular age-related macular degeneration: a review. // Clin. Ther. 2007. - Vol. 29(9). -P.1850-1861.

108. Krzystolik M.G., Afshari M.A., Adamis A.P. Prevention of experimental choroidal neovascularization with intravitreal anti-vascular endothelial growth factor antibody fragment. // Arch. Ophthalmol. 2002. - Vol. 120. - P.338-346.

109. Landers M.B., Trese M.T., Stefansson E., Bessler M. Argon laser intraocular photocoagulation. //Am. Acad. Ophthalmol. 1982. - Vol. 89(7). -P.785-788.

110. Lanzetta P., Pirracchio A., Bandello F. Optical coherence tomography of subfoveal choroidal neovascularization treated with transpupillary thermotherapy. // Semin. Ophthalmol. 2001. - Vol. 16(2). - P.97-100.

111. L'Esperance F. Ophthalmic lasers photocoagulation, photoradiation and surgery. // St. Louis: C.V. Mosby. 1983. -P.250-256.

112. Lieth E., Gardner Т., Barber A. J., Antonetti D. Retinal neurodegeneration: early pathology in diabetes.//Clin. Exp. Ophthalmol. 2000. - Vol. 28 (1). - P.3-8.

113. Little H.L. Preventing complications in argon laser retinal photocoagulation. //Symposium on light coagulation. Doc. Ophthalmol. Proc. Ser. /Ed. by Francois J. 1972. - Vol. 1. - P.87-95.

114. Little H.L. Treatment' of proliferative diabetic retinopathy. //Ophthalmology. 1985. - Vol. 92(2). - P.279-283.

115. Little H.L., Zweng H.C., Jack R.L. Vassiliadis A. Techniques of argon laser photocoagulation in the treatment of diabetic disc new vessels. //Am. J. Ophthalmol. 1976. - Vol. 82. - P.675-683.

116. Little H.L., Zweng H.C. Complications in argon laser photocoagulation. //Trans. Рас. Coast. Ophthalmol. Soc. 1971. - Vol. 53. - P.l 15-120.

117. Lodovichi C., Berardi N., Pizzorusso T et al. Effects of neurotrophins on cortical plasticity: Same or different? // J.Neurosci. 2000. - Vol.20(6). - P.2155-2165.

118. Machemer R. A new concept for vitreous surgery: II. Surgical technique and complications. //Am. J. Ophthalmol. 1972. - Vol. 74(6). - P.1022-1033.

119. Machemer R. A new concept for vitreous surgery: 1П. Indications and results. //Am. J. Ophthalmol. 1972. - Vol. 74(6). - P.1034-1056.

120. Machemer R. A new concept for vitreous surgery: IV. Two instrument techniques in pars plana vitrectomy. //Arch. Ophthalmol. 1974. - Vol. 92. -P.407-412.

121. Machemer R., Buettner H., Norton E. Vitrectomy: A pars plana approach. //Trans. Am. Acad. Ophthalmol.Otolaringol. 1971. - Vol. 75. - P.813-820.

122. Macular Photocoagulation Study Group. Argon lazer photocoagulation for neovascular maculopaty after five years: results from randomized clinical trials. // Arch. Ophthalmol. 1991.-Vol. 109(9).-P.l 109-1114.

123. Macular Photocoagulation Study Group. Occult choroidal neovasculararization. Influence on visual outcome in patients with AMD. // Arch. Ophthalmol. 1996. - Vol. 114(93). - P.400-412.

124. Mainster M.A. Decreasing retinal photocoagulation damage: principles and techniques. // Semin. Ophthalmol. 1999. - Vol. 14(4). - P.200-209.

125. Marciniak K., Butwicka A., Nowak J.Z. PEDF: an endogenousfactor displaying potent neuroprotective, neurotrophic and antiangiogenic activity. // Postepy. Hig. Med. Dosw. 2006. - Vol. 60. - P.387-396.

126. Marneros A.G., Fan J., Yokoyama Y. et al. Vascular endothelial growth factor expression in retinal pigment epithelium is essential for choriocapillarisdevelopment and vision function. // Am. J. Pathol. 2005. - Vol. 167.-P.1451-1459.

127. Mason J.O., Albert M.A. et al. Intravitreal bevacizumab (Avastin) for refractory pseudophakic cystoid macular edema. // Retina. 2006. - Vol. 26. -P.356-357.

128. McAvoyJ.W., Chamberlain C.G. Growth factors in the eye. // Prog. Growth Factor Res. 1990. - Vol. 2. - P.29-43.

129. Matsuyama K., Ogata N., Matsuoka M. et al. Relationship between pigment epithelium-derived factor (PEDF) and retinal function in patients with diabetic retinopathy. // Mol. Vis. 2008. - Vol. 14. - P.992-996.

130. Merimee T.J. Diabetic retinopathy: A synthesis of perspectives. //N. Eng. J. Med. 1990. - Vol. 322. - P.978-983.

131. Miller J.W., Adamis A.P., Shima D.T. Vascular endothelial growth factor/vascular permeability factor is temporally and spatially correlated with ocular angiogenesis in a primate model. // Am. J. Pathol. 1994. - Vol. 145. -P.574-584.

132. Mocanu С. Mechanism of angiogenesis. Ocular involvement. // Ophthalmologia. 2003. - Vol. 59(4). - P.3-8.

133. Mori K., Duh E., Gehlbach P., et al. Pigment epithelium-derived factor inhibits retinal and choroidal neovascularization. // J. Cell. Physiol. 2001. - Vol. 188. - P.253-263.

134. Mori K., Gehlbach P., Ando A., McVey D., Wei L., Campochiaro P.A. Regression of ocular neovascularization in response to increased expression of pigment epithelium-derived factor. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2002. - Vol. 43(7). - P.2428-2434.

135. Mylan R., Van-NewKirk J. The prevalence of age-related maculopathy. // Arch. Ophthalmol. 1988. - Vol. 106(2). - P.192-198.

136. Nguyen Q.D., Shah S., Tatlipinar S. et al. Bevacizumab suppresses choroidal neovascularisation caused by pathological myopia. // Br. J. Ophthalmol. -2005.-Vol. 89. P.1368-1370.

137. Nishijima K., Yin-Shan N., Zhog L. et al. Vascular endothelial growth factor-A is a survival factor for retinal neuros and a critical neuroprotectant during the adaptive response to ischemic injury. // Am. J. Pathol. 2007. - Vol. 171. -P.53-67.

138. Ogata N., Imaizumi M., Miyashiro M., Arichi M., Matsuoka M., Ando A., Matsumura M. Low levels of pigment epithelium-derived factor in highly myopic eyes with chorioretinal atrophy. // Am. J. Ophthalmol. 2005. - Vol. 140(5). -P.937-939.

139. Ogata N., Matsuoka M., Imaizumi M., Arichi M., Matsumura M. Decrease of pigment epithelium-derived factor in aqueous humor with increasing age. // Am. J. Ophthalmol. 2004. - Vol. 137(5). - P. 935-936.

140. Ogata N., Matsuoka M., Imaizumi M., Arichi M., Matsumura M. Decreased level of pigment epithelium-derived factor in eyes with neroretinal dystrophic diseases. // Am. J. Ophthalmol. 2004. - Vol. 137(6). - P.l 129-1130.

141. Ogata N., Nishikawa M., Nishimura Т., Mitsuma Y., Matsumura M. Unbalanced vitreous levels of pigment epithelium-derived factor and vascular endothelial growth factor in diabetic retinopathy. // Am. J. Ophthalmol. 2002. - Vol. 134(3). - P.348-353.

142. Ogata N., Wada M., Otsuji Т., Jo N., Tombran-Tink J., Matsumura M. Expression of pigment epithelium-derived factor in normal adult rat eye and experimental choroidal neovascularization. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2002. -Vol. 43(4).-P.l 168-1175.

143. Okun E., Cibic P. The role of photocoagulation in the thara of proliferative diabetic retinopathy. //Arch. Ophthalmol. 1966. - Vol. 75. - P.337-352.

144. O'Malley C., Heintz R. Vitrectomy via the pars plana: A new instrument system. //Trans. Рос. Coast Ophthalmol. Soc. 1972. - Vol. 53. - P.121-137.

145. Oosterhuis J.A., Journee-de Korver H.G., Kakebeeke-Kemme H.M, Transpupillary thermotherapy in choroidal melanomas. // Arch. Ophthalmol. -1995.-Vol. 113. -P.315-321.

146. Oosterhuis J.A., Journee-de Korver H.G., Keunen J.E.E. Transpupillary thermotherapy. Results in 50 patients with choroidal melanoma. // Arch. Ophthalmol. 1998.-Vol. 116. - P.l 57-162.

147. O'Reilly M.S., Boehm Т., Shing Y., et al. Endostatin: an endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor growth. // Cell. 1997. - Vol. 88. - P.277-285.

148. O'Reilly M.S., Holmgren S., Shing Y., et al. Angiostatin: a novel angiogenesis inhibitor that mediates the suppression of metastases by a Lewis lung carcinoma. //Cell. 1994. - Vol. 79. -P.315-328.

149. Oshima Y., Sakagushi H., Tano Y. Regression of iris neovascularization after intravitreal injection of bevacizumab in patients with proliferative diabetic retinopathy. // Am. J. Ophthalmol. 2006. - Vol. 142. -P.155-158.

150. Pang I.H., Zeng H., Fleenor D.L., Clark A.F. Pigment epithelium-derived factor protects retinal ganglion cells. // BMC Neurosci. 2007. - Vol. 8. - P.l 1-17.

151. Paskowitz D.M., Nune G., Yasumura D., et al. BDNF reduces the retinal toxicity of verteporfin photodynamic therapy. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -2004. Vol. 45(11). - P.4190-4196.

152. Pavan P., Folk J., Weingest T. et al. Diabetic rubeosis and panretinal photocoagulation. //Arch. Ophthalmol. 1983. - Vol. 101(6). - P.882-884.

153. Payman G., Dodoch N. Experimental vitrectomy: instrumention and surgical technique. //Arch. Ophthalmol. 1971. - Vol. 86. - P.548-551.

154. Payman G.A., Grisolano J.M., Palacio M.N. Intraocular photocoagulation with the argon-krypton laser. //Arch. Ophthalmol. 1980. - Vol. 98. - P.2062-2064.

155. Perry W.Y., Christine A.C. Chorioretinal atrophy: Bruch membrane changes and photoreceptor loss. // Ophthalmology. 2002. - Vol. 107. - P. 334343.

156. Peter A. Campochiaro. Ocular versus Extraocular Neovascularization: Mirror Images or Vague Resemblances. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2006. - Vol. 47. - P.462-474.

157. Puliafito C.A., Deutsch T.F., Boll J., Eng M., To K. Semiconductor laser endophotocoagulation of the retina. //Arch. Ophthalmol. 1987. - Vol. 5. - P.424-427.

158. Qaum Т., Xu Q., Joussen A.M. et al. VEGF-initiated blood-retinal barrier breakdown in early diabetes. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2001. — Vol. 42. -P.2408-2413.

159. Rehak J., Karhan J. Personal experience in the treatment of proliferative diabetic retinopathy using an argon laser. //Cesk-Oftalmol. 1992. - Dec. - Vol. 48(6). - p.440-446.

160. Reichel E., Berrocal A.M., Ip M. Transpupillary thermotherapy of subfoveal macular degeneration. // Ophthalmology. -1999. Vol. 106. - P.1908-1914.

161. Rickman D.W. Parvalbumin immunoreactivity is enhanced by brain-derived neurotrophic factor in organotypic cultures of rat retina. // J. Neurobiol. -1999.- Vol. 41(3). P.376-384.

162. Rivellese M.J., Baumal C.R. Photodynamic therapy of eye diseases. // J. Ophthalmic Nurs Technol. 2000. - May-Jun. - Vol. 19 (3). - P. 134-141.

163. Roberts W.G., Palade G.E. Neovasculature induced by vascular endothelial growth factor is fenestrated. // Cancer Res. 1997. - Vol. 57. -P.765-772.

164. Rosenfeld P.J., Fung A.E., Puliafito C.A. Optical coherence tomography findings after an intravitreal injection of bevacizumab (avastin) for macular edema from central retinal vein occlusion.// Ophthal. Surg. Lasers. 2005. - Vol. 36. -P.336-339.

165. Rosenfeld P.J., Moshfeghi A.A., Puliafito C.A. Optical coherence tomography findings after an intravitreal injection of bevacizumab (avastin) for neovascular age-related macular degeneration.// Ophthal. Surg. Lasers. 2005. -Vol. 36.-P.331-335.

166. Roth D.B., Downie A.A., Charles S.T. Visual results after submacular surgery for neovascularization in age-related macular degeneration.// Ophthal. Surg. Lasers. 1997. - Vol. 28(11). - P.920-925.

167. Sato J., Kamata A., Matsu M. Clinical studies on maculor changes in diabetic retinopathy. Part I. The classification and maculor changes in diabetic retinopathy. //Acta. Soc. Ophthalmol. Jap. 1981. - Vol. 85(9). - P. 1408-1474.

168. Schmidt- Erfurth U., Hasan T. Mechanismus of Action of Photodynamic Therapy with Verteporfin for the Treatment of Age Related Macular Degeneration. // Surv. Ophthalmol. 2000. - Vol. 45. - P. 195- 214.

169. Schmidt-Erfurth U., Miller J., Sickenberg M., Bunse A. Photodynamic therapy of subfoveal choroidal neovascularization: clinical and angiographic examples. // Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 1998. - Vol. 236(5). - P.365-374.

170. Shields C.L. Transpupillary thermotherapy in the management of choroidal melanoma // Ophthalmology. 1996. - Vol. 103. - P.1642-1650.

171. Shields C.L., Shields J.A., Cater J., Transpupillary thermotherapy for choroidal melanoma. Tumor control and visual results in 100 consecutive cases. // Ophthalmology. 1998. - Vol. 105. - P.581-590.

172. Shima D.T., Gougos A., Miller J.W. et al. Cloning and mRNA expression of vascular endothelial growth factor in ischemic retinas of Macaca fascicularis. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1996. - Vol. 37. -P.1334-1340.

173. Simo R., Carrasco E., Garcia-Ramirez M., Hernandez C. Angiogenic and antiangiogenic factors in proliferative diabetic retinopathy. // Curr. Diabetes Rev. -2006.-Vol. 2(1). -P.71-98.

174. Simorre-Pinatel V., Guerrin M., Chollet P. et al. Vasculotropin-VEGF stimulates retinal capillary endothelial cells through an autocrine pathway.// Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1994. - Vol. 35. - P.3393-3400.

175. Sivalingam A., Kenney J., Brown G. C., Benson W. E., Donoso L. Basic fibroblast growth factor levels in the vitreous of patients with proliferative diabetic retinopathy. //Arch. Ophthalmol. 1990. - Vol. 108. - P.869-872.

176. Smiddy W.E. Diode endolaser photocoagulation. //Arch. Ophthalmol. -1992.-Vol. 110.-P.l 172-1174.

177. Smith L.E., Wesolowski E. Oxygen-induced retinopathy in the mouse. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1994. - Vol. 35. - P.l01-111.

178. Smith W., Assin K.J., Klein R., et al. Risk factors for age-related macular degeneration. Pooled findings from three continents. // Ophthalmology. 2001. -Vol. 108. -P.697-704.

179. Spaide R.F., Fisher Y.L. Intravitreal bevacizumab (Avastin) treatment of proliferative diabetic retinopathy complicated by vitreous hemorrhage. // Retina. 2006. - Vol. 26. - P.275-278.

180. Spaide R.F., Laud K., Fine H.F. Intravitreal bevacizumab treatment of choroidal neovascularization secondary to age-related macular degeneration. // Retina. 2006. - Vol. 26(4). - P.383-390.

181. Steele F.R., Chader G.J., Johnson L.V., Tombran-Tink J. Pigment epithelium-derived factor: neurotrophic activity and identification as a member of the serine protease inhibitor gene family. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1993. Vol. 90. -P. 1526-30.

182. Stellmach V., Crawford S.E., Zhou W., Bouck N. Prevention of ischemia-induced retinopathy by the natural ocular antiangiogenic agent pigment epithelium-derived factor. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. - Vol. 98. - P.2593-2597.

183. Stone J., Itin A., Alon T. et al. Development of retinal vasculature is mediated by hypoxia-induced vascular endothelial growth factor (VEGF) expression by neuroglia.// J. Neurosci. 1995. - Vol. 15. - P.4738-4747.

184. Tanawaki Т., HarashimaN., Becerra S., Chader G., Etcheberrigary R., Schwartz J. Pigment epithelium-derived factor protects cultured cerebellar granule cells against glutamate-induced neurotoxicity. // J. Neurochem. 1997. - Vol. 68. - P.26-32.

185. Taniwki Т., Harashima N., Chader G., Schwartz J. Pigment epithelium-derived factor is a survival factor for cerebellar granule cells in culture. // J. Neurochem. 1995. - Vol. 64. - P.2509-2517.

186. Thieme H., Aiello L.P., Takagi H. et al. Comparative analysis of vascular endothelial growth factor receptors on retinal and aortic vascular endothelial cells.// Diabetes. 1995. - Vol. 44. - P.98-103.

187. Thomas E. L. // 24-th Annual ASRS Meeting/ 6-th Annual EVRS Meeting. Cannes, 2006. - P.83-88.

188. Thompson J.T. Retinal pigment epithelial tear after transpupillary thermotherapy for choroidal neovascularization. // Am. J. Ophthalmol. 2001. - Vol. 131. - P.662-664.

189. Tobe Т., Okamoto N., Vinores M.A. et al. Evolution of neovascularization in mice with overexpression of vascular endothelial growth factor in photoreceptors. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -1998. Vol. 39. - P.180-188.

190. Tolentino M.J., Miller J.W., Gragoudas E.S. et al. Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate. // Arch. Ophthalmol. 1996. - Vol. 114. -P.964-970.

191. Tombran-Tink J. The neuroprotective and angiogenesis inhibitory serpin, PEDF: new insights into phylogeny, function and signaling. // Front. Biosci. -2005.-Vol. 10. -P.2131-49.

192. Tombran-Tink J., Chader G.J., Johnson L.V. PEDF: a pigment epithelium-derived factor with potent neuronal differentiative activity. // Exp. Eye Res. 1991. -Vol. 53.-P.411-414.

193. Tombran-Tink J., Johnson L.V. Neuronal differentiation of retinoblastoma cells induced by medium conditioned by human RPE cells. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1989.-Vol. 30.-P.1700-1707.

194. Tombran-Tink J., Shivaram S., Chader G., Johnson L., Bok D. Expression, secretion, and age-related downregulation of pigment epithelium-derived factor, a serpin with neurotrophic activity. // J. Neurosci. 1995. - Vol. 15. - P.4992-5003.

195. Tong J.P., Yao Y.F. Contribution of VEGF and PEDF to choroidal angiogenesis: a need for balanced expressions. //Clin. Biochem. 2006. — Vol. 39(3). — P.267-276.

196. Van Wijngaarden P., Coster D. J., Williams K. A. Inhibitors of ocular neovascularization: promises and potential problems. // J. A. M. A. 2005. -Vol. 293.-P. 1509-1513.

197. Verma D. Pathogenesis of diabetic retinopathy-the missing link? // Med. Hypotheses. 1993. - Vol. 41(3). - P.205-210.

198. Williams D.F., Bennett S.R. et al. // 24-th Annual ASRS Meeting/ 6-th Annual EVRS Meeting. Cannes, 2006. - P.82-87.

199. Williams R.A., Brady B.L., Thomas R.J. The psychosocialimpact of macular degeneration. // Arch. Ophthalmol. 1998. - Vol. 116(4). - P.514-520.

200. Wong W.T., Rex T.S., Auricchio A., Maguire A.M., Chung D., Tang W., Bennett J. Effect of over-expression of pigment epithelium derived factor (PEDF) on developing retinal vasculature in the mouse. //Mol. Vis. 2004. - Vol. 10. - P.837-844.

201. Wu Y.Q., Notario V., Chader G.J., Becerra S.P. Identification of Pigment Epithelium-Derived Factor in the Interphotoreceptor Matrix of Bovine Eyes. //Protein Expr. Purif. 1995. - Vol. 6. - P. 447^156.

202. Yoshida A., Yoshida S., Khalil A.D., et al. Role of NF-kappaB-mediated interleukin-8 expression in intraocular neovascularization. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1998. - Vol. 39. — P.1097—1106.

203. Zarbin M.A. Current concepts in the pathogenesis of age-related macular degeneration. // Arch. Ophthalmol. 2004. - Vol. 122. - P.598-614.

204. Zweng H.C., Little H.L., Hammond A.H. Complications of argon laser photocoagulation in diabetic retinopathy. //Trans. Am. Acad. Ophthalmol. 1974. -Vol. 78. - P.195-198.

205. Zweng H.C., Little H.L., Peabody R.R. Laserphotocoagulation of macular lesions. // Trans. Am. Acad. Ophthal. Otolaryngol. -1968. Vol. 72(3). - P.377-388.