Зависимость параметров Т-лимфоцитарного звена иммунной системы у ВИЧ-инфицированных пациентов от уровня Т-хелперов и вирусной нагрузки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат медицинских наук Шестакова, Елена Владимировна

• Шестакова, Елена Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Шестакова, Елена Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ПРИНЯТЫХ В ДИССЕРТАЦИИ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Некоторые аспекты взаимодействия ВИЧ с иммунной системой человека (обзор литературы)

1.1 Характеристика ВИЧ

1.2 Патогенез ВИЧ-инфекции

1.3. Взаимодействие ВИЧ с клетками иммунной системы

1.4. Роль у5-Т-клеток

1.5. Проточная цитометрия при исследовании иммунного статуса у ВИЧ-инфицированных лиц

1.6. Определение вирусной нагрузки у ВИЧ-инфицированных лиц методом полимеразной цепной реакции с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени

Real-time PCR)

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

2.1. Иммунологические методы исследования

2.2. Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени

2.3. Статистические методы исследования

ГЛАВА 3. Сравнительный анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц в зависимости от уровня Т-хелперов (CD3+4+)

3.1. Анализ показателей лейкограммы у ВИЧ-инфицированных лиц в зависимости от уровня CD3+4+ л имфоцитов

3.2. Анализ показателей иммунофенотипирования лимфоцитов и уровня вирусной нагрузки у ВИЧ-инфицированных лиц в зависимости от уровня CD3+4+ лимфоцитов

ГЛАВА 4. Сравнительный анализ показателей иммунной системы у

ВИЧ-инфицированных лиц в зависимости от вирусной нагрузки

4.1. Анализ показателей лейкограммы у ВИЧ-инфицированных лиц в зависимости от уровня вирусной нагрузки

4.2. Анализ показателей иммунофенотипирования лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц в зависимости от уровня вирусной нагрузки

ГЛАВА 5. Анализ взаимодействий между показателями Т-лимфоцитарного звена иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц

5.1. Анализ взаимодействий между показателями

Т-лимфоцитарного звена иммунной системы среди всех обследованных ВИЧ-инфицированных лиц

5.2. Анализ взаимодействий между показателями

Т-лимфоцитарного звена иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц в зависимости от уровня вирусной нагрузки

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Зависимость параметров Т-лимфоцитарного звена иммунной системы у ВИЧ-инфицированных пациентов от уровня Т-хелперов и вирусной нагрузки»

Актуальность проблемы у5-Т-лимфоциты впервые были описаны Brenner М. et al. (1986) как гетерогенная субпопуляция Т-клеток с Т-клеточным рецептором, состоящим из у- и S-цепей (ySTcR) (Kuziel W.A. et al., 1987; Bucy P., et al. 1988; Hein W.R., Mackay C.R., 1991). У людей и многих животных большинство Т-клеток экспрессируют Т-клеточный рецептор, состоящий из а- и Р-цепей, и лишь небольшое количество Т-клеток несет Т-клеточный рецептор с у- и 8-цепями. В отличие от ар-Т-клеток, у8-Т-клетки напрямую распознают белковые и небелковые фосфолиганды без участия главного комплекса гистосовместимости. у8-Т-клетки участвуют в антимикробном иммунитете и обладают эффекторными функциями.

Роль yS-T-клеток в иммунных процессах при различных заболеваниях и их взаимодействие с другими клетками организма до сих пор остаются до конца невыясненными. Но уже накопилось достаточно информации, которая доказывает необходимость существования подобной популяции клеток (Caccamo N., 2006; Girardi М., 2006; Kastuta М., 2006). Количественное содержание у8-Т-клеток в организме невелико и варьирует в зависимости от локализации. у8-Т-клетки редко обнаруживаются в селезенке, пейеровых бляшках и паренхиме лимфатических узлов и широко распространены среди клеток периферической крови и афферентных и эфферентных лимфатических сосудах. у8-Т-клетки являются главной популяцией Т-клеток в эпителии нелимфоидных тканей, включая кожу, кишечник, легкие, язык и органы репродуктивной системы. Их популяция в тимусе и периферической крови взрослого человека составляет всего 1—5% или 5—10% от всех Т-лимфоцитов, а 90—95% Т-клеток крови представляют собой ар-Тклетки (Itohara S. et al., 1990). Известно, что уб-Т-лимфоциты вовлечены в механизмы местной иммунной защиты при ВИЧ- и цитомегаловирусной (ЦМВ) инфекции и при определенных бактериальных инфекциях, включая Лайм-боррелиоз (Dechanet J. et al., 1999). Так же оказалось, что у5-Т-клетки оказывают цитотоксическое действие с участием механизмов апоптоза (Pawelec G. et al., 1989; Boullier S. et al. 1997). Предполагается, что цитотоксическая активность у8-Т-клеток может быть стимулирована внутриклеточными патогенами, некоторыми бактериями и простейшими, включая М. tuberculosis, У. enterocolitica, Т. gondii, а также некоторыми вирусами (вирус простого герпеса, вирус Эпштейна—Барр, вирус иммунодефицита человека).

Существенную роль yS-T-клетки играют в противоинфекционном иммунитете. Высказано предположение, что они создают первую линию защиты в очаге бактериальной инфекции, сдерживая ее распространение до развития иммунного ответа, основанного на распознавании антигена сф-Т-клеток в комплексе с молекулами HLA, так как у5-Т-клетки распознают антигены без предварительного процессирования и участия молекул HLA комплекса, в отличие от оф-Т-лимфоцитов (Kozbor D. et al., 1989; Hayday A.C., 2000). Дальнейшие исследования выявили, что у8-Т-клетки высокочувствительны к фосфоантигенам (пирофосфатам и фосфомоноэстерам, конъюгированным нуклеотидным остаткам), которые могут продуцировать микобактерии, грамотрицательные, грамположительные кокки, токсоплазма и некоторые растения (Schoel В. et al., 1994; Fournie J.J., Bonneville M., 1996; Poquet Y. et al., 1998). Кроме того, у5-Т-клетки могут распознавать поверхностные антигены на определенных опухолевых клетках, таких как клетки лимфомы Беркитта.

Приведенные выше факты свидетельствуют в пользу того, что для более полной характеристики Т-клеток пациента анализ следует проводить не только по таким специфическим и безусловно важным при ВИЧ-инфекции маркерам как CD3+, CD3+4+ и CD3+8+, но и по наличию субпопуляций сф-Т-клеток и у5-Т-клеток. Важность определения последних очевидна при ВИЧ-инфекции, сопровождающейся длительной персистенцией антигена в организме на фоне депрессии Т-клеточного звена иммунной системы, для уточнения стадии заболевания, контроля эффективности проводимой антиретровирусной терапии, прогноза развития и течения заболевания.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования явилось изучение характера изменений как зависимого, так и независимого от главного комплекса гистосовместимости (МНС) Т-лимфоцитарного иммунного ответа у ВИЧ-инфицированных лиц в зависимости от уровня содержания в крови Т-хелперов (CD3+4+) и вирусной нагрузки (ВН) на организм.

Для достижения этой цели нами были поставлены следующие задачи:

1. Изучить изменения состояния Т-лимфоцитарного звена иммунитета у больных ВИЧ-инфекцией в зависимости от уровня содержания в крови Т-хелперов и вирусной нагрузки.

2. Оценить реакцию субпопуляций Т-лимфоцитов, несущих TcR а(3 и у8, на изменение вирусной нагрузки и уровня Т-хелперов.

3. Оценить взаимосвязь между основными показателями Т-лимфоцитарного звена иммунитета в зависимости от уровня антигенной нагрузки на организм.

Положения, выносимые на защиту

1. У ВИЧ-инфицированных лиц при различной степени вирусемии выявляются изменения параметров лимфоцитов, более выраженные у пациентов с высокой вирусной нагрузкой (более 100000 копий/мл), заключающиеся в падении общего числа Т-лимфоцитов, внутри популяции которых наблюдается снижение относительного уровня Т-хелперов и повышение относительного числа цитотоксических Т-лимфоцитов, сопровождающееся снижением соотношения CD3+4+/CD3+8+, а также падение относительного и абсолютного числа клеток двойной негативной субпопуляции Т-лимфоцитов.

2. У ВИЧ-инфицированных пациентов при снижении в крови уровня Т-хелперов наблюдается снижение абсолютного уровня цитотоксических Т-лимфоцитов и абсолютного количества двойной позитивной субпопуляции Т-лимфоцитов.

3. У ВИЧ-инфицированных лиц при снижении содержания в крови Т-хелперов и повышении вирусной нагрузки наблюдается падение абсолютных чисел Т-лимфоцитов, несущих как оф-, так и уб-TcR.

4. У ВИЧ-инфицированных пациентов формируются положительные корреляционные взаимосвязи между абсолютным количеством уб-Т-лимфоцитов и абсолютными уровнями Т-лимфоцитов, цитотоксических лимфоцитов и популяции двойных негативных Т-лимфоцитов. При высокой вирусной нагрузке (более 100000 копий/мл) у ВИЧ-инфицированных лиц формируется обратная корреляционная связь абсолютного уровня уб-Т-лимфоцитов с уровнем виремии.

Научная новизна

Впервые изучено состояние Т-лимфоцитарного звена иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с определением характера изменений внутри субпопуляции Т-лимфоцитов в зависимости от наличия сф- или y8-TcR. Определен характер изменений среди двойных негативных и позитивных субпопуляций Т-лимфоцитов в зависимости от уровня антигенной (вирусной) нагрузки на организм. Это позволило выяснить особенности реакции лимфоцитов на массированную антигенную атаку на организм и выявить значимость этих нарушений в формировании данной патологии. Помимо этого, изучено изменение данных показателей в зависимости от уровня содержания в крови ВИЧI инфицированных Т-хелперов, как основных клеток-мишеней вируса иммунодефицита человека и важного критерия прогрессирования заболевания.

Впервые показано, что в ответ на рост антигенной нагрузки не происходит пролиферативной активности уб-Т-лимфоцитов, а, напротив, наблюдается их угнетение наряду с другими субпопуляциями Т-лимфоцитов, что ведет к истощению иммунной реактивности организма и, соответственно, прогрессированию заболевания.

Теоретическая и практическая значимость

Теоретическая значимость результатов исследования состоит в расширении знаний о характере иммунологических нарушений внутри Т-лимфоцитарного звена иммунитета у ВИЧ-инфицированных лиц в зависимости от уровня Т-хелперов и ВН.

Выявленные нарушения внутри популяции Т-лимфоцитов, как основных клеток-мишеней при ВИЧ-инфекции, и оценка их патогенетического значения, позволят в дальнейшем более четко прогнозировать прогрессирование заболевания и оценивать эффективность проводимой антиретровирусной терапии в зависимости от уровня содержания Т-хелперов в крови, а также от антигенной нагрузки, от количества у5-Т клеток, двойной негативной и двойной позитивной субпопуляций Т-лимфоцитов как свидетелей дезорганизации работы иммунной системы при ВИЧ-инфекции.

Апробация работы

Результаты проведенных исследований доложены и обсуждены на Всероссийском научном Форуме имени академика В.И. Иоффе Дни иммунологии в Санкт-Петербурге «Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии» (г. Санкт-Петербург, 2008), I научно-практической конференции «Оптимизация высшего медицинского и фармацевтического образования: менеджмент качества и инноваций» (г. Челябинск, 2010), Национальной конференции «Аллергология и клиническая иммунология — практическому здравоохранению» (г. Москва, 2010), II Ежегодном Всероссийском конгрессе по инфекционным болезням (г. Москва, 2010).

Апробация диссертации была проведена на совместном заседании НИИ иммунологии, кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии, самостоятельного курса клинической лабораторной диагностики, кафедры иммунологии и аллергологии, ДНИЛ ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, из них 2 в научных журналах и изданиях, определенных ВАК.

Объем и структура диссертации

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Шестакова, Елена Владимировна

ВЫВОДЫ

1. У ВИЧ-инфицированных лиц формируется дисбаланс клеток Т-звена иммунной системы с истощением их резерва, что проявляется изменением параметров Т-лимфоцитов, более выраженным у лиц с высокой вирусной нагрузкой (более 100000 копий/мл), заключающихся в падении общего числа Т-лимфоцитов, внутри популяции которых наблюдается снижение относительного уровня Т-хелперов и повышение относительного числа цитотоксических Т-лимфоцитов, снижение соотношения CD3+4+/CD3+8+, а также падение относительного и абсолютного числа клеток двойной негативной субпопуляции Т-лимфоцитов.

2. На поздних стадиях ВИЧ-инфекции (при уровне Т-хелперов ниже 500 клеток/мкл) не происходит достаточной наработки Т-цитотоксических клеток, что выражается в снижении в крови абсолютного уровня цитотоксических Т-лимфоцитов при падении уровня Т-хелперов.

3. У ВИЧ-инфицированных лиц в ответ на активный рост антигенной (вирусной) нагрузки происходит угнетение индукторных клеток, что проявляется падением абсолютных чисел Т-лимфоцитов, несущих ар-и уб-TcR.

4. У ВИЧ-инфицированных пациентов формируются положительные корреляционные взаимосвязи между абсолютным количеством уб-Т-лимфоцитов и абсолютными уровнями Т-лимфоцитов, цитотоксических лимфоцитов и популяции двойных негативных Т-лимфоцитов. При высокой вирусной нагрузке (более 100000 копий/мл) у ВИЧ-инфицированных лиц формируется обратная корреляционная связь абсолютного уровня у8-Т-лимфоцитов с уровнем виремии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

При снижении уровня Т-хелперов CD3+4+ ниже 500 клеток/ мкл помимо стандартного определения количества Т-хелперов рекомендуется расширенное исследование субпопуляционного состава Т-звена иммунной системы, включающее дополнительное определение количества цитотоксических Т-лимфоцитов, оф- и у5-Т-лимфоцитов. Снижение их уровня является дополнительным критерием ухудшения прогноза развития заболевания и необходимости назначения высокоактивной антиретровирусной терапии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Шестакова, Елена Владимировна, 2010 год

1. Барлет, Дж. Клинические аспекты ВИЧ-инфекции / Жд. Барлет, Дж. Галлант. М., 2007. - 582 с.

2. Боровиков, В. STATISTICA. Искусство анализа данных на компьютере: Для профессионалов. (+CD) / В. Боровиков. — СПб., 2003.-688 с.

3. ВИЧ-инфекция: информ. бюл. М., 2006. - № 28. - 24 с.

4. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. — М.,1998.-459 с.

5. Говорун, В.В. ВИЧ-инфекция / В.В. Говорун. М., 2009. - 71 с.

6. Госдоклад «О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2006 году» Электронный ресурс. — М., 2006. Режим доступа: http: // www.rospotrebnadzor.ru.

7. Зуева, Е.Е. Иммунофенотипирование в диагностике острых лейкозов / Е.Е. Зуева // Рос. биомед. журн. — 2003. Т.4. - С. 471-478.

8. Зурочка, А.В. Изменение представлений об оценке иммунного статуса человека, новые проблемы и подходы к их решению / А.В. Зурочка, С.В. Хайдуков // Мед. иммунология. — 2007. -Т.9, №2-3.-С. 339-340.

9. П.Покровский, В.В. ВИЧ-инфекция: клиника, диагностика и лечение / В.В. Покровский, Т.Н. Ермак, В.В. Беляева, О.Г. Юрин.- М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 2000. 224 с.

10. Покровский, В.В. Эпидемиология и профилактика ВИЧ-инфекции и СПИД / В.В. Покровский. М., 1996. - 246 с.

11. Покровский, В.В. Клиническая диагностика и лечение ВИЧ-инфекции / под ред. В.В. Покровского. М., 2001. - 93 с.

12. Полетаев, А.И. Проточная цитометрия и сортировка в цитологии, молекулярной биологии, биотехнологии и медицине / А.И. Полетаев. М., 1989 - Т. 12. - 88с.

13. Робсон, А. Основы медицинской иммунологии / А. Робсон, А. Ройт, П. Делвз. М., 2006. - 320 с.

14. Симонова, А.В. Фенотип лимфоцитов крови при воспалительных заболеваниях человека / А.В. Симонова. М.: ИНТО, 2001.- 130 с.

15. Хаитов, P.M. СПИД / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева. М., 1992. -353 с.

16. Хаитов, P.M. Оценка иммунного статуса в норме и патологии / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология.- 2001.- № 4.- С.4-6.

17. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. М., 2002. - 536 с.

18. Хайдуков, С.В. Вопросы современной проточной цитометрии. Клиническое применение / С.В. Хайдуков; под ред. С.В. Хайдукова, А.В. Зурочки. — Челябинск, 2008. — 195 с.

19. Чередеев, А.Н. CD-маркеры в практике клинико-диагностических лабораторий / А.Н. Чередеев, Н.К. Горлина, И.Г. Козлов // Клинич. лаб. диагностика. 1999. - № 6. - С. 2531.

20. Шкарин, В.В. ВИЧ/СПИД инфекция. Двадцать лет спустя после начала пандемии / В.В. Шкарин, С.Н. Соринсон. — Н.Новгород, 1999.-146 с.

21. Шмаров, Д.А. Лабораторно-клиническое значение проточно-цитометрического анализа крови / Д.А. Шмаров, Г.И. Козинец, -М.:МИА, 2004.- 128с.

22. Ярилин, А.А. Основы иммунологии: учебник / А.А. Ярилин. -М.: Медицина, 1999. 608с.

23. Adans, Е. Structure of у5Т cell receptor in complex with the nonclassical MNC Т22/ E. Adans, Y-H. Chien, K. Garcia // Science .- 2005. Vol. 308. - P. 227-231.

24. Aiken, C. Nef induces CD4 endocytosis: Requirement for a critical dileucine motif in the membrane-proximal CD4 cytoplasmic do-main / C. Aiken, J. Konner, N.R. Landau et al. // Cell. 1994. - Vol. 76. - P. 853-864.

25. Autran, В. T- cell receptor gamma/delta+ lymphocyte subsets during HIV infection / B. Autran, F. Triebel, C. Katlama et al. // Clin. Exp. Immunol. 1989. - Vol. 75, № 2. - P. 206-210.

26. Banda, N.K. Cross-linking CD4 by HIV gpl20 primes T cells for activation induced apoptosis / N.K. Banda, J. Bernier, D.K. Kurahara et al. // J. Exp. Med. 1992. - Vol. 176. - P. 1099-1106.

27. Batman, P.A. HIV enteropathy: crypt stem and transit cell hyperproliferation induces villous atrophy in HIV / P.A. Batman, D.P. Kotler, M.S. Kapembwa et al. // AIDS. 2007. - Vol. 21. - P. 433-439.

28. Battistini, L. Phenotypic and cytokine analysis of human peripheral blood gamma delta T cells expressing NK cell receptors / L. Battistini, G. Borsellino, G. Sawicki et al. // J. Immunol. -1997. Vol. 159, № 8. - P. 3723-3730.

29. Beissert, S. Regulatory T cells / S. Beissert, A. Schwarz, T. Chwarz // J. Investigative Dermatology. 2006. - Vol. 126. - P. 1524.

30. Bernard, P.S. Color multiplexing hybridization probes using the apolipoprotein E locus as a model system for genotyping / P.S. Bernard, G.H. Ptithman, C.T. Wittwer // Analytical Biochemistry. -1999.-№273.-P. 221-228.

31. Boimenu, R. Intraepithelial yST cells exposed by functional genomics / R. Boimenu, W. Havran // Genime Biology. 2001. -Vol. 2 - P. 1031-1035.

32. Bonneville, M. Human Vy9V82 T cells: promising new leads for immunotherapy of infections and tumors / M. Bonneville, E. Scotet

33. Current Opinion in Immunology. 2006. - Vol. 18. - P. 5395464.

34. Born, W. The function of y5T cells in innate immunity / W. Born, R. Reardon, R. O'Brien // Current Opinion in Immunology. 2006. -Vol. 18.-P. 31-38.

35. Born, W. y8T lymphocytes-selectable cell within the innate system / W. Born, N. Jin, K. Aydintung et al. // J. Clinical Immunology. -2007.-Vol. 7.-P. 133-144.

36. Bour, S. The HIV type 1 vpu protein specifically binds to the cytoplasmic domain of CD4: Implications for the mechanism of degradation / S. Bour, U. Schubert, K. Strebel // J. Virol. 1995. -Vol. 69.-P. 1510-1520.

37. Brandes, M. Flexible migration program regulates yST cell involvement in humoral immunity / M. Brandes, K. Willimann, A. Lang et al. // Blood. 2003. - Vol. 102. - P. 3693-3701.

38. Brenchley, J.M. CD4 T cell depletion during all stages of HIV disease occurs predominantly in the gastrointestinal tract / J.M. Brenchley, T.W. Schacker, L.E. Ruff et al. // J. Exp. Med. 2004. -Vol. 200.-P. 749-759.

39. Brenchley, J.M. T-cells subsets that harbor human immunodeficiency virus (HIV) in vivo: implications for HIV pathogenesis / J.M. Brenchley, В J. Hill, D.R. Ambrozak et al. // J. Virol. 2004. - Vol. 78. - P. 1160-1168.

40. Brenchly, J.M. HIV disease: fallout from a mucosal catastrophe / J.M. Brenchly, D.A. Price, D.C. Douek // Nat. Immunol. 2006. -№7.-P. 235-239.

41. Brenner, M. Identification of a putative second T cell receptor / M. Brenner, J. McLean, D. Dialynas et al. // Nature. 1986. - Vol. 322.-P. 145-149.

42. Bucy, P. Avian T-cells expressing y8 receptors locolise in the splenic sinusoids and the intestinal epithelium / P. Bucy, C.L. Chen, J. Cihak et al. // J. Immunol. 1988. - Vol. 141. - P. 2200— 2205.

43. Caccamo, N. Sex-specific phenotypical and functional differences in peripheral human Vy9VS2 T cells / N. Caccamo, F. Dieli, D. Wesch et al. // J. Leukocyte Biology. 2006. - Vol. 79. - P. 663666.

44. Carding, S. yST cells: functional plasticity and heterogeneity / S. Carding, P. Egan // Nature Reviews. 2002. - Vol. 2. - P. 336-345.

45. Chien, Y-U. Recognition by y5T cells / Y-U. Chien, R. Jores, M. Crowley // Annual Reviews Immunology. 1996. - Vol. 14. - P. 511-532.

46. Chouquet, C. Con-elation between breadth of memory HIV-specific cytotoxic T cells, viral load and disease progression in HIV infection / C. Chouquet, B. Autran, E. Gomard et al.// AIDS. 2002. - № 16. - P. 2399-2407.

47. Chun, T.W. Quantification of latent tissue reservoirs and total body viral load in HIV-1 infection / T.W. Chun, L. Carruth, D. Finzi et al. //Nature. 1997. - Vol. 387. - P. 183-188.

48. Collins, K.L. HIV-1 nef protein protects infected primary cells against killing by cytotoxic T lymphocytes / K.L. Collins, B.K.

49. Chen, B.D. Walker, D. Baltimore // Nature. 1998. - Vol. 391. -P. 397-401.

50. Cowadia, H. Antiretroviral agents how best to protect infants from HIV and save their mothers from AIDS / H. Cowadia // N. Engl. J. Med. -2004. - Vol. 351, № 3. - P. 289-292.

51. Dalgleish, A.G. The CD4 (T4) antigen is an essential component of the receptor for the AIDS retrovirus / A.G. Dalgleish, P.C. Beverle., P.R. Clapham et al. // Nature. 1984. - Vol. 312. - P. 763-767.

52. Das, H. MICA engagement by human Vgamma2Vdelta2 T cells enhances their antigen-dependent effector functions / H. Das, V. Groh, C. Kuijl et al. // Immunity. 2001. - Vol. 15. - P. 83-93.

53. Das, S.R. Biology of the HIV Nef protein / S.R. Das, S. Jameel // Indian J. Med. Res. 2005. - Vol. 121. - P. 315-332.

54. Davis, M.M. T-cells antigen receptor genes and T-cell recognition / M.M. Davis, P.J. Bjorkman // Nature. 1988. - Vol. 334, № 6181. - P. 395-402.

55. Dechanet, J. Implication of y5 T cells in human immune response to cytomegalovirus / J. Dechanet, P. Merville, A. Lim et al. // J. Clin. Invest. 1999. - Vol. 103.-P. 1437-1449.

56. Deng, H.K. Expression cloning of new receptors used by simian and human immunodeficiency viruses / H.K. Deng, D. Unutmaz, V.N. Kewalramani, D.R. Littman // Nature. 1997. - Vol. 388. -P. 296-300.

57. De Rosa, S. Ontogeny of y8 T cells in humans / S. De Rosa, J. Andrus, S. Perfetto et al. // J. Immunol. 2004. - Vol. 172. - P. 1637-1645.

58. Dieli, F. Differentiation of effector memory V52 T cells and migratory routes in lymph nodes or inflammatory sites / F. Dieli, F. Poccia, M. Lipp et al. // J. Exp. Med. 2003. - Vol. 198. - P. 391397.

59. Di Nicola, M. Qantization of CD34+ peripheral blood hematopoietic progenitors for autografting in cancer patients / M. Di Nicola, S. Siena, M. Bregni et al. // Int. J. Artif. Organs. 1993. -№ 5. - P. 80-82. - Suppl.

60. Embretson, J. Massive covert infection of helper T lymphocytes and macrophages by HIV during the incubation period of AIDS / J. Embretson, M. Zupancic, J.L. Ribas et al. // Nature. 1993. - Vol. 362.-P. 359-362.

61. Fournie, J.J. Stimulation of у 8 T cells by phoshoantigens /J.J. Fournie, M. Bonneville // Res. Immunol. 1996. - Vol. 147. - P. 338-346.

62. Gallo, R.C. Isolation of human T-cell leukemia virus in acquired immune deficiency syndrome (AIDS) / R.C. Gallo, P.S. Savin, E.P. Gelmann et al. // Science. 1983. - Vol. 220. - P. 865-867.

63. Ganesh, L. The gene product murrl restricts HIV-1 replication in resting CD4+ lymphocytes / L. Ganesh, E. Burstein, A. Guha-Niyogi et al. // Nature. 2003. - Vol. 426. - P. 853-857.

64. Gatenby, P.A. Reduced CD4+ T cells and severe oral candidiasis in absence of HIV infection / P.A. Gatenby // Lancet. 1989. - № l.-P. 672.

65. Girardi, M. Immunosurveillance and immunoregulation by y5 T cells / M. Girardi // J. Investigative Dermatology. 2006. — Vol. 126.-P. 25-31.

66. Grossmam, Z. Pathogenesis of HIV-infection: what the virus spares is as important as what it destroys / Z. Grossmam, M. Meier-Schellersheim, W.E. Paul, L.J. Picker // Nat. Med. 2006. -Vol. 12.-P. 289-295.

67. Guidelines for the performance of CD4+ T-cells determinations in persons with human immunodeficiency virus infection // MMWR Reccom. Rep. 1992. - Vol. 41(RR-8). - P. 1-17.

68. Harari, A. Analysis of HIV-1 and CMV specific memory CD4 T cell responses during primary and chronic infection / A. Harari, G.P. Rizzardi, K. Ellefsen et al. // Blood. 2002. - Vol. 100. - P. 1381-1387.

69. Hay day, A.C. y8 T-cells: A right time and right place for a conserved thired way of protection / A.C. Hayday // Ann. Rev. Immunol. -2000. Vol. 18. - P. 975-1026.

70. Hayday, A. Intraepithelial lymphocytes: exploring the third way in immunology / A. Hayday, E. Theodoridis, E. Ramsburg, J. Shires // Nature Immunology. 2001. - Vol. 2 - P. 997-1003.

71. Hayday, A. Immunoregulation in the tissues by y8T cells / A. Hayday, R. Tigelaar // Nature Reviews. 2003. - Vol. 3. - P. 233242.

72. Heid, C.A. Real-time quantitative PCR / C.A. Heid // Genome Res. 1996. - №6. - P. 986-994.

73. Heikinheimo, O. Contraception and HIV infection in women / O. Heikinheimo, P. Lahteenmaki // Human Reproduction Update. -2009.-Vol. 15, №2.-P. 165-176.

74. Hein, W.R. Prominance of yd T-cell in the ruminant immune system / W.R. Hein, C.R. Mackay // Immunol. Today. 1991. -Vol. 12. - P. 30-34.

75. Higuchi, R. Kinetic PCR Analysis: Real-time monitoring of DNA amplification reactions / R. Higuchi // Biotechnology. 1993. -№11. - P. 1026-1030.

76. Itohara, S. Homming of a gamma delta thymocyte subset with homogeneous T-cell receptors to mucosal epithelia / S. Itohara, A. Farr, J.J. Lafaille et al. // Nature. 1990. - Vol. 343. - P. 754-757.

77. Jarry, A. Subsets of CD3+ (T cell receptor alpha/beta or gamma/delta) and CD3- lymphocytes isolated from normal human gut epithelium display phenotypical features different from their counterparts in peripheral blood / A. Jarry, N. Cerf-Bensussan, F.

78. Selz, D. Guy-Grand // Eur. J. Immunol. 1990. - Vol. 20, № 5. -P. 1097-1103.

79. Kabelitz, D. Role of gamma delta T-lymphocytes in HIV infection / D. Kabelitz, D. Wesch // Eur. J. Res. 2001. - Vol. 6. - P. 169174.

80. Kabelitz, D. Epithelial deference by y8T cells / D. Kabelitz, L. Marischen, H. Oberg et al. // International Archives Allergy Immunology. 2005. - Vol. 137. - P. 73-81.

81. Kirchhoff, F. Brief report: Absence of intact nef sequences in a long-term survivor with nonprogressive HIV-l infection / F. Kirchhoff, T.C. Greenough, D.B. Brettler et al. // N. Engl. J. Med. 1995.-Vol. 332.-P. 228-232.

82. Klatzmann, D.T-lymphocyte T4 molecule behaves as the receptor for human retrovirus LAV / D. Klatzmann, E. Champagne, S. Chamaret et al.// Nature. 1984. - Vol. 312. - P. 767-768.

83. Kozbor, D. Human TCR-g+d+, CD8+ T lymphocytes recognized tetanus toxoid in МНС-restricted fashion / D. Kozbor, G. Trinchieri, D.S. Monos et al.// J. Exp. Med. 1989. - Vol. 169. - P. 1847-1851.

84. Kronenberg, M. Frontline T cells: y8 T cells and intraepithelial lymphocytes / M. Kronenberg, W. Havran // Immunological Reviews. 2007. - Vol. 15. - P. 5-7.

85. Kuziel,W.A. Regulation of T-cell receptor g chain expression in murine thy-1 (+) dendritic epidermal cells / W.A. Kuziel, A. Takashima, M. Bonyhadi et al. // Nature. 1987. - Vol. 3238. - P.263.266.

86. Levy, J.A. Controlling HIV pathogenesis: the role of the noncytotoxic anti-HIV response of CD8+ T cells / J.A. Levy, C.E. Mackewicz, E. Barker // Immunol. Today. 1996. - Vol. 17. - P. 217-224.

87. Li, Q. Peak SIV replication in resting memory CD4+ T cells depletes gut lamina propria CD4+ T cells / Q. Li, L. Duan, J. D. Estes et al. // Nature. 2005. - Vol. 434. - P. 1148-1152.

88. Li, H. Association between Vy2V52 T cells and disease progression after infection with closely-related viral strains of HIV in China / H. Li, H. Peng, P. Ma et al. // Clin. Infect. Dis. 2008. -Vol. 46.-P. 1466-1472.

89. Liao, F. STRL-33, a novel chemokine receptor-like protein, functions as a fusion cofactor for both macrophage-tropic and T cell line-tropic HIV-1 / F. Liao, G. Alkhatib, K.W.C. Peden et al.// J.Exp. Med. 1997.-Vol. 185. - P. 2015-2023.

90. Liu, S.L. Divergent patterns of progression to AIDS after infection from the same source: HIV type 1 evolution and antiviral responses / S.L. Liu, T. Schacker, L. Musey et al. // J. Viral. 1997. - Vol. 71.-P. 4284-4295.

91. Luider, J. Impact of the new Beckman Coulter Cytomics FC 500 5-color flow cytometer on a regional flow Cytomerty clinicallaboratory servise / J. Luider, M. Cyfra, P. Johnson, I. Auer // Laboratory Hematology. -2004.-Vol. 10. P. 102-108.

92. Mariani, R. Species-specific exclusion of APOBEC3G from HIV-l virions by vif / R. Mariani, D. Chen, B. Schrofelbauer et al. // Cell. 2003. - Vol. 114. - P. 21 -31.

93. Martini, F. Gammadelta T-cell anergy in human immunodeficiency virus-infected persons with opportunistic infections and recovery after highly active antiretroviral therapy / F. Martini, R. Urso, C. Gioia // Immunology. 2000. - Vol. 100. -P. 481-486.

94. Mazzoli, S. HIV-specific mucosal and cellular immunity in HIV-seronegative partners of HIV-seropositive individuals / S. Mazzoli, D. Trabattoni, S. Lo Caputo et al. // Nat. Med. 1997. -№ 3. - P.1250-1257.

95. McMichael, A.J. Cellulare immune responses to HIV / A.J. McMichael, S.L. Rowland-Jones // Nature. 2001. - Vol. 410. -P. 980-987.

96. Mehandru, S. Mechanisms of gastrointestinal CD4+ T-cell depletion during acute and early human immunodeficiency virus type 1 infection / S. Mehandru, M.A. Poles, K. Tenner-Racz et al. // J. Virol. 2007. - P. 599-612.

97. Mehandru, S. Primary HIV-1 infection is associated with preferential depletion of CD4 T lymphocytes from effector sites in the gastrointestinal tract / S. Mehandru, M.A. Poles, K. Tenner-Raze et al. // J. Exp. Med. -2004. Vol. 200. - P. 761-770.

98. Menz, C. Dendritic cell maturation by innate lymphocytes: coordinated stimulation of innate and adaptive immunity / C. Menz, R. Steinman, S. Fujii // J. Experimental Medicine. 2005. -Vol.202.-P. 203-207.

99. Miller, R.H. HIV accessory proteins as therapeutic targets / R.H. Miller, N. Sarver // Nat. Med. 1997. - № 3. - P. 389-394.

100. Mincheva-Nilsson, L. Pregnancy and y5T cells: taking on the hard questions / L. Mincheva-Nilsson // Reproductive Biology and Endocrinology. 2003. - Vol. 1. - P. 120-131.

101. Moore, T.A. Gamma delta-T cells are critical for survival and early proinflammatory cytokine gene expression during murine Klebsiella pneumonia / T.A. Moore, B.B. Moore, M.W. Newstead, T.J. Standiford // J. Immunol. 2000. - Vol. 165. - P. 2643-2650.

102. Morita, C. Direct presentation of nonpeptide prenylpyrophosphate antigens to human y8T cells / C. Morita, E. Beckman, J. Bukowski et al. // Immunity . 1995. - Vol. 3. - P. 495-507.

103. Morita, C. Recognition of nonpeptide prenyl pyrophosphate antigens by human y5-T cells / C. Morita, H.K. Lee, D.S. Leslie et al. // Microbes, infect. 1999. - Vol. 1. -P. 175-786.

104. Moser, В. y5T cells: an alternative type of professional APC / B. Moser, M. Brandes //Trends in Immunology. 2006. - Vol. 27. - P. 112-118.

105. Moser, B. y5T cells: novel initiators of adaptive immunity / B. Moser, M. Eberl // Immunological Reviews. 2007. - Vol. 215. - P. 89-102.

106. Nanno, M. yST cells: firefighters of fire boosters in the front lines of inflammatory responses / M. Nanno, T.Shiohara, H. Yamamoto et al. // Immunological Reviews.-2007.-Vol.215.-P.103-113.

107. Nunnari, G. Do Vy2V52 T Cells Influence HIV Disease Progression? / G. Nunnari // Clin. Infect. Dis. 2008. - Vol. 46. -P. 1473-1475.

108. Oh, S.Y. Identification of HIV-1 envelope glykoprotein in the serum of AIDS and ARC patients / S.Y. Oh, W.W. Cruickshank, J. Raina et al. // J. Acquired Immune Defic. Syndr. 1992. - № 5. -P. 251.

109. Ono, A. Plasma membrane rafts play a critical role in HIV-1 assembly and release / A. Ono, E.O. Freed // Proc. Natl. Acad. Sci.USA. 2001. - Vol. 98. - P. 13925-13930.

110. Pantaleo, G. HIV infection is active and progressive in lymphoid tissue during the clinically latent stage of disease / G. Pantaleo, C. Graziosi, J.F. Demarest et al.// Nature. 1993. - Vol. 362. - P. 355-358.

111. Pantaleo, G. The immunopathogenesis of human immunodeficiency virus infection / G. Pantaleo, C. Graziosi, A.S. Fauci // N. Engl. J. Med. 1993. - Vol. 328. - P. 327-335.

112. Pawelec, G. Regulation of normal myelopoiesis and chronic myelogenous leukemia cell proliferation through a non-cytotoxicmechanism by a y5 cell clone / G. Pawelec, T. Sayers, F. Busch // M. Immunol. Lett. 1989. -Vol. 22. - P. 199-204.

113. Pennington, D. The integration of conventional and unconventional T cells that characterizes cell-mediated responses / D. Pennington, D. Vermijlen, E. Wise et al. // Advances in Immunology. 2005. - Vol. 87. - P. 27-59.

114. Peter, F. HIV nef: The mother of all evil / F. Peter // Immunity. -1998.- №9.-P. 433-437.

115. Poles, M.A. Human immunodeficiency virus type 1 induces persistent changes in mucosal and blood gammadelta T cells despite suppressive therapy / M.A. Poles, S. Barsoum, W. Yu // J. Virol. 2003. - Vol. 77. - P. 10456-10467.

116. Rosenberg, E.S. Vigorous HIV-1-specific CD4 T cell responses associated with control of viremia / E.S. Rosenberg, J.M. Billingsley, A.M. Caliendo et al. // Science. 1997. - Vol. 278. -P. 1447-1450.

117. Sack, U. Multiplex analysis of cytokines in exhaled breath condensate / U. Sack, R. Schiebe, M. Wotzel et al. // Cytometry A. 2006. - Vol. 69, № 3. - P. 169-172.

118. Saha, К. Isolation of primaiy HIV-1 that target CD8+ T lymphocytes using CD8 as a receptor / K. Saha, J. Zhang, A. Gupta et al. // Nat. Med. 2001. - Vol. 7. - P. 65-72.

119. Schoel, B. Phosphate is essential for stimulation of Vy9VS2 T lymphocytes by microbacterial low molecular weight ligand / B. Schoel, S. Sprenger, S.H. Kaufmann // Eur. J. Immunol. 1994. -Vol. 24.-P. 1886-1892.

120. Shapiro, H.M. Practical flow cytometry / H.M. Shapiro. New York; Chichester; Brisbane; Toronto; Singapure: WILEY-LISS, Inc., 1995.- 542 p.

121. Spada, F. Self-recognition of CD1 by gamma/delta T cells: implications for innate immunity / F. Spada, E. Grant, P. Peters et al. // J. Exp. Med. 2000. - Vol. 191. - P. 937-948.

122. Sunila, I. Gpl20 is present on the plasma membrane of apoptotic CD4 cells prepared from lymph nodes of HIV-1-infected individuals: an immunoelectron microscopic study / I. Sunila, M. Vaccarezza, G. Pantaleo et al. // AIDS. 1997. - № 11. - P. 27-32.

123. Sykes, P.J. Quantitation of targets for PCR by use of limiting dilution / P.J. Sykes, S.H. Neoh, M.J. Brisco et al. // BioTechniques. 1995. - № 13. - P. 444-449.

124. Thedrez, A. Self/non-self discrimination by human y5T cells: simple solutions for a complex tissue / A. Thedrez, C. Sabourin, J. Gertner et al. // Immunological Reviews. 2007. - Vol. 15. - P. 123-135.

125. Tyagib, S. Molecular beacons: probes that fluoresce upon hybridization / S. Tyagib, F.R. Kramer // NatBiotechnol. 1996. -№ 14. -P. 303-308.

126. Veazey, R.S. Gastrointestinal tract as a major site of CD4 T cell depletion and viral replication in SIV infection / R.S. Veazey, M.A. DeMaria, L.V Chailfoux et al. // Science. 1998. - Vol. 280.-P. 427-431.

127. Wong-Staal, F. HIVes and their replicationrFundamental Virology / F. Wong-Staal, B.N. Fields, D.M. Knipe et al. New York: Raven Press, Ltd., 1991.-533 p.

128. Wu, L. Dendritic-cell interactions with HIV: infection and viral dissemination / L. Wu, V.N. KewalRamani // Nat. Rev. Immunol. 2006. - № 6(11). - P. 859-868.

129. Zack, J.A. HIV-l entry into quiescent primary lymphocytes: Molecular analysis reveals a labile, latent viral structure / J.A. Zack, S.J.Arrigo, S.R. Weitsman et al. // Cell. 1990. - Vol. 61. -P. 213-222.