Химико-фармацевтический анализ метотрексата и изучение его токсичности при гемобластозах у детей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат фармацевтических наук Иванов, Алексей Владимирович

• Иванов, Алексей Владимирович
• кандидат фармацевтических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Иванов, Алексей Владимирович

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1. Метотрексат: строение, фармакокинетика и фармакодинамика.

2. Значение высокодозной терапии метотрексатом.

3. Терапевтический лекарственный мониторинг метотрексата и методы, используемые для его проведения в плазме крови.

4. Химико-фармацевтический анализ метотрексата; обзор фармакопейных статей.

5. Токсичность метотрексата и способы ее оценки.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

1. Препараты.

2. Отбор проб.

3. Определение концентрации метотрексата.

4. Определение показателей СПОЛ методом спектрофотометрии.

5. Методика определения N-AHK в сыворотке крови по Свеннерхольму.

6. Методика определения молекул средних масс в сыворотке крови.

7. Методика определения содержания а-токоферола и ретинола в плазме крови.

8. Методика определения ВМК в суточной моче.

9. Методика определения активности каталазы в эритроцитах.

10. Метод электроэнцефалографии.

11. Статистический анализ.

Глава 3. Результаты собственных исследований.

1. Разработка метода количественного определения метотрексата и его основного метаболита 7-OH-Mtx в сыворотке крови больных.

2. Разработка нового экспресс-метода количественного определения метотрексата в инъекционных лекарственных формах.

3. Качественный и количественный сравнительный анализ Mtx в инъекционных ЛФ, применяемых в онкологии, различных фирм производителей.

4. Сравнительная оценка методов количественного определения метотрексата в сыворотке крови для проведения TJIM.

5. Изучение взаимосвязи метаболизма метотрексата с токсическими проявлениями у детей, страдающих гемобластозами.

6. Изучение динамики изменения биохимических показателей у детей, страдающих гемобластозами и получающих химиотерапию.

7. Изучение взаимосвязи биохимических показателей с ЭЭГ исследованиями и данными мониторинга метотрексата.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Химико-фармацевтический анализ метотрексата и изучение его токсичности при гемобластозах у детей»

Актуальность.

Прогресс в детской онкологии связан в первую очередь с развитием химиотерапии, успехи которой определили новые возможности лечения гемобластозов у детей. Химиотерапия превратилась из вида вспомогательной помощи в метод лечения, в большинстве случаев определяющий исход заболевания. Путь к улучшению результатов лечения лежит в интенсификации химиотерапии, что увеличивает риск, связанный с её проведением. Это потребовало создания комплекса мер, направленных на профилактику и лечение осложнений, возникающих в процессе проведения химиотерапии, что является не менее важной и не менее сложной задачей, чем лечение рака (JT.A. Дурнов, 2002, 2004). Следовательно, искусство проведения высокодозной химиотерапии (ВДХТ), в первую очередь, связано не с формальным соблюдением режима введения цитостатиков в организм больного, а профилактикой и лечением острых и отсроченных осложнений химиотерапии.

Метотрексат (Mtx) является одним из самых эффективных цитостатических препаратов, относящихся к антиметаболитам фолиевой кислоты. Как лекарственное средство он известен с 1948 года (А.Альберт, 1989). В России для использования в онкологической практике зарегистрировано десять его торговых марок. Выбор наиболее качественного из них, безусловно, является актуальной и важной задачей, решение которой позволит сделать более безопасным и эффективным проведение ВДХТ. Проведение химико-фармацевтического анализа Mtx, а также разработка экспресс-метода для его количественного определения в лекарственной форме (ЛФ) непосредственно перед началом лечения позволит полностью исключить введение больным недоброкачественного препарата.

Mtx конкурентно ингибирует дигидрофолатредуктазу, превращающую фолиевую кислоту в тетрагидрофолат, в результате чего косвенно тормозится синтез нуклеиновых кислот и клеточное деление в S-фазе клеточного цикла (J.Holland et al., 1997; R.Bast et al., 2000). В связи со способностью Mtx проникать через гистогематические барьеры использование высоких и сверхвысоких доз (1,0 - 12,0 г/м ) этого препарата является ключевым фактором, позволяющим добиться излечения детей, страдающих гемобласто-зами. Однако наряду с высокой противоопухолевой активностью Mtx проявляет серьезные побочные эффекты, главными из которых являются нейро-, нефро-, гепатотоксичность, миелодепрессия, поражения ЖКТ (П.Копосов, 2002). Фармакокинетика Mtx также является принципиальным аспектом в развитии системной Mtx токсичности и связанной с ней смертностью. Именно поэтому ВДХТ Mtx представляет собой именно тот случай, когда необходим тщательный терапевтический лекарственный мониторинг (TJIM) препарата и биохимических показателей токсичности в крови. Нейротоксичность может быть дозолимитирующим фактором, ограничивающим возможности противоопухолевого лечения Mtx. Известно, что в основе механизма нейротоксичности лежат различные поражения структур нервной ткани, вызывающие нейрональную и аксональную деструктуризацию и демиелинизацию. Разработка методологических подходов к диагностике и мониторингу нейротоксичности Mtx на основе комплекса биохимических методов исследования является одной из важных задач. Следует отметить, что в литературе отсутствуют работы, посвященные изучению биохимических маркеров нейротоксичности - N -ацетилнейраминовой (N-AHK) и ванилминдальной кислот (ВМК) в крови больных гемобластозами детей. В этом аспекте очевидна актуальность проведенного комплексного исследования.

Целью настоящего исследования является разработка современных методов количественного определения Mtx в инъекционных лекарственных формах различных фирм-производителей и сыворотке крови больных детей, страдающих гемобластозами, а также изучение его токсичности при новых высокодозных режимах применения.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать метод количественного определения Mtx и его основного метаболита (7-OH-Mtx) в сыворотке крови больных при помощи метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

2. Установить возможность применения флуоресцентно-поляризационного иммуноанализа (ФПИА) для проведения количественного определения Mtx в инъекционных ЛФ и разработать новый экспресс-метод его количественного определения.

3. Провести сравнительную оценку качества лекарственных препаратов Mtx, применяемых в детской онкологии.

4. Провести сравнительную оценку методов количественного определения Mtx в сыворотке крови и выбрать наиболее оптимальный для проведения ТЛМ Mtx.

5. Изучить взаимосвязь между нарушением элиминации Mtx и его метаболизмом у детей, страдающих гемобластозами.

6. У детей, страдающих гемобластозами, изучить динамику изменения биохимических показателей: нейротоксичности - N-AHK и ВМК; общей токсичности - молекулы средних масс (МСМ); продуктов свободнорадикального перекисного окисления липидов (СПОЛ) - малоновый диальдегид (МДА); антиоксидантного статуса - ретинол, токоферол и катал аза.

7. С помощью корреляционного анализа у детей, страдающих гемобластозами, изучить взаимосвязь биохимических показателей с ЭЭГ исследованиями и данными мониторинга Mtx.

Научная новизна исследования:

Впервые разработан экспресс-метод количественного определения Mtx в инъекционных ЛФ с помощью ФПИА.

Впервые разработан метод количественного определения Mtx и его основного метаболита 7-OH-Mtx в сыворотке крови больных с помощью ВЭЖХ.

Впервые изучен вклад Mtx в развитие нейротоксичности и общей токсичности у детей с гемобластозами. Выявлены биохимические маркеры: N-АНК, ВМК, МДА, каталазы, МСМ, позволяющие проводить оценку побочных действий при химиотерапии до их клинического проявления.

Впервые с помощью корреляционного анализа обнаружены взаимосвязи между метаболическими изменениями (показателями нейротоксичности, общей токсичности и СПОЛ), значением Mtx в сыворотке крови и ЭЭГ-данными у детей, страдающих гемобластозами.

Практическая значимость исследования:

Разработанный экспресс-метод количественного определения Mtx в ЛФ с использованием флуоресцентно-поляризационного иммуноанализа позволяет в короткие сроки (20 минут) провести количественное определение, что исключает применение недоброкачественного препарата.

ВЭЖХ метод количественного определения соотношения концентраций Mtx и его основного метаболита 7-OH-Mtx в сыворотке крови рекомендован для оценки и коррекции токсических проявлений Mtx.

Разработанные методики биохимической диагностики общей токсичности и нейротоксичности предлагаются для выявления и корректирования побочных действий при химиотерапии Mtx.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в рамках НИР кафедры фармацевтической химии ММА им. И.М. Сеченова «Совершенствование контроля качества лекарственных средств», номер государственной регистрации 01.200.110545, а также в рамках НИР РАМН РФ (ГУ НИИ ДОиГ и ГУ НИИ КО РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН) «Особенности биоэлектрической активности головного мозга и нейромедиаторного обмена у детей с лимфопролиферативными заболеваниями в процессе противоопухолевого лечения», «Изучение общих биохимических механизмов синдрома токсичности у детей, страдающих злокачественными опухолями»: грантов РФФ «Изучение общих биохимических механизмов токсичности различных режимов высокодозной химиотерапии при злокачественных опухолях у детей» № 01-04-49828; № 00-15-97909; НШ-1110.2003.01.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Иванов, Алексей Владимирович

выводы

1. Разработан метод количественного определения метотрексата и его основного метаболита 7-OH-Mtx в сыворотке крови больных с помощью ВЭЖХ (предел обнаружения 0,8 10"3 мг/мл; коэффициент вариации 2,77%).

2. Установлена возможность применения ФПИА в системе FLx («Abbott», USA) для проведения количественного определения метотрексата в инъекционных ЛФ о предел обнаружения 4,5 10" мг/мл; коэффициент вариации 1,17%). Разработан экспресс-метод его количественного определения, сопоставимый по метрологическим характеристикам с методом европейской фармакопеи.

3. Проведенный сравнительный ВЭЖХ — анализ препаратов метотрексата, применяемых в детской онкологии и выпускаемых различными фирмами-производителями, показал, что они различаются по количественному содержанию примесей и действующего вещества. Наиболее качественными (отвечающими требованиям европейской фармакопеи - менее 2,5% и от 95 до 105% соответственно) являются раствор для инъекций метотрексата Лахема, Чехия (1,94 ± 0,49; 98,47 ± 0,71) и концентрат для приготовления инфузий метотрексата фирмы Эбеве, Австрия (1,15 ± 0,52; 103,23 ± 1,07).

4. Проведенный сравнительный анализ методов количественного определения метотрексата в сыворотке крови показал, что методы ВЭЖХ и ФПИА сопоставимы по точности (критерий Стьюдента р = 0,728) и воспроизводимости (96 и 99% соответственно). Метод ФПИА имеет ряд преимуществ (более простой и быстрый) по сравнению с ВЭЖХ, что делает его более пригодным для проведения ТЛМ метотрексата в клинической практике.

5. Установлено, что при замедленном выведении Mtx происходит изменение его метаболизма, которое выражается в нарушении соотношения концентрации Mtx/7-OH-Mtx.

6. Изучена динамика изменения биохимических показателей в процессе химиотерапии детей с гемобластозами и показана информативность следующих из них: МСМ, каталазы, витаминов А и Е для оценки общей токсичности и нарушений антиоксидантного статуса; N-AHK и ВМК для оценки нейротоксичности.

7. В период проведения высокодозной химиотерапии метотрексатом выявлен ряд корреляций между показателями нейротоксичности и данными ЭЭГ-иссле-дований, свидетельствующих о влиянии на ЦНС патологического процесса и химиотерапии. Показана прямая зависимость между увеличением концентрации Mtx и показателем нейротоксичности — N-AHK (коэффициент корреляции Спирмена 0,8683).

Практические рекомендации.

1. Разработана методология проведения ТЛМ Mtx у детей, страдающих гемобластозами.

2. Для количественного анализа инъекционных форм Mtx рекомендован метод ФПИА.

3. Разработаны биохимические критерии различных видов токсичности у детей, страдающих гемобластозами, которые применяются в отделение химиотерапии гемобластозов НИИ ДОиГ ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Иванов, Алексей Владимирович, 2005 год

1. Аббасова А.Г. Поражение печени при программной химиотерапии (m-BFM — 90) острых лейкозов и неходжкинских лимфом у детей. // Диссертация к. м. н. — М., 2001.

2. Адаптация метода ФПИА для мониторинга метотрексата в крови / Байков К.Э., Арзамасцев А.П., Родионова Г.М., Иванов А.В., Пичугин А.В., Байкова В.Н. // 9 Рос. Национальный Конгресс «Человек и лекарство». — Москва. — 2002. С. 575.

3. Байкова В.Н. Нарушение метаболизма тирозина и процессов свободнорадикального перекисного окисления липидов при опухолях у детей и пути их коррекций. // Дис. д. б. н. М., - 1998.

4. Беликов В.Г. Фармацевтическая химия. — Пятигорск: «Теза», 1996. -Т. 2. -С. 538-539.

5. Биохимические методы исследования в клинике./ Под ред. А.А Покровского/ -М.: «Медицина», 1969. С. 256-263.

6. Бобырев В.Н., Почерняева В.Ф., Стародубцев С.Г. / Специфичность антиокси-дантной защиты органов и тканей основа дифференциальной фармакотерапии антиоксидантами // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1994. - №7. С. 47 - 54.

7. Богданова Н.В. Лекарственное лечение онкологических больных в амбулаторных условиях. М.: «Олма-пресс». 2001. - С. 227 - 240.

8. Владимиров Ю.А., Арчаков A.M. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Медицина, 1972. - 320 с.

9. Горбачевская Н.Л. Особенности формирования ЭЭГ у детей в норме и при разных типах общих первазивных расстройств развития. // Дис. д.б.н. М., - 2000.

10. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа / МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - С. 200 - 211.

11. Дурнов JI.A., Голдобенко Г.В., Курмашов В.И. Детская онкология. М.: Литера, 1997.-С. 37-41.

12. Дурнов Л.А., Голдобенко Г.В., Сигал Ст.Э. Настольная книга детского онколога. М.: Параллель, 1994. - С. 57 - 63.

13. Еремин С.К., Изотов Б.Н., Веселовская Н.В. Анализ наркотических средств. М.: Мысль, 1993. С. 82-89.

14. Ерин А.Н., Гуляева И. В., Никушкин Е.В. Свободно-радикальные механизмы в церебральных патологиях // Бюл. Экспериментальной биологии и медицины. 1994. - № 10. С. 343 - 348.

15. Кишкун А.А., Назаренко Г.И. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. -М.: Медицина, 2002. С. 136-138.

16. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике. Минск: «Беларусь», 2000. - 560 с.

17. Клинический мониторинг метотрексата при лечении острого лимфобластного лейкоза у детей / Сингин А.С., Курдюков Б.В., Гаврилова И.Е. и др. // 2 съезд детских онкологов и гематологов России. Ростов-на-Дону. - 2001. С. 174.

18. Колосов П. В., Ковалев В. И., Ковалев Д. В. Профилактика и лечение осложнений химиотерапии злокачественных опухолей у детей: современные подходы. Руководство для врачей. М.: ООО «Клевер Принт», 2002. - С. 73 - 78.

19. Кузнецова Е.И. Функциональное состояние головного мозга онкологических больных после химио-лучевой терапии. Дис. к. б. н. - М., 1999. — 105 с.

20. Лоуренс Д. Р., Бенитт П.Н. Клиническая фармакология. М.: «Медицина», 1991.-700 с.

21. Любимова Н.В., Аббасова А.Г., Курмашов В.И., Киселев А.В., Кушлинский Н.Е. / Токсическое поражение печени при программном лечении мБФМ-90 детей с гемобластозами. // Новое в онкологии. 2001. - С. 37 - 44.

22. Макарова Н.В., Трофимец В.Я. Статистика в Excel: Учебное пособие. М.: Финансы и статистика, 2002. — С. 93 - 101.

23. Михаевич О.Д. Некоторые особенности процессов перекисного окисления липидов у онкологических больных и возможности их коррекции. // Дис. к.б.н. -М., 1992.-С. 24-38.

24. Моисеенко Е.И. Медико-социальные аспекты помощи детям с онкологическими заболеваниями. Дис. д. м. н. - М., 1997. - 150 с.

25. Немцова Е.Р., Сергеева Т.В., Якубовская Р.И. и др. / Окислительный стресс и как с ним бороться // Российский онкологический журнал. 2000. - № 2. — С. 45 - 54.

26. Переводчикова Н.И. Химиотерапия опухолевых заболеваний. М.: «Медицина». - 2000. С. 290 - 298.

27. Переводчикова Н.И., Еремина Л.А., Манзюк Л.В., Сингин А.С. и др. / Результаты применения высоких доз метотрексата при лечении остеогенной саркомы // Вопросы онкологии. 1990. - Т. 36, № 6. - С. 667 - 671.

28. Подымова С.Д. Болезни печени. Руководство для врачей. М.: «Медицина». -1993.-144 с.

29. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ Statistica. М., «МедиаСфера». - 2002. - С. 191-197.

30. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии. Под ред. А. П. Арзамасцева. М.: Медицина, 1995. - С. 227 - 228.

31. ФС предприятия «Ледерле Парентералс Инк» на препарат Метотрексат натрия лиофилизированный порошок для приготовления инъекций. № 42 — 2392 98.

32. ФС предприятия «Плива-Лахема а.о.» на препарат Метотрексат-Лахема раствор для инъекций. № 42-3350-01.

33. ФС предприятия «Фармация и Апджон (Перт) Пти Лимитед» на препарат Метотрексат раствор для инъекций. № 42-4312-00.

34. ФС предприятия «Фармахеми Б.В.» на препарат Метотрексат-Тева раствор для инъекций. № 42-3394-01.

35. ФС предприятия «ЭБЕВЕ Арцнаймиттел ГмбХ» на препарат Метотрексат -ЭБЕВЕ концентрат для инфузий. № 42-9200-98.

36. ФС предприятия «ТЕВА Фармацевтические предприятия ЛТД» на препарат Метотрексат для инъекций, лиофилизированный порошок. № 42-10099-99.

37. ФС № 42-1592-88 на метотрексат, для изготовления лекарственных средств.

38. ФС предприятия ООО «ЛЭНС-Фарм» на препарат «Метотрексат-ЛЭНС» для инъекций, лиофилизированный порошок. № 42-0046-0069-00.

39. Хазанов А.И. Функциональная диагностика заболеваний печени. — М.: «Медицина». 1988. - 261 с.

40. Харкевич Д.А. Фармакология.-М.: «ГЭОТАР Медицина», 2000. С. 585 - 587.

41. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография: Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии. Рига: Зинатне, 1988.-С. 81-84.

42. Abrey Е. High-dose methotrexate in oncology. Pediatr. Hematol. Oncol-2001. -Vol 18.-P. 415-22.

43. Amador E., Dorfman L.E. Serum lactic dehydrohenase: An analytical assessment of current assays. Clin. Chem. 1963. - Vol. 9. - P. 391.

44. Anzai T.N., Jaffe N.M., Wang Y.M., J. Chromatogr. 415 (1987) 445.

45. Bennett ЛУ1, Catovsky D, Daniel MT, et al.: The morphological classification of acute lymphoblastic leukaemia: concordance among observers and clinical correlations. Br J Haematol 47 (4): 553-61, 1981.

46. Bergmayer G., Schaibe T. and Wahlefeld H. International Federation of Clinical Chemistry, Scientific Committee. Clin. Chem. 1977. - Vol. 23. - P. 887 - 899.

47. Bernbeck B, Mauz-Korholz C, Zotz RB, Gobel U.: Methylenetetrahydrofolate reductase gene polymorphism and glucocorticoid intake in children with ALL and aseptic osteonecrosis. Klin Padiatr. Nov-Dec; 215 (6) : 327-31, 2003.

48. Biondi A, Cimino G, Pieters R, et al.: Biological and therapeutic aspects of infant leukemia. Blood 96 (1): 24-33, 2000.

49. Bohuon С., Duprey F., Boudene C., Clin. Chem. Acta 57 (1974) 263.

50. Borsi D., Sagen E., Romslo I., Мое J. Rescue after intermediate and high-dose methotrexate: background, rationale, and current practice. Pediatr. Hematol. Oncol. — 1990.-Vol. 7.-P. 347-363.

51. Bostrom ВС, Erdmann GR, Kamen BA.: Systemic methotrexate exposure is greater after intrathecal than after oral administration. J Pediatr Hematol Oncol. Feb; 25 (2) 114-117, 2003.

52. British Pharmacopoeia. Monographs: Medicinal and Pharmaceutical substances. — 2003.-Vol. 1. P. 1232-1238.

53. Butler RW, Hill JM, Steinherz PG, et al.: Neuropsychologic effects of cranial irradiation, intrathecal methotrexate, and systemic methotrexate in childhood cancer. J Clin Oncol 12 (12): 2621-9, 1994.

54. Buice RG, Evans WE, Karas J, et al.: Evaluation of enzyme immunoassay, radioassay, and radioimmunoassay of serum methotrexate, as compared with liquid chromatography. J. Clin. Chem. Oct; 20 (10): 765-72, 1982.

55. Cancer Medicine. Bast R.C.; Kufe D.W.; Pollock R. E.; Weichselbaum R. R.; Holland J.F. Hamilton (Canada): ВС Decker, Inc 2000. P. 1432 - 1468.

56. Cap J., Misikova Z., Foltinova A. Szabova I. Consequences of intensive therapy of acute lymphoblastic leukemia in children in initial complete remission lasting more than five years. Czech. Med. 1985. - Vol.8. - P. 35 - 44.

57. Chessells JM, Harrison С J, Watson SL, et al.: Medical Research Council Working Party on Childhood Leukaemia: Treatment of infants with lymphoblastic leukaemia: results of the UK Infant Protocols 1987-1999. Br J Haematol 117 (2): 306-14, 2002.

58. Chessells JM, Richards SM, Bailey CC, et al.: Gender and treatment outcome in childhood lymphoblastic leukaemia: report from the MRC UKALL trials. Br J Haematol 89(2): 364-372, 1995.

59. Christie D, Leiper AD, Chessells JM, et al.: Intellectual performance after presymptomatic cranial radiotherapy for leukaemia: effects of age and sex. Arch Dis Child 73 (2): 136-40, 1995.

60. Cichowicz D.J., Shane B. Mammalian folylpoly-g-glutamate synthetase: 1. Purification and general properties of the hog liver enzyme. Biochemistry 26: 504-12, 1987.

61. Cociglio M., Hillaire-Buys D., Alric C. Determination of methotrexate and 7-hydroxymethotrexate by liquid chromatography for routine monitoring of plasma levels. J. Chromatogr. 1995 - Vol. 674 - P. 101-10.

62. Copeland DR, Moore BD, Francis DJ, et al.: Neuropsychologic effects of chemotherapy on children with cancer: a longitudinal study. J Clin Oncol 14 (10): 2826-35, 1996.

63. Davidson A, Payne G, Leach MO, et al.: Proton magnetic resonance spectroscopy ((l)H-MRS) of the brain following high-dose methotrexate treatment for childhood cancer. Med Pediatr Oncol. Jul; 35 (1) : 28-34, 2000.

64. Distel L, Neubauer S, Varon R, et al.: Fatal toxicity following radio- and chemotherapy of medulloblastoma in a child with unrecognized Nijmegen breakage syndrome. Med Pediatr Oncol. Jul; 41 (1): 44-8, 2003.

65. Dordelmann M, Reiter A, Borkhardt A, et al.: Prednisone response is the strongest predictor of treatment outcome in infant acute lymphoblastic leukemia. Blood 94 (4): 1209-17,1999.

66. Eksborg S., Albertioni F., Rask C., Beck O., Palm C., Schroeder H., Peterson C. Methotrexate plasma pharmacokinetics: importance of assay method. Cancer. Lett. -1996. Vol.108. -P. 163 - 169.

67. Erickson R.J., Morales D.R. Clinical use of lactate dehydrogenase. N. Engl. J. Med.- 1961. Vol.265. - P. 48.

68. Espy KA, Moore IM, Kaufmann PM, et al.: Chemotherapeutic CNS prophylaxis and neuropsychologic change in children with acute lymphoblastic leukemia: a prospective study. J Pediatr Psychol 26 (1): 1-9, 2001 Jan-Feb.

69. European Pharmacopoeia 2004. Council of Europe, Strasbourg Cedex, France -2003. P. 61-66; 1556- 1557.

70. Falk L.C., Clark D.R., Kalman S.M., Long T.F., Clin. Chem. 22 (1976) 785

71. Ferrua B, Milano G, Ly B, et al.: An enzyme immunoassay design using labelled antibodies for the determination of haptens. Application to methotrexate assay. J. Immunol Methods. May; 60 (1-2): 257-68, 1983.

72. Fisgin T, Yarali N, Kara A, et al.: Hemostatic side effects of high-dose methotrexate in childhood acute lymphoblastic leukemia. Pediatr Hematol Oncol. Jan-Feb; 21 (1): 77-83, 2004.

73. Frankel LS, Ochs J, Shuster JJ, et al.: Therapeutic trial for infant acute lymphoblastic leukemia: the Pediatric Oncology Group experience (POG 8493). J Pediatr Hematol Oncol 19 (1): 35-42, 1997 Jan-Feb.

74. Gaynon PS, Bleyer WA, Steinherz PG, et al.: Day 7 marrow response and outcome for children with acute lymphoblastic leukemia and unfavorable presenting features. Med Pediatr Oncol 18 (4): 273-9, 1990.

75. Gaynon PS, Desai AA, Bostrom ВС, et al.: Early response to therapy and outcome in childhood acute lymphoblastic leukemia: a review. Cancer 80 (9): 1717-26, 1997.

76. Gajjar A, Ribeiro R, Hancock ML, et al.: Persistence of circulating blasts after 1 week of multiagent chemotherapy confers a poor prognosis in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood 86 (4): 1292-5, 1995.

77. Geri M. Gowan, Pharm.D., et al.: Methotrexate-Induced Toxic Leukoencephalo-pathy. Pharmacotherapy 22(9): 1183-1187, 2002.

78. Hata M, Ogino I, Aida N, et al.: Prophylactic cranial irradiation of acute lymphoblastic leukemia in childhood: outcomes of late effects on pituitary function and growth in long-term survivors. Int J Cancer 96 Suppl: 117-24, 2001.

79. Halberg FE, Kramer JH, Moore IM, et al.: Prophylactic cranial irradiation dose effects on late cognitive function in children treated for acute lymphoblastic leukemia. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 22 (1): 13-6, 1992.

80. Hirschfeld S, Ho PT, Smith M, Pazdur R.: Regulatory approvals of pediatric oncology drugs: previous experience and new initiatives. J Clin Oncol. Mar 15; 21 (6) : 1066-73,2003.

81. Hempel L, Misselwitz J, Fleck C, et al.: Influence of high-dose methotrexate therapy (HD-MTX) on glomerular and tubular kidney function. Med Pediatr Oncol. Jun; 40 (6):348-54, 2003.

82. Howell S.K., Wang Y.M., HosoyaR., Sutow W.W., Clin. Chem. 26 (1980) 734

83. Ito C, Kumagai M, Manabe A, et al.: Hyperdiploid acute lymphoblastic leukemia with 51 to 65 chromosomes: a distinct biological entity with a marked propensity to undergo apoptosis. Blood 93 (1): 315-20, 1999.

84. Jardine LF, Ingram LC, Bleyer WA.: Intrathecal leucovorin after intrathecal methotrexate overdose. J Pediatr Hematol Oncol. Aug; 18 (3) : 302-4, 1996.

85. Jolley M.E. Fluorescence polarization immunoassay for the determination of therapeutic drug levels in human plasma. Journal of Analytical Toxicity. — 1981. — Vol. 5.-P. 228-232.

86. Jolley M.E., Stroupe S.D., Wang C.J., et al. Fluorescence polarization immunoassay. An automated system. Clin Chem. 1981. - Vol. 27. - P. 1575 - 1579.

87. Kaspers GJ, Veerman AJ.: Clinical significance of cellular drug resistance in childhood leukemia. Recent Results Cancer Res. 161 : 196-220, 2003.

88. Kellie SJ, Barbaric D, Koopmans P, et al.: Cerebrospinal fluid concentrations of vincristine after bolus intravenous dosing: a surrogate marker of brain penetration. Cancer Mar 15; 94 (6) : 1815-20, 2002.

89. Knight J.A., Haymond R.E. y-glutamyltransferase and alkaline phosphatase activities compared in serum of normal children and children with liver disease. Clin. Chem. 1981. - Vol. 27. - P. 48.

90. Lennard L. Therapeutic drug monitoring of antimetabolic cytotxic drugs // Brit. J. Clin. Pharmacol. 1999. - Vol. 47 (2). - P. 131-143.

91. Lippens R.J., Winograd B.M. Methotrexate concentration levels in the cerebrospinal fluid during high-dose methotrexate infusions: an unreliable prediction. Pediatr. Hematol. Oncol. 1988. - Vol.249. - P. 249.

92. Lo Nigro L; Di Cataldo A; Schiliro G. Acute neurotoxicity in children with B-lineage acute lymphoblastic leukemia (B-ALL) treated with intermediate risk protocols. Med Pediatr Oncol 2000 Nov;35(5):449-55

93. McLean TW, Ringold S, Neuberg D, et al.: TEL/AML-1 dimerizes and is associated with a favorable outcome in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood 88 (11): 4252-8, 1996.

94. McCrudden E.A., Tett S.E. Improved high-performance liquid chromatography determination of methotrexate and its major metabolite in plasma using a poly(styrene-divinylbenzene) column. J. Chromatogr, 1999, v. 721, P. 87 - 92.

95. Mihara M., Uchiyama M. et al, Biochem. Med, 1980, - v 23, p 302.

96. Мое P.J., Holen A.S. High-dose methotrexate in childhood all. Pediatr. Hematol. Oncol.-2000.-Vol 17.-P. 615-22.

97. Millot F., Dhondt L., Mazingue F., Mechinaud F., Ingrand P., Guilhot F. Changes of cerebral biopterin and biogenic amine metabolism in leukemic children receiving 5 g/m2 intravenous methotrexate. Pediatr. Res. 1995. - Vol.37. - P. 151 - 154.

98. Moore IM, Espy KA, Kaufmann P, et al.: Cognitive consequences and central nervous system injury following treatment for childhood leukemia. Semin Oncol Nurs 16 (4): 279-90; discussion 291-9, 2000.

99. Nachman J, Sather HN, Cherlow JM, et al.: Response of children with high-risk acute lymphoblastic leukemia treated with and without cranial irradiation: a report from the Children's Cancer Group. J Clin Oncol 16 (3): 920-30, 1998.

100. Nachman JB, Sather HN, Sensel MG, et al.: Augmented post-induction therapy for children with high-risk acute lymphoblastic leukemia and a slow response to initial therapy. N Engl J Med 338 (23): 1663-71, 1998.

101. Najjar T.A., Matar K.M., Alfawaz I.M. Comparison of a new high-performance liquid chromatography method with fluorescence polarization immunoassay for analysis of methotrexate. The Drug Monit. 1992 - Vol. 14 - P. 142-6.

102. Nicoara A., Duffaud F., Guillet P., Pignon Т., Catalin J., Durand A., Favre R. Individual dose adjustment of high-dose methotrexate in clinical practice. Rev. Med. Intern. 1996. - Vol.17. - P. 689-98.

103. Ochs JJ, Bowman WP, Pui CH, et al.: Seizures in childhood lymphoblastic leukaemia patients. Lancet 2 (8417-18): 1422-4, 1984.

104. Ochs JJ.: Neurotoxicity due to central nervous system therapy for childhood leukemia. Am J Pediatr Hematol Oncol. Spring; 11 (1): 93-105, 1989.

105. Paxton J.W., Rowell F.J., Clin. Cim. Acta 80 (1977) 563.

106. Pesce M.A., Bodourian S.H. Evaluation of a fluorescence polarization immunoassay procedure for quantitation of methotrexate. The Drug Monit. — 1986 — Vol.8 -P.l 15-21.

107. Popelka S.R., Miller D.M., Holen J.T. and Kelso D.M. Fluorescence polarization immunoassay. Analizer for the rapid and precise measurement of fluorescence polarization using disposable cuvettes. Clin Chem. 1981. - Vol. 27. - P. 1198 - 1201.

108. Prytz S., Pettersen I., Aarbakke J. Methotrexate measurements in plasma: comparison of enzyme multiplied immunoassay technique, TDx fluorescence polarization immunoassay, and high pressure liquid chromatography. The Drug Monit. 1986-Vol. 8-P. 368-72.

109. Pui CH, Mahmoud- HH, Rivera GK, et al.: Early intensification of intrathecal chemotherapy virtually eliminates central nervous system relapse in children with acute lymphoblastic leukemia. Blood 92 (2): 411-5, 1998.

110. Pui CH, Evans WE: Acute lymphoblastic leukemia. N Engl J Med 339 (9): 60515, 1998.

111. Pui CH, Boyett JM, Relling MV, et al.: Sex differences in prognosis for children with acute lymphoblastic leukemia. J Clin Oncol 17 (3): 818-24, 1999.

112. Raso V., SchreiberR., Cancer Res. 35 (1975) 1407.

113. Ray M, Marwaha RK, Trehan A.: Chemotherapy related fatal neurotoxicity during induction in acute lymphoblastic leukemia. Indian J Pediatr. Feb; 69 (2): 185-7, 2002.

114. Reaman GH, Sposto R, Sensel MG, et al.: Treatment outcome and prognostic factors for infants with acute lymphoblastic leukemia treated on two consecutive trials of the Children's Cancer Group. J Clin Oncol 17 (2): 445-55, 1999.

115. Reiter A, Schrappe M, Ludwig WD, et al.: Chemotherapy in 998 unselected childhood acute lymphoblastic leukemia patients. Results and conclusions of the multicenter trial ALL-BFM 86. Blood 84 (9): 3122-33, 1994.

116. Relling MV, Pui CH, Sandlund JT, et al.: Adverse effect of anticonvulsants on efficacy of chemotherapy for acute lymphoblastic leukaemia. Lancet 356 (9226): 28590, 2000.

117. Resar LM, Phillips PC, Kastan MB, et al.: Acute neurotoxicity after intrathecal cytosine arabinoside in two adolescents with acute lymphoblastic leukemia of B-cell type. Cancer. Jan 1; 71 (1) : 117-23, 1993.

118. Rhee M.S., Galivan J. Conversion of methotrexate to 7-hydroxy-methotrexate polyglutamates in cultured rat hepatic cells Cancer Res. 46: 379 -83, 1986.

119. Ries LA, Kosary CL, Hankey BF, et al., eds.: SEER Cancer Statistics Review, 1973-1996. Bethesda, Md: National Cancer Institute, 1999.

120. Roach M.C., Gozel P., Zare R.N., J. Chromatogr. 426 (1988) 129

121. Schrappe M, Reiter A, Riehm H: Prophylaxis and treatment of neoplastic meningeosis in childhood acute lymphoblastic leukemia. J Neurooncol 38 (2-3) : 15965, Jun-Jul 1998.

122. Shuper A, Stark B, Kornreich L, et al.: Methotrexate treatment protocols and the central nervous system: significant cure with significant neurotoxicity. J Child Neurol. Sep; 15 (9):573-80, 2000.

123. Shuper A, Stark B, Kornreich L, et al.: Methotrexate-related neurotoxicity in the treatment of childhood acute lymphoblastic leukemia. Isr Med Assoc J. Nov; 4 (11) : 1050-3, 2002.

124. Shuster JJ, Wacker P, Pullen J, et al.: Prognostic significance of sex in childhood B-precursor acute lymphoblastic leukemia: a Pediatric Oncology Group Study. J Clin Oncol 16(8): 2854-63, 1998.

125. Shuster JJ, Camitta BM, Pullen J, et al.: Identification of newly diagnosed children with acute lymphocytic leukemia at high risk for relapse. Cancer Research, Therapy and Control 9(1-2): 101-107, 1999.

126. Sessink P.J., Friemel N.S., Anzion R.B., Bos R.P. Biological and environmental monitoring of occupational exposure of pharmaceutical plant workers to methotrexate. Arch. Occup. Environ Health-1994 Vol. 65-P. 401-3.

127. Sklar С, Mertens A, Walter A, et al.: Final height after treatment for childhood acute lymphoblastic leukemia: comparison of no cranial irradiation with 1800 and 2400 centigrays of cranial irradiation. J Pediatr 123 (1): 59-64, 1993.

128. Smith M, Arthur D, Camitta B, et al.: Uniform approach to risk classification and treatment assignment for children with acute lymphoblastic leukemia. J Clin Oncol 14 (1): 18-24, 1996.

129. Trueworthy R, Shuster J, Look T, et al.: Ploidy of lymphoblasts is the strongest predictor of treatment outcome in В-progenitor cell acute lymphoblastic leukemia of childhood: a Pediatric Oncology Group study. J Clin Oncol 10(4): 606-613, 1992.

130. Uchiyama M., Mihara M. Analyt. Biochem. 1978, v. 86, p. 271.

131. The United States Pharmacopoeia. 27-d revision. Rockville, 2003. - P. 1070 -1072.

132. Waber DP, Tarbell NJ, Kahn CM, et al.: The relationship of sex and treatment modality to neuropsychologic outcome in childhood acute lymphoblastic leukemia. J Clin Oncol 10 (5): 810-7, 1992.

133. Wall M., Gajjar A., Link A, Mahmoud H. Individualized methotrexate dosing in children with relapsed acute lymphoblastic leukemia. Leukemia. 2000. - Vol. 14. — P. 221 -225.

134. Wangm Y.M., Fujimoto T.V. Clinical pharmacokinetics of methotrexate in children. Clin. Pharmacokinet. 1993. - Vol. 48. - P. 335.

135. Widermann Brigitte C.; Balis Frank M.; Adamson Peter C. Dihydrofolate reductase enzyme inhibition assay for plasma methotrexate determination using a 96-well microplate reader. Clin. Chem. 1999. - Vol. 2. - P. 223-228.

136. Whitehead V.M., Rosenblatt D.S., et al. Accumulation of methotrexate and methotrexate polyglutamates in lymphoblasts at diagnosis of childhood acute lymphoblastic leukemia: a pilot prognostic factor analysis Blood 1990. - Vol. 76. - P. 44-51.