Оптимизация получения комплексов пептидов с рекомбинантным HSP70 человека для повышения иммуногенности белковых антигенов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Черников, Владимир Александрович

• Черников, Владимир Александрович
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Черников, Владимир Александрович

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Иммунтерапевтические подходы к лечению злокачественных новообразований

1.1. пассивная иммунотерапия

1.2. активная иммунотерапия и противоопухолевые вакцины

1.3. противоопухолевые вакцины: проблемы и перспективы

2. Белки теплового шока 70кДа и их внутриклеточные функции

2.1. Молекулярная структура белков семейства HSP

2.2. Номенклатура генов белков семейства HSP

2.3. Функции HSP70 внутри клетки

2.4. Механизм связывания пептидов с HSP

3. Внеклеточные функции HSP

3.1. Механизмы выхода HSP70 из клеток

3.2. Иммунологические функции HSP

3.3. Стратегии создания вакцин на основе HSP

II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Материалы

Методы исследования

1. Получение мРНК и к ДНК генов семейства HSP70 человека

2. Конструирование экспрессионных векторов

2.1. Амплификация ДНК

2.2. Электрофорез ДНК в агарозном геле и экстракция фрагментов ДНК из легкоплавкой агарозы

2.3. Рестрикция плазмид 40 2.3.1. Рестрикция плазмиды pUC19 Smal рестриктазой

2.3.2. Рестрикция плазмид pUC19-HSP70I, pUC19- HSP70 II, pUC19-HSC70I и pUC19- HSC70 II рестриктазами PstI и Hindlll

2.3.3. Рестрикция плазмиды pQE80L рестриктазами BamHI и Hindlll

2.3.4. Рестрикция плазмид pUC19-HSP70aib. pUC19-HSP70hyb, pUC19-HSC70 и pUC19-HSC70hyb рестриктазами BamHI и Hindlll

2.4. Дефосфорилирование рестриктированной Smal плазмиды pUC

2.5. Фосфорилирование фрагментов ДНК

2.6. Лигирование

2.7. Получение компетентных клеток и их трансформация

2.8. Выделение плазмид методом щелочного лизиса

3. Наращивание клеточной биомассы штамма-продуцента E.coli и индукция синтеза рекомбинантных белков

4. Выделение рекомбинантных белков из биомассы штаммов-продуцентов E.coli

5. Определение спектральных характеристик белков

5.1. Измерение спектральных характеристик белков при различных значениях рН среды

5.2. Измерение спектральных характеристик белков при взаимодействии с пептидами

6. Определение АТРазной активности рекомбинантных белков

7. Получение комплексов рекомбинантных белков HSP70 с синтетическими пептидами

7.1. Получение меченых FITC синтетических пептидов

7.2. Получение комплексов индивидуальных пептидов с HSP

7.3. Получение комплексов смеси меченого и немеченого пептидов с HSP70hyb

7.4. Получение комплексов смеси немеченых пептидов с HSC

8. Определение кинетических характеристик HSP

9. Получение комплексов рекомбинантных белков с пептидной фракцией лизата опухолевых клеток

9.1. Получение пептидной фракции лизата опухолевых клеток

9.2. Получение комплексов пептидной фракции лизата опухолевых клеток с HSP

10. Анализ клеточных пептидов, образующих комплексы с HSP

11. Анализ индукции цитотоксичсской активности Т лимфоцитов 48 11.1. Культивирование клеток

11.2. Получение дендритных клеток

11.3. Анализ фенотипа ДК

11.4. Нагрузка ДК опухолеспецифическими антигенами

11.5. Индукция специфических цитотоксических лимфоцитов

11.6. Определение цитотоксической активности ЦТЛ

III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Клонирование генов семейства HSP70 в экспрессионных плазмидных векторах

2. Получение рекомбинантных белков

3. Исследование спектральных характеристик рекомбинантных HSP

4. Исследование динамики связывания рекомбинантных HSP70 с пептидами

5. Исследование АТР-азной активности HSP

6. Исследование влияния различных параметров на связывание HSP с пептидами

7. Исследование взаимодействия HSP70 со смесью пептидов

8. Исследование взаимодействия HSP70 с пептидной фракцией лизата опухолевых клеток

9. Исследование цитотоксической активности 86 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оптимизация получения комплексов пептидов с рекомбинантным HSP70 человека для повышения иммуногенности белковых антигенов»

Актуальность темы.

Одним из наиболее динамично развивающихся в настоящее время подходов к лечению злокачественных новообразований является иммунотерапия, предполагающая подавление роста опухоли за счет индукция цитотоксических лимфоцитов (CTL), специфичных к антигенам опухоли. Необходимым условием получения специфического клеточного иммунного ответа является представление специализированными антиген-презентирующими клетками (АПК) опухолевых антигенов наивным CD8+ Т-лимфоцитам, осуществляемое благодаря процессу кросс-презентации, заключающемуся в способности АПК презентировать экзогенные антигены в составе MHC-I [135,182]. В 1990-х годах Р.К. Srivastava показал, что наибольшей иммуногенностыо обладают выделенные из опухолевых клеток белковые фракции с молекулярной массой около 70 и 90 кДа, а также, что иммуногенность данных фракций объясняется присутствием в них комплексов пептидных опухолевых антигенов с белками теплового шока HSP70, HSP90 и gp96 [77].

Белки теплового шока выполняют шаперонные функции внутри клеток и потому способны образовывать комплексы с широким спектром пептидов, а при попадании во внутренние среды организма в результате активной секреции при стрессе, или после гибели клеток комплексы пептидов с белками теплового шока могут быть захвачены АПК путем эндоцитоза, опосредуемого рецепторами CD91 и CD40, и включены в механизм кросс-презентации антигенов [11].

Клинические испытания вакцин [189], созданных на основе белков теплового шока, демонстрируют их высокую безопасность при достаточно большой дисперсии эффективности, которая может быть объяснена не только иммуносупрессорным влиянием опухоли, но и факторами, связанными с технологией получения препаратов. Наиболее перспективным подходом представляется создание аутологичных вакцин на основе выделенных из опухоли комплексов антигенных пептидов с HSP70 и gp96. Данный подход обеспечивает использование уникальных антигенов, присущих именно этой опухоли. Основной проблемой аутологичных вакцин является зависимость количества выделяемой вакцины от размеров опухоли. До 50% пациентов исключается из клинических испытаний по причине невозможности выделения достаточного для иммунизации количества вакцины [189]. Повышение концентрации шаперонов внутри клетки связано с воздействием на нее стрессовых факторов. Условия, создающиеся в период стресса различной природы внутри клетки, могут значительно различаться, что, по-видимому, может отражаться на степени нагрузки HSP70 антигенами и сужать спектр пептидов, образующих стойкие комплексы с данным белком in vivo. Неполная передача антигенного репертуара опухоли является, по-видимому, второй проблемой, объясняющей высокую дисперсию эффективности, характерную для аутологичных вакцин. Разрешить обе указанные проблемы может применение для получения вакцин рекомбинантного HSP70 человека и разработка методики нагрузки данного белка антигенами, выделяемыми'из пептидной фракции лизата клеток аутологичной опухоли in vitro.

Целью данной работы является: определение оптимальных условий получения комплексов пептидных антигенов с рекомбинантным HSP70 человека in vitro для повышения содержания антигенных пептидов в составе комплексов и расширения спектра связываемых антигенов.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи:

• Клонирование генов белков теплового шока» человека HSPA1B, HSPA8 и создание генно-инженерных конструкций их гибридных аналогов HSP70HYB и HSC70HYB.

• Экспрессия клонированных генов в клетках E.coli и получение высокоочищенных рекомбинантных белков HSP70aib, HSC70,' HSP70hyb и HSC70hyb.

• Определение спектральных характеристик и функциональной активности рекомбинантных белков.

• Исследование влияния на процесс образования комплексов рекомбинантных белков с НЬА-А2-рестриктированными пептидами следующих факторов: рН среды, температура, концентрация ADP и аденозиновых нуклеотидных аналогов, соотношение компонентов смеси.

• Отработка методики получения* комплексов рекомбинантных белков с пептидной фракцией лизатов опухолевых клеток.

• Исследование способности полученного in vitro комплекса Н8Р70-пептид вызывать активацию антигенспецифических цитотоксических Т-лимфоцитов.

Научная новизна и практическая значимость работы.

В результате проведенных работ получено четыре высокопродуктивных штамма JM109/pQE-hHSP70AlB, JM109/pQE-hHSP70HYB, JM109/pQE-hHSC70, JM109/pQEhHSC70HYB. Отработана методика получения высокоочищенных рекомбинантных белков человека HSP70aib> HSC70, и их гибридных аналогов, что позволяет исследовать разнообразные функции этих важных клеточных шаперонов.

Продемонстрировано влияние междоменных взаимодействий на спектральные характеристики белков. Впервые была показана корреляция изменений в УФ-спектре рекомбинатных HSP70 человека со структурными изменениями, происходящими при взаимодейстии данных белков с пептидами. Показаны различия пептид-связывающей активности рекомбинантных белков HSP70Aib, HSP70hyb> HSC70 и HSC70hyb

В ходе исследований был определен характер взаимодействий АТР-азного и пептид-свзывающего доменов в рекомбинантных белках и на основе полученных данных впервые предложен способ определения количества пептидных комплексов в препаратах HSP70, который может быть использован для стандартизации вакцин на основе рекомбинантных HSP70.

Показана возможность увеличения количества вакцины, выделяемой из фиксированного количества опухолевых клеток, за счет использования пептидной фракции лизата опухолевых клеток.

Наиболее перспективными из полученных рекомбинантных белков являются HSP70hyb и HSC70. Предложена методика получения противоопухолевых вакцин на их основе.

Работа в целом представляет собой основу для создания технологического регламента получения индивидуальных противоопухолевых, а также противовирусных вакцин на основе рекомбинантных белков HSP70. В работе проанализированы возможности дальнейшего совершенствования данного направления с учетом полученных в ней новых научных данных.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на следующих конференциях: International Scientific-Practical Interdisciplinary Workshop "New Technologies in Medicine and Experimental Biology" (Bangkok-Pattaya, Thailand, 2007). М1жнародна наукова конференщя студенев та молодых вчених «Молодь — медициш майбутнього» (Одесса, Украина, 2008. Работа награждена дипломом I степени.) V Конференция молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2008). VIII Всероссийская выставка научно-технического творчества молодежи НТТМ-2008 (Москва, 2008. Автор награжден медалью «За успехи в научно-техническом творчестве»). Международная научная конференция студентов, аспирантов и молодых учёных "Ломоносов-2009" (Москва, 2009). Методическая конференция кафедры биохимии ММА им. И.М.Сеченова 22.04.2009.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Черников, Владимир Александрович

ВЫВОДЫ

1. Сконструированы четыре рекомбинантные плазмидные ДНК и на их основе получены высокопродуктивные штаммы E.coli JM109/pQE-HSP70AlB, JM109/pQE-HSP70HYB, JM109/pQE-HSC70HYB и JM109/pQE-HSC70.

2. Разработана методика получения рекомбинантных белков HSP70aib и HSC70, а также гибридных белков IISP70hyb и HSC70hyb

3. Обнаружены и охарактеризованы особенности спектральных характеристик полученных рекомбинантных белков HSP70aib> HSC70, HSP70hyb и HSC70hyb и их комплексов с пептидами.

4. При исследовании взаимодействия рекомбинантных белков HSP70 с пептидами обнаружена линейная зависимость их АТР-азной активности от количества образующихся комплексов Н8Р70-пептид и на основе полученных данных предложен способ количественного определения пептидных комплексов в препаратах HSP70.

5. Установлены основные параметры, определяющие степень связывания пептидов с белками семейства HSP70 (концентрация ADP, температура и рН среды, соотношение пептидов и HSP70, типы белков и предложен оптимизированный метод получения комплексов пептидов с рекомбинантными HSP70 in vitro.

6. Показано, что спектр низкомолекулярных пептидов лизатов опухолевых клеток, связываемых рекомбинантными HSP70hyb и HSC70, зависит от условий образования комплексов in vitro (рН среды, молекулярное соотношение компонентов).

7. Продемонстрирована способность комплекса гибридного белка HSP70hyb с пептидным антигеном индуцировать образование специфических цитотоксических лимфоцитов in vitro.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенных исследований получен рекомбинантный белок HSP70hyb, обладающий новыми свойствами, обуславливающими его перспективность для дальнейшего использования при создании вакцин. С ним удалось получить наибольшее количество пептидных комплексов, а для стабилизации образовавшихся комплексов не требуется ADP. Исследование временной динамики образования комплексов пептидов с рекомбинантными HSP70aib> HSP70hyb и HSC70 позволило впервые показать двойную роль ADP, как нуклеотидного фактора, в работе шаперонной системы HSP70. Связывание ADP с N-концевым доменом индуцирует конформационные изменения в белке и облегчает его переход в «закрытую» конформацию, тем самым достигается не только повышение стойкости комплекса, но и увеличивается эффективность связывания с пептидами.

С другой стороны, при исследовании спектральных характеристик белков было показано, что при взаимодействии С-концевого домена HSP70 с пептидом также возникают конформационные изменения, затрагивающие не только субстрат-связывающий, но и АТР-азный домен. Причем индуцированные пептидами конформационные перестройки тем сильнее, чем выше сродство HSP70 к пептиду. Обнаруженные взаимодействия доменов в HSP70, согласующиеся с описанными в литературе данными о работе шаперонной системе, обуславливают следующие свойства HSP70, показанные в нашей работе. Это — зависимость АТР-азной активности от количества пептида, связанного с HSP70 и увеличение избирательности связывания HSP70 с пептидами при повышении концентрации ADP. Сложный характер влияния ADP необходимо учитывать при нагрузке HSP70 in vitro смесью пептидов.

В ходе проведения экспериментов было показано, что взаимное влияние доменов проявляется не только в форме линейной зависимости АТР-азной активности препарата белка от количества образовавшихся комплексов, угловой коэффициент которой определяется, по-видимому, структурой субстрат-связывающего домена и поэтому различается для HSP70aib и HSP70hyb- Субстратные предпочтения пептид-связывающего домена определяются, по-видимому, структурой АТР-азного, следствием чего является сходство параметров аффинности исследованных пептидов к HSP70aib и HSP70hyb

Проведенные в работе исследования позволили определить оптимальные значения рН среды, температуры и концентрации ADP для получения комплексов пептидов с HSP70 in vitro. Совместное использование HSP70hyb и HSC70 дает дополнительную возможность расширить спектр захватываемых пептидов. Благодаря одинаковому коэффициенту зависимости АТР-азной активности от количества комплексов в препарате этих белков, получаемый композитный препарат возможно стандартизовать по значению АТР-азной активности, характеризующему содержание комплексов с пептидами.

В экспериментах с лизатами опухолевых клеток показана возможность увеличения количества и повышения качества вакцины за счет использования свободных опухолевых пептидов. Таким образом, имеющиеся в настоящее время разработки могут послужить основой для создания технологического регламента получения индивидуальных противоопухолевых вакцин на базе рекомбинантных HSP70 и проведения необходимого комплекса доклинических и клинических испытаний для внедрения нового подхода в современную онкологическую практику в России.

Следует отметить, что предложенная методика не требовательна к техническому оснащению и необходимые для получения вакцины процедуры могут быть выполнены практически в любом лечебно-профилактическом учреждении, плоть до районной поликлиники, где есть собственная биохимическая лаборатория и хирургический кабинет. Введение же вакцины осуществляется путем подкожной инъекции, а данная манипуляция является рутинной для медицинского персонала среднего звена. Таким образом, введение в практику предлагаемых разработок будет способствовать улучшению качества и повышению количества медицинских услуг, оказываемых населению в области онкологии.

Определенный интерес для дальнейшего изучения может представлять поиск наиболее эффективных методов лизирования опухолевых клеток, например с применением протеаз. Проведенные исследования показали, что свойства пептидов эшоированных из комплексов с MHC-I, HSP90 и gp96 несколько отличаются, от свойств свободных опухолевых пептидов. Это дает возможность расширения спектра антигенов, извлекаемых из лизата опухолей, за счет элюции антигенов из комплексов с названными выше белковыми молекулами. Другим направлением оптимизации подхода, основанного на получении индивидуальных вакцин с применением рекомбинантного HSP70 является исследование возможности получения комплексов белков HSP70 с крупными белковыми молекулами, например, при кратковременной денатурации последних. Развитие этого направление позволит более эффективно преодолевать МНС-рестрикцию, однако, возможно, крупные белковые агрегаты будут индуцировать продукцию антител, которые в свою очередь, снизят их эффективность.

Полученные нами результаты дают также возможность несколько дополнить представления о работе шаперонной системы HSP70 in vivo, не смотря на то, что в клетке на нее действует множество дополнительных факторов по сравнению с изученными в данной работе. Нам удалось показать, что HSP70 обладает способностью связываться с более широким спектром пептидов, чем удается элюировать из комплексов, образовавшихся с HSP70 in vivo. Простота процедуры элюции эндогенных пептидов из комплексов с HSP70 обеспечивает уверенность в том, что узкий спектр свойств элюировапных пептидов не обусловлен потерями на разных этапах выделения и очистки. Таким образом, на субстратные предпочтения HSP70 оказывают влияние не только ко-шапероны, способные модулировать пептид-связывающую активность, но и другие внутриклеточные факторы, среди которых особое значение имеет концентрация ADP. Развитие гипоэпергетических состояний, характеризующихся низкой концентрацией АТР и высокой ADP, вследствие стрессовых воздействий приводит к преимущественному связыванию белков семейства HSP70 с высокоаффинными пептидами.

Резкое изменение кинетических характеристик HSP70hyb и практически полная потеря способности HSC70hyb связываться с пептидами позволяют судить о причинах высокой гомологии белков семейства HSP70 у людей, проживающих в разных регионах и относящихся к различным этническим группам, а также об их высокой эволюционной консервативности.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Черников, Владимир Александрович, 2009 год

1. Варфоломеев С.Д., Гуревич К.Г. Биокинетика: Практический курс. М.: ФАИР1. ПРЕСС, 1999-720с.

2. Крыштановский А.О. Ограничения метода регрессионного анализа. Социология:4М. 2000. № 12. С. 96-112.

3. Мейл Д., Бростофф Дж., Рот Д.Б., Ройт А.Иммунология/ пер. с англ. —

4. М.:Логосфера, 2007. 568 с.

5. Adachi Н, Tsujimoto М. Endothelial scavenger receptors. Prog Lipid Res. 20061. Sep;45(5):379-404.

6. Alexander M., Salgaller M.L., Celis E., Sette A., Barnes W.A., Rosenberg S.A., Steller

7. M.A. Generation of tumor-specific cytolytic T lymphocytes from peripheral blood of cervical cancer patients by in vitro stimulation with a synthetic human papillomavirus type 16 E7 epitope. Am J Obstet Gynecol. 1996 Dec;175(6):1586-93.

8. Anderson, S. L., Shen, Т., Lou, J., Xing, L., Blachere, N. E., Srivastava, P. K., Rubin,

9. B. Y. The endoplasmic reticular heat shock protein gp96 is transcriptionally upregulated in interferon-treated cells. J. Exp. Med. (1994)180: 1565-1569.

10. Asea A., Rehli M., Kabingu E., Boch J.A., Bare O., Auron P.E., Stevenson M.A.,

11. Caldervvood S.K. Novel signal transduction pathway utilized by extracellular HSP70: role of toll-like receptor (TLR) 2 and TLR4. J Biol Chem, 2002, 277(17), 1502815034.

12. Arnaiz B, Madrigal-Estebas L, Todryk S, James TC, Doherty DG, Bond U. A novelmethod to identify and characterise peptide mimotopes of heat shock protein 70-associated antigens.//.! Immune Based Ther Vaccines. 2006. - V. 4. - P. 2-14.

13. Baez-Astiia A., Herraez-Hernandez E., Garbi N., Pasolli H.A., Juarez V., Zur Hausen

14. H., Cid-Arregui A. Low-dose adenovirus vaccine encoding chimeric hepatitis В virus surface antigen-human papillomavirus type 16 E7 proteins induces enhanced E7-specific antibody and cytotoxic T-cell responses. J Virol. 2005 0ct;79(20):12807-17.

15. Banecki В., Zylicz M. Real time kinetics of the DnaK/DnaJ/GrpE molecular chaperonemachine action // J. Biol Chem. 1996. - Vol. 271. - P. 6137-6143.

16. Basu S., Binder R.J., Ramalingam Т., Srivastava P.K. CD91 is a common receptor forheat shock proteins gp96, hsp90, hsp70, and calreticulin // Immunity. 2001. - Vol. 14(3).-P. 303-313.

17. Bccker T, Hartl F.U, Wieland F. CD40, an extracellular receptor for binding and uptakeof Hsp70-peptide complexes. J Cell Biol. 2002 Sep 30;158(7):1277-85.

18. Bendz H., Ruhland S.C., Pandya M.J, Hainzl O., Riegelsberger S., Braiichlc C.,

19. Mayer M.P., Buchner J., Issels R.D., Noessner E. Human heat shock protein 70 enhances tumor antigen presentation through complex formation and intracellular antigen delivery without innate immune signaling. J Biol Chem. 2007 Oct 26;282(43):31688-702.

20. Blake, M. J., Udelsman, R., Feulner, G. J., Norton, D.D., Holbrook, N. J.: Stressinduced heat shock protein 70 expression in adrenal cortex: an adrenocorticotropic hormone-sensitive, age-dependent response. Proc Natl Acad Sci USA (1991) 88, 9873-9877

21. Brabletz Т., Jung A., Spaderna S., Hlubek F., Kirchner T. Opinion: migrating cancerstem cells an integrated concept of malignant tumour progression. Nat Rev Cancer. 2005 Sep;5(9):744-9.

22. Bredenbeck A, Losch FO, Sharav T, Eichler-Mertens M, Filter M, Givehchi A, Sterry

23. W, Wrede P, Walden P. Identification of noncanonical melanoma-associated T cell epitopes for cancer immunotherapy. J Immunol. 2005 Jun 1;174(11):6716-24.

24. Breloer M., Marti Т., Fleischer В., von Bonin A. Isolation of processed, H-2Kb-bindingovalbumin-derived peptides associated with the stress proteins HSP70 and gp96 // Eur. J. Immunol.- 1998. Vol. 28. - P. 1016- 1021.

25. Brocchieri L., Conway de Macario E., Macario A.J. hsp70 genes in the human genome:

26. Conservation and differentiation patterns predict a wide array of overlapping and specialized functions // BMC Evol. Biol. 2008. - P. 8-19.

27. Broquet, A. H., Thomas, G., Masliah, J., Trugnan, G., Bachelet, M. Expression of themolecular chaperone Hsp70 in detergent-resistant microdomains correlates with its membrane delivery and release. J Biol Chem (2003) 278, 21601-21606

28. Bryant P., Ploegh H. Class II MHC peptide loading by the professionals. Curr Opin1.munol. 2004 Feb;16(l):96-102.

29. Buchberger A., Theyssen H., Schroder H., McCarty J.S., Virgallita G., Milkereit P.,

30. Reinstein J., Bukau B. Nucleotide-induced conformational changes in the ATPase and substrate binding domains of the DnaK chaperoneprovide evidence for interdomain communication//J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 270. -P. 16903-16910.

31. Buczynski.G., Slepenkov S.V., Sehorn M.G. and Witt S.N. Characterization of a Lidless

32. Form of the Molecular Chaperone DnaK. // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276 (29). - P. 27231-27236

33. Burch P.A., Croghan G.A., Gastineau D.A., Jones L.A., Kaur J.S., Kylstra J.W.,

34. Richardson R.L., Valone F.H., Vuk-Pavlovic S. Immunotherapy (APC8015,

35. Provenge) targeting prostatic acid phosphatase can induce durable remission of metastatic androgen-independent prostate cancer: a Phase 2 trial. Prostate. 2004 Aug 1;60(3): 197-204.

36. Caldcrwood S.K., Mambula S.S,. Gray P.J. Jr. Extracellular heat shock proteins in cellsignaling and immunity. Ann N Y Acad Sci. 2007 Oct;l 113:28-39.

37. Callahan M.K., Chaillot D., Jacquin C., Clark P.R. and Menoret A. Differential

38. Acquisition of Antigenic Peptides by Hsp70 and Hsc70 under Oxidative Conditions // J. Biol. Chem.- 2002. Vol. 277 (37). - P. 33604-33609.

39. Carlos C.A, Dong H.F., Howard O.M., Oppenheim J.J., Hanisch F.G., Finn O.J.

40. Human tumor antigen MUC1 is chemotactic for immature dendritic cells and elicits maturation but does not promote Thl type immunity. J Immunol. 2005 Aug l;175(3):1628-35.

41. Carter P.J. Potent antibody therapeutics by design. Nat Rev Immunol. 20061. May;6(5):343-57.

42. Ccgielska A., Georgopoulos C. Functional Domains of the Escherichia coli dnaK Heat

43. Shock Protein as Revealed by Mutational Analysis // J. Biol. Chem. 1989. - Vol. 264(35).- P. 21122-21130.

44. Chakroborty N.G., Stevens R.L., Mehrotra S. et al. Recognition of PSA-derived peptideantigens by T cells from prostate cancer patients without any prior stimulation. //Cancer Immuno.Immunother. 2003. - V.52. - P.497-505

45. Chan K., Delfert D., Junger K. A direct colorimetric assay for Ca2+-stimulated ATPaseactivity. Analitical Biochemistry 157, 375-380, 1986.

46. Chang M.H., Chen C.J., Lai M.S., Hsu H.M., Wu T.C., Kong M.S., Liang D.C., Shau

47. W.Y., Chen D.S. Universal hepatitis В vaccination in Taiwan and the incidence of hepatocellular carcinoma in children. Taiwan Childhood Hepatoma Study Group. N Engl J Med. 1997 Jun 26;336(26): 1855-9.

48. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolashion by acid guanidiniumthiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem 1987,162, 156-159.

49. Delneste Y, Magistrelli G, Gaiichat J, Haeuvv J, Aubry J, Nakamura K, Kawakami

50. Honda N, Goetsch L, Sawamura T, Bonnefoy J, Jeannin P. Involvement of LOX-1 in dendritic cell-mediated antigen cross-presentation. Immunity 17: 353-362.

51. Denisenko O.N., Yarchuk O.B. Regulation of LacZ mRNA translatability in a cell-freesystem at heat shock by the last four sense codons // FEBS Lett. 1989. - Vol. 247 (2). -P. 251-254.

52. Denzer, K., Kleijmeer, M. J., Heijnen, H. F., Stoorvogel, W., Geuze, H. J.: Exosome:from internal vesicle of the multivesicular body to intercellular signaling device. J Cell Sci 113 Pt 19 (2000), 3365-3374

53. Dunn G.P, Bruce A.T, Ikeda H., Old L.J., Schreiber R.D. Cancer immunoediting: fromimmunosurveillance to tumor escape. Nat Immunol. 2002 Nov;3(l l):991-8.

54. Dunn G.P., Old L.J., Schreiber R.D. The immunobiology of cancer immunosurveillanceand immunoediting. Immunity. 2004 Aug;21(2): 137-48.

55. Eberlein T.J., Rosenstein M., Rosenberg S.A. Regression of a disseminated syngeneicsolid tumor by systemic transfer of lymphoid cells expanded in interleukin 2. J Exp Med. 1982 Aug 1;156(2):3 85-97.

56. Edwards D.P., Estes P.A., Fadok V.A., Bona B.J., Onate S., Nordeen S.K., Welch W.J.

57. Heat shock alters the composition of heteromeric steroid receptor complexes and enhances receptor activity in vivo // Biochemistry. 1992. - Vol. 31. - P. 2482-2491.

58. Ellis R.J. The molecular chaperone concept // Semin. Cell Biol. 1990. - Vol. 1. - P. 1-9.

59. Fan H., Kashi R.S., Middaugh C.R. Conformational lability of two molecular chaperones

60. Hsc70 and gp96: cffects of pH and temperature. Arch Biochem Biophys. 2006 Mar l;447(l):34-45.

61. Figlin R.A., Thompson J.A., Bukowski R.M., Vogelzang N.J., Novick A.C., Lange P.,

62. Steinberg G.D., Belldegrun A.S. Multicenter, randomized, phase III trial of CD8(+) tumor-infiltrating lymphocytes in combination with recombinant interleukin-2 in metastatic renal cell carcinoma. J Clin Oncol. 1999 Aug;17(8):2521-9.

63. Flaherty K.M., DeLuca-Flaherty C., McKay D.B. Three-dimensional structure of the

64. ATPase fragment of a 70K heat-shock cognate protein // Nature. 1990. — Vol. 346(6285). - P. 623-628.

65. Flynn G.C., Chappell T.G., Rothman J.E. Peptide Binding and Release by Proteins1.plicated as Catalysts of Protein Assembly // Science. 1989. - Vol. 245 (4916). - P. 385-390.

66. Fourie A.M., Sambrook J.F., and Gething M.J. Common and Divergent Peptide Binding

67. Specificities of hsp70 Molecular Chaperones // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269 (48). - P. 30470-30478.

68. Freitag, D. G., Ouimet, P. M., Girvitz, T. L. and Kapoor, M. Heat shock protein 80 of

69. Neurospora crassa, a cytosolic molecular chaperone of the eukaryotic stress 90 family, interacts directly with heat shock protein 70. (1997) Biochemistry 36: 10221-10229.

70. Gao В., Eisenberg E., Greene L. Interaction of Nucleotide-Free Hsc70 with Clathrin and

71. Peptide and Effect of ATP Analogues // Biochemistry. 1995. - Vol. 34. - P. 1188211888.

72. Gastpar R, Gross C, Rossbacher L, Ellwart J, Riegger J, Multhoff G. The cell surfacelocalized heat shock protein 70 epitope TKD induces migration and cytolytic activity selectively in human NK cells. J Immunol. 2004 Jan 15;172(2):972-80.

73. Gattinoni L., Powell D.J. Jr., Rosenberg S.A., Restifo N.P. Adoptive immunotherapy forcancer: building on success. Nat Rev Immunol. 2006 May;6(5):383-93.

74. Geladopoulos T.P., Sotiroudis T.G., Evangelopoulos A.E. A malachite greencolorimetric assay for protein phosphatase activity. Anal Biochem 1991, 192(1), 112116.

75. Gogvadze V, Orrenius S. Mitochondrial regulation of apoptotic cell death. Chem Biol1.teract 2006;163:4-14.

76. Gragerov A., Gottesman M.E. Different peptide binding specificities of hsp70 familymembers // J. Mo.l Biol. 1994. - Vol. 241(2). - P. 133-135.

77. Gragerov A., Zeng L., Zhao X., Burkholder W., and Gottesman M.E. Specificity of

78. DnaK-peptide binding // J. Mol. Biol. 1994. - Vol. 235 - P. 848-854.

79. Graziano D.F, Finn O.J. Tumor antigens and tumor antigen discovery. Cancer Treat Res.2005; 123:89-111.

80. Greenberg M.A., Fefer P.D. Specificity of adoptive chemoimmunotherapy of establishedsyngeneic tumors. Cheever J Immunol. 1980 Aug;125(2):711-4.

81. Grossmann ME, Madden BJ, Gao F, Pang YP, Carpenter JE, McCormick D, Young

82. CY. Proteomics shows Hsp70 does not bind peptide sequences indiscriminately in vivo.// Exp Cell Res. 2004. - V. 297(1). - P. 108-117.

83. Guerrero C.A., Bouyssounade D., Zarate S., Isa P., Lopez Т., Espinosa R., Romero P.,

84. Mendez E., Lopez S., Arias C.F. Heat shock cognate protein 70 is involved in rotavirus cell entry. J Virol, 2002, 76(8), 4096-4102.

85. Guidon P.T., Hightower L.E. Purification and initial characterization of the 71-kilodaltonrat heat-shock protein and its cognate as fatty acid binding proteins // Biochemistry. -1986.-Vol. 25.-P. 3231-3239.

86. Guzhova I., Kislyakova K., Moskaliova O., Fridlanskaya I., Ту tell M., Cheetham M.,

87. Margulis В.: In vitro studies show that Hsp70 can be released by glia and that exogenous Hsp70 can enhance neuronal stress tolerance. Brain Res (2001) 914, 66-73

88. Ha J-H., Hellman U., Johnson E.R., Li L., McKay D.B., Sousa M.C., Takedai S.,

89. Wernstedt C. and Wilbanks S.M. Destabilization of Peptide Binding and Interdomain Communication by an E543K Mutation in the Bovine 70-kDa Heat Shock Cognate Protein, a Molecular Chaperone // J. Biol. Chem. 1997. - Vol. 272 (44). - P. 2779627803.

90. Haanen J.B., Baars A., Gomez R., Weder P., Smits M., de GruijI T.D., von Blomberg

91. B.M., Bloemena E., Scheper R.J., van Ham S.M., Pinedo H.M., van den Eertwegh

92. A.J. Melanoma-specific tumor-infiltrating lymphocytes but not circulating melanoma-specific T cells may predict survival in resected advanced-stage melanoma patients. Cancer Immunol Immunother. 2006 Apr;55(4):451-8

93. Hartl F.U. Molecular chaperones in cellular protein folding // Nature. 1996. - Vol. 381.-P. 571-579.

94. Haug M, Dannecker L, Schepp CP, Kwok WW, Wernet D, Buckner JH, Kalbacher

95. H, Dannecker GE, Holzer U. The heat shock protein Hsp70 enhances antigen-specific proliferation of human CD4+ memory T cells. Eur J Immunol. 2005 Nov;35(l l):3163-72

96. Hersey P., Coates A.S., McCarthy W.H., Adjuvant immunotherapy of patients with highrisk melanoma using vaccinia viral lysates of melanoma: results of a randomized trial, J Clin Oncol 20 (2002):4181-4190.

97. Hightower, L. E., Guidon, P. Т., Jr.: Selective release from cultured mammalian cells ofheat-shock (stress) proteins that resemble glia-axon transfer proteins. J Cell Physiol 138 (1989), 257-266

98. Hishiya A., Takayama S. Molecular chaperones as regulators of cell death. Oncogene.2008 Oct 27;27(50):6489-506.

99. Houghton J. Morozov A., Smirnova I., Wang T.C. Stem cells and cancer. Semin Cancer

100. Biol. 2007 Jun; 17(3):191-203.

101. Ни В., Tomita М. The Hsp70 chaperone system maintains high concentrations of activeproteins and suppresses ATP consumption during heat shock. Syst Synth Biol. 2007 Mar;l(l):47-58.

102. Huang J., Klionsky D.J. Autophagy and human disease. Cell Cycle. 2007 Augl;6(15):1837-49.

103. Huang Q.Q., Sobkoviak R., Jockheck-Clark A.R., Shi В., Mandelin A.M. 2nd, Так

104. P.P., Haines G.K. 3rd, Nicchitta C.V., Pope R.M. Heat shock protein 96 is elevated in rheumatoid arthritis and activates macrophages primarily via TLR2 signaling. J Immunol. 2009 Apr 15;182(8):4965-73.

105. Hunt C., Morimoto R.I. Conserved features of eukariotic hsp70 genes revealed bycomparison with the nucleotide sequence of human hsp70. Proc Natl Acad Sci USA, 1985, 82(19), 6455-6459.

106. Hunter-Lavin, C., Davies, E. L., Bacelar, M. M., Marshall, M. J., Andrew, S. M.,

107. Williams, J. H.: Hsp70 release from peripheral blood mononuclear cells. Biochem Biophys Res Commun 324 (2004), 511-517

108. Ishii Т., Udono H., Yamano Т., Ohta H., Uenaka A., Ono T.,. Hizuta A, Tanaka N.,

109. Srivastava P.K., Nakayama E. Isolation of MHC class I-restricted tumor antigen peptide and its precursors associated with heat shock proteins Hsp70, hsp90, and gp96 // J. Immunol. 1999. -Vol. 162. - P. 1303- 1309.

110. Italiano A. Targeting the epidermal growth factor receptor in colorectal cancer: advancesand controversies. Oncology. 2006;70(3): 161-7.

111. Iwamoto M., Shinohara H., Miyamoto A., Okuzawa M., Mabuchi H., Nohara Т., Gon

112. G., Toyoda M., Tanigawa N. Prognostic value of tumor-infiltrating dendritic cells expressing CD83 in human breast carcinomas. Int J Cancer. 2003 Mar 10;104(l):92-7.

113. Jain R.K., Duda D.G., Clark J.W., Loeffler J.S. Lessons from phase III clinical trials onanti-VEGF therapy for cancer. Nat Clin Pract Oncol. 2006 Jan;3(l):24-40.

114. Janssen E.M., Lemmens E.E., Wolfe Т., Christen U., von Herrath M.G.,

115. Schoenberger S.P. CD4+ T cells are required for secondary expansion and memory in CD8+ T lymphocytes. Nature. 2003 Feb 20;421(6925):852-6.

116. Javid В., MacAry P.A., Oehlmann W., Singh M., Lehner P.J. Peptides complexed withthe protein HSP70 generate efficient human cytolytic T-lymphocyte responses // Biochem. Soc. Trans. 2004. - Vol. 32(4). - P. 622-625.

117. Jensen P.E. Recent advances in antigen processing and presentation. Nat Immunol. 20071. Oct;8(10):1041-8.

118. Jindal S., Murrey P., Rosenberg S., Young R.A., Williams K.P. Human stress proteinhsp70: overexpression in E.coli, purification and characterization. Biotechnology, 1995, 13, 1105-1109.

119. Karwacz K., Mukherjee S., Apolonia L., Blundell M.P., Bouma G., Escors D., Collins

120. M.K., Thrasher A.J. Nonintegrating lentivector vaccines stimulate prolonged T-cell and antibody responses and are effective in tumor therapy. J Virol. 2009 Apr;83(7):3094-103.

121. Kim R., Emi M., Tanabe K., Arihiro K. Tumor-driven evolution of immunosuppressivenetworks during malignant progression. Cancer Res. 2006 Jun 1;66(11):5527-36.

122. Kim S.Y., Sharma S., Hoskins J.R., Wickner S. Interaction of the DnaK and DnaJchaperone system with a native substrate, PI RepA. J Biol Chem. 2002 Nov 22;277(47):44778-83.

123. Klein G., Sjogren H.O., Klein E., Hellstrom K.E.Demonstration of resistance againstmethylcholanthrene-induced sarcomas in the primary autochthonous host., Cancer Res. 1960 Dec; 20:1561-72.

124. Koelle D.M, Magaret A, McClurkan C.L, Remington M.L, Warren T, Teofilovici F,

125. Kregel, Kevin C.: Molecular Biology of Thermoregulation: Invited Review: Heat shockproteins: modifying factors in physiological stress responses and acquired thermotolerance. JAppl Physiol (2002) 92, 2177-2186

126. Kumar S., Deepak P., Acharya A. Hsp70 induces Thl polarization through tumorassociated macrophages in a T-cell lymphoma. Neoplasma. 2007;54(2): 113-22.

127. Kyte J.A., Mu L., Aamdal S., Kvalheim G., Ducland S., Hauser M., Gullcstad H.P.,

128. Ryder Т., Lislerud K., Hammerstad H., Gaudernack G. Phase I/II trial of melanoma therapy with dendritic cells transfected with autologous tumor-mRNA. Cancer Gene Ther. 2006 0ct;13(10):905-18.

129. Laemmly U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head ofbacteriophge T4. Nature 1970, 227, 680-685.

130. Lammert, E., Arnold, D., Nijenhuis, M., Momburg, F., Hammerling, G. J., Brunner,

131. J., Stevanovic, S., Rammensee, H. G. and Schild, H. The endoplasmic reticulum-resident stress protein gp96 binds peptides translocated by TAP. (1997) Eur. J. Immunol. 27: 923-927.

132. Leist M, Jaattela M. Four deaths and a funeral: from caspases to alternative mechanisms.

133. Nat Rev Mol Cell Biol 2001;2:589-98

134. Leung S.-M., Hightower L.E. Mammalian Hsc70 and Hsp70 proteins. In: Guidebook to

135. Molecular Chaperones and Protein Folding Catalysts. Gething M.-J. (ed.) Oxford University Press, Sambrook & Tooze Imprint, Oxford. 1997. - P. 52-58.

136. Levene A.P., Singh G., Palmieri C. Therapeutic monoclonal antibodies in oncology. J R

137. Soc Med. 2005 Apr;98(4): 146-52.

138. Levine В., Deretic V. Unveiling the roles of autophagy in innate and adaptive immunity.

139. Nat Rev Immunol. 2007 Oct;7(10):767-77.

140. Lewis, M. J., Turco, S. J., Green, M. Structure and assembly of the endoplasmicreticulum. Biosynthetic sorting of endoplasmic reticulum proteins. J. Biol. Chem. (1985) 260:6926-6931.

141. Li L., Neaves W.B. Normal stem cells and cancer stem cells: the niche matters. Cancer

142. Res. 2006 May l;66(9):4553-7.

143. Livingston P.O., Wong G.Y.C., Adluri S. Improved survival in stage III melanomapatients with GM2 antibodies: a randomized trial of adjuvant vaccination with GM2 ganglioside, J Clin Oncol 12 (1994):1036-1044.

144. Liyanage U.K., Moore T.T., Joo H.G., Tanaka Y., Herrmann V., Doherty G., Drebin

145. J.A., Strasberg S.M., Eberlein T.J., Goedegebuure P.S., Linehan D.C. Prevalence of regulatory T cells is increased in peripheral blood and tumor microenvironment of patients with pancreas or breast adenocarcinoma. J Immunol. 2002 Sep 1;169(5):2756-61.

146. Lodge P.A., Jones L.A., Bader R.A., Murphy G.P., Salgaller M.L. Dendritic cell-basedimmunotherapy of prostate cancer: immune monitoring of a phase II clinical trial. Cancer Res. 2000 Feb 15;60(4):829-33.

147. Lu Y, Hu Q, Yang C, Gao F. Histidine 89 is an essential residue for Hsp70 in thephosphate transfer reaction. Cell Stress Chaperones. 2006 Summer; 11(2): 148-53.

148. Luo W., Rodina A., Chiosis G. Heat shock protein 90: translation from cancer to

149. Alzheimer's disease treatment? BMC Neurosci. 2008 Dec 3;9 Suppl 2:S7.

150. Macejak D., Rayfield M., Luftig R. Isolation and characterization of human HSP70expressed in Echerichia coli. Arch Biochem Biophys, 1990, 280(1), 55- 60.108109110111.112.113114115116,117.118119.120,121.

151. Mach H., Middaugh C.R. Simultaneous monitoring of the environment of tryptophan, tyrosine, and phenylalanine residues in proteins by near-ultraviolet second-derivative spectroscopy. Anal Biochem. 1994 Nov 1;222(2):323-31.

152. Malmberg K.J. Effective immunotherapy against cancer: a question of overcoming immune suppression and immune escape? Cancer Immunol Immunother. 2004 C)ct;53(10):879-92.

153. Marini, M., Frabetti, F., Musiani, D., Franceschi, C.: Oxygen radicals induce stress proteins and tolerance to oxidative stress in human lymphocytes. Int JRadiat Biol (1996) 70, 337-350

154. Matz, J. M., LaVoi, K. P., Blake, M. J.: Adrenergic regulation of the heat shock response in brown adipose tissue. J Pharmacol Exp Ther (1996) 277, 1751-1758

155. Mao Y., Deng A., Qu N., Wu X. ATPase domain of Hsp70 exhibits intrinsic ATP-ADP ' exchange activity. Biochemistry (Mosc). 2006 Nov;71(l 1): 1222-9.

156. Mayer M, Reinstein J, Buchner J. Modulation of the ATPase cycle of BiP by peptides and proteins. J Mol Biol. 2003 Jun 27;330(1): 137-44.

157. Mazzarella, R. A., Green, M. ERp99, an abundant, conserved glycoprotein of theendoplasmic reticulum, is homologous to the 90 kDa heat shock protein (hsp90) and the 94-kDa glucose regulated protein (grp94). J. Biol. Chem. (1987) 262: 8875-8883.

158. McCarty J.S., Buchberger A., Reinstein J., Bukau B. The role of ATP in the functional cycle of the DnaK chaperone system // J. Mol. Biol. 1995. - Vol. 249. -P. 126-137.

159. Mehlen P., Puisieux A. Metastasis: a question of life or death. Nat Rev Cancer. 2006 Jun;6(6):449-58.

160. Melief C.J. Cancer immunotherapy by dendritic cells. Immunity. 2008 Sep;29(3):372-83.

161. Mitchell M.S., Von Eschen K.B., Phase III trial of Melacine melanoma theraccine versus combination chemotherapy in the treatment of stage IV melanoma, Proc Am Soc Clin Oncol 16 (1997), p. 494

162. Minami, Y., Kawasaki, H., Suzuki, K. and Yahara, I. The calmodulin-binding domain of the mouse 90-kDa heat shock protein. (1993) J. Biol. Chem. 268: 9604-9610.

163. Morath C., Mueller M., Goldschmidt H., Schwenger V., Opelz G., Zeier M. Malignancy in renal transplantation. J Am Soc Nephrol. 2004 Jun; 15(6): 1582-8.

164. Moroi Y., Mayhew M., Trcka J., Hoe M. H., Takechi Y., Hartl F. U., Rothman J. E.,

165. Houghton A. N. Induction of cellular immunity by immunization with novel hybrid peptides complexed to heat shock protein 70 PNAS, 2000; 97: 3485-90.

166. Morshauser R.C., Wang H., Flynn G.C., Zuidervveg E.R. The peptide-binding domainof the chaperone protein Hsc70 has an unusual secondary structure topology // Biochemistry. 1995. - Vol. 34(19). - P. 6261-6266.

167. Nicland T.J., Tan M.C., Monne-van Muijen M., Koning F., Kruisbeek A.M., van

168. Bleek G.M. Isolation of an immunodominant viral peptide that is endogenously bound to the stress protein GP96/GRP94 // Proc Natl Acad Sci USA.- 1996. Vol. 93 (12). -P. 6135-6139.

169. Nickel W. Unconventional secretory routes: direct protein export across the plasmamembrane of mammalian cells. Traffic (2005) 6, 607-614

170. Ohno M., Kitabatake N., Tani F. Role of the C-terminal region of mouse inducible

171. Hsp72 in the recognition of peptide substrate for chaperone activity // FEBS Letters. — 2004.-Vol. 576.-P. 381-386.

172. Okudo H., Kato H., Arakaki Y., Urade R. Cooperation of ER-60 and BiP in theoxidative refolding of denatured proteins in vitro. JBiochem, 2005,138(6), 773-780.

173. Palleros D.R., Shi L., Reid K.L., Fink A.L. Hsp70-protein complexes. Complex stabilityand conformation of bound substrate protein // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269. - P. 13107-13114.

174. Parmiani G, De Filippo A, Novellino L, Castelli C. Unique human tumor antigens:immunobiology and use in clinical trials. J Immunol 2007; 178: 1975-9.

175. Pavlenko M., Roos A.K., Lundqvist A., Palmborg A., Miller A.M., Ozenci V.,

176. Peng M, Chen M, Ling N, Xu H, Qing Y, Ren H. Novel vaccines for the treatment ofchronic HBV infection based on mycobacterial heat shock protein 70.Vaccine. 2006 Feb 13;24(7):887-96.

177. Peng P., Menoret A., Srivastava P.K. Purification of immunogenic heat shock protein70.peptide complexes by ADP-affinity chromatography // J. Immunol. Methods. — 1997.-Vol. 204.-P. 13-21.

178. Pierpaoli E.V., Sandmeier E., Baici A., Schonfeld H.J., Gisler S., Christen P. Thepower stroke of the DnaK/DnaJ/GrpE molecular chaperone system // J. Mo.l Biol. -1997. Vol. 269. - P. 757-768.

179. Pockley A.G. Heat shock proteins as regulators of the immune response. Lancet. 2003 Aug9;362(9382):469-76.

180. Cancer Immunetherapy: Immune suppression and tumor growth. Edited by Prendergast

181. G.C., Jaffee E.M., 2007, Acad. Press. London., UK.

182. Qiao Y, Liu B, Li Z. Activation of NK cells by extracellular heat shock protein 70 throughinduction ofNKG2D ligands on dendritic cells. Cancer Immun. 2008 Jul 10;8:12.

183. Qu D., Mazzarella, R. A., Green, M. Analysis of the structure and synthesis of GRP94,an abundant stress protein of the endoplasmic reticulum. DNA Cell Biol. (1994)13: 117-124.

184. Quinones Q.J., de Ridder G.G., Pizzo S.V. GRP78: a chaperone with diverse rolesbeyond the endoplasmic reticulum. Histol Histopathol. 2008 Nov;23(l 1):1409-16.

185. Robert J., Cohen N., Maniero G.D., Goyos A., Morales H., Gantress J. Evolution of theimmunomodulatory role of the heat shock protein gp96. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 2003 Mar;49(2):263-75.

186. Rodriguez R., Rubio R., Masip M., Catalina P., Nieto A., de la Cueva Т., Arriero M.,

187. San Martin N., de la Cueva E., Balomenos D., Menendez P., Garcfa-Castro. Loss of p53 induces tumorigenesis in p21 -deficient mesenchymal stem cells J. Neoplasia. 2009 Apr;l l(4):397-407.

188. Roman L.D., Wilczynski S., Muderspach L.I., Burnett A.F., O'Meara A., Brinkman

189. J.A., Kast W.M., Facio G., Felix J.C., Aldana M, Weber J.S. A phase II study of Hsp-7 (SGN-00101) in women with high-grade cervical intraepithelial neoplasia. Gynecol Oncol. 2007 Sep;106(3):558-66.

190. Rosenberg S.A., Yang J.C., Restifo N.P, Cancer immunotherapy: moving beyond currentvaccines. Nat Med. 2004 Sep;10(9):909-15.

191. Rosenthal R., Viehl C.T., GuIIer U., Weber W.P., Adamina M., Spagnoli G.C.,

192. Heberer M., Zuber M. Active specific immunotherapy phase III trials for malignant melanoma: systematic analysis and critical appraisal. J Am Coll Surg. 2008 Jul;207(l):95-105.

193. Rudiger S., Germeroth L., Schneider-Mergener J., Bukau B. Substrate specificity ofthe DnaK chaperone determined by screening cellulose-bound peptide libraries // EMBOJ.- 1997.-Vol. 16 (7).-P. 1501-1507.

194. Rudiger S., Mayer M.P., Schneider-Mergener J. and Bukau B. Modulation of Substrate

195. Specificity of the DnaK Chaperone by Alteration of a Hydrophobic Arch // J. Mol. Biol. 2000. - Vol. 304. - P. 245-251.

196. Russell R., Wali Karzai A., Mehl A.F, McMacken R. DnaJ dramatically stimulates ATPhydrolysis by DnaK: insight into targeting of Hsp70 proteins to polypeptide substrates. Biochemistry. 1999 Mar 30;38(13):4165-76.

197. Savina, A., Furlan, M., Vidal, M., Colombo, M. I.: Exosome release is regulated by acalcium-dependent mechanism in K562 cells. J Biol Chem 278 (2003), 20083-20090

198. Savina A., Amigorena S. Phagocytosis and antigen presentation in dendritic cells.1.munol Rev. 2007 Oct;219:143-56.

199. Schadendorf D., Ugurel S., Sehuler-Thurner B. DC study group of the DeCOG

200. Dacarbazin (DTIC) versus vaccination with autologous peptide-pulsed dendritic cells (DC) in first-line treatment of patients with metastatic melanoma: a randomized phase III trial of the DC study group of the DeCOG, Ann Oncol 17 (2006):563-570.

201. Schmid D., Mtinz C. Innate and adaptive immunity through autophagy. Immunity. 20071. Jul;27(l): 11-21.

202. Schmielau J., Nalesnik M.A., Finn O.J. Suppressed T-cell receptor zeta chain expressionand cytokine production in pancreatic cancer patients. Clin Cancer Res. 2001

203. Shi Y., Thomas J. The transport of proteins into the nucleus requires the 70-kilodaltonheat shock protein or its cytosolic cognate // Mol. Cell Biol. 1992. - Vol. 12. - P. 2186-2192.

204. Slepenkov S.V. and Witt S.N. Peptide-Induced Conformational Changes in the Molecular

205. Chaperone DnaK // Biochemistry. 1998. - Vol. 37. - P. 16749-16756.

206. Smith D.F., Toft D.O. Steroid receptors and their associated proteins // Mol. Endocrinol.1993.-Vol. 7.-P. Ml.

207. Sonna L.A., Fujita J., Gaffin S.L., Lilly C.M. Effects of heat and cold stress onmammalian gene expression. JAppl Physiol, 2002, 92, 1725-1742.

208. Srivastava, P. К., DeLeo, А. В., Old, L. J. Tumor rejection antigens of chemicallyinduced tumors of inbred mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1986) 83: 3407-3411.

209. Srivastava P.K. Purification of heat shock protein-peptidc complexes for use invaccination against cancers and intracellular pathogens. Methods. 1997 Jun; 12(2): 16571. Review.

210. Srivastava P.K, Menoret A., Basu S., Binder R.J., McQuade K.L. Heat shock proteinscome of age: primitive functions acquire new roles in an adaptive world. Immunity. 1998 Jun;8(6):657-65.

211. Stevens S.Y., Cai S., Pellecchia M. and Zuiderweg E.R. The solution structure of thebacterial HSP70 chaperone protein domain DnaK(393-507) in complex with the peptide NRLLLTG // Protein Sci. 2003. - Vol.12. - P. 2588-2596.

212. Stewart S.A., Poon В., Jowett J.B., Chen I.S. Human immunodeficiency virus type 1 Vprinduces apoptosis following cell cycle arrest // J Virol. 1997. - Vol. 71. - P. 55795592.

213. Su Z., DannuII J., Heiser A., Yancey D., Pruitt S., Madden J., Coleman D.,

214. Niedzwiecki D., Gilboa E., Vieweg J. Immunological and clinical responses in metastatic renal cancer patients vaccinated with tumor RNA-transfected dendritic cells. Cancer Res. 2003 May 1;63(9):2127-33.

215. Sun, L., Chang, J., Kirchhoff, S. R., Knowlton, A. A.:Activation of HSF and selectiveincrease in heat-shock proteins by acute dexamethasone treatment. Am J Physiol Heart Circ.Physiol 2(2000)78, 1091-1097

216. Szabo A., Langer Т., Schroder H., Flanagan J., Bukau В., HartI F.U. The ATPhydrolysis-dependent reaction cycle of the Escherichia coli Hsp70 system DnaK, DnaJ, and GrpE // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - Vol. 91. - P. 10345-10349.

217. Tavaria M., Gabriele Т., Kola I., Anderson R.L. A hitchhiker's guide to the human

218. Hsp70 family // Cell Stress Chaperones. 1996. - Vol. 1. P. 23-28.

219. Takenaka I.M., Leung S.M., McAndrew S.J., Brown J.P., and Hightower L.E. Hsc70binding peptides selected from a phage display peptide library that resemble organellar targeting sequences // J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 270. - P. 19839-19844.

220. Theriault J.R., Mambula S.S., Sawamura Т., Stevenson M.A., Calderwood S.K.

221. Extracellular HSP70 binding to surface receptors present on antigen presenting cells and endothelial/epithelial cells. FEBS Lett. 2005 Mar 28;579(9): 1951-60.

222. Thurner B, Roder C, Dieckmann D, Heuer M, Kruse M, Glaser A, Keikavoussi P,

223. Kampgen E, Bender A, Schuler G. Generation of large numbers of fully mature andstsble dendritic cells from leukapheresis products for clinical application. J. Immunol. Meth. 1999. -V.223. - P. 1-15.

224. Tsamandas A.C., Kardamakis D., Tsiamalos P., Liava A., Tzelepi V., Vassiliou V.,

225. Tsai M.Y., Wang C. Uncoupling of peptide-stimulated ATPase and clathrin-uncoatingactivity in deletion mutant of hsc70. J Biol Chem, 1994, 269(8), 5958-5962.

226. Tsan M.F., Gao B. Heat shock protein and innate immunity. Cell Mol Immunol. 20041. Aug;l(4):274-9.

227. Tyagi R.K., Mangal S., Garg N., Sharma P.K. RNA-based immunotherapy of cancer:role and therapeutic implications of dendritic cells. Expert Rev Anticancer Ther. 2009 Jan;9(l):97-114.

228. Udono H., Srivastava P.K. Heat shock protein 70-associated peptides elicit speci.c cancerimmunity // J. Exp. Med. 1993. - Vol. 178. - P. 1391-1396.

229. Udono H., Srivastava P.K. Comparison of tumor-specific immunogenicities of stressinduced proteins gp96, hsp90, and hsp70. J Immunol. 1994 Jun 1;152(11):5398-403.

230. Udelsman, R., Li, D. G., Stagg, C. A., Gordon, С. В., Kvetnansky, R.: Adrenergicregulation of adrenal and aortic heat shock protein. Surgery (1994)116, 177-182

231. Van den Eynde B.J., van der Bruggen P. T cell-defined tumor antigens. Curr Opin1.munol 1997; 9: 684-93.

232. Villegas F.R., Coca S., Villarrubia V.G., Jimenez R., Chillon M.J., Jareno J., Zuil M.,

233. Callol L. Prognostic significance of tumor infiltrating natural killer cells subset CD57 in patients with squamous cell lung cancer. Lung Cancer. 2002 Jan;35(l):23-8.

234. Vos M.J, Hageman J., Carra S., Kampinga H.H. Structural and functional diversitiesbetween members of the human HSPB, HSPH, HSPA, and DNAJ chaperone families. Biochemistry. 2008 Jul 8;47(27):7001-11.

235. Vyas J.M., Van der Veen A.G., Ploegh H.L. The known unknowns of antigen processingand presentation. Nat Rev Immunol. 2008 Aug;8(8):607-18.

236. Wainberg Z., Oliveira M., Lerner S., Tao Y., Brenner B.G. Modulation of stress proteinhsp27 and hsp70) expression in CD4+ lymphocytic cells following acute infection with human immunodeficiency virus type-1 // Virology. 1997. - Vol. 233. - P. 364373.

237. Walsh, R. C., Koukoulas, I., Garnham, A., Moseley, P.L., Hargreaves, M., Febbraio,

238. M, A.: Exercise increases serum Hsp72 in humans. Cell Stress Chaperones (2001) 6, 386-393.

239. Wei J., Gaut J.R. and Hendershot L.M. In Vitro Dissociation of BiP-Peptide Complexes

240. Requires a Conformational Change in BiP after ATP Binding but Does Not Require ATP Hydrolysis // J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 270 (44). - P. 26677-26682.

241. Weide В., Garbe C., Rammensee H.G., Pascolo S. Plasmid DNA- and messenger RNAbased anti-cancer vaccination. Immunol Lett. 2008 Jan 15; 115(l):33-42.

242. Wood C, Srivastava P, Bukowski R, Lacombe L, Gorelov AI, Gorelov S, Mulders P,

243. Yanagimoto H., Takai S., Satoi S., Toyokawa H., Takahashi K., Terakawa N., Kwon

244. A.H., Kamiyama Y. Impaired function of circulating dendritic cells in patients with pancreatic cancer. Clin Immunol. 2005 Jan;l 14(l):52-60.

245. Yu M., Finn О.J. DNA vaccines for cancer too. Cancer Immunol Immunother. 20061. Feb;55(2): 119-30.

246. Zitzler S., Hellwig A., Hartl F.U., Wieland F., Diestelkotter-Bachert P. Distinct bindingsites for the ATPase and substrate-binding domain of human Hsp70 on the cell surface of antigen presenting cells. Mol Immunol. 2008 Sep;45(15):3974-83.

247. Zhu X., Zhao X., Burkholder W.F., Gragerov A., Ogata C.M., Gottesman M.E. and

248. Hendrickson W.A. Structural analysis of substrate binding by the molecular chaperone DnaK // Science. 1996. - Vol. 272. P. 1606-1614.

249. Zou W. Immunosuppressive networks in the tumor environment and their therapeuticrelevance. Nat Rev Cancer. 2005 Apr;5(4):263-74.

250. Zuckerman A.J. Prevention of primary liver cancer by immunization. N Engl J Med. 19971. Jun 26;336(26): 1906-7.