Фенотипические особенности лейкоцитарных клеток больных ВИЧ-инфекцией тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат наук Решетников, Игорь Владимирович

• Решетников, Игорь Владимирович
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Решетников, Игорь Владимирович

ОГЛАВЛЕНИЕ

стр.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Взаимодействие ВИЧ с иммунной системой человека (обзор литературы)

1.1. Характеристика ВИЧ

1.2. Патогенез ВИЧ-инфекции

1.3. Взаимодействие ВИЧ с клетками иммунной системой

1.4. Высокоактивная антиретровирусная терапия

1.5. Российская классификация ВИЧ-инфекции

1.6. Проточная цитометрия при исследовании иммунного статуса ВИЧ-инфицированных лиц

1.7. Использование системы Су1:оВ1£Гв оценке иммунного статуса ВИЧ-инфицированных лиц

1.8. Определение вирусной нагрузки у ВИЧ-инфицированных лиц методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

2.1. Иммунологические методы

2.2. Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени

2.3. Статистические методы анализа

ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение

3.1. Сравнительный анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц и условно здоровых доноров

3.2. Анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом стадии заболевания

3.3. Анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом уровня вирусной нагрузки

3.4. Анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом уровня Т-хелперов

3.5. Анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-

инфицированных лиц с IVA стадией заболевания с учетом проводимой В A APT

3.6. Анализ показателей иммунофенотипирования лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом сопутствующих патологий в виде хронического

вирусного гепатита с и внутривенного употребления опиоидных наркотиков

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ПРИНЯТЫХ В ДИССЕРТАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фенотипические особенности лейкоцитарных клеток больных ВИЧ-инфекцией»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

ВИЧ-инфекция - это медленно прогрессирующее инфекционное заболевание, последняя стадия которого известна как синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД). Первые случаи СПИДа были зарегистрированы в 1981 году в США, а в настоящее время число ВИЧ-инфицированных превышает 35 миллионов человек по всему миру [8]. Пандемия ВИЧ-инфекции далеко вышла за рамки проблемы одной страны, одной специальности, одной медицины.

Ежедневно в России диагностируется около 200 новых случаев заражения ВИЧ. За первые 10 месяцев 2012 г. было зарегистрировано более 62 тысяч новых случаев ВИЧ у российских граждан (на 12,5% больше показателей 2010 г.). По данным Федерального научно-методического Центра по профилактике и борьбе со СПИДом, на 15 сентября 2012 г. число граждан Российской Федерации, инфицированных ВИЧ, составило 682726 человек. Пораженность ВИЧ-инфекцией населения Российской Федерации (число людей с ВИЧ на 100 тысяч населения) -составляет 476,1. Ведущим путем передачи ВИЧ-инфекции продолжает оставаться парентеральное употребление наркотиков (в среднем 56,2% по Российской Федерации). Половой гетеросексуальный путь передачи составляет 41,4%. В то же время женщинам ВИЧ передается половым путем намного чаще (в 61% случаев) чем мужчинам [95]. Среди ВИЧ-инфицированных граждан Российской Федерации по-прежнему преобладают мужчины (64%).

Эпидемия ВИЧ-инфекции продолжает распространяться на фоне эпидемии наркомании и развития индустрии сексуальных услуг [15]. Растет число пациентов, находящихся на поздних стадиях ВИЧ-инфекции и нуждающихся в антиретровирусной терапии. С введением в схемы антиретровируспой терапии в 1995 г. ингибиторов протеазы и ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы началась эпоха высокоактивной антиретровирусной терапии (ВААРТ). Терапия позволила улучшить качество и продолжительность жизни

ВИЧ-инфицированных людей, снизить смертность и число осложнений, включая оппортунистические инфекции и злокачественные новообразования. К сожалению, несмотря на все успехи антиретровирусной терапии, полная элиминация вируса у ВИЧ-инфицированных по-прежнему остается невозможной [149]. В связи с внедрением ВААРТ появились новые проблемы — ранняя и отдаленная токсичность препаратов и устойчивостью вируса как у отдельных больных, так и в целом [40, 61, 90]. Дальнейшее распространение ВИЧ-инфекции во многом зависит от того, появится ли в ближайшем будущем эффективная вакцина для профилактики этой инфекции.

Главное условие, без которого невозможно пи упрочить завоеванных позиций в лечении и профилактике ВИЧ-инфекции, ни достичь новых — будь то иммунотерапия или разработка вакцин, — это понимание иммунопатогенеза ВИЧ-инфекции. Не вызывает сомнений, что течение ВИЧ-инфекции зависит от свойств как возбудителя, так и макроорганизма. Течение ВИЧ-инфекции отличается крайним непостоянством — у одних людей инфекция прогрессирует быстро, у других медленно [112]. У примерно 5% ВИЧ-инфицированных людей число Т-хелперов не снижается и СПИД не развивается в течение 7 и более лет — в таких случаях говорят о длительном непрогрессирующем течении инфекции. Иногда это связано с дефектными вирусами с ослабленной способностью к репликации [102]. Однако у большинства ВИЧ-инфицированных вирус активно реплицируется, а различия в скорости прогрессирования иммунодефицита объясняются особенностями макроорганизма.

На скорость развития иммунодефицита могут влиять различные факторы: исходное количество Т-хелперов, уровень вирусной нагрузки, получение ВААРТ, сопутствующие патологии. Научные данные по этим факторам немногочисленны и порой противоречивы. Необходимы дальнейшие исследования в этой области.

Хорошо известно, что основная мишень вируса иммунодефицита человека — лимфоциты CD4+. Однако нельзя забывать, что в патогенез ВИЧ-инфекции вовлечены не только Т-хелперы, но и другие клетки иммунной системы. При

ВИЧ-инфекции качественным и количественным изменениям подвергаются практически все популяции лейкоцитов. Исследования по данной теме проводятся довольно редко. Динамика изменения всего субпопуляционного состава лейкоцитов (как зрелых клеток, так и предшественников) представляет собой значительную ценность для построения целостной картины иммунопатогенеза ВИЧ.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования явилось изучение влияния тяжести ВИЧ-инфекции, антиретровирусной терапии и сопутствующих патологий на субпопопуляционный состав лейкоцитов периферической крови ВИЧ-инфицированных лиц.

Для достижения этой цели нами были поставлены следующие задачи:

1. Выполнить сравнительный анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц и условно здоровых доноров.

2. Выявить особенности иммунного статуса ВИЧ-инфицированных лиц с учетом стадии заболевания согласно классификации Покровского.

3. Оценить зависимость между увеличением вирусной нагрузки и изменением субпопуляционного состава лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц.

4. Выявить субпопуляции лейкоцитов, концентрации которых меняются на фоне проведения высокоактивной антиретровирусной терапии.

5. Оценить влияние сопутствующих патологий в виде хронического вирусного гепатита С и внутривенного употребления опиоидных наркотиков на иммунный статус ВИЧ-инфицированных лиц.

Методология и методы исследования

В настоящей работе проводилось количественное определение различных субпопуляций лейкоцитов периферической крови ВИЧ-инфицированных лиц.

Пациенты с ВИЧ-инфекцией были разделены на группы в зависимости от стадии и тяжести заболевания, получаемой ВААРТ и сопутствующих патологий. В состав контрольной группы вошли условно здоровые лица. Определение относительных и абсолютных количеств лейкоцитов осуществлялось методом проточной цитометрии. Также проводилось измерение концентрации РНК ВИЧ в плазме крови ВИЧ-инфицированных пациентов методом полимеразной цепной реакции.

Степень достоверности, апробация результатов, личный вклад автора

В первичной документации представлены выписки из историй болезни, протоколы лабораторных исследований, журналы регистрации результатов лабораторных исследований, результаты статистической обработки. Оценка достоверности результатов исследования выявила, что результаты получены на сертифицированном оборудовании, включающем проточный цитометр «Cytomics FC 500» компании Beckman Coulter и автоматизированную систему для анализа нуклеиновых кислот «m2000rt» компании Abbott Laboratories. Полученные результаты не противоречат данным, представленным в независимых источниках по данной тематике. В работе использованы современные методики сбора и обработки исходной информации с использованием пакета прикладных компьютерных программ «Statistica for Windows 6.0».

Результаты работы доложены и обсуждены на IV Международном молодежном медицинском конгрессе (Санкт-Петербург, 7-9 декабря 2011 г.).

Личный вклад автора заключается в непосредственном участии во всех этапах научной работы. Автор принимал непосредственное участие в анализе медицинских карт ВИЧ-инфицированных пациентов (200 историй болезни), в пробоподготовке и проведении исследований (включающих микроскопию препаратов крови, работу на гематологическом анализаторе и проточном цитомегре), в создании компьютерной базы данных, статистической обработке

\

материала с использованием прикладных программ «Excel 2000» компании Microsoft и пакета программ «Statistica for Windows 6.0» компании StatSoft.

Основная идея, планирование научной работы, включая формулировку рабочей гипотезы, определение методологии и общей концепции диссертационного исследования проводились совместно с научным руководителем Цейликманом В.Э., заведующим кафедрой биологической химии ГБОУ ВПО «ЮУГМУ Минздрава России», доктором биологических наук, профессором. Получение и интерпретация клинико-анамнестических данных осуществлялись при участии врачей-инфекционистов Миркиной Т. В. и Смирновой Н.В. (инфекционное отделение для лечения больных ВИЧ/СПИДом Клиники ГБОУ ВПО «ЮУГМУ Минздрава России»). Лабораторные исследования в области проточной цитометрии проводились при участии заведующей иммунологической лабораторией Клиники ГБОУ ВПО «ЮУГМУ Минздрава России» Квятковской C.B. Лабораторные исследования по определению вирусной нагрузки проводились при участии заведующей клинико-диагностической лабораторией ГУЗ «Челябинский областной центр по профилактике и борьбе со СПИДом и другими инфекционными заболеваниями» Долговой II.В.

Доля участия автора в накоплении, обобщении и анализе материала составляет более 90%.

Положения, выносимые на защиту

1. У ВИЧ-инфицированных лиц с ростом вирусной нагрузки и падением уровня Т-хелперов ассоциируется повышение числа моноцитов CD 16+, а также снижение количества зрелых В-лимфоцитов и повышение концентрации незрелых В-клеток в периферической крови.

2. На фоне получения высокоактивной антиретровирусной терапии у ВИЧ-инфицированных лиц наблюдается снижение количества моноцитов CD16+

и незрелых грапулоцитов, а также увеличение числа зрелых В-лимфоцитов с одновременным снижением уровня незрелых В-клеток.

3. Сопутствующие патологии в виде хронического вирусного гепатита С и внутривенного употребления опиоидных наркотиков ассоциированы с более выраженным дефицитом Т-хелперов у ВИЧ-инфицированных лиц.

Научная новизна

Впервые исследован расширенный субпопуляционный состав лейкоцитов периферической крови ВИЧ-инфицированных лиц с учетом как зрелых, так и незрелых клеток. Впервые было показано повышение количества незрелых В-клеток крови ВИЧ-инфицированных лиц относительно здоровых лиц. По мере прогрессирования заболевания число незрелых В-лимфоцитов растет при одновременном снижении концентрации зрелых клеток.

Выявлены корреляционные связи между концентрацией вируса в крови и числом зрелых и незрелых В-лимфоцитов, «воспалительных» моноцитов СО 16+. По мере роста вирусной нагрузки падает число зрелых В-клеток, количество ранних В-клегок и «воспалительных» моноцитов повышается.

Доказаны дополнительные - помимо снижения вирусной нагрузки и увеличения количества Т-хелперов - позитивные эффекты ВААРТ. Это -повышение концентрации зрелых В-лимфоцитов, снижение количества незрелых грапулоцитов, «воспалительных» моноцитов СО 16+ и незрелых В-клеток в крови.

Выявлено негативное влияние хронического вирусного гепатита С и внутривенного употребления опиоидных наркотиков и на уровень Т-хелперов у ВИЧ-инфицированных лиц. Литературные данные по этим вопросам немногочисленны и противоречивы.

Теоретическая и практическая значимость

Результаты исследования содержат данные о влиянии комплекса факторов на субпопуляционный состав лейкоцитов периферической крови ВИЧ-

инфицированных лиц. Получены данные в малоизученных отраслях, касающихся иммунопатогенеза ВИЧ. В частности, изменение концентрации ранних и зрелых В-лимфоцитов, «воспалительных» моноцитов СО 16+ при ВИЧ-инфекции.

Изучено влияние антиретровирусной терапии на различные популяции лейкоцитов ВИЧ-инфицированных лиц. Выявлены популяции клеток, которые могут служить критериями иммунологической эффективности ВААРТ. Полученные данные могут быть использованы в практике инфекционных отделений по лечению больных ВИЧ/СПИДом. Применение системы Су1о01ГГ в дополнение к стандартным методикам определения числа Т-хелперов и уровня вирусной нагрузки позволяет оценить иммунный статус ВИЧ-инфицированных лиц, а также эффективность антиретровирусной терапии.

Данная диссертационная работа может послужить основой для дальнейших научных исследований. Крайне интересной представляется работа по изучению механизма влияния вирусной репликации на число моноцитов СБ 16+ и ранних В-клеток. Перспективным представляется исследование по выявлению самых ранних маркеров иммунологической эффективности ВААРТ, среди которых могут оказаться «воспалительные» моноциты СО 16+.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты исследования внедрены в практику инфекционного отделения для лечения больных ВИЧ/СПИДом Клиники ГБОУ ВПО «ЮУГМУ Минздрава России» с 5 сентября 2012 г. Протокол CytoDiff позволяет врачу-клиницисту оценить степень иммунологических нарушений у ВИЧ-инфицированных пациентов. Уровень моноцитов СО 16+ в дополнении к стандартным показателям (число лимфоцитов СЭ4+) используется в качестве критерия иммунологической эффективности антиретровирусной терапии.

Результаты диссертационной работы внедрены в педагогическую практику кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической

лабораторной диагностики ГБОУ ВПО «ЮУГМУ Минздрава России» с «11» сентября 2014 г. (Протокол № 3 от 11.09.2014 г.).

Конкурсная поддержка исследования

Работа выполнена при поддержке Министерства образования и науки РФ в рамках базовой части государственного задания (код проекта -1696).

/

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 научных работ общим объемом 1,02 печатных листа, в том числе 4 статьи в изданиях, включенных в перечень российских рецензируемых научных журналов, рекомендованных Высшей Аттестационной Комиссией для публикаций основных научных результатов диссертаций, а также 2 работы в зарубежных научных изданиях. 3 работы опубликовано в материалах всероссийских и международных конференций и симпозиумов; имеется 4 публикации в электронных научных изданиях. 6 публикаций размещены в научных изданиях, представленных в базе данных «Российского индекса научного цитирования», 1 статья опубликована в журнале, представленном в базе данных «Scopus».

ГЛАВА 1. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ВИЧ С ИММУННОЙ СИСТЕМОЙ ЧЕЛОВЕКА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Характеристика ВИЧ

Возбудители ВИЧ-инфекции - лентивирусы ВИЧ-1 и ВИЧ-2 относятся к подсемейству Ьепйушпае большого семейства ретровирусов. Для человека патогенны еще два ретровируса, Т-лимфотропные вирусы человека типов 1 и 2, но они обладают трансформирующим действием на клетки, а не цитопатическим, как лентивирусы. Другие лентивирусы патогенны для многих видов животных, в том числе овец, лошадей, коз, коров, коек, обезьян. Представители подсемейства Ьепйутпае вызывают хронические инфекции с длинным латентным периодом, персистирующей репродукцией вируса и поражением ЦНС.

ВИЧ-1 и ВИЧ-2 имеют сходную структуру. В то же время у них есть и отличия — по некоторым дополнительным генам и молекулярной массе белков. Репликация как ВИЧ-1 и 2 происходит в лимфоцитах СБ4+. Оба вируса вызывают СПИД, хотя у инфицированных ВИЧ-2 он обычно протекает легче. Во всем мире ВИЧ-инфекцию чаще вызывает ВИЧ-1. Диаметр ВИЧ-1 составляет 100 нм. Снаружи вирус окружен липидной мембраной, в которую встроены 72 гликопротеидных комплекса. Каждый из этих комплексов образован тремя молекулами поверхностного гликопротеида (§р120) и тремя трансмембранного (§р41). Связь между gpl20 и §р41 довольно слабая, и поверхностный гликопротеид может спонтанно отсоединяться от вируса. Поэтому %р120 обнаруживается в сыворотке, а также лимфоидной ткани инфицированных [124, 140].

При выходе ВИЧ из клетки ее мембранные белки, в том числе ЫЪА классов I и И, и молекулы адгезии, встраиваются в двойной липидный слой внешней оболочки вируса. Эти белки облегчают адгезию вируса к клеткам-мишеням. Внутри к липопротеидной оболочке прилежит матриксный белок р17. Сердцевину вируса (капсид) составляет капсидный белок р24, который окружает белково-

нуклеиновый комплекс: две молекулы вирусной РНК, связанные с протеидом р7 и обратной транскриптазой рбб. Вирус содержит все необходимые ферменты для репликации: обратную транскриптазу, интегразу и протеазу.

Подобно другим ретровирусам ВИЧ-1 имеет гены структурных белков gag (кодирует капсидные белки, включая р24), pol (кодирует обратную транскриптазу, протеазу и интегразу) и env (кодирует белки внешней оболочки вируса). В то же время геном ВИЧ сложнее, чем геномы остальных ретровирусов (особенно тех, которые патогенны для животных, не относящихся к приматам). Геном ВИЧ-1 в составе своих 9000 пар нуклеотидов содержит еще шесть генов - tat, rev, nef, vif, vpr и vpu, участвующие в регуляции экспрессии других вирусных генов. Установлено, что продукты генов nef, tat и rev синтезируются в ранней фазе репликации ВИЧ. Регуляторные белки Tat и Rev накапливаются в ядре и связываются с определенными участками вирусной РНК. Белки Tat и Rev стимулируют транскрипцию провирусной ДНК в РНК, элонгацию РНК и транспорт РНК из ядра в цитоплазму, а также необходимы для трансляции. Белок Rev обеспечивает также транспорт компонентов вируса из ядра и переключение синтеза регуляторных белков на синтез структурных. Белок Nef выполняет несколько функций. Он снижает экспрессию молекул CD4 и HLA классов I и II на мембране инфицированных клеток, тем самым позволяя вирусу ускользать от атаки цитотоксических Т-лимфоцитов CD8 и от распознавания лимфоцитами CD4+ [32, 59]. Белок Nef может также угнетать активацию Т-лимфоцитов, связываясь с различными белками - компонентами систем внутриклеточной передачи сигнала [65, 131]. Согласно последним данным, белок Nef индуцирует апоптоз преимущественно неинфицированной популяции Т-хелперов, одновременно поддерживая жизнеспособность продуктивно инфицированных клеток [11, 125]. У небольшого числа взрослых и детей ВИЧ-инфекция не прогрессирует в течение 10 и более лет; уровень вирусной нагрузки в крови таких больных, как правило, низкий. Такое течение ВИЧ-инфекции называют замедленным прогрессированием. Оно обусловлено особенностями как вируса,

так и больного. У некоторых из этих больных обнаружен вариант ВИЧ с делецией в гене nef, которая, вероятно, приводит к снижению патогенности вируса [43].

Белок Vpr необходим для репликации вируса в непролиферирующих клетках, в том числе макрофагах. Недавно выяснено, что белок Vpr играет важную роль в переносе провируса в ядро и вызывает задержку пролиферации клетки [120]. Белок Vpu важен для выхода вируса из клетки: мутации гена vpu приводят к накоплению вирусных частиц у внутренней поверхности клеточной мембраны. Этот белок участвует также в разрушении комплексов CD4-gpl60 в эндоплазматическом ретикулуме, позволяя тем самым gpl60 включаться в формирование новых вирионов [45]. Согласно последним публикациям белок Vif играет важную роль в поддержке репликации вируса [114]. Штаммы, лишенные этого белка, не реплицируются в лимфоцитах CD4+, некоторых линиях Т-лимфоцитов («недоступных клетках») и макрофагах. Эти штаммы способны проникать в клетки-мишени и начинать обратную транскрипцию, однако синтез провирусной ДНК остается незавершенным.

Основное отличие генома ВИЧ-1 от генома ВИЧ-2 заключается в том, что последний вместо гена vpu несет ген vpx.

1.2. Патогенез ВИЧ-инфекции

Главной мишенью вируса иммунодефицита человека является CD4-рецептор лимфоцитов. CD4 - это мономерный гликопротеид массой 55 кДа, который выявляется на поверхности примерно 60% Т-лимфоцитов, предшественников Т-лимфоцитов в костном мозге и тимусе, а также моноцитов, макрофагов, эозинофилов, дендритных клеток и клеток микроглии ЦНС. Внеклеточный участок CD4 на Т-лимфоцитах содержит четыре иммуноглобулиноподобных домена D1-D4 и область V2, играющую важную роль в присоединении gpl20 к CD4. Эта область перекрывается с участком связывания молекул HLA класса II, которые являются естественными лигандами CD4. Молекулы CD4 связываются с антигенраспознающими рецепторами Т-

лимфоцитов и молекулами HLA класса II на поверхности антигенпрезентирующих клеток. Связывание gpl20 с CD4 не только служит ключевым моментом в проникновении вируса в клетку, но и нарушает внутриклеточную передачу сигнала и вызывает апопотоз лимфоцитов CD4+ [39].

В настоящее время известно, что одних только молекул CD4 на поверхности клеток для проникновения ВИЧ недостаточно. Был сделан вывод о существовании дополнительных рецепторов - корецепторов [51]. Также были обнаружены некоторые штаммы ВИЧ-1 и ВИЧ-2, которые могут проникать в клетки, лишенные молекул CD4. Интересно отметить, что моноклональные антитела к CD4 индуцируют связывание конформационных эпитопов (CD4I) с gp 120 этих С04-независимых штаммов. Это позволило предположить, что CD4-независимые штаммы уже несут области, необходимые для распознавания корецепторов, поэтому связывание с CD4 не обязательно для проникновения этих штаммов в клетку. С04-независимые штаммы легко нейтрализуются сывороткой ВИЧ-инфицированных, следовательно, они являются мишеныо иммунного ответ [63].

В 1995 г. были обнаружены факторы лимфоцитов CD8, способные in vitro подавлять репродукцию ВИЧ в аутологичных и аллогенных лимфоцитах CD4+, причем этот эффект не связан с цитотоксичностыо [58, 109]. В супернатанатах лимфоцитов CD8, взятых у ВИЧ-инфицированных, были найдены хемокины MIP-la, MIP-ip и RANTES. Хемокины и их рецепторы изначально были описаны как факторы, усиливающие миграцию лейкоцитов и их провоспалительную активность. Естественный лиганд рецептора хемокинов CXCR4 - фактор SDF-1 (от англ. «stromal cell-derived factor» - выделенный из стромальных клеток). Этот фактор предотвращает заражение активированных лимфоцитов CD4+ Т-тропными штаммами ВИЧ. Хемокины RANTES (от англ. Regulation-upon-Activation, Normal Т Expressed and Secreted - молекулы «регуляции при активации», экспрессируемые и секретируемые нормальными Т-лимфоцитами) и макрофагальные воспалительные белки MIP-1 и MIP-1 (от англ. macrophage

inhibitory protein) являются естественными лигандами рецептора CCR5 и способны предотвращать инфицирование Т-лимфоцитов М-тропными штаммами ВИЧ. Т-тропные штаммы ВИЧ заражают преимущественно активированные лимфоциты CD4+, используя для входа в клетку рецепторы CXCR4 и CD4. М-тропные штаммы способны заражать лимфоциты CD4+, моноциты и макрофаги, используя для входа в клетку рецепторы CCR5 и CD4 [57]. Сегодня взаимодействие gpl20 и клеточных рецепторов стали более понятны. Гликопротеид gpl20 сначала связывается с определенными эпитопами CD4. После этого gpl20 претерпевает конформационные изменения, которые обеспечивают более эффективное взаимодействие его петли V3 с соответствующим корецептором. Трансмембранный гликопротеид gp41 играет ключевую роль в слиянии внешней оболочки вируса и клеточной мембраны. После связывания gpl20 с рецептором CD4, в gp41 происходят конформационные изменения, в результате которых гидрофобный N-концевой фрагмент gp41 внедряется в мембрану клетки-мишени. Были открыты и другие рецепторы хемокинов, которые наряду с CCR5 и CXCR4 служат корецепторами для некоторых штаммов ВИЧ - CCR3, CCR2, CCR8, CCR9, STRL33, Gpr 15, Gpr 1, APJ и ChemR23 [67, 110]. Вероятно, в большей части случаев ВИЧ использует в качестве корецептора CCR5 и CXCR4. Рецептор CXCR4 экспрессируется, главным образом, на девственных Т-лимфоцитах, а рецептор CCR5 - на активированных Т-лимфоцитах, клетках памяти и эффекторных лимфоцитах. На ранней стадии ВИЧ-инфекции обнаруживаются преимущественно М-тропные штаммы ВИЧ. Интересно отметить, что М-тропные штаммы ВИЧ передаются чаще вне зависимости от того, какие штаммы - Т-тропные или нет - преобладают у источника инфекции. Вероятные причины данного феномена: благоприятное влияние местной хемокиновой и цитокиновой среды на репродукцию М-тропных вирусов или избирательный транспорт М-тропных штаммов дендритными клетками подслизистого слоя. Предполагается, что М-тропным штаммам легче

ускользнуть от иммунной системы благодаря репродукции в макрофагах, что и дает им преимущество в выживании [53].

После слияния вируса с клеточной мембраной вирусное ядро высвобождается в цитоплазму. ВИЧ проникает как в активированные Т-лимфоциты, так и в покоящиеся, однако, в покоящихся клетках синтез вирусной ДНК не завершается [73, 147]. Далее в цитоплазме клетки происходит синтез провирусной ДНК на матрице вирусной РНК с участием вирусного фермента обратной транскриптазы. В результате обратной транскрипции образуется двойная цепь ДНК ВИЧ (провирус). Затем провирусная ДНК проникает в ядро клетки и с помощью вирусного фермента интегразы случайным образом встраивается в геном клетки-хозяина. Провирус может находиться в составе генома клетки-хозяина в латентной или активной форме, в последнем случае происходят транскрипция вирусных генов и репликация вирусов.

Центральную роль в патогенезе ВИЧ-инфекции играет клеточная активация, поскольку с ней тесно связан жизненный цикл ВИЧ [88]. В покоящихся Т-лимфоцитах образованная в результате обратной транскрипции провирусная ДНК не встраивается в геном клетки хозяина. Для того, чтобы она встроилась в ДНК клетки, необходима активация клетки и перемещение вирусного преинтеграционного комплекса из цитоплазмы в ядро [56]. Активация иммунной системы происходит после контакта с антигеном, вакцинации или на фоне оппортунистической инфекции. Кроме того, имеются сведения о том, что вирусный гликопротеид gpl20 сам способен активировать зараженные клетки, способствуя тем самым встраиванию вирусной ДНК в клеточный геном. Помимо моноцитов, макрофагов и клеток микроглии невстроенная в клеточный геном провирусная ДНК ВИЧ содержится в покоящихся Т-хелперах - долгоживущих клетках, которые являются резервуаром ВИЧ и латентной инфекции [49, 55]. Так как естественное течение ВИЧ инфекции характеризуется постоянной репликацией вируса в активированных Т-хелперах, пребывание вируса в латентном состоянии в покоящихся лимфоцитах С04+ вероятно является

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Решетников, Игорь Владимирович

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что субпопопуляционные сдвиги лейкоцитарных клеток при ВИЧ-инфекции не ограничиваются снижением уровня Т-хелперов. Помимо этого наблюдается нарастание уровня моноцитов CD 16+ и незрелых гранулоцитов, а также увеличение содержания незрелых B-клеток при одновременном снижении числа зрелых В-лимфоцитов.

2. Переход ВИЧ-инфекции из субклинической стадии III в стадию вторичных заболеваний IVA сопряжен с повышением вирусной нагрузки и снижением числа лимфоцитов CD4+. Достоверного изменения концентраций В-клеток, моноцитов и гранулоцитов не наблюдаются.

3. У ВИЧ-инфицированных лиц при естественном течении ВИЧ-инфекции с ростом вирусной нагрузки и снижением концентрации Т-хелперов ассоциируется увеличение уровня моноцитов CD 16+, а также снижение числа зрелых B-лимфоцитов и повышение количества незрелых В-клеток.

4. При использовании высокоактивной антиретровирусной терапии помимо снижения вирусной нагрузки и увеличения количества Т-хелперов отмечается падение уровня моноцитов CD 16+ и незрелых гранулоцитов, а также повышение содержания зрелых B-лимфоцитов при одновременном снижении числа незрелых B-клеток в периферической крови.

5. Сопутствующие патологии в виде хронического вирусного гепатита С и внутривенного употребления опиоидных наркотиков приводят к более выраженному дефициту Т-хелперов у ВИЧ-инфицированных лиц.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Протокол Су1о01£Г может быть использован для мониторинга иммунологических нарушений при ВИЧ-инфекции. В дополнение к стандартной методике определения количества клеток С04+ и вирусной нагрузки система CytoDiff помогает оценивать иммунный статус ВИЧ-инфицированных пациентов, а также иммунологическую эффективность ВААРТ.

2. Число «воспалительных» моноцитов СО 16+ является критерием оценки эффективности ВААРТ: помимо увеличения количества Т-хелперов эффективная антиретровирусная терапия вызывает снижение уровня моноцитов СО 16+. Оценка количества «воспалительных» моноцитов может являться более ранним маркером иммунологической эффективности ВААРТ по сравнению с количеством лимфоцитов С04+.

3. Потребители инъекционных наркотиков с коинфекцией ВИЧ/ВГС требуют особого контроля со стороны клиницистов, так как у них отмечается более интенсивное истощение популяции Т-хелперов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Решетников, Игорь Владимирович, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аронин, С.И. ВИЧ-инфекция: вопросы терапии / С.И. Аронин // Казанский медицинский журнал. - 2005. - Т. 86, № 6. - 443-450.

2. Бартлетт, Дж. Клинические аспекты ВИЧ-инфекции / Дж. Бартлетт, Дж. Галлант, П. Фам. - М.: Р. Валент, 2010. - 490 с.

3. Боровиков, В. STATISTICA. Искусство анализа данных на компьютере: Для профессионалов. (+CD) / В. Боровиков. - Санкт-Петербург, 2003.-688 с.

4. ВИЧ-инфекция: клиника, диагностика и лечение / под ред. В.В. Покровского. - Москва, 2000. - 224 с.

5. Вопросы современной проточной цитометрии. Клиническое применение / под ред. C.B. Хайдукова, A.B. Зурочки. - Челябинск, 2008. - 195 с.

6. Галегов, Г.А. Высокоэффективная химиопрофилактика перинатальной передачи ВИЧ-инфекции у ВИЧ-инфицированных беременных женщин / Г.А. Галегов // Антибиотики и химиотерапия. - 2009. - Т. 54, № 3-4. - С. 56-80.

7. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. - Москва, 1998.-459 с.

8. Глобальный доклад: Доклад ЮНЭЙДС о глобальной эпидемии СПИДа [Электронный ресурс]. - 2012. - Режим доступа: http://www. unaids.org.

9. Зуева, Е.Е. Иммунофенотипирование в диагностике острых лейкозов / Е.Е. Зуева // Рос. биомед. журн. - 2003. - Т.4. - С. 471-478.

10. Зурочка, A.B. Изменение представлений об оценке иммунного статуса человека, новые проблемы и подходы к их решению / A.B. Зурочка, C.B. Хайдуков // Мед. иммунология. - 2007. - Т.9, № 2-3. - С. 339-340.

11. Иванкова, A.B. Роль ВИЧ-1 белка NEF в патогенезе ВИЧ-1 инфекции / A.B. Иванкова, C.B. Бойчук, И.Г. Мустафин и др. // Казанский медицинский журнал. - 2010. - Т. 91, №1. - С. 79-85.

12. Клиническая диагностика и лечение ВИЧ-инфекции / под ред. В.В. Покровского. - Москва, 2001. - 93 с.

13. Кравченко, A.B. ВИЧ-инфекция на стадии первичных проявлений: особенности клинической картины и диагностики / A.B. Кравченко, A.B. Мирошниченко, В.Г. Канестри, и др. // Инфекционные болезни. - 2005. - Т. 3, № З.-С. 18-22.

14. Луговская, С. А. Иммунофенотипирование в диагностике гемобластозов / С.А. Луговская, М.Е. Почтарь, H.H. Тупицын. - Тверь, 2005. - 168 с.

15. Мазус, А.И. ВИЧ-инфекция: динамика эпидемического процесса / А.И. Мазус, A.A. Голиусов, Г.Ю. Панкова и др. // Российский медицинский журнал. - 2006. - № 4. - С. 3-7.

16. Макарова, М.В. Роль антигенпрезентирующих клеток в репликации ВИЧ-1 / М.В. Макарова, С.В, Бойчук, И.Г. Мустафин и др. // Аллергология и иммунология. - 2007. - Т. 8, № 1. - С. 251.

17. Покровский, В.В. Эпидемиология и профилактика ВИЧ-инфекции и СПИД / В.В. Покровский. - Москва, 1996. - 246 с.

18. Покровский, В.В. Протоколы лечения больных ВИЧ-инфекцией / В.В. Покровский, О.Г. Юрин, A.B. Кравченко // Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы. - 2011. - № 3. - С. 1 -24.

19. Полетаев, А.И. Проточная цитометрия и сортировка в цитологии, молекулярной биологии, биотехнологии и медицине / А.И. Полетаев. - Москва, 1989.-Т. 12.-88с.

20. Правила проведения внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных исследований с использованием контрольных материалов: приказ Минздрава РФ № 220 от 26 мая 2003 г. - Москва, 2003. - 18 с.

21. Приказчикова, Т. А. Ингибиторы интегразы ВИЧ-1 как новый компонент противовирусной защиты / Т.А. Приказчикова, А.М. Сычева, Ю.Ю. Агапкина // Успехи химии. - 2008. - Т. 77, № 5. - С. 445-459.

22. Робсон, А. Основы медицинской иммунологии / А. Робсон, А. Ройт, П. Делвз. - Москва, 2006. - 320 с.

23. Санникова, О.Е. Социально-психологические аспекты дезадаптации ВИЧ-инфицированных лиц в пенитенциарной среде / О.Е. Санникова, А.Г. Соловьев, П.И. Сидоров // Экология человека. - 2009. - № 4. - С. 20-24.

24. Сахно, JI.B. Фенотипическая и функциональная характеристика моноцитов у больных туберкулезом легких / JI.B. Сахно, М.А. Тихонова, B.C. Кожевников и др. // Медицинская Иммунология. - 2005. - Т. 7, № 1. - С. 49-56.

25. Сотниченко, С.А. Особенности продукции цитокинов при ВИЧ-инфекции / С.А. Сотниченко // Успехи современного естествознания. - 2006. - №

5.-С. 13-15.

26. Хаитов, P.M. СПИД / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева. - Москва, 1992. -

353 с.

27. Хаитов, P.M. Оценка иммунного статуса в норме и патологии / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. - 2001. - № 4. - С.4-6.

28. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. - Москва, 2002. - 536 с.

29. Чередеев, А.Н. CD-маркеры в практике клинико-диагностических лабораторий / А.Н. Чередеев, Н.К. Горлина, И.Г. Козлов // Клипич. лаб. диагностика. - 1999. - № 6. - С. 25-31.

30. Шмаров, Д.А. Лабораторно-клиническое значение проточно-цитометрического анализа крови / Д.А. Шмаров, Г.И. Козинец. - Москва: МИА, 2004.- 128с.

31. Ясавеев, И.Г. Распространение ВИЧ/СПИДа в России как социальная проблема / И.Г. Ясавеев // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2006. - №

6.-С. 20-23.

32. Aiken, С. Nef induces CD4 endocytosis: Requirement for a critical dileucine motif in the membrane-proximal CD4 cytoplasmic domain / C. Aiken, J. Konner, N.R. Landau et al. // Cell. - 1994. - Vol. 76. - P. 853-864.

33. Ancuta, P. CD16+ Monocyte-Derived Macrophages Activate Resting T Cells for HIV Infection by Producing CCR3 and CCR4 Ligands / P. Ancuta, P. Autissier, A. Wurcel et al. // Journal of Immunology. - 2006. - Vol. 176. - P. 57605771.

34. Ancuta, P. Transcriptional profiling reveals developmental relationship and distinct biological functions of CD 16+ and CD 16- monocyte subsets / P. Ancuta, K.-Y. Liu, V. Misra et al. //BMC Genomics. -2009. - Vol. 10. - P. 403-414.

35. Antoni, B.A. Inhibition of apoptosis in human immunodeficiency virus-infected cells enhances virus production and facilitates persistent infection / B.A. Antoni, P. Sabbatini, A.B. Rabson et al. // J. Virol. - 1995. - Vol. 69. - P. 2384-2392.

36. Badley, A.D. Mechanisms of HIV-associated lymphocyte apoptosis / A.D. Badley, A.A. Pilon, A. Landay et al. // Blood. - 2000. - Vol. 96. - P. 2951-2964.

37. Baenziger, S. Triggering TLR7 in mice induces immune activation and lymphoid system disruption, resembling HIV-mediated pathology / S. Baenziger, M. Heikenwalder, P. Johansen et al. // Blood. - 2009. -Vol. 113. - P. 377-388.

38. Balboa, L. Impaired dendritic cell differentiation of CD16-positive monocytes in tuberculosis: role of p38 MAP kinase / L. Balboa, M.M. Romero, E. Laborde et al. // European Journal of Immunology. - 2012. - Vol. 43. - P. 335-347.

39. Banda, N.K. Cross-linking CD4 by HIV gpl20 primes T cells for activation induced apoptosis / N.K. Banda, J. Bernier, D.K. Kurahara et al. // J. Exp. Med. - 1992. - Vol. 176. - P. 1099-1106.

40. Barbaro, G. Highly active antiretroviral therapy: current state of the art, new agents and their pharmacological interactions useful for improving therapeutic outcome / G. Barbaro, A. Scozzafava, A. Mastrolorenzo et al. // Curr. Pharm. Des. -2005.- Vol. 11.-P. 805-843.

41. Bennett, D.E. The World Health Organization's global strategy for prevention and assessment of HIV drug resistance / D.E. Bennett, S. Bertagnolio, D. Sutherland et al. // Antivir. Ther. - 2008. - Vol. 13, № 2. - P. 1-13.

42. Bernard, P.S. Color multiplexing hybridization probes using the apolipoprotein E locus as a model system for genotyping / P.S. Bernard, G.Ii. Ptithman, C.T. Wittwer // Analytical Biochemistry. - 1999. - № 273. - P. 221-228.

43. Birch, M.R. An examination of signs of disease progression in survivors of the Sydney Blood Bank Cohort (SBBC) / M.R. Birch, J.C. Learmont, W.B. Dyer et al. // J. Clin. Virol. -2001. - Vol. 22. - P. 263-270.

44. Bosch, R.J. Pretreatment factors associated with 3-year (144-week) virologic and immunologic responses to potent antiretroviral therapy / R.J. Bosch, K. Bennett, A.C. Collier et al. // Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes. -2007. - Vol. 44. - P. 268-277.

45. Bour, S. The HIV type 1 vpu protein specifically binds to the cytoplasmic domain of CD4: Implications for the mechanism of degradation / S. Bour, U. Schubert, K. Strebel // J. Virol. - 1995. - Vol. 69. - P. 1510-1520.

46. Braitstein, P. Immunologic response to antiretroviral therapy in hepatitis C virus-coinfected adults in a population-based HIV/AIDS treatment program / P. Braitstein, C. Zala, B. Yip et al. // Journal of Infectious Diseases. - 2006. - Vol. 193. — P. 259-268.

47. Braitstein, P. Mortality of HIV-1-infected patients in the first year of antiretroviral therapy: comparison between low-income and high-income countries / P. Braitstein, M.W. Brinkhof, F. Dabis et al. // Lancet. - 2006. - Vol. 367. - P. 817-824.

48. Brenchley, J.M. CD4 T cell depletion during all stages of HIV disease occurs predominantly in the gastrointestinal tract / J.M. Brenchley, T.W. Schacker, L.E. Ruff et al. // J. Exp. Med. - 2004. - Vol. 200. - P. 749-759.

49. Brenchley, J.M. T-cells subsets that harbor human immunodeficiency virus (HIV) in vivo: implications for HIV pathogenesis / J.M. Brenchley, B.J. Hill, D.R. Ambrozak et al. // J. Virol. - 2004. - Vol. 78. - P. 1160-1168.

50. Brenchley, J.M. Microbial translocation is a cause of systemic immune activation in chronic HIV infection / J.M. Brenchley, D.A. Price, T.W. Schacker et al. // Nature Medicine.-2006.-Vol. 12.-P. 1365-1371.

51. Brenner, M. Identification of a putative second T cell receptor / M. Brenner, J. McLean, D. Dialynas et al. //Nature. - 1986. - Vol. 322. - P. 145-149.

52. Chaussabel, D. Unique gene expression profiles of human macrophages and dendritic cells to phylogenetically distinct parasites / D. Chaussabel, R.T. Semnani, M.A. McDowell et al.//Blood.-2003.-Vol.102.-P. 672-681.

53. Cheng-Mayer, E. Viral determinants of human immunodefciency virus type 1 T-cell or macrophage tropism, cytopathogenicity, and CD4 antigen modulation / E. Cheng-Mayer, M. Quiroga, J.W. Tung et al. // J. Virol. - 1990. - Vol. 64. - P. 43904398.

54. Chouquet, C. Correlation between breadth of memory HIV-specific cytotoxic T cells, viral load and disease progression in HIV infection / C. Chouquet, B. Autran, E. Gomard et al.// AIDS. - 2002. - № 16. - P. 2399-2407.

55. Chun, T.W. Quantification of latent tissue reservoirs and total body viral load in HIV-1 infection / T.W. Chun, L. Carruth, D. Finzi et al. // Nature. - 1997. - Vol. 387.-P. 183-188.

56. Cicala, C. HIV envelope induces a cascade of cell signals in non-proliferating target cells that favor virus replication / C. Cicala, J. Arthos, S.M. Selig et al. // The Proceedings of the National Academy of Sciences Online (U.S.). - 2002. — Vol. 99.-P. 9380-9385.

57. Coberley, C.R. Impact on genetic networks in human macrophages by a CCR5 strain of human immunodeficiency virus type 1 / C.R. Coberley, J.J. Kohler, J.N. Brown et al. // Journal of Virology. - 2004. - Vol. 78. - P. 11477-11486.

58. Cocchi, C. Identification of RANTES, MIP-1 alpha, and MIP-1 beta as the major HTV-suppressive factors produced by CD8+ T cells / F. Cocchi, A. DeVico, A. Garzino-Demo et al. // Science. - 1995. - Vol. 270. -P. 1811-1815.

59. Collins, K.L. HIV-1 nef protein protects infected primary cells against killing by cytotoxic T lymphocytes / K.L. Collins, B.K. Chen, B.D. Walker et al. // Nature. - 1998. - Vol. 391. - P. 397-401.

60. Coutlee, F. Coamplification of HIV type 1 and beta-globin gene DNA sequences in a nonisotopic polymerase chain reaction assay to control for amplification affiency / F. Coutlee, Y. He, P. Saint-Antoine et al. // AIDS Res. Hum. Retroviruses. -1995. -№ 11.-P. 363-371.

61. Covvadia, H. Antiretroviral agents - how best to protect infants from HIV and save their mothers from AIDS / H. Covvadia // N. Engl. J. Med. - 2004. - Vol. 351, № 3. - P. 289-292.

62. Cozzi-Lepri, A. Evolution of drug resistance in HIV-infected patients remaining on a virologically failing combination antiretroviral therapy regimen / A. Cozzi-Lepri, A.N. Phillips, L. Ruiz et al. // AIDS. - 2007. - Vol. 21. - P. 721-732.

63. Dalgleish, A.G. The CD4 (T4) antigen is an essential component of the receptor for the AIDS retrovirus / A.G. Dalgleish, P.C. Beverle., P.R. Clapham et al. // Nature. - 1984. - Vol. 312. - P. 763-767.

64. Das, H. MICA engagement by human Vgamma2Vdelta2 T cells enhances their antigen-dependent effector functions / H. Das, V. Groh, C. Kuijl et al. // Immunity. -2001.-Vol. 15.-P. 83-93.

65. Das, S.R. Biology of the HIV Nef protein / S.R. Das, S. Jameel // Indian J. Med. Res.-2005.-Vol. 121.-P. 315-332.

66. Davis, M.M. T-cells antigen receptor genes and T-cell recognition / M.M. Davis, PJ. Bjorkman //Nature. - 1988. - Vol. 334, № 6181. - P. 395-402.

67. Deng, H.K. Expression cloning of new receptors used by simian and human immunodeficiency viruses / H.K. Deng, D. Unutmaz, V.N. Kewalramani et al. // Nature. - 1997. - Vol. 388. - P. 296-300.

68. Di Nicola, M. Qantization of CD34+ peripheral blood hematopoietic progenitors for autografting in cancer patients / M. Di Nicola, S. Siena, M. Bregni et al. // Int. J. Artif. Organs. - 1993. - № 5. - P. 80-82.

69. Donaghy, H. Loss of blood CDllc(+) myeloid and CD1 lc(-) plasmacytoid dendritic cells in patients with HIV-1 infection correlates with HIV-1 RNA virus load / H. Donaghy, A. Pozniak, B. Gazzard et al. // Blood. - 2001. - Vol. 98. - P. 2574.

70. Egger, M. Prognosis of HIV-1-infected patients starting highly active antiretroviral therapy: a collaborative analysis of prospective studies / M. Egger, M. May, G. Chene et al. // Lancet - 2002. - Vol. 360. - P. 119-129.

71. Egger, M. Antiretroviral therapy in resource-poor settings: scaling up inequalities? / M. Egger, A. Boulle, M. Schechter et al. // International Journal of Epidemiology. - 2005. - Vol. 34. - P. 509-512.

72. Ellery, P.J. The CD 16+ Monocyte Subset Is More Permissive to Infection and Preferentially Harbors IiIV-1 In Vivo / P.J. Ellery, E. Tippett, Y.-L. Chiu et al. // Journal of Immunology.- 2007. -Vol. 178, № 10.-P. 6581-6589.

73. Embretson, J. Massive covert infection of helper T lymphocytes and macrophages by HIV during the incubation period of AIDS / J. Embretson, M. Zupancic, J.L. Ribas et al. // Nature. - 1993. - Vol. 362. - P. 359-362.

74. Faucher, J-L. "6 markers/5 colors" extended white blood cell differential by flow cytometry / J-L. Faucher, C. Lacronique-Gazaille, E. Frebet et al. // Cytometry Part A. - 2007. - Vol. 71A,№ ll.-P. 934-944.

75. Fauci, A.S. The acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) / A.S. Fauci, H.C. Lane // Harrison's principles of internal medicine. - 1991. - P. 1402-1410.

76. Fauci, A.S. Immunopathogenic mechanisms of HIV infection /A.S. Fauci, G. Pantaleo, S. Stanley et al. // Ann. Intern. Med. - 1996. - Vol. 124. - P. 654-663.

77. Fauci, A.S. Human immunodeficiency virus (HIV) disease: AIDS and related disorders / A.S. Fauci, H.C. Lane // Harrison's principles of internal medicine. -1997.-P. 1791-1856.

78. Fischer-Smith, T. CD163/CD16 coexpression by circulating monocytes/macrophages in HIV: potential biomarkers for HIV infection and AIDS progression / T. Fischer-Smith, E.M. Tedaldi, J. Rappaport // AIDS Res. Hum. Retroviruses. - 2008. - Vol. 24. - P. 417-421.

79. Freedberg, K.A. The cost effectiveness of combination antiretroviral therapy for HIV disease / K.A. Freedberg, E. Losina, M.C. Weinstein et al. // New England Journal of Medicine. - 2001. - Vol. 344. - P. 824-831.

80. Gallo, R.C. Isolation of human T-cell leukemia virus in acquired immune deficiency syndrome (AIDS) / R.C. Gallo, P.S. Savin, E.P. Gelmann et al. // Science. -1983. - Vol. 220. - P. 865-867.

81. Gandhi, R.T. HIV-1 directly kills CD4+ T cells by a Fas-independent mechanism / R.T. Gandhi, B.K. Chen, S.E. Straus et al. // J. Exp. Med. - 1998. - Vol. 187. - P. 1113-1122.

82. Gendelman, H.E. A selective defect of interferon alpha production in human immunodeficiency virus-infected monocytes / H.E. Gendelman, R.M. Friedman, S. Joe et al. // Journal of Experimental Medicine. - 1990. - Vol. 172. - P. 1433-1442.

83. Ganesh, L. The gene product murrl restricts HIV-1 replication in resting CD4+ lymphocytes / L. Ganesh, E. Burstein, A. Guha-Niyogi et al. // Nature. - 2003. -Vol. 426.-P. 853-857.

84. Giri, M.S. Circulating monocytes in HIV-1-infected viremic subjects exhibit an antiapoptosis gene signature and virus- and host-mediated apoptosis resistance / M.S. Giri, M. Nebozyhn, A. Raymond et al. // Journal of Immunology. -2009. - Vol. 182. - P. 4459-4470.

85. Goldie, S.J. Cost-effectiveness of HIV treatment in resource-poor settings -the case of Côte d'Ivoire / S.J. Goldie, Y. Yazdanpanah, E. Losina et al. // New England Journal of Medicine.- 2006. -Vol. 355.-P. 1141-1153.

86. Gougeon, M.L. Programmed cell death in peripheral lymphocytes from HIV-infected persons: increased susceptibility to apoptosis of CD4 and CD8 T cells correlates with lymphocyte activation and with disease progression / M.L. Gougeon, H. Lecoeur, A. Dulioust et al. // J. Immunol. - 1996. - Vol. 56. - P. 3509-3520.

87. Greub, G. Clinical progression, survival, and immune recovery during antiretroviral therapy in patients with HIV-1 and hepatitis C virus coinfection: the Swiss HIV Cohort Study / G. Greub, B. Ledergerber, M. Battegay et al. // Lancet. - 2000. -Vol. 356.-P. 1800-1805.

88. Grossmam, Z. Pathogenesis of HIV-infection: what the virus spares is as important as what it destroys / Z. Grossmam, M. Meier-Schellersheim, W.E. Paul et al. // Nat. Med. - 2006. - Vol. 12. - P. 289-295.

89. Hammer, S.M. Treatment for adult HIV infection: 2006 recommendations of the International AIDS Society - USA panel / S.M. Hammer, M.S. Saag, M. Schechter et al. // The Journal of the American Medical Association. - 2006. - Vol. 296.-P. 827-843.

90. Hammer, S.M. International AIDS Society-USA. Antiretroviral treatment of adult HIV infection: 2008 reccomendations of the International AIDS Society-USA panel / S.M. Hammer, J.J. Eron, P. Jr. Reiss et al. // The Journal of the American Medical Association. - 2008. - Vol. 300, № 5. - P. 555-570.

91. Harari, A. Analysis of HIV-1 and CMV specific memory CD4 T cell responses during primary and chronic infection / A. Harari, G.P. Rizzardi, K. Ellefsen et al.//Blood.-2002.-Vol. 100.-P. 1381-1387.

92. Harrington, M. Hit HIV-1 hard, but only when necessary / M. Harrington, C.C. Carpenter//Lancet.-2000.-Vol. 355.-P. 2147-2152.

93. Heggelund, L. Stimulation of toll-like receptor 2 in mononuclear cells from HIV-infected patients induces chemokine responses: possible pathogenic consequences / L. Heggelund, J.K. Damas, A. Yndestad et al. // Clinical and Experimental Immunology. - 2004. - Vol. 138. - P. 116-121.

94. Heid, C.A. Real-time quantitative PCR / C.A. Heid // Genome Res. - 1996. - №6. - P. 986-994.

95. Heikinheimo, O. Contraception and HIV infection in women / O. Heikinheimo, P. Lahteenmaki // Human Reproduction Update. - 2009. - Vol. 15, №2. -P. 165-176.

96. Herbein, G. Distinct mechanisms trigger apoptosis in human immunodeficiency virus type 1-infected and in uninfected bystander T lymphocytes / G. Herbein, C. Van Lint, J.L. Lovett et al. // Virol. - 1998. - Vol. 72. - P. 660-670.

97. Higuchi, R. Kinetic PCR Analysis: Real-time monitoring of DNA

amplification reactions / R. Higuchi // Biotechnology. - 1993. -№11. - P. 1026-1030.

98. Hughes, M.D. Monitoring plasma HIV-1 RNA levels in addition to CD4 + lymphocyte count improves assessment of antiretroviral therapeutic response. ACTG 241 protocol virology substudy team / M.D. Hughes, V.A. Johnson, M.S. Hirsch et al. // Annals of Internal Medicine. - 1997. - Vol. 126. - P. 929-938.

99. Jaworowski, A. Normal CD 16 Expression and Phagocytosis of Mycobacterium avium Complex by Monocytes from a Current Cohort of HIV-1— Infected Patients / A. Jaworowski, P. Ellery, C.L. Maslin et al. // The Journal of Infectious Diseases. - 2006. - Vol. 193. - P. 693-697.

100. Kari, L. Classification and prediction of survival in patients with the leukemic phase of cutaneous T cell lymphoma / L. Kari, A. Loboda, M. Nebozhyn et al. // Journal of Experimental Medicine. - 2003. - Vol. 197. - P. 1477-1488.

101. Kim, W.K. Monocyte heterogeneity underlying phenotypic changes in monocytes according to SIV disease stage / W.K. Kim, Y. Sun, H. Do et al. // Journal of Leukocyte Biology. - 2010. - Vol. 87. - P. 557-567.

102. Kirchhoff, F. Brief report: Absence of intact nef sequences in a long-term survivor with nonprogressive HIV-1 infection / F. Kirchhoff, T.C. Greenough, D.B. Brettler et al. // N. Engl. J. Med. - 1995. - Vol. 332. - P. 228-232.

103. Klein, M.B. The impact of hepatitis C virus coinfection on HIV progression before and after highly active antiretroviral therapy / M.B. Klein, R.G. Lalonde, S. Suissa // Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes. - 2003. -Vol. 33.-P. 365-372.

104. Kumarasamy, N. High frequency of clinically significant mutations after first-line generic highly active antiretroviral therapy failure: implications for second-line options in resource-limited settings / N. Kumarasamy, V. Madhavan, K.K. Venkatesh et al. // Clin. Infect. Dis. - 2009. - Vol. 49. - P. 306-309.

105. Lane, LLC. Correlation between immunologic function and clinical subpopulations of patients with the acquired immune deficiency syndrome / H.C. Lane, H. Masur, E.P. Gelmann et al. // Am. J. Med. - 1985. - Vol. 78. - P. 417-422.

106. Lane, H.C. The generation of CD4 T lymphocytes in patients with HIV infection / H.C. Lane // J. Biol. Regul. Homeostatic Agents. - 1995. - Vol. 9. - P. 107109.

107. Lange, C.G. Nadir CD4 + T-cell count and numbers of CD28 + CD4 + T-cells predict functional responses to immunizations in chronic HIV-1 infection / C.G. Lange, M.M. Lederman, K. Medvik et al. // AIDS. - 2003. - Vol. 17. - P. 2015-2023.

108. Lederman, M.M. Immune restoration with antiretroviral therapies: implications for clinical management / M.M. Lederman, H. Valdez // The Journal of the American Medical Association. - 2000. - Vol. 284. - P. 223-228.

109. Levy, J. A. Controlling HIV pathogenesis: the role of the noncytotoxic anti-HIV response of CD8+ T cells / J.A. Levy, C.E. Mackewicz, E. Barker // Immunol. Today. - 1996. - Vol. 17. - P. 217-224.

110. Liao, F. STRL-33, a novel chemokine receptor-like protein, functions as a fusion cofactor for both macrophage-tropic and T cell line-tropic FIIV-1 / F. Liao, G. Alkhatib, K.W.C. Peden et al.// J. Exp. Med. - 1997. - Vol. 185. - P. 2015-2023.

111. Lichterfeld, M. HIV-1 specific cytotoxicity is preferentially mediated by a subset of CD8+ T cells producing both interferon gamma and tumor necrosis factor alpha / M. Lichterfeld, X.G. Yu, M.T. Waring et al.// J. Exp. Med. - 2004. - Vol. 104. -P. 487-494.

112. Liu, S.L. Divergent patterns of progression to AIDS after infection from the same source: HIV type 1 evolution and antiviral responses / S.L. Liu, T. Schacker, L. Musey et al. // J. Viral. - 1997. - Vol. 71. - P. 4284-4295.

113. Luider, J. Impact of the new Beckman Coulter Cytomics FC 500 5-color flow cytometer on a regional flow Cytomerty clinical laboratory servise / J. Luider, M. Cyfra, P. Johnson et al. // Laboratory Hematology. - 2004. - Vol.10. - P. 102-108.

114. Mariani, R. Species-specific exclusion of APOBEC3G from IiIV-1 virions by vif / R. Mariani, D. Chen, B. Schrofelbauer et al. // Cell. - 2003. - Vol. 114. - P. 2131.

115. Mazzoli, S. HIV-specific mucosal and cellular immunity in HIVseronegative partners of HIV-seropositive individuals / S. Mazzoli, D. Trabattoni, S. Lo Caputo et al. // Nat. Med. - 1997. - № 3. - P. 1250-1257.

116. McElrath, M.J. Mononuclear phagocytes of blood and bone marrow: comparative roles as viral reservoirs in human immunodeficiency virus type 1 infections / M.J. McElrath, J.E. Pruett, Z.A. Cohn // The Proceedings of the National Academy of Sciences Online (U.S.). - 1989. - V. 86. - P. 675-679.

117. McMichael, A.J. Cellular immune responses to HIV / A.J. McMichael, S.L. Rowland-Jones // Nature. - 2001. - Vol. 410. - P. 980-987.

118. Mellors, J.W. Plasma viral load and CD4 + lymphocytes as prognostic markers of HIV-1 infection / J.W. Mellors, A. Munoz, J.V. Giorgi et al. // Annals of Internal Medicine. - 1997. - Vol. 126. - P. 946-954.

119. Menz, C. Dendritic cell maturation by innate lymphocytes: coordinated stimulation of innate and adaptive immunity / C. Menz, R. Steinman, S. Fujii // J. Experimental Medicine. - 2005. - Vol. 202. - P. 203-207.

120. Miller, R.H. HIV accessory proteins as therapeutic targets / R.H. Miller, N. Sarver // Nat. Med. - 1997. -№ 3. - P. 389-394.

121. Mocroft, A. Normalization of CD4 counts in patients with HIV-1 infection and maximum virological suppression who are taking combination antiretroviral therapy: an observational cohort study / A. Mocroft, A.N. Phillips, J. Gatell et al. // Lancet. - 2007. - Vol. 370. - P. 407-413.

122. Napravnik, S. Gender difference in HIV RNA levels: a meta-analysis of published studies / S. Napravnik, C. Poole, J.C. Thomas et al. // Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes. - 2002. - Vol. 31. -P. 11-19.

123. Noraz, N. HlV-induced apoptosis of activated primary CD4+ T lymphocytes is not mediated by Fas-Fas ligand / N. Noraz, J. Gozlan, J. Corbeil et al. // AIDS. - 1997. - Vol. 11. - P.1671-1680.

124. Oh, S.Y. Identification of HIV-1 envelope glykoprotein in the serum of AIDS and ARC patients / S.Y. Oh, W.W. Cruickshank, J. Raina et al. // J. Acquired Immune Defic. Syndr. - 1992. - № 5. - P. 251.

125. Olivetta, E. HIV-l Nef induces the release of inflammatory factors from human monocyte/macrophages: involvement of Nef endocytotic signals and NF-kappa B activation / E. Olivetta, Z. Percario, G. Fiorucci et al. // Journal of Immunology. -2003.-Vol. 170.-P. 1716-1727.

126. Orenstein, J.M. Macrophages as a source of HIV during opportunistic infections / J.M. Orenstein, C. Fox, S.M. Wahl // Science. - 1997. - Vol. 276. - P. 1857-1861.

127. Owens, M.A. Flow cytometry principles for clinical laboratory practice. Quality Assurance for Quantitative Immunophenotyping / M.A. Owens, M.R. Loken. -New York, 1995-25 p.

128. Pahwa, S. Pediatric acquired immunodeficiency syndrome: demonstration of B lymphocyte defects in vitro / S. Pahwa, S. Fikrig, R. Menez et al. // Diagn. Immunol. - 1986.-Vol. 4, № l.-P. 24-30.

129. Pantaleo, G. HIV infection is active and progressive in lymphoid tissue during the clinically latent stage of disease / G. Pantaleo, C. Graziosi, J.F. Demarest et al.//Nature. - 1993. - Vol. 362. - P. 355-358.

130. Pantaleo, G. The immunopathogenesis of human immunodeficiency virus infection / G. Pantaleo, C. Graziosi, A.S. Fauci // N. Engl. J. Med. - 1993. - Vol. 328. -P. 327-335.

131. Peter, F. HIV nef: The mother of all evil / F. Peter // Immunity. - 1998. -№9.-P. 433-437.

132. Rapaport, E. Mapping of HIV-1 determinants of apoptosis in infected T cells / E. Rapaport, C.R. Casella, F. Mustafa et al. // Virology. - 1998. - Vol. 252. - P. 407-417.

133. Robbins, G.K. Comparison of sequential three-drug regimens as initial therapy for fflV-1 infection / G.K. Robbins, V. De Gruttola, R.W. Shafer et al. // New England Journal of Medicine. - 2003. - Vol. 349. - P. 2293-2303.

134. Rockstroh, J.K. Influence of hepatitis C virus infection on IHV-1 disease progression and response to highly active antiretroviral therapy / J.K. Rockstroh // Journal of Infectious Diseases. -2005. - Vol. 15. - P. 992-1002.

135. Rosenberg, E.S. Vigorous HIV-1-specific CD4 T cell responses associated with control of viremia / E.S. Rosenberg, J.M. Billingsley, A.M. Caliendo et al. // Science. - 1997. - Vol. 278. - P. 1447-1450.

136. Sack, U. Multiplex analysis of cytokines in exhaled breath condensate / U. Sack, R. Schiebe, M. Wotzel et al. // Cytometry A. - 2006. - Vol. 69, № 3. - P. 169172.

137. Saha, K. Isolation of primary HIV-1 that target CD8+ T lymphocytes using CD8 as a receptor / K. Saha, J. Zhang, A. Gupta et al. // Nat. Med. - 2001. - Vol. 7. -P. 65-72.

138. Shafer, R.W. Comparison of four-drug regimens and pairs of sequential three-drug regimens as initial therapy for HIV-1 infection / R.W. Shafer, L.M. Smeaton, G.K. Robbins et al. // New England Journal of Medicine. - 2003. - Vol. 349. -P. 2304-2315.

139. Shapiro, H.M. Practical flow cytometry / H.M. Shapiro. - New York, 1995. - 542 p.

140. Sunila, I. Gpl20 is present on the plasma membrane of apoptotic CD4 cells prepared from lymph nodes of HIV-1-infected individuals: an immunoelectron microscopic study /1. Sunila, M. Vaccarezza, G. Pantaleo et al. // AIDS. - 1997. - № 11.-P. 27-32.

141. Sykes, P.J. Quantitation of targets for PCR by use of limiting dilution / P.J. Sykes, S.H. Neoh, M.J. Brisco et al. // BioTechniques. - 1995. - № 13. - P. 444-449.

142. Thibault, S. TLR2 and TLR4 triggering exerts contrasting effects with regard to HIV-1 infection of human dendritic cells and subsequent virus transfer to

CD4+ T cells / S. Thibault, R. Fromentin, M.R. Tardif et al. // Retrovirology. - 2009. - . ' Vol. 6.-P. 42.

143. Tyagib, S. Molecular beacons: probes that fluoresce upon hybridization / S. Tyagib, F.R. Kramer // Nat. Biotechnol. - 1996. - № 14. - P. 303-308.

144. Van Asten, L. Infection with concurrent multiple hepatitis C virus genotypes is associated with faster FIIV disease progression / L. Van Asten, M. Prins // AIDS. - 2004. - Vol. 18. - P. 2319-2324.

145. Williams, D.W. Mechanisms of HIV Entry into the CNS: Increased Sensitivity of HIV Infected CD 14+CD16+ Monocytes to CCL2 and Key Roles of CCR2, JAM-A, and ALCAM in Diapedesis / D.W. Williams, T.M. Calderon, L. Lopez et al. // PLoS One.-2013.-Vol. 8, №7.-P. 1-15.

146. Wu, PI. Multiple CD4 + cell kinetic patterns and their relationships with baseline factors and virological responses in HIV type 1 patients receiving highly active antiretroviral therapy / H. Wu, E. Connick, D.R. Kuritzkes et al. // AIDS Res. Hum. Retroviruses.- 2001. -Vol. 17.-P. 1231-1240.

147. Zack, J.A. HIV-1 entry into quiescent primary lymphocytes: Molecular analysis reveals a labile, latent viral structure / J.A. Zack, S.J.Arrigo, S.R. Weitsman et al. // Cell. - 1990. - Vol. 61. - P. 213-222.

148. Zhang, D. Most antiviral CD8 T cells during chronic viral infection do not express high levels of perforin and are not directly cytotoxic / D. Zhang, P. Shankar, Z. Xu et al. // Blood. - 2003. - Vol. 101. - P. 226-235.

149. Zhang, L. Quantifying residual HIV-1 replication in patients receiving combination antiretroviral therapy / L. Zhang, B. Ramratnam, K. Tenner-Racz et al. // New England Journal of Medicine. - 1999. - Vol. 340. - P. 1605-1613.

150. Ziegler Heitbrock, H.W. The novel subset of CD 14+ /CD 16+ blood monocytes exhibits features of tissue macrophages / H.W. Ziegler Heitbrock, G. Fingerle, M. Strobel et al. // European Journal of Immunology. - 1993. - Vol. 23. - P. 2053-2058.