Биофармацевтическое исследование гемцитабина-противоопухолевого лекарственного средства группы антиметаболитов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат биологических наук Паршина, Наталья Анатольевна

• Паршина, Наталья Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Паршина, Наталья Анатольевна

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биофармацевтическое исследование гемцитабина-противоопухолевого лекарственного средства группы антиметаболитов»

Цель и задачи исследования.7

Научная новизна исследования.8

Научно-практическая значимость исследования.8

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.10

1.1 Роль гемцитабина в современной онкологии.10

1.2.1 Рак поджелудочной железы: эпидемиология, статистика, патогенез. 12

1.2.2. Терапия рака поджелудочной железы.14

1.3. Химическое строение, фармакокинетические и фармакодинамические особенности гемцитабина.17

1.3.1. Фармакопейные характеристики гемцитабина.17

1.3.2 Фармакодинамика гемцитабина.18

1.3.3 Фармакокинетика гемцитабина.22

1.3.4 Стандартный режим дозирования гемцитабина.24

1.4.Клинические исследования по изучению длительных инфузий гемцитабина с постоянной скоростью введения.25

1.5.Особенности токсикологического профиля гемцитабина.31

1.6.Фармацевтический анализ гемцитабина. Обзор фармакопейных статей.40

1.7. Алгоритм выбора условий хроматографического определения гемцитабина.42

1.7.1 ВЭЖХ-определение гемцитабина в плазме крови.48

1.8. Клинико-диагностическое значение определения гематологических и биохимических показателей при терапии гемцитабином.50

1.8.1.Общеклиническое исследование крови.50

1.8.2.Биохимические методы оценки функции печени и почек.52

1.9. Роль процессов свободнорадикального окисления и активности антиоксидантной системы при проведении химиотерапии.53

1.10. Математическое моделирование биокинетики.57

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Методы определения гемцитабина в лекарственном препарате и плазме крови.61

2.1.1. Оборудование и реактивы.61

2.1.2. Стандартные образцы.62

2.1.3. Объекты анализа.63

2.1.4. Оценка параметров хроматографической системы.64

2.1.5. Расчет количественного содержания гемцитабина в лекарственной форме.66

2. 2. Валидация хроматографического метода исследования.66

2.3 Характеристика групп пациентов.69

2.3.1. Пациенты, получавшие монотерапию гемцитабином в форме пролонгированных инфузий.70

2.3.2. Пациенты, получавшие полихимиотерапию, включающую гемцитабин.72

2.4. Методики определения биохимических показателей крови.73

2.5. Определение показателей состояния антиоксидантной системы.75

2.6 Определение подлинности гемцитабина гидрохлорида методом ИК-спектрофотометрии.81

ГЛАВА 3. Результаты исследований.82

3.1. Разработка экспресс-методики количественного определения гемцитабина гидрохлорида в лекарственном препарате «Гемзар».83

3.1.1 Подготовка стандартных растворов.84

3.1.2. Выбор оптимальных условий хроматографического определения.85

3.1.3. Выбор условий детектирования.91

3.1.4. Параметры разделения и метрологическая характеристика методики.92

3.2 Определение подлинности лекарственного препарата «Гемзар»и оценка содержания гемцитабина гидрохлорида в нем.95

3.2.1 Подготовка проб для хроматографического анализа.95

3.2.2 Анализ лекарственного препарата «Гемзар» в условиях онкологической клиники.95

3.3. Идентификация гемцитабина гидрохлорида в лекарственном препарате «Гемзар» методом ИК—спектрометрии.97

3.4. Разработка и валидация методики количественного определения гемцитабина в плазме крови.102

3.5. Терапевтический лекарственный мониторинг гемцитабина в плазме крови и оценка безопасности применения пролонгированной инфузии в терапии рака поджелудочной железы.108

3.5.1 Эффективность модифицированного режима введения гемцитабина.108

3.5.2 Оценка переносимости и токсичности пролонгированных инфузий гемцитабина в терапии рака поджелудочной железы.110

3.6. Мониторинг гемцитабина в плазме крови у детей, получающих комплексную терапию, включающую гемцитабин, и оценка безопасности режимов.123

3.6.1. Мониторинг гемцитабина у детей, получающих препарат в составе химиотерапии лимфомы Ходжкина.124

3.6.2. Токсичность схем терапии на основе гемцитабина у детей с лимфомой Ходжкина.126

3.6.3. Токсичность химиотерапии на основе гемцитабина у детей с солидными опухолями.139

3.7. Биокинетический анализ показателей гепатотоксичности и гематологической токсичности схем химиотерапии на основе гемцитабина.144

ВЫВОДЫ.146

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.148

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ECOG - Восточная Кооперативная Группа Исследования Рака FDR - инфузии с фиксированной скоростью введения Gem (Гем) - гемцитабин GeOx - протокол гемцитабин-оксалиплатин

ViGePP - протокол винорельбин-гемцитабин-прокарбазин-преднизолон

USP - фармакопея США

AJ1T - аланинаминотрансфераза

АОК - антиоксидантный комплекс

АОС - антиоксидантная система

ACT - аспартатаминотрансфераза в/в - внутривенно

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ГПО - глутатионпероксидаза

ГР - глутатионредуктаза

ДЛТ - дозолимитирующая токсичность

JIB - лекарственное вещество

ЛДГ - лактатдегидрогеназа

ЛИ - лекарственный препарат

JIC - лекарственное средство

ЛФ - лекарственная форма

ЛХ - лимфома Ходжкина

ЛУК - ледяная уксусная кислота

МДА - малоновый диальдегид

НМРЛ -немелкоклеточный рак легкого

ОАОС - общий антиоксидантный статус

ОБ - общий билирубин

ОФ — обращенная фаза

ПОЛ - пероксидное окисление липидов

ПФ - подвижная фаза

ПХТ - полихимиотерапия

РПЖ - рак поджелудочной железы

СОД - супероксиддисмутаза

СПОЛ - свободнорадикальное пероксидное окисление липидов

ТБК - тиобарбитуровая кислота

ТЛМ - терапевтический лекарственный мониторинг

XT- химиотерапия

ЩФ - щелочная фосфатаза у-ГТ - у -глутамилтрансфераза

Введение

Актуальность темы

Гемцитабин (торговое название «Гемзар») — 2',2-дифтородезоксицитидин-сравнительно новый противоопухолевый препарат из группы антиметаболитов - применяется в терапии злокачественных новообразований у взрослых [115, 123]. Гемцитабин является препаратом выбора в терапии нерезектабельного рака поджелудочной железы [112, 120]. Уникальный механизм действия, выраженная эффективность в терапии различных типов опухолей у взрослых, а также умеренная токсичность создали предпосылки для внедрения препарата в детскую онкологию [107].

Оптимизация режимов введения гемцитабина путем модификации дозы и длительности инфузии - актуальная задача противоопухолевой терапии [127]. Достижение максимальной эффективности терапии эскалацией дозы препарата нецелесообразно, так как влечет за собой развитие тяжёлых токсических реакций. В связи с этим важной задачей является поиск новых режимов дозирования, заключающихся в увеличении времени инфузии по сравнению со стандартным режимом с одновременным снижением дозы гемцитабина.

Применяемая до настоящего времени 30-минутная инфузия в дозе 10001500 мг/м2 [37, 55] приводит к тому, что большую часть времени концентрация гемцитабина в плазме крови превышает концентрацию насыщения дезоксицитидинкиназы — фермента, обеспечивающего образование активных внутриклеточных форм гемцитабина как пролекарства. Это вызывает неполную активацию гемцитабина.

Исследования последних лет показали, что с изменением темпа внутривенного введения гемцитабина меняется его противоопухолевая активность и переносимость [55, 78]. Исходя из представлений о возможности оптимального использования особенностей метаболизма гемцитабина разработан режим фиксированной дозовой интенсивности (Fixed Dose Rate -FDR), когда гемцитабин инфузируется длительно (до 120 мин) с постоянной скоростью 10 мг/м2 в минуту [130].

В условиях пролонгированного введения для оценки скорости накопления внутриклеточных метаболитов, ответственных за реализацию цитотоксического эффекта гемцитабина, необходимо исследовать его фармакокинетику. Кроме того, особое значение приобретает оценка эффективности и безопасности режима длительных инфузий препарата на основе контроля общих клинических и биохимических показателей крови.

Химиотерапия гемцитабином в сочетании с другими цитостатиками успешно применяется в лечении различных гистологических подтипов лимфомы Ходжкина у взрослых. Но недостаточная и противоречивая информация о безопасности режимов химиотерапии, включающих гемцитабин, ограничивает его применение для лечения гемобластозов и солидных опухолей у детей [117, 127]. Для эффективного дозирования гемцитабина в схемах химиотерапии в детской практике требуется детальное исследование особенностей его метаболизма.

Цель исследования - разработка системы терапевтического лекарственного мониторинга гемцитабина у больных раком поджелудочной железы и лимфомой Ходжкина на основе методик количественного определения в лекарственном препарате и плазме крови методом ВЭЖХ и кинетического контроля общеклинических и биохимических Задачи исследования:

1. Разработать методики контроля качества лекарственного препарата и количественного определения гемцитабина в плазме крови методом ВЭЖХ.

2. Провести терапевтический мониторинг гемцитабина с оценкой его фармакокинетики у больных раком поджелудочной железы при режиме модифицированной инфузии с фиксированной скоростью введения для оптимизации химиотерапии.

3. Осуществить систематический контроль биохимических и общеклинических показателей крови у больных раком поджелудочной железы, получающих препарат в режиме модифицированной инфузии с фиксированной скоростью введения.

4. Провести терапевтический мониторинг гемцитабина у детей с лимфомой Ходжкина при его ведении в состав комплексной химиотерапии для оценки эффективности и безопасности применения.

5. Оценить степень выраженности гематологической токсичности и гепатотоксичности при различных схемах терапии гемцитабином по кинетическим параметрам биохимических и общеклинических показателей крови.

Научная новизна. Разработана и валидирована экспресс-методика определения гемцитабина гидрохлорида в лекарственной форме методом ВЭЖХ, которая позволила охарактеризовать различные серии препарата по показателям качества: «подлинность», «испытания на чистоту», «количественное определение».

Разработана и валидирована экспресс-методика определения гемцитабина в плазме крови методом ВЭЖХ. Методика позволила проводить терапевтический мониторинг гемцитабина и продемонстрировать преимущественную эффективность не применявшегося ранее режима пролонгированных инфузий гемцитабина в рамках протокола «Исследование дозозависимого режима длительных инфузий гемцитабина у больных местнораспространенным и диссеминированным раком поджелудочной железы», разработанного в отделении Клинической фармакологии НИИ Клинической онкологии РОНЦ РАМН по сравнению со стандартным введением.

Практическая значимость. Разработанная методика определения гемцитабина в плазме крови позволяет мониторировать его содержание при назначении инфузий препарата в различных режимах и схемах моно- и полихимиотерапии для контроля и коррекции дозы.

На основании результатов терапевтического лекарственного мониторинга гемцитабина и оценки показателей биохимического и гематологического анализа крови модифицированный режим с фиксированной скоростью введения рекомендован для терапии рака поджелудочной железы взамен действующему стандартному протоколу.

Внедрение в практику. Экспресс-метод количественного определения гемцитабина гидрохлорида реализуется в РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН.

Рекомендации по применению модифицированного режима инфузий гемцитабина взамен стандартного режима введения, биокинетическая оценка показателей гематологической токсичности и гепатотоксичности у детей, получающих гемцитабин в составе полихимиотерапии, внедрены в лечебную практику в РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН.

Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической и токсикологической химии медицинского факультета РУДН (специальность «Фармация», дисциплина фармацевтическая химия, раздел «Современные методы стандартизации и контроля качества лекарственных средств»)

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Паршина, Наталья Анатольевна

выводы

1. Разработана методика количественного определения гемцитабина в ЛП и плазме крови. В результате экспериментальных исследований был подобран оптимальный вариант пробоподготовки и условия хроматографирования: изократическая система для реализации разделения в обращенно-фазовом варианте ВЭЖХ. Нижний предел количественного определения для плазмы крови составил 1 мкг/мл, линейная зависимость сохранялась в интервале (1-^15) мкг/мл (г=0,9975). Проведена оценка качества двух серий препарата, выявлено соответствие НД по показателям «подлинность», «количественное определение» и «испытания на чистоту» методами ВЭЖХ и ИК-спектроскопии.

2. На основании результатов ТЛМ гемцитабина у больных РПЖ, получающих препарат в форме инфузий с фиксированной скоростью введения, было установлено, что оптимальная концентрация гемцитабина в плазме для проявления его терапевтического эффекта (6—9 мкг/мл) достигается в среднем через 30 мин от начала 120-минутного введения и остается на данном уровне во время инфузии и в течение 30 мин после её завершения. Для группы пациентов, получавших гемцитабин в форме стандартной инфузии, такой закономерности не выявлено. Определены фармакокинетические характеристики гемцитабина для пролонгированных инфузий: Стах=Т0,7±1,8 мкг/мл, период полувыведения 11/2=16,9 мин, константа элиминации к=(0,041±0,007)мин~1.

3. Установлено, что модифицированный режим введения гемцитабина в терапии РПЖ характеризуется умеренным профилем токсичности, основным проявлением которой явилась миелосупрессия: 40% пациентов после применения гемцитабина возникла тромбоцитопения, анемия наблюдалась у 10% пациентов, а лейкопения - у 48% пациентов.

4. В результате ТЛМ гемцитабина у детей с лимф омой Ходжкина, получавших препарат в составе комплексной химиотерапии, было показано, что во время инфузии и в течение 10 мин после ее завершения концентрация пролекарства достигает оптимальных значений (6 мкг/мл). На основании полученных результатов были рассчитаны фармакокинетические параметры для данного типа инфузий гемцитабина: Стах= (6,12±1,82) мкг/мл, константа элиминации к = (0,103±0,032) мин-1, ti/2=6,71 мин.

5. На основании биокинетического моделирования показано, что скорость восстановления показателей гематологической токсичности до нормы значительно ниже по сравнению с маркерами поражения печени (к восстановления лейкоцитов составила 0,03-0,045, а для AJIT и ACT (0,070,08) сут-1 и (0,06-0,07) сут-1 соответственно).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Паршина, Наталья Анатольевна, 2009 год

1. Арзамасцев А. П., Садчикова Н. П., Харитонов Ю. Я. Валидация аналитических методов // Фармация. 2006. - № 4. - С. 23-27.

2. Мамедов Ф. Ф., Нариманов М. Н, Базин И. С. и др. Оценка токсичности противоопухолевого препарата гемцитабина (GEM) // Современная онкология. 2001. - Т. 3. - № 4. - С. 18-22.

3. Савватеев А. М, Белобородов В. Л., Тюкавкина Н. А. и др. Валидность методики определения компонентов препарата "Саливертин" // Фармация. 2005. -№ 3. - С. 11-14.

4. Владимиров Ю. А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН — 1998. — № 7. С. 43-51.

5. Бауэр Г., Энгельгард X., Хеншен А. и др. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии: Пер. с англ. /Под ред. А. Хеншен. М.: Мир, 1988.-688 с.

6. Гемцитабин в клинической практике/ Под ред. Бычкова М.Б. М.: Артинфо Паблишинг, 2002. - 192 с. Варфоломеев С.Д., Гуревич К.Г. Биокинетика: Практический курс. - М.: ФАИР-ПРЕСС, 1999.-720 с.

7. Государственная фармакопея СССР XI: Выпуски 1,2: репринтное издание. -М.: Тимотек. 1998.

8. Дорофеев В. JL, Арзамасцев А. П., Садчикова Н. П. Проект общей фармакопейной статьи "Высокоэффективная жидкостная хроматография" // Вестник ВГУ. 2004. - №1. - С. 166-172.

9. Ю.Дурнов JI. А., Голдобенко Г. В., Сигал Ст. Э. Настольная книга детского онколога. М.: Параллель, 1994. - 176 с.

10. П.Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньшикова Е.Б. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001. - 343 с.

11. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимическимисследованиям и лабораторной диагностике. Минск: «Беларусь», -2004. - 920 с.

12. Клиническая фармакология по Гудману и Гилману/ Под ред. А. Гилмана. М.: Практика, 2006. - 1648 с.

13. Кржечковская Н. М. Фармакодинамика, фармакокинетика с основами общей фармакологии Спб.: Питер, 2004. - 187 с.

14. Комаров Ф. И. , Коровкин Б. Ф., Меньшиков В. В. Лабораторные методы исследования в клинике. М.: МЕДпресс-информ, 2001. - 216 с.

15. Кубышкин В.А., Вишневский В.А. Рак поджелудочной железы. М:. Медпрактика-М, 2003. - 296 с.

16. Давлетбаева Л.Р. Валидация аналитических методов исследования // Медицинские иммунобиологические препараты в XXI веке: разработка, производство и применение: Мат. Всерос. Конф. Уфа, 2005. - С. 34-47.

17. Лекарственные препараты в России: справочник VIDAL . М.: АстраФармСервис, 2006. - 1488 с.

18. Лоуренс Д. Р., Бенитт П.Н. Клиническая фармакология. М.: «Медицина», 1991. - 700 с.

19. Отто М. Современные методы аналитической химии. М.: Техносфера, 2008. - 544 с.

20. Плетенева Т. В., Степанова Н. С., Байкова В. Н., Кошечкин К. А. Биокинетические параметры показателей токсичности высоких доз метотрексата // Вестник Российского университета дружбы народов. -2008. -№3.- С. 10-14.

21. Переводчикова Н. И. Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний М.: Практическая медицина, 2005. - 704 с.

22. Переводчикова Н.И. Гемцитабин (Гемзар) и его место в современной противоопухолевой химиотерапии // Русский медицинский журнал. -2007. Т. 15. - № 25. -С. 54-58.

23. Садек П. Растворители для ВЭЖХ/ Пер. с англ. A.A. Горбатенко и Е.И.

24. Ревиной. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2006. - 704 с.

25. Саркисов Д. С., Саввина Т. В. Патоморфология заболеваний поджелудочной железы. М.: Медицина, 1995. - 317 с.

26. Спецификация на препарат «Гемзар» лиофилизированный порошок. № 42 -4963-95.

27. Стыскин И. Л., Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография М.: 1986. - 284 с.

28. Ткачук В.А. Клиническая биохимия. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. - 360 с.

29. Хенке X. Жидкостная хроматография. М.: Техносфера, 2009. - 264 с.

30. Шмит О. Спектроскопия для химико и биологов

31. Шатц В. Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии. Рига: Зинатне, 1988. - 220 с.

32. Эпштейн Н.А Оценка пригодности (Валидация) ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. -2004.-№4.-С. 40-56.

33. Aapro М., Martin С., Hatty S. Gemcitabine — a safety review // Anticancer Drugs. 1998. -Vol. 9.- №3.- P. 191-201.

34. Achiwa H., Oguri Т., Sato S. et al. Determinants of sensitivity and resistance to gemcitabine: The roles of human equilibrative nucleoside transporter 1 and deoxycytidine kinase // Cancer Science. 2004. - Vol. 95. - P. 753-757.

35. Grunewald R., Kantaijian H., Du M. et al. Gemcitabine in leukemia: a phase I clinical, plasma, and cellular pharmacology study // Journal of Clinical Oncology. 1992. - Vol. 10(3). - P. 406-413.

36. Plunkett W., Liliemark J.O., Estey E. et al. Saturation of ara-CTP accumulation during high-dose ara-C therapy: Pharmacologic rationale for intermediate-dose ara-C. // Semin Oncol. 1989. - Vol. 14(suppl 1). - P. 159 -166.

37. Shewach D.S., Reynolds K.K., Hertel L. Nucleotide specificity of human deoxycytidine kinase. // Mol Pharmacol. 1992. - Vol. 42. - P. 518 -524.

38. Shwarte M., Wagner K. et al. Radiation recall pneumonitis induced by gemcitabine. // Strahlenther Onkol. 2007. - Vol. 183 (4). - P. 215-217.

39. Abbruzzese J. L. New applications of Gemcitabine and future directions in the management of pancreatic cancer. // CANCER Supplement. Vol. 95(4). -202.-P. 942-949.

40. Abbruzzese J. Phase I stage with nucleoside analog gemcitabine. // Semin Oncol. -1998. Vol. 23(10). - P. 25-31.

41. Adjei A., Erlichman C., Sloan J. et al. Phase I and pharmacologic study of sequences of Gemcitabine and the Multitargeted Antifolate Agent in patients with advanced solid tumors. // Journal of Clinical Oncology. 2000. - Vol. 18. -P. 1748-1757.

42. Alberts S. R. Gemcitabine, 5-Fluorouracil, and Leucovorin in advanced biliary tract and gallbladder carcinoma a North Central Cancer Treatment Group phase IItrial.//CANCER.-2005.-Vol. 103(1).-P. 112-119.

43. Alberts S. R., Townley P. M., Goldberg R. M. et al. Gemcitabine and oxaliplatin for metastatic pancreatic adenocarcinoma: a North Central Cancer Treatment Group phase II study. // Annals of Oncology. 2003. - Vol. 14. - P. 580-585.

44. Anderson P., Wiseman G., Erlandson L., et al. Gemcitabine radiosensitization after high-dose Samarium for osteoblastic osteosarcoma. // Clin Cancer Res. -2005.-Vol. 11(19).-P. 6895-6904.

45. Bengala C., Guarneri V., Giovannetti E. et al. Prolonged fixed dose rate infusion of gemcitabine with autologous haemopoietic support in advanced pancreatic adenocarcinoma. // Br J Cancer. 2005. - Vol. 93. - P. 35-40.

46. Bergman A.M., Pinedo HM, Peters GJ. Determinants of resistance to 2,2-difluorodeoxycytidine (gemcitabine). // Drug Resist Update. 2002. - Vol. 5. -P. 19-33.

47. Berlin J.D., Adak S., Vaughn D.J. et al. A phase II study of gemcitabine and 5-fluorouracil in metastatic pancreatic cancer: An Eastern Cooperative Oncology Group study (E3296). // Oncology. 2000. - Vol. 58. - P. 215-218.

48. Bhargava P., Marshall J.L., Fried, K. et al. Phase I and pharmacokinetic study of two sequences of gemcitabine and docetaxel administered weekly to patients with advanced cancer. // Cancer Chemother Pharmacol. 2001. - Vol. 48. - P. 95-103.

49. Bouffard D.Y., Laliberte J., Momparler R.L. Kinetic studies on 2,2-difluorodeoxycytidine (Gemcitabine) with purified human deoxycytidine kinase and cytidine deaminase. // Biochem Pharmacol. 1993. - Vol. 45. - P. 1857-1861.

50. Brand R., Capadano M., Tempero M. A phase I trial of weekly gemcitabine administered as a prolonged infusion in patients with pancreatic cancer and other solid tumors. // Invest New Drugs. 1997. - Vol. 15. - P. 331-341.

51. Buesa J. Phase I clinical trial of fixed-dose rate infusional Gemcitabine and Dacarbazine in the treatment of advanced soft tissue sarcoma, with assessment of Gemcitabine Triphosphate accumulation. // CANCER. 2004. - Vol. 101(10).-P. 2262-2269.

52. Cattel L., Airoldi M., Delprino L et al. Pharmacokinetic evaluation of gemcitabine and 2',2'-difluorodeoxycytidine-5'-triphosphate after prolonged infusion in patients affected by different solid tumors. // Ann Oncol. 2006. -Vol. 17.-P. 142-147.

53. Clark J., Ryan D., Kulke M. et al. A Phase II Trial of Gemcitabine in Patients with Advanced Hepatocellular Carcinoma // CANCER . 2002. - Vol. 94. - P. 124-128.

54. Coeman D., Verbeken E., Nackaerts K. et al. //Ann Oncol. 2000. - Vol. 11. -P. 1503-1508.

55. Delalodgi S., Lombart A. Gemcitabine in patients with solid tumors and renal impairment: a pharmacokinetic phase I study. // Am J Clin Oncol. 2004. -Vol. 27(3).-P. 289-293.

56. Dobbie M., Hofer S., Oberholzer M. et al. Veno-occlusive disease of the liver induced by gemcitabine. // Annals of Oncology. 1998. - Vol. 9. - P. 681686.

57. Davidson J.D., Ma L., Flagella M. et al. An increase in the expression of ribonucleotide reductase large subunit 1 is associated with gemcitabineresistance in non-small cell lung cancer cell lines. // Cancer Res. 2004. - Vol. 64.-P. 3761-3766.

58. Farber S., Diamond L.K., Mercer R.D. et al. Temporary remissions in acute leukemia in children produced by folic acid antagonist, 4-Aminopteroyl-glutamic acid (Aminopterin). // N Engl J Med . 1949. - Vol. 238 (787). P. 787-793.

59. Feliu J., Mel J.R., Camps C. et al. Phase II study of a fixed dose-rate infusion of gemcitabine associated with uracil/tegafur in advanced carcinoma of the pancreas. //Annals of Oncology. 2002. - Vol. 13. - P. 1756-1766.

60. Ferrari D., Carbone C., Codeca C. et al. Gemcitabine and atrial fibrillation: a rare manifestation of chemotherapy toxity. // Anticancer Drugs. 2006. - vol. 17(3).-P. 359-361.

61. Fogli S., Danesil R., et al. Gemcitabine, epirubicin and paclitaxel: pharmacokinetic and pharmacodynamic interactions in advanced breast cancer. // Annals of Oncology. 2002. - Vol. 13. - P. 919-927.

62. Fuchs C., Clark J., Ryan D. et al. A Phase II trial of Gemcitabine in patients with advanced hepatocellular carcinoma. // CANCER. 2002. - Vol. 94(12). -P. 3188-3195.

63. Gardenes H., DeWitt J., et al. Locally advanced pancreatic cancer. // The Oncologist.-2006.-Vol. 11.-P. 612-623.

64. Gilbert J., Salavaggione O., et al. Gemcitabine pharmacogenomics: cytidine deaminase and deoxycytidylate deaminase gene resequencing and functional genomics. // Clin Cancer Res. 2006. - Vol. 12(6). - P. 1794-1801.

65. Goel S., Bulgaru A., Höchster H. et al. Phase I clinical study of infusional 5-fluorouracil with oxaliplatin and gemcitabine (FOG regimen) in patients with solid tumors. // Annals of Oncology. 2003. Vol. 14. - P. 1682-1687.

66. Grunewald R., Abbruzzese J.L., Tarassoff P., Plunkett W. Saturation of 2',2-difluorodeoxycytidine 5'-triphosphate accumulation by mononuclear cells during a phase I trial of gemcitabine. // Cancer Chemother Pharmacol. 1991. - Vol. 27. - P. 258-262.

67. Grunewald R., Kantarjian H., Keating M. et al. Pharmacologically directed design of the dose rate and schedule of 2',2'-Difluorodeoxycytidine (Gemcitabine) administration in leukemia. Cancer research. 1990. V.50. - P. 6823-6826.

68. Heinemann V., Estey E., Keating M.J. et al. Patient-specific dose rate for leukemia. J Clin Oncol 1989;7:622- 628.

69. Heinemann V., Hertel L.W., Grindey G.B., Plunkett W. Comparison of the cellular pharmacokinetics and toxicity of 2',2'-difluorodeoxycytidine and 1-beta-D-arabinofuranosylcytosine. // Cancer Res. 1988. - Vol. 48. - P. 40244031.

70. Heinemann V., Quietzsch D., Gieseler F. et al. A phase III trial comparing gemcitabine plus cisplatin vs. gemcitabine alone in advanced pancreatic carcinoma. // Proc Am Soc Clin Oncol. 2003. - Vol. 22. - P. 250-255.

71. Heinemann V., Xu Y., Chybb S. et al. Cellular elimination of 2',2'-difluorodeoxycytidine 5-triphosphate: a mechanism of self-potentiation. // Cancer Res. 1992.-V. 52(3).-P. 1681-1686.

72. Huang P., Chybb S., Hertel L.W., Grindey G.B., Plunkett W. Action of 2',2'-difluorodeoxycytidine on DNA synthesis. // Cancer Res. 1991. - Vol. 51. - P. 6110-6117.

73. Jacobs A.D. Gemcitabine-based therapy in pancreas cancer. // CANCER Supplement. 2000. - Vol. 95(4). - P. 924-931.

74. Karnitz L., Flatten K., Wagner J. et al. Gemcitabine-induced activation of checkpoint signaling pathways that affect tumor cell survival. // Mol Pharmacol. 2005. - Vol. 68(6). - P. 1636-1644.

75. Kaye S.B. Gemcitabine: Current status of phase I and II trials. // Journal of Clinical Oncology. 1994. - Vol. 12. - P. 1527-1531.

76. Keith B., Grean J. Measurement of anticancer agent gemcitabine in plasma by HPLC // Journal of Chromatography B. 2003. - Vol. 785. - P. 65-72.

77. Kindler H. L. The Pemetrexed/Gemcitabine combination in pancreatic cancer. // CANCER Supplement. 2002. - Vol. 95(4). - P. 930-937.

78. Knox J. J., Hedley D., et al. Gemcitabine concurrent with continuous infusional 5-fluorouracil in advanced biliary cancers: a review of the Princess Margaret Hospital experience. // Annals of Oncology. 2004. - Vol. 15. - P. 770-774.

79. Ko A., Dito E., Schillinger B., Vehook A. et al. Phase II study of fixed dose rate Gemcitabine with Cisplatin for metastatic adenocarcinoma of the pancreas. // Journal of Clinical oncology. 2006. - Vol. 24(3). - P. 379-385.

80. Kroep J.R., Giaccone G., Voorn D.A. et al. Gemcitabine and paclitaxel: pharmacokinetic and pharmacodynamic interactions in patients with non-small-cell lung cancer. // Journal of Clinical Oncology. 1999. - Vol. 17(7). -P. 2190-2197.

81. Lange S., van der Born K. et al. No evidence of gemcitabine accumulation during weekly administration. // Eur J Clin Pharmacol. 2005 - Vol. 61 (11). -P. 843-9.

82. Li N.M., Zeng S., Ma S.L. Determination of gemcitabine and its metabolite in human plasma using high-pressure liquid chromatography coupled with a diode array detector. // Acta Pharmacol Sin. 2004. - Vol. 25(12). - P. 15841589.

83. Mackey J.R., Mani R.S., Seiner M. et al. Functional nucleoside transporters are required for gemcitabine influx and manifestation of toxicity in cancer cell lines. // Cancer Res. 1998. - Vol. 58. - P.4349-4357.

84. McGinn C., Lawrence T., et al. On the development of Gemcitabine-based chemoradiotherapy regimens in pancreatic cancer. // CANCER Supplement. -2001.-Vol. 95(4).-P. 934-941.

85. Mercier C., Raynal C. et al. Toxic death case in a patient undergoing gemcitabine-based chemotherapy in relation with cytidine deaminase downregulation // Pharmacogenet Genomics. 2007. - Vol. 17 (10). - P. 841—

86. Moore M., Andersen J., Burris H. et.al. A randomized trial of gemcitabine versus 5-FU as first line therapy in advanced pancreatic cancer. // Proc. ASCO.- 1999.- ab.473.

87. Moufarij M., Phillips D., Cullinane C. Gemcitabine potentates cisplatin cytotoxicity and inhibits repair of cisplatin-DNA damage in ovarian cancer cell lines. // Mol Pharmacol. 2003. - Vol. 63. - P. 862-869.

88. Nelson R., Tarassoff P. Dyspnoea with gemcitabine is disease related, transient and rarely severe.// Eur J Cancer. 1996. - Vol. 31 (Suppl 5). - P. 197-198.

89. Noble S, Goa KL. Gemcitabine. A review of its pharmacology and clinical potential in non-small cell lung cancer and pancreatic cancer. // Drugs. 1997.- Vol. 54. P. 447-472.

90. Nöda Y., Anzai K., Mori A. et al. Hydroxyl and superoxide anion radical scavenging activities of natural source antioxidants using the computerized JES-FR30 ESR spectrometer system.// Biochem Mol Biol Int. 1997.-Vol. 42(1).-P. 35-44.

91. Nomura M., Inoue Y. et al. A case of drug-induced interstitial pneumonitis after gemcitabine treatment for advanced pancreatic cancer // Respir Med. -2006. Vol. 33 (1). - P. 123-127.

92. Oettle H., Arning M., Pelzer U. et al. A phase II trial of gemcitabine in combination with 5-fluorouracil (24-hour) and folinic acid in patients with chemonaive advanced pancreatic cancer. // Annals of Oncology. 2001. - Vol. 11.-P. 1267-1272.

93. Okada S., Ueno H., Okusaka T. et al. Phase I trial of gemcitabine in patients with advanced pancreatic cancer. // Journal of Clinical Oncology. 2001. -Vol. 31.-P. 7-12.

94. Olson K.R. (Ed.); Poisoning & Drug Overdose. 5th ed. Lange Medical Books/McGraw-Hill. New York, N.Y. 2007.

95. Patnaik A., Eckhardt S., Tolcher A. et al. A Phase I, pharmacokinetic, and biological study of Tipifarnib in combination with Gemcitabine in patients with advanced malignancies. // Clinical Cancer Research. 2003. - Vol. 9. - P. 4761-4771.

96. Pavlakis N, Bell D. et al. Fatal Pulmonary Toxicity and Gemcitabine // Cancer. 1997. - Vol. 80 (2). - P. 286-291.

97. Perry M. C. Chemotherapeutic agents and hepatotoxity. // Semin oncol. -1997.-Vol. 19.-P. 551-556.

98. Philip A. Philip, et al. Phase II study of Gemcitabine and Cisplatin in the treatment of patients with advanced pancreatic carcinoma. // CANCER. -2001.-Vol. 92(3).-P. 570-577.

99. Philip Agop Philip. Gemcitabine and Platinum Combinations in pancreatic cancer. // CANCER Supplement. 2002. - Vol. 95(4). P. 910-917.

100. Philip A., Zalupski M.M., Heilbrun L.K. et al. Phase II study of gemcitabine and cisplatin in the treatment of patients with advanced pancreatic carcinoma. // Cancer. 2001. - Vol. 92. - P. 569-577.

101. Pourquier P., Hertel L., Gmeiner W. et al. Gemcitabine (2',2'-Difluoro-2'-Deoxycytidine), an antimetabolite that poisons topoisomerase. // Clin Cancer Res. 2002. - Vol. 8. - P. 2499-2504.

102. Raraty M., Magee C., Ghaneh P. et al. New techniques and agents in the adjuvant therapy of pancreatic cancer. // Acta Oncologica. 2002. - Vol. 41(7):.-P. 582-595.

103. Reid J.M., Qu W., Safgren S.L. et al. Phase I trial and pharmacokinetics of gemcitabine in children with advanced solid tumors. // Journal of Clinical Oncology. 2004. - Vol. 22. - P. 2445-2451.

104. Rini B, Weinberg V, Small J. A Phase I trial of fixed dose rate Gemcitabine and Capecitabine in metastatic renal cell carcinoma. CANCER 2005; 103(3): 553-560

105. Robinson K, Lambiase L, Li J, Monteiro C, Schiff M. Fatal cholestatic liver failure associated with gemcitabine therapy. Dig Dis Sei 2003; 48:1804-8.

106. Ryan D, Kulke M, Fuchs C, Grossbard M, Grossman S, Morgan J, Earle C, et al. A Phase II study of Gemcitabine and Docetaxel in patients with metastatic pancreatic carcinoma. CANCER 94(1):98-105, 2002

107. Saif MW Pancreatic Cancer Highlights from the 42nd Annual Meeting of the American Society of Clinical Oncology// J Pancreas 2006; 7(4)337-348

108. Sandler B., Kindler H. L., Einhorn L. H., Mitchell E., Masters G., et al. Phase II trial of gemcitabine in patients with previously untreated metastatic cancer of the esophagus or gastroesophageal junction. Annals of Oncology 11: 11611164, 1999;

109. Sauer-Heilborn A., Kath R., Schneider C.P. and et all Severe nonhaematological toxicity after treatment with gemcitabine. J Cancer Res Clin Oncol.- 1999.- 125 (11).- pp. 637-640

110. Schmid P, Schweigert M, Beinert T et al. Prolonged infusion of gemcitabine in advanced solid tumors: A phase-I-study. Invest New Drugs 2005;23: 139— 146.

111. Spratlin J, Sangha R, Glubrecht D et al. The absence of human equilibrative nucleoside transporter 1 is associated with reduced survival in patients with gemcitabine-treated pancreas adenocarcinoma. Clin Cancer Res 2004; 10: 6956-6961

112. Steinherz P., Seibel N., Ames M et al. Phase I study of gemcitabine (difluorodeoxycytidine) in children with relapsed or refractory leukemia (CCG-0955): a report from the Children's Cancer Group.//Leuk Lymphoma. 2002 ;43(10): 1945-50

113. Storniolo A.M., Enas N.H., Brown C.A., Schilsky R. An investigational new drug program for patients with gemcitabine: Results for over 3000 patients with pancreatic carcinoma. Cancer. 1997; 85:1261-1268.

114. Sun W, Stevenson J, Gallagher M, et al. A Phase I Trial of Topotecan and Gemcitabine administered weekly for 3 consecutive weeks to patients with advanced tumors. CANCER 92(2): 416-423, 2001

115. Tempero M., Plunkett W., Ruiz van Harpen V. et al. Randomized phase II comparison of dose-intense gemcitabine: thirty-minute infusion and fixed dose rate infusion in patients with pancreatic adenocarcinoma. J Clin Oncol. 2003 Sep 15;21(18):3402-8

116. The United States Pharmacopeia, 29th revision. 2003.

117. Touroutoglou N, Gravel D, Raber MN, Plunkett W, Abbruzzese JL. Clinical results of a pharmacodynamically-based strategy for higher dosing of gemcitabine in patients with solid tumors. Ann Oncol 1998;9:1003-8.

118. Veltkamp S, Beijnen J , Schellens J. Prolonged Versus Standard Gemcitabine Infusion: Translation of Molecular Pharmacology to New Treatment Strategy// The Oncologist 2008;13:261-276

119. Walling A., Freelove R. Pancreatic cancer: diagnosis and management//American Family Physician. -Vol. 73. N3. -2005. - 485-92.

120. Yilmaz K, Kadiogli M. Investigation of the pharmacokinetics of gemcitabineand 2',2'-difluorodeoxyuridine in human plasma by liquid chromatography.Anal Biochem. 2004 Sep 15;332(2):234-7.

121. Zwitter M, Kovac V, Smrdel U et al. Phase I-II trial of low-dose gemcitabine in prolonged infusion and cisplatin for advanced non-small cell lung cancer. Anticancer Drugs 2005;16:1129-1134