Экспрессия интерлейкина-6 человека и его вирусного гомолога при неходжкинских лимфомах и множественной миеломе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Широков, Дмитрий Алексеевич

• Широков, Дмитрий Алексеевич
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Широков, Дмитрий Алексеевич

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

Вирусный интерлейкин-6 и ннтерленкнн-6 человека в патогенезе неходжкинских лимфом и множественной миеломы.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

Глава 3. Разработка системы определения экспрессии мРНК генов hIL-б и \ IL-6.

Глава 4. Последовательности генома HHV-8 и экспрессия мРНК vIL-б и hIL-б в клетках костного мозга больных множественной миеломой.

Детальная характеристика костного мозга больных множественной миеломой. .58 Последовательности генома HHV-8 в клетках костного мозга больных множественной миеломой.

Экспрессия мРНК hIL-б и vIL-б в клетках костного мозга больных множественной миеломой.

Взаимосвязь наличия последовательностей генома HHV-8 и экспрессии мРНК vIL-б и hIL-б в клетках костного мозга больных множественной миеломой с относительным содержанием различных клеточных типов в миелограмме.

Секвенирование последовательностей кДНК vIL-б, обнаруженных в клетках костного мозга больных множественной миеломой.

Резюме.

Глава 5. Экспрессия мРНК hIL-б и vIL-б при неходжкинских лимфомах.

Характеристика иммунофенотипа лимфом, включённых в исследование.

Экспрессия вирусного интерлейкина-6 и интерлейкина-6 человека в клетках неходжкинских лимфом.

Резюме.

Глава 6. Первичная лимфома серозных полостей.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспрессия интерлейкина-6 человека и его вирусного гомолога при неходжкинских лимфомах и множественной миеломе»

Актуальность темы исследования.

Регуляторная роль интерлейкина-6 человека (hIL-б) в стимуляции роста опухолевых клеток и развитии их резистентности к химио- и гормонотерапии при множественной миеломе и неходжкинских лимфомах убедительно доказана. Установление этого факта послужило толчком к развитию нового направления фундаментальных научных исследований в области активации трансдуцерного рецептора gpl30 и опосредованной им передачи сигнала в нормальных и опухолевых клетках. Прикладным аспектом работы явилось обоснование возможности проведения антицитокиновой (анти-ЫЬ-б) терапии в лечении множественной миеломы с помощью моноклональных антител. В нашей стране такие исследования проведены в ГУ Российском онкологическом научном центре имени Н.Н.Блохина РАМН. Достигаемый положительный эффект был, как правило, транзиторным, что обусловлено сходством биологической активности шести цитокинов, передающих сигнал через молекулу gpl30. По этой причине в качестве перспективной мишени антицитокинотерапии рассматривается gpl30, проводится исследование активации рецептора при неходжкинских лимфомах.

Проблема осложняется тем, что открыт новый цитокин семейства интерлейкина-6, который способен воздействовать непосредственно на gpl30 и вызывать его гомодимеризацию на нормальных и опухолевых клетках. Это вирусный интерлейкин-6 - цитокин вирусного происхождения, закодированный в геноме герпесвируса человека 8 типа (HHV-8). Вирусный интерлейкин-6 имеет 24% гомологии по аминокислотному составу с интерлейкином-6 человека, способен действовать на клетки человека и воспроизводить практически те же самые эффекты, что и его гомолог человеческого происхождения.

HHV-8 является последним из открытых (1994 год) опухолеродных вирусов человека. Этиологическая роль этого вируса наиболее хорошо известна при саркоме Капоши и мультицентрической болезни Кастельмана.

Полную ассоциацию с данным вирусом имеет и крайне редкая нозологическая форма периферических крупноклеточных неходжкинских лимфом - первичная лимфома серозных полостей, описанная лишь в последние годы. Важную патогенетическую роль в стимуляции роста этих опухолей играет продуцируемый инфицированными клетками вирусный интерлейкин-6. Ассоциация с HHV-8 документирована не только для первичной лимфомы серозных полостей, но и для иных В-крупноклеточных лимфом, фолликулярных лимфом, мальтом, что не исключает патогенетической роли вирусного интерлейкина-6 в этих случаях.

Особую роль в установлении ассоциации HHV-8 с опухолями иммунной системы занимают исследования в области множественной миеломы. Несмотря на то, что первая работа, подтвердившая HHV-8-инфекцию клеток костного мозга у больных ММ, была опубликована 10 лет назад (Rettig et al, 1996) в журнале Science, полной ясности в данном вопросе нет до настоящего времени. Следовательно, остается неясной и роль вирусного интерлейкина-6 при множественной миеломе. А это очень важно как с точки зрения фундаментальных знаний, так и с точки зрения установления причин возможных неудач анти-ЫЬ-6 терапии множественной миеломы.

С целью поиска ответов на эти вопросы нами в настоящей работе проведено исследование экспрессии интерлейкинов-6 человеческого и вирусного происхождения при различных вариантах периферических неходжкинских лимфом и лимфом из клеток-предшественников. Детальный молекулярный анализ опухолевых клеток в этих случаях проведен методами иммуногистохимии и проточной цитометрии. Экспрессия человеческого и вирусного интерлейкинов-6 при множественной миеломе и первичной лимфоме серозных полостей изучена с подтверждением наличия генов HHV-8 (Kl, К2 и ORF26) в опухолевой ткани.

Целью настоящей работы явилось изучение экспрессии интерлейкина-6 человека (hIL-б) и его вирусного аналога (vIL-6) опухолевыми клетками при различных иммуноморфологических вариантах неходжкинских лимфом, а также при множественной миеломе.

Задачи исследования.

1. Изучить экспрессию мРНК интерлейкина-6 человека и вирусного интерлейкина-6 в клетках неходжкинских лимфом методом RT-PCR.

2. Изучить экспрессию мРНК интерлейкина-6 человека и вирусного интерлейкина-6 клетками костного мозга больных множественной миеломой.

3. Охарактеризовать иммунофенотип клеток неходжкинских лимфом, экспрессирующих интерлейкин-6 человека и вирусный интерлейкин-6.

4. Исследовать образцы костного мозга больных множественной миеломой на предмет наличия в них ДНК HHV-8 по 3 генам-мишеням: Kl, К2 и ORF26.

5. Изучить нуклеотидные последовательности гена вирусного интерлейкина-6 в случаях его экспрессии при множественной миеломе.

6. Охарактеризовать цитологически клетки костного мозга больных множественной миеломой при экспрессии интерлейкина-6 человека и вирусного интерлейкина-6.

Научная новизна.

В результате проведенных исследований установлен ряд новых научных фактов. Главным из них является установление экспрессии вирусного интерлейкина-6 клетками костного мозга больных множественной миеломой в 20% случаев. Впервые показано, что в части случаев экспрессии вирусного интерлейкина-6 при множественной миеломе структурные гены HHV-8 в клетках костного мозга отсутствуют. Выявлены случайная нуклеотидная замена и 2 типа повторяющихся нуклеотидных замен в последовательностях вирусного интерлейкина-6, выделенном из клеток костного мозга больных множественной миеломой. Одна из этих замен приводит к изменению аминокислотного состава вирокина - замене аспарагиновой кислоты на аспарагин в положении 192, что потенциально может сказаться на особенностях третичной структуры и биологической активности вирусного интерлейкина-6 при множественной миеломе. Установлено, что вирусный интерлейкин-6 в 30% случаев его обнаружения экспрессируется опухолевой тканью HXJI и ММ при отсутствии экспрессии человеческого гомолога. Впервые обнаружена экспрессия вирусного интерлейкина-6 при лимфомах из Т-клеток-предшественников. Напротив, патогенетическая роль вирусного интерлейкина-6 при периферических В-клеточных лимфомах, исходя из результатов наших исследований, представляется маловероятной, так как он обнаружен лишь в 3% случаев (1 из 33, фолликулярная лимфома). Подтверждены экспрессия вирусного интерлейкина-6 и наличие генома HHV-8 в клетках первичной лимфомы серозных полостей в первом описанном в России ВИЧ-негативном случае.

Практическая значимость.

Практическая значимость работы складывается из 2 аспектов: диагностического и в перспективе иммунотерапевтического. Диагностический аспект заключается в разработке и внедрении в клиническую практику молекулярной диагностики периферичеких В-клеточных неходжкинских лимфом (в первую очередь, первичной лимфомы серозных полостей) и лимфом из Т-клеточных предшественников, основанной на установлении экспрессии опухолевой тканью вирусного интерлейкина 6. Вирусный интерлейкин-6 имеет уникальные антигенные детерминанты, что делает его потенциальной мишенью иммунотерапии в случаях экспрессии вирокина при множественной миеломе и неходжкинских лимфомах. При наличии генов HHV-8: К1 и ORF-26 в случаях множественной миеломы и первичной лимфомы серозных полостей, кодируемые ими белки также могут явиться потенциальной мишенью иммунотерапии.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Широков, Дмитрий Алексеевич

выводы.

1. Продукция вирусного интерлейкина-6 (vIL-б) клетками опухолевой ткани больных множественной миеломой и неходжкинскими лимфомами не взаимосвязана с экспрессией его человеческого гомолога и зависит от нозологической формы заболевания.

2. Экспрессия гена вирусного интерлейкина-6 наблюдается в -20% случаев множественной миеломы, которые по составу опухолевых клеток плазматического ряда и нормальных гемопоэтических клеток костного мозга не отличаются от vIL-6-негативных случаев.

3. Экспрессия гена vIL-б в большинстве случаев не ассоциирована с наличием генов HHV-8 К1 и ORF26 при множественной миеломе: в 50% этих случаев обнаруживается только ген vIL-б, в 12,5% - гены vIL-6 и ORF-26 и в 37,5% - все 3 изученных гена - vIL-6 (К2), ORF-26 и К1. Этот факт свидетельствует о возможном наличии дефектных вирусных геномов в клетках пораженного костного мозга больных множественной миеломой.

4. В 30% случаев экспрессии мРНК вирусного интерлейкина-6 клетками опухолевой ткани множественной миеломы и неходжкинских лимфом вирокин продуцируется при отсутствии человеческого интерлейкина-6, то есть потенциально может замещать интерлейкин-6 человека в качестве онкогена.

5. Ген вирусного интерлейкина-6, экспрессируемый клетками пораженного костного мозга больных множественной миеломой, имеет ряд изменений нуклеотидной структуры (в сопоставлении с нуклеотидной последовательностью, приводимой GeneBank). Замена тимина на цитозин в положении 306 не ведет к изменению аминокислоты в структуре вирусного интерлейкина-6 (фенилаланин-102). Замена гуанина на аденин в положении 574 ведет к изменению аминокислотного состава белка (аспарагиновой кислоты-192 на аспарагин).

6. Вероятной мишенью злокачественной трансформации, опосредованной HHV-8, при неходжкинских лимфомах являются пре-Т-лимфоциты, так как при редкой нозологии - лимфомах из Т-предшественников -экспрессия вирусного интерлейкина-6 обнаружена в 2 из 3 случаев.

7. При периферических В-клеточных лимфомах (за исключением первичной лимфомы серозных полостей) этиопатогенетическая роль вирусного интерлейкина-6 представляется маловероятной, так как экспрессия вирокина обнаруживается только в 3% случаев.

8. Клетки первичной лимфомы серозных полостей (описан первый в России ВИЧ-негативный случай) экспрессируют мРНК интерлейкина-6 человека и мРНК вирусного интерлейкина-6. В опухолевых клетках присутствует полноценный геном герпесвируса человека 8 типа (гены К1,К2, ORF26).

Заключение.

Целью данной диссертационной работы являлось исследование экспрессии двух белков - интерлейкина-6 человека и гомологичного ему вирусного интерлейкина-6 - при различных иммуноморфологических вариантах неходжкинских лимфом и множественной миеломе. С научной точки зрения, эти исследования в первую очередь были интересны потому, что в России подобных работ до сих пор не проводилось.

Множественная миелома представляет собой одно из самых распространённых онкогематологических заболеваний в мире. Ежегодно регистрируется 30 новых случаев на 1 миллион населения, а среди 80-летних заболеваемость составляет 37 человек на 100000 населения в год. Множественная миелома составляет 1% от всех онкологических заболеваний и немногим более 10% среди всех гемобластозов. При этом этиология данного заболевания до сих пор остаётся не ясной. Работа Rettig et al в журнале Science [Rettig, 1997] пробудила интерес к исследованиям возможного участия вируса герпеса человека 8 типа (HHV-8) в развитии этого заболевания. Не останавливаясь подробно на всех исследованиях, посвящённых этому вопросу и детально описанных в литературном обзоре, необходимо заметить, что результаты этих работ были крайне противоречивы.

Нами была поставлена задача исследовать экспрессию вирусного интерлейкина-6 (vIL-б) на уровне мРНК в образцах костного мозга больных множественной миеломой. Этот вирусный белок представляется наиболее вероятным кандидатом на роль основного фактора прогрессии ММ в случае ассоциации заболевания с HHV-8. Это объясняется, в первую очередь, тем, что vIL-б является гомологом интерлейкина-6 человека и практически идентичен ему по проявляемым биологическим активностям. А интерлейкин-6 человека, в свою очередь, является главным ростовым фактором при ММ. Именно это предопределило выбор vIL-б, как гена-мишени при исследованиях роли HHV-8 в развитии ММ. Также в задачу нашего исследования входило сравнение экспрессии вирусного интерлейкина-6 с экспрессией интерлейкина-6 человека при множественной миеломе.

Всего было исследовано 38 образцов костного мозга больных множественной миеломой. Исследование проводилось методом ПЦР с обратной транскрипцией. Для этой работы нами были подобраны пары праймеров к vIL-б и hIL-б, которые были протестированы на клеточных линиях ВС-3 и BCBL-1, несущих геном HHV-8, с целью исключить возможность ложноположительных результатов. Из 38 образцов костного мозга в 7 была обнаружена экспрессия мРНК vIL-б, что составило 18,4% от общего числа больных ММ. Экспрессия мРНК интерлейкина-6 человека была обнаружена в 32 из 38 случаев, что составило 84,2%. При сравнении результатов экспрессии мРНК этих двух белков выяснилось, что в большинстве случаев экспрессии мРНК vIL-б, в тех же образцах костного мозга наблюдается и экспрессия мРНК hIL-б. Единственным исключением стала больная З.И., у которой наблюдается экспрессия мРНК только вирусного интерлейкина-6. Это позволило предположить, что активность vIL-б скорее всего не является уникальной и жизненно необходимой для поддержания роста опухоли.

С целью подтвердить наличие геномов HHV-8 в костном мозге больных множественной миеломой мы также поставили ПЦР на выявление в клетках ДНК 3 генов-мишеней: К2 (ген, кодирующий vIL-6), ORF26 (ген большого капсидного белка вируса) и К1 (ген, кодирующий трансмембранный белок, предполагаемо участвующий в трансформации клеток). Гены-мишени были подобраны таким образом, чтобы расстояния между ними в вирусном геноме были достаточно большими и, следовательно, можно было с большей вероятностью оценить наличие в клетке полноценных геномов HHV-8. Также известно, что все 3 гена необходимы для продуктивной репликации вируса. Результаты наших исследований оказались довольно интересными. Из 7 образцов костного мозга больных ММ с экспрессией vIL-б наличие всех 3 генов-мишеней наблюдалось только в 2 случаях (больные В.А.2 и В.Б.). Ещё в одном случае (больная Н.В.) были обнаружены 2 гена - vIL-б и ORF26. Наконец, в остальных 4 случаях был найден только ген вирусного интерлейкина-6. Помимо этого, был обнаружен больной (Н.В.) с наличием всех 3 генов-мишеней, но без экспрессии мРНК vIL-6.

Данные этих исследований заставляют предположить, что полноценные геномы HHV-8 присутствуют в клетках 3 больных множественной миеломой. В случае остальных пяти больных можно говорить либо о встраивании части генома HHV-8 в геном клетки-хозяина, что до сих пор не было описано в литературе, либо о наличии в клетке дефектных эписом вируса, что более вероятно. При этом вопрос об участии HHV-8 в этиологии множественной миеломы остаётся открытым. Несомненно, что генетический материал этого вируса в клетках больных ММ встречается с большей частотой, чем в здоровой популяции или в других онкологических заболеваниях (за исключением, разумеется, трёх 100%-ассоциированных с HHV-8 патологий - саркомы Капоши, первичной лимфомы серозных полостей и мультицентрической болезни Кастельмана). Но является ли вирус пусковым механизмом трансформации клеток, участвует ли в поддержании трансформированного состояния клеток, либо является вирусом-сателлитом - это остаётся неясным. С другой стороны, наличие гена вирусного интерлейкина-6 и экспрессия мРНК vIL-б в клетках определённой части больных множественной миеломой позволяет говорить о vIL-б, как о возможной мишени противоопухолевой терапии. С этой точки зрения vIL-б является отличным опухолеассоциированным антигеном, специфичным только для трансформированных клеток.

Также нами были секвенированы нуклеотидные последовательности кДНК (комплементарных копий мРНК) вирусного интерлейкина-6, обнаруженных у больных множественной миеломой. Были обнаружены следующие нуклеотидные замены в кодонах vIL-б. 1)3амена аденина на цитозин в положении 119 (40 аминокислота, 2 положение ко дона, A AT

АСТ) у больной З.И., приводящая к замене аспарагина на треонин. 2)3амена тимина на цитозин в положении 306 (102 аминокислота, 3 положение кодона, ТТТ—>ТТС) у больных H.A.2, М.Е., З.И., В.П. и Г.А., не приводящая к замене фенилаланина. 3)3амена гуанина на аденин в положении 574 (192 аминокислота, 1 положение кодона, GAC—>ААС) у больных H.A.2, М.Е., З.И., В.П. и Г.А., приводящая к замене аспарагиновой кислоты на аспарагин. Проанализировав эти замены мы пришли к выводу, что они могут не влиять на функциональную активность вирусного интерлейкина-6 и могут говорить скорее о генетических особенностях штаммов HHV-8, циркулирующих в России.

Другим большим разделом нашей работы был скрининг образцов опухолевых клеток различных иммуноморфологических вариантов неходжкинских лимфом на экспрессию мРНК вирусного интерлейкина-6. Параллельно, как и в случае с множественной миеломой, изучалась экспрессия мРНК интерлейкина-6 человека. Всего было исследовано 35 образцов от больных HXJ1, в том числе 12 фолликулярных лимфом, 10 диффузных В-крупноклеточных лимфом, 4 Ki-1 крупноклеточных анапластических лимфомы, 3 лимфомы из Т-предшественников, 2 лимфомы Бёркитта, 1 первичная медиастинальная В-крупноклеточная лимфома, 1 лимфома из малых лимфоцитов (хронический лимфолейкоз), 1 периферическая Т-клеточная лимфома и 1 лимфома маргинальной зоны селезёнки. Все диагнозы были верифицированы с помощью метода иммуногистохимии с применением широкой панели моноклональных антител.

Экспрессия мРНК вирусного интерлейкина-6 была обнаружена в 3 из 35 случаев HXJI. Это был 1 случай фолликулярной лимфомы (1 из 12) и 2 случая лимфомы из Т-предшественников (2 из 3). Экспрессия мРНК интерлейкина-6 человека была обнаружена в 26 из 35 случаев неходжкинских лимфом. В vIL-6-позитивном случае фолликулярной лимфомы экспрессии мРНК hIL-б не наблюдали. Также не наблюдалось экспрессии мРНК hIL-6 у одного из больных с vIL-6-позитивным случаем пред-Т-клеточной лимфомы (больной ВАС). У больного ЮАВ с тем же диагнозом экспрессировались оба цитокина. У 7 пациентов не было обнаружено экспрессии ни мРНК vIL-б, ни мРНК hIL-б. Случаи лимфом из Т-предшественников представляют особый интерес потому, что обычным резервуаром для HHV-8 считаются В-лимфоциты, и в меньшей степени -моноциты, эндотелиоциты и эпителиальные клетки. Тем не менее, в литературе описаны случаи HHV-8-ассоциированных опухолей Т-клеточной природы. Так, в частности, были описаны случаи HHV-8-позитивных первичных лимфом серозных полостей с Т-клеточным фенотипом [Lechapt-Zalcman, 2001; Said, 1999]. Таким образом, наши данные подтверждают возможность присутствия HHV-8 в Т-клетках.

Наконец, важным достижением нашей работы стало обнаружение, диагностика и детальное описание первого в России случая HHV-8-позитивной первичной лимфомы серозных полостей (первичной выпотной лимфомы). Эта лимфома достаточно трудна по своей диагностике, так как характерные для этой патологии экссудаты опухолевых клеток в различные полости тела встречаются и при других неходжкинских лимфомах. Помимо этого, будучи В-клеточной по своей природе, эта лимфома может не экспрессировать В-клеточных маркеров. Идентифицированный нами случай первичной выпотной лимфомы отличался высоким уровнем экспрессии В-клеточного антигена CD20, активационного антигена CD38 и молекулы HLA-DR. Необычным было отсутствие экспрессии молекулы синдекана-1 (маркер CD138), которая в принципе является дифференциальным маркером данной патологии.

Плевральный экссудат, полученный от больного, была исследован в реакции непрямой иммунофлуоресценции на наличие антител к белкам 2 герпесвирусов - HHV8 и EBV. Были определены высокие титры антител к белкам обоих вирусов. Также этот случай первичной лимфомы серозных полостей был исследован цитологически. Кроме того, была поставлена PCR на 3 гена HHV8 (Kl, К2 и ORF26) и RT-PCR на экспрессию мРНК интерлейкина-6 человека и вирусного интерлейкина-6. Результат был положительным как на наличие в опухолевых клетках всех генов-мишеней, так и на экспрессию vIL-6 и hIL-6.

Уникальность обнаруженного нами случая первичной лимфомы серозных полостей в том, что он оказался ВИЧ-негативным, хотя из литературных данных было известно, что практически всегда эта патология развивается на фоне СПИДа. Этот случай оказался всего лишь 23-ей ВИЧ-негативной первичной выпотной лимфомой, описанной в мировой литературе.

Подводя итог, можно сказать, что оценка экспрессии вирусного интерлейкина-6 и сравнение с экспрессией интерлейкина-6 человека при множественной миеломе и различных вариантах HXJ1 были проведены в нашей стране впервые. Ещё одним важным достижением явилось детальное описание первого в России случая HHV8+ HIV" первичной лимфомы серозных полостей. Введение в рутинную клиническую практику молекулярно-биологического анализа на HHV8 позволило бы выявлять другие подобные случаи, а также, возможно, новые вирус-ассоциированные гемопоэтические патологии. Результаты нашей работы могут быть использованы в практической деятельности - совершенствовании диагностики лимфом и развитии новых методов биотерапии лимфом и множественной миеломы. Совершенствование диагностики в данном случае подразумевает дополнение стандартных иммуногистохимических и иммуноцитоморфологических признаков молекулярными методами оценки экспрессии цитокинов опухолевыми клетками. Возможная роль данных исследований в развитии методов биотерапии лимфом и множественной миеломы может заключаться в более точной идентификации групп опухолей, характеризующихся продукцией интерлейкина-6, и в частности, вирусного интерлейкина-6 и развитию методов целенаправленного блокирования активности этого цитокина у больных.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Широков, Дмитрий Алексеевич, 2006 год

1. Тупицын Н.Н. Новое о трансдуцерном рецепторе цитокинов gpl30 в онкогематологии. Современная онкология. -1999. Т.1, №1. С.4-8.

2. Тупицын Н.Н. Роль рецептора цитокинов gpl30 в росте и дифференцировке нормальных и опухолевых гемопоэтических клеток. I. Общие сведения. Функциональные эпитопы gp 130/80 рецепторного комплекса. Гематология и трансфузиология. 2001. Т.46, №4, С.9-14.

3. Тупицын Н.Н., Андреева Л.Ю., Вульфова Ю.И и др. Роль рецептора цитокинов gpl30 в росте и дифференцировке нормальных и опухолевых гемопоэтических клеток. III. Бесцитокиновая регуляция гемопоэза. Гематология и трансфузиология. 2002, v.47, №2, С.3-13.

4. Тупицын Н.Н. Роль рецептора цитокинов gpl30 в гемопоэзе. Современная онкология. 2001. Т.З, №1. С. 29-31.

5. Тупицын Н.Н. Фундаментальные вопросы регуляции опухолевого роста через ИЛ-6 рецепторный комплекс. 4 Ежегодная Российская конференция ESMO. 2000. С. 19-20.

6. Ansari M.Q, Dawson D.B, Nador R, Rutherford C, Schneider N.R, Latimer M.J, Picker L, Knowles D.M, McKenna R.W. Primary body cavity-based AIDS-related lymphomas. Am J Clin Pathol. 1996 Feb; 105(2): 221-229.

7. Antman, K, and Y. Chang. 2000. Kaposi's sarcoma. N. Engl. J. Med. 342:1027-1038.

8. Aoki Y, Jaffe E. S, Chang Y, Jones K, Teruya-Feldstein J, Moore P. S, Tosato G. (1999) Angiogenesis and hematopoiesis induced by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-encoded interleukin-6. Blood, 93, №12,4034-4043.

9. Aoki Y, Narazaki M, Kishimoto T, Tosato G. (2001) Receptor engagement by viral interleukin-6 encoded by Kaposi sarcoma-associated herpesvirus. Blood, 98, 3042-3049.

10. Aoki Y, Yarchoan R, Braun J, Iwamoto A, Tosato G. Viral and cellular cytokines in AIDS-related malignant lymphomatous effusions. Blood. 2000 Aug 15; 96(4): 1599-1601

11. Ascoli V., Carnovale Scalzo C., Danese C., Ascoli V., Scalzo C.C., Danese C., Vacca K., Pistilli A, Lo Coco F. Human herpes virus-8 associated primary effusion lymphoma of the pleural cavity in HIV-negative elderly men. EurRespirJ. 1999; 14: 1231-1234

12. Autissier P., de Vos J., Liautard J., Tupitsyn N.N. et al. Dimerisation and activation of the common transducing chain (gpl30) of the cytokines of IL-6 family by mAb. International Immunology, 1998, v. 10, 12, P. 1881-1889.

13. Azzi A, Fanci R, De Santis R, Ciappi S, Paci C. Human herpesvirus 8 DNA sequences are present in bone marrow from HIV-negative patients with lymphoproliferative disorders and from healthy donors. Br J Haematol. 2001, 113(1): 188-90.

14. Bataille R., В Barlogie, ZY Lu, JF Rossi, T Lavabre-Bertrand, T Beck, J Wijdenes, J Brochier and В Klein. Biologic effects of anti-interleukin-6 murine monoclonal antibody in advanced multiple myeloma. Blood. 86: 685-691, 1995.

15. Beaty M.W., Kumar S., Sorbara L., Miller K., Raffeld M., Jaffe E.S. A biophenotypic human herpesvirus 8-associated primary bowel lymphoma. Am J Surg Pathol. 1999; 23(8): 992-994.

16. Bisping G, Leo R, Wenning D et al. Paracrine interactions of basic fibroblast growth factor and interleukin-6 in multiple myeloma. Blood. 2003;101(7):2775-83

17. Boulanger E., Hermine O., Fermand J.P., Radford-Weiss I., Brousse N., Meignin V., Gessain A. Human herpesvirus 8 (HHV-8)-associatedperitoneal primary effusion lymphoma (PEL) in two HIV-negative elderly patients. Am J Hematol. 2004. 76(1):88-91.

18. Boulanger M. J., Chow D., Brevnova E., Martick M., Sandford G., Nicholas J., Garcia К. C. (2004) Molecular mechanisms for viral mimicry of a human cytokine: activation of gpl30 by HHV-8 interleukin-6. J. Mol. Biol., 335, 641-654.

19. Brakenhoff J. P. J., de Hon F. D., Fontaine V., ten Boekel E., Schooltink H., Rose-John S., Heinrich P. C., Content J., Aarden L. A. (1994) Development of a human interleukin-6 receptor antagonist. J. Biol. Chem., 269, 86-93.

20. Bravo J., Heath J. K. (2000) Receptor recognition by gpl30 cytokines. EMBOJ., 19, №11, 2399-2411.

21. Bravo J., Staunton D., Heath J. K., Jones E. Y. (1998) Crystal structure of acytokine-bindingregionofgpl30. EMBOJ., 17, 1665-1674.

22. Cesarman E., Chang Y., Moore P.S. Said J.W., Knowles D.M. Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-related body-cavity-based lymphomas. N. Eng. J. Med. 1995,332: 1186-1191.

23. Chang, Y., and P. S. Moore. 1996. Kaposi's sarcoma (KS)-associated herpesvirus and its role in KS. Infect. Agents Dis. 5:215-222.

24. Chatterjee M., Osborne J., Bestetti G., et al. Viral IL-6-induced cell proliferation and immune evasion of interferon activity. Science. 2002;298:1432-1435

25. Chauhan D., Pandey P., Ogata A', Teoh G., Krett N., Halgren R., Rosen S., Kufe D., Kharbanda S. and K. Anderson. Cytochrome c-dependent and -independent Induction of Apoptosis in Multiple Myeloma Cells. Blood. 272 (48): 29995-29997 1997.

26. Chauhan D., Pandey P., Ogata A', Teoh G., Treon S., Urashima M., Kharbanda S. and and КС Anderson. Dexamethasone induces apoptosis of multiple myeloma cells in a JNK/SAP kinase independent mechanism. 15 (7):837-843,1997.

27. Chauhan D., S Kharbanda, A Ogata, M Urashima, G Teoh, M Robertson, DW Kufe and КС Anderson. Interleukin-6 inhibits Fas-induced apoptosis and stress-activated protein kinase activation in multiple myeloma cells. Blood. 89: 227-234,1997.

28. Chow D.-C., He X.-L., Snow A. L., Rose-John S., Garcia К. C. (2001) Structure of an extracellular gpl30 cytokine receptor signaling complex. Science, 291, 2150-2155.

29. Civati, G., G. Busnach, B. Brando, M. L. Broggi, C. Brunati, G. P. Casadei, and L. Minetti. 1988. Occurrence of Kaposi's sarcoma in renal transplant recipients treated with low doses of cyclosporine. Transplant. Proc. 20:924-928.

30. Cole A. R, Hall N. E, Treutlein H. R, Eddes J. S, Reid G. E, Moritz R. L, Simpson R. J. (1999) Disulfide bond structure and N-glycosylation sites of the extracellular domain of the human interleukin-6 receptor. J. Biol. Chem., 274:7207-7215.

31. Danese C., Angrisani L, Colotto M, Clarice A, Ferranti E. A five year follow-up of an HHV-8 related lymphoma in an HIV-negative elderly patient. Clin. Ter. 2004. 155(11-12):543-546.

32. Deng, H, Song, M. J, Chu, J. T, Sun, R. (2002). Transcriptional Regulation of the Interleukin-6 Gene of Human Herpesvirus 8 (Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus). J. Virol. 76: 8252-8264

33. Di Alberti, L., A. Piattelli, L. Artese, G. Favia, S. Patel, N. Saunders, S. R. Porter, С. M. Scully, S. L. Ngui, and C. G. Teo. 1997. Human herpesvirus 8 variants in sarcoid tissues. Lancet 350:1655-1661.

34. Dong Y, Zhu P, Ma M. Quantitative analysis of human herpes virus type 8 and expression of its genes in patients with multiple myeloma. [Article in Chinese] Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2001 Oct 25;81(20): 1230-3.

35. Engels, E. A, P. S. Rosenberg, M. Frisch, and J. J. Goedert. 2001. Cancers associated with Kaposi's sarcoma (KS) in AIDS: a link between KS herpesvirus and immunoblastic lymphoma. Br. J. Cancer 85:12981303.

36. Foreman, К. E, Alkan, S, Kreuger, A. E, Panella, J. R, Swinnen, L. J, and Nickoloff, B. J. Geographically distinct HHV-8 DNA sequences in

37. Saudi Arabian Iatrogenic Kaposi's sarcoma lesions. Am. J. Pathol., 153: 1001-1004, 1998.

38. Frassanito M.A., Cusmai A., Iodice G., and Dammacco F. Autocrine interleukin-6 production and highly malignant multiple myeloma: relation with resistance to drug-induced apoptosis. Blood 97:483-489 2001.

39. Friedman-Kien, A. E. 1981. Disseminated Kaposi's sarcoma syndrome in young homosexual men. J. Am. Acad. Dermatol. 5:468-471.

40. Frizzera, G. 1992. Atypical lymphoproliferative disorders, p. 459-496. In D. M. Knowles (ed.), Neoplastic hematopathology. Williams and Wilkins, Baltimore, Md.

41. Gaillard J. P., Mani J. C., Klein В., Brochier J. (1999) Interleukin-6 receptor signalling. I. Gp80 and gpl30 receptor interaction in the abcence of interleukin-6. Eur. Cyt. Network, 10, 43^8.

42. Gaillard JP, Bataille R, Brailly H et al. Increased and highly stable levels of functional soluble interleukin-6 receptor in sera of patients with monoclonal gammopathy. Eur J Immunol 23:820, 1993

43. Gao SJ, Alsina M, Deng JH, Harrison CR, Montalvo EA, Leach CT, Roodman GD, Jenson HB. Antibodies to Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (human herpesvirus 8) in patients with multiple myeloma. J Infect Dis. 1998 Sep;178(3):846-9.

44. Greipp PR, Gaillard JP, Kalish LA et al. Independent prognostic value for serum soluble interleukin-6 receptor (sIL-6R) in Eastern cooperative oncology group (ECOG) myeloma trial E9487. Proc Am SOC Clin Oncol 12:404, 1993

45. Hammacher A., Simpson R. J., Nice E. C. (1996) The interleukin-6 (IL-6) partial antagonist (Q159E,T162P) IL-6 interacts with the IL-6 receptor and gpl30 but fails to induce a stable hexameric receptor complex. J. Biol. Chem., 271, №10, 5464-5473.

46. Heinrich P.C. et al. Principles of IL-6-type cytokine signalling and its regulation. Biochem. J. immediate publication. 2003; 29:188-192.

47. Hollingsworth H.C., Stetler-Stevenson M., Gagneten D., Kingma D.W., Raffeld M., Jaffe E.S. Immunodeficiency-associated malignant lymphoma. Three cases showing genotypic evidence of both T- and B-cell lineages. Am J Surg Pathol. 1994, 18(11): 1092-1101.

48. Hsu HC, Lee YM, Yang CF, Hsiao KJ, Liu TT, Ho CK, Ho CH, Wang SY, Liu WT. Detection of Kaposi sarcoma-associated herpesvirus in bonemarrow biopsy samples from patients with multiple myeloma. Cancer. 2001 Apr 15;91(8): 1409-13.

49. Huh, J., G. H. Kang, G. Gong, S. S. Kim, J. Y. Ro, and C. W. Kim. 1998. Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus in Kikuchi's disease. Hum. Pathol. 29:1091-1095.

50. Inagi, R, H. Kosuge, S. Nishimoto, K. Yoshikawa, and K. Yaminishi. 1996. Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) sequences in premalignant and malignant skin tumors. Arch. Virol. 141:2217-2223.

51. Jaffe E.S, Harris N.L, Stein H. and Vardiman. J.W. Pathology and genetics of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues. World Health Organization classification of tumours, I ARC Press, Lyon 2001, pp. 179-180.

52. Jourdan M, Veyrune JL, Vos JD et al. A major role for Mcl-1 antiapoptotic protein in the IL-6-induced survival of human myeloma cells. Oncogene. 2003 May 15;22(19):2950-9

53. Kaposi, M. 1872. Idiopatisches multiples Pigmentsarkom der Haut. Arch. Dermatol. Syphillis 4:265-273.

54. Kawano M, Hirano T, Matsuda T et al. Autocrine generation and essential requirement of BSF-2X-6 for human multiple myeloma. Nature 332:83, 1988

55. Kishimoto T. The biology of interleukin-6. Blood. 1989; 74:1-10.

56. Kishimoto T, Akira S, Narazaki M, Taga T. (1995) Interleukin-6 family of cytokines and gpl30. Blood, 86, №4,1243-1254.

57. Klein B, Zhang X-G, Lu Z-I and Bataille R. Interleukin-6 in human multiple myeloma.Blood 85:863-872,1995

58. Klein В., J Wijdenes, XG Zhang, M Jourdan, JM Boiron, J Brochier, J Liautard, M Merlin, С Clement and В Morel-Fournier. Murine anti-interleukin-6 monoclonal antibody therapy for a patient with plasma cell leukemia. Blood. 78: 1198-1204,1991.

59. Klepfish A., Sarid R., Shtalrid M., Shvidel L., Berrebi A., Schattner A. Primary effusion lymphoma (PEL) in HIV-negative patients--a distinct clinical entity. Leuk Lymphoma. 2001,41(3-4): 439-443.

60. Klussmann, J. P., A. Muller, M. Wagner, O. Guntinas-Lichius, M. Jungehuelsing, T. Sloots, D. V. Ablashi, and G. R. F. Krueger. 2000. Human herpesvirus type 8 in salivary gland tumors. J. Clin. Virol. 16:239-246.

61. Li H., Nicholas J. (2002) Identification of amino acid residues of gpl30 signal transducer and gp80 receptor subunit that are involved in ligand binding and signaling by human herpesvirus 8-encoded interleukin-6. J. Vir., 76, №11, 5627-5636.

62. Matolcsy A., Nador R.G., Cesarman E., Knowles D.M. Immunoglobulin VH gene mutational analysis suggests that primary effusion lymphomas derive from different stages of В cell maturation. Am J Pathol. 1998 Nov; 153(5): 1609-1614.

63. Memar, О. M., P. L. Rady, R. M. Goldblum, A. Yen, and S. K. Tyring. 1997. Human herpesvirus 8 DNA sequences in blistering skin from patients with pemphigus. Arch. Dermatol. 133:1247-1251.

64. Memar, О. M, P. L. Rady, R. M. Goldblum, and S. K. Tyring. 1997. Human herpesvirus-8 DNA sequences in a patient with pemphigus vulgaris, but without HIV infection or Kaposi's sarcoma. J. Investig. Dermatol. 108:118-119.

65. Molden, J, Y. Chang, Y. You, P. S. Moore, and M. A. Goldsmith. 1997. A Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-encoded cytokine homolog (vIL-6) activates signaling through the shared gpl30 receptor subunit. J. Biol. Chem. 272:19625-19631

66. Moore P.S, Gao S.-J, Dominguez G, Cesarman E, Lungu 0, Knowles D.M, Garber R, Pellett P.E, McGeoch D.J, Chang Y. Primary characterization of a herpesvirus agent associated with Kaposi's sarcoma. J Virol. 1996, 70(1): 549-558.

67. Moore, P. S, C. Boshoff, R. A. Weiss, and Y. Chang. 1996. Molecular mimicry of human cytokine and cytokine response pathway genes by KSHV. Science 274:1739-1744.

68. Mullberg J, Geib T, Jostock T, Hoischen S. H, Vollmer P, Voltz N, Heinz D, Galle P. R, Klouche M, Rose-John S. (2000) IL-6 receptor independent stimulation of human gpl30 by viral IL-6. J. Immunol, 164, 4672-4677.

69. Munichor M, Cohen H, Sarid R, Manov I, Iancu T.C. Human herpesvirus 8 in primary effusion lymphoma in an HIV-seronegative male. A case report. Acta Cytol. 2004 48(3):425-430.

70. Murakami M, Hibi M, Nakagawa N, Nakagawa T, Yasukawa K, Yamanishi K, Taga T, Kishimoto T. (1993) IL-6-inducedhomodimerisation of gpl30 and associated activation of a tyrosine kinase. Science, 260, 1808-1810.

71. N.N.Tupitsyn, J.Brochier. Epitopic map of gpl30 receptor activation state. Tissue antigens, 2000, №1, P.52.

72. Nador R.G., Cesarman E., Chadburn A., Dawson D.B., Ansari M.Q., Said J, Knowles D.M. Primary effusion lymphoma: a distinct clinicopatholologic entity associated with Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus. Blood. 1996. 88: 645-656.

73. Narazaki M., Witthuhn B. A., Yoshida K., Silvennoinen O., Yasukawa K., Ihlet J. N., Kishimoto Т., Taga T. (1994) Activation of JAK2 kinase mediated by the interleukin 6 signal transducer gpl30. Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 91, 2285-2289.

74. Neipel, F., J. C. Albrecht, A. Ensser, Y. Q. Huang, J. J. Li, A. E. Friedman-Kien, and B. Fleckenstein. 1997. Human herpesvirus 8 encodes a homolog of interleukin-6. J. Virol. 71:839-842

75. Osborne, J., P. S. Moore, and Y. Chang. 1999. KSHV-encoded viral IL-6 activates multiple human IL-6 signaling pathways. Hum. Immunol. 60:921-927

76. Otsuki Т., Kumar S., Ensoli B. Kingma D.W., Yano Т., Stetler-Stevenson M., Jaffe E.S., Raffeld M. Detection of HHV-8/KSHV DNA sequences in AIDS-associated extranodal lymphoid malignancies. Leukemia. 1996. 10: 1358-1362.

77. Pan L, Milligan L, Michaeli J, Cesarman E, Knowles DM. Polymerase chain reaction detection of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-optimized protocols and their application to myeloma. J Mol Diagn. 2001 Feb;3(l):32-8.

78. Paravicini С, Chandran В, Corbellino M, Berti E, Paulli M, Moore P.S, Chang Y. 2000. Differential viral protein expression in KSHV-infected diseases. Am.J.Pathol. 156 (3): 743-749.

79. Parravicini, С, M. Corbellino, M. Paulli, U. Magrini, M. Lazzarino, P. S. Moore, and Y. Chang. 1997. Expression of a virus-derived cytokine, KSHV vIL-6, in HIV-seronegative Castleman's disease. Am. J. Pathol. 151:1517-1522.

80. Pastore, R. D, A. Chadburn, C. Kripas, and E. J. Schattner. 2000. Novel association of haemophagocytic syndrome with Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-related primary effusion lymphoma. Br. J. Haematol. Ill: 1112-1115.

81. Patel M, Mahlangu J, Patel J, Stevens G, Stevens W, Allard U, Mendelow B. Kaposi sarcoma-associated herpesvirus/human herpesvirus 8 and multiple myeloma in South Africa. Diagn Mol Pathol. 2001;10(2):95-99.

82. Pau, С. P, Thomas, L. L, and Spira, T. J. Mapping and serodiagnostic application of a dominant epitope within the human herpesvirus 8 ORF 65-encoded protein. J. Clin. Microbiol, 36: 1574-1577,1998.

83. Perez S.L, Rudoy S. Anti-CD20 Monoclonal Antibody Treatment of Human Herpesvirus 8-Associated, Body Cavity-Based Lymphoma with an Unusual Phenotype in a Human Immunodeficiency Virus-Negative Patient. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2001, p. 993-996

84. Polstra A.M., Goudsmit J. and Cornelissen M. Development of real-time NASBA assays with molecular beacon detection to quantify mRNA coding for HHV-8 lytic and latent genes. BMC Infectious Diseases 2002, 2:18.

85. Portier M, Rajzbaum G, Zhang Xg et al. In vivo interleukin-6 gene expression in the tumoral environment in multiple myeloma. Eur J Immunol 21:1759, 1991

86. Puthier D, Derenne S, Barille S. et al. Mcl-1 and Bcl-xL are co-regulated by IL-6 in human myeloma cells. Br J Haematol. 1999;107(2):392-5

87. R Tedeschi, T Luostarinen, P De Paoli, R E Gislefoss, L Tenkanen, J Virtamo, P Koskela, G Hallmans, M Lehtinen and J Dillner Joint Nordic prospective study on human herpesvirus 8 and multiple myeloma risk British Journal of Cancer (2005) 93, 834-837.

88. Rasmussen T, Dahl IM, Jensen L, Johnsen HE. CD68+/CD83+/CDla-dendritic cell subsets from patients with multiple myeloma are not infected with human herpesvirus 8. Med Oncol. 2000 Aug; 17(3): 189-94.

89. Somers W., Stahl M., Seehra J. S. (1997) 1.9 A crystal structure of interleukin-6: implications for a novel mode of receptor dimerization and signaling. EMBO J, 16, 989-997.

90. Stepina V.N., Gourtsevich V.E., Mazurenko N.P., Yaiymova N.M., Kaverznyeva M.M., Lorye Y.I. Humoral antibodies to the capsid antigen of Epstein-Barr virus in Hodgkin's disease. Neoplasma, 1976, 23(5): 523532.

91. Strauchen J.A., Hauser A.D., Burstein D., Jimenez R., Moore P.S., Chang Y. Body-cavity-based malignant lymphoma containing Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus in an HIV negative man with previous Kaposi sarcoma. Ann Intern Med 1996; 125: 822-825.

92. Suzuki A., Takahashi Т., Okuno Y. et al. Estimation of interleukin 6 production by reverse transcriptase-polimerase chain reaction in four human myeloma cell lines. Leukemia Research. 1991; 15:1043-1050.

93. Taga Т., Hibi M., Hirata Y., Yamasaki K., Yasukawa K., Matsuda Т., Hirano Т., Kishimoto T. (1989) Interleukin-6 triggers the association of its receptor with a possible signal transducer, gpl30. Cell, 58, 573-581.

94. Tedeschi R, Kvarnung M, Knekt P, Schulz TF, Szekely L, De Paoli PD, Aromaa A, Teppo L, Dillner J. A prospective seroepidemiological study of human herpesvirus-8 infection and the risk of multiple myeloma. Br J Cancer. 2001;84(l):122-5.

95. Tedeschi, R., De Paoli, P., Schulz, T. F., and Dillner, J. Human serum antibodies to a major defined epitope of human herpesvirus 8 small viral capsid antigen. J. Infect. Dis., 179: 1016-1020, 1999.

96. Tupitsyn N., Kadagidze Z., Gaillard J.P. et al. Functional interactions of gp80 and gpl30 receptors in human B-cell malignancies. Clin. Lab. Haematol. 1998; 20: 345-52.

97. Tupitsyn N.N.et al. Functional Interactions of the gp80 and gpl30 IL-6 receptors in human B-cell malignancies. Clinical Laboratory Haematology, 1998, v.20, P.345-352.

98. Uchiyama H, Barut В A, Mohrbacher AF, Adhesion of human myeloma-derived cell lines to bone marrow stromal cells stimulates interleukin-6 secretion. Blood 82:3712, 1993.

99. Wan, X., H. Wang, and J. Nicholas. 1999. Human herpesvirus 8 interleukin-6 (vIL-6) signals through gpl30 but has structural and receptor-binding properties distinct from those of human IL-6. J. Virol. 73:8268-8278.

100. Zeinalova P.A., Tupitsyn N.N., Osmanov D.Sh. Interleukin-6 receptor complex activation in human B-cell non-Hodgkins lymphomas.// 18th UICC International Cancer Congres; 30 June-5 July 2002, Oslo-Norway; p.392.

101. Zhu YX, Li ZH, Voralia M, Stewart AK. Antigenic open reading frames from HHV-8 are present in multiple myeloma patients and normal individuals at similar frequency. Leuk Lymphoma. 2002;43(2):369-75.

102. Ziegler, J. L, and E. Katongole-Mbidde. 1996. Kaposi's sarcoma in childhood: an analysis of 100 cases from Uganda and relationship to HIV infection. Int. J. Cancer 65:200-203.