Структура вариабельного региона легких цепей иммуноглобулинов в патогенезе миеломной нефропатии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.21, кандидат медицинских наук Горчакова, Светлана Владимировна

• Горчакова, Светлана Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Горчакова, Светлана Владимировна

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Общая характеристика больных, включенных в исследование

2.2. Выделение мононуклеаров из пунктата костного мозга

2.3. Выделение РНК и обратная транскрипция

2.4. Анализ генов ЛЦ А, и к

2.4.1. Определение семейства ЛЦ А, и к

2.4.2. Секвенирование ПЦР- продукта

2.4.3. Множественное выравнивание последовательностей и определение вторичной структуры

2.4.4. Расчет изоэлектрической точки вариабельного региона и СБЮ

Глава 3. Результаты и обсуждение

3.1. Характеристика больных, включенных в исследование

3.2. Характеристика больных с цилиндровой нефропатией

3.3. Характеристика больных без цилиндровой нефропатией

3.4. Анализ использованных генов вариабельного региона легких цепей

3.5. Сравнение использования УЬ и генов у больных с цилиндровой нефропатией и без нее

3.6. Множественное выравнивание

3.7. Анализ расчетной изоэлектрической точки вариабельных регионов и СБЮ

3.8. Анализ клинических и лабораторных факторов, предсказывающих развитие цилиндровой нефропатии

3.9. Определение концентрации белка Бенс-Джонса в моче у больных хроническим лимфолейкозом

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структура вариабельного региона легких цепей иммуноглобулинов в патогенезе миеломной нефропатии»

Актуальность темы

Нефропатия- является ведущим клиническим проявлением^ при множественной ■ миеломе (ММ). В момент диагностики ММ- признаки, почечной» недостаточности (ПН) выявляют в 40-50%; случаев [10,28,31, 42,57,66,68,116,119,122]. Главным- патогенетическим' звеном в развитии миеломной нефропатии' является секреция • легких цепей (ЛЦ) иммуноглобулинов, которые могут вызывать повреждения различных структур нефрона: как канальцев, так и клубочков. Наиболее частым» (в 6387% случаях) вариантом поражения почек при ММ является цилиндровая нефропатия [111]. Под термином «цилиндровая нефропатия» (миеломная нефропатия, cast nephropathy) понимают поражение почек вследствие формирования* белковых преципитатов, (цилиндров или слепков) в дистальных отделах канальцев и собирательных трубках. Цилиндры вызывают обструкцию дистальных отделов канальцев и> собирательных трубочек, что приводит к. интерстициальному воспалению и фиброзу. Клинически выявляют признаки уремии с высоким уровнем азотемии. Эффективное лечение ММ приводит к улучшению функции почек в 50%. случаев цилиндровой нефропатии [18].

Образование цилиндров происходит при взаимодействии CDR3 (англ. complemetary-determining region) участка вариабельного домена ЛЦ и гликопротеида Тамма-Хорсфолла, секретируемого эпителием восходящего отдела петли Генле [63].

В патогенезе нефротоксичности определяющее значение имеют физико-химические свойства ЛЦ, их тропность к различным отделам нефрона и степень адгезии [8,37,106,117,128]. В частности, известны случаи высокого уровня секреции белка Бенс-Джонса в течение длительного времени7 без нарушения функции почек [119]. В то же время при секреции ЛЦ в минимальном количестве может развиться^ тяжелое необратимое поражение почек. В экспериментальных исследованиях in vitro было обнаружено [143], что способность ЛЦ взаимодействовать с гликопротеидом Тамма-Хорсфолла различна и зависит от строения CDR3 участка вариабельного домена ЛЦ.

Таким образом, CDR3 участок вариабельного домена, возможно, определяет нефротоксичные свойства ЛЦ и их способность вызывать развитие цилиндровой нефропатии при ММ. Изучение строения CDR3 участка вариабельного домена во взаимосвязи с клиническими проявлениями ММ позволит углубить представления о патогенезе формирования цилиндровой нефропатии в каждом конкретном случае. Цель исследования

Установить значение структуры вариабельного региона и конкретно CDR3 участка ЛЦ и их изоэлектрической точки в патогенезе цилиндровой > нефропатии у больных ММ. Задачи исследования

1. Определить нуклеотидные последовательности вариабельных регионов ЛЦ, синтезируемых плазматическими клетками у больных ММ с цилиндровой нефропатией и без нее.

2. Провести анализ нуклеотидных и предсказанных аминокислотных последовательностей вариабельных регионов ЛЦ, включающий:

• оценку репертуара используемых V и J генов ЛЦ у больных ММ с цилиндровой нефропатией и без нее,

• установление степени гомологии V генов ЛЦ терминальным генам

• рассчет изоэлектрической точки для вариабельного региона и CDR3 каждой ЛЦ, сравнение вариабельных регионов у больных ММ с цилиндровой нефропатией и без нее, используя методы компьютерного моделирования.

3. Проанализировать вероятность развития цилиндровой нефропатии и тяжесть. поражения на; основании анализа нуклеотидной последовательности вариабельного региона ЛЦ.

4. Исследовать клинические и лабораторные факторы риска развития? цилиндровой нефропатии.

Научная новизна:

Установлена первичная структура вариабельного региона и СОК.З легких цепей; а также их изоэлектрическая точка у пациентов с миеломной нефропатией ,и без нее. Изучено прогностическое значение этих показателей при развитии цилиндровой нефропатии; Выявлен репертуар используемых семейств генов вариабельного региона у пациентов с цилиндровой . нефропатией и без нее.

Практическая ценность.

В результате проведенных исследований; многие данные получены впервые: определены закономерности в использований определенных семейств генов вариабельных регионов в синтезе легких цепей при множественной миеломе,: установлено, что у пациентов с миеломной нефропатией и без нее нет различий в репертуаре используемых семейств генов вариабельных регионов. В результате проведенных исследований выявлено, что на основании первичной и вторичной структуры вариабельных регионов легких цепей, аминокислотного состава СОЮ, изоэлектрической: точки вариабельного региона легкой цепи и СОКЗ, невозможно установить их способность к образованию цилиндров с белком Тамма-Хорсфолля в почечных канальцах.

Положения, выносимые на защиту.

1. Для пациентов с множественной миеломой характерно использование специфического репертуара семейств генов вариабельного региона легких цепей. В группе Ук-генов достоверно чаще представлено I семейство. Среди .Гк-генов чаще всего используется 1кП. В группе больных с секрецией лямбда легких цепей, преобладают V гены I и III семейств. Использование I —генов X осуществляется только за счет ПЯП семейств.

2. Для пациентов с цилиндровой нефропатией характерно использование того же репертуара генов вариабельного региона легких цепей, что и для пациентов без цилиндровой нефропатии.

3. Гены вариабельного региона легких цепей, используемые миеломными клетками, совпадают с терминальными генами менее чем на 98%, что говорит о многочисленных мутациях. Накопление мутаций с заменой аминокислот в районах СОЯ свидетельствует о возможном контакте с антигеном.

4. На основании анализа первичной и вторичной структуры вариабельного региона легких цепей невозможно прогнозировать ее способность к образованию цилиндров с белком Тамма-Хорсфолля в почечных канальцах.

5. Развитие цилиндровой нефропатии коррелирует со стадией заболевания, определяемой по Оипе-Бакпоп и по международной системе стадирования.

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Горчакова, Светлана Владимировна

Выводы1

1. Строение первичной и вторичной структур вариабельных регионов легких^ цепей.иммуноглобулинов, включая аминокислотный состав районов CDR и FWR, изоэлектрическую точку вариабельного региона и CDR3, распределение аминокислот с разным1 зарядом, не коррелирует с цилиндровой нефропатией. Вероятность развития цилиндровой нефропатии и тяжесть поражения почек невозможно- прогнозировать на основании, анализа нуклеотидной последовательности- вариабельного региона легкой цепи иммуноглобулинов.

2. Использование семейств« генов вариабельного региона легких цепей миеломными клетками носит специфический характер. В группе Ук -генов достоверно чаще представлено I семейство - 50% (р<0,0001) по сравнению с репертуаром у здоровых доноров. Среди JK-генов чаще всего использовалось JkII - 42% (р=0,005).

3. В группе больных с секрецией лямбда легких цепей, преобладали V гены I -55%(р=0,002) и III - Зб%(р=0,012) семейств, II семейство было представлено не достаточно - 9%(р=0,001) по сравнению с репертуаром у здоровых доноров. Использование J -генов X осуществлялось только за счет II/III семейств - 100% (р<0,0001), в то время как у здоровых доноров представлены преимущественно VI (54%) и в меньшей степени I (7%) семейства.

4. Различий в репертуаре используемых генов вариабельного региона легких цепей у пациентов с цилиндровой нефропатией и без нее получено не было.

5. Используемые миеломными клетками гены вариабельного региона легких цепей во всех случаях обнаруживают признаки перенесенной соматической гипермутации, что свидетельствует о постфолликулярном происхождении клеток этой опухоли. Кпастерирование несинонимных мутаций в районах CDR свидетельствует о возможном контакте с антигеном.

6. Статистический анализ позволил выявить достоверную корреляцию между стадией заболевания, определяемой по Durie-Salmon (р=0,0006) и по международной системе стадирования (р=0,003) и развитием цилиндровой нефропатии.

Заключение.

Проведенный, нами анализ структуры» ЛЦ позволил установить определенные закономерности в использовании* семейств УЬ и 1Ь-генов миеломными клетками. Репертуар Ук и- УА,-генов, а также .Гк и А-генов • носит специфический характер и не совпадает с частотой использования генов в нормальной популяции. В! то же время различий в репертуаре семейств УЪ и Л, генов у пациентов с цилиндровой нефропатией и без нее получено не было.

При- анализе последовательностей генов вариабельного региона было, установлено, что гомология-терминальному гену была менее 97%. УЪ-гены, используемые миеломными клетками, во всех случаях обнаруживают признаки перенесенной соматической* гипермутации, что свидетельствует о. постфолликулярном происхождении клеток этой опухоли. У каждого* пациента с множественной миеломой плазматические клетки синтезируют свой уникальный моноклональный продукт, его уникальность обеспечивается, именно прошедшей соматической гипермутацией. Ранее существовала гипотеза, что миелома возникает на уровне стволовых клеток. Если бы это было так, то плазматические клетки были бы гетерогенны по секретируемому продукту. Проведенный анализ показал, что структура опухоли горизонтальная, поскольку плазматические клетки гомогенны, секретируют одинаковые по структуре иммуноглобулины.

Также в группе исследованных пациентов выявляется кластерирование несинонимных мутаций в районах СОЯ, т.е. последовательность УЬ имеет признаки целенаправленной селекции антигеном.

Таким образом, опухоль возникает из клетки, прошедшей антигензависимую дифференцировку. Полученные нами данные совпадают с литературными [55,81,115].

Цилиндровая не фропатия является безусловно лидирующим вариантом поражения^ почек при ММ, но это не позволяет исключить вероятность развития^ других типов4 нефропатии. Причем, именно^ цилиндровая нефропатия. считается* потенциально обратимой разновидностью» поражения, почек [79.131]. В связи с этим вариант нефропатии необходимо установить в дебюте заболевания, т.к. это* влияет на выбор тактики лечения пациента. Например, в последнее время множество исследований посвящено использованию в заместительной почечной терапии фильтров, позволяющих селективно удалять свободные ЛЦ [20,64,112]. Раннее применение данного вида терапии позволяет увеличить вероятность обратимости почечной недостаточности.

В настоящее время единственным достоверным методом с помощью^ которого можно установить вариант поражения почек при ММ является биопсия почки. Безусловно данный метод исследования является потенциально опасным, особенно учитывая склонность пациентов с ММ к развитию кровотечений, дорогостоящим, требующим особого внимания к пациенту и наличия необходимой патологоанатомической базы. Исследование структуры ЛЦ могло бы быть эквивалентом, альтернативой биопсии почки, позволяющим упростить верификацию типа поражения почек.

На основании многолетнего опыта наблюдения за пациентами с ММ и поражением почек также возможно предположить тип поражения почек с определенной долей вероятности, но только ретроспективно, анализируя характер течения заболевания. Поэтому мы провели в нашей работе моновариантный анализ с целью выявить клинические/лабораторные показатели, которые позволяли бы предсказывать развитие этого осложнения миеломной болезни. Кроме того, в случае выявления устойчивой ассоциации между развитием цилиндровой нефропатией и структурой ЛЦ был бы необходим анализ потенциальных вмешивающихся факторов. G учетом изложенного* выше, в исследование предусматривался моно- и многовариантный анализ факторов, ассоциирующихся* с цилиндровой^ нефропатией. Нам не удалось- идентифицировать клинических и» лабораторных факторов; которые независимо предсказывали бы вероятность развития цилиндровой нефропатии.

Несмотря на огромное количество, исследований посвященных моделированию различных вариантов поражения почек при ММ, установлению связей, между свойствами конкретной ЛЦ и формирующимся-типом, нефропатии, проведенное нами исследование абсолютно исключает наличие корреляции* между вероятностью' и тяжестью цилиндровой нефропатии и первичной структурой ЛЦ, а также предсказанной вторичной структурой. Таким образом, основным фактором который определяет способность ЛЦ связываться с белком Тамма-Хорсфолля является третичная структура ЛЦ. Известно, что способность антител специфически связывать те или иные антигены- может определяется их третичной структурой. Возможно, что нефротоксичность ЛЦ при цилиндровой нефропатии обусловлена структурными особенностями моно- или олигосахаридов, присоединяющихся к белку Бенс-Джонса, или другими причинами для поиска которых необходимы дальнейшие исследования. По всей видимости, в данном случае имеет место именно такой механизм. К сожалению, имеющиеся в настоящее время в распоряжении молекулярных биологов биоинформационные инструменты не позволяют проводить сколько бы то ни было достоверное предсказание третичной структуры белка по его аминокислотной последовательности.

Учитывая' все вышесказанное можно сделать вывод, что данное исследование является одним из первых шагов в данном направлении.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Горчакова, Светлана Владимировна, 2011 год

1. Альберте Б. с соавт. Молекулярная биология клетки. М., Мир,,1994.

2. Бирюкова JI.G., Володаева Е!В., Фетисова Е.В., Пивник A.B., Марголин О.В. Острая и хроническая почечная недостаточность при миеломной болезни. Тер. архив. 1999; 71: 7; 58-64.

3. Близнюков 0:П., Козьмин Л.Д., Высотская Л.Л., Голенков- А.К. Тищенко В.М:, Самойлович М.П., Климович В.Б. Человеческие-легкие цепи иммуноглобулинов лямбда формируют амилоидные фибриллы и гранулярные агрегаты в растворе. Биохимия. 2005;70(4): 458-66.

4. Блумберг И:А. Физико-химические свойства парапротеинов сыворотки крови и мочи при парапротеинемических гемобластозах. Москва. 1981'. 24 с.

5. Блумберг И.А., Велик Л.В., Семенова И.А. Характеристика физико-химических свойств парапротеинов. В кн.: Яворковский Л. И. (ред.). Лейкозология. Рига: РМИ; 1979: 4-12.

6. Блумберг И.А., Яворковский Л.И., Велик Л.В. Изоэлектрическая точка парапротеинов у больных миеломной болезнью. В кн.:Лейкозология. Рига:РМИ; 1983.76-80.

7. Бутвиловский A.B., Барковский Е.В., Бутвиловский В.Э. Выравнивание аминокислотных и нуклеотидных последовательностей. Медицинский журнал. 2007/№ 1; 10-12.

8. Варламова Е.Ю., Марьина С.А., Соболева Н.П., Сариди Э.Ю. Распространенность и клинические проявления моноклональной гаммапатии. Клин. Геронтология. 2004;№5:с.35-41.

9. Рекомендации NKF K/DOQI. Клинические практические рекомендации по хроническим Заболеваниям Почек: Оценка, Классификация и

10. Стратификация. Часть 4. Определения и классификация: стадий ХЗП. Положения 1.

11. O.Abraham R.S., Clark R.J., Bryant S.С, Lymp J.F:, Larson Т., Kyle R.A.,

12. Alexanian R., Barlogie В., Dixon D. Renal failure in multiple myeloma. Pathogenesis; and: prognostic implications. Arch Intern Med. 1990; 150: 1693-1695.

13. Alim-M.A., Hara Y.,, Kaji H■, Shinoda T. The V kappa III subgroup light chain proteins in AL amyloidosis & autoimmune diseases: Indian. J. Med. Res. 2001; 114:30-35.

14. Alpers CE, Magil AB, Gown AM: Macrophage origin of the multinucleated cells of myeloma cast nephropathy. Am J Clin Pathol 1989; 92: 662-665.

15. Arimura A, Li M, Batuman V. Treatment of renal failure associated with multiple myelomas and; other diseases by PACAP-38. Ann N Y Acad Sci. 2006 Jul; 1070:1-4.

16. Aucouturier P, Khamlichi AA, Preud'homme JL, Bauwens M, Touchard G, Cogne M. Complementary DNA sequence of human amyloidogenic immunoglobulin light-chain precursors. Biochem J. 1992 Jul 1;285 (Pt 1): 149-52.

17. Bahlis NJ, Lazarus PIM. Multiple myeloma-associated AL amyloidosis: is a distinctive therapeutic approach warranted? Bone Marrow Transplant. 2006;. 38:7-15.

18. Basic-Jukic N; Kes P; Labar B. Myeloma kidney: pathogenesis and treatment. Acta Med Croatica. 2001;55(4-5): 169-75.

19. Batuman V, Dreisbach AW, Cry an J. Light-chain binding sites on renal brush-border membranes. Am J Physiol 1990; 258:F 1259-65.

20. Batuman V, Verroust PJ, Navar GL, Kaysen JH, Goda FO, Campbell WC, Simon E, Pontillon F, Lyles M, Bruno J, Hammond TG. Myeloma light chains are ligands for cubilin (gp280). Am J Physiol 1998; 275: F246-54.

21. Bellotti V, Mangione P, Merlini G. Review: immunoglobulin light chain amyloidosis—the archetype of structural and pathogenic variability. J Struct Biol. 2000 Jun;130(2-3):280-9.

22. Bradwell A.R. Serum free light chain analysis. 4th Edition. Pub: UK 2006. 14-17.

23. Bridges SL, Lee SK, Johnson ML. et al. Somatic mutation and CDR3 lengths of immunoglobulin k light chains expressed in patients with rheumatoid arthritis and in normal individuals. J Clin Invest 1995;96:831-841.

24. Bridoux F., Sirac C., Hugue V. et al. Fanconi's syndrome induced by a monoclonal V kappa 3 light chain in Waldenstrom's macroglobulinemia. Am. J. Kidney Dis. 2005; 45(4): 749-757.

25. Buxbaum J.N., Chubba J.V., Hellman G.E. et al. MonoclonaK immunoglobulin deposition disease. Ann Int Med. 1990; 112: 455-464.

26. Cagnoli L. Society of Nephrology. Instructions and implementations for percutaneous renal biopsy. Guidelines for the therapy of glomerular nephropaties. G Ital Nefrol. 2003 Sep-0ct;20 Suppl 24:S3-47.

27. Chenna R, Sugawara H, Koike T, Lopez R, Gibson' TJ, Higgins DG, Thompson JDi Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs. Nucleic Acids Res. 2003 Jul l;31(13):3497-500.

28. Chothia C, Lesk AM, Tramontano A et al. Conformations of immunoglobulin hypervariable regions. Nature 1989; 342:877-883.

29. Clark AD, Shetty A, Soutar R. Renal failure and multiple myeloma: pathogenesis and treatment of renal failure and management of underlying myeloma. Blood Rev. 1999 Jun;13(2):79-90.

30. Cohen AH, Border WA: Myeloma kidney. An immunomorphogenetic study of renal biopsies. Lab Invest 1980; 42: 248-256.

31. Comenzo RL, Zhang Y, Martinez C, Osman K, Herrera GA. The tropism.of organ involvement in primary systemic amyloidosis: contributions of Ig V(L) germ line gene use and clonal plasma cell burden. Blood. 2001; 98:714-720.

32. Coward RA, Delamore IW, Mallick NP, Robinson EL. The importance of urinary immunoglobulin light chain isoelectric point (pi) in nephrotoxicity in multiple myeloma. Clin Sci (Lond). 1984 Feb;66(2):229-32.

33. Davis DP, Gallo G, Vogen SM, Dul JL, Sciarretta KL, Kumar A, Raffen R, Stevens FJ, Argon Y. Both the environment and somatic mutations govern the aggregation pathway of pathogenic immunoglobulin light chain. J Mol Biol. 2001 Nov 9;313(5): 1021-34.

34. Dayhoff M.O., Schwartz R.M., Orcutt B.C. In. atlas of protein sequence and structure. 1978, NBRF, Washington. Vol. 5, suppl. 3 (Dayhoff M.0., ed.). P. 345-352.

35. Decourt C, Cogné M, Rocca A. Structural- peculiarities of a-truncated V kappa III immunoglobulin light chain in myeloma'with light chain deposition disease.ClinExp Immunol. 1996 Nov;106(2):357-61.

36. Decourt C., Rocca A., Bridoux F. et al. Mutational analysis in murine models- for myeloma-associated. Fanconi's syndrome or cast myeloma-nephropathy. Blood. 1999; 94(10): 3559-3366.

37. Denoroy L., Déret S., Aucouturier P. Overpresentation of the V kappa IV subgroup in light chain deposition disease. Immunol. Lett. 1994; 42: 63-66.

38. Enqvist S, Sletten K, Stevens FJ, Hellman U, Westermark P. Germ line origin and somatic mutations determine the target tissues in systemic AL-amyloidosis. PLoS One. 2007 Oct 3;2(10):e981.

39. Farner NL, Dorner T, Lipsky PE. Molecular mechanisms and selection influence the generation of the human V lambda J lambda repertoire. J Immunol. 1999 Feb 15;162(4):2137-45.

40. Foss G.S., Nilsen R., Cornwell G.C. 3rd. A glycosylated Bence Jones protein and its autologous amyloid light chain containing potentially amyloidogenic residues. Scand. J. Immunol. 1998; 47(4): 348—354.

41. Ganeval D, Rabian C, Guerin V, Pertuiset P, Landias P, Jungers P. Treatment of multiple myeloma with renal involvement. Adv Nephrol. 1992. 21:347-370.

42. Gokden N, Cetin N, Colakoglu N, Kumar J, Abul-Ezz S, Barlogie B, Liapis H, Walker PD. Morphologic manifestations of combined light-chain deposition disease and light-chain cast nephropathy. Ultrastruct Pathol. 2007 Mar-Apr;31(2): 141-9.

43. Goldschmidt H, Lannert H, Bommer J, Ho AD. Renal failure in multiple myeloma "the myeloma kidney": state of the art. Saudi J Kidney Dis Transpl. 2001 Apr-Jun; 12(2): 145-50.

44. Goldschmidt H., Lannert H., Bommer J., Ho A. Multiple myeloma and renal failure. Nephrol Dial Trasplant. 2000; 15:301-304.

45. Gonnet GH, Cohen MA, Benner SA. Exhaustive matching of the entire protein sequence database. Science. 1992 Jun 5;256(5062): 1443-5.

46. Goranova V., Spassov E. Prognostic significance of the immunological variant in patients with multiple myeloma. Folia Med. 1999; 41:164-167.

47. Gu M., Wilton R., Stevens F.J. Diversity and diversification of light chains in myeloma: the specter of amyloidogenesis by proxy. Contrib. Nephrol. 2007; 153: 156-181.

48. Gu.X, Barrios R, Cartwright J, Font RL, Truong L, Herrera GA. Light chain, crystal deposition'as a manifestation-of plasma cell dyscrasias: the role of immunoelectron microscopy. Hum Pathol. 2003 Mar;34(3):270-7.

49. Gu X, Herrera GA. Light-chain-mediated acute tubular interstitial nephritis: a poorly recognized pattern* of renal disease in patients with* plasma cell dyscrasia. Arch Pathol Lab Med: 2006 Feb;130(2):165-9.

50. Henikoff S., Henikoff J.G. Amino acid substitution-matrices from.protein blocks. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. P. 10915-10919:

51. Herrera GA, Joseph L, Gu X, Hough A, Barlogie B. Renal pathologic spectrum in an autopsy series of patients with plasma cell dyscrasia. Arch Pathol Lab Med.2004 Aug;128(8):875-9.

52. Herrera GA. Renal manifestations of plasma cell dyscrasias. An* appraisal from the patients' bedside to the research laboratory. Ann Diagn Pathol. 2000; 4: 174-200.

53. Higgins DG, Sharp PM. CLUSTAL: a package for performing multiple sequence alignment on a microcomputer. Gene. 1988 Dec 15;73(l):237-44.

54. Hill GS, Morel-Maroger L, Mery JP, Brouet JC, Mignon F: Renal'lesions in multiple myeloma: Their relationship to associated protein abnormalities. Am J Kidney Dis. 1983; 2:423-438.

55. Huang ZQ, Kirk KA, Connelly KG, Sanders PW. Bence Jones proteins bind to a common peptide segment of Tamm-Horsfall glycoprotein to promote heterotypic aggregation. J Clin Invest. 1993; 92:2975-83.

56. Khamlichi A.A., Rocca A., Touchard G. et al. Role of light chain variable region in myeloma; with: light' chain deposition? disease: Evidence- from• am experimental model. Blood 1995; 86(10): 3655-3659.

57. Kim Y, Wall JS, Meyer J, Murphy C, Randolph TW, Manning MC, Solomon A, Carpenter JE. Thermodynamic modulation of light chain amyloid? fibril formation. J Biol Chem. 2000 Jan 21 ;275(3): 1570-4.

58. Knudsen LM, Hippe E, Hjorth M, Holmberg E, Westin J. Renal function in newly diagnosed multiple myeloma-a demographic study of 1353 patients. The Nordic Myeloma Study Group. Eur J Haematol. 1994 0ct;53(4):207-12.

59. Knudsen LM, Hjorth M, Hippe E. Renal failure in multiple myeloma: reversibility and impact on the prognosis. Nordic Myeloma Study Group. Eur J Haematol. 2000; 65(3):175-181.

60. Knudsen LM, Nielsen B, Gimsing P, Geisler C. Autologous stem cell transplantation in multiple myeloma: outcome in patients with renal failure: Eur J Haematol 2005;75:27-33.

61. Knudsen, LM; Nielsen B, Gimsing P, Geisler C. Autologous stem cell transplantation in multiple myeloma: outcome in patients with renal failure. Eur J Haematol. 2005 Jul;75(l):27-33.

62. Korbet SM, Schwartz MM. Multiple myeloma. J Am Soc Nephrol. 2006 Sep;17(9):2533-45.

63. Kosmas C, Stamatopoulos K, Stavroyianni N, Belessi C, Viniou N, Yataganas X. Molecular analysis of immunoglobulin genes in multiple myeloma. Leuk Lymphoma. 1999 Apr;33(3-4):253-65.

64. Kyle RA, Gertz MA. Primary systemic amyloidosis: clinical and laboratory features in 474 cases. Semin Hematol1. 1995;32:45-59.

65. Kyle RA, RajkumarSV: Multiple myeloma. N Engl J Med. 2004;351:1860-1873.

66. Kyle RA. Monoclonal proteins and renal disease. Annu Rev Med. 1994;45:71 -7.

67. Lin J., Markowitz GS, Valeri AM, Kambham N, Sherman WH, Appel GB, D'Agati VD. Renal monoclonal immunoglobulin deposition disease: The disease spectrum. J Am Soc. Nephrol. 2001; 12: 1482-1492.

68. Magee C, Vella JP, Tormey WP, Walshe JJ. Multiple myeloma and renal failure: one centers experience. Ren Fail. 1998; 20(4):597-606.

69. Mallick N.R. Acute renal failure and myeloma. Nephrol Dial Transplant. 1994; 9: 108-110.

70. Markowitz GS. Dysproteinemia and the kidney. Adv Anat Pathol 2004;11:49-63.

71. Matsuura K, Ikoma S, Watanabe M, Togawa A, Sinohara H. Some Bence-Jones proteins enter renal tubular cells, reach nuclei and induce cell death. Immunology. 1999 Dec;98(4): 584-9.

72. Melcion C, Mougenot B, Baudouin B. et al. Renal failure in myeloma: relationship with isoelectric point of immunoglobulin light chains. Clin Nephrol. 1984 Sep;22(3):138-43.

73. Merlini G, Pozzi C. Mechanisms of renal damage in plasma cell dyscrasias: an overview. Contrib Nephrol. 2007;153:66-86.

74. Merlini G, Stone MJ.Blood. Dangerous small B-cell clones. 2006 Oct 15;108(8):2520-30. Epub 2006 Jun 22.

75. Mian IS, Bradwell AR, Olson AJ: Structure, function and properties of antibody binding sites. J Mol Biol 1991, 217:133-151.

76. Montseny JJ, Kleinknecht D, Meyrier A, Vanhille P, Simon P, Pruna A, Eladari D. Long-term outcome according to renal histological lesions in 118 patients with monoclonal gammopathies. Nephrol Dial Transplant. 1998 Jun; 13 (6): 143 8-45.

77. Nicastri AL, Prado MJ, Dominguez WV, Prado EB. Nephrotoxicity of Bence-Jones proteins: interference in renal epithelial cell acidification. Braz J Med Biol Res.2002 Mar;35(3):357-60.

78. Nowrousian MR, Brandhorst D, Sammet C, Kellert M, Daniels R, Schuett P, Poser M, Mueller S, Ebeling P, Welt A, Bradwell AR, Buttkereit U, Opalka

79. Pandit» SR, Vesole DH. Management of renal dysfunction in multiple myeloma. Curr Treat Options Oncol. 2003 Jun;4(3):239-46.

80. Pasquali S, Casanova S, Zucchelli A, Zucchelli P. Long-term survival patients with acute and severe renal failure due to multiple myeloma. Clin Nephrol. 1990 Dec;34(6):247-54.

81. Pokkuluri PR, Solomon A, Weiss DT, Stevens FJ, Schiffer M. Tertiary structure of human lambda 6 light chains. Amyloid. 1999; 6(3): 165-171.

82. Poshusta T.L., Sikkink L.A., Leung N. et al. Mutations in specific structural regions of immunoglobulin light chains are associated with free light chain levels in patients with A1 amyloidosis. PLoS ONE 2009; 4(4): e5169.

83. Pote A, Zwizinski C, Simon EE, Meleg-Smith S, Batuman V. Cytotoxicity of myeloma light chains in cultured human kidney proximal tubule cells. Am J Kidney Dis. 2000 Oct;36(4):735-44.

84. Pozzi C., D Amigo M., Fogazzi B. et al. Light chain deposition disease with renal involvement: Clinical characteristics and prognosis factors. Am. J.Kidney Dis. 2003; 42: 1154-1163.

85. Prokaeva T, Spencer B, Kaut M, Ozonoff A, Doros G, et al. Soft tissue, joint, and bone manifestations of AL amyloidosis: clinical presentation, molecular features, and survival. Arthritis Rheum. 2007;56:3858-3868.

86. Randall RE, Williamson WC Jr, Mullinax F, Tung MY, Still WJ. Manifestations of systemic light chain deposition. Am J Med. 1976 Feb;60(2):293-9.

87. Randies E.G., Thompson J.R., Martin D.J., Ramirez-Alvarado M. Structural alterations within native amyloidogenic immunoglobulin light chains. J. Mol. Biol. 2009; 389(1): 199-210.

88. Ronco P.M., Alyanakian M.A., Mougenot B., Aucouturier P. Light chain deposition disease. A model of glomerulosclerosis defined at the molecular level. J. Am. Soc. Nephrol. 2001; 12: 1558-1565.

89. Rose, PE; McGonigle, R; Michael, J; Boughton, BJ. Renal failure and the histopathological features of myeloma kidney reversed by intensive chemotherapy and peritoneal dialysis. Br Med J (Clin Res Ed). 1987;294:411-412.,

90. Rostagno A, Vidal R, Kaplan B. pH-dependent fibrillogenesis of a Vkappalll Bence Jones protein. J Haematol. 1999 Dec;107(4):835-43.

91. Sakhuja V, Jha V, Varma S, Joshi K, Gupta KL, Sud,K, Kohli HS. Renal involvement in multiple myeloma: a 10-year study. Ren Fail. 2000;22(4):465-77.

92. Sanders PW, Booker BB, Bishop JB, Cheung HC. Mechanisms of intranephronal proteinaceous cast formation by low molecular weight proteins. J Clin Invest. 1990; 85(2):570-6.

93. Sanders PW, Booker BB. Pathobiology of cast nephropathy from human Bence Jones proteins. J Clin Invest 1992; 89:630-639.

94. Sanders PW. Management of paraproteinemic renal disease. Curr OpinNephrol Hypertens. 2005 Mar;14(2):97-103.

95. Sanders PW. Myeloma kidney. Kidney 1993, 25:1-7.

96. Sanders PW. Potential role of colchicine in the prevention of cast nephropathy from Bence Jones proteins. Contrib Nephrol 1993; 101:104-8.

97. Santostefano M., Zanchelli F., Zaccaria A., Poletti G., Fusaroli M. The ultrastructural basis of renal pathology in monoclonal gammopathies. J NEPHROL 2005; 18: 659-675.

98. Sikkink LA, Ramirez-Alvarado M. Biochemical and aggregation analysis of Bence Jones proteins from different light chain diseases. Amyloid. 2008 Mar;15(l):29-39.

99. Smolens P, Barnes JL, Stein JH. Effect of chronic administration of different Bence Jones proteins on rat kidney. Kidney Int. 1986 Dec;30(6):874-82.

100. Smolens P, Venkatachalam M, Stein JH. Myeloma, kidney cast nephropathy in a rat model' of multiple myeloma. Kidney Int. 1983 Aug;24(2): 192-204.

101. Solomon A, Weiss-DT, Kattine AA. Nephrotoxic potential of Bence Jones proteins. N Engl J Med 1991'; 324:1845-51.

102. Solomon. A, Weiss DT. Structural and functional properties of human lambda-light-chain variable-region subgroups. Clin Diagn Lab Immunol. 1995 Jul;2(4):387-94.

103. Solomon A. Light chains of immunoglobulins: structural-genetic correlates. Blood 1986, 68:603-610.

104. Solomon A. Light chains of human immunoglobulins. Meth Enzymol 1985; 116: 101-121.

105. Solomon A., Frangione B., Franklin E.C. Bence Jones proteins and-light chains of immunoglobulins. Preferential association of the V lambda VI subgroup of human light chains with amyloidosis AL (lambda). J. Clin. Invest. 1982; 70(2): 453-460.

106. Solomon A., Weiss D.T., Kattine A.A. Nephrotoxic potential of Bence Jones proteins. N. Engl. J. Med. 1991; 324: 1845-1851.

107. Solomon A., Weiss D.T., Pepys M.B. Induction in mice of human light-chain associated amyloidosis. Am. J. Pathol. 1992; 140: 629-637.

108. Solomon A., Weiss D.T., Williams T.K. Experimental model of human light-chain associated disease. Curr. Top Microbiol. Immunol. 1992; 182:261-267.

109. Stekhoven JH, van Haelst UJ. Unusual findings in the human renal glomerulus in multiple myeloma. A light- and electron-microscopic study. Virchows Arch B Cell Pathol 1971;9:311-321.j

110. Torra R, Blade J, Cases A. et al. Patients with multiple myeloma requiring long-term dialysis: presenting features, response to therapy, and outcome in a series of 20 cases. Br J Haematol. 1995; 91:854-859.

111. Viertel A, Weidmann E, Ditting T, Geiger H. Management of renal complications in patients with advanced multiple myeloma. Leuk Lymphoma. 2000; 38 (5-6): 513-519.

112. Weichhart T, Zlabinger GJ, Saemann MD. The multiple functions of Tamm-Horsfall protein in human health and disease: a mystery clears up. Wien Klin Wochenschr. 2005 May; 117(9-10):316-22.

113. Ying W-Z, Sanders PW. Mapping the Binding Domain of Immunoglobulin Light Chains for Tamm-Horsfall Protein. American Journal of Pathology. 2001;158:1859-1866.