Получение рекомбинантного человеческого эндостатина и исследование его антиангиогенных и противоопухолевых свойств тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Позднякова, Наталья Владимировна

• Позднякова, Наталья Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Позднякова, Наталья Владимировна

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Опухолевый ангиогенез и инвазия: общие механизмы регуляции.

1.2. Краткая история развития представлений об ангиогенезе.

1.3. Эндостатин: физико-химические свойства, происхождение.

1.3.1. Коллаген XVIII.

1.3.2. Изоформы коллагена XVIII.

1.3.3. Структурная организация молекулы эндостатина.

1.3.4. Образование Р-структур.

1.4. Механизм действия и физиологические функции эндостатина.

1.4.1. Протеолитические пути получения эндостатина.

1.4.2. Рецепторы эндостатина.

1.4.3. Свойства пептидных фрагментов эндостатина.

1.5. Перспективы клинического применения эндостатина.

1.5.1. Общие подходы к антиангиогенной терапии.

1.5.2. Перспективы терапевтического использования рекомбинантного человеческого эндостатина.

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Реактивы.

2.2. Клеточные линии.

2.3. Конструирование экспрессионного вектора эндостатина человека.

2.4. Наращивание биомассы штамма-продуцента Е. coli.

2.5. Получение растворимого рекомбинантного эндостатина из штамма-продуцента Е. coli.

2.6. Получение липосомной формы эндостатина.

2.7. Получение наночастиц и определение их размеров.

2.8. Методика культивирования клеток для проведения исследований на покоящемся и пролиферирующем эндотелии

2.9. Определение ЦТА эндостатина в отношении культур клеток MCF-7, DU145, АВАЕ, SVEC4-10, bSMC и фибробластов человека.

2.10. Определение ЦТА эндостатина в отношении клеток линии HUVEC.

2.11. Оценка выживаемости клеток.

2.12. Исследование противоопухолевой активности препаратов рекомбинантного эндостатина in vivo.

2.13. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение

3.1. Конструирование экспрессионного вектора и биосинтез рекомбинантного эндостатина человека в клетках штамма-продуцента Escherichia coli JM 109.

3.2. Получение растворимого рекомбинантного эндостатина из

Е. coli.

3.2.1. Получение телец включения.

3.2.2. Солюбилизация телец включения.

3.2.3. Ренатурация эндостатина.

3.2.4. Гель-фильтрация.

3.3. Цитотоксическая активность рекомбинантного эндостатина в отношении эндотелиальных клеток линий HUVEC, АВАЕ и SVEC4-10.

3.4. Цитотоксическая активность рекомбинантного эндостатина в отношении гладкомышечных, соединительнотканных и раковых клеточных линий.

3.5. Получение наночастиц, содержащих рекомбинантный эндостатин, и исследование их терапевтического противоопухолевого потенциала в модельных экспериментах in vivo.

3.6. Получение липосомной формы рекомбинантного эндостатина и исследование ее антиангиогенной противоопухолевой активности in vivo.

3.7. Исследование возможности применения липосомной формы рекомбинантного эндостатина в схемах противоопухолевой комбинированной терапии.

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение рекомбинантного человеческого эндостатина и исследование его антиангиогенных и противоопухолевых свойств»

Раковые опухоли могут расти только при условии формирования собственной сети кровеносных сосудов, обеспечивающих опухоль кислородом и нутриентами. С тех пор, как Фолкман постулировал [46] зависимость роста опухолей от их кровоснабжения, специалисты, работающие в области молекулярной медицины, пытаются бороться со злокачественным ростом, блокируя ангиогенез - процесс образования новых опухолевых кровеносных сосудов из предсухцествующих [191]. Возможно, именно с помощью антиангиогенной терапии удастся обойти одно из главных препятствий в химиотерапии рака, состоящее в том, что злокачественные клетки быстро приобретают устойчивость к противоопухолевым препаратам. Опухолевый рост сопровождается одновременным формированием сосудистой сети. После сеанса химиотерапии большинство раковых клеток погибает, но некоторая их часть благодаря мутациям, хромосомным перестройкам или индукции экспрессии отдельных генов оказывается устойчивой и выживает; неповрежденными остаются и сосуды, так что опухоль снова быстро прогрессирует. При этом такая опухоль, прошедшая естественный отбор, уже обладает лекарственной устойчивостью, и повторное лечение этим препаратом не приносит терапевтического эффекта.

Особый интерес в качестве мишени химиотерапии представляют собой клетки, выстилающие внутренние стенки сосудов, образующие эндотелий. У вновь образовавшихся капилляров эндотелиальные клетки имеют маркеры, отличающие их от эндотелиальных клеток полностью зрелых сосудов. Это важно, поскольку позволяет вести поиск лекарственных препаратов, специфически разрушающих только новообразованные сосуды, не повреждая остальные. Важно также, что клетки эндотелия доброкачественны и генетически стабильны и поэтому не обладают способностью к быстрому приобретению устойчивости. Таким образом, при проведении антиангиогенной терапии после сеанса лечения разрушается не сама опухоль, а питающая ее кровеносная сеть, что является причиной быстрой регрессии опухоли, лишенной оксигенизации и источников питания. При прекращении проведения терапии может наблюдаться повторный рост опухоли, однако лекарственная устойчивость не возникает.

Среди известных в настоящее время ингибиторов ангиогенеза одним из наиболее перспективных является эндостатин, который представляет собой С-концевой протеолитический фрагмент коллагена XVIII. Даже при длительном терапевтическом применении эндостатин не вызывает возникновения резистентности у опухолевых клеток и при этом обладает ярко выраженным терапевтическим эффектом. Необходимо заметить, что этот антиангиогенный агент может быть использован не только в противоопухолевой терапии, но и при лечении других болезней, связанных с нарушением ангиогенеза. Важной особенностью антиангиогенной терапии является возможность ее комбинированного применения с другими видами терапии, такими как радио-, иммуно- или химиотерапия.

Широкие терапевтические перспективы диктуют необходимость разработки эффективных систем получения растворимого рекомбинантного эндостатина. Так как в системе экспрессии Escherichia coli получение рекомбинантного эндостатина в растворимой форме, предпочтительной для использования в клинической практике, представляет собой трудно разрешимую проблему, в настоящее время для клинических исследований в США и Нидерландах используется рекомбинантный человеческий эндостатин, полученный в дрожжевой системе экспрессии (Pichia pastoris). Однако в дрожжевой системе экспрессии выход целевого белка невысок и недостаточен для массового использования в клинической практике [26], а системе Е. coli. белок экспрессируется в виде нерастворимых в физиологических условиях телец включения. Поэтому по-прежнему остается актуальной проблема разработки метода получения растворимого рекомбинантного эндостатина в системе клеток Е. coli., которая по сравнению с другими [116,133, 134,158,165, 175,177,188] является наименее затратной и наиболее технологически простой, способной обеспечить высокие выходы биологически активного белка. Важной задачей является также исследование возможностей повышения биодоступности и терапевтической эффективности эндостатина при его применении в составе наночастиц и липосом.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Позднякова, Наталья Владимировна

Выводы

1. Сконструирована экспрессионная плазмида, несущая ген эндостатина человека, на основе которой разработан штамм-продуцент Е. coli JM109, позволяющий осуществлять индуцируемую экспрессию эндостатина в тельцах включения. Продуктивность штамма составила 46 мг/л культуры.

2. Разработаны эффективные модифицированные методы очистки и ренатурации рекомбинантного эндостатина человека из штамма-продуцента Е. col JM109 и получен высокоочищенный препарат белка с выходом 48%.

3. Показано, что полученный с помощью разработанного метода препарат рекомбинантного эндостатина проявляет специфическую ЦТА в отношении эндотелиальных клеток линий человека (HUVEC), быка (АВАЕ) и мыши (SVEC4-10), сравнимую с активностью природного эндостатина человека.

4. Продемонстрирована in vitro более высокая чувствительность пролиферирующего эндотелия к действию рекомбинантного эндостатина человека по сравнению с конфлюентными культурами эндотелиоцитов.

5. Получены наночастицы на основе поли-Ы-винилпирролидона с эндостатином и исследована их противоопухолевая активность в отношении модельных опухолей мышиной меланомы В16 in vivo. Показано, что применение эндостатина в составе наночастиц позволяет значительно повысить эффективность его противоопухолевого действия.

6. Получена липосомная форма эндостатина на основе лецитина и холестерола и продемонстрирована in vivo ее противоопухолевая активность в отношении меланомы мыши линии В16, значительно превышающая активность свободного белка.

7. В экспериментах in vivo показано, что применение липосомной формы эндостатина в сочетании с химиопрепаратами доксорубицином, карминомицином и таксолом позволяет существенно повысить эффективность противоопухолевой терапии экспериментальных животных по сравнению с применением индивидуальных препаратов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Позднякова, Наталья Владимировна, 2007 год

1. Ackley В. D., Crew J. R., Elamaa H., Pihlajaniemi Т., Kuo С. J. and Kramer J. M. The NCl/Endostatin domain of Caenorhabditis elegans type XVIII collagen affects cell migration and axon guidance. // J. Cell Biol. 2001. - №152. - P. 1219-1232.

2. Allen T.M., Cullis P.R. Drug delivery systems: entering the mainstream. // Science.-2004.-№303 5665.-P. 1818-22.

3. Arenillas J.F., Alvarez-Sabin J. Basic Mechanisms in Intracranial Large-Arteiy Atherosclerosis: Advances and Challenges. // Cerebrovasc Dis. 2005. - №20 2.-P. 75-83.

4. Arnold F., West D.C. Angiogenesis in wound healing. // Pharmacol Ther. -1991.-№52 3. P. 407-422.

5. Becker C.M., Sampson D.A., Short S.M., Javaherian K., Folkman J., DAmato R.J. Short synthetic endostatin peptides inhibit endothelial migration in vitro and endometriosis in a mouse model. // Fertil Steril. 2006 - №85 1. - P. 7177.

6. Berger A. C., Feldman A. L., Gnant M. F. et al. The angiogenesis inhibitor, endostatin, does not affect murine cutaneous wound healing. // J. Surg. Res. -2000.-№91.-P. 26-31.

7. Bergers G., Javaherian K., Lo К. M., Folkman J. and Hanahan D. Effects of angiogenesis inhibitors on multistage carcinogenesis in mice. // Science. 1999. -№284.-P. 808-812.

8. Blezinger P., Wang J., Gondo M. et al. Systemic inhibition of tumor growth and tumor metastases by intramuscular administration of the endostatin gene. // Nat. Biotechnol. 1999. -№17. - P. 343-348.

9. Bloch W., Huggel K., Sasaki T. et al. The angiogenesis inhibitor endostatin impairs blood vessel maturation during wound healing. // FASEB J. 2000. -№14.-P. 2373-2376.

10. Boehle A. S., Kurdow R., Schulze M et al. Human endostatin inhibits growth of human non-small-cell lung cancer in a murine xenotransplant model. // Int. J. cancer. 2001. - №94. - P. 420-428.

11. Boehm Т., Folkman J., Browder D. and O'Reilly M. R. Antiangiogenic therapy of experimental cancer does not induce acquired drug resistance. // Nature. -1997.-№390.-P. 404-407.

12. Broun N.J., Staton C.A., Rodgers G.R., et al. Fibrinogen E fragment selectively disrupts the vasculature and inhibits the grows of tumors in a syngeneic murine model. // Br J Cancer. 2002. - №86. - P. 1813-1816.

13. Brouty-Boye D., Zetter B.R. Inhibition of cell motility by interferon. // Science. -1980.-№208.-P. 516-518.

14. Calvo A., Yokoyama Y., Smith L.E., et al. Inhibition of the mammary carcinoma angiogenic switch in C3(1)/SV40 transgenic mice by a mutated form of human endostatin. // Int J Cancer. 2002. - №101 3. P. 224-234.

15. Camphausen K., Moses M.A., Beecken W.D., Khan M.K., Folkman J., O'Reilly M.S. Radiation therapy to a primary tumor accelerates metastatic growth in mice. // Cancer Res. 2001. - №61 5. - P. 2207-2211.

16. Cao Y., Xue L. Angiostatin. // Semin. Thromb. Hemost. 2004. - №30 1. - P. 83-93.

17. Carmeliet P., Jain R.K. Angiogenesis in cancer and other diseases. // Nature. -2000. №407. -P 249-257.

18. Cattaneo M.G., Pola S., Francescato P., Chillemi F., Vicentini L.M. Human endostatin-derived synthetic peptides possess potent antiangiogenic properties in vitro and in vivo. // Exp Cell Res. 2003. - №283 2. - P. 230-236.

19. Chang J.H., Javier J.A., Chang G.Y., Oliveira H.B., Azar D.T. Functional characterization of neostatins, the MMP-derived, enzymatic cleavage products of type XVIII collagen. // FEBS Lett. 2005. - №579 17. P. 3601-3606.

20. Colorado P. C., Torre A., Kamphaus G. et al. Anti-angiogenic cues from vascular basement membrane collagen. // Cancer Res. 2000. - №60. - P. 2520-2526.

21. Crum R., Szabo S., Folkman J. A new class of steroids inhibits angiogenesis in the presence of heparin or a heparin fragment. // Science. 1985. - №230. - P. 1375-1378.

22. Dans К., Behrendt N., Hetyer-Hansen G., Johnsen M., Lund L.R., Ploug M., Romer J. Plasminogen activation and cancer. // Thromb. Haemost. 2005. -№93.-P. 676-681.

23. Davidoff A.M., Leary M.A., Ng C.Y., et al. Autocrine expression of both endostatin and green fluorescent protein provides a synergistic antitumor effect in a murine neuroblastoma model. //.Cancer Gene Ther. 2001. - №8 7. - P. 537-545.

24. Dhanabal M., Volk R., Ramchandran R., Simons M. and Sukhatme V. P. Cloning, expression, and in vitro activity of human endostatin. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. - №258. - P. 345-352.

25. Dhanabal M., Ramchandran R., Volk R. et al. Endostatin: yeast production, mutants, and antitumor effect in renal cell carcinoma. // Cancer Res. 1999. -№59.-P. 189-197.

26. Dhanabal M., Ramchandran R., Waterman M. J. F., Lu H., Knebelmann В., Segal M. and Sukhatme V. P. Endostatin induces endothelial cell apoptosis. // J. Biol. Chem. 1999. - №274. - P. 11721-11726.

27. Ding Y.H., Javaherian K., Lo K.M. et al. Zinc-dependent dimers observed in crystals of human endostatin. //Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1998. - №95. - P. 10443-10448.

28. Dixelius J., Cross M., Matsumoto Т., Sasaki Т., Timpl R. and Claesson-Welsh L. Endostatin regulates endothelial cell adhesion and cytoskeletal organization. // Cancer Res. 2002. - №62. - P. 1944-1947.

29. Dong S., Cole G.J., Halfter W. Expression of collagen XVIII and localization of its glycosaminoglycan attachment sites. // J. Biol. Chem. 2003. - №278. - P. 1700-1707.

30. Eccles S.A. Parallels in invasion and angiogenesis provide pivotal points for therapeutic intervention. // Int. J. Dev. Biol. 2004. - №48. - P. 583-598.

31. Eder J. P Jr, Supko J. G, Clark J. W. et al. Phase I clinical trial of recombinant human endostatin administered as a short intravenous infusion repeated daily. // J. Clin Oncol. -2002. -№20 18. P. 3792-803.

32. Eisterer W., Jiang X., Bachelot Т., et al. Unfulfilled promise of endostatin in a gene therapy-xenotransplant model of human acute lymphocytic leukemia. // Mol Ther. 2002. - №5. - P. 352-359.

33. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups. // Arch. Biochem. Biophys. 1959. -№82 1.-P. 70-77.

34. Engelse M.A., Hanemaaijer R., Koolwijk P., van Hinsbergh V.W. The fibrinolytic system and matrix metalloproteinases in angiogenesis and tumor progression. // Semin. Thrombos. Hemostas. 2004. - №30 1. - P. 71-82.

35. Ergun S., Kilic N., Wurmbach J. H. et al. Endostatin inhibits angiogenesis by stabilization of newly formed endothelial tubes. // Angiogenesis. 2001. - №4. -P. 193-206.

36. Felbor U., Dreier L., Bryant R. A. R. et al. Secreted cathepsin L generates endostatin from collagen XVIII. // EMBO J. 2000. - №19. - P. 1187-1194.

37. Feldman A.L., Рак H., Yang J.C., Alexander H.R. Jr., Libutti S.K. Serum endostatin levels are elevated in patients with soft tissue sarcoma. // Cancer. -2001.-№91 8. P. 1525-1529

38. Fernandez A., Udagawa Т., Schwesinger C., Beecken W., Achilles-Gerte E., McDonnell Т., D'Amato R. Angiogenic potential of prostate carcinoma cells overexpressing bcl-2. // J. Natl. Cancer Inst. 2001. - №93 3. - P. 208-213.

39. Ferrara N. Vascular endothelial growth factor: molecular and biological aspects. // Curr Top Microbiol Immunol. 1999. - №237. - P. 1-30.

40. Ferreras M., Felbor U., Lenhard Т., Olsen B. R. and Delaisse J.-M. Generation and degradation of human endostatin proteins by various proteinases. // FEBS Lett. 2000. - №486. - P. 247-251.

41. Folkman J. Fundamental concepts of the angiogenic process. // Curr. Mol. Med. 2003. - №3. - P. 643-651.

42. Folkman J., Klagsbrun M. Angiogenic factors review. // Science. 1987. -№235.-P. 442-447.

43. Folkman J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications. // N Engl J Med. -1971.-№285.-P. 1182-1186.

44. Fukai N., Eklund L., Marneros A.G., Oh S.P., Keene D.R., Tamarkin L., Niemela M., lives M., Li E., Pihlajaniemi Т., Olsen B.R. Lack of collagen XVIII/endostatin results in eye abnormalities. // EMBO J. 2002. №21 7. -P. 1535-1544.

45. Gebbink F.B.G., Voest E. E., Reijerkerk A. Do antiangiogenic protein fragments have amyloid properties? // Blood. 2004. - №104 6. - P. 16011605.

46. Halfter W., Dong S., Schrurer В., Cole G.J. Collagen XVIII is a basement membrane heparan sulfate proteoglycan. // J. Biol. Chem. 1998. - №273. - P. 25404-25412.

47. Han J., Ohno N., Pasco S., Monboisse J. С., Borel J. P. and Kefalides N. A. A cell binding domain from the 3 chain of type IV collagen inhibits proliferation of melanoma cells. //J. Biol. Chem. 1997. -№272. - P. 20395-20401.

48. Hanai J., Dhanabal M., Karumanchi S.A., Albanese C., Waterman M., Chan В., Ramchandran R., Pestell R., Sukhatme V.P. Endostatin causes G1 arrest of endothelial cells through inhibition of cyclin Dl. //J Biol Chem. 2002. -№277 19.-P. 16464-16469.

49. Hanai J., Gloy J., Karumanchi S.A., Kale S., Tang J., Hu G., Chan В., Ramchandran R., Jha V., Sukhatme V.P., Sokol S. Endostatin is a potential inhibitor of Wnt signaling. // J Cell Biol. 2002. - №58 3. - P. 529-539.

50. Hanna N.N., Seetharam S., Mauceri H.J., et al. Antitumor interaction of short-course endostatin and ionizing radiation. // Cancer J. 2000. - №6. - P. 287293.

51. He Y., Zhou H., Tang H., Luo Y. Deficiency of disulfide bonds facilitating fibrillogenesis of endostatin. // J Biol Chem. 2006. - №281 2. - P. 10481057.

52. Hebert C., Siavash H., Norris K., Nikitakis N.G., Sauk J.J. Endostatin inhibits nitric oxide and diminishes VEGF and collagen XVIII in squamous carcinoma cells. // Int J Cancer. 2005. - №114 2. - P. 195-201.

53. Herbst R.S., Hess К R, Tran H.T et al. Phase I Study of recombinant human endostatin in patients with advanced solid tumors. // J. Clin. Oncol. 2002. -№20.-P. 3792-3803.

54. Herbst R. S., Mullani N. A., Davis D. W. et al. Development of biologic markers of response and assessment of antiangiogenic activity in a clinical trial of human recombinant endostatin. // J. Clin. Oncol. 2002. - №20. - P. 3804— 3814.

55. Hohenester E, Sasaki T, Mann K, Timpl R. Variable zinc coordination in endostatin. // J Mol Biol. 2000. - №297 1. - P. 1-6.

56. Hohenester E., Sasaki Т., Olsen B.R., Timpl R. Crystal structure of the angiogenesis inhibitor endostatin at 1.5 A resolution. // EMBO J. 1998. -№17.-P. 1656-1664.

57. Huang X., Wong M.K.K., Zhao Q. et al. Soluble Recombinant Endostatin Purified from Escherichia coli: Antiangiogenic Activity and Antitumor Effect. // Cancer Res. 2001. - № 61. - P. 478-481.

58. Hurt E.M., Wiestner A., Rosenwald A. et al. Overexpression of cmaf is a frequent oncogenic event in multiple myeloma that promotes proliferation and pathological interactions with bone marrow stroma. // Cancer Cell. 2004. -№5.-P. 191-199.

59. Indraccolo S., Gola E., Rosato A., et al. Differential effects of angiostatin, endostatin and interferon-alpha(l) gene transfer on in vivo growth of human breast cancer cells. // Gene Ther. 2002. - №9. - P. 867-878.

60. Iozzo R. V. and San Antonio J. D. Heparan sulfate proteoglycans: heavy hitters in the angiogenesis arena. // J. Clin. Invest. 2001. - №108. - P. 349-355.

61. Iversen P.O., Sorensen D.R., Benestad H.B. Inhibitors of angiogenesis selectively reduce the malignant cell load in rodent models of human myeloid leukemias. // Leukemia. 2002. - №16. - P. 376-381.

62. Javaherian K., Park S.Y., Pickl W.F., LaMontagne K.R., Sjin R.T., Gillies S., Lo K.M. Laminin modulates morphogenic properties of the collagen XVIII endostatin domain. // J Biol Chem. 2002. - №277 47. - P. 45211-45218.

63. John H. , Radtke K. , Standker L. , Forssmann W.G. Identification and characterization of novel endogenous proteolytic forms of the human angiogenesis inhibitors restin and endostatin. // Biochimica et biophysica acta. -2005.-№1747 2. P. 161-170.

64. John H., Forssmann W.G., Determination of the disulfide bond pattern of the endogenous and recombinant angiogenesis inhibitor endostatin by mass spectrometry. // Rapid Commun. Mass Spectrom. 2001. - №15. - P. 1222— 1228.

65. John H., Preissner K.T., Forssmann W.G., Standker L. Novel glycosylated forms of human plasma endostatin and circulating endostatin-related fragments of collagen XV. // Biochemistry. -1999. №38 32. - P. 10217-10224.

66. Jones M., Leroux J. Polymeric micelles a new generation of colloidal drug carriers///Eur. J.Pharm. Biopharm.- 1999.-№482.-P. 101-111.

67. Jouanneau E., Alberti L., Nejjari M. et al. Lack of antitumor activity of recombinant endostatin in a human neuroblastoma xenograft model. // J Neurooncol. 2001. - №51. - P. 11 -18.

68. Kamphaus G.D., Colorado P.C., Panka D.J., Hopfer H., Ramchandran R., Torre A., Maeshima Y., Mier J.W., Sukhatme V.P., Kalluri R. Canstatin, a novel matrix-derived inhibitor of angiogenesis and tumor growth. // J Biol Chem. -2000.-№275. P. 1209-1215.

69. Karumanchi S. A., Jha V., Ramchandran R. et al. Cell surface Glypicans are low-affinity endostatin receptors. // Mol. Cell. 2001. - №7. - P. 811-822.

70. Kim Y. M„ Hwang S., Kim Y. M., Pyun B. J., Kim T. Y., Lee S. Т., Gho Y. S. and Kwon Y. G. Endostatin blocks VEGF-mediated signaling via direct interaction with KDR/Flk-1. II J. Biol. Chem. 2002. - №277. - P. 2787227879.

71. Kisker O., Becker С. M., Prox D. et al. Continuous administration of endostatin by intraperitoneally implanted osmotic pump improves the efficacy and potency of therapy in a mouse xenograft tumor model. // Cancer Res. 2001. - №61. -P. 7669-7674.

72. Koch A.E., Harlow L.A., Haines G.K., Amento E.P., Unemori E.N., Wong W.L., Pope R.M. and Ferrara N. Vascular endothelial growth factor. A cytokine, modulating angiogenesis in rheumatoid arthritis. // J. Immunol. 1994. - №152. -P. 4149-4156.

73. Kolkhorst V., Sturzebecher J., Wiederanders B. Inhibition of tumor cell invasion by protease inhibitors: correlation with the protease profile. // J. Cancer Res. Clin. Oncol. 1998. - №124. - P. 598-606.

74. Kranenburg O, Kroon-Batenburg L.M, Reijerkerk A. et al. Recombinant endostatin forms amyloid fibrils that bind and are cytotoxic to murine neuroblastoma cells in vitro. // FEBS Lett. 2003. - №539 1-3. - P. 149-155.

75. Kruger E. A., Duray P. H., Tsokos M. G. et al. Endostatin inhibits microvessel formation in the ex vivo rat aortic ring angiogenesis assay. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - №268. - P. 183-191.

76. Kuo C. J., LaMontagne K. R. Jr, Garcia-Cardena G. et al. Oligomerization-dependent regulation of motility and morphogenesis by the collagen XVIII NCI/Endostatin domain. // J. Cell Biol. 2001 - №152. - P. 1233-1246.

77. Kuroiwa M, Ikeda H, Hongo T, Tsuchida Y, et al. Effects of recombinant human endostatin on a human neuroblastoma xenograft. // Int J Mol Med. -2001.-№8.-P. 391-396.

78. Lein P. J., Turner D. C., Flier L. A. and Terranova V. P. The NCI domain of type IV collagen promotes axonal growth in sympathetic neurons through interaction with the alpha 1 beta 1 integrin. // J. Cell Biol. 1991. - №113. - P. 417-428.

79. Li В., Wu X., Zhou H. et al. Acid-Induced Unfolding Mechanism of Recombinant Human Endostatin. // Biochemistry. 2004. - №43. - P. 25502557.

80. Li D., Clark C.C., Myers J.C. Basement membrane zone type XV collagen is a disulfide-bonded chondroitin sulfate proteoglycan in human tissues and cultured cells. //J. Biol. Chem. 2000. - №275. - P. 22339-22347.

81. Lin H.-C., Chang J.-H., Jain S. et al. Matrilysin cleavage of corneal collagen type XVIII NCI domain and generation of a 28-kDa fragment. // Invest. Ophtalmol. Vis. Sci. 2001. - №42. - P. 2517-2524.

82. Liu D.L., Wen J.X., Tong W.C., Ben L.H. Inhibition of lung adenocarcinoma LA795 in mice by recombinant human endostatin. // Di Yi Jun Yi Da Xue Xue Bao. -2001. -№21. P. 917-919.

83. MacDonald R.C., MacDonald R.I., Menco B.P. et al. Small-volume extrusion apparatus for preparation of large, unilamellar vesicles. // Biochim. Biophys. Acta. 1991. -№1061 2. - P. 297-303.

84. MacLachlan Т.К., Dhanabal M. Insights into differential endostatin activity. // Cancer Biol. Ther. 2004. - №3 11. - P. 1167-1168.

85. Maniotis A.J., Folberg, R., Hess A. et al. Vascular channel formation by human melanoma cells in vivo and in vitro: vasculogenic mimicry. // Am J Pathol. -1999.-№155.-P. 739-752.

86. Matsumura Y., Yokoyama M., Kataoka K. et al. Reduction of the side effects of an antitumor agent, KRN5500, by incorporation of the drug into polymeric micelles. //Jpn. J. Cancer Res. 1999. -№90 1. - P. 122-128.

87. Matsuno H., Yudoh K., Uzuki M. et al. Treatment with the angiogenesis inhibitor endostatin: anovel therapy in rheumatoid arthritis. // J. Rheumatol. -2002.-№29.-P. 890-895.

88. Miao R. Q., Agata J., Chao L., and Chao J. Kallistatin is a new inhibitor of angiogenesis and tumor growth. // Blood. 2002. - October 16. - №100 9. - P. 3245-3252.

89. Monboisse J. C., Garnotel R., Bellon G., Ohno N., Perreau C., Borel J. P. and Kefalides N. A. The alpha 3 chain of type IV collagen prevents activation of human polymorphonuclear leukocytes. // J. Biol. Chem. 1994. - №269. - P. 25475-25482.

90. Mongiat M., Sweeney S. M., San Antonio J. D., Fu J., and IozzoR. V. Endorepellin, a Novel Inhibitor of Angiogenesis Derived from the С Terminus of Perlecan. // J. Biol. Chem. 2003. - №278 6. - P. 4238-4249.

91. Mori K., Ando A., Gehlbach P. et al. Inhibition of choroidal neovascularization by intravenous injection of adenoviral vectors expressing secretable endostatin. // Am. J. Pathol. 2001. - №159. - P. 313-320.

92. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxity assays. // J. Immunol. Meth. 1983. -№65.-P. 55-63.

93. Nakanishi Т., Fukushima S., Okamoto K. et al. Development of the polymer micelle carrier system for doxorubicin. // J. Control Release. 2001. - №74 1-3.-P. 295-302.

94. Nishiyama N, Kataoka K. Polymeric micelle drug carrier systems: PEG-PAsp(Dox) and second generation of micellar drugs. // Adv. Exp. Med. Biol. -2003.-№519.-P. 155-177.

95. Nishiyama N., Kato Y., Sugiyama Y., Kataoka K. Cisplatin-loaded polymer-metal complex micelle with time-modulated decaying property as a novel drug delivery system. //Pharm. Res. -2001. -№18 7. P. 1035-1041.

96. O'Reilly M.S., Boehm Т., Shing Y., et al. Endostatin: an endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor growth. // Cell. 1997. - №88. - P. 277-285.

97. O'Reilly M.S., Holmgren L., Shing Y., et al. Angiostatin: a novel angiogenesis ingibitor that mediates the suppression of metastases by a Lewis lung carcinoma. // Cell. 1994. - №79. - P. 315-328.

98. O'Reilly M.S., Pirie-Shepherd S., Lane W.S., FoIkmanJ. Antiangiogenic activity of the cleaved conformation of the serpin antithrombin. // Science. -1999.-№285.-P. 1926-1928.

99. Oh S.P., Warman M.L., Seldin M. F. et al. Cloning of cDNA and genomic DNA encoding human type XVIII collagen and localization of the alpha 1 XVIII.collagen gene to mouse chromosome 10 and human chromosome 21. // Genomics. 1994. - №19. P. 494-499.

100. Olsen B.R. From the editor's desk. // Matrix Biol. 2002. - №21. - P. 309-310.

101. Ortega N„ Werb Z. New functional roles for non-collagenous domains of basement membrane collagens. // Journal of Cell Science. 2002. - №115. - P. 4201-4214

102. Park J.H., Chang K.H., Lee J.M., Lee Y.H., Chung I.S. Optimal production and in vitro activity of recombinant endostatin from stably transformed Drosophila melanogaster S2 cells. // In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2001. - №37 1. - P. 5-9.

103. Pawliuk R., Bachelot Т., Zurkiya O. et al. Continuous intravascular secretion of endostatin in mice from transduced hematopoietic stem cells. // Mol Ther. -2002,-№5.-P. 345-351.

104. Perris R., Syfrig J., Paulsson M., Bronner-Fraser M. Molecular mechanisms of neural crest cell attachment and migration on type I and IV collagen. // J. Cell Sci. 1993. -№106. - P. 1357-1368.

105. Rakic J. N., Gerber H-P. and Lecouter J. The biology of VEGF and its receptors. // Nature Med. 2003. - №6. - P. 669-676.

106. Rakic J. N., Maillard C., Jost M. et al. Role of plasminogen activatorplasmin system in tumor angiogenesis. // Cell Mol. Life Sci. 2003. - №60. - P. 463-473.

107. Rastinejad F., Polverini P.J., Bouck N.P. Regulation of the activity of a new inhibitor of angiogenesis by a cancer suppressor gene. // Cell. 1989. - №56 3.-P. 345-355.

108. Rehn M., Pihlajaniemi T. Type XV and type XVIII collagens, a new subgroup within the family of collagens. // Cell Dev. Biol. -1996. №7. - P. 673-679.

109. Rehn M., Veikkola Т., Kukk-Valdre E., Nakamura H., Ilmonen M., Lombardo C. R., Pihlajaniemi Т., Alitalo K. and Vuori K. Interaction of endostatin with integrins implicated in angiogenesis. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. -№98.-P. 1024-1029.

110. Reijerkerk A., Mosnier L.O., Kranenburg O. et al. Amyloid Endostatin Induces Endothelial Cell Detachment by Stimulation of the Plasminogen Activation System.//Molecular Cancer Research.-2003. -№1.-P. 561-568.

111. Reis R.C, Schuppan D., Barreto A.C., Bauer M., Bork J.P., HasslerG., Coelho-Sampaio T. Endostatin competes with bFGF for binding to heparin-like glycosaminoglycans. // Biochem Biophys Res Commun. 2005. - №333 3. -P. 976-983.

112. Reynolds L. E., Wyder L., Lively J. C., Taverna D., Robinson S. D., Huang X., Sheppard D., Hynes R. O. and Hodivala-Dilke К. M. Enhanced pathological angiogenesis in mice lacking B3 integrin or B3 and 135 integrins. // Nat. Med. -2002.-№8.-P. 27-34.

113. Rhim T.Y., Park C.S., Kim E., Kim S.S., Human prothrombin fragment 1 and 2 inhibit bFGF-induced ВСЕ cell growth. // Biochem Biophis Res Commun. -1998.-№252.-P. 513-516.

114. Risau W. Embryonic angiogenesis factors review. // Pharmacol. Ther. -1991. -№51.-P. 371-376.

115. Rokstad A.M., Holtan S., Strand В., et al. Microencapsulation of cells producing therapeutic proteins: optimizing cell growth and secretion. // Cell Transplant. 2002. - №11 4. - P. 313-324.

116. Rokstad A.M., Strand В., Rian K., Steinkjer В., Kulseng В., Skjak-Braek G., Espevik T. Evaluation of different types of alginate microcapsules as bioreactors for producing endostatin. // Cell Transplant. 2003. - №12 4. - P. 351-364.

117. Saarela J., Rehn M., Oikarinen A. et al. The short and long forms of type XVIII collagen show clear tissue specificities in their expression and location in basement membrane zones in humans. // Am. J. Pathol. 1998. - №153. - P. 611-626.

118. Sanz L. and Alvarez-Vallina L. The extracellular matrix: a new turn of the screw for antiangiogenic strategies. // Trends. Molec. Med. 2003. - №9. - P. 256-262.

119. Saphir A. Angiogenesis: the unifying concept in cancer? // J Natl Cancer Inst. -1997. -№89 22. P. 1658-1659.

120. Sasaki Т., Fukai N., Mann K., Gohring W., Olsen B. R„ and Timpl R. Structure, function and tissue forms of the C-terminal globular domain of collagen XVIII containing the angiogenesis inhibitor endostatin. // EMBO J. 1998. - №17 15.-P. 4249-4256.

121. Satchi-Fainaro R., Puder M., Davies J.W., Tran H.T., Sampson D.A., Greene A.K., Corfas G., Folkman J. Targeting angiogenesis with a conjugate of HPMA copolymer and TNP-470. // Nat. Med. 2004. - №10 3. - P. 255-261.

122. Savic R., Luo L., Eisenberg A., Maysinger D. Micellar nanocontainers distribute to defined cytoplasmic organelles. // Science. 2003. - №300 5619. -P. 615-618.

123. Scappaticci F.A. Mechanisms and future directions for angiogenesis-based cancer therapies. // J. Clin. Oncol. 2002. - №20 18. - P. 3906-3927.

124. Schmidt A., Addicks K., Bloch W. Opposite effects of endostatin on different endothelial cells. // Cancer Biol. Ther. 2004. - №3 11. - P. 1162-1166.

125. Schmidt A., Wenzel D., Ferring I., Kazemi S., Sasaki Т., Hescheler J., Timpl R., Addicks K., Fleischmann B.K., Bloch W. Influence of endostatin on embryonic vasculo- and angiogenesis. // Dev. Dyn. 2004. - №230 3. - P. 468-480.

126. Shahan T. A., Ohno N., Pasco S., Borel J. P., Monboisse J. C. and Kefalides N. A. Inhibition of tumor cell proliferation by type IV collagen requires increased levels of camp. // Connect. Tissue Res. 1999. - №40. - P. 221-232.

127. Sharma D., Chelvi T.P., Kaur J. et al. Novel Taxol formulation: polyvinylpyrrolidone nanoparticle-encapsulated Taxol for drug delivery in cancer therapy. // Oncol Res. 1996. - №8 7-8. - P. 281-286.

128. Shichiri M. and Hirata Y. Antiangiogenesis signals by endostatin. // FASEB J. -2001.-№15.-P. 1044-1053.

129. Sidky Y.A., Borden E.C. Inhibition of angiogenesis by interferons: effects on tumor- and lymphocyte-induced vascular responses. // Cancer Res. 1987. -№47 19.-P. 5155-5161.

130. Skovseth D.K., Veuger M.J.T., Sorensen D.R. et al. Endostatin dramatically inhibits endothelial cell migration, vascular morphogenesis, and perivascular cell recruitment in vivo.//Blood.-2005. -№105.-P. 1044-1051.

131. Solaun M.S., Mendoza L., De Luca M., et al. Endostatin inhibits murine colon carcinoma sinusoidal-type metastases by preferential targeting of hepatic sinusoidal endothelium. // Hepatology. 2002. - №355. - P. 1104-1116.

132. Sorensen D. R., Read T. A., Porwol T. et al. Endostatin reduces vascularization, blood flow, and growth in a rat gliosarcoma. // Neuro-Oncol. 2002. - №4. - P. 1-8.

133. Sorenson D.R., Leirdal M., Iverson P.O., Sioud M. Combination of endostatin and a protein kinase С alpha DNA enzyme improves the survival of rats with malignant glioma. // Neoplasia. 2002. - №4. - P. 474-479.

134. Standker L., Schrader M., Kanse S. M., Jurgens M., Forssmann W. G. and Preissner К. T. Isolation and characterization of the circulating form of human endostatin. // FEBS. Lett. 1997. - №420. - P. 129-133.

135. Steele F.R. Can "negative" be positive? Mol Ther. 2002. - №5. - P. 338-339.

136. Su Z., Wu X., Feng Y., Ding C., Xiao Y„ Cai L„ Feng W., Li X. High level expression of human endostatin in Pichia pastoris using a synthetic gene construct. // Appl Microbiol Biotechnol. 2007. - №73 6. - P. 1355-1362.

137. Sudhakar A., Sugimoto H., Yang C., Lively J., Zeisberg M., Kalluri R. Human tumstatin and human endostatin exhibit distinct antiangiogenic activities mediated by avP3 and a5pl integrins. // Proc Natl Acad Sci USA.- 2003. -№100 8.-P. 4766-4771.

138. Suzuki O.T. et al. Molecular analysis of collagen XVIII reveals novel mutations, presence of a third isoform, and possible genetic heterogeneity in Knobloch syndrome. // Am J Hum Genet. 2002. - №71. - P. 1320-1329.

139. Swidzinska E., Ossolinska M., Naumnik W., Trojan S., Chyczewska E. Serum endostatin levels in patients with lung carcinoma. // Rocz Akad Med Bialymst. -2005.-№50.-P. 197-200.

140. Taddei L., Chiarugi P., Brogelli L. et al. Inhibitory effect of full-length human endostatin on in vitro angiogenesis. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1999.-№263.-P. 340-345.

141. Tjin Tham Sjin R.M., Satchi-Fainaro R., Birsner A.E et al. A 27-Amino-Acid Synthetic Peptide Corresponding to the NH2-Terminal Zinc-Binding Domain of Endostatin Is Responsible for Its Antitumor Activity. // Cancer Res. 2005. -№65.-P. 3656-3663.

142. Trinh L., Noronha S.B., Fannon M., Shiloach J. Recovery of mouse endostatin produced by Pichia pastoris using expanded bed adsorption. // Bioseparation. -2000.-№9.-P. 223-230.

143. Welsh A.O. and Enders A.C. Chorioallanoic placenta formation in the rat: I. luminal epithelial cell death and extracellular matrix modifications in the mesometrial region of implantation chambers. // Am. J. Anat. -1991. №192. -P. 347-365.

144. White C.W., Sondheimer H.M., Crouch E.C., Wilson H., Fan L.L. Treatment of pulmonary hemangiomatosis with recombinant interferon alfa-2a. // N. Engl. J. Med. 1989. - №320 18. - P. 1197-1200.

145. Wickstrom S.A., Alitalo K., Keski-Oja J. An endostatin-derived peptide interacts with integrins and regulates actin cytoskeleton and migration of endothelial cells. // J Biol Chem. 2004. - №279 19. - P. 20178-20185.

146. Wodarz A., Nusse R. Mechanisms of Wnt signalling in development. // Annu Rev Cell Dev Biol. 1998. - №14. - P. 59-88.

147. Wu J., Fu W., Luo J., Zhang T. Expression and purification of human endostatin from Hansenula polymorpha A16. // Protein Expr. Purif. 2005. - №42 1. - P. 12-19.

148. Wu P., Yonekura H., Li H., et al. Hypoxia down-regulates endostatin production by human microvascular endothelial cells and pericytes. // Biochem Biophys Res Commun. -2001. -№288 5. P. 1149-1154.

149. Wu X., Huang J., Chang G., Luo Y. Detection and characterization of an acid-induced folding intermediate of endostatin. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -2004.-№320 3.-P. 973-978.

150. Xia H., Zhang L., Wen J.X., Tong W.C. Expression and purification of human endostatin in Pichia pastoris and its inhibition on the growth of mouse pulmonary adenocarcinoma cell line LA795. // Di Yi Jun Yi Da Xue Xue Bao. -2002.-№22 5.-P. 393-396.

151. Xu H.M., Zhang G.Y., Ji X.D. et al. Expression of soluble, biologically active recombinant human endostatin in Escherichia coli. // Protein Expr. Purif. -2005.-№41 2.-P. 252-258.

152. Xu R., Du P., Fan J.-J. et al. High-level expression and secretion of recombinant mouse endostatin by Escherichia coli. II Prot. Expr. And Purif. 2002. - №24. -P. 453-459.

153. Xu R., Yao Z.Y., Xin L., Zhang Q„ Li T.P., Gan R.B. NCI domain of human type VIII collagen (alpha 1) inhibits bovine aortic endothelial cell proliferation and causes cell apoptosis. // Biochem Biophys Res Commun. 2001. - №289. -P. 264-268.

154. Xu Y.K., Nusse R. The Frizzled CRD domain is conserved in diverse proteins including several receptor tyrosine kinases. // Curr Biol. 1998. - №8. - P. 405406.

155. Yamaguchi N., Anad-Apte В., Lee M. et al. Endostatin inhibits VEGF-induced endothelial cell migration and tumor growth independently of zinc binding. // EMBO J. 1999. - №18. - P. 4414-4423.

156. Ye C., Feng C., Wang S., et al. Antiangiogenic and antitumor effects of endostatin of follicular thyroid carcinoma. // Endocrinology. 2002. - №143. -P. 3522-3528.

157. Yin G., Liu W., An P. et al. Endostatin gene transfer inhibits joint angiogenesis and pannus formation in inflammatory arthritis. // Mol. Ther. 2002. - №5. - P. 547-554.

158. Yokoyama M., Okano Т., Sakurai Y. et al. Selective delivery of adriamycin to a solid tumor using a polymeric micelle carrier system. // J. Drug Target. 1999. -№7 3. - P. 171-186

159. Yokoyama Y., Green J.E., Sukhatme V.P., Ramakrishnan S. Effect of endostatin on spontaneous tumorigenesis of mammary adenocarcinoma in a transgenic mouse model. // Cancer Res. 2000. - №60 16. - P. 4362-4365.

160. Yoon S. S., Eto H., Lin С. M. et al. Mouse endostatin inhibits the formation of lung and liver metastases. // Cancer Res. 1999. - №59. - P. 6251-6256.

161. You W. K., So S. H., Lee H. et al. Purification and characterization of recombinant murine endostatin in E. coli. 11 Exp. Mol. Med. 1999. - №31. - P. 197-202.

162. Yu Y., Moulton K.S., Khan M.K., Vineberg S., Boye E„ Davis V.M., O'Donnell P.E., Bischoff J., Milstone D.S. E-selectin is required for the antiangiogenic activity of endostatin. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004. -№101 21.-P. 8005-8010.

163. Zhang L., Song A.Q., Wen J.X. Expression of recombinant human endostatin in Pichia pastoris and its inhibitory effects on the growth of human lungadenocarcinoma Astc-a-1 cells. // Di Yi Jun Yi Da Xue Xue Bao. 2003. -№23 9.-P. 895-898.

164. Васильев A.E. Наноносители лекарственных веществ. // Новая аптека. -2003.-№1.-С. 7-11.

165. Введение в молекулярную медицину / Под ред. М.А. Пальцева. М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2004. - 496 с.

166. Дудниченко А. С. Новые возможности в лечении рака. // Провизор. 2000. - №7. - С. 16-23.

167. Завадская Е.С., Захарова Е.С., Кадулин С.Г., Кибардин А.В., Киселёв C.JI., Гнучев Н.В. Получение рекомбинантного эндостатина в молоке трансгенных мышей. // Генетика. 2001. - Т. 37 9. - С. 1207-1212.

168. Каплун А.П., Jle Банг Шон, Краснопольский Ю.М., Швец В.И. Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ. // Вопросы медицинской химии. 1999. - №1. - С. 3-11.

169. Киселёв С.М., Луцеико С.В., Северин С.Е., Северин Е.С. Ингибиторы опухолевого ангиогенеза. // Биохимия. 2003. - Т. 68 5. - С. 611-631.

170. Пальцев М.А. Молекулярная медицина и прогресс фундаментальных наук. // Вестник Российской Академии Наук. 2002. - Т. 72. - №1. - С. 13-21.

171. Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.ebi.uniprot.org/uniprot-srv/uniProtView.do?proteinId=:COIAlHU MAN.

172. Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.expasy.org/cgi-bin/aligner?P39060.