Биофармацевтический анализ антидотных свойств кальция фолината при высокодозной химиотерапии метотрексатом остеосаркомы у детей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат биологических наук Кошечкин, Константин Александрович

• Кошечкин, Константин Александрович
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кошечкин, Константин Александрович

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биофармацевтический анализ антидотных свойств кальция фолината при высокодозной химиотерапии метотрексатом остеосаркомы у детей»

Цель и задачи исследования.9

Научная новизна исследования.10

Научно-практическая значимость исследования.11

Внедрение в практику.11

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.12

1.1. Высокодозная химиотерапия метотрексатом на фоне антидотной терапии кальция фолинатом остеосаркомы у детей.12

1.2. Механизм действия метотрексата и роль сопроводительной терапии кальция фолинатом.13

1.3. Токсические проявления метотрексата, купируемые введением кальция фолината. 14

1.4. Значение применения кальция фолината при высокодозной терапии метотрексатом 17

1.5. Химическое строение, фармакокинетические и фармакологические характеристики кальция фолината.19

1.5.1. Химическое строение и свойства кальция фолината.19

1.5.2. Фармакологическое действие кальция фолината.20

1.5.3. Роль фолиевой кислоты и ее производных в организме человека и их метаболизм.22

1.5.4. Способы применения и дозы кальция фолината.25

1.5.5. Препараты кальция фолината.27

1.6. Контроль качества препаратов кальция фолината по данным государственных фармакопей и НД производителей.29

1.6.1. Обзор государственных фармакопейных статей на субстанцию кальция фолитата.29

1.6.2. Обзор фармакопейных статей предприятий на лекарственные формы кальция фолитата.36

1.6.3. Мониторинг производных ФК в сыворотке крови.40

1.7. Мониторинг биохимических показателей крови.42

1.7.1.Некоторые клинические и молекулярные аспекты токсических осложнений

ВДХТМ1х.42

1.7.2. Биохимические показатели в оценке поражения печени при ВДХТ Mtx ОС у детей.44

1.8. Нарушение состояния антиоксидантной системы.52

1.8.1. Механизм возникновения свободных радикалов.53

1.8.2. Методики для определения активности АОС.57

1.9. Математическое моделирование биокинетики.59

Заключение по главе 1.62

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.64

2.1. Характеристика группы больных остеосаркомой и аспекты проводимой терапии .64

2.1.1. Характеристика группы больных остеосаркомой.64

2.1.2. Схема проведения химиотерапии больным остеосаркомой.65

2.1.3. Введение кальция фолината больным остеосаркомой.67

2.1.4. Клиническая характеристика результатов проводимой терапии.67

2.2. Методы определения лекарственных препаратов кальция фолината.69

2.2.1. Оборудование и реактивы.69

2.2.2. Стандартные образцы.69

2.2.3. Объекты анализа.70

2.2.4. Оценка хроматографических параметров.71

2.2.5. Расчет количественного содержания кальция фолината.71

2.3. Определение биохимических показателей крови при ВДХТ М1х остеосаркомы у детей.72

2.4. Определение показателей состояния антиоксидантной системы.75

2.4.1. Методика определения общего антиоксидантного статуса в сыворотке крови. 75

2.4.2. Методика определение активности супероксиддисмутазы в эритроцитах.77

2.4.3. Методика определение активности глутатионредуктазы.79

2.4.4. Методика определения активности у— глутамилтрансферазы.80

2.5. Определения кинетических параметров биохимических показателей крови.80

2.6. Статистическая обработка результатов.83

Заключение по главе II.84

3.1 Разработка методики определения кальция фолината.85

3.1.1 Подготовка стандартных растворов.85

3.1.2. Подбор оптимальных условий разделения кальция фолината и фолиевой кислоты.85

3.1.3. Выбор условий детектирования.89

3.1.4. Параметры разделения и метрологическая характеристика методики.90

3.2 Определение подлинности и содержания кальция фолината в инъекционных лекарственных формах.92

3.2.1 Подготовка проб для хроматографического анализа.92

3.2.2 Анализ лекарственных препаратов кальция фолината.92

3.2.3 Определение концентрации кальция фолината методом ВЭЖХ в сыворотке крови.96

3.3. Мониторирование биохимических показателей гепатотоксичности и их роль при проведении сопроводительной терапии кальция фолинатом.99

3.3.1. Динамика содержания общего белка и альбумина.100

3.3.2. Динамика содержания креатинина и мочевины.102

3.3.3. Динамика содержания кальция.105

3.3.4. Динамика содержания АСТ.105

3.3.5. Динамика содержания AJIT.108

3.3.6. Динамика содержания ЛДГ.111

3.3.7. Динамика содержания общего билирубина.114

3.3.8. Кинетические характеристики показателей гепатотоксичности.117

3.4. Показатели состояния антиоксидантной системы и их значение в проведении антидотной терапии кальция фолинатом.121

3.4.1. Результаты мониторинга показателей АОС.121

3.4.2. Биокинетика изменения показателей АОС при сопроводительной терапии кальция фолинатом.127

3.5. Применение препарата Гептрал совместно с кальция фолинатом.130

Заключение по главе 3.133

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.135

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.144

СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.145

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ у-ГТ - у-глутамилтрансфераза

7-ОН-МТХ - 7-гидроксиметотрексат

ABGA — ^(п-фминобензоил)-Ь-глутаминовая кислота

Br.Ph. - Британская фармакопея

CaFol - кальция фолинат

Eur. Ph. - Европейская фармакопея

Mtx — метотрексат

РАВА - n-аминобензойная кислота

USP - фармакопея США

АК — аскорбиновая кислота

AJIT — аланинаминотрансфераза

АОК — антиоксидантный комплекс

АОС - антиоксидантная система

ACT — аспартатаминотрансфераза

АФК — активные формы кислорода в/в - внутривенно

ВД - высокие дозы

ВДХТ — высокодозная химиотерапия в/м - внутримышечно

ВМК — ванилминдальная кислота

ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения

ВЭЖХ — высокоэффективная жидкостная хроматография

ИФА - иммуноферментный анализ

JIB - лекарственное вещество

ЛДГ - лактатдегидрогеназа

ЛП - лекарственный препарат

ЛС - лекарственное средство

ЛФ - лекарственная форма

МДА — малоновый диальдегид

МСМ — молекулы средних масс

ОАОС — общий антиоксидантный статус

ОБ - общий билирубин

ОЛЛ - острый лимфобластный лейкоз

ОС - остеосаркома

ПОЛ - пероксидное окисление липидов ПХТ — полихимиотерапия ПЭ — полная эффективность СМЖ - спинномозговая жидкость СОД - супероксиддисмутаза

СПОЛ — свободнорадикальное пероксидное окисление липидов

СТ - сопроводительная терапия

ТБАГ - тетрабутиламмония гидроксид

ТБК — тиобарбитуровая кислота

ТЛМ - терапевтический лекарственный мониторинг

ТСХ - тонкослойная хроматография

ФК - фолиевая кислота

ФПИА - флуоресцентно поляризационный иммуноанализ ФФК - 10-формилфолиевая кислота ЦНС - центральная нервная система ЧЭ - частичная эффективность ЩФ — щелочная фосфатаза

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

Создание и внедрение в клиническую практику эффективных противоопухолевых препаратов значительно расширило возможности воздействия на злокачественные опухоли детей. К сожалению, большинство из применяемых противоопухолевых препаратов обладают рядом существенных недостатков: низкой избирательностью действия, небольшой терапевтической широтой, токсическим действием на различные органы и системы организма, возникновением лекарственной устойчивости. Трудности и несовершенства метода полихимиотерапии (ПХТ) опухолей у детей диктуют необходимость изыскания не только новых оригинальных противоопухолевых препаратов, но и разработки оригинальных методик проведения лечения, включающих режимы и дозы их введения в организм. В последнее время в программном лечении онкологических заболеваний у детей стали применяться высокие дозы противоопухолевых препаратов [84, 124, 128, 131, 137, 152]. Это требует тщательного изучения их безопасности, фармакокинетики, фармакодинамики.

В настоящее время в мировой лечебной практике разработаны протоколы лечения онкологических заболеваний с максимальными дозами противоопухолевых препаратов, строго регламентированными периодами их проведения. Многие больные дети такой интенсивной терапии не выдерживают и их исключают из протокола лечения. По этой причине в последнее время начинает развиваться персонализированная медицина, которая подразумевает назначение конкретного противоопухолевого препарата конкретному больному на основании фармакокинетических и фармако-геномных сведений пациента. Назначение кальция фолината при высокодозной химиотерапии (ВДХТ) метотрексатом (Mix) является одним из аспектов индивидуального подхода к лечению [34, 111]. Применение кальция фолината на фоне лечения Mtx, когда дозы последнего многократно превышают стандартные, поддерживает нормальную жизнедеятельность клеток со сниженным уровнем фолатов и позволяет осуществлять антидотную терапию. Антагонисты фолиевой кислоты (ФК), главным из которых является ]Шх, занимают особое место среди противоопухолевых препаратов: с их помощью были получены первые полные ремиссии при лейкозах [19, 23,]. Интерес к антагонистам ФК еще больше повысили достижения ВДХТ в сочетании с кальция фолинатом, снижавшим токсичность препаратов. Благодаря этому расширился спектр противоопухолевой активности МЪс, теперь его назначают при остеосаркоме (ОС), на которую препарат в стандартных дозах не действовал. Оптимальная схема введения ВД М1х в сочетании с кальция фолинатом при ОС до сих пор не разработана. ВДХТ МЪс чревата тяжелыми побочными эффектами, лечение должно проводиться под строгим контролем многих лабораторных показателей, в частности, терапевтического лекарственного мониторинга (ТЛМ) концентрации МЬс, по значениям которых определяется необходимая доза кальция фолината. Фактически, при ВДХТ М1х осуществляется "resque" - спасение кальция фолинатом. Успех лечения во многом зависит от качества кальция фолината, что повышает требования к его фармацевтическому анализу, независимо от источника поступления на отечественный фармацевтический рынок. В настоящее время в РФ действует 7 регистрационных удостоверений- на препараты кальция фолината. Выбор наиболее безопасного и эффективного из них, безусловно, является актуальной и важной задачей, решение которой позволит снизить токсические эффекты ВДХТ М1х. Анализ этих ЛС в условиях детской онкологической клиники, модификация существующих и разработка новых аналитических методик позволит повысить эффективность спасительной терапии кальция фолинатом [35].

Высокая отсроченная токсичность МЪс является серьезным ограничением в достижении максимального лечебного действия, что в большинстве случаев обусловливает возникновение у больных серьезных побочных эффектов со стороны различных органов и систем. Проявление гепато- и нефротоксичности служат показанием для прерывания, и даже прекращения эффективного лечения, приводя к повышению частоты рецидивов основного заболевания. При ВДХТ исключительно большое значение имеют адаптивные и компенсаторные системы организма, способствующие мобилизации защитных потенциалов - это состояние антиоксидантной системы (АОС), обеспечивающее резистентность организма в процессе экстремального воздействия.

Разработка методологических подходов к диагностике и мониторингу токсичности ВД Mtx на основе комплекса биохимических методов исследования и контроль детоксикационного действия проводимой сопроводительной терапии на основе биокинетических подходов является одной из актуальных задач детской онкологии [19]. Следует отметить, что в литературе отсутствуют работы, посвященные изучению биохимических маркеров токсичности, не разработан алгоритм обследования и дозы кальция фолпната при проведении ВДХТ Mtx. В этом аспекте очевидна актуальность проведенного комплексного исследования.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования является разработка методики количественного определения кальция фолината в инъекционных лекарственных препаратах (ЛП) различных фирм-производителей методом ВЭЖХ и биокинетическая оценка антидотной активности кальция фолината при ВДХТ Mtx остеосарком у детей.

Для реализации поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Разработать методику количественного определения кальция фолината в инъекционных ЛП и в сыворотке крови методом ВЭЖХ.

2. Провести сравнительную оценку качества инъекционных препаратов кальция фолината различных фирм-производителей.

3. Оценить влияние кальция фолината на показатели гепатотоксичности на различных курсах лечения. Рассчитать биокинетические параметры восстановления показателей гепатотоксичности на основе их длительного мониторинга при проведении ВДХТ М1х у детей с ОС.

4. Изучить состояние АОС (показатели активности СОД, ГР и ОАОС) и оценить их взаимосвязи с токсическими осложнениями. Рассчитать биокинетические параметры изменения состояния АОС на основе длительного мониторинга ее показателей при лечении ОС у детей ВДХТ ]Шх.

5. Провести сравнительное исследование биохимических показателей (гепатотоксичности и состояния АОС) на фоне применения вспомогательного гепатопротектора - «Гептрала»).

Научная новизна исследования

Разработана унифицированная экспресс-методика определения (метод ВЭЖХ) кальция фолината в ЛФ и сыворотке крови (модельные системы). Несколько серий препаратов разных производителей качественно и количественно охарактеризованы.

Впервые проведена оценка антидотной активности кальция фолината при ВДХТ М1х ОС детей на основе длительного мониторирования биохимических показателей крови — маркеров гепатотоксичности, нефротоксичности, водно-электролитного и кислотно-основного баланса.

Впервые количественно охарактеризовано изменение состояния ферментов АОС при терапии ВД М1х ОС детей и проведена оценка их взаимосвязи с токсическими осложнениями.

Впервые рассчитаны биокинетические параметры показателей гепатотоксичности и состояния АОС.

Научно-практическая значимость исследования

Разработана и внедрена в ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН методика определения кальция фолината в ЛП разных фирм-производителей и сыворотке крови.

Проанализировано соответствие декларированных показателей качества фактическим для зарегистрированных на отечественном рынке и применяемых в ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН препаратов кальция фолината. Выданные рекомендации по предпочтительному использованию одного из препаратов позволят улучшить показатели выживаемости и качество жизни у исследуемой категории пациентов.

На основании проведенной биокинетической оценки биохимических показателей крови (константа скорости и период полувосстановления до нормы) даны рекомендации по периодичности сопроводительной терапии.

На основании установленных изменений активности ферментов АОС при ВДХТ Mtx рекомендована сопутствующая антиоксидантная терапия.

Внедрение в практику

Экспресс-метод определения содержания кальция фолината и примесей в ЛП внедрен в ГУ РОНЦ им. Н:Н. Блохина РАМН.

Рекомендации по сопроводительной терапии на основе анализа ЛП кальция фолината различных фирм-производителей, биокинетические исследования показателей гепатотоксичности и состояния АОС больных ОС применяются в ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН.

Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической и токсикологической химии медицинского факультета РУДН.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Кошечкин, Константин Александрович

ВЫВОДЫ:

1. Разработана методика количественного определения кальция фолината в ЛП и сыворотке крови. В результате экспериментальных исследований подобрана изократичная система: ТБГА — ацетонитрил — вода - 2 моль/л раствор Na2HP04 (2:15:81:2), рН 7,5, характеризующаяся высокой селективностью (1,8), разделяющей способностью (2,1) и эффективностью (500900 теоретических тарелок).

2. Проведена сравнительная оценка качества инъекционных препаратов кальция фолината различных фирм-производителей. Выявлено различное содержание действующего вещества и родственных примесей в препаратах. Рекомендован препарат кальция фолината с наиболее точной дозировкой действующего вещества (98,23 ± 0,80)% и наименьшим содержанием примесей (1,83 ± 0,51)% - порошок для инъекций фирмы Лахема (Чешская республика).

3. Установлено, что при ВДХТ Mtx в 82,1% случаев наблюдаются тяжелые нарушения печени (АЛТ и ACT >10N) , в 17,8% - умеренные (2,5N — 10N). Использование в качестве антидота кальция фолината снижает гепатотоксические эффекты. Скорость восстановления показателей до нормы падает в ряду АСТ>АЛТ>ЛДГ>ОБ. С ростом номера курса ВДХТ Mix скорость восстановления до нормы АЛТ увеличивается, достигая 0,40 сут"1, для других показателей такая зависимость не обнаружена.

4. Проведено биофармацевтическое исследование состояния АОС (активности СОД, ГР, у-ГТ и ОАОС,) в процессе терапии ВД Mtx ОС у детей. Установлено, что состояние АОС, и в первую очередь активность СОД, являются показателями токсических осложнений Восстановление показателей ОАОС и ГР, подчиняясь кинетике первого порядка, практически не изменяется на первых шести курсах и несколько возрастает на 7 и 8 курсах терапии. Для СОД и у-ГТ 7 и 8 курсы терапии характеризуются самыми низкими скоростями восстановления. Для СОД установлена прямолинейная зависимость снижения скорости от номера курса лечения. Полученные результаты свидетельствует о необходимости проведения сопутствующей антиоксидантной терапии.

5. Проведено сравнение сроков восстановления биохимических показателей до нормы у детей, получавших Гептрал совместно с кальция фолинатом при ВДХТ Mtx. Установлено сокращение сроков восставновления уровня ферментов печени: AJIT в 3.2 раза, ACT в 2.7 раза, ЛДГ в 2 раза; состояния АОС: ОАОС в 2.7 раза, ГР в 9,9 раза. Это позволило рекомендовать применение дополнительных гепатопротскторов при ВДХТ Mtx ОС у детей.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для оценки состояния тяжести токсического действия ПХТ у детей, получающих ВД Mtx необходимо определять следующие биохимические показатели: Mtx до концентрации 0,02 мкмоль/л, ОАОС, ОБ, активность ферментов - АЛТ, ACT, ЛДГ, ГГТ, СОД, ГР.

На основе детального ТЛМ концентрации Mtx, биохимических показателей гепатотоксичности (АЛТ, ACT, ЛДГ, общего билирубина) и состояния АОС (СОД, ГР, у-ГТ и ОАОС) в крови предложена схема индивидуального дозирования кальция фолината при ВДХТ Mtx больных ОС.

Рекомендована к использованию разработанная методика определения кальция фолината в ЛП методом ВЭЖХ.

Для более быстрого купирования токсического эффекта ВДХТ Mtx у детей с ОС, рекомендовано своевременное назначение гепатопротекторного препарата Гептрал (адеметионин) в сочетании с препаратами кальция фолината.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кошечкин, Константин Александрович, 2008 год

1. Аббасова А.Г. Поражение печени при программной химиотерапии (m-BFM — 90) острых лейкозов и неходжкинских лимфом у детей. // Диссертация к. м. н. М., 2001.

2. Антиоксидантные препараты их место и роль в детской онкологии / Байкова В.Н., Байков К.Э., Иванов A.B., Калинкина A.B., Кошечкин К.А., Паршина H.A., Арзамасцев А.П., Дурнов JI.A. // «Практикующий врач сегодня» М., 2005 г. - № 1. - С. 29 - 32.

3. Арзамасцев А.П., Багирова B.JL, Садчикова Н.П. Стратегия в области совершенствования фармакопейного анализа лекарственных средств // Человек и лекарство: Тезисы докл. VI Росс. нац. конгр. — М., 2000. —С. 599.

4. Арзамасцев А.П., Садчикова Н.П., Багирова B.JI. Основные аспекты совершенствования фармакопейного анализа // Хим.-фарм. журн. — 2000. — № 5. — С. 47—49.

5. Арзамасцев А.П., Садчикова Н.П., Харитонов Ю.Я. / Валидация аналитических методов // Фармация : двухмесячный научно-практический журнал. — 2006. — N 4 . — С. 8-12.

6. Байкова В.Н. «Нарушение метаболизма тирозина и процессов свободно-радикального перекисного окисления липидов при злокачественных опухолях у детей» / Дисс. Докт 1999 г

7. Байкова В.Н., Иванов A.B., Кошечкин К.А., Кадагидзе З.Г., Валентей JI.B / Опыт организации экспресс-лаборатории в НИИ детской онкологии и гематологии ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН // «Детская онкология» М., 2007 г. - № 1. - С. 10 - 13.

8. Бобырев В.Н., Почерняева В.Ф., Стародубцев С.Г. / Специфичность антиоксидантной защиты органов и тканей — основа дифференциальной фармакотерапии антиоксидантами // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1994. - № 7. - С. 47 - 54.

9. Богданова Н.В. / Лекарственное лечение онкологических больных в амбулаторных условиях. / М.: «Олма-пресс». 2001. - С. 227 - 240.

10. Валидация фармакопейных методов (проект общей фармакопейной статьи) / Арзамасцев А.П., Садчикова Н.П., Харитонов Ю.Я. // Ведомости научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств. — МЗ РФ, 2001. — № 1. — С. 28—29.

11. Верболаевич В.П., Подгорная Л.М. / Определение активности, глутатионредуктазы и супероксиддисмутазы на биохимическом автоанализаторе. // Лабораторное дело. 1987. - №2. - С. 17-19. .

12. Гусак E.H. Вирусные гепатиты (А, В, С, Д) и токсические поражения печени у детей, больных острым лейкозом, при использовании современных программ химиотерапии // Автореферат диссертации к. м. н.- СПб., 1994

13. Денисова H.A. Исследование эффективности и безопасности применения препарата «Консупрен» после аллогенной трансплантации почки. // Диссертация к.б.н. М., 2003.

14. Дурнов Л.А., Голдобенко Г.В., Курмашов В.И. / Детская онкология. -М.: Литера, 1997.-400 с.

15. Дурнов JI.А., Голдобенко Г.В., Сигал Ст.Э. Настольная книга детского онколога. М.: Параллель, 1994. — 176 с.

16. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньшикова Е.Б. / Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты.-МАИК «наука / интерпериодика», 2001.-343 с.

17. Иванов A.B. Химико-фармацевтический анализ метотрексата и изучение его токсичности при гемобластозах у детей // Диссертация к. ф. н. -М., 2005

18. Иванов A.B. Химико-фармацевтический анализ метотрексата и изучение его токсичности при гемобластозах у детей Автореферат к.ф.н. -М., 2005.

19. Иванов A.B., Байкова В.Н., Родионова Г.М., Арзамасцев А.П. Сравнительная оценка методов определения концентрации метотрексата в сыворотке крови // XI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», М., 2004, с. 871.

20. Иванов A.B., Родионова Г.М., Байкова В.Н., Арзамасцев А. / Количественный анализ дженериков метотрексата применяемых в онкологии. // III Российский конгресс «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии», М.,2004, с. 405

21. Иванова Н.М., Пашков Ю.В. Остеосаркома // Энциклопедия клинической онкологии. PJIC. Москва, 2004. - С. 739-744.

22. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике.- Минск: «Беларусь», 2000.

23. Келети Т. Основы ферментативной кинетики. М.: Мир, 1990. - 350 с.

24. Кормош Н.Г., Лактионов К.П., Чеснокова A.A. / Уровень перекисного окисления липидов в крови как фактор прогноза у больных с распространенным раком яичников // Тез. Докл. 2 съезда онкологов стран СНГ. Киев, 2000. - №1022.

25. Лекарственные препараты в России: справочник VIDAL . М.: АстраФармСервис, 2007. - 1488 с.

26. Лифшиц В.М., Сидельникова В.И. / Биохимические анализы в клинике // Справочник. 5. изд., перераб. и доп. М. : Триада-Х , 2002 -202 с.

27. Лоуренс Д. Р., Бенитт П.Н. Клиническая фармакология. М.: «Медицина», 1991. - 700 с.

28. Манзюк JI.B. / Роль лейковорина в современной химиотерапии некоторых солидных опухолей. // Диссертация. 1996.

29. Насонов E.JI. 50 лет применения метотрексата в ревматологии // Ревматология, 2000. № 9, том 8, - С. 372

30. Немцова Е.Р., Сергеева Т.В., Якубовская Р.И. и др. / Окислительный стресс и как с ним бороться // Российский онкологический журнал. 2000. - № 2. - С. 45 — 54.

31. Особенности системы стандартизации субстанций в условиях рыночной экономики / А. П. Арзамасцев, А. В. Титова // Ремедиум. — 2006. —N9. —С. 57-59.

32. Переводчикова Н. И. / Химиотерапия злокачественных опухолей. // -М. «Медицина». - 1976.

33. Плетенева Т.В., Кошечкин К.А., Степанова Н.С., Байкова В.Н. / Биокинетические параметры показателей токсичности высоких дозметотрексата // Вестник Российского университета дружбы народов. -М. 2008 г.-№3,С. 10-14

34. Применение индикаторно-жидкостной хроматографии для анализа некоторых лекарственных препаратов в водных средах / JI. В. Зрелова, И. А. Самылина, А. П. Арзамасцев, Н. Н. Дементьева // Фармация. — 2008, —N3. —С. 16-19.

35. Применение антиоксидантов в комплексном лечении онкологических больных / Т. О. Бабаян, А. П. Арзамасцев, Н. Е. Кушлинский, Г. М. Родионова // Фармация. — 1998. —N 3 . — С. 39-40.

36. Розенко Л.Я., Сидоренко Ю.С., Франциянц Е.М. / Особенности изменения параметров антиокслительной системы организма в зависимости от клинической регрессии опухоли шейки матки. // Вопросы онкологии. 2003. - № 1. - С. 99 - 101.

37. Розенко Л .Я., Франциянц Е.М. / Изменение показателей антиоксидантной системы организма в зависимости от клинической регрессии опухоли шейки матки. // Вопросы онкологии. 2003. - № 1. -С. 99-101.

38. Спецификация на препарат кальция фолината раствор для инъекций. № 42 2395 - 99.

39. Спецификация на препарат лейковорин кальция лиофилизированный порошок. № 42 9389 - 98.

40. Спецификация на препарат лейковорин лиофилизированный порошок. № 42 3236 - 99.

41. Спецификация на препарат лейковорин раствор для инъекций. № 42-3437-99.

42. Спецификация на препарат лейковорин Ca Лахема лиофилизированный порошок. № 42 2065 - 00.

43. Спецификация на препарат лейковорин-Тева лиофилизированный порошок. № 42 12680 - 02.

44. Спецификация на препарат лейковорин-Тева раствор для инъекций. №42- 12681-02.

45. Стандартизация и контроль качества Л С под редакциейН.А. Тюкавкина / Медицинское информационное агентство. М 2007 376 4-50 с.

46. Ткачук В.А. Клиническая биохимия М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002.-360с.

47. Фармакология / Под ред. Р.Н. Аляутдина. -2-е изд., испр.-М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004.-592с.

48. Франциянц Е.М., Орловская Л.А., Шалашная Е.В., Мусиенко Н.В., Анапалян В.Х. / Изменение антиокислительного статуса крови больных неоперабельным раком желудка после проведения полихимиотерапии. // Вопросы онкологии. 1999. том 45 - № 6. - С. 607 - 611.

49. ФС предприятия № 42 0046-0070-00.

50. Химиотерапия опухолевых заболеваний. Под. ред. Н.И.Переводчиковой. -М.: Медицина. 1998 390 с.

51. A New Mechanism of Methotrexate Action Revealed by Target Screening with Affinity Beads / Hitoshi Uga, Chikanori Kuramori, Akiko Ohta, Yasunori Tsuboi // Mol. Pharmacol., Nov 2006; 70: 1832 1839

52. Allegra C. J., Chabner B. A., Scholar P. W., et al. / Preliminary results of a phase 2 trial for the treatment of metastatic breast cancer with 5-fluorouracil and leucovorin. // NCI. Monographs. 1987. - № 5. - P. 199203.

53. Aquerreta I., Aldaz A., Giraldez J. et al. Methotrexate pharmacokinetics and survival in osteosarcoma // Pediatr. Blood. Cancer. 2004. - Vol. 42. -N l.-P. 52-58.

54. Bacci G., Briccoli A., Longhi A. et al. Treatment and outcome of recurrent osteosarcoma: Experience at Rizzoli in 235 patients initially treated with neoadjuvant chemotherapy // Acta Oncologica. 2005. - Vol. 44. - P. 748-755.

55. Bacci G., Picci P., Ferrari S. et al. A Prognostic significance of serum alkaline phosphatase measurement in patients with osteosarcoma treated with adjuvant or neoadjuvant chmotherapy. Cancer, 1993; 71 (4). — P. 12241230.

56. Bertrand R., Jolivet J. / Lacr of interference by the unnatural isomer of 5-formyltetrahydrofolate with the effects of the natural isomer in leucovorin preparations. // Nahl Cancer Inst. 1989. - №81. -P. 1175-78.

57. Bielack SS, Marina N, Ferrari S. et al. Osteosarcoma: the same old drugs or more? J Clin Oncol. 2008 Jun 20;26(18):3102-3; author reply 3104-5. Comment on: J Clin Oncol. 2005 Mar 20;23(9):2004-ll.

58. Biochemical comparison between radon effects and thermal effects on humans in radon hot spring therapy. / Yamaoka K., Mitsunobu F., Hanamoto K., Shibuya K., Mori S., Tanizaki Y., Sugita K. // Radiat. Res. 2004. -№45.-83-88.

59. Brandsteterova E., Marcincinova K., Lehotay J., Zbojova A., Halko J. / HPLC analysis of optical izomers of leucovorin and methotrexate using achiral-chiral system. // Neoplasma. 1993. - №10. - P. 241-244.

60. Brigitte C. Widemanna, Peter C. Adamson Understanding and Managing Methotrexate Nephrotoxicity // The Oncologist, Vol. 11, No. 6, 694-703, 2006

61. British Pharmacopoeia. / Calcium Folinate Injection. 2001.

62. British Pharmacopoeia. / Monogramphs: medical and Pharmaceutical substances Calcium Folinate. 2001.

63. Chan E.S., Cronstein B.N. / Molecular action of methotrexate in inflammatory diseases // Arthritis Res, 2002. № 4, - 266-273.

64. Chevion S., Heled Y., Shani Y.,Regev G., Abbou B., Berenshtein E. / Plasma antioxidant status and cell injury after severe physical exercise. // Biochemistry.- 2003. № 9. -P. 5119-5123.

65. Chollet-Janin A, Finckh A, Dudler J, Guerne PA. / Methotrexate as an alternative therapy for chronic calcium pyrophosphate deposition disease: An exploratory analysis // Arthritis Rheum. 2007 Jan 30;56(2):688-692

66. Cociglio M, Hillaire-Buys D, Alric C. / Determination of methotrexate and 7-hydroxymethotrexate by liquid chromatography for routine monitoring of plasma levels. // J. Chromatogr. 1995 - Vol. 674 - P. 101-10.

67. Crews K.R., Liu T., Rodriguez-Galindo C. et al. High-dose methotrexate pharmacokinetics and outcome of children and young adults with osteosarcoma // Cancer. 2004. -Vol. 100. - N 8. - P. 1724-1733.

68. Davis A.M., Bell R.S., Goodwin P.J. / Prognostic factors in osteosarcoma: A critical review. // Journal of Clinical Oncology, 1994; 12. — P. 423-431.

69. Ebbehoj E., Langkjer S.T. / Comparison between different parameters of cell viability. In vitro studies in a human cervix cancer line // J. Exp. Clin. Cancer Res. 1995. - Vol.14. - P. 95-101.

70. Efficacy of methotrexate in pediatric Crohn's disease: a French multicenter study. / Uhlen S., Belbouab R., Narebski K., Goulet O., Schmitz J., Cezard J.P., Turck D., Ruemmele F.M. // Inflamm Bowel Dis; 2006, P. 1053-7

71. Etienne M.C., Speziale N., Milano G. / HPLC of folinic acid diastereoisomers and 5-methyltetrahydrofolinate in plasma. // Clinical chemistry. 1993. - №27. - P. 82-86.

72. European pharmacopoeia. / Calcium Folinate. // 2001.-P.531- 533.

73. European pharmacopoeia. / Supercritical fluid chromatografhy. // 2001. - 2.2.45.

74. Ferrari S, Palmerini E. Adjuvant and neoadjuvant combination chemotherapy for osteogenic sarcoma // Curr. Opin. Oncol. 2007- Vol. 19. -N4.-P. 341-346.

75. Fried K., Wainer 1W. / Column-switching techniques in the biomedical analysis of stereoisomeric drugs: Why, how and when. // Journal of Chromatography B: biomedical applications. 1997. - Vol.689. - P. 91-104.

76. Ger L.P., Wang J.W., Lin C.C. et al. / Prognostic factors in 43 cases of osteosarcoma. // J. Formos. Med. Assoc. 1993; 92 (11). — P. 962-968.

77. Glasser D.B., Lane J.M., Huvos A.G. et al. // Survival, prognosis and trerapeutic response in osteogenic sarcoma: the Memorial Hospital Experience. // Cancer 1992; 69. — P. 698-708.

78. Goldberg D.M., Spooner R.J. / Methods of Enzymatic Analisis // Verlog Chemie, Deerfield Beach, Fl. Bergmeyen, H.V. Ed. 3rd edn. Vol 3, 1983 pp 258-265

79. Grant G.H., et al. / Amino Acids and proteins // Fundamentals of Clinical Chemistry, Tietz N.W. Editor, Third Edition, WB Saunders Company Philadelphia USA, 328-329, 1987

80. Henry, R.J. / Clinical Chemistry // Principles and Techniques, 2nd Edition, Harper and Row, 1974 ,p. 525

81. Irinotecan plus Fluorouracil and Leucovorin for Metastatic Colorectal Cancer / Leonard B. Saltz, John V. Cox, Charles Blanke, Lee S. Rosen, Louis Fehrenbacher et al. // N. Engl. J. Med., Sep 2000; 343: 905 914

82. Ivanova N., Koshechkin K., Baykova V., Aliev M. et al. / The pripary treatment results by using of high doses of methotrexate for the children with osteosarcoma // Journal of N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS; 2006 M. P. 34

83. Kalifa C, Brugieres L, Le Deley MC. Neoadjuvant treatment in osteosarcomas // Bull Cancer. 2006 Nov 1;93(11):1115-20.

84. Koracevic D., Koracevic G., Djorjevic V., Andrejevic S., Cosic V. / Method for the measurement of antioxidant activity in human fluids. // Clin Pathol. 2001. -№ 54. P. 56-61.

85. Krishna Sumanth M., Sharma V.K., Khaitan B.K., Kapoor A., Tejasvi T. / Evaluation of oral methotrexate in the treatment of systemic sclerosis // Int J Dermatol. 2007;46(2):218-23

86. Kunikane H., Zalupski M.M., Ramachandran C. et al. / Fiow cytometric analisys of P-glycoprotein expression and drug efflux in huvfnn soft tissue and bone sarcomas. // Cytometry, 1997; 30 (4). — P. 197-203.

87. Kusuzaki K., Ashihara T., Hirasawa Y. / Assessment of malignancy of bone and soft tissue tumors using DNA cytoflrometry. // Recent Advances in Musculoskeletal Oncology. Springer-Verlag, Tokyo 1992. —P. 221-228.

88. La Rue S. M., Fox M.H., Withrow S.W. et al. / Impact of heterogeneityiy the predictive value of kinetic parameters in canine osteosarcoma. Cacer Res. 1994; 54 (14). — P. 3916-3921.

89. Lawrence J.A., Babyn P.S., Chan H.S. et al. / Extremity osteosarcoma in childhood: prognostic value of radiologic imaging. // Radiology; 1993, 189 (1). —P. 43-47.

90. Lerebours F., Olshwang S., Thuills B. et al. / Fine deletion mapping of chromosome 8p in non-small-cell lung carcinoma. // Int J Cancer, 1999, Jun 11; 81 (6).—P. 854-858.

91. Leucovorin Rescue from Raltitrexed (Tomudex)-induced Antiproliferative Effects: In Vitro Cell Line and in Vivo Mouse Studies / Dv C. Farrugia, G. W. Aherne, L. Brunton, S. J. Clarke, and A. L. Jackman // Clin. Cancer Res., Sep 2000; 6: 3646

92. L-folic acid versus DL folinic acid in the resque of high-dose methotrexate therapy in leukemic children. / Etienne M.C., Thyss A., Bertrand Y., Rubie H., Milano G. // Bulletin du cancer. 1993. - №22. - P. 357-363.

93. Lymphoepithelioma-like carcinoma of the lung in a patient with silicosis / J.C. Ho, W.K. Lam, G.C. Ooi, M.P. Wong, J.C. Lam et al. // ERS Journals Ltd, 2003. 383-386

94. Mackway-Jones K. / Towards evidence based emergency medicine: best BETs from the Manchester Royal Infirmary // Emerg Med J 2003;20:464-470

95. Mainwaring P., Grygiel J.J. / Interaction of 5-fluorourac with folates. // Australian and New Zealand J. Of Med. 1995. - Vol.2. - №1. - P.60.

96. Mandl A., Lindner W. / Improved detection of leucovorin in mixed folates and antifolates by reversed-phase liquid chromatography and on-line post-column UV irradiation. // Chromatographia. 1996. - №14. - P. 327330.

97. McEvoy G.K. / American Hospital Formulary Service Drug Information 2005. // Bethesda, MD: American Society of Health-System Pharmacists, Inc. 2005 P. 1561

98. Methotrexate for ankylosing spondylitis / Author(s): Chen J, Liu C, Lin J // Cochrane Database Syst Rev; 2006, Pages: CD004524

99. Methotrexate for the treatment of Crohn's disease. The North American Crohn's Study Group Investigators. / Feagan B.G., Rochon J., Fedorak R.N., Irvine E.J., Wild G., Sutherland L., et al. // N Engl J Med 1995;332:292-7

100. Mittal R, Mottl H, Nemec J. Acute transient cerebral toxicity associated with administration of high-dose methotrexate. Med Princ Pract. 2005 May-Jun; 14(3):202-4.

101. Moe P.J., Holen A.S. / High-dose methotrexate in childhood all. / Pediatr. Hematol. Oncol.-2000. Vol 17. - P. 615-22.

102. Munos V.A., Ocete G., Aymerich M.L. et al. / Preoperative and postoperative chemotherapy of osteogenic sarcoma of the limbs in children. // Med. Clin (Bare.), 1996; 107 (5). — P. 161-164.

103. O'Connell M.Y. / Results of phase 3 trial of 5-fluorouracil and leucovorin in treatment of advanced colorectal cancer. '// Abstrakt 019. — Proc. of the YI NCI-EORTS symposium on new drags in cancer chemotherapy. 1989.

104. Paul D. King, Michael C. Perry / Hepatotoxicity of chemotherapy // Oncologist 2001;6; 162-176

105. Peyriere H, Cociglio M, Margueritte G et al. Optimal management of methotrexate intoxication in a child with osteosarcoma // Ann Pharmacother. 2004 Mar;38(3):422-7. Epub 2004 Jan 23.

106. Picci P. Osteosarcoma (Osteogenic sarcoma) // Orphanet J. Rare Dis. — 2007.-Vol. 2.-P. 6.

107. Schajowicz F., Sisson H.A., Sobin L.H. / The World Health Organization's histologic classification of bone tumors: a commentay on the second edition. Cancer, 1995; 75. — P. 1208-1214.

108. Schalhorn A.,Kühl M. / Clinical pharmacokinetics of fluorouracil and folinic acid. // Semin Oncol. 1992. - №19. - P.82-92

109. Scotlandi K., Serra M., Manara M. et al. / Clinical relevance of Ki-67 expression in bone tumors. // Cancer, 1995; 75 (3). — P. 806-814.

110. Seibel N.L., Krailo M., Chen Z. et al. Upfront window trial of topotecan in previously untreated children and adolescents with poor prognosis metastatic osteosarcoma: children's Cancer Group (CCG) 7943 // Cancer -2007,-Vol. 109. —N 8. P. 1646-1653.

111. Sessink P.J, Friemel N.S, Anzion R.B, Bos R.P. / Biological and environmental monitoring of occupational exposure of pharmaceutical plant workers to methotrexate. // Arch. Occup. Environ Health 1994 Vol. 65 - P. 401-3.

112. Stoffregen C., Zurborn KH., Boehme V., Schmid A., Lorenz G., Arendt T., Folsch U.R. / Weekly high-dose 5-fluorouracil 24-hour infusion and intermediate-dose folinic acid bolus in metastatic colorectal cancer. // Onkologie. 1996. - №19. - P. 410-414.

113. Straw A., Szapary U., Wynn W.T. / Pharmacokinetics of the diastereoisomers of leucovorin alter intravenous and oral administration of normal subjects // Cancer Res. 1974. - Vol. 13. - P. 9326-9933.

114. Tietz, N. / Clinical Guide to Laboratory Tests. Ed. W. B. Saunders. // CP Philadelphia, 1990 PA. P. 90

115. Tunn P.U., Reichardt P. Chemotherapy for osteosarcoma without highdose methotrexate: a 12-year follow-up on 53 patients // Onkologie. 2007. -Vol. 30-N5.-P. 228-232.

116. USP 24. / Leucovorin. Official Monographs. // P.956-958.

117. Vezmar S, Bode U, Jaehde U. / Monitoring of methotrexate and reduced folates in the cerebrospinal fluid of cancer patients. // Int J Clin Pharmacol Ther. 2002 Dec;40(12):582-3

118. Wangm Y.M., Fujimoto T.V. / Clinical pharmacokinetics of methotrexate in children. // Clin. Pharmacokinet. 1993. - Vol. 48. - P. 335.

119. Zelcer S, Kellick M, Wexler LH et al. The Memorial Sloan Kettering Cancer Center experience with outpatient administration of high dose methotrexate with leucovorin rescue // Pediatr Blood Cancer. 2008 Jun;50(6): 1176-80.

120. Zelcer S., Kellick M., Wexler L.H. / Methotrexate levels and outcome in osteosarcoma. // Pediatr Blood Cancer. 2005 Jun 15; 44 (7). — P. 638-42.

121. Zhang Q, Niu XH, Cai YB et al. Prognostic factors for the local recurrence of osteosarcoma in extremities treated with combined therapy // Zhonghua Wai Ke Za Zhi. 2007 Aug 15;45(16):1114-7.