Разработка тест-систем для оценки мукозального и клеточного иммунитета птиц тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат биологических наук Ирза, Анна Викторовна

• Ирза, Анна Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ирза, Анна Викторовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Иммунная система птиц

1.1.1. Основные иммунокомпетентные органы птиц

1.1.2. Факторы врожденного иммунитета

1.1.3. Факторы приобретенного иммунитета

1.1.3.1. Клеточный иммунитет

1.1.3.3. Мукозальный иммунитет

1.2. Методы оценки клеточного и мукозального иммунитета

1.2.1. Традиционные методы исследования

1.2.2. Современные методы

1.2.2.1. Клеточный иммунный статус

1.2.2.1. Оценка гуморального иммунитета

1.2.2.2. Количественный метод оценки иммунного ответа - проточная цитофлуориметрия

1.3. Особенности поствакцинального иммунитета у птиц

1.3.1. Живые противовирусные вакцины

1.3.2. Инактивированные противовирусные вакцины

1.3.3. Роль и механизм действия адъювантов в составе вакцин

1.3.4. Мукозальные вакцины

1.4. Обоснование выбора вируса НБ в качестве модели

1.5. Заключение по обзору литературы

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы

2.1.1. Антиген

2.1.2. Вирус контрольного заражения

2.1.3. Животные

2.1.4. Реактивы

2.1.5. Иммуноспецифические компоненты реакции

2.1.6. Растворы, необходимые для постановки реакции

2.1.7. Прочие материалы

2.1.8. Оборудование

2.1.9. Коммерческие наборы

2.2. Методы исследования

2.2.1. Отбор проб для оценки уровня экспрессии цитокинов с помощью ПЦР в реальном времени

2.2.2. Выделение суммарной РНК

2.2.3. ПЦР-РРВ для оценки уровня экспрессии цитокинов

2.2.4. Изготовление образцов вакцин

2.2.5. Реакция гемагглютинации (РГА)

2.2.6. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

2.2.7. Непрямой вариант ИФА

2.2.8. Выделение лимфоцитов из периферической крови кур

2.2.9. Выделение лимфоцитов из ткани селезёнки кур

2.2.10. Определение протективной защиты на трахеальных органных культурах (ТОК)

2.2.11. Статистический анализ материалов

2.3. Результаты собственных исследований

2.3.1. Разработка методов

2.3.1.1. Отбор проб лакримальной жидкости, смывов зоба и респираторного тракта кур

2.3.1.2. Оптимизация метода отбора и окрашивания пейеровых бляшек

2.3.1.4. Разработка метода выявления специфических к вирусу НБ иммуноглобулинов (IgA, IgG, IgM) в секреторных жидкостях кур в непрямом варианте ИФА

2.3.1.5. Разработка метода подготовки проб для иммунофенотипирования и количественной оценки субпопуляций лимфоцитов с использованием проточной цитофлуориметрии

2.3.1.6. Разработка метода оценки пролиферативной активности лимфоцитов кур с использованием реагента Alamar Blue

2.3.1.7. Разработка метода количественного определения куриного интерферона-у в биологических жидкостях и культуральных суспензиях методом ИФА

2.3.1.8. Разработка метода анализа экспрессии цитокинов кур с помощью ПЦР в режиме реального времени

2.3.2. Применение разработанных методов для комплексной оценки иммунного ответа

2.3.2.1 Комплексная оценка иммунного ответа после применения

коммерческой инактивированной вакцины

2.3.2.2. Исследование мукозального и гуморального иммунного ответа

цыплят на введение вакцин против НБ с различными адъювантами

2.3.2.1. Комплексная оценка иммунного ответа после применения живой вакцины

3. ОБСУЖДЕНИЕ

4. ВЫВОДЫ

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

6.СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

7. ПРИЛОЖЕНИЯ

Список обозначений и сокращений

АГ - антиген AT - антитело

АЭЭИ - аминоэтилэтиленимин

АБТС - 2,2-азино-ди-(-3-этилбензтиазолинсульфонат)

ВНБ - вирус ньюкаслской болезни

БСА - бычий сывороточный альбумин

ГТЦ - гуанидинизотиоцианат

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ДСН - додецилсульфат натрия

ИФА - иммуноферментный анализ

КББ - карбонатно-бикарбонатный буфер

КЭ - куриные эмбрионы

МАТ - моноклональные антитела

МНС - главный комплекс гистосовместимости

н-ИФА - непрямой вариант иммуноферментного анализа

НБ - ньюкаслская болезнь

ОП - оптическая плотность

ПБ - пейеровы бляшки

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ПЦР-РРВ - полимеразная цепная реакция в режиме реального времени

РГА - реакция гемагглютинации

РТГА - реакция торможения гемагглютинации

СПФ - животные, свободные от специфических патогенов

ТБР-Т - трис-буферный раствор

ФБР - фосфатно-буферный раствор

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

BALT - (от англ. bronchial-associated lymphoid tissue) лимфоидная ткань

ассоциированная с дыхательными путями.

САР - частицы - частицы фосфата кальция

CD - кластер дифференциации

CTL - цитотоксические Т-лимфоциты

MALT - (от англ. mucosa-associated lymphoid tissue) лимфоидная ткань ассоциированная со слизистыми CTL - цитотоксические Т-лимфоциты Ct - пороговый цикл

dNTP - дезоксирибонуклеозидтрифосфат Ig - иммуноглобулин IL - интерлейкин IFN - интерферон

GALT - (от англ. gut-associated lymphoid tissue) лимфоидная ткань

ассоциированная с кишечником

mCV - модифицированный кристалл виолет

NALT - (от англ. nasal-associated lymphoid tissue) лимфоидная ткань ассоциированная с дыхательными путями.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка тест-систем для оценки мукозального и клеточного иммунитета птиц»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Поверхности слизистых респираторного и желудочно-кишечного тракта представляют собой основные ворота для проникновения большинства патогенов, поражающих птиц. Защитные реакции слизистых оболочек играют роль наружного барьера, предохраняя организм от воздействия различной патогенной микрофлоры. Этот тип иммунного ответа получил название иммунитета слизистых оболочек или мукозального иммунитета. Резистентность слизистых имеет важное значение при кишечных и респираторных болезнях птиц (Ньюкаслская болезнь, инфекционный бронхит кур, микоплазмозы), а также играет важную роль при пероральном и аэрозольном методе иммунизации.

Для повышения эффективности и упрощения техники применения иммунологических препаратов в последние годы разрабатываются новые типы вакцин. Одним из перспективных направлений являются мукозальные вакцины, главными компонентами которых являются специфический антиген и природные или синтетические вещества, обладающие мукоадгезивной активностью, вводимые интраназально или перорально.

Преимуществом мукозальных вакцин при локальной иммунизации является формирование более широкого спектра иммунного ответа по сравнению с парентерально вводимыми вакцинами и высокая безопасность.

Создание и испытания препаратов для защиты слизистых оболочек расширяют наши представления о закономерностях функционирования мукозальной иммунной системы.

В связи с этим, разработка методов оценки мукозального иммунитета играет важную роль, позволяя спрогнозировать тип, динамику и направление иммунного ответа, что особенно важно для исследований по оценке резистентности к возбудителям болезней.

Степень разработанности проблемы. Вопросам оценки клеточного и мукозального иммунитета птиц посвящены работы ряда зарубежных авторов [25, 26, 28]. В связи с интересом к снижению побочных действий, связанных

с введением вакцины и выработке специфических типов иммунитета очевидна целесообразность разработки новых вариантов вакцин, вакцинных адъювантов и способов их оценки [39, 52, 53, 123].

На данный момент существует необходимость сравнения и установления корреляции между различными количественными и качественными методами с целью построения общей картины иммунного ответа.

К настоящему времени иностранными авторами разработано несколько тест-систем для оценки клеточного и мукозального иммунитета. Lambrecht В. и сотр. разработали сэндвич-вариант ИФА для выявления у-интерферона [34]. С помощью ИФА AL-Garib S.0 были определены кинетика и распределение классов иммуноглобулинов к вирусу НБ [68, 96]. Применение метода проточной цитофлуориметрии позволило количественно охарактеризовать субпопуляции лимфоцитов. В работах Dalgaard T.S. и сотр. (2010), Fair J.M. и сотр. (2008), Bridle B.W. и сотр. (2006) показана их зависимость от возраста птицы и типа иммунного ответа [78, 98, 184]. Kaizer Р. и сотр. (2000) предложили методы исследований клеточного иммунитета по экспрессии цитокинов на основе ПЦР [69, 109]. В составе мукозальных препаратов для вакцинопрофилактики болезней птиц L. Ilium и сотр. (2001), F. Rauw и сотр. (2010) были испытаны новые типы вакцинных адъювантов и описаны способы оценки их эффективности [53, 92]. Большой интерес представляют исследования Jayawardane G.W.L и сотр. (1995), Kapczynski D. R. и сотр. (2005), Collison E.W. и сотр. (2000), доказывающие значение клеточных и гуморальных факторов для защиты от заражения [61, 107, 113].

Однако данные, полученные разными исследователями при изучении иммунных реакций птиц, имеют большие отличия и носят противоречивый характер. В РФ Колабской J1.C. (1987) были предложены методы исследований отдельных направлений клеточного иммунитета птиц, но в комплексе глубокого изучения различных факторов иммунного ответа не

проводилось [7, 8, 9, 11]. До текущего времени надёжных и достоверных диагностических тест-систем по оценке мукозального и клеточного иммунитета не разработано.

Цель и задачи исследования. Цель данной работы состояла в разработке современных диагностических тест-систем для оценки мукозального и клеточного иммунитета.

Для осуществления поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1) Оптимизировать методы отбора проб секреторных жидкостей с поверхностей слизистых оболочек для получения качественных образцов, позволяющих проводить оценку мукозального иммунитета.

2) Разработать методы комплексной оценки иммунитета:

- клеточного (иммунофенотипирование и оценка пролиферации лимфоцитов, анализ экспрессии цитокинов, количественное определение интерферона);

-мукозального (выявление иммуноглобулинов классов ^А, ^М в секреторных жидкостях);

- гуморального (выявление специфических иммуноглобулинов класса М).

3) С помощью разработанных методов изучить иммунный ответ цыплят на введение различных вакцинных препаратов против НБ: коммерческие живые и инактивированные вакцины; инактивированные вакцины, содержащие мукозальные адъюванты.

4) Определить взаимосвязь между изучаемыми показателями местных факторов защиты и гуморального иммунитета.

5) Изучить зависимость между уровнем защиты и параметрами иммунного ответа вакцинированной птицы до и после контрольного заражения высоковирулентным вирусом НБ с помощью разработанных методов.

Научная новизна исследований. Впервые в отечественной ветеринарной лабораторной диагностике разработаны методы комплексной оценки мукозального иммунитета птиц с использованием современных

лабораторных тест-систем, включая молекулярно-биологические исследования. Испытаны различные адьюванты в составе экспериментальных инактивированных вакцин для местного применения против НБ. На биологической модели с контрольным заражением цыплят высоковирулентным вирусом НБ установлены параметры местных и системных иммунных реакций, обеспечивающие устойчивость птиц к заболеванию и гибели.

Практическая значимость исследований. На основании экспериментальных исследований предложены методы комплексной оценки поствакцинального и постинфекционного иммунитета, которые могут быть использованы в лабораторной практике. В результате проведённых исследований разработаны, одобрены учёным советом и утверждены директором ФГБУ «ВНИИЗЖ» следующие нормативные документы:

«Методические указания по выявлению специфических к вирусу ньюкаслской болезни иммуноглобулинов ^А, ^М и в секреторных жидкостях кур в непрямом варианте иммуноферментного анализа»;

«Методические рекомендации по отбору проб лакримальной жидкости, смывов зоба и респираторного тракта»;

«Методические рекомендации по отбору и окрашиванию пейеровых бляшек»;

«Методические рекомендации для количественного определения куриного интерферона -у в биологических жидкостях и культуральных суспензиях методом ИФА»

«Методические рекомендации по подготовке проб для иммунофенотипирования и количественной оценке субпопуляций лимфоцитов с использованием проточной цитофлуориметрии»;

«Методика анализа экспрессии цитокинов кур с помощью ПЦР в режиме реального времени при автоматизации сбора реакционной смеси»;

«Методические рекомендации по оценке пролиферативной активности лимфоцитов, выделенных из крови и селезенки кур, с использованием Alamar Blue»;

Разработанные методические указания и рекомендации используются при проведении исследований по оценке мукозального и клеточного иммунитета.

Публикации научных исследований. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 2 работы в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. В

соответствии с формулой специальность 03.02.02 «Вирусология» представляет собой область науки, занимающуюся исследованием вирусов, их происхождения, состава, строения, генетики, морфологии, механизмов размножения, аспектов взаимоотношений с клеточными организмами, проблемами противовирусного иммунитета, патогенности вирусов, разработкой мер и средств предупреждения, диагностики и лечения вызываемых вирусами заболеваний.

В диссертационной работе приведены результаты исследований по разработке методов оценки клеточного и мукозального иммунитета птиц и их применению для изучения иммунного ответа цыплят на введение различных вакцинных препаратов против НБ.

Результаты научного исследования соответствуют пунктам 6, 7, 10 паспорта специальности.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены, опубликованы и обсуждены на конференции молодых ученых «Актуальные проблемы инфекционной патологии ветеринарной медицины» (г. Покров, ГНУ ВНИИВВиМ, 2009 г.), международной научно-практической конференции молодых ученых «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику» (г. Владимир, 2010 г.), заседаниях учёного совета

ФГБУ "ВНИИЗЖ" 2005-2009 гг., в материалах международной конференции по мукозальным вакцинам в г. Порто (Португалия, 2008 г.).

Личный вклад. Основной объем исследований проведен автором самостоятельно. Консультативную и методическую помощь при выполнении отдельных этапов работы оказывали сотрудники лаборатории диагностики болезней птиц: М.А. Волкова, И.А. Чвала, Н.С. Мудрак, за что автор выражает им признательность.

Основные положения, выносимые на защиту. Разработанные методы для комплексной оценки иммунного ответа. Результаты их применения для изучения иммунного ответа цыплят на введение различных вакцинных препаратов против НБ: живые вакцины; коммерческие инактивированные вакцины; инактивированные вакцины, содержащие мукозальные адъюванты. Определение взаимосвязи между изучаемыми показателями местных факторов защиты и гуморальным иммунитетом.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на 152 страницах и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение и выводы. Список используемой литературы включает 210 источников, из которых 188 иностранных. Работа включает 33 таблицы и иллюстрирована 30 рисунками.

Исследования по диссертационной работе выполнены в 2004-2011 гг. в лаборатории диагностики болезней сельскохозяйственных животных ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Иммунная система птиц

В настоящее время иммунитет рассматривается как многоэтапная система факторов, обеспечивающих внутреннюю защиту организма от экзогенной (бактерии, вирусы и т. д.) и эндогенной (измененные или опухолевые клетки) биологической агрессии. Иммунная система, развившись на основе системы крови, впитала в себя все достижения эволюции многоклеточных организмов и составила наряду, с метаболической, эндокринной, условно-рефлекторной, четвертую систему отражения живой материи. Возросший интерес к исследованиям в иммунологии продолжается и не ослабевает, тем самым обеспечивая быстрое развитие этой отрасли биологии. Возникшие представления об иммунных механизмах непрерывно пополняются новыми открытиями [17, 27, 62, 63, 171, 172, 173, 193].

1.1.1. Основные иммунокомпетентные органы птиц

Иммунная система птиц находится на такой же высокой ступени развития, как и у млекопитающих, но имеет некоторые отличия [62, 172]:

1) Центральное звено иммунной системы птиц, в отличие от млекопитающих, полностью отделено от системы кроветворения, т.е. у птиц имеет место топографическое и органное обособление части системы, которая отвечает за пролиферацию, созревание и дифференциацию Т- и В-лимфоцитов.

2) Красный костный мозг у птиц является только органом гемопоэза и выполняет функцию кроветворения.

3) Для птиц характерно наличие железы третьего века, которая в своей структуре имеет лимфоидные образования. Секрет железы через носослезный проток попадает в носовую полость и обеспечивает местный иммунитет слизистых оболочек глаза, носовой и ротовой полостей.

4) Рудимент желточного мешка у птиц трансформируется в лимфоидный дивертикул и участвует в пролиферации лимфоцитов. В его структуре

преобладают лимфоидные элементы, которые дифференцируются на диффузные скопления и узелки.

5) В постнатальный период селезенка у птиц является только органом лимфопоэза и не участвует в кроветворении, что соответствует общей тенденции об отделении иммунной системы от кроветворной.

6) Отсутствие анатомически выраженных лимфатических узлов компенсируется широким распространением лимфоидных образований в стенках лимфатических сосудов в виде многочисленных узелков и скоплений. Особенностью их структуры является то, что в каждый лимфатический узел входит только один приносящий лимфатический сосуд, а не 3-5 сосудов, как у млекопитающих. Жаров A.B. и соавт установили, что лимфатические узлы могут быть сгруппированы на заднем и среднем участках шеи. В каждую группу входят несколько единичных узлов. Однако обнаружить их трудно [5].

7) Среди органов иммунной системы возрастная инволюция, в первую очередь, затрагивает клоакальную сумку и к периоду полового созревания она полностью редуцируется [18].

У птиц лимфоидные органы по степени функциональной активности и значимости в развитии иммунного ответа, так же, как и у млекопитающих, принято подразделять на первичные, или центральные, и вторичные, или периферические.

К центральным органам иммунитета птицы относят эмбриональный желточный мешок, костный мозг, тимус, фабрициевую сумку (бурсу). В этих органах идут процессы пролиферации клеток-предшественников, их дифференцировка и созревание, вплоть до выхода в циркуляцию и заселения периферических органов иммунной системы зрелыми иммунокомпетентными клетками.

К периферическим (вторичным) лимфоидным органам птицы относятся селезенка, лимфоидные узлы слепых отростков (цекальные миндалины), гардерова железа, скопления лимфоидных элементов глотки,

гортани, бронхов и кишечника и небольшие скопления лимфоидных клеток в других органах и тканях [3, 10, 210]. Селезенка является местом распознавания антигена, антигензависимой пролиферации и дифференцировки Т- и В-лимфоцитов, их активации, а также продукции и секреции специфических антител-иммуноглобулинов. В период постэмбрионального развития у птиц происходит атрофия тимуса и фабрициевой сумки, поэтому их роль впоследствии выполняют вторичные лимфоидные органы.

Основные защитные функции иммунной системы - распознавание и элиминацию чужеродных макромолекул - осуществляют иммунокомпетентные клетки (лимфоциты), а также продуцируемые и секретируемые ими макромолекулы - антитела (иммуноглобулины). Различают две основные формы специфического иммунного ответа: гуморальный и клеточный [17].

1.1.2. Факторы врожденного иммунитета

Под врожденным иммунитетом в настоящее время принято понимать совокупность факторов неспецифической резистентности, обеспечивающих немедленную защиту при внедрении антигена или патогена. Эти факторы являются врожденными, а их защитное действие обеспечивает элиминацию микробов или предотвращение инфекции на тех ранних этапах процесса защиты, когда приобретенный иммунитет еще отсутствует.

Система врожденного иммунитета не распознает каждый проникший антиген и не различает тонкие структурные детали антигенов. Она распознает относительно небольшое число устойчивых (консервативных) антигенных структур, присутствующих у многих микроорганизмов. Эти типичные для микробов молекулы получили название патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (шаблонов, или типов). Паттерны включают липополисахариды (ЛПС) грамотрицательных бактерий, пептидогликан и липотейхоевые кислоты грамположительных микробов,

маннозу, бактериальную ДНК, Ы-формилметионин, двунитчатую РНК вирусов, глюканы клеточных стенок грибов. Для перечисленных общих патоген-ассоциированных структур имеются особые, паттерн-распознающие рецепторы на большинстве клеток, участвующих в неспецифической защите, поэтому реакции врожденного иммунитета против микробной инвазии начинаются немедленно. Помимо клеточных рецепторов, патоген-ассоциированные паттерны распознаются также целым рядом гуморальных факторов неспецифической резистентности, которые действуют как опсонины и активаторы комплемента [106].

Целый ряд сигнальных паттерн-распознающих рецепторов известны как ЬН-подобные рецепторы (сокращенно - ТЬЯ, или ТЪЯ-рецепторы). Серия ТЬЛ-рецепторов и рецептор СО 14 вызывают в фагоцитах активацию генов медиаторов воспаления - цитокинов (интерлейкинов, фактора некроза опухолей, интерферонов и др.), адгезивных молекул, с помощью которых лейкоциты прилипают к стенке сосуда, благодаря чему обеспечивается немедленный отпор микробной инвазии. Считается, что вся система врожденного иммунитета в состоянии распознать около 1000 молекулярных паттернов [106, 111, 194].

Система врожденного иммунитета включает: -фагоцитирующие клетки (нейтрофилы, моноциты и макрофаги) -клетки, выделяющие медиаторы воспаления (тучные клетки, эозинофилы); -натуральные киллеры (КГК-клетки);

-гуморальные факторы, или молекулы, такие как белки комплемента, белки острой фазы воспаления, цитокины [148, 187].

Гуморальные факторы. Кроме ТЬЯ-рецепторов в реакциях врожденного иммунитета участвует целый ряд растворимых (сывороточных) факторов, которые также распознают молекулярные паттерны патогенов.

Гуморальные факторы врожденного иммунитета присутствуют в слизи, секретах, плазме крови и тканевой жидкости, причем многие непосредственно распознают и связывают антигены возбудителей (лизоцим,

дефенсины, лектин, трансферрин и др). В ответ на инфекцию или повреждение тканей резко увеличивается концентрация некоторых белков плазмы крови, имеющих общее название "белки острой фазы". Основным белком этой группы является С-реактивный белок.

Существенную роль в защитных процессах играют адгезионные белки межклеточного вещества соединительной ткани (матрикса), формирующие среду очага воспаления, в которой действуют лейкоциты.

Комплемент - сложный комплекс белков, действующих совместно для удаления внеклеточных форм патогена; система активируется спонтанно определенными патогенами или комплексом антиген-антитело. Белки комплемента формируют каскадные системы, обнаруженные в плазме крови. Для этих систем характерно формирование быстрого, многократно усиленного ответа на первичный сигнал за счет каскадного процесса. В этом случае продукт одной реакции служит катализатором последующей, что в конечном итоге приводит к лизису клетки или микроорганизма [118].

Натуральные киллеры (NK от англ. natural killer) представляют собой популяцию лимфоцитов, лишенных признаков Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов. NK птиц экспрессируют на своей поверхности гомодимер CD88aa и являются большими гранулярными лимфоцитами, имеющими морфологическое сходство с лимфоцитами млекопитающих. NK, в отличие от цитотоксических Т-лимфоцитов, весьма эффективно распознают клетки, поверхность которых лишена или частично утратила свои молекулы МНС.

Полагают, что NK узнают определенные структуры высокомолекулярных гликопротеинов, которые экспрессируются на мембране инфицированных вирусом клеток. Узнавание клетки-мишени и сближение с ней происходит за счет рецепторов NK. Их участие в неспецифическом иммунном ответе состоит в способности оказывать прямое цитотоксическое действие на вирус-инфицированные клетки [48, 83, 84, 174].

1.1.3. Факторы приобретенного иммунитета

Антигены, не ликвидированные факторами врожденного иммунитета, активируют Т- и В-лимфоциты и индуцируют процесс иммунизации, т.е. развитие специфического иммунного ответа (рис.1). В результате формируется приобретенный иммунитет - появляются антиген-специфичные лимфоциты, вырабатываются антитела. Приобретенный иммунитет может выработаться на неограниченное число антигенов, в этом отношении возможности системы приобретенного иммунитета практически не ограничены.

Рис.1

Схема иммунного ответа

Примечание:

эозинофил } (тучные клетки | Мф-макрофаги

клеточный иммунитет

гуморальный иммунитет

ТЪ - Т хелперы В - В-лимфоциты МК -натуральные киллеры

Решающий момент специфического иммунного ответа - это ответ СБ4 Т-лимфоцитов хелперов на распознавание антигена. На этом этапе определяется форма иммунного ответа: с преобладанием антител (гуморального) или с преобладанием клеточных реакций (гиперчувствительности замедленного типа). Направление дифференцировки СБ4 лимфоцитов, от которого зависит форма специфического иммунного ответа, контролируется цитокинами, образующимися в ходе воспалительной реакции.

Поэтому сравнительная оценка динамики субпопуляций лимфоцитов может играть важную роль при оценке эффективности различных вакцин.

1.1.3.1. Клеточный иммунитет

Термин клеточный иммунитет (иммунитет, опосредованный клетками) первоначально служил для обозначения местных реакций, осуществляемых лимфоцитами и фагоцитами без участия антител - эффекторов гуморального иммунитета. Теперь этот термин используют в более широком смысле, для описания иммунного ответа, в котором антителам принадлежит не ведущая, а вспомогательная роль [14, 17, 22, 76, 171].

Однако полностью разделить клеточный иммунитет и гуморальный невозможно. Этот вариант иммунитета проявляется в двух направлениях: генерации специфических цитотоксических Т-лимфоцитов против внутриклеточных вирусов и стимуляции Т-лимфоцитами активности неспецифических клеток, таких как макрофаги, в отношении внутриклеточных бактерий и других паразитов. Клеточный иммунитет регулируется различными супрессорными клетками и факторами, которые в норме, вероятно, ограничивают повреждающие побочные эффекты, но при некоторых заболеваниях подавляют защитные свойства иммунной системы [150, 201]. По функциям среди Т-лимфоцитов различают эффекторные (CD8 цитотоксические - CTL) и регуляторные (CD4 Т-хелперы-ТЬ) субпопуляции.

Т-система иммунитета уничтожает антигены, представленные на клетках, через прямое взаимодействие субпопуляции специфических цитотоксических Т-лимфоцитов (Т-киллеров) с измененными собственными или чужеродными клетками. Специфичность его определяется антиген-распознающими CD8 Т-лимфоцитами, которые пролиферируют, активируются и формируют клон эффекторных цитотоксических лимфоцитов - CTL.

Вторая отличительная черта Т-клеток связана с особенностями распознавания антигена: Т-клетки распознают не собственно антигенный

пептид (эпитоп), а его комплекс с молекулами I или II классов МНС [114, 211].

В тех случаях, когда антигенный пептид образует комплекс, включающий молекулы МНС I класса, распознавание и уничтожение осуществляется цитотоксическими CD8 Т-клетками [61, 65, 165]. CD4 Т-лимфоциты после распознавания антигена в комплексе с молекулами МНС II класса могут дифференцироваться в двух направлениях. Воспалительные Т-лимфоциты (Thl) приобретают способность активировать макрофаги и тем самым содействовать уничтожению внутриклеточных патогенных агентов. Другое направление дифференцировки ведет к формированию Т-хелперов (Th2), способных активировать специфические B-лимфоциты к продукции соответствующих по специфичности антител-иммуноглобулинов. Антитела, в свою очередь, могут участвовать в различных способах элиминации инфекционных агентов [46, 186]. В соответствии с двумя путями дифференцировки Т-лимфоцитов принято различать преимущественно клеточно-опосредованный и преимущественно гуморальный (антительный) специфический иммунный ответ.

Особой формой специфического иммунного ответа на контакт иммунной системы с чужеродным антигеном является формирование иммунологической памяти, которая проявляется в способности организма отвечать на повторную встречу с тем же антигеном так называемым вторичным иммунным ответом более быстрым и более сильным. Эта форма иммунного ответа связана с накоплением клона долгоживущих клеток памяти, способных распознать антиген и ответить ускоренно и усиленно на повторный контакт с ним [27, 141].

1.1.3.2. Гуморальный иммунитет

Гуморальный иммунитет назван так потому, что его иммуноциты (В-клетки) вырабатывают антитела, способные отделяться от клеточной поверхности, продвигаясь по кровяному или лимфатическому руслу - гумору (от лат. humor - жидкость).

В-лимфоциты распознают антигены специфическими рецепторами иммуноглобулиновой природы, которые по мере созревания экспрессируются на их мембранах [120]. Взаимодействие антигена с такими рецепторами является сигналом активации В-лимфоцитов и их антиген-зависимой дифференцировки в плазматические клетки, активно продуцирующие и секретирующие специфические для данного антигена антитела-иммуноглобулины [14, 142].

У птиц существуют три класса иммуноглобулинов: 1&М, ^О и (табл. 1).

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Ирза, Анна Викторовна

4. ВЫВОДЫ

1. Усовершенствованы методы отбора проб секреторных жидкостей со слизистых оболочек, что позволяет получать качественные образцы для оценки мукозального иммунитета.

2. Разработаны методы комплексной оценки клеточного иммунитета. Иммунофенотипирование лимфоцитов методом проточной цитофлуориметрии и анализ экспрессии цитокинов методом ПЦР-РРВ позволили спрогнозировать тип, динамику и направление иммунного ответа. Для определения функциональной активности лимфоцитов и способности иммунной системы к активации разработан метод количественного определения интерферона в сэндвич-варианте ИФА, минимальная чувствительность которого составила 30 пг/мл.

3. Для выявления иммуноглобулинов трех классов (1§А, 1§М) в секреторных жидкостях и специфических иммуноглобулинов класса М в крови разработан непрямой вариант иммуноферментного анализа, обладающий специфичностью (97,3 - 99,3%) и чувствительностью (96,0 -99,3%).

4. С помощью разработанных методов установлено, что иммунная реакция цыплят на введение живой вакцины против НБ из штамма «Ла Сота» развивается через 1 нед. и характеризуется преимущественно клеточными факторами защиты, выработкой интерферона и секреторных антител;

- на коммерческие инактивированные эмульсионные вакцины - через 2 нед., при этом основное звено защиты составляет гуморальная реакция;

- на инактивированные вакцины, содержащие мукозальные адъюванты, -через 1 -2 нед. и сочетает клеточные, гуморальные и мукозальные факторы защиты.

5. После контрольного заражения птиц, вакцинированных живой вакциной, отмечали следующие иммунные реакции: повышение уровня №N-7 (в ~16 раз по отношению к контролю); снижение иммунорегуляторного индекса вследствие роста уровня СБ8+ клеток и повышение уровня гуморальных антител (с 5 до 11, 75 к^2). 6. Показано, что цыплята, не имевшие сывороточных антител на протективном уровне, были устойчивы к контрольному заражению вследствие действия факторов клеточного и мукозального иммунитета.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании экспериментальных исследований предложены методы комплексной оценки поствакцинального и постинфекционного иммунитета, которые могут быть использованы в лабораторной практике. Разработаны, одобрены учёным советом и утверждены директором ФГБУ «ВНИИЗЖ» следующие нормативные документы:

Методические указания по выявлению специфических к вирусу ньюкаслской болезни иммуноглобулинов ^М и ^О в секреторных жидкостях кур в непрямом варианте иммуноферментного анализа» одобрены учёным советом и утверждёны директором ФГУ «ВНИИЗЖ» (утверждены 23.11.2006 г.);

Методические рекомендации по отбору проб лакримальной жидкости, смывов зоба и респираторного тракта» одобрены учёным советом и утверждёны директором ФГУ «ВНИИЗЖ» (утверждены 08.05.2008 г.);

Методические рекомендации по отбору и окрашиванию пейеровых бляшек» одобрены учёным советом и утверждёны директором ФГУ «ВНИИЗЖ» (утверждены 08.06.2008 г.);

Методические рекомендации для количественного определения куриного интерферона -у в биологических жидкостях и культуральных суспензиях методом ИФА» одобрены учёным советом и утверждёны директором ФГУ «ВНИИЗЖ» (утверждены 16.12.2008 г.);

Методические рекомендации по подготовке проб для иммунофенотипирования и количественной оценке субпопуляций лимфоцитов с использованием проточной цитофлуориметрии» одобрены учёным советом и утверждёны директором ФГУ «ВНИИЗЖ» (утверждены 12.09.2008 г.);

Методика анализа экспрессии цитокинов кур с помощью ПЦР в режиме реального времени при автоматизации сбора реакционной смеси» (утверждена 16.12.2008 г.);

Методические рекомендации по оценке пролиферативной активности лимфоцитов, выделенных из крови и селезенки кур, с использованием Alamar Blue» одобрена учёным советом и утверждёна директором ФГУ «ВНИИЗЖ» (утверждены 23.11.2010 г.)

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ирза, Анна Викторовна, 2012 год

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ада Г., Рамсей А. Вакцины, вакцинация и иммунный ответ // М.: Медицина, 2002. - 328 С.

2. Беляков И.М. Иммунная система слизистых // Иммунология. - 1997. -№4. -С. 7-13.

3. Болотников И. А., Конопатов Ю.В. Практическая иммунология сельскохозяйственной птицы. СПб: Наука, - 1993. - 205 С.

4. Гендон Ю.З. Мукозальные вирусные вакцины: успехи и проблемы // Вопросы вирусологии. - 2003. - №4. - С. 3-10.

5. Жаров А. В. Патологическая анатомия сельскохозяйственных животных: учебник для вузов / ред. В.П. Шишков, A.B. Жаров - 3-е изд., перераб. и доп. - М. : Колос, 1995. - 543 С.

6. Игнатов П.Е. Иммунитет и инфекция. Возможности управления / - М.: Время, 2002. - 352 С.

7. Колабская JI.C. Иммуноглобулины птицы // Птицеводство. -1987. - № 9. - С. 35-36.

8. Колабская JI.C. Пути повышения неспецифической резистентности птиц // Система мероприятий по обеспечению эпизоотического благополучия и эффективности птицеводческих хозяйств промышленного типа: сб. науч. Тр.М, 1987. - С. 46-47.

9. КоляковЯ.Е. Ветеринарная иммунология// М.: Агропромиздат, 1986.-272 С.

10. Конопатов, Ю.В., Макеева Е.Е. Основы иммунитета и кормления сельскохозяйственной птицы / СПб, 2000. - 204 С.

11. Лагуткин H.A., Седых О.Г. Влияние некоторых факторов на иммунитет: обзор // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзот. и зооантропоноз. болезнями животных: - Междунар. науч.-практ. конф. - Покров, 2000. - С. 103-104.

12. Манин Т.Б. Усовершенствование методов ретроспективной диагностики и оценки поствакцинального иммунитета ньюкаслской

болезни птиц: диссертация канд. биол. наук. - Владимир, 2000. - 135 С.

13. Медуницын Н.В. Вакцинология / М.: Триада-Х, 2010. - 512 С.

14. Основы инфекционной иммунологии / В.В. Макаров, A.A. Гусев, Е.В. Гусева, О.И. Сухарев. - Владимир: Фолиант, 2000. - 176 С.

15. Особенности иммунитета слизистых оболочек: обзор лит. / О.В. Кухаркина [и др.]. - Владимир: ФГУ "ВНИИЗЖ", Владимир, 2007. - 77 С.

16. Пероральная иммунизация цыплят кур оболочечными белками вируса ньюкаслской болезни (ВБН), иммобилизованными в липосомы / H.A. Лагуткин, А.Д. Середа, Т.Э. Южук, В.Н.Смирнов // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзот. и зооантропоноз. болезнями животных: Сб.ст. Междунар.науч.-практ.конф. - Покров, 2000. -С. 113-115

17. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. - М.: Мир, 2000. - 592 С.

18. Селезнев С.Б. Структурная организация иммунной системы птиц и млекопитающих. - М.: Изд-во РУДН, 1999. - 32 С.

19. Сергеев В.А., Непоклонов Е.А., Алипер Т.И. Вирусы и вирусные вакцины. - М.: Библионика, 2007. - 524 С.

20. Троценко Н.И. Практикум по ветеринарной вирусологии - М.: Колос, 1999.-272 С.

21. Чупина O.A. Использование эксплантатов трахеи куриных эмбрионов и цыплят для изучения возбудителей инфекционных респираторных болезней птиц: диссертация канд. биол. наук. - Владимир, 2009. - 135 С.

22. Ярилин A.A. Основы иммунологии - М.: Медицина, 1999. - 607 С.

23. A mucosal IgA-mediated excretory immune system in vivo / J.K. Robinson, T.G. Blanchard, A.D. Levine [et al.] // Immunology. - 2001. - Vol. 166 - P. 3688-3692.

24. A simple method to measure cell viability in proliferation and cytotoxicity assays/ R.C. Borra, M.A. Lotufo, S.M. Gagioti [et al.] // Braz. Oral Res.-2009.- Vol. 23, №3 P. - 255-262

25. A third sublineage of avian T cells can be identified with a T cell receptor-3-specific antibody / D. Char, P. Sanchez, C. H. Chen [et al.] // Immnology -1990 -Vol. 145. - P. 3547-3555.

26. A type-specific avian influenza virus subunit vaccine for turkeys: induction of protective immunity to challege infection / S. Kodihalli, V. Sivanandan, K.V. Nagaraja [et al.] //Vaccine. -1994. - Vol. 12, №15. - P. 1467-1472

27. Abbas A., Lichtman A., Pober J. Cellular and molecular immunology. N Y: W. B. Saunders Company. - 1991. - 553P.

28. Adjuvant effect of cholera toxin on systemic and mucosal immune responses in chickens infected with E. tenela or given recombinant parasitic antigen per os / F. Girard, P. Pery, M. Naciri, P. Quere // Vaccine. -1999. - Vol. 17, №11-12. -P.1516-1524.

29. Alexander D. J. Newcastle disease virus and other avian paramyxoviruses // Laboratory Manual for the Isolation and Identification of Avian Pathogens, 4th ed.-PA, 1998.-P. 156-163.

30. Alexander D.J., Senne D.A. Newcastle disease, other avian paramyxoviruses, and pneumovirus infections // Diseases of Poultry. - 12th ed. - Ames, 2008. - P. 75-115.

31. Analysis of chicken CD4 by monoclonal antibodies indicates evolutionary conversion between avain and mammalian species / M. Luhtala, J. Salomonsen, Y. Hirota [et al.] // Hybridoma. - 1993. Vol. 12 - P. 633-646.

32. Antigen delivery strategies for mucosal vaccines / A.J. Husband, S. Bao, S.J. McClure [et al.] / Int. J. Parasitol. - 1996. - Vol. 26, № 8-9. - P. 825-834.

33. Assessment of humoral and cellular-mediated immune response in chickens treated with tilmicosin, florfenicol, or enrofloxacin at the time of Newcastle disease vaccination / M. S. Khalifeh, M. M. Amawi, E. A. Abu-Basha [et al.] // Poultry Science. - 2011. -Vol. 90. - P. - 2723-2729.

34. Assessment of the cell-mediated immune response in chickens by detection of chicken interferon-gamma in response to mitogen and recall Newcastle disease

viral antigen stimulation / B. Lambrecht, M. Gonze, G. Meulemans, T.P. van den Berg // Avian Pathology. - 2004. - Vol. 33, №4. - P. 343-350.

35. Aucouturier J., Dupuis L., Ganne V. Adjuvants designed for veterinary and human vaccines // Vaccine. - 2001. - Vol.19. - P. 2666-2672.

36. B subunit of E. coli enterotoxin as adjuvant and carrier in oral and skin vaccination / E. Fingerut, B. Gutter, M. Goldway [et al.] // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 2006. -Vol. 112. -P.253-263.

37. Bernot A., Auffray C. Primary structure of ontogeny of an avian CD3 transcript // Proc. Natl. Acad. Sci. - 1991.- Vol. 88. - P. 2550-2554.

38. Burns R. B. Histology and immunology of Peyer's patches in the domestic fowl (Gallus domesticus) // Res. Vet. Sci. -1982. - Vol. 32. - P. 359-367.

39. Calcium phosphate nanoparticles induce mucosal immunity and protection against Herpes Simplex virus type 2 / He Qing, A. Mitchell, T. Morcol, S.J.D. Bell // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. - 2002. - Vol. 9. - P. 1021-1024.

40. cDNA cloning of biologically active chicken interleukin-18. /Schneider, K., F. Puehler, D. Baeuerle [et al.] // J. Interferon. - 2000. - Vol. 20. - P. 879-883.

41. Chan M. M., Chen C. L., Ager M. Identification of the avian homologues of mammalian CD4 and CD8 antigens / J. Immonol. -1998. - Vol. 140. - P. 21332138.

42. Characterisation of basal expression of selected cytokines in the liver, spleen, and respiratory, reproductive and intestinal tract of hens // M. Kolesarova, V. Spisakova, M. Matulova [et al.] Veterinarni Medicina. - 2011. - Vol. 56, №7. -P. 325-332.

43. Characteristics of bursal T lymphocytes induced by infectious bursal disease virus /1. J. Kim, S. K. You, H. Kim [et al.] // J. Virology. - 2000. - Vol.74. - P. 8884-8892.

44. Characterization and functional properties of a novel monoclonal antibody which identifies a T cell receptor in chickens / J. Cihak, H. W. Ziegler-

Heitbrock, H. Trainer [et al.] // Eur. J. Immunol. -1988. - Vol .18. - P.533-538.

45. Chen C. H., T. W. F. Gobel, T. Kubota T cell development in the chicken. Poultry Science. - 1994. - Vol. 73. - P.1012- 1018.

46. Chen C. L. H., Chanh T. C., Cooper M. D. Chicken thymocyte-specific antigen identified by monoclonal antibodies: Ontogeny, tissue distribution and biochemical characterization // Eur. J. Immunol. - 1984. - Vol.14. - P. 385-391.

47. Cheng H.W., Eicher D., Chen Y. Effect of genetic selection for group productivity and longevity on immunological and hematological parameters of chickens // Poultry Science. - 2001. - Vol. 80. - P. 1079-1086.

48. Chi D. S., Thorbecke J. Cytotoxicity of allogeneic cells in chickens. 3. Antibody dependent cell-mediated cytotoxicity in normal and agammaglobulinemic chickens // Cell Immunol.-1981. - Vol.64. - P.258-266

49. Chicken interferon gene: Cloning, expression and analysis / M. J. Sekellick, A. F. Ferrandino, D. A. Hopkins, P.I. Marcus // J. Interferon. - 1994. Vol.14. -P. 71-79.

50. Chicken peripheral blood CD3+ CD4- CD8- cells are regulated by endocrine and nerve systems // K. Kushima, K. Yoshida, M. Fudjita [et al.] // J. Vet. Med. Sci. - 2004. -V. 66.-P. 143-148.

51. Chicken-activated-T-lymphocyte-antigen (CATLA) recognized by monoclonal antibody INN-CH-16 represents the IL-2 receptor / K. Schauenstein, G. Kronerm, K. Hala [et al.] // Developmental and Comparative Immunology - 1988. - Vol. 12. - P.823-831.

52. Chitosan and trimethyl chitosan chloride (TMC) as adjuvants for inducing immune responses to ovalbumin in mice following nasal administration/ Boonyo W. Hans E. Junginger [et al] // Official J. Controlled Release Society. -2007.- Vol. 121, №3. P. 168-175.

53. Chitosan as a novel delivery system for vaccines / L. Ilium, I. Jabbal-Gill, M. Hinchcliffe [et al.] // Adv. Drug Deliv. Rev. - 2001. - Vol. 51, №3 - P. 81-96.

54. Chitosan for mucosal vaccination / I. M. Van der Lubben, J. C. Verhoef, G. Borchard, H. E. Junginger// Adv. Drug Deliv. Rev. - 2001. - Vol. 52, №2 -P.139-144.

55. Coadministration of IFN-y enhances antibody responses in chickens/ J.W. Lowenthal, T.E. O'Neil, M. Broadway [et al.] // Inf. Cyt. Res. - 1998. -Vol.18. - P.617-622.

56. Comparison of intranasal inoculation of influenza HA vaccine combined with cholera toxin B subunit with oral or parenteral vaccination / Y. Hirabayashi, H. Kurata, H. Funato [et al.] // Vaccine. - 1990. - Vol. 8. - P. 243-248.

57. Correlation of haemagglutinin-neuraminidase and fusion protein content with protective antibody response after immunization with inactivated Newcastle disease vaccines / R.A. Maas, M. Komen, M. van Dipen [et al.] // Vaccine. -2003.-Vol.21.-P. 3137-3142.

58. Cox J.C., Coulter A.R. Adiuvants- a classification and review of their modes of action // Vaccine. - 1997. - Vol.15. - P.248-256.

59. Cytokine gene expression in splenic CD4+ and CD8+ T cell subsets of genetically resistant and susceptible chickens infected with Marek's disease virus / P. Parvizi, L.R. Read , M.F. Abdul-Careem [et al.] // Vet. Immunology Immunopathol. - 2009.-Vol. 132, №2-4 - P.209-217.

60. Cytokines as adjuvants for the induction of anti-human immunodeficiency virus peptide immunoglobulin G (IgG) and IgA antibodies in serum and mucosal secretions after nasal immunization / C.P. Bradney, G.D. Sempowski, H.-X. Liao [et al.] // Virology. - 2002. - Vol. 76, № 2. - P. 517-524.

61. Cytotoxic T cells are critical in the control of infectious bronchitis virus in poultry / E.W. Collison, J. Pei, J. Dzielawa [et al.] // Developmental and Comparative Immunology. -2000. -Vol.24. -P. 187-200.

62. Davison T.F, Kaspers B, Schat K.A. Avian Immunology. Amsterdam: Academic Press, - 2008. - 481 P.

63. Davison T. F., Morris T. R., Payne L. N. Poultry immunology. Poultry Science Symposium Series. - Abingdon, UK: Carfax Publishing Company, 1996.-Vol.24.

64. Davison T.F. The immunologist's debt to the chicken // Br. Poult. Sci. - 2003. -Vol. 44. -P.6-21.

65. Defense mechanisms against viral infection in poultry: Review / S. H. M Jeurissen, A. G. Boonstra-Blom, S. O. Al-Garib [et al.] // Vet. Quart. 2000.-Vol.22. - P 204-208.

66. Del Giudice G., Pizza M., Rappuoli R. Mucosal delivery of vaccines // Methods. - 1999.- V. 19, №1. - P.148-155

67. Demaries S. L., Ratcliffe M. J. H. Cell surface and secreted immunoglobulins in B cell development // Handbook of Vertebrate Immunology. - London, 1998.-P. 89-92.

68. Detection of antibody forming cells directed against Newcastle disease virus and their Ig-class by double immuno-enzyme histochemistry/ S.O. AL-Garib, E. Grays, A.L. Gielkens, G. Koch // Avian Diseases. - 2003. -Vol.47, №2. - P. 453-457.

69. Differential cytokine expression in avian cells in response to invasion by Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis and Salmonella gallinarum / P. Kaiser, L. Rothwell, E. E. Galyov, P. A. Barrow [et al.] // Microbiology. - 2000. Vol. 12. - P.3217-3226.

70. Digby M. R., Lowenthal J. W. Coling and expression of the chicken interferon-gamma gene // Inf. Cyt. Res. - 1995. - Vol.15. - P.939-945.

71. Distinct mechanismis for cross-protection of the upper versus lower respiratory tract through intestinal priming / A.W. Zuercher, H.Q. Jiang, M.C Thurnheer [et al.] // J. Immunol. - 2002. - Vol. 169, №7. - P. 3920 - 3925.

72. ELISPOT and intracellular cytokine staining: Novel assays for quantifying T cell responses in the chicken / M.P. Ariaans, P.M. van de Haar, J.W. Lowenthal [et al.] // Developmental and Comparative Immunology. - 2008. -Vol. 32, №11,- P.1398-1404.

73. Enteritoxin-based mucosal adjuvants alter antigen trafficking and induce inflammatory responses in the nasal tract / F.W. van Ginkel, R.J. Jackson, N. Yoshino [et al.] // Infect. Immun. - 2005. - Vol. 73, № 10. - P. 6892-6902.

74. Erf G.F. Immune system function and development in broilers // Center of Excellence for Poultry Science University of Arkansas - 1997.

75. Erf G.F., Bottje W.G., Bersi T.K. CD4, CD8 and TCR defined T-cell subsets in thymus and spleen of 2- and 7-week old commercial broiler chickens // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 1998.-Vol.62, №4.- P.-339-48.

76. Erf G.F. Cell-mediated immunity in poultry // Poultry Science. - 2004 Vol. 83. P. 580-590.

77. Evaluation of CD45+ cells kinetics in the blood of fattening chickens immunized with live or inactivated Newcastle disease vaccine / M. Popovic, M. Balenovi, A.E. Kabalin [et al.] // Veterinarski arhiv. - 2010. - Vol.80 - P.61-69.

78. Flow cytometric assessment of antigen-specific proliferation in peripheral chicken T cells by CFSE dilution / T.S. Dalgaard, L.R. Norup, D. Rubbenstroth [et al] // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 2010. -Vol. 138. - P. 85-94.

79. Flow cytometric immune profiling of specific-pathogen-free chickens before and after infectious challenges / B.C. Beirao, C.Jr. Favaro, L.S. Nakao [et al.] // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 2012. - Vol. 145, P. 32-41.

80. Folitse R., Halvorson D.A., Sivanandan V. Efficacy of combined killed-in-oil emulsion and live Newcastle disease vaccines in chickens // Avian Diseases. -1998,- Vol.42, №1.- P. 173-178.

81. Freytag L.C., Clements J.D. Mucosal adjuvants // Vaccine. - 2005. - Vol.23. -P.1804-1813.

82. Ganapathy K, Cargill PW, Jones RC. A comparison of methods of inducing lachrymation and tear collection in chickens for detection of virus-specific immuoglobulins after infection with infectious bronchitis virus // Avian Pathology. - 2005. - Vol. 34. -P.248-251.

83. Gobel T. W. F. Isolation and analysis of natural killer cells in chickens // Method. Mol. Biol. - 2000. - Vol.121. - P.337- 345.

84. Gobel T. W. F. Characterization of avian NK cells ontogeny and tissue distribution by a novel NK cell specific MAb // Immunobiology. - 1996. -Vol.196. -P.124-125.

85. Gogal R.M., Ahmed S.A., Larsen C.T. Analysis of avian lymphocyte proliferation by a new, simple, nonradioactive assay (lympho-pro) // Avian Diseases. - 1997. - Vol.41, №3 - P.714-725.

86. Gut associated lymphoid tissue in the chicken. I. Morphology, ontogeny, and some functional characteristics of Peyer's patches / A. D. Befus , N. Johnston, G. A. Leslie, J. Bienenstock // J. Immunol. - 1980. - Vol. 125. - P. 2626-2632.

87. Hannat D. Mucosal immunology: overview and potential in the veterinary species // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 2002. - Vol.87. P.265-267.

88. Higgins D. A., Warr G. W. The avian immune response to infectious diseases // Developmental and Comparative Immunology. - 2000. - Vol.24. - P.85-101.

89. Hilton L.S., Bean A.G.D., Lowenthal J.W. The emerging role of avian cytokines as immunotherapeutics and vaccine adjuvants. Veterinary Immunology and Immunopathology. - 2002. - Vol. 85. - P. 119-128.

90. Houssaint E., Diez E., Jotereau F. V. Tissue distribution and ontogenic appearance of a chicken T lymphocyte differentiation marker // Eur. J. Immunol- 1985. - Vol.15. - P.305-308.

91. Hu K-F., Lovgren-Bengtsson K., Morein B. Immunostimulating complex (ISCOMs) for nasal vaccination // Adv. Drug Deliv Rev. - 2001. - Vol.51. - P. 149-159.

92. Humoral, cell-mediated and mucosal immunity induced by oculo-nasal vaccination of one-day-old SPF and conventional layer chicks with two different live Newcastle disease vaccines / F. Rauw, Y. Gardin, V. Palya [et al.] // Vaccine. - 2009. -Vol .27. - P. 3631-3642.

93. Husband A.J., Kramer D.R., Bao S. Regulation of mucosal IgA responses in vivo: cytokines and adjuvants // Veterinary Immunology and Immunopatology. -1996. -Vol.54. -P.179-186

94. Identification and analysis of the expression of CD8xx and CD8xb isoforms in chickens reveals a major TCR-gd CD8_b subset of intestinal intraepithelial lymphocytes./ C. A. Tregaskes, F. Kong, E. Paramithiotis [et al.] // J. Immonol. -1995 Vol. 154. - P. 4485-4494.

95. Immune responses to ISCOM formulation in animal and primate models / A. Sjolander, D. Drane, E. Maraskovsky [et al.] //Vaccine. - 2001. - Vol.19. - P. 2661-2665.

96. Immunoglobulin class distribution of systemic and mucosal antibody response to Newcastle disease in chickens / S.O. AL-Garib, AL. Gielkens, E. Grays [et al.] // Avian Diseases. - 2003. - Vol.47, №1. - P.32-40.

97. Immunological basis of differences in disease resistance in the chicken/ B.Zekarias, A. Huurne, W. Landman [et al.] // Vet. Res. - 2002. - Vol.33. -P.109-125.

98. Immunophenotyping of chicken peripheral blood lymphocyte subpopulations: individual variability and repeatability/ J.M. Fair, K.J. Taylor-McCabe, Y. Shou, B.L. Marrone // Veterinary Immunology and Immunopatology. - 2008 Vol.-125. - P. 268-273.

99. Improved protection from velogenik Newcastle disease virus challenge following multiple immunizations with plasmid DNA encoding for F and HN genes / C.F. Loke, A.R. Omar, A.R. Raha, K. Yusoff // Veterinary Immunology and Immunopatology. - 2005. - Vol.106. - P. 259-267

100. In vivo transcriptional cytokine responses and association with clinical and pathological outcomes in chickens infected with different Newcastle disease virus isolates using formalin-fixed paraffin-embedded samples / R. Eccoa, C. Browna, L. Sustaa [et al.] // Veterinary Immunology and Immunopathology 2011.-Vol. 141, №3-4.- P. 221-229.

101. Indication of lymphoid leukosis transplantable tumours and the establishment of lymphoblastoid cell lines / W. Okazaki, R. L. Witter, C. Romero [et al.] // Avian Pathology. - 1980. - Vol.9. - P.311-329.

102. Induction of protective immunity in chickens oral immunized with inactivated infectious bursal disease virus / S. Hoshi, T. Nakamura, T. Nunoya, T. S. Ueda // Vaccine. - 1995. - Vol.13, № 3. - P.245-252.

103. Interaction between live avian pneumovirus and Newcastle disease virus vaccines in specific pathogen free chickens / K. Ganapathy, P. Cargill, E. Montiel, R.C. Jones // Avian Pathol. -2005. - Vol.34, №4. - P.297-302.

104. Intestinal T lymphocytes in the chicken express an integrin-like antigen // M. Haury, Y. Kasahara, S. Schaal [et al.] // Eur. J. Immunol. - 1993- Vol.23 -P.313-319.

105. Investigation of several selected adjuvants regarding their efficacy and side affects for the production of a vaccine for parakeets to prevent a disease caused by a paramyxovirus type 3 /1. Beck, H. Gerlach, E. Burkuhardt, E.F. Kaleta // Vaccine. - 2003. - Vol. 21. - P. 1006-1022

106. Janeway C.A. Jr, Medzhitov R. Innate immune recognition // Annu. Rev. Immunol. - 2002. - Vol.20. - P. 97-216.

107. Jayawardane G.W.L., Spradbrow P.B. Mucosal immunity in chickens vaccinated with the V4 strain of Newcastle disease virus // Veterinary Microbiology. - 1995. - Vol.46. - P.69-77.

108. Jeurissen S. H. M., Wagenaar F., Janse E. M. Further characterization of M cells in gut-associated lymphoid tissues of the chicken // Poultry Science. -1999. -Vol.78. - P.965-972.

109. Kaiser P. Avian cytokines // DavisonT. F., Morris T. R., Payne L.N., Poultry Immunology.-1st edn. - Abingdon, UK: Carfax Publishing Company, 1996. - P. 83-114.

110. Kaiser P., Sonnemans D., Smith L. M. Avian IFN-gamma gene: Sequence analysis suggests probable crossspecies reactivity among galliforms // J. Ifn. Cyt. - 1998. - Vol.18 . - P.711-719.

111.Kaisho T., Akira S. Toll-like receptors and their signaling mechanism in innate immunity // Acta Odontol Scand. - 2001. - Vol. 59, №3. - P. 124-30.

112. Kapczynski D.R., Kogut M. Measurement of avian cytokines with real-time RT-PCR following infection with the avian influenza virus // Avian Influenza Virus. Athens, GA. - 2008. - P. 127-134.

113. Kapczynski D. R., King D. J. Protection of chickens against overt clinical disease and determination of viral shedding following vaccination with commercially available Newcastle disease virus vaccines upon challenge with highly virulent virus from the California 2002 exotic Newcastle disease outbreak // Vaccine. - 2005. - Vol. 23. - P.3424-3433.

114. Kaufman J. Structure and function of the major histocompatibility complex of chickens // Poultry Immunology. Poultry Science Symposium Series. - 1996. -Vol.24. - P. 67-82.

115. Kersten G.F.A., Crommelin D.J.A. Liposomes and ISCOMs as vaccine formulations // Biochim. Biophys. Acta. 1995. - Vol.1241. - P.l 17-138.

116. Kilian M., Mestecky J., Russell M.W. Defense mechanisms involving Fc-dependent functions of immunoglobulin A and their subversion by bacterial immunoglobulin A proteases // Microbiol. Rev. - 1988. - Vol.52. - P.296-303.

117. Kim I.J., Sharma J.M. IBDV-induced bursal T lymphocytes inhibit mitogenic response of normal splenocytes // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 2000. Vol.74. - P.47-57

118. Koppenheffer T. L. Complement // J. M. Sharma, Section (ed.) Avian Immunology. Handbook of Vertebrate Immunology. - San Diego, USA: Academic Press, 1998. - P.99-101

119. Leslie G. A., Martin L. Studies on the secretory immunologic system of the fowl. 3 Serum and secretory IgA of the chicken // J. Immunology. - 1973. Vol.110. - P. 1-9.

120. Leslie G. A., Clem L. W. Phylogen of immunoglobulin structure and function. 3. Immunoglobulin // J. Exp. Med - 1969. - Vol.130. - P. 1337-1352.

121. Locally produced mucosal IgG in chickens immunized with conventional vaccines for Newcastle disease virus / Z.S. Chimeno, E. Gomez, E. Carrillo, A. Berinstein // Braz. J. Med. Biol. Res. - 2008.- Vol.41. - P.318-323.

122. Locations of gut-associated lymphoid tissue in the 3-month-old chicken: a review / C. Casteleyn , M. Doom , E. Lambrechts [et al.] // Avian Pathology -2010. - Vol. 39, №3. - P.143-150

123. Low molecular weight chitosan nanoparticles as new carriers for nasal vaccine delivery in mice / A. Vila, A. Sanchez, K. Janes [et al.] // Eur. J. Pham. Biopharm. - 2004. - Vol. 57. - P. 123-131.

124. Maccubin D. L., Schierman L. W. MHC restricted cytotoxic response of chicken T cells: Expression, augmentation and clonal characterisation // J Immonol. - 1986. - Vol.136. - P.12-16.

125. McConell C. D., Adair B. M., MCNulty M. S. Effects of chicken anemia virus on macrophage function in chickens // Avian Diseases. - 1993. - Vol. 37. -P. 358-365.

126. McDermont M., Bienenstock J. Evidence for a common mucosal immunologic system. Migration of B immunoblasts into intestinal, respiratory, and genital tissues // J. Immunol. - 1979. - Vol. 122. - P.1892-1898.

127. Medina E., Guzman C.A. Modulation of immune responses following antigen administration by mucosal route // FEMS Immunol. Med. Microbiol. - 2000. -Vol. 27, №4.- P.305-311.

128. Meszaros J., Szemeredi M., Tamasi G. Immunization of day-old chickens against Newcastle disease // Acta Vet. Hung. -1992 - Vol. 40. - P. 121-127.

129. Mucosal and systemic immunization elicited by Newcastle disease virus (NDV) transgenic plants as antigens /A. Berinstein, C. Vazquez-Rovere, S. Asurmendi [et al.] // Vaccine. -2005. - Vol.23. - P.5583-5589.

130. Mucosal delivery of inactivated influenza vaccine induces B cell-dependent heterosubtypic cross-protection against lethal influenza A H5N1 virus vaccine. / T.M. Tumpey, M. Renshaw, J.D. Clements, J.M. Katz // Virology. - 2001. Vol.74. - P.6105-6116.

131. Mucosal immunity to infection with implications for vaccine dvelopment / H.F. Staats, R.J. Jacson, H. Kiyono, J.R. McGhee // Cuur. Opin. Immunol. -1994. - Vol.6. - P.572-583.

132. Mucosal immunization and adjuvants: a brief overview of recent advances and challenges / J. Holmgren, C. Czerkinsky, K. Eriksson, A. Mharandi // Vaccine.-2003.-Vol.21.-P. 89-95.

133. Muir W.I., Bryden W. L., Husband A. J. Immunity, vaccination and the avian intestinal tract // Developmental and Comparative Immunology. - 2000. -Vol.24, №2-3. - P.325-342.

134. Nasal or intramuscular immunization of mise with influenza subunit antigen and the B subunit of Escherichia coli heat-labile toxin induces IgA- or igG-mediated protective mucosal immunity/ L. De Haan, W. Verweij, M. Holtrop [et al.] /,/ Vaccine. - 2001. - Vol.19. - P. 2898-2907.

135. Nictic oxide inducing factor as a measure of antigen and nitrogen-specific T cell responses in chickens / K. Karaca, I. J. Kim, S. K. Reddy, J. M. Sharma // J. Immunol. Methods. - 1996. - Vol.192. - P.97-103.

136. Novel adjuvants and vaccine delivery systems / B. Morein, M. Villacres-Eriksson, A. Sjolander, L. Bentsson // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 1996. - Vol.54. - P.373-384.

137. Novel chicken CXC and CC chemokines. C. Sick, K. Schneider, P. Staeheli, K.C. Weining Cytokine - 2000. - Vol.12. - P. 181-186.

138. Nucleotide sequences of HN gene and gene F fragment of Newcastle disease virus Bor 74 and Bor 82 strains / O.G. Gribanov, S.K. Starov, A.I. Lomakin [et al.] // Mol. Genetics, Mcrobiol. and Virol. - 1999. - Vol.3. - P. 29 -33.

139. CTHagan D. Recent advances in vaccine reactions and mucosal administration // J. Pharm. Pharmacol. - 1997. - Vol.49. - P.l-10.

140. Ogra P.L., Faden H., Welliver R.C. Vaccination Strategies for Mucosal Immune Responses // Clinical Microbiollogy Reviews- 2001. - Vol.14, №2. -P.430-445.

141. Pei J., Elwood Briles W., Collisson Memory E. W. T cells protect chicks from acute infectious bronchitis virus infection // Virology. - 2003. - Vol.306. -P. 376-384.

142. Pei J., Collisson E.W. Specific antibody secreting cells from chickens can be detected by three days and memory B cells by three weeks post-infection with the avian respiratory coronavirus // Comparative Immunology. -2005. - Vol.29. - P.153-160.

143. Pertile T. L., Sharma J. M., Walser M. M. Reovirus infection in chickens primes splenic adherent macrophages to produce nitric oxide in response to T cell produced factors // Cell Immunology. - 1995. - Vol.164. - P.207-216.

144. Phase I Evaluation of Intranasal Trivalent Inactivated Influenza Vaccine with Nontoxigenic Escherichia coli Enterotoxin and Novel Biovector as Mucosal Adjuvants, Using Adult Volunteers /1. Stephenson, M.C. Zambon, A. Rudin [et al.] // J. of Virol.- 2006. - Vol. 80. - P. 4962-4970.

145. Phenotypic characterization of chicken thymic stromal elements / R. L. Boyd, T. J. Wilson, A. G. Bean [et al.] // Dev. Immunol. - 1992- Vol.2. - P.51-66.

146. Protection against influenza virus infection in polymeric Ig receptor knockout mice immunized intranasally with adjuvant-combined vaccines / Y. Asahi, T. Yoshikawa, I. Watanabe [et al.] // J. Immunol. - 2002. - Vol.168, №6. -P.2930-2938.

147. Quere P., Girard F. Systemic adjuvant effect of cholera toxin in the chicken // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 1999. - Vol.70. - 135-141.

148. Qureshi M. A., Heggen C. L., Hussain I. Avian macrophage effector functions in health and disease. The avian immune response to infectious diseases. Special issue // Developmental and Comparative Immunology. - 2000. -Vol.24. - P. 103-119.

149. Rautenschlein S., Yeh H. Y., Sharma Y. M. The role of T-cellsprotection by an inactivated infectious bursal disease virus vaccine // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 2002. - Vol.89. - P. 159-167.

150. Rautenshelein S., Sharma J. M. Cytokines // Handbook of Vertebrate Immunology. San Diego, USA: Academic Press, 1998. - P.95-99.

151. Recombinant duck interferon: A new reagent for studying the mode of interferon action against hepatitis B virus / U. Schultz, J. Kock, H. J. Schlicht, P. Staeheli // Virology - 1995. - Vol.212. - P.641-649

152. Reese S., Dalamani G., Kaspers B. The avian lung-associated immune system: a review // Vet. Res. - 2006. - Vol.37. - P. 311-324.

153. Rescue of Newcastle disease virus from Cloned cDNA: Evidence that deavability of fusion protein is a major determinant for virulence / B. H. Peeters, O. De Leeuw, G. Koch, A. L. J. Gielkens // J. of Virology. - 1999. -Vol.73. - P. 5001-5009.

154. Review of Newcastle disease virus with particular references to immunity and vaccination / S. O. A1 Garib, A.L. Gielkens, E. Druys, G. Koch // World"s Poultry Science J. - 2003. - Vol.59. -P. 185-200.

155. Reynolds D.L., Maraqa A.D. Protective immunity against Newcastle disease: The role of antibodies specific to Newcastle disease virus polypeptides // Avian Diseases. - 2000. - Vol. 44, №1 - P. 138-144.

156. Reynolds D.L., Maraqa A.D. Protection immunity against Newcastle disease: The role of cell mediated immunity // Avian Diseases. - 2000. - Vol. 44. -P.145-159.

157. Role of the harderian gland in immunoglobulin A production in chicken lacrimal fluid / T. Baba, T. Kawata, K. Masumoto, T. Kajikawa // Res. Vet. Sci.- 1990 .- Vol. 49, №1,- P. 20-24.

158. Role of the harderian gland on differentiation and proliferation of immunoglobulin A - bearing lymphocytes in chickens / S. Tsuji, T. Baba, T. Kawata, T. Kajikawa // Veterinary Immunology and Immunopathology. -1993. - Vol. 37, № 3-4. - P. 271-283

159. Roth J.A. Mechanism bases for adverse vaccine reactions and vaccine failures //Adv. Vet. Med. - 1999. - Vol. 41. - P. 681-700.

160. Russell P. H., Dwivedi P. N., Davison T. F. The effects of cyclosporin A and cyclophosphamide on the populations of B and T cells and vims in the Harderian gland of chickens vaccinated with the Hitchner B1 strain of Newcastle disease virus // Veterinary Immunology and Immunopathology. -1997.-Vol. 60. -P.171-185.

161. Russell P.H., Koch G. Local antibody forming cell responses to the Hitchner B1 and Ulster strains of Newcastle disease virus // Veterinary Immunology and Immunopathology. -1993. - Vol.37. - P. 165-180.

162. Russell P.H. Newcastle disease virus: virus replication in the harderian gland stimulates lacrimal IgA; the yolk sac provides early lacrimal IgG. // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 1993. - Vol.37, №2. - P. 151-163.

163. Russell P.H., Ezeifeka G.O. The Hitchner B1 strain of Newcastle disease vims induces high levels of IgA, IgG and IgM in newly hatched chicks. Vaccine. - 1995. - Vol.13, №1. - P. 61-66.

164. Safety and antigenicity of non-adjuvant and MF59-adjuvanted influenza A/duck/Singapore/97 (H5N3) vaccine: a radomised trial of two potential vaccines against H5N1 influenza / K. G. Nicolson, A. E. Colegate, A. Podda [et al.] // Lancet. - 2001. - Vol. 357. - P. 1937-1943.

165. Schat K.A., Xing Z. Specific and non-specific immune responses to Marek's disease virus. The avian immune response to infectious diseases.// Developmental and Comparative Immunology. - 2000. - Vol.24. - P.201-221.

166. Schijns V.E., Mechanism J.C. of vaccine adjuvant activity: initiation and regulation of responses by vaccine adjuvants // Vaccine. - 2003. - Vol. 21. -P.829-831.

167. Serum and mucosal immune responses to an inactivated influenza virus vaccine induced by epidermal powder immunization / D. Chen, S. Periwal, K. Larrivee [et al.] // J. of Virology. - 2001. - Vol. 75, №.17. - P.7956-7965.

168. Severe acute respiratory syndrome vaccine development: experiences of vaccination against avian infectious bronchitis coronavirus/ D. Cavanagh // Avian Pathology. - 2003. - Vol. 32, № 6. - P.567-582.

169. Senne D.A., King D.J., Kapczynski D.R. Control of Newcastle disease by vaccination 11 Dev. Biol. (Basel).-2004. - Vol. 119. - P. 165-170.

170. Shafer A.L., Katz J.B., Eernisse K.A Development and validation of a competitive enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of type A influenza antibodies in avian serum // Avian Diseases.-1998. - Vol.42.-P. 2834.

171. Sharma J. M. Avian Cellular Immunology. - FL: CRS Press, 1991. - 207p.

172. Sharma J. M. Avian Immunology. Handbook of Vertebrate Immunology. -San Diego, USA: Academic Press, 1998. - P.73-136.

173. Sharma J. M. The structure and function of the avian immune system //Acta Veterinaria Hungarica. - 1997. - Vol. 45. - P.229-238.

174. Sharma J. M., Okazaki W. Natural killer cell activity in chickens: target cell analysis and effect of antithymocyte serum on effector cells // Infect. Immun. -1981.-Vol. 31.- P. 1078-1085.

175. Sharma J.M. Introduction to poultry vaccines and immunity // Adv. Vet. Med. -1999. - Vol. 41. - P.481-494.

176. Shat K.A., Myers T.J. Avian intestinal immunity // Crit. Rev. Poultry Biol. 1991. - Vol. 3. - P.19-34.

177. Sowder J. T., Chen C. H., Ager L. L. A large subpopulation of avian T cells express a homologue of the mammalian T receptor // J. Exp. Med. -1988. - Vol. 167.- P.315-322.

178. Stone H.D. Evalution of inactivated Newcastle disease oil-emulsion vaccines // Avian Diseases. - 1980. - Vol. 24. - P. 99-111.

179. Stone H.D. The preparation and efficacy of manual emulsified Newcastle disease oil-emulsion vaccines // Avian Diseases. - 1991. - Vol. 35. - P.8-16.

180. Structure- and oil type-based efficacy of emulsion adjuvants /T. Jansen, M.P.M. Hofmans, M.J.G. Theelen [et al.] // Vaccine. - 2006. - Vol. 24. -P.5400-5405.

181. Suarez D.L., Schultz-Cherry S. Immunology of avian influenza virus: A Review // Developmental and Comparative Immunology. - 2000. - Vol. 24. - P. 269-283.

182. Sundick R. S., Gill-Dixon C. A cloned chicken lymphocyte homologous to both mammalian IL-2 and IL-15 // J. Immunol. - 1997. - Vol. 159. - P.720-725.

183. Swayne D., Suarez D.L. Highly pathogenic avian influenza // Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz. - 2000. - Vol. 19. - P.463-482.

184. T lymphocyte subpopulations diverge in commercially raised chickens / B.W. Bridle, R. Julian, P.E. Shewen [et al.] // Can. J. Vet. Res. - 2006. - Vol. 70. - P. 183-190.

185. Takada A., Kida H. Protective immune response of chickens against Newcastle disease, induced by the intranasal vaccination with inactivated virus ,/,/ Veterinary Microbiology. - 1996. - Vol. 50. - P. 17-25.

186. Thl/Th2 polarization by viral and helminth infection in birds // W.G.J. Degena, N. van Daal, L. Rothwell [et al.] // Veterinary Microbiology. - 2005. -Vol. 105. - P.163-167

187. The avian macrophage in cellular immunity / R. R. Dietert, K. A. Golemboski, S. E. Bloom [et al.] // Avian Cellular Immunology / J.M. Sharma (ed.). - FL, 1991. - P.71-95.

188. The mucosal immune system: from fundamental concepts to vaccine development // J.R. McGhee, J. Mestecky, M.T. Dertzbaugh [et al.] // Vaccine. -1992. - Vol. 10.-P.75-88.

189. The origin of IgA in chicken bile: its rapid active transport from blood / M.E. Rose, E. Orlans, A.W.R Payne, P. Hesketh // Eur. J. Immunol. - 1981.- Vol. 11. - P.561-564

190. The positive adyuvant effect of chitosan on antigen-specific cell-mediated immunity after chickens vaccination with live Newcastle disease vaccine / F. Rauw, Y.Gardin, V.Palya [et al.] // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 2010. - Vol. 134. -P. 249-258.

191. Thiagarajan D., Ram G.C, Bansal M.P. Optimum conditions for in vitro chicken IL-2 production and its in vivo role in Newcastle disease vaccinated chickens // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 1999. - Vol. 67, №1.- P.79-91.

192. Timms L. M., Bracewell C. D., Alexander D. J. Cell-mediated and humoral immune response of chickens to infectious bronchitis // Br. Vet. J. - 1980. - Vol. 136. - P.349-356.

193. Toivanen A., Toivanen P. Avian Immunology: Basis and Practice. - FL: CRS Press, 1987. - Vol. 1-2

194. Toll-like receptor agonists stimulate differential functional activation and cytokine and chemokine gene expression in heterophils isolated from chickens with differential innate responses / M.H. Kogut, C.Swaggerty, H. He, [et al.] // Microbes Infect. -2006. - Vol. 8, №7. - P. 1866-1874.

195.Tomasi T.B., Bienenstock J. Secretory immunoglobulins // Adv. Immunol. 1968.-Vol. 9.-P. 1-96.

196. Toth T.E. Nonspecific cellular defence of the avian respiratory system: a review // Developmental and Comparative Immunology. -2000. - Vol. 24. -P. 121-139.

197. Turkey and chicken interleukin-2 cross react in in vitro proliferation assay despite limited amino acid sequence identity / S. Lawson, L. Rothwell, P. Kaiser//J. Ifn. Cyt. Res. - 2000. - Vol. 20. - P. 161 -170.

198. Type I IFN as a vaccine adjuvant for both systemic and mucosal vaccination against influenza virus / L. Bracci, I. Canini, M. Venditti [et al.] // Vaccine. -2006.-Vol. 24. -P.56-57.

199. Vaccination against Newcastle disease with a recombinant baculovirus hemaggluttnin-neuraminidase subunit vaccine / E. Nagy, P. J. Krell, G. C. Dulac, J. B. Derbyshire // Avian Diseases. - 1991. - Vol. 35. -P. 585-590.

200. Van Eck J.H. Vaccination of Fowl with Inactivated Newcastle Disease Vaccine by the Respiratory Route // Avian Pathology. - 1990. - Vol. 19. - P. 313-330.

201. Vandaveer S.S., Erf G.F., Durdik J.M. Avian T helper one/two immune response balance can be shifted toward inflammation by antigen delivery to scavenger receptors//Poultry Science. -2001.- Vol.80, №2. - P. 172-181.

202. Virosome and ISCOM vaccines against Newcastle disease: preparation, characterization and immunogenicity / A. Homhuan, S. Prakongpan, P. Poomvises [et al.] // Eur. J. of Pharmaceutical Sciences. -2004. - Vol.22. -P.459-468.

203. Virulent Newcastle disease virus elicits a strong innate immune response in chickens/ A. R. Cary, S. Leonardo, I. Cornax [et al.] // J. General Virology. -2011.-Vol. 92, №4.- P.931-939.

204. Warr G. W., Major K. E., Higgins D. A. IgY: clues to the origin of modern antibodies // Immunology Today. - 1995. - Vol. 16. - P.392-398.

205. Wassung K.W, Challenging the theory of artificial immunity // Nature medicine. 2000

206. Wigley P., Keiser P. Avian cytokines in health and disease // Brazillian J. of Poultry Science. -2003.-Vol.5, №1.-P.1-14.

207. Wu C.C., Thiagarajan D., Lin T.L. ELISPOT assay for detection of antibody secreting cells to infectious bursal disease virus in chickens // Poultry Science. -1998. -Vol.77. - P.662-665.

208. Xie Z., Stone H.D. Immune response to oil-emulsion vaccines with single or mixed antigens of Newcastle disease, avian influenza, and infectious bronchitis // Avian Diseases. 1990. - Vol.34. - P. 154-162.

209. Yun C. H., Lillehoj H. S., Lillehoj E. P. Intestinal immune responses to coccidiosis // Developmental and Comparative Immunology. - 2000. - Vol.24. -P.303-324.

210. Zarzaur B.L., Kudsk K.A. The mucosa-associated limphoid tissue structure, function, and gerangements // Shock. - 2001. - Vol. 15, №6 - P. 411-420.