Внутривидовое разнообразие и противораковые потенции простейшего Trypanosoma Cruzi тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Шеклакова, Лариса Андреевна

• Шеклакова, Лариса Андреевна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шеклакова, Лариса Андреевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Морфология, жизненный цикл Trypanosoma cruzi и болезнь Чагаса.

1.2. Геном.

1.3. Фенотипическая вариабельность вида Т.cruzi.

1.4. Генетическая внутривидовая неоднородность T.cruzi.

1.5. Противоопухолевые потенции жгутикового простейшего T.cruzi.

ГЛАВА 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы исследования.

2.1.1. Штаммы T.cruzi коллекции МГУ, получение к ним иммунных сывороток.

2.1.2. Изучение родства штаммов 1 -7 T.cruzi по антигенным структурам в реакции непрямой иммунофлюоресценции

РНИФ).

2.1.3. Штаммы T.cruzi и других трипаносоматид коллекции лаборатории «Генетика инфекционных заболеваний».

2.1.4. Культивирование трипаносоматид коллекции лаборатории «Генетика инфекционных заболеваний».

2.1.5. Культуры злокачественных клеток человека и их культивирование.

2.1.6. Приготовление и применение лизатов T.cruzi.

2.1.7 Оценка противоракового эффекта T.cruzi и ОН-Тат (4

Hydroxytamoscifen).

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Оценка антигенного родства штаммов 1 -7 T.cruzi коллекция МГУ).

3.2. Сравнение интенсивности специфического свечения и распределения антигенов в РНИФ в разных стациях цикла развития

Т.спш.

3.3. РНИФ эпимастигот Т.спш, обработанных трипсином.

3.4. Противораковая активность 16 клонированныштаммов штаммов Т.спш в отношении культур раковых клеток человека.

3.5. Зависимость противораковой активности Т.спш от различных факторов.

3.5.1. Зависимость противопухолевой активности Т.спш от природы раковых клеток.

3.5.2. Зависимость противопухолевой активности лизатов Т.спш от фазы роста продуцента препарата.

3.5.3. Зависимость противораковой активности лизатов Т.спш от принадлежности продуцента к определенной генетической группе.

3.6. Противоопухолевая активность микроогрганизмов, филогенетически близких Т.спш.

3.7. Сравнение противоопухолевого эффекта различных генетических групп Т.спш и препарата ОН-Тат (4-Hydroxytamoscifen).

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Внутривидовое разнообразие и противораковые потенции простейшего Trypanosoma Cruzi»

Актуальность темы. Жгутиковое простейшее Trypanosoma cruzi -возбудитель болезни Чагаса, являющейся серьезной проблемой Южной и Центральной Америки. Сложности диагностики, лечения и специфической профилактики связаны с внутриклеточной локализацией паразита в различных тканях хозяина, его антигенной вариабельностью, а также молекулярной мимикрией, свойственной этому паразиту.

Исключительный интерес представляет способность Т. cruzi подавлять опухолевый рост. Открытие противоопухолевого действия этого жгутикового простейшего (Роскин Г.И., Экземплярская Е.В.,1932) как результата развития естественных отношений паразита и хозяина, двух процессов - болезни Чагаса и злокачественного роста, много лет назад положило начало новому направлению современной онкотерапии - биотерапии злокачественных заболеваний (Роскин Г.И., Экземплярская Е.В.,1932; Роскин Г.И., Каллиникова В.Д., Лейкина М.И., 1968). На нескольких видах животных с различными опухотШГ'"~'"~было показано, что заражение Т.cruzi приводит к предпочтительному поражению трипаносомой раковых клеток перед клетками нормальными, к подавлению или полной регрессии новообразований. Эта противораковая активность T.cruzi распространяется и на злокачественные заболевания человека.

Противоопухолевая сохраняется также в убитых клетках T.cruzi. Под действием экстракта из T.cruzi происходит угнетение митотической активности, повреждение и гибель опухолевых клеток, причем действие это всегда избирательно по сравнению с клетками нормальными.

В 60-х годах на базе T.cruzi производился противораковый препарат круцин (Каллиникова В.Д. и соавт., 1994), производство которого было прекращено по причинам, далеким от науки. Искусственно прерванные на многие годы исследования противораковых свойств T.cruzi несколько лет назад были возобновлены в Московском Государственном Университете, последние публикации которых посвящены, главным образом, изучению противоопухолевых потенций различных штаммов T.cruzi.

Наряду с этим за последние 20 лет накоплен фундаментальный материал по изучению генетического разнообразия T.cruzi, позволивший разделить природные популяции этого простейшего на две основные группы, или филогенетические линии 1 и 2, - DTUi и DTU 2 (Discrete Typing Units). DTU 2, в свою очередь, подразделяется на 5 подгрупп - DTU 2 а, гь, 2с, 2d, 2е (С. Barnabe, S.Brisse and М. Tibayrenc, 2000; S.Brisse, 1998; Brisse S., Barnabe C., Tibayrenc M., 2000). Клональная структура популяций T.cruzi делает возможным сравнение биологически^/ особенностей штаммов, принадлежащих к различным генетическим группам этого простейшего.

Поскольку известно, что штаммы T.cruzi обладают различными противоопухолевыми потенциями (Каллиникова В. Д. и соавт., 1994; Каллиникова В.Д. и соавт., 1995; Каллиникова В.Д., Лейкина М.И. и соавт., 1996; Н.В. Воробьева, В.Д. Каллиникова, 1998), необходимо выяснить, различаются ли генетические группы трипаносом по противоопухолевым свойствам. Это сделает возможным выбор наиболее активного в отношении раковых клеток человека варианта T.cruzi.

Цель работы. Целью работы явилось изучение противоопухолевых потенций штаммов (клонов) разных генетических групп T.cruzi на злокачественных клеточных линиях человека, а также установление степени антигенного родства неклонированных штаммов этого простейшего, обладающими различной противораковой активностью.

Работа является результатом сотрудничества кафедры микробиологии Российского Университета дружбы народов, кафедры зоологии, сравнительной анатомии и экологии беспозвоночных МГУ им. Ломоносова и лаборатории UVR CNRS/IRD9996 "Генетика инфекционных заболеваний", Франция, Монпелье.

В задачи исследований входило:

• установить степень антигенного родства штаммов T.cruzi коллекции МГУ, обладающих различными противоопухолевыми потенциями;

• выявить наиболее активную в отношении раковых клеток человека генетическую группу T.cruzi;

• изучить влияние T.cruzi на раковые клеточные линии, обладающие различной степенью злокачественности;

• установить корреляцию между известными биологическими свойствами и степенью противораковой активности различных штаммов T.cruzi;

• изучить противоопухолевое воздействие видов, филогенетически близких T.cruzi;

• сравнить противораковое воздействие на клетки рака молочной железы лизатов T.cruzi и препарата OH-Tam (4-Hydroxytamoscifen).

Научная новизна. Впервые была исследована противоопухолевая У активность различных штаммов T.cruzi в зависимости от их генотипической принадлежности. Выявлена наиболее активная в отношении раковых клеток человека генетическая группа этого простейшего.

Выявлена корреляция противоракового эффекта с другими биологическими свойствами T.cruzi (скорость роста эпимастигот и интенсивность их трансформации в метациклические трипомастиготы, чувствительность к комплементу и др.).

Впервые установлена положительная зависимость между степенью злокачественности клеточной линии и противораковой активностью T.cruzi.

Изучено противоопухолевое воздействие видов, филогенетически близких T.cruzi (Leishmania, T.dionisii, T.c.marinkellei).

Впервые проведена сравнительная оценка противоракового воздействия на клетки рака молочной железы лизатов T.cruzi и антиэстрогенного препарата OH-Tam (4-Hydroxytamoscifen).

Впервые показана различная степень антигенного родства штаммов T.cruzi, обладающих различными противоопухолевыми потенциями.

Научно-практическое значение работы. Полученные данные вносят определенный вклад в изучение феномена противораковой активности T.cruzi и его связи с генетической вариабельностью этого вида. Была выявлена наиболее активная в отношении раковых клеток человека генетическая популяция

Т.спш, что может быть использовано в разработке противоопухолевого препарата на базе этого простейшего.

Результаты исследований, показавшие зависимость интенсивности противоопухолевого воздействия Т.спш от степени злокачественности клеточных линий, в дальнейшем могут быть использованы в практической онкологии для выбора оптимальных методов лечения злокачественных новообразований.

Результаты сравнения противоракового воздействия Т.спш и препарата ОН-Тат в последующем могут быть использованы при разработке метода их сочетанного применения в онкотерапии как цитолитического и цитостатического факторов.

На защиту выносятся: 1. Данные о степени антигенного родства штаммов Т.спш коллекции МГУ.

2. Данные о противораковой активности различных генетических групп Т.спш и филогенетически близких видов на культурах злокачественных опухолей человека.

3. Результаты сравнения противораковой активности генетических групп Т.спш и антиэстрогенного препарата ОН-Тат.

Апробация диссертационной работы. Результаты исследований и основные положения диссертации доложены и обсуждены на семинарах лабораторий «Генетика инфекционных заболеваний», Института исследований для развития и «Молекулярная и клеточная эндокринология рака», Национального института здоровья и медицинских исследований, Франция (2001, Монпелье) и на научных конференциях кафедры микробиологии, иммунологии и вирусологии РУДН (2000, 2001, Москва).

Объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, главы собственных исследований и обсуждения полученных результатов, выводов и библиографического указателя. Материалы диссертации изложены на 91 странице машинописного текста, включая 12 таблиц, 19 рисунков. Список литературы содержит 133 работ, из 14 них отечественных и 119 зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Шеклакова, Лариса Андреевна

выводы

1. Выявлено антигенное родство штаммов 4, 5, 6, обладающих сходными достаточно сильными противоопухолевыми потенциями; показана антигенная обособленность для штамма 3, обладающего наименьшей противоопухолевой активностью in vitro и in vivo.

2. Интенсивное свечение цитоплазматических гранул в присутствии иммунной сыворотки было показано для штаммов 1, 2, 4, 6, обладающих выраженным иммуномодулирующим воздействием на лимфоциты человека; интенсивное свечение поверхностной мембраны трипаносом проявляли вирулентные штаммы.

3. Более выраженное специфическое свечение в РНИФ трипомастиготных форм по сравнению с эпимастиготными можно объяснить известными гораздо большими противоопухолевыми потенциями первых.

4. Все изученные клонированные штаммы T.cruzi обладали противораковой активностью in vitro.

5. Показана положительная зависимость между степенью злокачественности клеточной линии и противораковой активностью T.cruzi.

6. Генетическая группа DTUi T.cruzi в максимальной дозе оказывает больший противораковый эффект на клетки MCF-7, чем антиэстрогенный препарат ОН-Тат.

7. Показана зависимость интенсивности противоракового воз/действия генетической группы DTU2 T.cruzi от фазы роста культуры.

8. Более сильный противоопухолевый эффект группы БТИ! по сравнению с группой 1)'Ш2 был выражен в экспоненциальной фазе роста трипаносом.

9. Отличия групп ЭТО! и БТИг по ряду биологических свойств коррелирует с разницей в их антибластомной активности.

10. Различный противоопухолевый эффект групп БТи1 и БТи2 (филогенетических линий 1 и 2) Т.сггш отражает клональный характер эволюции этого вида.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шеклакова, Лариса Андреевна, 2001 год

1. Н.В. Воробьева, В.Д. Каллиникова. Влияние лизатов эпимастиготных форм Trypanosoma cruzi на пролиферацию лимфоцитов человека in vitro. Вестн. Моск. Ун-та. Сер.16, Биология. 1998. №2, стр. 16-21.

2. Верховский Н.А. Опыт поликлинического применения круцина у онкологических больных IV стадии. Противораковый антибиотик круцин. М. 235-243.

3. Данилова Н.М. 1968. Своеобразие тропизма штамма Trypanosoma cruzi. Противораковый антибиотик круцин. М.С. 20-24.

4. Клюева Н.Г., Роскин Г.И. Биотерапия злокачественных опухолей. М. Изд-во АМН СССР, 1946.

5. Кузьмин Е.В., Зайцева Т.Н. Структура и функции кинетопластной ДНК трипаносоматид. Биохимия. Т. 51, вып.6, стр. 883-895.

6. В.Д. Каллиникова, П.В.Матекин, Т.А. Оглоблина, М.И. Лейкина, Л.С. Погодина, А.Ф. Кононенко, Н.М. Соколова. Противораковые свойства жгутикового простейшего Trypanosoma cruzi CHAGAS, 1909. 5.

7. Противоопухолевые потенции культуральных форм Trypanosoma cruzi. Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 16, Биология. 1997. №3

8. В.Д. Каллиникова. Антибластомные свойства паразитического простейшего T.cruzi. Вестник ветеринарии. - №7,- 1998. - стр. 39-41.

9. Роскин Т.П., Экземплярская Е.В.,1932 Протозойная инфекция и экспериментальный рак. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, 9, № 3, 339-341.

10. Г.И. Роскин, В.Д.Каллиникова, С.В.Кожухова, С.М. Коломина, I Л.В.Баличева. Цитохимическая характеристика стадий жизненного цикла ' Trypanosoma cruzi. 1968. Своеобразие тропизма штамма Trypanosoma cruzi.

11. Противораковый антибиотик круцин. М.С. 66-76.14. .Сухарева Н.И. Биотехнология получения липидных препаратов из культур жгутиконосцев. Простейшие объекты биотехнологии. М. 1989, 6578.

12. Abel, L.C.J. Т cell molecular mimicry between cardiac myosin and T.cruzi protein B13: B13-driven T cell clone recognizes cardiac myosin. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

13. L.C.J. Abel. Molecular mimicry between cardiac myosin and Trypanosoma cruzi antigen В13: identification of a B13-driven human T cell clone that recognizes cardiac myosin. Braz. J. Med. Biol. Res., November 1997. Volume 30 (11) 1305-1308

14. Antonio Alcina and Manuel Fresno. A Tubulin related 55 kilodaldon surface antigen recognized by different Trypanosoma cruzi stage-specific monoclonal antibodies from infected mice. Molecular and Biochemical Parasitology, 1988, 29, 181-190.

15. Abrahamson, I.A. &Coffman, R.L. IL-10, TNF, IFN-g and IL-12 regulate innate and acquired immunity to Trypanosoma cruzi infection. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

16. Antonio Alcina and Manuel Fresno, A tubulin-related 55 kilodalton surface antigen recognized by different Trypanosoma stage-specific monoclonalantibodies from infected mice, Molecular and Biochemical Parasitology, 29 (1988) 181-190.

17. Andrade S.G. Tentetive of grouping different Trypanosoma cruzi strains in some types. Rev.Inst.Med.Trop., 1976, 18, pp.140-141.

18. Andrade V., Brodskyn c., Andrade S.G. Correlation between isoenzyme pattern and biological behavior of different strains of T.cruzi. Trans.R.Soc.Trop.Med.Hyg., 1983, 77(6), pp.796-799.

19. Andrade S.G., Andrade V., Broskyn c., Magalhaes J.B., Netto M.B. Immunological response of Swisse mice to infection with three different strains of T.cruzi. Ann.Trop.Med.parasitol., 1985, 79(4), pp.397-407.

20. Andrade, S.G. Biological characterization of strains of Trypanosoma cruzi. Congresso International sobre Doenca de Chagas, rio de janeiro, 1979, 9-13.

21. Andrade S.G. Morphological and behavioural characterization of Trypanosoma cruzi strains. Revista da Sociedade Brasiliera de medicine Tropical , 1985, 18, 39-46.

22. Asahi H, Kawabata M, Moribayashi A, Okumura H. Cytotoxic factors toward neuroblastoma cells in trypomastigotes of Trypanosoma cruzi. Can J Microbiol 1986 Sep; 32(9) :711-8 .

23. Araujo LC et al. CD4+ T cells from chronic chagasic patients against self lisosomal cathepsins: molecular mimicry? Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

24. Bice D.E. and Zeledon, R. Comparison of infectivity of strains of trypanosoma cruzi. Journal of Parasitilogy, 1970, 56, 663-670.

25. Bogiolo A.R. Comparative behavioural and life cycle studies on different zymodemes of trypanosoma cruzi. Thesis for the degree of Doctor of Philosophy of the university of London, London School of Hygiene and Tropical Medicine, Angleterre, 1983.

26. Brener, Z. Comparative studies of different strains of Trypanosoma cruzi. Annals of Tropical Medicine and Parasitology, 1965, 59,19-25.

27. Brener, Z. Significance of morphologic variation of bloodstreann forms. Panamerican health Organization Scientific Publication, Washington, 1976, 318, 129-131.

28. Brener, Z. General review on Trypanosoma cruzi classification and taxonomy. Revista da Socedade Brasileira de Medicina tropical .1985, 18, 1-8.

29. Ben Abderrazak S., Guerrini F., Mathieu-Daude F., Truc p., Neubauer K., Barnabe C. Et Tibayrenc M. Isoenzyme electrophoresis for parasite characterization. Meth.Mol.Biol., 1993, 21, 27, pp.361-382.

30. Borst P., Hoeijmkers J.N.J., Biochim. et biophys. acta, 1978, V.521, №2, p.407-411

31. Bower S.M. et Woo P.T.K. Two new species of trypanosomes (subgenus Schizotrypanum) in bats from southern Ontario. Can.J.Zool. 1980, 59, 530-545.

32. Bellio M. Glycoinositol phospolipid (GipL) isolated from Trypanosoma cruzi induces cell cycle arrest and increased IL-2 secretion by a murine T-cell hybridoma. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996

33. Boufa E. et al. Autoantibodies in Chagas" disease: an antibody cross-reactive with human and T.cruzi ribosomal proteins. J. Immunol. Vol.150, 3917-3930.

34. S.Brisse. Phylogénie moléculaire des clones naturels de Trypanosoma cruzi, Thèse, 1998, document Orstom Montpellier, 1998, №2.

35. Breniere S.F., Braquemond P., Solari A.,Agnese Y.F., Tibayrenc M. An isoenzyme study of naturally occuring clones of T.cruzi isolated from both S(?)ides of the West Andes Highland. Trans. Roy. Soc. Trop. Med. a. Hyg. 1991. 85, 1:62-66.

36. C. Barnabé, S.Brisse and M. Tibayrenc. Population structrure and genetic typing of Trypanosoma cruzi, the agent of Chagas disease : a multilocus enzyme electrophoresis approach. Parasitology (2000), 120, 513-526.

37. Brisse S., Barnabé C., Tibayrenc M. Identification of six trypanosoma cruzi phylogenetic lineages by random amlified polymorphic DNA and multilocus enzyme electrophoresis. Int J Parasitol 2000; 30 :35 44.

38. M.E. Begin, G. Ellis, D.F. Horrobin, Polyunsaturated fatty acid-induced cytotoxicity against tumor cells and its relationship to lipid peroxidation, J. Natl. Cancer Inst. 80 (1988) 188-194.

39. Castro C., Craig S.P. et castaneda M. Genome organization and ploidy in Trypanosoma cruzi. Mol Biochem Parasitol, 1981, 4, pp. 273-282.

40. Engman D.M., Reddy L.V., Donelson J.E. et Kerchoff L.V. Trypanosoma cruzi exhibits inter- and intra-strain heterogeneity in molecular karyotype and chromosomal gene location. Mol.Biochem.Parasitol., 1987, 22, 115-123.

41. Carneiro M., Romahna A.J. et Chiari E. Biological characterization of trypanosoma cruzi strains from different zymodemes and schizodemes. Mem. Inst. Oswaldo cruz, 1991 86, 4, pp.387-393.

42. Cleonice A.M. et al. Glycoinositolphospholipids (GIPL) purified from Trypanosoma cruzi stimulate Ig production in vitro. J. Immunol., Vol. 157 (11), p. 4996-5001, 1996.

43. Cunha -Neto, E. Natural anti-myosin autoantibodies are mainly directed to conserved epitopes of globular head (SI) region of myosin heavy chain. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

44. Dr. Campbell CM 168 Week 3 - 27th January 1999 - Lecture 2 -Trypanosoma cruzi - Attachment to and entry into the host cell.

45. Cunha-Neto, E. et al. Natural anti-miosin autoantibodies are mainly directed to conserved epitopes of globular head (SI) region of miosin heavy chain Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

46. Cunha-Neto, E. et al. Cytokine environment in heart lesions of human Chagas" disease: a functional study with heart-infiltrating T cell lines. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

47. Conzalez G. Detection of cruzipain, the major cysteine proteinaze from Trypanosoma cruzi and its C-terminal extension in biological fluids during experimental infection in mice. Scand. J. Immunol. 1996:44:122-128.

48. Costa F. Et al. DNA immunization against Trypanosoma cruzi infection. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

49. Coudert J. Клинические и экспериментальные исследования действия лиофилизированногот экстракта T.cruzi на некоторые формы рака. «Антибиотики», 1961, т. 6, № 2.

50. V.R. Durgam, G. Fernandes, The growth inhibitory effect of conjugated linoleic acid on MCF-7 cells is related to estrogen response system, Cancer Lett. 116(1997) 121-130.

51. Dvorak J.A., hartman D.L., Miles M.A. Trypanosoma cruzi: Correlation of growth kinetics to zymodeme type in clones derived from various sources. J.protozool., 1980, 27 (4) pp.472-474.

52. Doyle P.S., Dvorak j.A., Engel J.C. Trypanosoma cruzi : Quantification and analysis of the infectivity of cloned stocks. J.protozool., 1984, 31(2), pp.280-283.

53. Dvorak j.A. The natural heterogeneity of trypanosoma cruzi: Biological and medical implications. 1984, J.cell.biochem., 24, pp.357-371.

54. Duranti, M. Immunodominant epitope in B13 protein : antigenicity correlates with peptide structure in solution. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

55. De Barros-Mazon, S. IL-12 enhances proliferation of peripheral blood mononuclear cells from chagasic pations to Trypanosoma cruzi antigen. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

56. Esteves MG, Gonzales-Perdomo M, Alviano CS, Angluster J, Goldenberg S. Changes in fatty acid composition associated with differentiation of Trypanosoma cruzi. FEMS Microbiol Lett 1989 May ; 50(1-2) :31-4 .

57. Freire de Lima, C. Signaling of macrophage responses induced by the purified glycoinositol phospholipid (GIPL) from trypanosoma cruzi. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

58. Fernandes,IL.C.Abastos, I.M.D.a, Lauria-pires,l.a, Vexenat, A.C.a. The Alkaline 120 kDa and the ATP-activated proteses of Trypanosoma cruzi are immunogennic in human infection. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996

59. Fred R. Miller. Xenograft models of premalignant breast disease. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia, Vol.5, №4, 2000.

60. Frach A.C.C., Sanches D.O., Stoppani A.O.M. Biochim. et biophys. Acta, 1984, V.782, №1, p.26-33

61. Fausto G. et al. Characterisation of stages and strains of Trypanosoma cruzi by analysis of cell membrane components. J. Immunology, Vol.127. № 3, 1981

62. Gibson W.C. et Miles M.A. The karyotype and ploidy of Trypanosoma cruzi. EMBO 1986, J. 5, 1299-1305.

63. Galliard H., Brumpt L.C., Martinez R. Infections expérimentales à Trypanosoma cruzi Chagas chez l'homme à propos de la biotherapie du cancer. Bull. Soc. Pathol.Exot.1950, 43, № 3-4, 204-216.

64. Ribeiro Gomes et al. Cruzipain immunodominant T cell peptide is taken up by human macrofages and drived to miic vesicles. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

65. Gomes M.L., Romanha A.J., goncalves A.M., chiari E. Stability of isoenzyme and kinetoplast DNA (k-DNA) patterns in successivelycloned T.cruzi populations. Mem.Inst.Oswaldo Cruz, 1991, 86(4), oct., pp. 379-385.

66. Henriksson J., Pettersson U. Et Solari A. Trypanosoma cruzi: Correlation between karyotype variability and isoenzyme classification. Exp.parasitol., 1993, 77, pp.334-348.

67. Hendricksson J. Et al. Trypanosoma cruzi: correlation between karyotipe variability and isoenzyme classification. Exp. Parasitol. 77, 334-348, 1993

68. Hansen D.S. An immunoaffmity-purified Trypanosoma cruzi antigen suppresses cellular proliferation through a TGF-beta-mediated mechanism. Scand J Immunol, 1998 May, 47:5, 509-16

69. Paul A.Haynes. Subcellular localization of Trypanosoma cruzi glycoprotein GP72. J. of Cell Science. Vol. 109 (13) 1996.

70. Hontebeyrie-Joskowicz, M. Immunopathologie de la trypanosomiase américaine. Bulletin Institut Pasteur. 1993, 91, 75-85.

71. Daniel F. Hoft, John E. Donelson and V. Kirchhoff "Repetitive protein antigens of Trypanosoma cruzi have diverse intracellular locations" -J.Parasitol.-1995. - V.81. - № 4. - P.549-554.

72. Itow, S. and Camargo, E.P. Proteolytic activities in cell extracrs of Trypanosoma cruzi. J.Protozool. 24, 591-595.

73. Kaneda Y, Nagakura K, Goutsu T. lipid composition of three morphological stages of Trypanosoma cruzi. Comp Biochem Physiol B 1986 ;83(3) :533-6.

74. Krautz, G.M. Utility of pooled recombinant 70 kDa heat-shock proteins for serodiagnosis of Trypanosoma cruzi infection. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

75. Kirchoff L.V., Engel J.C., Dvorak J.A., Sher A. Strains and clones of T.cruzi differ in their expression of a surface antigen identified by a monoclonal antibody. Mol.Biochem.Parasitol., pp.81-89.

76. Kesper Jr, N. Western-blot analysis of excreted/secreted antigens from 12 Trypanosoma cruzi strains reveals conserved and polymorphic peptides. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

77. Lopes-Olmos, V. and Espinoza, B. Protective monoclonal antibodies against Trypanosoma cruzi. Memorias do Instituí Oswaldo Cruz Vol.91, Suppl.,November, 1996.

78. Laucella SA. Trypanosoma cruzi and mammalian heart cross-reactive antigens. Acta Trop, 1996 May, 61:3, 223-38.

79. Lana M.M., Silvera P.A. , Barnabe Ch., Quesney V., Noel S., Tibayrenc M. T.cruzi: Compared Vectorial Transmissibility of Three Major Clonal Genotypes by Triatoma infestans. Exp. Parasitol, 1998, 90: 20-25.

80. Laurent Jean-Pierre. Thése Comparaison des propriétés biologiques de différents clones naturels de Trypanosoma cruzi CHAGAS 1909, agent de maladie de Chagas , 1994, CEPM, IRD.

81. Lemesre J.L.,Tibayrenc M. Trypanosoma cruzi: measurement of DNA quantity in different isoenzymic strains.Ann. Soc. beige med. Trop., 1983, 63, 4: 313-317

82. Laureut Y.P., Barnabe C.,Quesney V., Noel S., Tibayrenc M. Impact of clonal evolution on the biological diversity of T. cruzi. Parasitilogy, 1997 Mar; 114 (pt3) :213-218.

83. Helen B. Macdonald, MSc, RD, FDC. Conjugated linoleic acid and Disease prevention : a review of current knowledge. J.american College of Nutrition, Vol.19, №2, 111S-118S (2000).

84. T.S. McCormick and E.C. Rowland. Trypanosoma cruzi: recognition of a 43-kDa muscle glycoprotein by autoantibodies present during murine infection. Exp. Parasitol. 77, 273-281 (1993).

85. Meló, R.C. and brener, Z. Tissu tropism of different Trypanosoma cruzi strains. Journal of Parasitology. 1978, 64, (3) 475-482.

86. Marcia F.Araguth et al. Trypanosoma cruzi metacyclic trypomastigotes: neutralization by the the stage-specific MA 1G7 and immunogenicity of 90 kDa surface antigen. Parasite immunology 1998, 10, 707-712.

87. Melo, M.B. Glycoinositolphospholipids (GIPLs) purified from trypanosoma cruzi stimulate human natural killer cells. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

88. Morrot et al. Chronic chagasic myocardiopathy in humans: identification of cruzipain antigens in inflammatory sites. Memorias do instituto Oswaldo Cruz. Vol. 91, Suppl., November, 1996.

89. C.L. Montes et al. Trypanosoma cruzi Cytosolic Alkaline antigens (FI) induce polyclonal activation in murine normal B cells. Scand. J. Immunol. 44,93100, 1996.

90. Olivas-Rubio M. Et al. A fusion protein specific Trypanosoma cruzi amastigotes induces antibodies that cross-react with a host's protein.

91. Peter J. et al. MCF-10AT : a model for the Evolution of cancer from proliferative breast disease. American Journal of Patbology, vol.148, №1, January 1996, p . :311-319.

92. K. Petry and W.C. Van Voothis. Antigens of Trypanosoma cruzi that mimic mammalian nervous tissues: investigations of their role in the autoimmune pathophysiology of chronic Chagas' disease. Res. Immunol. 1991. V. 142. №2.

93. Pereira-Chioccola, V.L. The nature of the protective immunity induced by trans-sialidase in experimental chagas" disease. Memorias do instituto Oswaldo Cruz, Vol. 91, Suppl., November, 1996.

94. Rangel, R.A., Araujo, P.M.F., Repka, D. and Costa, M.G. Trypanosoma cruzi: isolation and characterization of a proteinase. Exp. Parasitol, 1981,52, 199-209.

95. Sanchez, G., Wallace, A., Munoz, S., Venegas, J., Ortiz, S. And Asolari, A. Characterization of Trypanosoma cruzi populations by several molecular markers supports a clonal mode of reproduction

96. Stage-specific surface antigens of metacyclic Trypomastigotes of Trypanosoma cruzi identified by monoclonal antibodies. Molecular and Biochemical Parasitology, 18 (1986), 271-282.

97. Simson L. The mitochondrial genome of kinetoplastid protozoa: genomic organization, transcription, replication and evolution. Ann.Rev.Microbiol., 1987, 41, 363-382.

98. AL Sabbagh A et al. Evidence for cross-reactivity between antigen derived from Trypanosoma cruzi and myelin basic protein in experimental Chagas disease. Exp Parasitol, 1998 Jul, 89:3, 304-11

99. Tibayrenc m., Cariou, M.L., Solignac, M., dedet, J.P., Poch, O. And Desjeux, p. New electrophoretic evidence of genetic variation and diploidy in trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas" desease. Genetica, 1985 67 (3): 223-230.

100. Trejos, A., Godoy G.A., Greenblatt, H.C. and Cedillos R. Effects of temperature on morphologic variation of Schizotrypanum cruzi in tissue culture. Experimental Parasitology, 1963, 13,211-218.

101. Nobuko Yoshida et al. Metacyclic neutralizing effect of monoclonal antibody 10D8 directed to the 35- and 50-kilodalton surface glycoconjugates of Trypanosoma cruzi. Infection and Immunity, June 1989, p.1663-1667.

102. Nobuko Yoshida et al. Metacyclic neutralizing effect of monoclonal antibody 10D8 directed to the 35- and 50-kilodalton surface glycoconjugates of Trypanosoma cruzi. Infection and Immunity, June 1989, p. 1663-1667.

103. Nobuko Yoshida et al. Metacyclic neutralizing effect of monoclonal antibody 10D8 directed to the 35- and 50-kilodalton surface glycoconjugates of Trypanosoma cruzi. Infection and Immunity, June 1989, p. 1663-1667.

104. Nobuko Yoshida. Surface antigens of metacyclic Trypomastigotes of Trypanosoma cruzi. Infection and Immunity, May 1983. P. 836-839.

105. Revollo S., Laurent I.P. Oury B., Tibayrenc M. Linkage between biological properties and phylogenetic diversity of T.cruzi natural clones. 8th Int. Congr. Parasit. Izmir-Turkey, 1994 Abstr. V.2:272. Po802 (684).

106. N. V. Verbisck, S. Da-Silva and R.A. Mortara.Trypanosoma cruzi: amastigote polymorphism defined by monoclonal antibodies. Braz. J. Med. Biol. Res, December 1998, Volume 31 (12) 1583-1591

107. Santana et al., 1992, Biochem.Bioph. Res. Comm. 187, 1466

108. Santori F.R . et al. A recombinant protein based on the Trypanosoma cruzi metacyclic trypomastigote 82 kDa antigen that induces and effective immune response to acute infection. Infect. Immun., 1996 Apr, 64:4, 1093-9

109. E.L. Segura et al. Antigens of the subcellular fractions of trypanosoma cruzi. II. Flagellar and membrane fraction. J. Protozool., 1977, 24 (4), 540-543

110. Jose L. Saborio et al. Isolation and characterization of paraflagellar proteins from Trypanosoma cruzi. The Journal of Biological Chemistry., Vol. 264, № 7,

111. Ruth A. Wrightsman et al. Pure paraflagellar Rod protein protects mice against Trypanosoma cruzi infection. Infection and Immunity, Jan. 1995, p.122-125.

112. Tibayrenc M., Ward Ph., Moya A., Ayala F.J. Natural populations of Trypanosoma cruzi, the agent of Chagas disease, have a complex multiclonal structure. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 1986, V.83: 115-119.

113. Tibayrenc M., Ayala F.Y. Towards a populations genetics of microorganisms: The clonal theory of parasitic protozoa. Parasitology today, 1991, V.7 (9), 228-232.

114. Tibayrenc M., Desjeux Ph. The presence in Bolivia of two distinct zimodemes of Trypanosoma cruzi, circulating sympatrically in a domestic transmission cycle. Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 1983,77,1: 73-75.

115. Tibairenc M.,Hoffmann A., Toch O., Echalar L., le Pont F.m,lemesre Y.L, Desjeux, Ayala F.Y. Additional data on T.cruzi isozymic strains encountered in Bolivia domestic transmission cycles. Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 1986, 80, 3: 442-447.

116. Tibayrenc M., Ayala F.Y. Forte correlation entre classification isoenzymatique et variabilité de F DNA kinetoplastique chez T. cruzi. C.r. Acad. Sei.,1987, ser.3, 304, № 4: 89-95

117. Tibayrenc M., Ayala F.Y. Isozyme variability in T. cruzi, the agent of Chagas disease: genetical, taxonomical and epidemiological significance. Evolution (USA), 1988, 42, 2: 277-292.

118. Zhand Q, Tibayrenc M., Ayala F. Y. Linkage disequilibrium in natural populations of T. cruzi, the agent of Chagas disease. J. Protozool. 1988, 35, 1: 81-85.

119. Tarrieu F., Barnabec C., Banuls A.L., Tibayrenc M. Evidence by MLEE and RAPD of additional genetic variability within a major clone of T.cruzi. 8th Int. Congr. Parasit. Izmir-Turkey, 1994, Abstr. V.2:272, P08.OI (683).

120. Tibayrenc M., Breniere F., Barnabe C., Lemesre Y.Z., Echalar L., Desjeux P. Isozyme variability of T.cruzi: biological and epidemilogical significance. Ann. Soc. beige med. trop., 1985, 65, Suppl. №1:59-61.

121. Tibayrenc M. et al. Cenetic characterization of six parasitic protozooa: parity between randomprimer DNA typing and multi locus enzyme electrophoresis. Proc natl Acad Sci USA 1993, 90 :1335-9.

122. Vartak, R McCaw , CS Davis, MEC Robbns and AA Spector, y-Linolenic acid (GLA) is cytotoxic to 36 BIO malignant rat astrocytoma cells but not to 'normal' rat astrocytes. Britich journal of Cancer 1998° 77 (10), 16121620.

123. WHO 1993. Chagas'disease., Eleventh Programme Report of the UNDP/World Bank/WHO. Tropical Disease Research, Progress 1991-92, 67-75.