ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЛАЗМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК ПРИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ ДО И ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ АУТОЛОГИЧНЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.21, кандидат наук Ахундова Фидан Мустафа Кызы

• Ахундова Фидан Мустафа Кызы
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Ахундова Фидан Мустафа Кызы

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы по теме

исследования

1.1. Общее понятие о множественной миеломе. Эпидемиология. Этиология

1.2. Современный подход к диагностике множественной миеломы

1.2.1. Диагностика множественной миеломы

1.3. Иммунофенотипическая характеристика плазматических клеток

1.3.1. Нормальные плазматические клетки

1.3.2. Патологические плазматические клетки

1.4. Основные принципы лечения множественной миеломы

1.4.1. Иммунофенотипирование плазматических клеток костного мозга

и его роль в оценке эффективности лечения

1.5. Характеристика и спецификация антигенов, встречающихся

на плазматических клетках

1.6. Исследование иммунофенотипа плазматических клеток лейкоконцентрата

1.7. Значение маркеров миеломных клеток в определении

прогноза заболевания

1.8. Значение иммунофенотипирования для детекции и мониторинга

минимальной резидуальной болезни

Глава 2. Характеристика больных и методы исследования

2.1. Характеристика пациентов

2.2. Иммунофенотипирование плазматических клеток костного мозга

2.2.1. Процесс пробоподготовки

2.2.2. Окрашивание исследуемого образца

2.3. Статистическая обработка результатов

Глава 3. Иммунофенотипическая характеристика плазматических клеток костного мозга первичных больных множественной миеломой

3.1. Иммунофенотип плазматических клеток костного мозга

здоровых доноров

3.2. Иммунофенотип плазматических клеток костного мозга

первичных больных множественной миеломой

Клинический пример

3.3. Сопоставление результатов иммунофенотипического и морфологического

методов исследования плазматических клеток костного мозга

Глава 4. Иммунофенотипирование плазматических клеток

костного мозга в процессе лечения

4.1. Изменение иммунофенотипа плазматических клеток костного мозга

до и после мобилизации

4.2. Изменение иммунофенотипа плазматических клеток костного мозга до и

после трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток

Клинический пример

4.3. Характеристика иммунофенотипа плазматических клеток

костного мозга после завершения трансплантационного лечения

Клинический пример

4.4. Изменение частоты экспрессии аберрантных маркеров плазматических клеток костного мозга в процессе лечения

4.5. Оценка эффективности трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток у пациентов с множественной миеломой

4.6. Исследование методом проточной цитофлюориметрии общего количества плазматических клеток и плазматических клеток

с аберрантной экспрессией в костном мозге до и после ауто-ТГСК

Глава 5. Иммунофенотипирование плазматических клеток в лейкоконцентрате, собранном в результате мобилизации ГСК

5.1. Исследование общего количества плазматических клеток

с аберрантной экспрессией в костном мозге и в лейкоконцентрате,

собранном за первую процедуру лейкафереза

5.2. Оценка выживаемости без прогрессии после ауто-ТГСК пациентов с ММ в зависимости от количества аберрантных

плазматических клеток в лейкоконцентрате

Заключение

Выводы

Список литературы

Приложение. Схемы протоколов индукционного лечения

(препараты, дозы, дни введения)

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

BD - Beckton Dikinson Biosciences BC - Beckman Coulter

CD - Cluster of differentiation, кластеры дифференцировки

CRAB - наличие симптомокомплекса (C - гиперкальциемия; R - почечная недостаточность - креатининемия; A - анемия; B - костные измения - наличие остеодеструкций)

CyIgK - цитоплазматический иммуноглобулин к CyIgX - цитоплазматический иммуноглобулин X

EBMT - European Society for Blood and Marrow Transplantation, Европейская ассоциация по трансплантации крови и костного мозга

EPIC - European Prospective Investigation into Cancer and Nutrition, Европейское проспективное исследование взаимосвязи раковых заболеваний и питания (ЕПИР)

EuroFlow Consortium - Консорциум Европейской ассоциации по проточной цито флю ориметрии

EMN - European Myeloma Network, Европейская группа по миеломе (ЕМГ) IMiDs - Immunomodulatory drugs, противоопухолевые иммуномодуляторы IMF - International Myeloma Foundation, Международная организация по изучению миеломы

IMWG - International Myeloma Working Group, Международная группа по изучению миеломы

ISS - International Staging System - ISS, Международная система стадирования

FISH - флюоресцентная in situ гибридизация

FSC - прямое рассеяние света

MC - Mouse Control, контроль

NK - натуральные киллеры

SCF - Stem Cell Factor, фактор стволовых клеток

ББС - боковое рассеяние света

Ауто-ТГСК - трансплантация аутологичных гемопоэтических стволовых клеток

БСВ - бессобытийная выживаемость

ВБПЗ - выживаемость без прогрессии заболевания

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

В-ПЛЛ - В-клеточный пролимфоцитарный лейкоз

В-ХЛЛ - В-клеточный хронический лимфолейкоз

ВХТ - высокодозная химиотерапия

ГСК - гемопоэтические стволовые клетки крови

Г-КСФ - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор

ДБККЛ - диффузная В-крупноклеточная лимфома ИФ - иммунофенотипирование ИФЦ - иммунофиксация

кДа - килодальтон (единица измерения массы тела гликопротеина)

КМ - костный мозг

КТ - компьютерная томография

МГНГ - моноклональная гаммапатия неясного генеза

мД - монотерапия дексаметазоном

МкАТ - моноклональные антитела

ММ - множественная миелома

МОБ или МРБ - минимальная остаточная болезнь или минимальная

резидуальная болезнь

МРТ - магнитно-резонансная томография

ОВ - общая выживаемость

ОЛЛ - острые лимфобластные лейкозы

ОМЛ - острые миелоидные лейкозы

ОХЧР - очень хорошая частичная ремиссия

ПБЛ - плазмобластная лимфома

ПК - плазматические клетки

ПКЛ - плазмоклеточный лейкоз

ПР - полная ремиссия ПЦ - проточная цитофлюориметрия ПЦР - полимеразная цепная реакция СЛЦ - свободные легкие цепи

СП - солитарная плазмоцитома

сПО - строгий полный ответ

СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита ТМ - тлеющая миелома

Т-ОЛЛ - Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз ХТ - химиотерапия ЦФ - циклофосфан ЧР - частичная ремиссия

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЛАЗМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК ПРИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ ДО И ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ АУТОЛОГИЧНЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК»

Актуальность темы исследования

Современные программы терапии симптоматической формы множественной миеломы (ММ) основаны на принципе ранней интенсификации и высокодозной консолидации с применением трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток. Аутологичная трансплантация в настоящее время рассматривается в качестве «стандарта» при лечении больных множественной миеломой моложе 60-65 лет.

Интенсивное лечение ММ предполагает максимальное подавление опухолевого клона. Внедрение в клиническую практику трансплантационных методик позволило существенно повысить результаты лечения множественной миеломы, для оценки которых исследовательская группа EBMT разработала такие понятия, как полная и частичная ремиссия, выживаемость без прогрессии и без признаков заболевания [27].

В последнее десятилетие в схемы терапии ММ были включены новые препараты, обладающие направленным механизмом действия. Это ингибитор протеасом (бортезомиб) и иммуномодулирующие препараты (талидомид и леналидомид). Применение новых препаратов на этапе индукции позволило у 25-35% больных ММ получать строгий полный ответ. Дальнейшее выполнение высокодозной химиотерапии с последующей трансплантацией аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) увеличило частоту полных иммунохимических ремиссий до 45-50% [26].

В связи с возможностью существенной редукции опухолевой массы после аутологичной трансплантации чувствительность стандартных методов оценки эффективности лечения ММ (морфологическое исследование аспирата костного мозга и иммунохимический контроль М-градиента) оказалась недостаточной. Появилась необходимость в дополнительном применении более чувствительных методик детекции минимальной резидуальной болезни.

К дополнительным методам исследования костного мозга относятся иммунофенотипирование методом проточной цитофлюориметрии (ПЦ) и молекулярно-биологические исследования, которые постепенно становятся обязательными при многих гематологических заболеваниях. С помощью данных методов удается получить больше информации о биологии заболевания, определить остаточные опухолевые клетки, оценить эффективность лечения [84], а также выявить ранние признаки рецидива заболевания, тем самым предопределить прогноз заболевания.

Актуальность нашего исследования заключается в том, что иммунофенотипирование плазматических клеток (ПК) костного мозга методом проточной цитофлюориметрии является одним из наиболее современных методов диагностики гемобластозов. Так, при моноклональной гаммапатии неясного генеза (МГНГ) на этапе диагностики с помощью проточной цитофлюориметрии появилась возможность выявления клональных ПК, что позволяет своевременно диагностировать данную нозологию [120]. При тлеющей миеломе (ТМ) с помощью проточной цитофлюориметрии удается выявить более 60% клональных ПК в костном мозге больных, что диктует необходимость немедленного начала специфической терапии. При солитарной плазмоцитоме (СП) на основе данного метода была пересмотрена и сформулирована новая классификация, основанная на содержании опухолевых клеток в костном мозге: СП без вовлечения костного мозга и СП с минимальным вовлечением костного мозга. При таких заболеваниях, как амилоидоз и макроглобулинемия Вальденстрема, проточная цитометрия, выявляющая клональные ПК в костном мозге, обеспечивает дополнительную информацию, способствующую быстрой и четкой диагностике. И, наконец, при ММ проточная цитометрия, не являющаяся стандартным методом диагностики, используется в основном при трудных диагностических ситуациях, а также при оценке и мониторинге минимальной резидуальной болезни (МРБ) на фоне лечения и для подтверждения строгого полного ответа после проведенной терапии [120].

При исследовании образца костного мозга больного ММ оценка одновременной экспрессии СБ138/СБ38 представляет собой оптимальную комбинацию маркеров для идентификации ПК костного мозга и их отличия от других клеточных популяций и гемопоэтических стволовых клеток.

Наиболее важными маркерами, благодаря которым опухолевые миеломные клетки можно отличить от нормальных плазматических клеток костного мозга, являются: СБ45, СБ19, СБ117, CD56 в популяции СБ138+/СБ38+ ПК.

Исследование остаточной опухолевой популяции плазматических клеток костного мозга после завершения высокодозной программы лечения ММ будет способствовать оценке результативности терапии.

В нашем исследовании был подробно изучен иммунофенотип ПК костного мозга у больных ММ, как на момент диагностики заболевания, так и в процессе лечения, включавшего высокодозную химиотерапию с последующей трансплантацией аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК). При изучении публикаций отечественных и зарубежных авторов нами не встречено сообщений, указывающих на возможность изменения иммунофенотипа миеломных клеток или сочетания аберрантных маркеров в процессе трансплантационного лечения, что дает основание считать данную проблему актуальной.

Цель исследования

Изучить иммунофенотипические характеристики плазматических клеток костного мозга больных множественной миеломой до и после трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток крови.

Задачи исследования

1. Исследовать иммунофенотип плазматических клеток костного мозга первичных больных ММ методом проточной цитофлюориметрии.

2. Исследовать иммунофенотип плазматических клеток костного мозга здоровых доноров и сопоставить его с иммунофенотипом первичных больных ММ.

3. Определить изменение иммунофенотипических характеристик плазматических клеток костного мозга у больных ММ в процессе лечения: после индукционной терапии, до и после трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток.

4. Изучить качественный и количественный состав плазматических клеток в лейкоконцентрате, собранном за первую процедуру лейкафереза, и оценить выживаемость без прогрессии после трансплантации в зависимости от количества перелитых плазматических клеток.

Научная новизна

1. Впервые описана иммунофенотипическая характеристика плазматических клеток костного мозга, исследованная на различных этапах лечения ММ.

2. Определена гетерогенность иммунофенотипа плазматических клеток костного мозга больных ММ и здоровых доноров.

3. На основании иммунофенотипических маркеров плазматических клеток определено общее количество плазматических клеток и плазматических клеток с аберрантной экспрессией в лейкоконцентрате, заготовленном за первую процедуру лейкафереза.

4. Анализ показателей безрецидивной выживаемости больных ММ после трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток крови позволил определить отсутствие зависимости сроков развития рецидива/прогрессии от количества трансплантированных плазматических клеток с аберрантной экспрессией.

Объем и структура работы

Диссертация представлена на 162 страницах и состоит из введения, пяти глав, заключения, выводов, списка литературы, включающего 10 отечественных и 151 иностранный источник, и приложения. В тексте работы содержится 18 таблиц, 27 рисунков.

Практическое значение работы

Методика иммунофенотипирования с использованием 4-цветной проточной цитофлюориметрии включала в себя исследование плазматических клеток костного мозга у больных ММ с применением 6 маркеров (СБ 138, СБ38, СБ45, СБ19, СБ117, СБ56). Данная методика была адаптирована как для применения в диагностике ММ, так и в процессе мониторинга минимальной остаточной болезни.

Положения, выносимые на защиту

1. На момент диагностики множественной миеломы наиболее часто встречающимся иммунофенотипом был СВ19-/СВ117-/СБ56+, характеризующийся отсутствием экспрессии СБ19, СБ 117 и наличием экспрессии СБ56 аберрантных маркеров в популяции плазматических клеток СБ138+/СБ38+ костного мозга.

2. При исследовании иммунофенотипа плазматических клеток первичных больных множественной миеломой и здоровых доноров костного мозга была выявлена гетерогенность экспрессии аберрантных маркеров.

3. При исследовании иммунофенотипа плазматических клеток костного мозга в процессе лечения наблюдалось изменение соотношения разных популяций плазматических клеток с различным аберрантным иммунофенотипом как до, так и после трансплантации ГСК.

4. После применения высокодозного мелфалана с последующей трансплантацией аутологичных ГСК было выявлено достоверное снижение содержания как общего количества плазматических клеток, так и количества аберрантных плазматических клеток в костном мозге больных множественной миеломой.

5. Результаты исследования плазматических клеток в лейкоконцентрате, заготовленном за первую процедуру лейкафереза, подтвердили отстутствие зависимости сроков развития рецидива/прогрессии заболевания от количества перелитых плазматических клеток с аберрантной экспрессией.

Внедрение результатов исследования

Разработанный алгоритм исследования плазматических клеток костного мозга у больных ММ методом проточной цитофлюориметрии как на этапе диагностики, так и в процессе трансплантационного лечения внедрен в работу научно-клинических отделений ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Апробация работы и публикации по теме исследования

Основные положения диссертации представлены в постерных докладах:

• на XXXVIII ежегодном собрании Европейской группы по трансплантации костного мозга (Женева, 2012 г.);

• на Европейской школе по гематологии «Учебно-практический семинар по трансплантации гемопоэтических стволовых клеток» (Малага, 2015 г.).

Апробация диссертации состоялась на заседании проблемной комиссии «Клинические исследования в гематологии (гемобластозы, депрессии кроветворения; ТКМ; миело- и лимфопролиферативные заболевания; опухоли лимфатической системы; патология красной крови; ИТП; порфирии), трансфузиологии, патологии гемостаза, хирургической гематологии, анестезиологии и интенсивной терапии» ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации 19 июня 2017 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе: 2 - в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, 2 печатные работы - в журналах ВАК Министерства образования и науки Азербайджанской Республики (на русском языке) и 1 абстракт - в зарубежном журнале (на английском языке).

ГЛАВА 1

1.1. Общее понятие о множественной миеломе. Эпидемиология. Этиология

Множественная миелома (миеломная болезнь, болезнь Рустицкого -Калера) - это злокачественное В-клеточное лимфопролиферативное заболевание, характеризующееся опухолевой пролиферацией клона плазматических клеток, который в свою очередь продуцирует моноклональный иммуноглобулин в сыворотке крови и/или моче и сопровождается остеолитическими поражениями костей. Результатом пролиферации плазматических клеток являются диссеминированные поражения скелета с литическими повреждениями костей и выраженным остеопорозом с наличием или отсутствием компрессионных переломов в костях, гиперкальциемиией, анемией или появлением экстрамедуллярной плазмоцитомы. Результатом избыточной продукции свободных легких цепей является почечная недостаточность, так называемая «миеломная нефропатия». Рецидивирующие бактериальные и вирусные инфекции появляются вследствие снижения уровня поликлональных иммуноглобулинов [3, 4, 7, 8].

В соответствии с классификацией Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), множественная миелома (ММ) относится к периферическим В-клеточным лимфоидным опухолям [10]. Термин «множественная миелома» впервые был предложен в 1873 г. I. Кш112ку [9]. В России впервые ММ была описана как «миеломная болезнь» Г. А. Алексеевым в 1949 г. [1]. Генри Бенс-Джонс впервые обнаружил белок - «гидратированный

оксид альбумина» в осадке мочи пациента с болями в костях и анемией. Некоторое время спустя белок был назван «белком Бенс-Джонса» [24, 25].

J. H. Wright [9] на основании результатов морфологии показал, что основу опухоли у больных ММ составляют плазматические клетки, которые, в свою очередь, являются конечным продуктом дифференцировки В-лимфоцитов. Описания морфологии плазматических клеток впервые были предложены R. Cajal в 1890 г., а в 1985 г. эти клетки были более подробно описаны T. Marschalko [3].

Этиология

Этиология заболевания недостаточно изучена и зависит от общих факторов риска, которые обычно встречаются при других формах рака, исключение составляют курение и питание, не влияющие на этиологию ММ, как было описано авторами Boffetta et al. и Rohrmann et al. [99].

Однако в литературе встречается множество данных, связанных с потреблением разнообразных продуктов, так или иначе влияющих на риск заболеваемости. В частности, в сообщениях авторов Tavani et al., Brown et al., Valjinac et al. говорится о снижении относительного риска заболеваемости, связанного с избыточным потреблением фруктов и овощей [99]. Данные результаты были получены Rohrmann et al. исходя из последнего анализа ЕПИР [99].

Несмотря на противоречивые результаты, в отношении причины возникновения заболевания учеными Alexander et al., Preston et al., Cardis et al. и Becker et al. было доказано, что ионизирующая радиация играет существенную роль в этиологии ММ [99]. Goedert et al. и Grulich et al. определили, что пациенты, имеющие в анамнезе синдром приобретенного иммунного дефицита (СПИД) и гепатит С, также относятся к группе риска [99].

Эпидемиология

Почти у всех пациентов с ММ начальная стадия протекает бессимптомно, так называемая моноклональная гаммапатия неясного генеза (МГНГ). Частота

перехода МГНГ в ММ не превышает 1% случаев в год. У некоторых пациентов наблюдается бессимптомная, медленно прогрессирующая фаза заболевания, называемая тлеющей миеломой (ТМ). ТМ переходит в ММ в 10% случаев в год в течение первых 5 лет после диагностики, 3% в год - в течение последующих 5 лет и 1,5 % в год - в последующих периодах [7, 10].

На основании международных данных установлено, что ежегодная заболеваемость ММ приравнивается к 86 000 случаев (из них 47 000 мужчин и 39 000 женщин), что составляет примерно 0,8% от всех впервые выявленных новообразований. Смертность от ММ составляет около 63 000 (33 000 м : 30 000 ж) в год, что составляет 0,9% от всей смертности при других злокачественных новообразованиях [5]. С точки зрения учета уровня возрастных стандартов, ежегодный процент заболеваемости в мире составляет 1,7 на 100 000 у мужчин и 1,2 у женщин. Уровень летальности составляет 1,2% у мужчин и 0,9% у женщин. Частота встречаемости ММ среди всех гемобластозов, описанная авторами Devesa et al. и Becker et al., составляет около 15-20% [2, 5, 99].

Географически частота встречаемости заболевания по всему миру весьма разнообразна. Наибольшая заболеваемость наблюдается в промышленно развитых городах Австралии, Новой Зеландии, Европы и Северной Америки. Сравнение этнической группы заболеваемости ММ в популяции США проявляет двойственный характер, преимущественно встречается среди черных по сравнению с белыми. Parkin et al. и Coleman et al. была исследована азиатская популяция: в частности, у китайцев и японцев заболеваемость ММ выявляется весьма редко [99].

В том же источнике описана заболеваемость и летальность в азиатских странах - там ситуация более стабильна в сравнении с белой расой в западных странах и черной расой в США, где эти показатели медленно возрастают с каждым десятилетием. Средняя 5-летняя выживаемость составляет 15-20% с широким интервалом выживаемости от нескольких лет и до 10 и более лет [99].

В России, по данным эпидемиологических источников за 2013 год, абсолютное число заболевших ММ в год на 100 000 населения составило 3041. «Грубый» показатель заболеваемости составил 2,12, а стандартизованный - 1,32 на 100 000 населения, причем абсолютное число заболевших женщин 1711, а мужчин 1330, коэффициент соотношения ж : м равен 1,28 [5].

Болеют ММ преимущественно пожилые люди, возрастная медиана заболеваемости составляет 68 лет. Однако в настоящее время заболеваемость ММ встречается в возрасте 40 лет, а также в научных публикациях есть данные, указывающие на единичные случаи больных моложе 30 лет, достоверных сведений о заболеваемости ММ у детей нет. Ученые считают, что болезнь значительно «помолодела», а также отмечают увеличение частоты заболеваемости за последние два десятилетия, однако часть исследователей связывает это с улучшением лабораторной диагностики в начале 80-х годов [7, 10].

1.2. Современный подход к диагностике множественной миеломы

1.2.1. Диагностика множественной миеломы

Диагноз множественная миелома устанавливался в соответствии с международными критериями (IMWG, 2014) [73]:

о выявление клональных плазматических клеток (ПК) в аспирате костного мозга больных > 10%;

о гиперкальциемия: сывороточный Са > 0,25 ммоль/л (> 1 мг/дл), что выше верхней границы нормы или > 2,75 ммоль/л (> 11 мг/дл);

о почечная недостаточность: клиренс креатинина < 40 мл/мин. или сывороточный креатинин > 177 цмоль/л (> 2 мг/дл);

о анемия: гемоглобин на 20 г/л ниже нижней границы нормы или < 100 г/л.;

o поражение костей: одно и/или более поражение костной ткани, выявленное при радиографии, компьютерной томографии (КТ) или позитронно-эмессионной томографии-КТ костей скелета;

o определение моноклонального белка в сыворотке крови (IgG и IgA)

> 30 г/л или моноклональный белок мочи > 500 мг/сутки.

Определение одного или более биомаркеров опухоли:

• Клональные ПК, определяющиеся в костном мозге в количестве

> 60%. Клональность выявлялась посредством определения к/А - легких цепей, методом проточной цитофлюориметрии или иммуногистохимии.

• Соотношение свободных легких цепей в сыворотке крови > 100.

• > 1 фокальное поражение костного мозга при магнитно-резонансной томографии (МРТ).

• Диагностика вялотекущей множественной миеломы основывается на выявлении не менее двух критериев:

> моноклональный протеин в сыворотке крови (IgG или IgA) > 30 г/л или моноклональный протеин > 500 мг/сутки;

^ содержание плазматических клеток (ПК) в костном мозге в количестве 10-60%;

> отсутствие клинических проявлений миеломы симптомокомплекса «CRAB» или амилоидоза.

1.3. Иммунофенотипическая характеристика плазматических клеток

1.3.1. Нормальные плазматические клетки

Дифференцировка ПК с формированием клона, продуцирующего антитела, является основным фактором для обеспечения гуморального иммунитета. Созревание ПК в норме является результатом поэтапных процессов, таких как

клеточная дифференцировка, клеточный цикл и апоптоз [34]. Исходный этап дифференцировки ПК начинается с активации покоящихся В-лимфоцитов в ответ на определенный антиген, что впоследствии приводит к запуску процессов клеточного деления [88].

Иммунофенотипические изменения сопровождают каждую стадию дифференцировки активированных В-лимфоцитов в ПК. Как показано в экспериментах «in vitro», в ходе дифференцировки ПК из В-клеток памяти с помощью антигенной стимуляции изменяют свой иммунофенотип по следующей схеме:

0-й день (стадия В-клеток памяти) - иммунофенотип представлен CD 19++/CD20++/CD45+++/CD38+/-/CD138-;

2-й день (стадия преплазмобласта) - CD19+/-/CD20+/-/CD45+++/CD38+/CD138-;

4-й день (стадия плазмобласта) - CD19-/CD20-/CD45++/CD38+++/CD138-;

7-й день (стадия преплазматической клетки) - постепенное увеличение экспрессии иммуноглобулинов на поверхности клеток CD19-/CD20-/CD45++/CD38+++/CD138+++ [9, 133] (см. рисунок 1).

HiIH

Immature .xlinW

Pro В cell НквигИ в crll M.uvrBcHI gull GtBtHI

CDll'CDJtflg CDirCDiO1^ CDlfl'CDiO'tg1 Oli'CDZO1 CtmtDZD1 СР19"СЕШ'

Ц-CDJS"' rg-CDJS" Ig-CDM"

I

PUinu с HI Cl.rvm.i Mi« iMptnrifv В f HI PouGt В t#l[

© ф--o—p—g

5w«ne«i CDlfl^COiO-lg- CDli-CDiOlg-'" CDliCDiO-lg"- CDT9"CDM"

CD27-CD38~tDlJr CDi7"COJ8" CDi7*lgM/lgG/l94" Ig'COW

СЕПВ"

Edwards at al. Natu/v Rcw'civs Immunology 6, (May 2006)

Рисунок 1. Процесс созревания B-клеток в костном мозге

На рисунке 1 [41] представлен процесс созревания В-клеток и их предшественников, а также их иммунофенотипические характеристики. Постепенная утрата экспрессии В-клеточных маркеров, таких как СБ 19 и СБ20, указывает на снижение способности ПК реагировать на антигенную стимуляцию. Снижение яркости экспрессии маркера СБ45 отражает угасание способности созревающих клеток к пролиферации. При исследовании экспрессии СБ45 на различных стадиях дифференцировки ПК выявлялось градиентное снижение яркости экспрессии СБ45 по мере созревания ПК [113]. Однако в костном мозге в некоторых случаях определяется гетерогенная популяция СБ45+ ПК. Таким образом, можно сделать вывод о наличии сложной иерархии в дифференцировке ПК, не только на уровне различных «компартментов», но и в самом костном мозге [22]. Важно отметить, что яркая экспрессия маркера СБ45, характерная для ранних и промежуточных стадий дифференцировки ПК, предупреждает о персистенции реактивных ПК в костном мозге, сохраняющих способность к делению [22]. По мере созревания ПК нарастает экспрессия маркеров СБ138/СБ38. Таким образом, выявление сочетанной яркой экспрессии данных маркеров позволяет с полной уверенностью верифицировать ПК на конечной стадии дифференцировки [60].

В некоторых исследованиях было изучено, что синдекан-1 (СБ138) индуцирует апоптоз, ингибирует рост миеломных клеток, тормозит дифференцировку остеокластов и стимулирует созревание остеобластов, выступая в качестве низкоафинного рецептора фактора роста фибробластов [31, 38]. То есть главными иммунофенотипическими особенностями созревания ПК в норме являются:

1) постепенная утрата экспрессии В-ассоциированных маркеров;

2) снижение уровня экспрессии антигена СБ45;

3) одновременное усиление экспрессии антигенов СБ38 и СБ138.

Нарушения в процессе созревания ПК происходят прежде всего в

зародышевом центре, на стадии дифференцировки В-клеток, где протекает

процесс реанжировки, приводящий к накоплению клональных трансформированных клеток.

К основным заболеваниям, связанным с пролиферативной особенностью ПК, относятся: В-клеточная неходжкинская лимфома, моноклональная гаммапатия неясного генеза, макроглобулинемия Вальденстрема и множественная миелома. Важно отметить, что все вышеуказанные заболевания ассоциированы с различными стадиями созревания ПК (см. рисунок 2) [9].

Рисунок 2. Пролиферативные заболевания плазматических клеток. Ассоциация

со стадией дифференцировки

1.3.2. Патологические плазматические клетки

Патологические ПК, претерпевшие опухолевую трансформацию, наряду с нормальными мигрируют обратно в костный мозг, где под влиянием микроокружения костного мозга формируют опухолевый клон, впоследствии приводящий к остеодеструкциям.

Цитокины, секретируемые стромальными элементами костного мозга, играют важную роль для вновь прибывших в костный мозг ПК. Как известно, интерлейкин-6 является фактором роста для миеломных ПК. В результате ряда

активационных процессов миеломные ПК приобретают высокую пролиферативную активность одновременно со снижением их способности к апоптотической гибели [98]. Маркер адгезии СБ56 отсутствует на поверхности ПК в норме, в то же время экспрессируется миеломными ПК в начале заболевания, однако исчезает на этапе прогрессии заболевания [6, 39]. Приобретение молекул адгезии связано с возвращением миеломных ПК обратно в КМ после завершения изотипического синтеза иммуноглобулинов в лимфатическом узле.

По ряду морфологических особенностей миеломные ПК могут быть идентифицированы в мазке костного мозга. В зависимости от степени анаплазии и опухолевой прогрессии трансформированные ПК имеют различные структурные и морфологические характеристики [132].

Так, Оге1рр й а1. выделили четыре основных морфологических подтипа миеломных ПК: зрелые, промежуточные, незрелые, плазмобласты [117]. Наличие большого количества опухолевых клеток и плазмобластная морфология в мазке костного мозга являются доказательными критериями неблагоприяного прогноза [122]. Анализ мазка костного мозга является одним из важнейших исследований с целью оценки успешно проведенного лечения, а также для подтверждения рецидива или прогрессии заболевания.

Субстратом ММ являются не полностью дифференцированные ПК, а так называемые миеломные ПК. Созревание ПК является достаточно сложным и многоступенчатым процессом [34], что создает трудности при дифференциальной диагностике между миеломными ПК и нормальными ПК методом световой микроскопии. Исследование мазка не подразумевает анализа значительного количества клеток, но является одним из обязательных исследований при диагностике минимальной резидуальной болезни (МРБ). Таким образом, анализ мазка костного мозга для диагностики МРБ обладает наименьшей чувствительностью по сравнению с более чувствительными методами, такими как электрофорез, иммунофиксация, полимеразная цепная реакция (ПЦР) и проточная цитофлюориметрия (ПЦ) [6].

Иммунофенотипирование (ИФ) ПК костного мозга методом проточной цитофлюориметрии позволяет проводить единовременный анализ большого количества клеток, учитывая интенсивность флюоресценции, проводить исследование экспрессии одновременно нескольких маркеров, а также обладает высокой чувствительностью для диагностики минимальной резидуальной болезни [59].

Иммунофенотипирование позволяет четко дифференцировать нормальные ПК от миеломных ПК в костном мозге больного, единовременно определяя иммунофенотип злокачественного клона.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ахундова Фидан Мустафа Кызы, 2017 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Андреева, Н. Е. Иммуноглобулинопатии / Н. Е. Андреева, Е. Б. Чернохвостова. - М.: Медицина, 1985. - 240 с.

2. Бондаренко, С. Н. Эффективность интенсивной химиотерапии и трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у пациентов множественной миеломой: дис. ... канд. мед. наук / С. Н. Бондаренко. - СПб., 2006.

3. Волкова, М. А. Клиническая онкогематология / М. А. Волкова - М.: Медицина, 2007. - 847-853 с. (глава 42).

4. Воробьев, А. И. Руководство по гематологии / А. И. Воробьев. - М.: Ньюдиамед, 2007. - 408-430 с.

5. Каприн, А. Д. Злокачественные новообразования в России в 2013 году (заболеваемость и смертность) / А. Д. Каприн, В. В. Старинский, Г. В. Петрова. -М., 2015.

6. Куртова, А. В. Иммунофенотипирование костного мозга для диагностики множественной миеломы / А. В. Куртова // Клиническая лабораторная диагностика. - 2008. № 1. - С. 17-20.

7. Менделеева, Л. П. Протокол высокодозной химиотерапии и трансплантации аутологичных стволовых гемопоэтических клеток при множественной миеломе / Л. П. Менделеева, О. С. Покровская // Программное лечение заболеваний системы крови / под ред. В. Г. Савченко. - М., 2008. -С.359-399.

8. Рукавицин, О. А. Парапротеинемические гемобластозы: монография / О. А. Рукавицин, Г. И. Сидорович. - СПб.: ГЭОТАР-Медиа, 2008.- С. 6-28.

9. Русанова, Е. Б. Биологические особенности трансформации плазматических клеток и лабораторная диагностика множественной миеломы: дис. ... канд. биол. наук / Е. Б. Русанова. - СПб., 2009.

10. Савченко, В. Г. Програмное лечение заболеваний системы крови / В. Г. Савченко. - М.: Практика, 2012. - С. 517-578.

11. Abdelhaleem, M. Frequent but nonrandom expression of myeloid markers on de novo childhood acute lymphoblastic leukemia / M. Abdelhaleem // Exp. Mol. Pathol. - 2007. - Vol. 83. - N 1. - P. 138-141.

12. Almeida, J. High-sensitive immunophenotyping and DNA ploidy studies for the investigation of minimal residual disease in multiple myeloma / J. Almeida, A. Oreao, M. Ocqueteau, G. Mateo, M. Corral, M. D. Caballero, J. Blade, M. J. Moro, J. Hernandez, J. F. San Miguel // Br. J. Haematol. - 1999. - Vol. 107. - N 1. - P. 121131.

13. Alvares, C. L. Long-term outcomes of previously untreated myeloma patients: Responses to induction chemotherapy and high-dose melphalan incorporated within a risk stratification model can help to direct the use of novel treatments / C. L. Alvares, F. E. Davies, C. Horton, G. Patel, R. Powles, B. Sirohi, R. Zuha, A. Gatt, R. Saso, J. G. Treleaven, C. E. Dearden, M. N. Potter, M. E. Ethell, G. J. Morgan // Br. J. Haematol. - 2005. - Vol. 129. - N 5.- P. 607-614.

14. Anderson, K. C. Multiple Myeloma, Version 1. 2013 Featured Updates to the NCCN Guidelines / K. C. Anderson, M. Alsina, W. Bensinger, J. S. Biermann, A. D. Cohen, S. Devine, B. Djulbegovic, E. A. F. Jr, C. Gasparetto, F. Hernandez-illizaliturri, C. A. Huff, A. Kassim, A. Y. Krishnan // JNCCN. - 2013. - Vol. 11. April. - P. 11-17.

15. Arroz, M. Consensus guidelines on plasma cell myeloma minimal residual disease analysis and reporting / M. Arroz, N. Came, P. Lin, W. Chen, C. Yuan, A. Lagoo, M. Monreal, R. de Tute, J. A. Vergilio, A. C. Rawstron, B. Paiva // Cytom. Part B - Clin. Cytom. - 2015. - Vol. 1. January. - P. 1-9.

16. Ashman, B. L. K. Expression of the YB5.BS Antigen / B. L. K. Ashman, A. C. Cambareri, L. B. To, R. J. Levinsky, C. A. Juttner // Blood. - 2017. - Vol. 78. -N 1. - P. 30-37.

17. Paiva B. Utility of flow cytometry immunophenotyping in multiple myeloma and other clonal plasma cell-related disorders / B. Paiva, J. Almeida, M. Pérez-Andrés, G. Mateo, A. López, A. Rasillo, M. B. Vídriales, M. C. López-Berges,

J. F. Miguel, A. Orfao // Cytom. Part B - Clin. Cytom. - 2010. - Vol. 78. - N 4.-P. 239-252.

18. Bakanay, S. M. Presence Of Abnormal Plasma Cells In Peripheral Stem Cell Harvest Products Predict Early Relapse Following Autologous Stem Cell Transplantation In Patients With Multiple Myeloma / S. M. Bakanay, K. Dalva, B. E. Koksoy, S. Civriz, E. Ayyildiz, M. Arat, M. Ozcan, O. Ilhan, M. Beksac // Biol. Blood Marrow Transplant. - 2010. - Vol. 16. - N 2.- P. 239.

19. Barlogie, B. Long-term outcome results of the first tandem autotransplant trial for multiple myeloma / B. Barlogie, G. J. Tricot, F. Van Rhee, E. Angtuaco, R. Walker, J. Epstein, J. D. Shaughnessy, S. Jagannath, V. Bolejack, J. Gurley, A. Hoering, D. Vesole, R. Desikan, D. Siegel, J. Mehta, S. Singhal, N. C. Munshi, M. Dhodapkar, B. Jenkins, M. Attal, J. L. Harousseau, J. Crowley // Br. J. Haematol. -2006. - Vol. 135. - N 2.- P. 158-164.

20. Baseggio, L. The expression of TCR-gamma delta/CD3 complex in neoplastic gamma delta T-cell / L. Baseggio, F. Berger, G. Monneret, J. P. Magaud, G. Salles // Haematologica. - 2006. - Vol. 91. - N 12. - P. 1717-1719.

21. Bataille, R. The phenotype of normal, reactive and malignant plasma cells. Identification of «many and multiple myelomas» and of new targets for myeloma therapy / R. Bataille, G. Jego, N. Robillard, S. Barille-Nion, J. L. Harousseau, P. Moreau, M. Amiot, C. Pellat-Deceunynck // Haematologica. - 2006. - Vol. 91. -N 9. - P. 1234-1240.

22. Bataille, R. A cellular model for myeloma cell growth and maturation based on an intraclonal CD45 hierarchy / R. Bataille, N. Robillard, C. Pellat-Deceunynck, M. Amiot // Immunol. Rev. - 2003. - Vol. 194. September. P. 105-111.

23. Bayer-Garner, S. B. CD117, but not lysozyme, is positive in cutaneous plasmacytoma / S. B. Bayer-Garner, P. Lin // Am. J. Clin. Pathol. - 2002. - Vol. 118. -P. 621.

24. Bence Jones, H. Chemical Pathology / H. Bence Jones // Lancet. - 1847. -Vol. 2. - P. 88-92.

25. Bence Jones, H. On the new substance occurring in the urine of patient with mollities ossium / H. Bence Jones // Philos. Trans. R. Soc. Lond. - 1848. - Vol. 138. -P. 55-62.

26. Bensinger, W. Stem-cell transplantation for multiple myeloma in the era of novel drugs / W. Bensinger // J. Clin. Oncol. - 2008. - Vol. 26. - N 3.- P. 480-492.

27. Blade, J. Criteria for evaluating disease response and progression in patients with multiple myeloma treated by high-dose therapy and haemopoietic stem cell transplantation. Myeloma Subcommittee of the EBMT. European Group for Blood and Marrow Transplant / J. Blade, D. Samson, D. Reece, J. Apperley, B. Bjorkstrand,

G. Gahrton, M. Gertz, S. Giralt, S. Jagannath, D. Vesole // Br. J. Haematol. - 1998. -Vol. 102. - N 5. - P. 1115-1123.

28. Boccadoro, M. Multiple myeloma: the number of reinfused plasma cells does not influence outcome of patients treated with intensified chemotherapy and PBPC support / M. Boccadoro, P. Omede, A. Dominietto, A. Palumbo, S. Bringhen, F. Giaretta, B. Ortolano, S. Triolo, A. Pileri // Bone Marrow Transplant. - 2000. -Vol. 25. - N 1.- P. 25-29.

30. Callard, R. G. A. The Cytokine Factsbook / G. A. R. Callard. - Acad. Press,

1994.

31. Camacho, F. Nodal marginal zone lymphoma: a heterogeneous tumor: a comprehensive analysis of a series of 27 cases / F. Camacho // Am. J. Surg. Pathol. -2003. - Vol. 27. - N 6. - P. 762-771.

32. Caraux, A. Circulating human b and plasma cells. age-associated changes in counts and detailed characterization of circulating normal CD138- and CD138 plasma cells / A. Caraux, B. Klein, B. Paiva, C. Bret, A. Schmitz, G. M. Fuhler, N. A. Bos,

H. E. Johnsen, A. Orfao // Haematologica. - 2010. - Vol. 95. - N 6. - P. 1016-1020.

33. Cavo, M. Bortezomib with thalidomide plus dexamethasone compared with thalidomide plus dexamethasone as induction therapy before, and consolidation therapy after, double autologous stem-cell transplantation in newly diagnosed multiple myeloma: a randomised phase 3 / M. Cavo, P. Tacchetti, F. Patriarca, M. Petrucci, L. Pantani, M. Galli, F. Raimondo // Lancet. - 2010. - Vol. 376. - P. 2075-2085.

34. Chen-Kiang, S. Biology of plasma cells / S. Chen-Kiang // Best. Pr. Res. Clin. Haematol. - 2005. - Vol. 18. - P. 493-507.

35. Cruse, J. M. Aberrant expression of CD7, CD56, and CD79a antigens in acute myeloid leukemias. / J. M. Cruse, R. E. Lewis, S. Pierce, J. Lam // Exp. Mol. Pathol. - 2005. - Vol. 79. - N 1. - P. 39-41.

36. Dalmazzo, L. F. The presence of CD56/CD16 in T-cell acute lymphoblastic leukaemia correlates with the expression of cytotoxic molecules and is associated with worse response to treatment / L. F. Dalmazzo, R. H. Jacomo, A. F. Marinato, L. L. Figueiredo-Pontes, R. L. Cunha, A. B. Garcia, E. M. Rego // Br. J. Haematol. -2009. - Vol. 144. - N 2. - P. 223-229.

37. Damgaard, T. Regulation of the CD56 promoter and its association with proliferation, anti-apoptosis and clinical factors in multiple myeloma / T. Damgaard, L. M. Knudsen, I. M. Dahl, P. Gimsing, M. Lodahl // Leuk. & Lymphoma, - 2009. -Vol. 50. - N 2.- P. 236-246.

38. Dhodapkar, M. Syndecan-1 is a multifunctional regulator of myeloma pathobiology: control of tumor cell survival, growth, and bone cell differentiation / M. Dhodapkar, E. Abe, A. Theus, M. Lacy, J. K. Langford, B. Barlogie, R. D. Sanderson // Blood. - 1998. - Vol. 91. - N 8. - P. 2679-2688.

39. DiGiuseppe, J. A. Flow cytometric immunophenotyping of plasmacytic neoplasms / J. A. DiGiuseppe // Am. J. Clin. Pathol. - 2007. - Vol. 127. - N 2. -P. 172-174.

40. DiPersio, J. F. Relevance and clinical implications of tumor cell mobilization in the autologous transplant setting / J. F. DiPersio, A. D. Ho, J. Hanrahan, F. J. Hsu, S. Fruehauf // Biol. Blood Marrow Transplant. - 2011. - Vol. 17. - N 7. - P. 943-955.

41. Edwards, J. C. B-cell targeting in rheumatoid arthritis and other autoimmune diseases / J. C. Edwards // Nat. Rev. Immunol. - 2006. - Vol. 6. - N 5. - P. 394-403.

42. Fabello, S. 20th Annual meeting of the Clinical Cytometry Society poster abstracts / S. Fabello, P. Browne, K. Baggiani, L. Hertzberg // Cytom. Part B Clin. Cytom. - 2005. - Vol. 68B. - N 1(37). - P. 67.

43. Fernandez-Luna, J. L. Characterization and expression of the human leukocyte-common antigen (CD45) gene contained in yeast artificial chromosomes / J. L. Fernandez-Luna, R. J. Matthews, B. H. Brownstein, R. D. Schreiber // Genomics. - 1991. - Vol. 10(3). July. - P. 756-764.

44. Fischer, L. CD56 expression in T-cell acute lymphoblastic leukemia is associated with non-thymic phenotype and resistance to induction therapy but no inferior survival after risk-adapted therapy / L. Fischer, N. Gökbuget, S. Schwartz, T. Burmeister, H. Rieder, M. Brüggemann, D. Hoelzer, E. Thiel // Haematologica. -2009. - Vol. 94. - N 2. - P. 224-229.

45. Funaro, A. Human CD38, a surface receptor, an enzyme, an adhesion molecule and not a simple marker / A. Funaro // J. Biol. Regul. Homeost. agents. -1999. - Vol. 13. - N 1. - P. 54-61.

46. Gay, F. Complete response correlates with long-term progression-free and overall survival in elderly myeloma treated with novel agents: Analysis of 1175 patients / F. Gay, A. Larocca, P. Wijermans, F. Cavallo, D. Rossi, R. Schaafsma, M. Genuardi, A. Romano, A. M. Liberati, A. Siniscalchi, M. T. Petrucci, C. Nozzoli, F. Patriarca, M. Offidani, R. Ria, P. Omed, B. Bruno, R. Passera, P. Musto, M. Boccadoro, P. Sonneveld, A. Palumbo // Blood. - 2011. - Vol. 117. - N 11. -P. 3025-3031.

47. Gorczyca, W. Flow cytometry immunophenotypic characteristics of monocytic population in acute monocytic leukemia (AML-M5), acute myelomonocytic leukemia (AML-M4), and chronic myelomonocytic leukemia (CMML) / W. Gorczyca // Methods Cell. Biol. - 2004. - Vol. 75. - P. 665-677.

48. Graf, M. High expression of costimulatory molecules correlates with low relapse-free survival probability in acute myeloid leukemia (AML). / M. Graf, S. Reif, K. Hecht, R. Pelka-Fleischer, T. Kroell, K. Pfister // Ann. Hematol. - 2005. -Vol. 84. - N 5. - P. 287-297.

49. Greipp, P. R. International staging system for multiple myeloma / P. R. Greipp, J. S. Miguel, B. G. M. Dune, J. J. Crowley, B. Barlogie, J. Blad, M. Boccadoro, J. A. Child, J. L. Harousseau, R. A. Kyle, J. J. Lahuerta, H. Ludwig,

G. Morgan, R. Powles, K. Shimizu, C. Shustik, P. Sonneveld, P. Tosi, I. Turesson, J. Westin // J. Clin. Oncol. - 2005. - Vol. 23. - N 15.- P. 3412-3420.

50. Grzegorz, S. Nowakowski. Circulating plasma cells detected by flow cytometry as a predictor of survival in 302 patients with newly diagnosed multiple myeloma. / G. S. Nowakowski, T. E. Witzig, D. Dingli, M. J. Tracz, M. A. Gertz, M. Q. Lacy, J. A. Lust, A. Dispenzieri, P. R. Greipp, R. A. Kyle // Blood. - 2005. -Vol. 106. - N 7. - P. 2276-2279.

51. Harada, H. Phenotypic difference of normal plasma cells from mature myeloma cells / H. Harada, M. M. Kawano, N. Huang, Y. Harada, K. Iwato, O. Tanabe, H. Tanaka, A. Sakai, H. Asaoku, A. Kuramoto // Blood. - 1993. -Vol. 81. - N 10. - P. 2658-2663.

52. Hart, A. J. Minimal Residual Disease in Myeloma: Are We There Yet? / A. J. Hart, M. H. Jagasia, A. S. Kim, C. A. Mosse, B. N. Savani, A. Kassim // Biol. Blood Marrow Transplant. - 2012. - Vol. 18. - N 12. - P. 1790-1799.

53. Hundemer, M. Lack of CD56 expression on myeloma cells is not a marker for poor prognosis in patients treated by high-dose chemotherapy and is associated with translocation t(11;14) / M. Hundemer, U. Klein, D. Hose, M.-S. Raab, F. W. Cremer, A. Jauch, A. Benner, C. Heiss, M. Moos, A. D. Ho, H. Goldschmidt // Bone Marrow Transplant. - 2007. - Vol. 40. - N 11. - P. 1033-1037.

54. Ito, S. Clinical and biological significance of CD56 antigen expression in acute promyelocytic leukemia / S. Ito, Y. Ishida, T. Oyake, M. Satoh, Y. Aoki, S. Kowata, T. Uchiyama, S. Enomoto, T. Sugawara, H. Numaoka, K. Suzuki // Leuk. & Lymphoma. - 2004. - Vol. 45, - N 9. - P. 1783-1789.

55. De, J. Immunophenotypic profile predictive of KIT activating mutations in AML1-ETO leukemia / J. De, R. Zanjani, M. Hibbard // Am. J. Clin. Pathol. - 2007. -Vol. 128. - N 4. - P. 550-557.

56. Jamal, S. Immunophenotypic Analysis of Peripheral T-Cell Neoplasms A Multiparameter Flow Cytometric Approach / S. Jamal, L. Picker, D. Aquino, R. McKenna, B. Dawson // Am. J. Clin. Pathol. - 2001. - Vol. 116. - N 4. - P. 512526.

57. Jawed, I. Survival outcomes for multiple myeloma over three decades: A Surveillance, Epidemiology, and End Results (SEER) analysis / I. Jawed, C. Lee, J. Tward, O. Macdonald, D. Martincic, N. Vudarla, R. Fairbanks // J. Clin. Oncol. -2007. - Vol. 25. - P. 8019.

58. Jeong, T. Simplified flow cytometric immunophenotyping panel for multiple myeloma, CD56/CD19/CD138(CD38)/CD45, to differentiate neoplastic myeloma cells from reactive plasma cells / T. Jeong, C. Park, H. Shim, S. Jang, H. Chi, D. H. Yoon, D. Kim, J.-H. Lee, J.-H. Lee, C. Suh, K. H. Lee // Korean J. Hematol. - 2012. -Vol. 47. - N 4. - P. 260-266.

59. Jesús, F. Conventional diagnostics in multiple myeloma / F. Jesús // Eur. J. CANCER. - 2006. - Vol. 42. - N 11. - P. 1510-1519.

60. John, De Vos. Microarray-based understanding of normal and malignant plasma cells / D. V. John, D. Hose, T. Réme, K. Tarte, J. Moreaux, K. Mahtouk, M. Jourdan, H. Goldschmidt, J.-F. Rossi, F. W. Cremer, B. Klein // Immunol. Rev. -2006. - Vol. 210. - P. 86-104.

61. Johnsen, S. Identification and Characterization of Plasma Cells in Normal Human Bone Marrow by High-Resolution Flow Cytometry / S. Johnsen, M. R. Loken // Blood. - 1990. - Vol. 76(9). - P. 1739-1747.

62. Almeida, J. Immunophenotypic analysis of peripheral blood stem cell harvests from patients with multiple myeloma / J. Almeida, L. Vázquez, A. Orfao // Haematol. - 2003. - Vol. 88 (09). October. - P. 1013-1021.

63. Kapoor, P. Importance of Achieving Stringent Complete Response After Autologous Stem-Cell Transplantation in Multiple Myeloma / P. Kapoor, S. K. Kumar, A. Dispenzieri, M. Q. Lacy, F. Buadi, D. Dingli, S. J. Russell, S. R. Hayman, T. E. Witzig, J. A. Lust, N. Leung, Y. Lin, S. R. Zeldenrust, A. Mccurdy, P. R. Greipp, R. A. Kyle, S. V. Rajkumar, M. A. Gertz // J. of Clin. Oncol. - 2017. - Vol. 31. -N 36. - P. 4529-4536.

64. Kawano, Y. Multiple myeloma cells expressing low levels of CD138 have an immature phenotype and reduced sensitivity to lenalidomide / Y. Kawano, S. Fujiwara,

N. Wada, M. Izaki, H. Yuki, Y. Okuno, K. Iyama, H. Yamasaki, A. Sakai, H. Mitsuya, H. Hata // Int. J. Oncol. - 2012. - Vol. 41. - N 3. - P. 876-884.

65. Kesler, M. V. Anaplastic Large Cell Lymphoma A Flow Cytometric Analysis of 29 Cases / M. V. Kesler, G. S. Paranjape, S. L. Asplund, R. W. McKenna, S. Jamal // Am. J. Clin. Pathol. - 2007. - Vol. 128. - N 2. - P. 314-322.

66. Khalidi, H. S. The immunophenotype of adult acute myeloid leukemia: high frequency of lymphoid antigen expression and comparison of immunophenotype, French-American-British classification, and karyotypic abnormalities / H. S. Khalidi, L. J. Medeiros, K. L. Chang, R. K. Brynes, M. L. Slovak // Am. J. Clin. Pathol. -1998. - Vol. 109. - N 2. - P. 211-220.

67. Koehler, M. Expression of activation antigens CD38 and CD71 is not clinically important in childhood acute lymphoblastic leukemia / M. Koehler, F. Behm, M. Hancock // Leukemia. - 1993. - Vol. 7. - N 1. - P. 41-45.

68. Kopp, H. Contamination of autologous peripheral blood progenitor cell grafts predicts overall survival after high-dose chemotherapy in multiple myeloma / H. Kopp, S. Yildirim, K. Weisel, L. Kanz // J. Cancer Res. Clin. Oncol. - 2009. -Vol. 135. - N 4. - P. 637-642.

69. Korthals, M. The Level of Minimal Residual Disease in the Bone Marrow of Patients with Multiple Myeloma before High-Dose Therapy and Autologous Blood Stem Cell Transplantation Is an Independent Predictive Parameter / M. Korthals, N. Sehnke, R. Kronenwett, I. Bruns, J. Mau, F. Zohren, R. Haas, G. Kobbe, R. Fenk // Biol. Blood Marrow Transplant. - 2012. - Vol. 18. - N 3. - P. 423-431.

70. Kost, C. B. Marginal zone B-cell lymphoma: a retrospective immunophenotypic analysis. / C. B. Kost, J. T. Holden // Cytom. B. Clin. Cytom. -2008. - Vol. 74. - N 5. - P. 282-286.

71. Kraj, M. C-Kit Receptor (CD 117) Expression on Plasma Cells in Monoclonal Gammopathies / M. Kraj // Leuk. & Lymphoma. - 2004. - Vol. 45. -N 11. - P. 2281-2289.

72. Krejci, M. Myeloma Prognostic factors for survival after autologous transplantation: a single centre experience in 133 multiple myeloma patients /

M. Krejci, T. Buchler, R. Hajek, A. Svobodnik, A. Krivanova, L. Pour, Z. Adam, J. Mayer // Bone Marrow Transplantation. - 2005. - Vol. 35. - P. 159-164.

73. Kumar, S. International Myeloma Working Group consensus criteria for response and minimal residual disease assessment in multiple myeloma / S. Kumar, B. Paiva, K. C. Anderson, B. Durie, O. Landgren, P. Moreau, N. Munshi, S. Lonial, J. Blad, M. V. Mateos, M. Dimopoulos, E. Kastritis, M. Boccadoro, R. Orlowski, H. Goldschmidt, A. Spencer, J. Hou, W. J. Chng, S. Z. Usmani, E. Zamagni, K. Shimizu, S. Jagannath, H. E. Johnsen, E. Terpos, A. Reiman, R. A. Kyle, P. Sonneveld, P. G. Richardson, P. McCarthy, H. Ludwig, W. Chen, M. Cavo, J. L. Harousseau, S. Lentzsch, J. Hillengass, A. Palumbo, A. Orfao, S. V. Rajkumar, J. S. Miguel, H. Avet-Loiseau // Lancet Oncol. - 2016. - Vol. 17. - N 8. - P. 328-346.

74. Kumar, S. CD45 expression by bone marrow plasma cells in multiple myeloma: clinical and biological correlations / S. Kumar, S. V. Rajkumar, T. Kimlinger, P. R. Greipp, T. E. Witzig // Leukemia. - 2005. - Vol. 19. - N 8. -P. 1466-1470.

75. Kumar, S. K. Risk of progression and survival in multiple myeloma relapsing after therapy with IMiDs and bortezomib: a multicenter international myeloma working group study. / S. K. Kumar, J. H. Lee, J. J. Lahuerta, G. Morgan, P. G. Richardson, J. Crowley, J. Haessler, J. Feather, A. Hoering, P. Moreau, X. LeLeu, C. Hulin, S. K. Klein, P. Sonneveld, D. Siegel, J. Bladé, H. Goldschmidt, S. Jagannath, J. S. Miguel, R. Orlowski, A. Palumbo, O. Sezer, S. V Rajkumar, B. G. M. Durie // Leukemia. - 2012. - Vol. 26. - N 1. - P. 149-157.

76. Kumar, S. K. Improved survival in multiple myeloma and the impact of novel therapies / S. K. Kumar, S. V. Rajkumar, A. Dispenzieri, M. Q. Lacy, S. R. Hayman, F. K. Buadi, S. R. Zeldenrust, D. Dingli, S. J. Russell, J. A. Lust, P. R. Greipp, R. A. Kyle, M. A. Gertz // Blood. - 2015. - Vol. 111. - N 5. - P. 25162521.

77. Kyle, R. SPOTLIGHT REVIEW Criteria for diagnosis, staging, risk stratification and response assessment of multiple myeloma / R. Kyle // Leukemia. -2009. - Vol. 23. - P. 3-9.

78. Lacronique-Gazaille, C. A simple method for detection of major phenotypic abnormalities in myelodysplastic syndromes: expression of CD56 in CMML / C. Lacronique-Gazaille, M. Chaury, A. Guyader, J. Faucher, D. Bordessoule // Haematologica. - 2007. - Vol. 92. - N 6. - P. 859-860.

79. Lamkin, T. Immunophenotypic differences between putative hematopoietic stem cells and childhood B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia cells / T. Lamkin, J. Brooks, G. Annett, W. Roberts W // Leukemia. - 1994. - Vol. 8. -N 11. - P. 1871-1878.

80. Lavabre-Bertrand, T. Quantification of CD24 and CD45 antigens in parallel allows a precise determination of B-cell maturation stages: relevance for the study of B-cell neoplasias. / T. Lavabre-Bertrand, C. Duperray, C. Brunet, P. Poncelet, C. Exbrayat, P. Bourquard, C. Lavabre-Bertrand, J. Brochier, M. Navarro // Leukemia. - 1994. - Vol. 8. - N 3. - P. 402-408.

81. Legrand, O. The immunophenotype of 177 adults with acute myeloid leukemia: Proposal of a prognostic score / O. Legrand, J.-Y. Perrot, M. Baudard, A. Cordier, R. Lautier, G. Simonin, R. Zittoun, N. Casadevall, J.-P. Marie // Blood. -2000. - Vol. 96. - N 3.

82. Lewis, R. E. The immunophenotype of pre-TALL/LBL revisited. / R. E. Lewis, J. M. Cruse, C. M. Sanders, R. N. Webb, B. F. Tillman, K. L. Beason, J. Lam // Exp. Mol. Pathol. - 2006. - Vol. 81. - N 2. - P. 162-165.

83. Li, T. Immunohistochemical and genetic analysis of Chinese nasal natural killer/T-cell lymphomas / T. Li, B. Zhang, Y. Ye // Hum. Pathol. - 2006. - Vol. 37. -N 1. - P. 54-60.

84. Lima, M. Immunophenotypic Aberrations, DNA Content, and Cell Cycle Analysis of Plasma Cells in Patients with Myeloma and Monoclonal Gammopathies / M. Lima, M. Teixeira, S. Fonseca, C. Gon5alves, M. Guerra, M. Queiros, A. Santos, A. Coutinho, L. Pinho, L. Marques, M. Cunha, P. Ribeiro, L. Xavier, H. Vieira, P. Pinto // Blood Cells, Mol. Dis. - 2000. - Vol. 26. - N 6. - P. 634-645.

85. Lin, P. Flow Cytometric Immunophenotypic Analysis of 306 Cases of Multiple Myeloma / P. Lin, R. Owens, G. Tricot, C. S. Wilson // Am. J. Clin. Pathol. -2004. - Vol. 121. - N 4. - P. 482-488.

86. Lin, F. Plasmablastic lymphoma of the cervical lymph nodes in a human immunodeficiency virus-negative patient: a case report and review of the literature / F. Lin, K. Zhang, A. J. Quiery, J. Prichard // Arch. Pathol. Lab. Med. - 2004. -Vol. 128. - N 5. - P. 581-584c.

87. Liu, H. Flow cytometric minimal residual disease monitoring in patients with multiple myeloma undergoing autologous stem cell transplantation: a retrospective study / H. Liu, C. Yuan, J. Heinerich, R. Braylan, M. Chang, J. Wingard, J. Moreb // Leuk. & Lymphoma - 2008. - Vol. 49. - N 2. - P. 306-314.

88. Liu, Y. J. Regulation of B-cell commitment to plasma cells or to memory B cells / Y. J. Liu, J. Banchereau // Semin. Immunol. - 1997. - Vol. 9. - P. 235-240.

89. Lochem, E. G. Immunophenotypic differentiation patterns of normal hematopoiesis in human bone marrow: reference patterns for age-related changes and disease-induced shifts / E.g. Lochem, V. H. van der Velden, H. K. Wind, J. G. te Marvelde, N. A. Westerdaal // Cytom. B Clin Cytom. - 2004. - Vol. 60. - N 1. - P. 113.

90. Loosdrecht, A. A. Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1-risk myelodysplastic syndromes by flow cytometry / A. A. Loosdrecht, T. M. Westers, A. H. Westra, A. M. Dräger, V. H. van der Velden // Blood. - 2008. -Vol. 111. - N 3. - P. 1067-1077.

91. Lorand-Metze, I. The prognostic value of maturation-associated phenotypic abnormalities in myelodysplastic syndromes / I. Lorand-Metze, S. M. Califani, E. Ribeiro, C. S. Lima // Leuk Res. - 2008. - Vol. 32. - N 2. - P. 211-213.

92. Ludwig, H. Bortezomib, thalidomide and dexamethasone, with or without cyclophosphamide, for patients with previously untreated multiple myeloma: 5-year follow-up / H. Ludwig, R. Greil, T. Masszi, I. Spicka, O. Shpilberg, R. Hajek, A. Dmoszynska, B. Paiva, M. B. Vidriales, G. Esteves, A. M. Stoppa, D. Robinson,

S. Chaturvedi, O. Ataman, C. Enny, H. Feng, H. van de Velde, L. Viterbo // Br. J. Haematol. - 2015. - Vol. 171. - N 3. - P. 344-354.

93. Ocqueteau, M. Expression of the CD117 antigen (C-Kit) on normal and myelomatous plasma cells / M. Ocqueteau; A. Orfao; R. García-Sanz; J. Almeida; M. Gonzalez // Br. J. Haematol. - 1996. - Vol. 95. - N 3.

94. Martín, P. Neural cell adhesion molecule expression in plasma cells in bone marrow biopsies and aspirates allows discrimination between multiple myeloma, monoclonal gammopathy of uncertain significance and polyclonal plasmacytosis / P. Martín, A. Santón // Histopathology. - 2004. - Vol. 44. - N 4. - P. 375-380.

95. Mateo, G. Prognostic value of immunophenotyping in multiple myeloma: A study by the PETHEMA/GEM cooperative study groups on patients uniformly treated with high-dose therapy / G. Mateo, M. A. Montalbán, M. B. Vidriales, J. J. Lahuerta, M. V. Mateos, N. Gutiérrez, L. Rosiñol, L. Montejano, J. Bladé, R. Martínez, J. De La Rubia, J. Diaz-Mediavilla, A. Sureda, J. M. Ribera, J. M. Ojanguren, F. De Arriba, L. Palomera, M. J. Terol, A. Orfao, J. F. San Miguel // J. Clin. Oncol. - 2008. -Vol. 26. - N 16. - P. 2737-2744.

96. Mateo Manzanera, G. Immunophenotyping of plasma cells in multiple myeloma / G. Mateo Manzanera, San Miguel Izquierdo // Methods Mol. Med. -2005. - Vol. 113. - P. 5-24.

97. Meletios, A. Study of Lenalidomide Plus Dexamethasone Versus Dexamethasone Alone in Relapsed or Refractory Multiple Myeloma (MM): Results of a Phase 3 Study (MM-010) / A. Meletios, A. Dimopoulos // Blood. - 2005. -Vol. 106. - N 11.- P. 6.

98. Miles, C. A. Papers in Press. Published on July 11, 2000 as Manuscript M002346200 / C. A. Miles, A. Sionkowska, S. L. Hulin, T. J. Sims, C. Nicholas, A. J. Bailey // J. B. C. - 2000. - P. 1-33.

99. Moehler, T. Multiple Myeloma / T. Moehler, H. Goldschmidt // Recent Results Cancer Res. - 2011. - Vol. 8. - P. 438-446.

100. Moreau, P. Bortezomib plus dexamethasone versus reduced-dose bortezomib, thalidomide plus dexamethasone as induction trthalidomide plus

dexamethasone as induction treatment before autologous stem cell transplantation in newly diagnosed multiple myeloma / P. Moreau, H. Avet-loiseau, T. Facon, M. Attal, M. Tiab, C. Hulin, C. Doyen, L. Garderet, E. Randriamalala, C. Araujo, G. Lepeu,

D. Caillot, M. Escoffre, B. Lioure, L. Benboubker, B. Pegourie, B. Kolb, A. M. Stoppa, J. Fuzibet, O. Decaux, M. Dib, C. Berthou, C. Sebban, C. Traulle, J. Fontan, M. Wetterwald, P. Lenain, C. Mathiot, J. Harousseau // Blood. - 2012. -Vol. 118. - N 22. - P. 5752-5758.

101. Morice, W. NK-cell-associated receptor expression in hepatosplenic T-cell lymphoma, insights into pathogenesis / W. Morice // Leukemia. - 2006. - Vol. 20. -N 1. - P, 883-886.

102. Morice, W. Novel immunophenotypic features of marrow lymphoplasmacytic lymphoma and correlation with Waldenstrom's macroglobulinemia / W. Morice // Mod. Pathol. - 2009. - Vol. 22. - P. 807-816.

103. Niesvizky, R. The relationship between quality of response and clinical benefit for patients treated on the bortezomib arm of the international, randomized, phase 3 APEX trial in relapsed multiple myeloma / R. Niesvizky, P. G. Richardson, S. V. Rajkumar, M. Coleman, L. Rosiol, P. Sonneveld, M. W. Schuster, D. Irwin,

E. A. Stadtmauer, T. Facon, J. L. Harousseau, A. L. Boral, D. L. Esseltine, K. C. Anderson, J. Blad // Br. J. Haematol. - 2008. - Vol. 143. - N 1. - P. 46-53.

104. Olteanu, H. Immunophenotypic studies of monoclonal gammopathy of undetermined significance / H. Olteanu, H. Y. Wang, W. Chen, R. W. McKenna // BMC Clin. Pathol. - 2008. - Vol. 8. - P. 13.

105. Ord, D. CD19 maps to a region of conservation between human chromosome 16 and mouse chromosome 7 / D. Ord // Immunogenetics. - 1994. -Vol. 39. - N 5. - P. 322-328.

106. Ortolani, C. Flow Cytometry of Hematological Malignancies / C. Ortolani // Am. J. Clin. Pathol. - 2011. - Vol. 7. - P. 823-831.

107. Paietta, E. Activating FLT3 mutations in CD117/KIT(+) T-cell acute lymphoblastic leukemias / E. Paietta, A. A. Ferrando, D. Neuberg, J. M. Bennett,

J. Racevskis, H. Lazarus, G. Dewald, J. M. Rowe, P. H. Wiernik, M. S. Tallman // Blood. - 2004. - Vol. 104. - N 2. - P. 558-560.

108. Paietta, E. A surrogate marker profile for PML/RAR alpha expressing acute promyelocytic leukemia and the association of immunophenotypic markers with morphologic and molecular subtypes / E. Paietta, O. Goloubeva, D. Neuberg, J. M. Bennett, R. Gallagher, J. Racevskis, G. Dewald, P. H. Wiernik // Cytom. B. Clin. Cytom. - 2004. - Vol. 59. - N 1. - P. 1-9.

109. Paiva, B. Multiparameter flow cytometric remission is the most relevant prognostic factor for multiple myeloma patients who undergo autologous stem cell transplantation / B. Paiva, J. Cervero, G. Mateo, J. J. Pe, M. a Montalba, A. Sureda, L. Montejano, N. C. Gutie, A. Garci, M. V Mateos, M. C. Lo, R. Garci, J. Galende, J. Herna, L. Palomera, D. Carrera, R. Marti, J. De Rubia, A. Marti, J. Blade, J. J. Lahuerta, A. Orfao // Blood. - 2008. - Vol. 112. - N 10. - P. 4017-4023.

110. Paiva, B. New criteria for response assessment: role of minimal residual disease in multiple myeloma / B. Paiva, J. J. M. Van Dongen, A. Orfao // Blood. -2016. - Vol. 125. - N 20. - P. 3059-3069.

111. Paiva, B. Comparison of immunofixation, serum free light chain, and immunophenotyping for response evaluation and prognostication in multiple myeloma / B. Paiva, J. Martinez-Lopez, M. B. Vidriales, M. V. Mateos, M. A. Montalban, E. Fernandez-Redondo, L. Alonso, A. Oriol, A. I. Teruel, R. De Paz, J. G. Larana, E. Bengoechea, A. Martin, J. D. Mediavilla, L. Palomera, F. De Arriba, J. Blad, A. Orfao, J. J. Lahuerta, J. F. S. Miguel // J. Clin. Oncol. - 2011. - Vol. 29. -N 12. - P. 1627-1633.

112. Peceliunas, V. Six color flow cytometry detects plasma cells expressing aberrant immunophenotype in bone marrow of healthy donors / V. Peceliunas, A. Janiulioniene, R. Matuzeviciene, L. Griskevicius // Cytom. Part B - Clin. Cytom. -2011. - Vol. 80 B. - N 5. - P. 318-323.

113. Pellat-Deceunynck, C. Normal and malignant human plasma cells: Proliferation, differentiation, and expansions in relation to CD45 expression / C. Pellat-

Deceunynck, R. Bataille // Blood Cells, Mol. Dis. - 2004. - Vol. 32. - N 2. - P. 293301.

114. Pellat-Deceunynck, C. Reactive plasmacytoses, a model for studying the biology of human plasma cell progenitors and precursors / C. Pellat-Deceunynck // Hematol. J. - 2000. - Vol. 1. - N 6. - P. 362-366.

115. Pérez-Andrés, M. Clonal plasma cells from monoclonal gammopathy of undetermined significance, multiple myeloma and plasma cell leukemia show different expression profiles of molecules involved in the interaction with the immunological bone marrow microenvironment / M. Pérez-Andrés, J. Almeida, M. Martín-Ayuso, M. J. Moro, G. Martín-Nuñez, J. Galende, D. Borrego, M. J. Rodríguez, F. Ortega, J. Hernandez, I. Moreno, M. Domínguez, G. Mateo, J. F. San Miguel // Leukemia. -2005. - Vol. 19. - N 3. - P. 449-455.

116. Petitjean, B. Pyothorax-associated lymphoma: a peculiar clinicopathologic entity derived from B cells at late stage of differentiation and with occasional aberrant dual B- and T-cell phenotype / B. Petitjean, F. Jardin, B. Joly, N. Martin-Garcia, H. Tilly, J. M. Picquenot, J. Briére, C. Danel, S. Mehaut, I. Abd-Al-Samad, C. Copie-Bergman, M. H. Delfau-Larue // Am. J. Surg. Pathol. - 2002. - Vol. 26. - N 6. -P. 724-732.

117. Philip, B. Subtype in Morphological / B. Philip, R. Greipp. - 1985. -Vol. 65. - P. 305-310.

118. Raja, K. R. M. Review of phenotypic markers used in flow cytometric analysis of MGUS and MM, and applicability of flow cytometry in other plasma cell disorders / K. R. M. Raja, L. Kovarova, R. Hajek // Br. J. Haematol. - 2010. -Vol. 149. - N 3. - P. 334-351.

119. Rajkumar, S. V. Phase III clinical trial of thalidomide plus dexamethasone compared with dexamethasone alone in newly diagnosed multiple myeloma: A clinical trial coordinated by the eastern cooperative oncology group / S. V. Rajkumar, E. Blood, D. Vesole, R. Fonseca, P. R. Greipp // J. Clin. Oncol. - 2006. - Vol. 24. -N 3. - P. 431-436.

120. Rajkumar, S. V. International Myeloma Working Group updated criteria for the diagnosis of multiple myeloma / S. V. Rajkumar, M. A. Dimopoulos, A. Palumbo, J. Blade, G. Merlini, M. V. Mateos, S. Kumar, J. Hillengass, E. Kastritis, P. Richardson, O. Landgren, B. Paiva, A. Dispenzieri, B. Weiss, X. LeLeu, S. Zweegman, S. Lonial, L. Rosinol, E. Zamagni, S. Jagannath, O. Sezer, S. Y. Kristinsson, J. Caers, S. Z. Usmani, J. J. Lahuerta, H. E. Johnsen, M. Beksac, M. Cavo, H. Goldschmidt, E. Terpos, R. A. Kyle, K. C. Anderson, B. G. M. Durie, J. F. S. Miguel // Lancet Oncol. - 2014. - Vol. 15. - N 12. - P. 538-548.

121. Rajkumar, S. V. Combination therapy with lenalidomide plus dexamethasone (Rev/Dex ) for newly diagnosed myeloma / S. V. Rajkumar, S. R. Hayman, M. Q. Lacy, A. Dispenzieri, S. M. Geyer, B. Kabat, S. R. Zeldenrust, S. Kumar, P. R. Greipp, R. Fonseca, J. A. Lust, S. J. Russell, R. A. Kyle, T. E. Witzig, M. A. Gertz // Lancet Oncol. - 2005. - Vol. 106. - N 13. - P. 4050-4053.

122. Rajkumar, S. V. Plasmablastic morphology is an independent predictor of poor survival after autologous stem-cell transplantation for multiple myeloma / S. V. Rajkumar, R. Fonseca, M. Q. Lacy, T. E. Witzig, T. M. Therneau, R. A. Kyle, M. R. Litzow, M. A. Gertz // J. Clin. Oncol. - 2017. - Vol. 17. - N 5. - P. 1551-1557.

123. Rawstron, A. C. Minimal residual disease assessed by multiparameter flow cytometry in multiple myeloma: impact on outcome in the Medical Research Council Myeloma IX Study / A. C. Rawstron, J. A. Child, R. M. de Tute, F. E. Davies, W. M. Gregory, S. E. Bell, A. J. Szubert, N. Navarro-Coy, M. T. Drayson, S. Feyler, F. M. Ross, G. Cook, G. H. Jackson, G. J. Morgan, R. G. Owen // J. Clin. Oncol. -2013. - Vol. 31. - N 20. - P. 2540-2547.

124. Rawstron, A. C. Flow cytometric disease monitoring in multiple myeloma : the relationship between normal and neoplastic plasma cells predicts outcome after transplantation / A. C. Rawstron, F. E. Davies, R. Dasgupta, A. J. Ashcroft, R. Patmore, M. T. Drayson, R. G. Owen, A. S. Jack, J. A. Child, G. J. Morgan // J. Clin. Oncol. - 2002. - Vol. 100. - N 9. - P. 3095-3100.

125. Rawstron, A. C. Minimal residual disease in myeloma by fl ow cytometry : independent prediction of survival bene fi t per log reduction / A. C. Rawstron,

W. M. Gregory, R. M. De Tute, F. E. Davies, S. E. Bell, M. T. Drayson, G. Cook, G. H. Jackson, G. J. Morgan, J. A. Child, R. G. Owen // J. Clin. Oncol. - 2017. -Vol. 125. - N 12. - P. 1932-1936.

126. Rawstron, A. C. Report of the European Myeloma Network on multiparametric flow cytometry in multiple myeloma and related disorders / A. C. Rawstron, A. Orfao, M. Beksac, L. Bezdickova, R. A. Brooimans, H. Bumbea, K. Dalva, G. Fuhler, J. Gratama, D. Hose, L. Kovarova, M. Lioznov, G. Mateo, R. Morilla, A. K. Mylin, P. Omed, C. Pellat-Deceunynck, M. P. Andres, M. Petrucci, M. Ruggeri, G. Rymkiewicz, A. Schmitz, M. Schreder, C. Seynaeve, M. Spacek, R. M. De Tute, E. Van Valckenborgh, N. Weston-Bell, R. G. Owen, J. F. San Miguel, P. Sonneveld, H. E. Johnsen // Haematologica. - 2008. - Vol. 93. - N 3. - P. 431-438.

127. Rawstron, A. Current Protocols in Cytometry. Immunophenotyping of plasma cells / A. Rawstron. - United Kingdom., 2006. - Chapter 6. Unit 6. - 23 c.

128. Reece, D. E. To the editor: Once- versus twice-weekly bortezomib induction therapy with CyBorD in newly diagnosed / D. E. Reece // Haematologica. -2017. - Vol. 115. - N 16. - P. 3416-3418.

129. Rei chard, K. ALK-positive diffuse large B-cell lymphoma: report of four cases and review of the literature. / K. Reichard, R. McKenna // Mod. Pathol. - 2007. -Vol. 20. - N 3. - P. 310-319.

130. Reid, S. Characterisation and relevance of CD138-negative plasma cells in plasma cell myeloma / S. Reid, S. Yang, R. Brown, K. Kabani, E. Aklilu, P. J. Ho, N. Woodland, D. Joshua // Int. J. Lab. Hematol. - 2010. - Vol. 32. - N 6. - Part 1. -P. 190-196.

131. Repp, R. Immunophenotyping is an independent factor for risk stratification in AML / R. Repp // Cytometry. - 2003. - Vol. 53 B. - N 1. - P. 11-19.

132. Riccardi, A. Changing clinical presentation of multiple myeloma / A. Riccardi; P. G. Gobbi; G. Ucci; D. Bertoloni; R. Luoni; L. Rutigliano; E. Ascari // Eur. J. Cancer. - 1991. - Vol. 27 (11). - P. 1401-1405.

133. Richardson, P. G. Bortezomib or High-Dose Dexamethasone for Relapsed Multiple Myeloma / P. G. Richardson, P. Sonneveld, M. W. Schuster, D. Irwin,

E. A. Stadtmauer, T. Facon, J.-L. Harousseau, D. Ben-Yehuda, S. Lonial, H. Goldschmidt, D. Reece, J. F. San-Miguel, J. Blade, M. Boccadoro, J. Cavenagh, W. S. Dalton, A. L. Boral, D. L. Esseltine, J. B. Porter, D. Schenkein, K. C. Anderson // N. Engl. J. Med. - 2005. - Vol. 352. - N 24. - P. 2487-2498.

134. Robillard, N. Immunophenotype of normal and myelomatous plasma-cell subsets / N. Robillard, S. Wuilleme, P. Moreau, M. C. Bene // Front. Immunol. -2014. - Vol. 5. - P. 721-727.

135. Rosinol, L. Superiority of bortezomib, thalidomide, and dexamethasone (VTD) as induction pretransplantation therapy in multiple myeloma: A randomized phase 3 PETHEMA/GEM study / L. Rosinol, A. Oriol, A. I. Teruel, D. Hernandez, J. Lopez-Jimenez, J. De La Rubia, M. Granell, J. Besalduch, L. Palomera, Y. Gonzalez, M. A. Etxebeste, J. Diaz-Mediavilla, M. T. Hernandez, F. De Arriba, N. C. Gutierrez, M. L. Martin-Ramos, M. T. Cibeira, M. V. Mateos, J. Martinez, A. Alegre, J. J. Lahuerta, J. San Miguel, J. Blada // Blood. - 2012. - Vol. 120. - N 8. -P. 1589-1596.

136. Ruiz-Ballesteros, E. Splenic marginal zone lymphoma: proposal of new diagnostic and prognostic markers identified after tissue and cDNA microarray analysis / E. Ruiz-Ballesteros, M. Mollejo, A. Rodriguez, F. I. Camacho, P. Algara, N. Martinez, M. Polla, A. Sanchez-aguilera, J. Menarguez, E. Campo, P. Martinez, M. Mateo, M. A. Piris // Blood. - 2005. - Vol. 106. - N 5. - P. 1831-1839.

137. Ryder, J. Aggressive natural killer cell leukemia: report of a Chinese series and review of the literature / J. Ryder, X. Wang, L. Bao, S. A. Gross, F. Hua // Int. J. Hematol. - 2007. - Vol. 85. - N 1. - P. 18-25.

138. Sahara, N. Clinicopathological and prognostic characteristics of CD56-negative multiple myeloma / N. Sahara, A. Takeshita, K. Shigeno, S. Fujisawa, K. Takeshita, K. Naito, M. Ihara, T. Ono, S. Tamashima, K. Nara, K. Ohnishi, R. Ohno // Br. J. Haematol. - 2002. - Vol. 117. - N 4. - P. 882-885.

139. Sahara, N. Prognostic significance of surface markers expressed in multiple myeloma: CD56 and other antigens / N. Sahara // Leuk. & Lymphoma. - 2004. -Vol. 45. - N 1. - P. 61-65.

140. San-Miguel, J. Immunological evaluation of minimal residual disease (MRD) in acute myeloid leukaemia (AML) / J. San-Miguel, M. Vidriales // Best. Pr. Res. Clin. Haematol. - 2002. - Vol. 15. - N 1. - P. 105-118.

141. San Miguel, J. Immunophenotypic analysis of Waldenstrom's macroglobulinemia / J. San Miguel, M. Vidriales, E. Ocio, G. Mateo, F. Sánchez-Guijo, M. Sánchez, L. Escribano, A. Bárez, M. Moro, J. Hernández, C. Aguilera, R. Cuello, J. García-Frade, R. López, J. Portero // Semin Oncol. - 2003. - Vol. 30. -N 2. - P, 187-195.

142. San Miguel, J. Immunophenotype and DNA cell content in multiple myeloma / J. San Miguel, R. Garcia-Sanz, M. Gonzalez, A. Orfao // Baillieres Clin. Haematol. - 1995. - Vol. 8. - N 4, - P. 735-759.

143. Sanderson, D. Syndecan-1 in B limphoid malignancies / D. Sanderson // Ann. Hematol. - 2002. - Vol. 81. - N 3. - P. 125-135.

144. Satoh, C. Flow cytometric parameters with little interexaminer variability for diagnosing low-grade myelodysplastic syndromes / C. Satoh, K. Dan, T. Yamashita, R. Jo, H. Tamura // Leuk. Res. - 2008. - Vol. 32. - N 5. - P. 699-707.

145. Kumar, S. Progress in the treatment of multiple myeloma / S. Kumar // Lancet. - 2006. - Vol. 367. - P. 791-792.

146. Kumar S. Drug Insight: thalidomide as a treatment for multiple myeloma / S. Kumar, K. C. Anderson // Nat. Rev. Clin. Oncol. - 2005. - Vol. 2. - P. 262-270.

147. Shea, D. O. Predictive factors for survival in myeloma patients who undergo autologous stem cell transplantation: a single-centre experience in 211 patients / D. O. Shea, C. Giles, E. Terpos, J. Perz, M. Politou, V. Sana, K. Naresh, I. Lampert, D. Samson, S. Narat, E. Kanfer, E. Olavarria, J. F. Apperley, A. Rahemtulla // Am. J. Clin. Pathol. - 2006. - February. - P. 731-737.

148. Singhal, S. Antitumor activity of thalidomide in refractory multiple myeloma / S. Singhal, J. Mehta, R. Desikan // New Engl. J. Med. - 1999. - Vol. 341. -P. 1565-1571.

149. Bakanay, S. M. Minimal Residual Plasma Cell Content of Autulogous Grafts, Chemosensitivity to Induction or High Dose Therapy and Pre/Post Transplant

PET Negativity Predict Long Term Disease Free Survival in Multiple Myeloma / S. M. Bakanay, K. Dalva, B. E. Koksoy, E. Ayyildiz, M. Ozcan, O. Ilhan // Blood. -2012. - Vol. 120. - N 21. - P. 3024.

150. Suzuki, R. Aggressive natural killer-cell leukemia revisited: large granular lymphocyte leukemia of cytotoxic NK cells / R. Suzuki, J. Suzumiya, S. Nakamura,

A. Notoya, S. Ozaki, H. Gondo, N. Hino, H. Mori, H. Sugimori, K. Kawa, K. Oshimi // Leukemia. - 2004. - Vol. 18. - N 4. - P. 763-770.

151. Tedder, T. F. The CD19/CD21 signal transduction complex of B lymphocytes / T. F. Tedder, L. J. Zhou // Immunol. Today - 1994. - Vol. 15. - N 9. -P. 437-442.

152. Tembhare, P. R. Flow cytometric differentiation of abnormal and normal plasma cells in the bone marrow in patients with multiple myeloma and its precursor diseases / P. R. Tembhare, C. M. Yuan, D. Venzon, R. Braylan, N. Korde, E. Manasanch, D. Zuchlinsky, K. Calvo, R. Kurlander, M. Bhutani, N. Tageja, I. Maric, M. Mulquin, M. Roschewski, M. Kwok, D. Liewehr, O. Landgren, M. Stetler-Stevenson // Leuk. Res. - 2014. - Vol. 38. - N 3. - P. 371-376.

153. Thalhammer-Scherrer, R. The immunophenotype of 325 adult acute leukemias: relationship to morphologic and molecular classification and proposal for a minimal screening program highly predictive for lineage discrimination / R. Thalhammer-Scherrer, G. Mitterbauer, I. Simonitsch, U. Jaeger, K. Lechner,

B. Schneider, C. Fonatsch // Am. J. Clin. Pathol. - 2002. - Vol. 117. - N 3. - P. 380389.

154. Uckun, F. Regulation of human B-cell ontogeny / F. Uckun // Blood. -1990. - Vol. 76. - N 10. - P. 1908-1923.

155. Vega, F. Plasmablastic lymphomas and plasmablastic plasma cell myelomas have nearly identical immunophenotypic profiles / F. Vega // Mod. Pathol. -2005. - Vol. 18. - N 6. - P. 806-815.

156. Vidriales, M. Minimal residual disease monitoring by flow cytometry / M. Vidriales, J. San-Miguel, A. Orfao, E. Coustan-Smith // Best. Pr. Res. Clin. Haematol. - 2003. - Vol. 16. - N 4. - P. 599-612.

157. Weber, D. Lenalidomide Plus High-Dose Dexamethasone Provides Improved Overall Survival Compared to High-Dose Dexamethasone Alone for Relapsed or Refractory Multiple Myeloma (MM): Results of 2 Phase III Studies (MM-009, MM-010) and Subgroup Analysis of Patients with / D. Weber, M. Wang, C. Chen, A. Belch, E. Stadtmauer, R. Niesvisky, Z. Yu, M. Olesnyckyj, J. Zeldis, R. Knight // Blood. - 2006. - Vol. 108. - N 11. - P. 3547.

158. Xu, Y. Flow cytometric analysis of monocytes as a tool for distinguishing chronic myelomonocytic leukemia from reactive monocytosis / Y. Xu, R. W. McKenna, N. J. Karandikar, A. J. Pildain // Am. J. Clin. Pathol. - 2005. -Vol. 124. - N 5. - P. 799-806.

159. Yuan, C. M. Role of flow cytometry of peripheral blood and bone marrow aspirates in early myeloma / C. M. Yuan, M. Stetler-Stevenson // Semin. Hematol. -2011. - Vol. 48. - N 1. - P. 32-38.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Схемы протоколов индукционного лечения (препараты, дозы, дни введения)

PAD

Бортезомиб 1,3 мг/м в/в струйно или п/к в 1, 4, 8 и 11-й дни

Доксорубицин 9 мг/м в/в в виде постоянной инфузии или ежедневно болюсно в 1-4-й дни

Дексаметазон 40 мг в/в капельно или внутрь: в 1-м курсе - в 1-4-й и в 8-11-й дни; в остальных курсах - только в 1 -4-й дни

Начало следующего курса - на 22-й день от начала предыдущего

VCD

Бортезомиб 1,3 мг/м в/в струйно или п/к в 1, 4, 8 и 11-й дни

Циклофосфамид 400 мг в/в капельно в 1-й и 8-й дни или 200 мг в/в капельно в 1, 4, 8 и 11-й дни или 50 мг внутрь в 1-14-й дни

Дексаметазон 40 мг в/в капельно или внутрь: в 1-м курсе - в 1-4-й и в 8-11-й дни; в остальных курсах - только в 1 -4-й дни или 20 мг в 1, 2, 4, 5, 8, 9, 11 и 12-й дни

Начало следующего курса - на 22-й день от начала предыдущего

VD

Бортезомиб 1,3 мг/м в/в струйно или п/к в 1, 4, 8 и 11-й дни

Дексаметазон 40 мг в/в капельно или внутрь: в 1-м курсе - в 1-4-й и в 8-11-й дни; в остальных курсах - только в 1 -4-й дни

или 20 мг в 1, 2, 4, 5, 8, 9, 11 и 12-й дни

Начало следующего курса - на 22-й день от начала предыдущего

СТБ

Талидомид 100 мг внутрь, ежедневно в течение 4 недель (постепенно увеличивая дозу до 200 мг/сутки)

Циклофосфамид 500 мг внутрь, 1 раз в неделю (1, 8, 15, 22-й дни)

Дексаметазон 20 мг внутрь в 1-4-й и в 15-18-й дни или 20 мг внутрь в 1, 8, 15, 22-й дни

Начало следующего курса - на 29-й день от начала предыдущего

УТБ

Бортезомиб 1,3 мг/м2 в/в струйно или п/к в 1, 4, 8 и 11-й дни

Талидомид 100 мг внутрь ежедневно 1-21-й дни

Дексаметазон 40 мг внутрь в 1-2, 4-5, 8-9 и 11-12 дни в 1-м и 2-м курсе или 40 мг внутрь в 1-4-й и 9-12-й дни в 1 -м и 2-м курсе, в 3-м и 4-м курсах 1, 2, 3, 4-й дни

Начало следующего курса - на 22-й день от начала предыдущего

УТБ+ (ерИ) или УТБС

Бортезомиб 1,3 мг/м2 в/в струйно или п/к в 1, 4, 8 и 11-й дни

Талидомид 100 мг внутрь ежедневно 1-21-й дни

Циклофосфамид 400 мг в/в капельно в 1-й и 8-й дни

Дексаметазон 40 мг внутрь в 1 -4-й, 9-12-й дни или 40 мг внутрь в 1 -4-й и 9-12-й дни в 1 -м и 2-м курсе, в 3-м и 4-м курсах 1, 2, 3, 4-й дни

Начало следующего курса - на 22-й день от начала предыдущего

VMP

Лечение по этой схеме включает 9 курсов

Курсы 1-4

Бортезомиб 1,3 мг/м2 в/в струйно или п/к в 1, 4, 8, 11, 22, 25, 29 и 32-й дни каждого курса

Мелфалан 9 мг/м внутрь в 1-4-й дни

Преднизолон 60 мг/м2 внутрь в 1-4-й дни

Перерыв между курсами - 10 дней

Последующие курсы (5-9) проводятся в следующем режиме

Бортезомиб 1,3 мг/м2 в/в струйно или п/к в 1, 4, 8, 22, 29-й дни каждого курса

Мелфалан 9 мг/м2 внутрь в 1-4-й дни

Преднизолон 60 мг/м внутрь в 1-4-й дни

Перерыв между курсами - 14 дней

RD

Леналидомид 25* мг внутрь в 1-21-й дни

Дексаметазон 40 мг внутрь в 1-4-й, 9-12-й дни и в 17-20-й дни в первых 4 курсах; в последующих курсах дексаметазон применяют только в 1 -4-й дни

Начало следующего курса - на 29-й день от начала предыдущего

*Доза леналидомида определяется в зависимости от функции почек (учитывается клиренс эндогенного креатинина).

Rd

Леналидомид 25* мг внутрь в 1-21-й дни

Дексаметазон 40 мг внутрь в 1, 8, 15 и 22-й дни

Начало следующего курса - на 29-й день от начала предыдущего

*Доза леналидомида определяется в зависимости от функции почек (учитывается клиренс эндогенного креатинина).

MP

Мелфалан 9 мг/м внутрь в 1-4-й дни

Преднизолон 60 мг/м2 внутрь в 1-4-й дни со снижением дозы в 5-8-й дни и полной отменой с 9-го дня

Начало следующего курса - на 29-36-й дни от начала предыдущего

УМРТ

Лечение по этой схеме включает 9 курсов

Курсы 1-4

Бортезомиб 1,3 мг/м2 в/в струйно или п/к в 1, 4, 8, 11, 22, 25, 29 и 32-й дни каждого курса

Талидомид 50 мг внутрь в 1-42-й дни

Мелфалан 9 мг/м2 внутрь в 1-4-й дни

Преднизолон 60 мг/м2 внутрь в 1-4-й дни

Начало следующего курса - на 43-й день от начала предыдущего

Последующие курсы (5-9) проводятся в следующем режиме

Бортезомиб 1,3 мг/м2 в/в струйно или п/к в 1, 8, 22 и 29-й дни каждого курса

Талидомид 50 мг внутрь в 1-42-й дни

Мелфалан 9 мг/м внутрь в 1-4-й дни

Преднизолон 60 мг/м2 внутрь в 1-4-й дни

Начало следующего курса - на 43-й день от начала предыдущего

СУЛБ

Лечение по этой схеме включает 4-6 курсов

Циклофосфамид 500 мг внутрь в 1, 8, 15, 22-й дни

Винкристин 0,4 мг/день (максимальная доза за 1 курс - 1,6 мг)

Доксорубицин 9 мг/м в/в в виде постоянной инфузии или ежедневно болюсно в 1-4-й дни (максимальная доза за 1 курс - 36 мг/м2)

Дексаметазон 40 мг внутрь в 1-4-й и в 12-15-й дни

Начало следующего курса - на 22-й день от начала предыдущего

УБСМР

Винкристин 1,5-2 мг в/в в 1-й день

БСКИ (Сагшшйп) 1 мг/кг в/в в 1 -й день

ССКИ (белюстин) 80-120 мг внутрь в 1-й день

Циклофосфан 800-1200 мг в/в в 1-й день

Мелфалан 10 мг в день внутрь с 1-го по 7-й или с 1-го по 10-й дни

Преднизолон 1 мг/кг внутрь с 1-го по 7-й дни, далее - равномерное снижение дозы до 21 -го дня курса, отмена на 22-й день

Перерыв между курсами - 3-4 недели (после отмены преднизолона)

VBAP

Винкристин 1 мг/м2 в/в в 1-й день

BCNU (Carmustin) 25 мг/м или CCNU (белюстин) - 80 мг внутрь в 1-й день

Адриабластин 30 мг/м2 в/в в 1-й день

Преднизолон 60 мг/м2 внутрь с 1-го по 4-й дни

Перерыв между курсами - 3 недели от 1 -дня лечения

VBAD

Винкристин 1 мг/м2 в/в в 1-й день

BCNU (Carmustin) 25 мг/м или ССКи (белюстин) - 80 мг внутрь в 1-й день

Адриабластин 30 мг/м2 в/в в 1-й день

Дексаметазон 40 мг внутрь с 1-го по 4-й дни

Перерыв между курсами - 3 недели от 1 -дня лечения

Иммунофенотип СВ19+/СБ117+/СБ56+, характеризующимся экспрессией аберрантных маркеров СБ117 и СБ56, а также экспрессией маркера СБ19, наблюдался у 6 (25%) больных.

Иммунофенотип СВ197СВ1177СБ56", характеризующийся отсутствием экспрессии аберрантных маркеров СБ117 и СБ56, а также отсутствием экспрессии СБ19, был выявлен у 4 (16,7%) пациентов.

Иммунофенотип СВ19+/СБ1177СБ56+, представленный экспрессией маркера СБ 19, экспрессией аберрантного маркера СБ56 и отсутствием экспрессии СБ117, был отмечен только у 1 (4,1%) пациента.

СВ197СБ1177СБ56+ - иммунофенотип, характеризующийся экспрессией аберрантного маркера СБ56 и отсутствием СБ117 и СБ 19 маркеров ПК, встречался у 9 (37,5%) пациентов.

Таким образом, наиболее часто встречающимся иммунофенотипом у больных ММ, напоминающим опухолевый, являлся СБ197СВ1177СБ56+.

Рисунок 5 иллюстрирует разновидности иммунофенотипа ПК костного мозга у первичных больных ММ.

■ С1)Ш/СШ171/0)56+

■ СВ19+/СВ117-/СВ56+

■ С 1)19 /СШ17 /С 1)56

■ СВ19-/С1)117+/СВ56+

СТ)19-/СТ>117-/СП56+

Рисунок 5. Иммунофенотип ПК (СБ138+/СВ38+/СБ45") костного мозга больных ММ

на момент диагностики

Частота выявления аберрантных маркеров ПК костного мозга

на момент диагностики ММ

На момент диагностики заболевания Частота выявления аберрантных маркеров плазматических клеток, %

СБ19 СБ117 СБ56

— + — + — +

70,80 29,2 58,3 41,7 16,7 83,3

На рисунке 6 ив таблице 6 представлена частота встречаемости аберрантных маркеров ПК в костном мозге первичных больных множественной миеломой.

СБ19-

шсти+ ■ СБ56+

Рисунок 6. Частота встречаемости экспрессии аберрантных маркеров ПК костного мозга на момент диагностики ММ

Как уже было отмечено выше, иммунофенотип опухолевых ПК имеет вид СБ 138+/СВ38+/СВ45"Мт/СБ 197СБ117+/СБ56+. Наиболее часто в нашем исследовании выявлялась экспрессия аберрантного маркера СБ56 - у 20 (83,3%) из 24 больных. Отсутствие экспрессии маркера СБ19 наблюдалось у 17 (70,83%) из 24 больных. Экспрессия СБ117 была выявлена у 10 (41,66%) из 24 больных.

90,00% 30,00% 70,00% 60,00% 50,00% 40,00% 30,00% 20,00% 10,00% 0,00%

*3,3 0%

70,80%

41,70°/ о

СР19-

СР117 <

СР56 (

отсутствием экспрессии трех маркеров. У 4 (13,3%) пациентов наблюдался СБ197СБ1177СБ56+ иммунофенотип, характеризовавшийся экспрессией аберрантного маркера СБ56 и отсутствием СБ 117, также не выявлялась экспрессия СБ19. Только у 2 (6,7%) пациентов наблюдалось сочетание экспрессии маркеров СБ117, СБ56 и отсутствие экспрессии СБ19, что наиболее соответствовало опухолевому иммунофенотипу плазматических клеток костного мозга СБ197СБ117+/СБ56+. В одном случае определялся СБ197СБ117+/СБ56" фенотип ПК, характеризовавшийся экспрессией аберрантного маркера СБ 117 и отсутствием экспрессии СБ56, также не выявлялась экспрессия СБ19. У другого пациента выявлялся СБ19+/СБ117+/СБ56- иммунофенотип ПК, отличавшийся от предыдущего только экспрессией СБ19 (см. таблицу 9, рисунок 8). И у последнего пациента определялся СБ 19+/ СБ 1177 СБ56+ иммунофенотип плазматических клеток, характеризовавшийся экспрессией аберрантного маркера СБ56 и отсутствием экспрессии аберрантного маркера СБ117, также выявлялась экспрессия маркера СБ19.

Иммунофенотип ПК

Рисунок 8. Иммунофенотип плазматических клеток костного мозга больных ММ

перед мобилизацией ГСК

Иммунофенотипирование плазматических клеток костного мозга на этапе перед 1-й ауто-ТГСК (или через 2-7 месяцев после мобилизации ГСК) было выполнено 31 больному ММ. Наиболее часто встречавшимся иммунофенотипом плазматических клеток на этом этапе лечения, так же как и перед мобилизацией ГСК, был СВ19+/СБ117+/СБ56+, выявлявшийся у 12 (38,7%) больных и характеризовавшийся экспрессией всех трех маркеров. Иммунофенотип С0197СВ1177С056-, отличавшийся отсутствием экспресиии всех трех маркеров, определялся у 10 (32,3%) пациентов. У 6 (19,35%) пациентов наблюдался иммунофенотип СБ197С01177С056+, характеризовавшийся отсутствием экспрессии аберрантного маркера С0117 и экспрессией СБ56, а также отсутствием экспрессии СБ19. Иммунофенотип СБ19+/СБ117-/СБ56+, схожий с предыдущим в отношении экспрессии аберрантных маркеров СБ 117 и СБ56, выявлялся у 3 (9,7%) больных и отличался от предыдущего экспрессией маркера СБ19 (см. таблицу 9, рисунок 9).

Рисунок 9. Иммунофенотип плазматических клеток костного мозга больных ММ после мобилизации ГСК (или перед 1-й ауто-ТГСК)

Изменение иммунофенотипа ПК костного мозга до и после мобилизации представлено на рисунке 10 - на диаграмме показано изменение иммунофенотипа ПК костного мозга до и после введения циклофосфана. Так, после мобилизации высокодозным циклофосфаном отмечалось значимое увеличение частоты встречаемости трех комбинаций иммунофенотипа, таких как СО197СВ1177СБ56+, СО19+/СВ1177СБ56+ и СО197СВ1177СБ56" после мобилизации. Другие три разновидности иммунофенотипа, такие как СО19-/СБ117+/СБ56+, СБ19"/СБ117+/СБ56" и СБ19+/СБ117+/СБ56", встречавшиеся до мобилизации, не выявлялись после введения циклофосфана.

14 12

а ю

S

Л

Щ 8

О I©

О 6

е

о

Е? 4

2

0

ч\

<хг (Л

О XV .<У ху

4Г #

У 1

У 1

1

у

1

я - 1

я 1 1 1 1 _ 7

^ чс

х

é> С

чл*х ^ л*

jy jr J? J? ^

Ч-> 0V & Л S? .Op

л -V .o4 ,<v .o4

v\4

..cv

S>

<9 с

ó> C^ & <5>л Иммунофенотип ПК

Перед мобилизацией После мобилизации

Рисунок 10. Изменение иммунофенотипа плазматических клеток до и после мобилизации ГСК

Только в одном случае отмечалось уменьшение частоты встречаемости иммунофенотипа ПК СБ19+/СБ117+/СБ56+ после мобилизации ГСК в сравнении с предыдущим этапом лечения (см. таблицу 9, рисунок 10).

Поскольку экспрессия маркера СО 19 может присутствовать или отсутствовать в популяции нормальных и опухолевых плазматических клеток [15], изучение изменений иммунофенотипа плазматических клеток в нашем

исследовании основывалось на анализе сочетаний аберрантных маркеров СВ117/СБ56. Так, при сравнении экспрессии аберрантных маркеров до и после мобилизации ГСК отмечались видимые изменения. Как представлено в таблице 9 и на рисунке 11 (А), перед мобилизацией ГСК, то есть перед введением циклофосфана, у 16 (53,3%) больных выявлялась экспрессия двух аберрантных маркеров СБ117 и СБ56 на плазматических клетках. У 5 (16,7%) больных выявлялась аберрантная экспрессия маркера СБ56 и отсутствие СБ117, и наоборот, у 2 (6,7%) пациентов определялась экспрессия СБ117 и отсутствие экспрессии СБ56. У 7 (23,3%) больных отмечалось отсутствие обоих аберрантных маркеров СБ117, СБ56. Как представлено на рисунке 11(Б), после мобилизации ГСК у 12 (38,7%) больных, так же как и на предыдущем этапе лечения, наиболее часто определялась экспрессия обоих аберрантных маркеров (СБ117/СБ56). У 10 (32,3%) больных наблюдалось отсутствие экспрессии этих же двух маркеров ПК. И у 9 (29%) больных отмечалась экспрессия маркера СБ56 и отсутствие маркера СБ117.

6,70%

□ СОЦ7- СО?б

аСШ17+/СБ56+

шСОИ7- СШ6-

ВСП117+СО?б-

А

□ С1)117-/01)56+ ■CDtl7l.CD.56i ■ СО117-/0056-

Б

Рисунок 11. Частота экспрессии аберрантных маркеров (CD117/CD56):

А. Перед мобилизацией ГСК. Б. После мобилизации ГСК (или перед 1-й ауто-ТГСК)

При сравнении аберрантной экспрессии антигенов до и после мобилизации были выявлены значимые изменения. Так, после мобилизации ГСК частота экспрессии СБ117+/СБ56+ снизилась с 53,3% до 38,7%, частота СБ1177СБ56-увеличилась с 23,3% до 32,3%, СБ117"/СБ56+- также увеличилась с 16,7% до 29%. Обращает на себя внимание отсутствие комбинации СВ117+/СБ56- после мобилизации, несмотря на то что данное сочетание аберрантных маркеров ПК встречалось на предыдущем этапе лечения у 6,7% больных.

4.2. Изменение иммунофенотипа плазматических клеток костного мозга до и после трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток

Исследование иммунофенотипа плазматических клеток костного мозга после 1-й ауто-ТГСК было выполнено 17 пациентам. Наиболее часто встречавшимся иммунофенотипом на этом этапе лечения оказался СВ19+/СВ117+/СБ56+, определявшийся у 8 пациентов и отличавшийся

экспрессией всех трех маркеров. У 5 пациентов отмечался иммунофенотип плазматических клеток С0197С01177С056-, характеризовавшийся отсутствием экспрессии всех трех маркеров. У 2 пациентов был выявлен фенотип СБ19-/С0117-/С056+, отличавшийся отсутствием экспрессии аберрантного маркера С0117 и экспрессией СБ56, а также отсутствием экспрессии СБ19. У 1 пациента определялся иммунофенотип СБ19"/СБ117+/СБ56", характеризовавшийся экспрессией СБ 117 и отсутствием экспрессии СБ56, а также отсутствием экспрессии СБ19. Еще у 1 пациента наблюдался фенотип плазматических клеток СБ197С0117+/С056+, отличавшийся экспрессией обоих аберрантных маркеров С0117 и СБ56 и отсутствием экспрессии СБ19, наиболее соответствовавший характеристике опухолевого иммунофенотипа (см. таблицу 9, рисунок 12).

Рисунок 12. Иммунофенотип плазматических клеток костного мозга больных ММ

после 1-й ауто-ТГСК

На рисунке 13 отражены изменения иммунофенотипа ПК костного мозга больных ММ до и после 1-й ауто-ТГСК. Так, после трансплантации частота встречаемости иммунофенотипов СБ19-/СБ117-/СБ56+, СБ19-/СБ117-/СБ56- и С019+/С0117+/С056+ снизилась в сравнении с предыдущим этапом лечения. СБ19+/СБ117-/СБ56+ иммунофенотип ПК, определявшийся перед 1 -й

ауто-ТГСК, не выявлялся после трансплантации. Комбинации иммунофенотипа СБ 19-/ СБ 117+/ СБ56+ и СО197СВ117+/СБ56- стали определяться после трансплантации, хотя на предыдущем этапе не выявлялись. Иммунофенотип ПК СВ19+/СБ117+/СВ56-, не определявшийся перед трансплантацией, также не наблюдался после.

Рисунок 13. Изменение иммунофенотипа плазматических клеток

до и после 1-й ауто-ТГСК

На рисунке 14 (А, Б) представлена частота экспрессии аберрантных маркеров СБ117 и СБ56 до и после 1-й ауто-ТГСК. Так, перед 1-й ауто-ТГСК у 12 (38,7%) больных выявлялась экспрессия обоих аберрантных маркеров СБ117 и СБ56 на плазматических клетках. У 9 (32,3%) больных отмечалось отсутствие обоих аберрантных СБ117 и СБ56 маркеров, а у оставшихся 6 (29%) больных определялась экспрессия маркера СБ56 и отсутствие СБ117.

После 1-й ауто-ТГСК у 9 (52,9%) пациентов выявлялась экспрессия обоих аберрантных маркеров СБ117 и СБ56, однако у 5 (29,4%) пациентов наблюдалось отсутствие экспрессии этих маркеров. У 2 (11,8%) пациентов определялась экспрессия аберрантного маркера СБ56 наряду с отсутствием

экспрессии другого аберрантного маркера СБ117. А у 1 (5,9%) больного, наоборот, наблюдалась экспрессия аберрантного маркера СБ117 при отсутствии экспрессии СБ56.

□ СЮ1)7-/СП>56+

□ СО 11 7+/ОШ6+ ■ СОИ7-ЛЯ)56-

А

□ СШ17-/СШ6+

■ СП 117+/С056+ шфЦ7-/ф56-