Детекция и мониторинг клональных перестроек генов тяжелых цепей иммуноглобулинов у больных множественной миеломой тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.29, кандидат медицинских наук Жеребцова, Вера Анатольевна

• Жеребцова, Вера Анатольевна
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Жеребцова, Вера Анатольевна

Список используемых сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Характеристика больных.

2.2. Программы химиотерапии, используемые у больных ММ.

2.3. Методы исследования.

2.4. Статистический анализ полученных данных.

2.5. Основные понятия.

Глава 3. Результаты и их обсуждение.

3.1. Результаты клинического исследования.

3.2. Результаты детекции реаранжировок генов IgH.

3.3. Мониторинг минимальной резидуальной болезни.

3.4. Результаты и обсуждение статистического анализа.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Детекция и мониторинг клональных перестроек генов тяжелых цепей иммуноглобулинов у больных множественной миеломой»

Актуальность проблемы.

В лечении множественной миеломы (ММ) выделяют два основных химиотерапевтических подхода. Принципом так называемой стандартной терапии миеломной болезни является длительное, практически непрерывное применение химиопрепаратов в небольших дозах (схемы «МП», «М2»). Программы высокодозной химиотерапии (ВХТ) основаны на принципе интенсификации дозы химиотерапевтического воздействия. Интенсивное лечение ММ рассчитано на максимальное уменьшение опухолевой массы на первых этапах ВХТ с последующей трансплантацией аутологичных или аллогенных стволовых клеток крови (СКК) или костного мозга (КМ) в качестве консолидации достигнутого эффекта и длительным поддерживающим лечением интерфероном-а (ИНФ-а). Применение интенсивных программ химиотерапии и трансплантации аутологичных или аллогенных стволовых клеток у больных ММ позволило существенно увеличить частоту достижения полных ремиссий (ПР) и продолжительность жизни больных. Чувствительность стандартных методов оценки эффективности лечения ММ (морфологическое исследование костного мозга и иммунохимическое исследование сыворотки крови и мочи) оказалась недостаточной в связи с существенной редукцией опухолевой массы. Появилась необходимость в дополнительном применении более чувствительных методов детекции минимальной резидуальной болезни (МРБ).

Одним из методов, обладающих достаточно высокой чувствительностью для обнаружения опухолевого клона и отслеживания в динамике остаточных миеломных клеток, является полимеразная цепная реакция (ПЦР). В основе оценки кпональности и мониторинга МРБ при ММ лежит биологическая особенность лимфоидной ткани, отличающая ее от любой другой наличием в геноме каждого лимфоцита уникально перестроенного гена тяжелых цепей иммуноглобулинов (IgH). ПЦР-анализ в подавляющем большинстве случаев дает возможность маркировать опухолевый клон по таким уникальным перестройкам. Метод ПЦР позволяет определить остаточные опухолевые клетки с высокой чувствительностью. Большим преимуществом данного подхода является также возможность не только качественной, но и полуколичественной или количественной оценки опухолевого клона.

Использование метода ПЦР для определения минимальной резидуальной болезни способствует более полной оценке результативности режимов химиотерапии. Клиническая значимость мониторинга МРБ в настоящее время достоверно показана для острых и хронических лейкозов. Так в частности, результаты молекулярных исследований при данных заболеваниях широко используют для прогнозирования клинико-гематологических рецидивов и определения показаний к возобновлению или смене специальной терапии. Роль мониторинга МРБ у больных ММ пока остается неопределенной. Кроме того, недостаточно изучены биологические особенности опухоли. Именно эти нерешенные вопросы послужили поводом для проведения нашего исследования.

Цель исследования:

Разработка методов оценки эффективности лечения множественной миеломы с использованием высокочувствительных индивидуальных ПЦР-систем для тестирования опухолевого клона.

Задачи исследования:

1. Разработать метод детекции клональных перестроек генов тяжелых цепей иммуноглобулинов у больных парапротеинемическими гемобластозами, основанный на обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции.

2. Определить нуклеотидную последовательность фрагментов, соответствующих клонально перестроенным вариабельным регионам генов иммуноглобулинов и проанализировать их на наличие мутаций.

3. Определить частоту обнаружения клональных перестроек генов тяжелых цепей иммуноглобулинов у больных парапротеинемическими гемобластозами и изучить характер использования семейств VH-генов.

4. Создать индивидуальные пациент-специфичные ПЦР-системы для тестирования опухолевого клона и провести с их использованием динамическое исследование резидуальной болезни в ходе лечения множественной миеломы.

5. Сравнить информативность исследований перестроек генов иммуноглобулинов в образцах костного мозга и периферической крови.

6. Оценить прогностическую значимость выявления остаточной популяции опухолевых клеток в образцах лейкоконцентратов.

7. Определить этапы селекции больных множественной миеломой в ходе проведения интенсивной химиотерапии и провести анализ эффективности лечения на различных этапах.

Научная новизна:

1. Установлено соответствие частоты встречаемости различных семейств VH-генов у больных множественной миеломой с частотой их использования в нормальном В-клеточном репертуаре.

2. Детально охарактеризованы и представлены в GenBank NCBI нуклеотидные последовательности клонально перестроенных VH-генов у 38 больных множественной миеломой.

3. Отмечено частое использование вариабельного сегмента VH1-69.

4. Показана высокая стабильность структуры перестроенных генов тяжелых цепей иммуноглобулинов при развитии рецидива множественной миеломы и на разных стадиях заболевания.

5. Установлено, что отсутствие сывороточного парапротеина у больных с миеломой Бенс-Джонса и несекретирующей формой миеломы обусловлено возникновением аномальных стоп-кодонов и frameshift-мутаций.

Практическая ценность:

1. Доказана целесообразность использования в качестве молекулярного маркера опухоли у больных парапротеинемическими гемобластозами клональных перестроек генов тяжелых цепей иммуноглобулинов.

2. Созданы высокочувствительные, индивидуальные пациент-специфичные ПЦР-системы для мониторинга минимальной резидуальной болезни у пациентов с множественной миеломой.

3. Определены этапы селекции больных в ходе проведения интенсивной химиотерапии и показаны основные причины снятия пациентов с высокодозных программ лечения множественной миеломы.

4. Продемонстрированы различные методические подходы, использованные для повышения чувствительности детекции минимальной резидуальной болезни.

Положения, выносимые на защиту:

1. Клональная реаранжировка генов тяжелых цепей иммуноглобулинов методом обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции выявлена у 90% первичных больных парапротеинемическими гемобластозами.

2. Характер использования генов вариабельного региона в исследуемой группе соответствует частоте использования VH-генов в нормальном репертуаре В-клеток.

3. Степень гомологии с терминальными VH-генами составляет 74,2%-96%, что свидетельствует о прохождении соматического гипермутирования.

4. Клонально перестроенный ген IgH в опухолевых клетках у больных ММ отличается высокой стабильностью на разных стадиях болезни и при развитии рецидива.

5. Созданы высокочувствительные, индивидуальные пациент-специфичные ПЦР-системы для мониторинга минимальной резидуальной болезни у пациентов с множественной миеломой

6. После курсов «VAD» и циклофосфана в высоких дозах у 100% больных в костном мозге обнаруживаются остаточные опухолевые клетки. После курса «EDAP» молекулярный маркер выявляется у 77,8%, после аутотрансплантации стволовых клеток крови - у 67% больных.

7. В лейкоконцентратах опухолевые клетки с клональными перестройками генов тяжелых цепей иммуноглобулинов обнаружены у 64% больных ММ.

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Жеребцова, Вера Анатольевна

Выводы:

1. Кпональная реаранжировка генов тяжелых цепей иммуноглобулинов выявлена у 90% больных парапротеинемическими гемобластозами. Перестройки VH-генов в опухолевых клетках не обнаружены только у больных миеломой Бенс-Джонса и несекретирующей миеломой.

2. Вероятность участия различных генных сегментов в формировании полноценного вариабельного гена иммуноглобулинов в опухолевых клетках у больных множественной миеломой соответствует таковой в нормальном репертуаре В-клеток, однако среди VH-генов первого семейства обращает на себя внимание аномально высокая частота использования сегмента VH1-69 (55,6%).

3. Установлено, что опухолевые клетки всех больных множественной миеломой прошли этап соматического гипермутирования. Степень гомологии с терминальными VH-генами составила 74,2-96%.

4. Нуклеотидная последовательность перестроенных генов IgH в опухолевых клетках у больных множественной миеломой отличается высокой стабильностью на разных этапах эволюции опухолевого клона, в нем не накапливаются дополнительные изменения структуры, в том числе соматические мутации.

5. Показано, что в опухолевых клетках всех больных парапротеинемическими гемобластозами в нуклеотидных последовательностях вариабельных генов IgH прошел процесс соматического гипермутирования.

6. В ходе терапии множественной миеломы молекулярный маркер опухоли в образцах периферической крови перестает обнаруживаться значительно раньше, чем в костном мозге, поэтому для мониторинга минимальной резидуальной болезни целесообразно использовать образцы костного мозга.

7. Программная химиотерапии (VAD, HDCph) ни у одного из больных не привели к эрадикации опухолевого клона. Дальнейшая интенсификация лечения (EDAP) привела к уменьшению вероятности обнаружения молекулярного маркера опухоли до 77,8%. Молекулярная ремиссия констатирована у 5 больных, в том числе у 2-х на фоне «стандартного» воздействия.

8. В лейкоконцентратах, полученных методом лейкафереза после предшествующей стимуляции гранулоцитарным колониестимулирующим фактором, опухолевые клетки могут быть обнаружены более чем у половины от общего числа больных (64%). Вероятность их обнаружения напрямую зависит от степени редукции опухолевого клона до проведения сбора СКК.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Жеребцова, Вера Анатольевна, 2008 год

1. Абелев Г.И. Механизмы дифференцировки и опухолевый рост. Биохимия 2000, 65, 127-13.

2. Айала Ф.Дж., Кигер Дж.А. Современная генетика. 1988; т. 1. Изд. Мир, Москва.

3. Андреева Н.Е. Вялотекущая множественная миелома. Проблемы гематологии 1983; 4: 55-58.

4. Андреева Н.Е., Чернохвостова Е.В. Иммуноглобулинопатии. М.: Медицина 1985

5. Андреева Н.Е. Диагностика и лечение множественной миеломы. М. Ньюамед-АО 1998.

6. Андреева Н.Е. Парапротеинемические гемобластозы. Руководство по гематологии под редакцией А.И. Воробьева. М.: Медицина, 1985; 290-313.

7. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж. и др. Молекулярная биология клетки. Изд. Мир, 1994, том 3, 465-481.

8. Барышников А.Ю. Программированная клеточная смерть (апоптоз). Клиническая онкогематология под редакцией М.А. Волковой. Изд. Медицина 2001, глава 4, 36-41.

9. Воробьев А.И. Общий патогенез гемобластозов. Руководство по гематологии, том 1, с. 147-150.

10. Кондратенко И.В. Клеточные основы иммунного ответа. Вопросы гематологии, онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2003; 3: 71-78.

11. Кузнецов С.В. Апоптоз и некоторые механизмы его регуляции. Проблемы гематологии, 1998; 2: 22-27.

12. Мелешко А.Н., Потапнев М.П. Оценка реаранжировки генов иммуноглобулинов и Т-клеточного рецептора при лимфопролиферативных заболеваниях: методология и клиническое значение. Гематология и трансфузиология 2006; 2: 34-41.

13. Никитин Е.А., Ленива Е.А., Судариков А.Б. Роль молекулярных методов в диагностике и мониторинге лимфопролиферативных заболеваний. Гематология и трансфузиология 2001; 3: 19-26.

14. Никитин Е.А., Пивник А.В., Судариков А.Б. Сравнение форм хронического лимфолейкоза в зависимости от мутационного статуса генов вариабельного региона иммуноглобулинов. Тер. архив 2000; 7: 52-56.

15. Татосян А.Г., Зуева Э.Ш. Механизмы активации онкогенов. Клиническая онкогематология под редакцией М.А. Волковой. Изд. Медицина 2001, глава 2, 22-28.

16. Цикалов В.А., Журавлев С.В., Мокеева Р.А., Козинец Г.И. Клиническое значение иследования пролиферативной активности плазматических клеток при множественной миеломе. Проблемы гематологии 1983; 4: 36-40.

17. Aktan М., Akkaya A., Dogan О. Chronic lymphocytic leukemia and multiple myeloma in the same patient: case report. Leuk. Lymphoma 2003; 44: 1421-1424.

18. Alexanian R., Bonnet J., Gehan E., et al. Combination chemotherapy for multiple myeloma. Cancer 1972; 30: 382-389.

19. Alexanian R., Haut A., Khan A. Treatment of multiple myeloma: Combination therapy with different melphalan dose regiments. J. Am. Med. Assoc. 1969; 208:1680-1685

20. Alexanian R, Dimopoulos M. The treatment of multiple myeloma. N. Engl. J. Med. 1994; 330:484-489.

21. Alexanian R., Barlogie В., Tucker S., et al. VAD-based regimens as primary treatment for multiple mueloma. 1990; 33: 86-89.

22. Alexanian R., Dimopoulos M., Smith T. Limited value of myeloblative therapy for late myeloma. Blood, 1994; 83: 512-516.

23. Alexanian R., Barlogie В., Tucker S., et al. VAD-based regimens as primary treatment for multiple mueloma. 1990; 33: 86-89.

24. Alt F.W., Oltz E.M., Young F., et al. VDJ recombination. Immunol. Today 1992; 13: 306-313.

25. Anderson K.C., Lust J.A. Role of cytokines in multiple myeloma. Semin. Hematolog. 1999; 36: 14-20.

26. Ashcroft J., Rawstron A.C., Owen R.G., et al. Penotyping in myeloma: identification of a rare CD19+56 -subgroup. Blood 2000; 96: 156a.

27. Attal M., Harousseau J.L., Facon Т., et al. Single versus double transplantation in myeloma: a prospective randomized trial of Intergroupe Francophone du Myeloma. Blood 2000; 96: 557a.

28. Attal M., Harousseau J-L., Stoppa A-M. A prospective, randomized trial of autologous bone marrow transplantation and chemotherapy in multiple myeloma. N. Engl. J. Med. 1996; 335: 91-97.

29. Attal M., Harousseau J.L. Autologous transplantation in multiple myeloma. Gahrton G., Durie B.G.M., Arnold, London, 1996, 182.

30. Avet-Loiseau H., Gerson F., Magrangeas F., et al. Rearrangements of the c-myc oncogene are present in 15% of primary human multiple myeloma tumors. Blood 2001; 98: 3082-3086.

31. Avet-Loiseau H., Daviet A., Sauner S., et al. Chromosome 13 abnormalities in multiple myeloma are mostly monosomy 13. Br. Journal of Haematol. 2000; 111: 1116-1117.

32. Avet-Loiseau H. Genetics of multiple myeloma. Haematology 2005; 1: 206-210.

33. Bahler D.W., Campbell M.J., Hart S. lg VH gene expression among human follicular lymphoma. Blood 1991; 78: 1561-1668.

34. Bakkus M.H.C., Van-Rirt I., et al. Evidence that the clonogenic cell in multiple myeloma originates from pre-switched but somatically mutated B-cell. Br.J.Haematol. 1994; 87: 68-74.

35. Bakkus M.H., Heirman C., Van-Rirt I., et al. Evidence that multiple myeloma lg heavy chain VDJ genes contain somatic mutations but show no intraclonal variation. Blood 1992; 80: 2326-2335.

36. Bakkus M.H.C., Bouko J., Samson D., et al. Post-transplantation tumor load in bone marrow, as assessed by quatitative ASO-PCR, is a prognostic parameter in multiple myeloma abstract. Br. J. Haematol. 2004; 126: 665.

37. Barlogie В., Alexanian R., Dicke K.A. et al. High-dose chemoradiotherapy and autologous bone marrow transplantation for resistans multiple myeloma. Blood 1987; 70: 869-872.

38. Barlogie В., Jagannath S., Desican K.R.: Total Therapy with Tandem Transplants for Newly Diagnosed Multiple Myeloma. Blood 1999; 93: 55-65.

39. Barlogie В., Spencer Т., Tricot G., et al. Long term follow-up of 169 patients receiving a phase II trial of singl agent thalidomide for advanced and refractory multiple myeloma. Blood 2000; 96: 514a.

40. Barlogie В., Shaughnessy J., Tricot G., et al. Treatment of multiple myeloma. Blood 2004; 103: 20-32.

41. Barton J.C. Thalidomide and dexamethasone therapy of myeloma in a patient with previously untreated B-chronic lymphocytic leukemia. Am. J. Hematol. 2003; 74: 205207.

42. Bataille R., Durie B.G.M., Grenier J., et al. Serum p2 microglobulin and survival duration in multiple myeloma: a simple reliable marker for staging. Br. J Hematol. 1983; 55:439-447.

43. Bataille R., Grenier J., Sany J. Beta-2-microglobulin in myeloma: Optimal using in staging, prognosis and threatment. Blood 1984; 63: 472-476.

44. Bataille R., Boccadoro M., Klein B. C-reactive protein and beta-2-microglobulin produce a simple and powerful myeloma staging system. Blood 1992; 80: 733-737.

45. Billadeau D., Quam L., Thomas W., et al. Detection and quantitation of malignant cells in peripheral blood of multiple myeloma patients. 1992; 7: 1818-1824.

46. Billadeau D., Blackstadt M., Greipp P. Analysis of B-lymphoid malignancies using allele-specific polymerase chain reaction: a technique for sequential quantitation of residual didease. Blood 1991; 78: 3021-3029.

47. Bensinger W.I., Buckner C.D., Anasetti C., et al. Allogeneic marrow transplantation for multiple myeloma: an analysis of risk factors on outcome. Blood 1996; 88: 27872793.

48. Bensinger W.I., Buckner D., Gahrton G. Allogeneic stem cell transplantation for multiple myeloma. Hematol. Oncol. Clin. Norf. Am. 1997; 11: 147-157.

49. Bergel F., Stock J.A. Ann. Rep. Brit. Emp. Cancer. Comparign. 1953; 31: 607.

50. Bergsagel D.E., Wong O., Bergsagel P.L.: Benzene and multiple myeloma: appraisal of scientific evidence. Blood 1999; 94: 1174-1182.

51. Bergsagel P.L., Kuehi W.M. Chromosome translocations in multiple myeloma. Oncogene 2001; 20: 5611-5622.

52. Bergsagel P.L., Kuehl W.M. Crinical roles for immunoglobulin translocations and cyclin D dysregulation in multiple myeloma. Immunol. Rev. 2003; 194: 96-104.

53. Bergsagel D.E., Sprague C.C., Austin C., et al. Evaluation of new chemotherapeutic agents in the treatment of multiple myeloma: IV. L-Phenylalanin mustard (NC-8806) Cancer Chemoter. Rep. 1962; 21: 87-99.

54. Bezieau S., Aver-Loiseau H., Moisan J.P., et al. Activating Ras mutations in patients with plasma-cell disorders: a reappraisal. Blood 2003; 100: 1101-1102.

55. Blade J., Samson D., Reece D., et al. Criteria for evaluating disease response and progression in patients with multiple myeloma treated by high-dose therapy and haematopoietic stem cell transplantation. Br. J. Haematol. 1998; 102: 1115-1123.

56. Blokhin N.N., et al. Clinical experiences with sarcolysin in neoplastic diseases. Ann. NY Acad. Sci. 1958; 68: 1128-1132.

57. Brisco M.J., Tan L.W., Orsborn A.M. Development of a highly sensitive assay, based on the polymerase chain reaction, for rare B-Iimphocyte clones in a polyclonal population. Br. J. Haematol. 1990; 75: 163-167.

58. Browman G.P., Bergsagel D., Sicheri D., et al. Randomized trial of interferon maintenance in multiple myeloma. A study of the National Cancer Institute of Canada, Clinical Trials Group. J. Clin. Oncol. 1995; 13: 2354.

59. Carlo-Stella C., Mangon L., Potti G.P. Techniques for detection minimal residual disease. Leukemia and Lymph. 1995; 18: 75-80.

60. Castryck H., Van Den Driessche M., Hagemeijer A. Coexistence of light chain disease and lymphocytic leukemia, a complex karyotype with a rapid fatal outcome. Clin. Lab. Haematol. 2006; 28: 138-140.

61. Cavo M., Galieni P., Zuffa E., et al. Prognostic variables and clinical staging in multiple myeloma. Blood 1989; 74: 1774-1780.

62. Cavo M., Terragna C., Martinelli G., et al. Molecular monitoring of minimal residual disease in patients in long-term complete remission after allogeneic stem cell transplantation for multiple myeloma. Blood 2000; 96: 355-357.

63. Cavo M., Cellini C., Zamagni E., et al. Superiority of double over single autologous stem cell transplantation as first-line therapy for multiple myeloma. Blood 2004; 103: 155a (abstr.)

64. Cavo M., Zamagni E., Tosi P., et al. First-line therapy with thalidomide and dexamethasone in preparation for autologous stem cell transplantation for multiple myeloma. Haematologica 2004; 89: 826-831.

65. Chiecchio L., Protheroe R.C., Ibrahim A.H., et al. Deletion of chromosome 13 detected by conventional cytogenetics is a critical prognostic factor in myeloma. Leukemia 2006; 20: 1610-1617.

66. Child J., Morgan G., Davies f., et al. High-dose therapy with hematopoietic stem cell transplantation for multiple myeloma. N. Engl. J. Med. 2003; 348: 1875-1883.

67. Child J.A., Morgan G.J., Davies F.E., et al. High-dose chemotherapy with haematopoietic stem cell rescue for multiple myeloma. N. Engl. J. Med. 1996; 384: 1875-1883.

68. Chronic Leukemia-Myeloma Task Force National Cancer Institute. Proposed guidelines for protocol studies. II Plasma cell myeloma. Cancer Chemother. Rep. 1973; 4: 145-157.

69. Cigudosa J.C., Rao P.H., Calasanz M.J., et al. Characterization of nonrandom chromosomal gains and losses in multiple myeloma by comparative genomic hybridization. Blood 1998; 91: 3007-3010.

70. Ciudad J., San Miguel J.F., Lopez-Berges M.C. et al. Prognostic value of immunophenotypic detection of minimal residual disease in acute lymphoblastic leukemia. J. Clin. Oncol. 1998; 16: 3774-3781.

71. Cook G.P., Tomlinson I.M. The human immunoglobulin VH repertore. Immunol. Today 1995; 16: 237-242.

72. Cook G.P., Tomlinson I.M., Walter G., et al. A map of the human immunoglobulin VH locus completed by analysis of the telomeric region of chromosome 14q. Nature Genet. 1994; 7: 162-170.

73. Corradini P., Cavo M., Lokhorst H., et al. Molecular remission after myeloablative allogeneic stem cell transplantation predicts a better relapse-free survival in patients with multiple myeloma. Blood 2003; 102: 1927-1929.

74. Corradini P., Voena C., Tarella C., et al. Molecular and clinical remissions in multiple myeloma: Role of autologous and allogeneic transplantation of hematopoietic cells. J. of Clinic. Oncology 1999; 17: 208-215.

75. Corradini P., Voena C., Astolfi M., et al. High-dose Sequential Chemoradiotherapy in Multiple Myeloma: Residual Tumor Cells are Detectable in Bone Marrow and Peripheral Blood Cell Harvests and After Autografting. Blood 1995; 85: 1596-1602.

76. D'Amato R.J., Loughnan M.S., Flynn E. & Folkman J. Thalidomide is an inhibitor of angiogenesis. Proceedings of the National Academy of the USA. 1994; 91: 40824085.

77. Davies F.E., Raje N., Hideshima Т., et al. Thalidomide and immunomodulatory derivatives augment natural killer cell cytotoxicity in multiple myeloma. Blood 2001; 98: 210-216.

78. Dewald G., Therneau Т., Larson D., et al. Relationship of patient survival and chromosome anomalies detected in metaphase and/or interphase cells at diagnosis myeloma. Blood 2005; 106: 3553-3558.

79. Dewald G., Kyle R., Hicks G., et al. The clinical significance of cytogenetic studies in 100 patients with multiple myeloma, plasma cell leukaemia or amyloidosis. Blood 1985; 66: 380-390.

80. Dewald G., Therneau Т., Larson D., et al. Relationship of patient survival and chromosome anomalies detected in metaphase and/or interphase cells at diagnosis myeloma. Blood 2005; 106: 3553-3558

81. Deanne M.D., Norton J.D. Immunoglobulin heavy chain variable region family usage is independent of tumor cell phenotype in human В lineage leukemias. Eur. J. Immunol. 1990; 20: 2209-2217/

82. Dimopoulos M.A., Anagnostopoulos A., Terpos E. Novel drugs in the treatment of multiple myeloma. Hematology 2005; 1: 211-215. :

83. Dolken G. Detection of minimal residual disease. Adv. Cancer Res. 2001; 82: 133185.

84. Drach J., Angerler J., Schuster J., et al. Interphase fluorescence in situ hybridization identifies chromosomal abnormalities in plasma cells from patients with monoclonal gammopathy of undetermined significance. Blood 1995; 86: 3915-3921.

85. Drach J., Ackermann J., Fritz E., et al. Presence of a p53 gene deletion in patients with multiple myeloma predicts for short survival after the conventional-dose chemotherapy. Blood 1998; 92: 802-809.

86. Drach J., Sagaster V., Ackerman J., et al. Prognostic factors for multiple myeloma. Haematol. 2006; 2: 196-200.

87. Duke V.M, Gandini D., Sherrington P.D. VH gene usage differs in gemline and mutated B-cell chronic lymphocytic leukemia. Haematologica 2003; 88: 1259-71/

88. Durie B.G.M., Salmon S.E. Clinical staging system for multiple myeloma: Correlation of measured myeloma cell mass with presenting clinical features, response to treatment, and survival. Cancer 1975; 36: 842.

89. Dune B.G.M., Salmon S.E., Moon Т.Е.: Blood 1980; 55: 364-372.

90. Durie B.G.M., Stock-Novack D., Salmon S.E. Prognostic value of pretreatment serum 32-microglobulin in myeloma: Southwest Oncology Group Study. Blood 1990; 75:823-830.

91. Durie B.G., Harousseau J.-L., Miguel J.S., et al. International uniform response criteria for multiple myeloma. Leukemia 2006; 20:1467-1473.

92. Fassas A.B.-T., Spencer Т., Sawyer J., et al. Both hypodiploidy and deletion of chromosome 13 independently confer poor prognosis in multiple myeloma. Br. J. Haematol. 2002; 118: 1041-1047.

93. Fenk R., Ak M., Kobbe G., et al. Levels of minimal residual disease detected by quantitative molecular monitoring herald relapse in patients with multiple myeloma. Hematologica 2004; 89: 557-565.

94. Fonseca R., Harrington D., Oken M. Prognostic significance of 13q deletions and t(11;14)(q13;q32) in myeloma: an interphase FISH study of 351 patients entered into the Eastern Oncology Group E9487 clinical trial. Blood 2000; 96: 547a.

95. Fonseca R., Blood E., Greipp P. Myeloma and the t(11;14)(q13;q32); evidence for biologically defined unique subset of patients. Blood 2002; 99: 3735-3746.

96. Fonseca R., Biley R.J., Ahmann G.J. et al. Genomic abnormalities in monoclonal gammopathy of undetermined significance. Blood 2002; 100: 1417-1424.

97. Fonseca R., Blood E., Rue M., et al. Clinican and biologic implications of recurrent genomic aberration in myeloma. Blood 2003; 101: 4569-4575.

98. Fonseca R., Debes-Marun C.S., Picken E.B., et al. The recurrent IgH translocations are highly associated with nonhyperdiploid varian multiple myeloma. Blood 2003; 102: 2562-2567.

99. Gahrton G. Allogeneic stem cell transplantation in multiple myeloma-an update of EBMT regisry. VI International Workshop on Multiple Myeloma. Boston; USA 1997.

100. Gahrton G. Allogeneic bone marrow transplantation in multiple myeloma. Pathol. Biol. 1999; 47: 188-191.

101. Galimberti S., Morabito F., Guerrini F., et al. Peripheral blood stem cell contamination evaluated by a highly sensitive molecular method fails to predict outcome of autotransplanted multiple myeloma patients. Br. J. Haematol. 2003; 120: 405-412.

102. Galimberti S., Benedetti E., Morabito F., et al. Prognostic role of minimal residual disease in multiple myeloma patients after non-myeloablative allogeneic stem cell transplantation in multiple myeloma. Leuk. Res. 2005; 29: 961-966.

103. Gonzalez D., Gonzales M., Balanzategui A. Molecular characteristics and gene segment usage in IGH gene rearrangements in multiple myeloma. The Hematology J. 2005; 90: 906-913.

104. Gore M.E., Selby P.J., Viner C., et al. Intensive treatment of multiple myeloma and criteria for complete remission. Lanset 1989; II: 879-881.

105. Gould J., Alexanian R., Goodacre A., et al. Plasma cell karyotype in multiple myeloma. Blood 1988; 7: 453-456.

106. Greipp P.R., Lust J.A., O'Fallon M. Plasma cell labeling index and p2-microglobulin predict survival independent of thymidine kinase and C-reactive protein in multiple myeloma. Blood 1993; 81: 3382.

107. Greipp R.R., San Miguel J.F., Fonseca R., et al. Development of an International Prognostic Index (IPI) for myeloma: report of the International Myeloma Working Group. Haematol. J. 2003; 4: p 7.1, 43-44.

108. Greipp R.R., San Miguel J.F., Durie B.G.M., et al. International Staging System for multiple myeloma. J. Clin. Oncolog. 2005; 23: 3412-3420.

109. Gregory W.M., Richards M.A., Malpas J.S., et al. Combination chemotherapy versus melphalan and prednisolon in the treatment of multiple myeloma. An overview of published trials. J. Clin. Oncol. 1992; 10: 334-342.

110. Hadzidimitriou A., Stamatopoulos K., Belessi C. Immunoglobulin genes in multiple myeloma: expressed and non-expressed repertoires, heavy and light chain pairings and somatic mutation patterns in a series of 101 cases. Haematologica 2006; 91: 781-787.

111. Hayashi Т., Hideshima Т., Anderson K.C. Novel therapies for multiple myeloma. Review. Br. J. Haematolog. 2003; 120: 10-17.

112. Hellek M., Bersagel P.L., Anderson K. Multiple myeloma: increasing evidence for a multistep transformation process. Blood 1998; 91: 3-21.

113. Hideshima Т., Bergsagel P.L., Kuehl W.M., Anderson K.C. Advances in biology of multiple myeloma: clinical applications. Blood 2004; 104: 607-618.

114. Hideshima Т., Chauhan D., Shima Y., et al. Thalidomide and its analogs overcome drug resistance of human multiple myeloma cells to conventional therapy. Blood 2000; 96: 2943-2950.

115. Hsu F.J., levy R. Preferential use of VH4 lg gene family by diffuse large-cell lymphoma. Blood 1995; 86: 3072-3082.

116. Jacobson J., Hussein M., Barlogie B. A new staging system for multiple myeloma patients based on the southwest Oncology Group (SWOG) experience. Br. J. Haematol. 2003; 122: 441-450.

117. Jagannath S., Vesole D.H., Glenn L., Crowley J., et al. Low risk intensive therapy for multiple myeloma with combined autologous bone marrow and blood stem cell support. Blood 1992; 80: 1666-1672.

118. Janssen J.W., Vaandrager J.W., Heuser Т., et al. Concurreent activation of a novel putative transforming gene, myeov, and cyclin D1 in a subset of multiple myeloma cell lines with t(11;14)(q13;q32). Blood 2000; 95: 2691-2698.

119. Joy P.H. Chromosomal and genetic abnormalities in myeloma. Clin. Lab. Haem. 2002; 24: 259-269.

120. Juge-Morineau N., Harousseau J.L., Amoit M., et al. The retinoblastoma susceptibility gene RB1 in multiple myeloma. Leuk.&Lymph. 1997; 24: 229-237.

121. Kaufmann H., Urbauer E., Ackermann J., et al. Advances in biology and therapeutic management of multiple myeloma. Ann. Hematol. 2001; 80: 445-451.

122. Kaufmann H., Ackermann J., Nosslinger T. Absence of clonal chromosomal relationship between concomitant B-CLL and multiple myeloma a report on two cases. Ann Hematol. 2001; 80: 474-478.

123. Kaufman J., Lonial S. Multiple myeloma: the role of transplant and novel treatment strategies. Seminars in Oncology 2004; 31: 99-105.

124. Keats J.J., Reiman Т., Maxwell C.A., et al. In multiple myeloma t(4;14)(p16;q32) is an adverse prognostic factor irrespective of FGFR3 expression. Blood 2003; 101: 1520-1529.

125. Klein В., Zhang X.G., Lu Z.I., et al. lnterleukin-6 in human multiple myeloma. Blood 1995; 85: 863-872.

126. Konigsberg R., Zojer N., Ackermann J. Predictive role of interphase cytogenetics for survival of patients with multiple myeloma. J. Clin. Oncol. 2000; 18: 804-812.

127. Korst D.R., Clifford G.O., Fowler W.M. J. Am. Med. Assoc. 1964; 83: 535-538.

128. Kuehl W.M., Bergsagel P.L. Multiple myeloma: evolving genetic events and horst interactions. Rev. Cancer. 2002; 2: 175-187.

129. Kyle R.A.: Multiple Myeloma: An Overview in 1996. The Oncologist 1996; 1: 315323.

130. Kyle R.A. Update on Treatment of Multiple Myeloma. The Oncologist 2001; 6: 119124.

131. Kyle R.A., Child J.A., Durie B.G.M. Criteria for the classification of monoclonal gammapathies, multiple myeloma, and related disorders: a report of the International Myeloma Working Group. Br. J. Haematol. 2003; 121: 749-757.

132. Lai J.L., Zandeski M., Mary G., et al. Improved cytogenetics in multiple myeloma: a study of 151 patients including 117 patients at diagnosis. Blood 1995; 85: 24902497.

133. Larionov L.F., Shkodinskaja E.N., Troosheikina V.I. Lancet. 1955; 2: 169-171.

134. Lee G.C., Hong J.S., Lee K.H. A case of coincident multiple myeloma and non-Hodgkin"s lymphoma. Korean J. Intern. Med. 1994; 9: 113-115 (abstr.).

135. Lida S., Rao P.H., Butler M., et al. Deregulation of MUM1/IFR4 by chromosomal translocation in multiple myeloma. Nat. Genet. 1997; 17: 226-230.

136. Lipinski E., Cremer F.W., Ho A.D.: Molecular monitoring of the tumor load predicts progressive disease with multiple myeloma after high-dose therapy with autologous peripheral blood stem cell transplantation. Bone Marrow Transplant. 2001; 28, 957962.

137. Macaluso M., Montanari M., Cinti С., et al. Modulation of cell cycle components by epigenetic and genetic events. Semin. Oncolog. 2005; 32: 452-457.

138. Malpas J.S., Bergsagel P.L., Kyle R., et al. Myeloma. Biology and management. 3rd Ed. Newcastle 2004; 163-194.

139. Mandelli F., Awisati G., Amadori S. et al. Maintenance treatment with recombinant interferon alfa-2b in patients with multiple myeloma responding to conventional induction chemotherapy. N. Engl. J. Med. 322: 1430.

140. Martinelli G., Terragna C., Zamagni E. Polymerase chain reaction-based detection of minimal residual disease in multiple myeloma patients receiving allogeneic stem cell transplantation. Haematologica 2000; 85: 930-934.

141. McElwain T.J., Powles R.L. High-dose intravenous melphalan for plasma-cell leukemia and myeloma. Lancet 1983; 1: 822-824.

142. Myeloma Trialists Collaborative Group. Combination chemotherapy versus melphalan plus prednisone as treatment for multiple myeloma: an overview of 6633 patients from 27 randomized trials. J. Clin. Oncol. 1998; 16: 3832-3842.

143. Myeloma Trialists Collaborative Group. Interferon as therapy for multiple myeloma: an individual patients data overview of 24 randomized trials and 4012 patients. Br. J. Haematol. 2001; 113: 1020-1034.

144. Mughal T.I., Yong A., Szydlo R.M. et al. Molecular studies in patients with chronic myeloid leukemia in remission 5 years after allogeneic stem cell transplant define the risk of subsequent relapse. Br. J. Haematol. 2001; 115: 569-574.

145. Nevins J.R., Leone G., DeGregori J., et al. Role of the Rb/E2F pathway in cell growth control. J. Cell Physiol. 1997; 173: 233-236.

146. Pelliniemi T.T., Irjala K., Mattila K. Immunoreactive interleukin-6 and acude phase proteins as prognostic factors in multiple myeloma. Blood 1995; 85: 765-771.

147. Perez-Simon J.A., Garcia-Sanz R., Tabernere M.D., et al. Prognostic value of numerical chromosomal aberrations in multiple myeloma: a FISH analysis of 15 different chromosoms. Blood 1998; 91: 3366-3371.

148. Preudhomme C., Facon Т., Zandeski M., et al. Rare occurrence of p53 gene mutations in multiple myeloma. Br. J. Haematol. 1992; 81: 440-443.

149. Raab M.S., Cremer F.W., Breitkreutz I.N., et al. Molecular monitoring of tumour load kinetics predicts disease progression after non-myeloablative allogeneic stem cell transplantation in multiple myeloma. Ann. Oncol. 2005; 16: 611-617.

150. Ralph Q.M., Brisco M.J., Joshua D.E. Advancement of multiple myeloma lg heavy chain gene from diagnosis through plateau phase to progression does not involve a new B-cell clone: evidence from the lg heavy chain gene. Blood 1993; 82: 202-206.

151. Rao S.P., Riggs J.M., Biased VH gene usage in early lineage human В cells: avidence for preferential lg gene rearrangement in the absence of selection. J. Immunol. 1999; 163: 2732-2740.

152. Reiman Т., Seeberger K., Taylor B.J., et al. Persistent preswitch clonotypic myeloma cells correlate with decreased survival: evidence for isotype switching within the myeloma clone. Blood 2001; 98: 2791-2799.

153. Rettig M.B., Vescio R.A., Cao G. VH gene usage in multiple myeloma: complete absence of the VH4.21 (VH4-34) gene. Blood 1996; 87: 2846-2852.

154. Richelda R., Ronchetti D., Baldini L., et al. A novel chromosomal translocation t(4;14)(p16;q32) in multiple myeloma involves fibroblast growth-factor receptor 3 gene. Blood 1997; 90: 4062-4070.

155. Richardson P.G., Barlogie В., Berenson J., et al. A phase 2 study of bortezomib in relapsed, refractory myeloma. N. Engl. J. Med. 2003; 348: 2609-2617.

156. Sahota S., Leo R., Hamblin T.J. Myeloma V L and VH Gene Sequences Reveal a Complementary Imprint of Antigen Selection in Tumor Cells. Blood 1997; 89: 219226.

157. Saltman D.L., Ross J.A., Banks R.E. Molecular evidence for single clonal origin in biphenotypic concomitant chronic lymphocytic leukemia and multiple myeloma. Blood 1989;74:2062-2065.

158. Samson D., Gaminara E., Newland A., et al. Infusion of vincristine and doxorubicin with oral dexametasone as first-line therapy multiple mueloma. Lancet 1989; 2: 882885.

159. Sanz I., Kelly P., Williams C., et al. The smaller human Vh gene families display remarkably little polymorphism. EMBO J. 1989; 8: 3741-3747.

160. San Miguel J.F., Almeida J., Mateo G., et al. Immunophenotypic evaluation of the plasma cell compartment in multiple myeloma: a tool for comparing the efficacy of different treatment strategies and predicting outcome. Blood 2002; 99: 1853-1855.

161. San-Miguel J.F., Gutierrez N., Garcia-Sanz R., et al. Thalidomide and new drugs for treatment of multiple myeloma. Hematol. J. 2003; 4 (suppl.3): 201-207.

162. Schatz D.G., Oettinger M.A., Schlissel M.S. V(D)J recombination: molecular biology and regulation. Ann. Rev. Immunol. 1992; 10; 359-383.

163. Shaughnessy J., Gabrea A., Qi Y., et al. Cyclin D3 at 6p21 is dysregulated by recurrent chromosomal translocations in immunoglobulin loci in multiple myeloma. Blood 2001; 98: 217-223.

164. Shaughnessy J., Tian E., Sawyer J., et al. High incidence of chromosome 13 deletion in multiple myeloma detected by multiprobe interphase FISH. Blood 2000; 96: 1505-1511.

165. Shou Y., Martelli M.L., Gabrea A., et al. Diverse karyotypic abnormalities of the c-myc locus associated with c-myc dysregulation and tumor progression in multiple myeloma. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000; 97: 228-233.

166. Singhal S., Mehta J., Desikan R. Et al. Antitumor activity of thalidomide in refractory multiple myeloma. N. Engl. J. Med. 1999; 341: 1565-1571.

167. Smadja N.V., Bastard C., Brigaudeau C., et al. Hypodiploidy is a major prognostic factor in multiple myeloma. Blood 2001; 98: 2229-2238.

168. Spom JR, Mclntyre OR. Chemotherapy of previously untreated multiple myeloma patients: an analysis of recent treatment results. Semin. Oncol. 1986; 13: 318-325.

169. Steensma D.P., Gertz M.A., Greipp P.R. et al. A high bone marrow plasma cell labeling index in stable plateau-phase multiple myeloma is marker for early disease progression and death. Blood 2001; 97: 2522-2523.

170. Stewart A.K., Schwartz R.S. Immunoglobulin V region and В cell. Blood 1994; 83: 1717-1730.

171. Sucker C., Kramer A., Moos M. Concomitant chronic lymphocytic leukemia and multiple myeloma: proof of common clonal origin. The Chinese-German J. of Clinical Oncol. 2004; 3: 81-84.

172. Suzuki I., Pfister L., Annuska G., et al. Representation of rearranged VH gene segments in the human adult antibody repertoire. J. Immunol. 1995; 154: 3902.

173. Swedin A., Lenhoff S.( Olofsson Т., et al. Clinical utility of immunoglobulin heavy chain gene rearrangement identification for tumour cell detection in multiple myeloma. Blood 2000; 96: 355-357.

174. Terpos E., Eleutherakis-Papaiakovos V., Dimopoulos M.A. Clinical implications of chromosomal abnormalities in multiple myeloma. Leuk. & Lymph. 2006; 47: 803814.

175. The Nordic Myeloma Study Group. Interferon alpha 2b added to melphalan prednisone for initial and maintenance treatment in multiple myeloma. Ann. Inter. Med. 1996; 124: 212-222.

176. Tienhaara A., Pulkki K., Mattila K. Serum immunoreactive interleukin-6 and C-reactive protein levels in patients with multiple myeloma at diagnosis. Br. J. of Haematolog. 1994; 86: 391-393.

177. Togel F., Kroger N., Korioth F. Molecular methods for detection and quantification of myeloma cells after bone marrow transplantation: comparison between real-time quantitative and nested PCR. J. Hematol. Stem Cell Res. 2002; 11: 971-976.

178. Tonegava S. Somatic generation of antibody diversity. Nature 1983; 302: 505-581.

179. Tricot G. New insights into role of microenvironment in multiple myeloma. Lancet 2000; 355: 248-248.

180. Tricot G., Sawyer J.R., Jahannath S. et al. Unique role of cytogenetics in the prognosis of patients with myeloma receiving high-dose therapy and autotransplants. J. Clin. Oncol. 1997; 15: 2659-2666.

181. Tricot G., Barlogie В., Jagannath S. Poor prognosis in Multiple Myeloma is associated only with partial or complete deletions of chromosome 13 or abnormalities Involving 11 q and not with other karyotype abnormalities. Blood 1995; 86: 4250-4256.

182. Vacca A., Ribatti D., Roncali L., et al. Bone marrow angiogenesis and progression in multiple myeloma. Br. J. Of Haematolog. 1994; 87: 503-508.

183. Van Dongen J.J., Seriu Т., Panzer-Grumayer E.R., et al. Prognostic value of minimal residual disease in acute lymphoblastic leukaemia in childhood. Lancet. 1998; 28: 1731-1738.

184. Vincent Т., Jourdan M., Sy M.S., et al. Hyaluronic acid induces survival and proliferration of human myeloma cells through an interleukin-6 mediated pathway the phosphotylation of retinoblastoma protein. J.Biol. Chem. 2001; 276: 1472814736.

185. Voena C., Ladetto M., Astolfi M. A novel nested-PCR strategy for the detection of rearranged immunoglobulin heavy-chain genes in B-cell tumors. Leukemia 1997; 11: 1793-1798.

186. Westin K., Rodger S., Turesson I., et al. Interferon alpha-2b versus no maintenance therapy during the plateu phase in multiple myeloma. A randomized study. Br. J. Haematol. 1995; 89: 561.

187. Wilson P.S., de Bouteiller O., Liu Y.J., et al. Somatic hypermutation introduces insertions and deletions into immunoglobulin V genes. J. Exp. Med. 1998; 187: 5970.

188. Willems P., Verhagen O., Segeren C., et al. Consensus strategy to quantitative malignant cells in myeloma patients is validated in multicenter study. Blood 2000; 96: 63-70.

189. Zandecki M. Multiple myeloma: Almost all patients are cytogenetically abnormal. Br. J. Haematol. 1996; 94: 217-227.

190. Zhu P., Ma M., Yu J. Analysis of clonal origin of concomitant chronic lymphocytic leukemia and multiple myeloma in a patient with advanced age. Zhonghua Nei Ke Za Zhi. 1996; 35: 326-328 (abstr.).

191. Zojer N., Konigsberg R., Ackermann J. Deletion of 13q14 remains an independent adverse prognostic variable in multiple myeloma despite its frequent detection by interphase fluorescence in situ hybridization. Blood 2000; 95: 1925-1930.

192. Yamada M., Hudson S., Tournay O. Detection of minimal disease in hematopoietic malignancies of B-cell lineage by using third-complementarity-determining region (CDR-lll-specific probes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989; 86: 5123-5127.f