Разработка и изучение генно-инженерных вакцин для терапии опухолей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Ларин, Сергей Сергеевич

• Ларин, Сергей Сергеевич
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ларин, Сергей Сергеевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К СОЗДАНИЮ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ВАКЦИН.

1.1. Механизмы противоопухолевого иммунного ответа.

1.1.1. Защитные функции системы адаптивного иммунитета.

1.1.1.1. Механизмы ускользания трансформированных клеток от иммунного надзора.

1.1.1.2. Современные представления о теории сигналов опасности (danger signals).

1.1.1.3. Опухолевые антигены распознаваемые иммунной системой.

1.1.2. Распознавание опухолевых клеток системой врожденного иммунитета.

1.1.2.1. Распознающие рецепторы на поверхности нормальных киллерных клеток.

1.1.2.2. NKG2D активационный рецептор распознающий опухолевые клетки.

1.1.2.3. Естественные цитотоксические рецепторы.

1.1.2.4. Активационные рецепторы KIR и LIR семейств рецепторов нормальных киллеров.

1.1.2.5. Активирующие С-лектиновые рецепторы нормальных киллеров.

1.1.2.6. NKT клетки как противоопухолевые эффекторы.

1.2. Характеристика семейства генов млекопитающих tag7-tagL (PGRPs).

1.2.1. Молекулярно генетическая характеристика генов tag 7 и tagL.

1.2.2. Функциональная характеристика семейства.

1.3. Основные стратегии современной противоопухолевой вакцинации.

1.3.1. Использование генетически модифицированных опухолевых клеток в качестве вакцины.

1.3.2. Антиген - специфические противораковые вакцины.

1.3.2.1. Пептидные вакцины.

1.3.2.2. Рекомбинантные вирусные вакцины.

1.3.2.3. Рекомбинантные бактериальные вакцины.

1.3.2.4. ДНК и РНК вакцины.

1.3.3. Дендритные клетки как компонент противораковой вакцины.

1.3.4. Белки теплового шока в качестве носителей антигенов.

1.3.5. Потенциальные возможности увеличения эффективности вакцинации.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Ферменты и реактивы.

2.2. Плазмидные векторы и клонирование.

2.3. Агарозный гель-электофорез ДНК.

2.4. Трансформация клеток Е. coli.

2.5. Выделение плазмидной ДНК.

2.6. Культивирование клеточных линий.

2.7. Получение стабильно трансфецированных клонов С26 и B16F10.

2.8. Транзиторная трансфекция культуры опухолевых клеток.

2.9. Облучение клеток.

2.10. Анализ скорости роста опухолей in vivo.

2.11. Иммунопреципитация белка Tag7 из кондиционной среды.

2.12. Электрофорез в ДСН-ПААГ и иммуноблот анализ.

2.13. Выявление экспрессии репортерного гена/? - галоктозидазы.

2.14. Иммуногистохимический анализ опухолевого материала.

2.15. Статистическая обработка результатов.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Противоопухолевый эффект экспрессии гена tag7 проявляется в рамках различных моделей злокачественных новообразований.

3.2. Транзиторно-трансформированные опухолевые клетки эффективны для профилактики образования экспериментальных опухолей.

3.3. Противоопухолевый эффект генетически модифицированных опухолевых клеток определяется секрецией белка Tag7.

3.4. Исследование опухолей после вакцинации генетически модифицированными клетками доказывает участие клеток иммунной системы в торможении опухолевого роста.

3.5. Для успешной вакцинации генетически модифицированными опухолевыми клетками необходимо участие Т лимфоцитов.

3.6. Применение генетически модифицированных клеток эффективно для терапии сформированного опухолевого узла.

3.7. Результативность использования генетически модифицированных клеток для терапии множественных метастазов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка и изучение генно-инженерных вакцин для терапии опухолей»

14 мая 1796 года английский врач Эдвард Дженнер (Edvard Jenner) привил восьмилетнему Джеймсу Фиппсу (James Phipps) вирус коровьей оспы, полученный из инфицированной руки доярки Сары Нельмес (Sarah Nelmes) [77]. Своим экспериментом Дженнер продемонстрировал резистентность мальчика по отношению к оспе. Новая процедура стала известной как вакцинация. Несмотря на некий скептицизм, вакцинация была широко принята, a cowpox вирус был позднее вытеснен vaccinia вирусом, который вызывал более мягкую реакцию на вакцинацию при сохранении стойкого перекрестного иммунитета. Таким образом, Дженнером были заложены основы науки вакцинации и иммунологии [65], а принцип использования родственного, менее опасного или ослабленного иммуногена для индукции иммунного ответа на кросс-реактивные высоко вирулентные патогены был широко использован Луи Пастером (Louis Pasteur), продемонстрировавшим защиту от холеры [128] и сибирской язвы [127]. С конца XIX начала XX века ученые изучают взаимодействие между иммунной системой и раковыми клетками, с целью усиления противоопухолевого иммунитета для терапии рака. В конце XIX века Вильям Коли (William Coley) начал лечить раковых пациентов бактериальными экстрактами (Coley's toxins) для активации общего системного иммунитета, часть которого может быть направлена против опухоли [113]. Столетие спустя, понимание молекулярных механизмов иммунологического распознавания и регуляции иммунитета дают возможность заключить, что попытки Коли создать противораковую вакцину со специфичностью по отношению к раковым клеткам и низкой токсичностью по отношению к нормальным тканям, были обречены на неудачу. В отличии от профилактических вакцин против инфекционных агентов, для которых индукция нейтрализующего гуморального иммунитета является наиболее значимым звеном, основное направление противораковой вакцинации сфокусировано на развитии антиген специфического Т-лимфоцитарного ответа [125]. По литературным данным одним из эффективных способов генерации специфического противоопухолевого иммунитета является создание вакцин на основе генетически модифицированных опухолевых клеток. Основой этого направления следует считать работу Lindenmann и Klein [94], в которой было показано, что вакцинация с использованием лизатов опухолевых клеток, инфицированных вирусом гриппа, вызывает системный иммунный ответ при последующем введении неинфицированных опухолевых клеток. В настоящее время для модификации опухолевых клеток, с целью дальнейшего терапевтического применения, широко используют гены различных цитокинов, таких как IL-2, IL-4, IL-12, IFN-y, GM-CSF, стимуляторных молекул и последовательности, кодирующие высокоиммуногенные пептиды [125].

В нашей лаборатории ранее был клонирован [4] и охарактеризован [85] новый ген млекопитающих - tag7 (PGRP), проявляющий свойства цитокина и обладающий противоопухолевой активностью [2, 53, 84, 90]. Полученные экспериментальные данные позволяли предположить, что возможно применение гена tag7 (PGRP) в противоопухолевой терапии.

В связи с вышеизложенным цель настоящего исследования состояла в разработке и тестировании генотерапевтической противораковой вакцины на основе аутологичных опухолевых клеток, модифицированных геном tag7, в рамках мышиных опухолевых моделей.

Для выполнения указанной цели были поставлены следующие экспериментальные задачи:

1. Определить спектр опухолей, чувствительных к противоопухолевому влиянию локальной экспрессии гена tag7.

2. Изучить возможность применения транзиторно-трансформированных опухолевых клеток для профилактики метастазирования.

3. Сравнить эффективность вакцинации на основе опухолевых клеток модифицированных геном tag7 с эффективностью вакцинации с использованием гена GM-CSF.

4. Протестировать возможность применения генетически модифицированных опухолевых клеток в терапевтических схемах эксперимента.

5. Изучить возможный механизм противоопухолевого иммунного ответа, вызванного вакцинацией модифицированными геном tag7 опухолевыми клетками.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Ларин, Сергей Сергеевич

5. Выводы.

1. Показано, что противоопухолевый эффект экспрессии гена tag7 распространяется на различные виды опухолевых линий и не зависит от эмбрионального происхождения ткани, давшей начало клеточной линии, а опухолевые клетки, транзиторно-трансформированные геном tag7, могут быть успешно использованы для экспериментальной противоопухолевой вакцинации.

2. Для формирования противоопухолевого ответа необходима секреция белка Tag7 трансформированными клетками.

3. Проведено сравнение эффективности вакцины на основе гена tag7 с результатами, полученными зарубежными исследователями. Показано, что эффективность применения гена tag7 для генетической модификации опухолевых клеток, в условиях данных экспериментов выше, чем при использовании гена GM-CSF.

4. Впервые показано, что в случае использования вакцины на основе опухолевых клеток, модифицированных геном tag 7, развитие противоопухолевого иммунного ответа на клеточном уровне, опосредованно участием и кооперацией двух ветвей иммунитета: врожденного (NK клетки) и адаптивного (Т лимфоциты) ответов.

5. Разработана и экспериментально проверена методика использования аутологичных генетически модифицированных опухолевых клеток для эффективной противоопухолевой терапии, базирующейся на защитных функциях иммунной системы.

4. Заключение.

Последнее десятилетие было отмечено большим научным прогрессом в разработке противоопухолевых вакцин, нежели предыдущие 90 лет, с момента опытов William Coley. Оптимизм по поводу революции, которую новые вакцины могут произвести в онкологии, должен быть умерен, благодаря данным о механизмах индуции иммунологической толерантности и устойчивой к иммунному распознаванию большинства опухолей. Однако, сравнение молекулярных вакцин нового поколения с вакцинами в старой формулировке ясно демонстрирует их превосходство в рамках мышиных раковых моделей. Будущие задачи лежат в области перехода от сегодняшних экспериментальных достижений в область воспроизводимых клинических успехов. Использование для лечения современных молекулярно-генетических вакцин позволит избежать индукции многих побочных эффектов традиционной терапии. В связи с вышесказанным, разработка и изучение данных подходов представляет большой научный и практический интерес. Настоящая работа посвящена исследованию вакцины на основе модифицированных с использованием гена tag7 аутологичных опухолевых клеток, которая была разработана в нашей лаборатории.

В данной работе иммунизация генетически модифицированными опухолевыми клетками была исследована в рамках различных моделей. Показано, что противоопухолевое влияние экспрессии tag7 распространяется на различные виды клеточных линий и не зависит от эмбрионального происхождения ткани, давшей начало опухоли. В качестве объяснения механизма ингибирования опухолевого роста на молекулярном уровне предполагается, что секреция белка Tag7 опухолевыми клетками выступает в качестве «сигнала опасности». В случае синтеза белка Tag7 модифицированными опухолевыми клетками, имитируются межклеточные сигналы, возникающие при бактериальной инфекции и сопровождающиеся активацией иммунокомпетентных клеток

Была сделана попытка оценить возможность применения модифицированных опухолевых клеток для профилактики развития опухолей на модели роста меланомы МЗ на сингенных мышах. Было получено два важных результата. Во-первых, транзиторно-трансформированные опухолевые клетки могут быть успешно использованы для экспериментальной противоопухолевой вакцинации. Во-вторых, эффект от применения для генетической модификации гена tag7, в условиях наших экспериментов выше, чем в случае использования GM-CSF. Следует отметить, что синтез белка Tag7 модифицированными опухолевыми клетками являлся непременным условием успешной вакцинации, как это было показано с использованием aHTH-Tag7 иммунной сыворотки.

Также были исследованы системные эффекты, участвующие в реакции отторжения и редукции опухолей, в частности, была показана необходимость полноценного функционирования Т клеточного звена иммунитета для развития противоопухолевого ответа.

Нами были предприняты шаги для выяснения клеточных механизмов иммунного ответа в сайте редукции опухоли. Оказалось, что эффект опосредуют Мас-1+ и NK(NKT)+ клетки. Причем, если Мас-1 позитивным клеткам приписывается основная антиген-презентирующая функция, то NK(NKT) клетки выполняют эффекторную роль.

Нельзя не упомянуть, что как это отмечено в обзоре литературы, объем знаний о мобилизации компонентов системы врожденного иммунитета постоянно возрастает. Если в настоящий момент основные направления терапии сфокусированы на запуске CD4+ и CD8+ Т клеточных противоопухолевых ответов, то в будущем, возможно, будут разработаны протоколы селективной активации NK и/или NKT противоопухолевых эффекторов напрямую или в качестве инструктивной роли врожденных реакций для системы приобретенного иммунитета. Интеграция этих двух видов иммунитета в качестве иммунотерапевтической стратегии, может представлять высокоэффективный клинический подход. В нашем случае, наблюдается ярко выраженное кооперативное действие адоптивного и врожденного иммунитетов, направленное на эллиминацию опухоли. Вполне резонное объяснение этому феномену конститутивная роль белка Tag7 в запуске и развитии врожденного иммунитета, показанная на примере дрозофилы.

Заключительная серия экспериментов была посвящена перспективам возможного практического применения разрабатываемой генноинженерной вакцины. Была показана, принципиальная возможность терапевтического применения опухолевых клеток трансформированных геном tag 7 для влияния на скорость развития злокачественных новообразований.

Таким образом, подводя итог проделанной работе, можно утверждать, что предложена и протестирована схема эффективной иммунотерапии и профилактики злокачественных новообразований, базирующаяся на использовании аутологичных опухолевых клеток, модифицированных с использованием гена tagl.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ларин, Сергей Сергеевич, 2002 год

1. Кибардин, А.В., Миркина, И.И., Корнеева, Е.А., Гнучев, Н.В., Георгиев, Г.П., Киселев, C.JI. (2000) Молекулярное клонирование нового мышиного гена tagL, содержащего лизоцим-подобный домен. Докл. Акад. Наук, 372: 103-105.

2. Киселев, С Л., Ларин, С.С., Гнучев, Н.В., Георгиев, Г.П. (2000) Ген tag7 и генотерапия рака. Генетика, 36: 1431-1435.

3. Коробко, Е.В. Характеристика свойств белка Tag7 in vitro и in v/vo.(1998) Дисс. на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Москва, 1998.

4. Кустикова, О.С., Киселев, С.Л., Бородулина, О.Р., Сенин, В.М., Афанасьева А.В., Кабишев, А.А. (1996) Клонирование гена tag7, экспрессирующегося в метастазирующих опухолях. Генетика, 32: 621-628.

5. Миркина, И.И., Кибардин, А.В., Корнеева, Е.А., Гнучев, Н.В., Георгиев, Г.П., Киселев, СЛ. (2000) Клонирование и изучение новых генов млекопитающих, имеющих область структурной гомологии с фаговым лизоцимом. Генетика, 36: 1492-1501.

6. Миркина, И.И., Киселев,СЛ., Сащенко, Л.П., Садчикова, Е.Р., Гнучев, Н.В. (1999) Клонирование гена tag7 человека и изучение его геномной организации. Докл. Акад. Наук, 367: 1-5.

7. Сенин, В.М., Иванов, A.M., Афанасьева, А.В., Бунцевич, A.M. (1984)

8. Вестник РАМН, СССР, 5: 85-91.

9. Aderem, A., Ulevitch, R. (2000) Toll-like receptors in the induction of the innate immune response. Nature, 406: 782-787.

10. Aichele, P., Brduscha, R.K., Zinkernagel, R.M., Hengartner, H. , Pircher, H.I. (1995). T cell priming versus T cell tolerance induced by synthetic peptides. J Exp Med. 1995 Jul l;182(l):261-6. J. Exp. Med., 182: 261-266.

11. Akira, S., Takeda, K., Kaisho, T. (2001) Toll-like receptors: critical proteins linking innate and acquired immunity. Nat. Immunol., 2: 675-680.

12. Aldovini, A., Young, R.A. (1991) Humoral and cell-mediated immune responses to live recombinant BCG-HIV vaccines. Nature 351. 479-482.

13. Arthur, J.F., Butterfield, L.H., Roth, M.D., Bui LA, Kiertscher SM, Lau R, Dubinett S, Glaspy J, McBride WH, Economou JS. (1997) A comparison of gene transfer methods in human dendritic cells. Cancer Gene Ther., 4: 17-25.

14. Ballas, Z.K., Rasmussen, W. (1993) Lymphokine-activated killer cells VII. IL-4 induces an NK1.1+ CD8a+p" TCR-ap B220+ lymphokine-activated killer subset. J. Immunol. 150: 17-30.

15. Banchereau, J., Steinman, R.M. (1998) Dendritic cells and the control of immunity. Nature, 392: 245-252.

16. Bauer, S., Groh, V., Wu, J., Steinle, A., Phillips, J.H., Lanier, L.L., Spies, T.1999) Activation of NK cells and T cells by NKG2D, a receptor for stress-inducible MICA. Science, 285: 727-729.

17. Beasley, R.P., Hwang, L.Y., Lin, C.C., Chien, C.S. (1981) Hepatocellular carcinoma and hepatitis В virus. A prospective study of 22 707 men in Taiwan. Lancet, 2: 1129-1133.

18. Beaudenon, S. Kremsdorf D, Croissant 0, Jablonska S, Wain-Hobson S, Orth G. (1986). A novel type of human papillomavirus associated with genital neoplasias. Nature, 321:246-249.

19. Bendelac, A., Rivera, M.N., Park, S.H., Roark, J.H. (1997) Mouse CD1-specific NK1 T cells: development, specificity, and function. Annu. Rev. Immunol. 15: 535-562

20. Berd, D., Maguire, H.C.J., McCue, P., Mastrangelo, M.J. (1990). Treatment of metastatic melanoma with an autologous tumor-cell vaccine: clinical and immunologic results in 64 patients. Clin. Oncol., 8: 1858-1867.

21. Bernards R, Destree A, McKenzie S, Gordon E, Weinberg RA, Panicali D. (1987) Effective tumor immunotherapy directed against an oncogene-encoded product using a vaccinia virus vector. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 6854-6858.

22. Boczkowski, D., Nair, S.K., Snyder, D., Gilboa, E. (1996) Dendritic cells pulsed with RNA are potent antigen-presenting cells in vitro and in vivo. J. Exp. Med., 184: 465-472.

23. Boel, P., Wildmann, C., Sensi, M.-L., Brasseur, R., Renauld, J.-C., Coulie, P., Boon, Т., van der Bruggen, P. (1995) BAGE, a new gene encoding an antigen recognized on human melanomas by cytolytic T lymphocytes. Immunity, 2: 16789

24. Borges L, Cosman D (2000) LIRs/ILTs/MIRs, inhibitory and stimulatory Ig-superfamily receptors expressed in myeloid and lymphoid cells. Cytokine Growth Factor Rev, 11: 209-217.

25. Boveri, T. (1929) The Origin of Malignant Tumors. (Baltimore: The Williams and Wikins Co.) 26-27.

26. Brossart P, Goldrath AW, Butz EA, Martin S, Bevan MJ (1997) Virus-mediated delivery of antigenie epitopes into dendritic cells as a means to induce CTL. J. Immunol., 158: 3270-3276.

27. Burkly, L.C., Lo, D., Kanagawa, 0., Brinster. R.L., Flavell, R.A. (1989) T-cell tolerance by clonal anergy in transgenic mice with nonlymphoid expression of MHC class II 1-Е. Nature 342: 564-566.

28. Burnet, F.M. (1970). The concept of immunological surveillance. Prog. Exp. Tumor Res. 13,1-27.

29. Celluzzi CM, Mayordomo JI, Storkus WJ, Lotze MT, Falo LD Jr. (1996) Peptide-pulsed dendritic cells induce antigen-specific CTL-mediated protective tumor immunity. J. Exp. Med., 183: 283-287.

30. Cerwenka, A., Bakker, A.B., McClanahan, Т., Wagner, J., Wu, J., Phillips, J.H., Lanier, L.L. (2000) Retinoic acid early inducible genes define a ligand family for the activating NKG2D receptor in mice. Immunity 2000,12: 721-727.

31. Chace, J.H., Hooker, N.A., Mildenstein, K.L., Krieg, A.M., Cowdery, J.S. (1997) Bacterial DNA-induced NK cell IFN-gamma production is dependent on macrophage secretion of IL-12. Clin. Immunol. Immunopathol. 84: 185-193.

32. Chen PW, Wang M, Bronte V, Zhai Y, Rosenberg SA, Restifo NP. (1996) Therapeutic antitumor response after immunization with a recombinant adenovirus encoding a model tumor-associated antigen. J Immunol. 156: 224-231

33. Chen YH, Chiu NM, Mandal M, Wang N, Wang CR. (1997) Impaired NK1+ T cell development and early 11-4 production in CD 1-deficient mice. Immunity, 6: 459-467.

34. Choe KM, Werner T, Stoven S, Hultmark D, Anderson KV. (2002) Requirement for a Peptidoglycan Recognition Protein (PGRP) in Relish Activation and Antibacterial Immune Responses in Drosophila.

35. Choe, K.M., Werner, Т., Stoven, S., Hultmark, D., Anderson, K.V. (2002) Requirement for a Peptidoglycan Recognition Protein (PGRP) in Relish Activation and Antibacterial Immune Responses in Drosophila. Science 2002 296: 359-362.

36. Coffman, B. (1982) Surface antigen expression and immunoglobulin rearrangement during mouse pre-B cell development. Immunological Rev., 69:523.

37. Colonna M, Nakajima H, Cella M (2000) A family of inhibitory and activating Ig-like receptors that modulate function of lymphoid and myeloid cells. Semin Immunol, 12: 121-127.

38. Correale, P., Walmsley, K., Nieroda, C., Zaremba, S., Zhu, M., Schlom, J., Tsang, K.Y. (1997) In vitro generation of human cytotoxic T lymphocytes specific for peptides derived from prostate-specific antigen. J Natl Cancer Inst, 89: 293-300.

39. Cox AL, Skipper J, Chen Y, Henderson RA, Darrow TL, Shabanowitz J, Engelhard VH, Hunt DF, Slingluff CL Jr. (1994) Identification of a peptide recognized by five melanoma-specific human cytotoxic T cell lines. Science, 264: 716-719.

40. Diefenbach, A., Jamieson, A.M., Liu, S.D., Shastri, N., Raulet, D.H. (2000) Ligands for the murine NKG2D receptor: expression by tumor cells and activation of NK cells and macrophages. Nat. Immunol., 1:119-126.

41. Disis, M.L., Cheever, M.A. (1996) Oncogenic proteins as tumor antigens. Curr. Opin. Immunol., 8: 637-642.

42. Falkow, S., lsberg. R.R., Portnoy, D.A. (1992). The interaction of bacteria with mammalian cells. Annu. Rev .Cell Biol. 8, 333-363

43. Fearon, E.R., Itaya, Т., Hunt, В., Vogelstein, В., Frost, P. (1988) Induction in a murine tumor of immunogenic tumor variants by transfection with a foreign gene. Cancer Res., 48: 2975-2980.

44. Fidler IJ. (1975) Biological behavior of malignant melanoma cells correlated to their survival in vivo. Cancer Res., 35: 218-224.

45. Finn, O.J., Jerome, K.R., Henderson, R.A., Pecher, G., Domenech, N., Magarian-Blander, B.-B. SM. (1995) MUC-1 epithelial tumor mucin-based immunity and cancer vaccines. Immunol. Rev., 145: 61-89.

46. Fisk, B, Blevins, T.L., Wharton, J.T., Ioannides, C.G. (1995) Identification of an immunodominant peptide of HER-2/neu protooncogene recognized by ovarian tumor-specific cytotoxic T lymphocytes lines. J. Exp. Med., 181: 2109-2117.

47. Flamand V, Sornasse T, Thielemans K, Demanet C, Bakkus M, Bazin H, Tielemans F, Leo O, Urbain J, Moser M. (1994) Murine dendritic cells pulsed in vitro with tumor antigen induce tumor resistance in vivo. Eur. J. Immunol., 24:605.610.

48. Georgiev, G.P., Kiselev, S.L., Lukanidin, E.M. (1998) Genes involved in the control of tumor progression and their possible use for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 1: 381-398.

49. Golumbek PT, Azhari R, Jaffee EM, Levitsky HI, Lazenby A, Leong K, Pardoll DM. (1993) Controlled release, biodegradable cytokine depots: a new approach in cancer vaccine design. Cancer Res., 53: 1-4.

50. Gong, J., Chen, D., Kashiwaba, M., Kufe, D. (1997) Induction of antitumor activity by immunization with fusions of dendritic and carcinoma cells. Nat. Med., 3: 558-561.

51. Gottar M, Gobert V, Michel T, Belvin M, Duyk G, Hoffmann JA, Ferrandon D, Royet J. (2002) The Drosophila immune response against Gram-negative bacteria is mediated by a peptidoglycan recognition protein. Nature, 416: 640-644.

52. Grabbe S, Bruvers S, Gallo RL, Knisely TL, Nazareno R, Granstein RD. (1991) Tumor antigen presentation by murine epidermal cells. J. Immunol., 146: 3656-61.

53. Groh, V., Rhinehart, R., Secrist, H., Bauer, S., Grabstein, K.H., Spies, T (1999) Broad tumor-associated expression and recognition by tumor-derived gamma delta T cells of MICA and MICB. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96: 6879-6884.

54. Hart, D.N. (1997) Dendritic cells: unique leukocyte populations which control the primary immune response. Blood, 90: 3245-3287.

55. Hashimoto, W., Takeda, K., Anzai, R., Ogasawara. K., Sakihara, H., Sugiura, K., Seki, S., Kumagai. К (1995) Cytotoxic NK1.1 Ag + alpha beta T cells with intermediate TCR induced in the liver of mice by IL-12. J. Immunol., 154: 43334340.

56. Haywood, G.R., McKhann, C.F. (1971) Antigenic specificities on murine sarcoma cells. Reciprocal relationship between normal transplantation antigens (H-2) and tumor-specific immunogenicity. J. Exp. Med., 133: 1171-1187.

57. Hesketh, R., (1997)'The Oncogene and Tumor Suppressor Genes' Facts Book, edn 2. London: Academic Press.

58. Hilleman, M.R. (1998) Six decades of vaccine development a personal history. Nature Med. vaccine supplement 4: 507-514.

59. Hodge, J.W. (1996) Carcinoembryonic antigen as a target for cancer vaccines. Cancer Immunol. Immunother., 43: 127-134.

60. Hoiseth, S.K., Stocker, B.A. (1981) Aromatic-dependent Salmonella typhimurium are non-virulent and effective as live vaccines. Nature, 291: 238-239.

61. Hsu FJ, Benike C, Fagnoni F, Liles TM, Czerwinski D, Taidi B, Engleman EG, Levy R. (1996) Vaccination of patients with B-cell lymphoma using autologousantigen-pulsed dendritic cells. Nat. Med. 2: 52-58

62. Huang AY, Golumbek P, Ahmadzadeh M, Jaffee E, Pardoll D, Levitsky H. (1994) Role of bone marrow-derived cells in presenting MHC class I-restricted tumor antigens. Science, 264: 961-965.

63. Hui, K., Grosveld, F., Festenstein, H. (1984) Rejection of transplantable AKR leukaemia cells following MHC DNA-mediated cell transformation. Nature, 311: 750-752.

64. Ikonomidis G, Paterson Y, Kos FJ, Portnoy DA. (1994) Delivery of a viral antigen to the class I processing and presentation pathway by Listeria monocytogenes. J Exp Med. 180: 2209-2218.

65. Ioannides, C.G., Fisk, В., Jerome, K.R., Irimura, Т., Wharton, J.Т., Finn, O.J. (1993) Cytotoxic T cells from ovarian malignant tumors can recognize polymorphic epithelial mucin core peptides. J Immunol., 151: 3693-3703.

66. Juillard V, Villefroy P, Godfrin D, Pavirani A, Venet A, Guillet JG. (1995). Long-term humoral and cellular immunity induced by a single immunization with replication-defective adenovirus recombinant vector. Eur J Immunol. 25: 3467-34.

67. Kang, D., Liu, G., Lundstrom, A., Gelius, E., Steiner, H. (1998) A peptidoglycan recognition protein in innate immunity conserved from insects to humans. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95: 10078-10082.

68. Kast WM, Roux L, Curren J, Blom HJ, Voordouw AC, Meloen RH, Kolakofsky

69. D, Melief CJ (1991). Protection against lethal Sendai virus infection by in vivo priming of virus-specific cytotoxic T lymphocytes with a free synthetic peptide. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 2283-2387.

70. Kircheis, R., Kupcu, Z., Wallner, G, Wagner, E. (1998) Cytokine gene-modified tumor cells for prophylactic and therapeutic vaccination: IL-2, INF-y, or combination IL-2 + INF-y. Cytokines, Cel. Mol. Ther., 4: 95-103.

71. Kiselev, S.L., Korobko, E.V., Kustikova, O.S., Larin, S.S., Rikhlin, N.T., Georgiev, G.P. (1998) Antitumor effect of the tag7 protein synthesis by the tumor cells. Eur. Cytokine Netw. 9: 401.

72. Kiselev, S.L., Kustikova, O.S., Korobko, E.V., Prokhortchouk, E.B., Kabishev, A. A., Lukanidin, E.M., Georgiev, G.P. (1998) Molecular cloning and characterization of the mouse tag7 gene encoding a novel cytokine. J. Biol. Chem. 273: 18633-18639.

73. Krieg, A. (2000) The role of CpG motifs in innate immunity. Curr. Opin. Immunol., 12: 35-43.

74. Kwon ED, Hurwitz AA, Foster BA, Madias C, Feldhaus AL, Greenberg NM, Burg MB, Allison JP. (1997) Manipulation of T cell costimulatory and inhibitory signals for immunotherapy of prostate cancer. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 8099-8103.

75. Laemmli, U.K. (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 227: 680-685.

76. Lammert E, Arnold D, Nijenhuis M, Momburg F, Hammerling GJ, Brunner J, Stevanovic S, Rammensee HG, Schild H. (1997). The endoplasmic reticulum-resident stress protein gp96 binds peptides translocated by TAP. Eur. J. Immunol., 27: 923-927.

77. Lathe R, Kieny MP, Gerlinger P, Clertant P, Guizani I, Cuzin F, Chambon P. (1987) Tumour prevention and rejection with recombinant vaccinia. Nature 326: 878-880.

78. Leach, D.R., Krummel, M.F., Allison, J.P. (1996) Enhancement of antitumor immunity by CTLA-4 blockade. Science 271: 1734-1736.

79. Leitner, W.W., Ying, H., Restifo, N.P. (2000) DNA and RNA-based vaccines: principles, progress and prospects. Vaccine, 18: 765-777.

80. Lindenmann, J., Klein, P.A. (1967) Viral oncolysis: increased immunogenicity of host cell antigen associated with influenza virus. J. Exp. Med. 126: 93-108.

81. Liu, C., Gelius, E., Liu, G., Steiner, H.s Dziarski, R. (2000) Mammalian peptidoglycan recognition protein binds peptidoglycan with high affinity, is expressed in neutrophils, and inhibits bacterial growth. J. Biol. Chem. 275: 24490 -24499

82. Livingston PO, Albino AP, Chung TJ, Real FX, Houghton AN, Oettgen HF, Old LJ. (1985) Serological response of melanoma patients to vaccines prepared from VSV lysates of autologous and allogeneic cultured melanoma cells. Cancer, 55: 713-720.

83. Long, E.O. (1999) Regulation of immune responses through inhibitory receptors. Ann. Rev. Immunol., 17: 875-904.

84. Lopez-Botet M, Bellon T (1999) Natural killer cell activation and inhibition by receptors for MHC class I. Curr Opin Immunol, 11: 301-307.

85. Malarkannan, S., Shih, P.P., Eden, P.A., Horng, Т., Zuberi, A.R., Christianson, G., Roopenian, D., Shastri, N. (1998) The molecular and functional characterization of a dominant minor H antigen, H60. J. Immunol., 161: 35013509.

86. Mandruzzato S, Brasseur F, Andry G, Boon T, van der Bruggen P. (1997). A CASP-8 mutation recognized by cytolytic T lymphocytes on a human head and neck carcinoma. J. Exp. Med., 186: 785-793.

87. Marchand M, Weynants P, Rankin E, Arienti F, Belli F, Parmiani G, Cascinelli N, Bourlond A, Vanwijck R, Humblet Y (1995). Tumor regression responses in melanoma patients treated with a peptide encoded by gene MAGE-3. Int. J. Cancer63:883-885.

88. Mason, L.H., Anderson, S.K., Yokoyama, W.M., Smith, H.R., Winkler-Pickett, R., Ortaldo, J.R (1996) The Ly-49D receptor activates murine natural killer cells. J. Exp. Med., 184:2119-2128.

89. Matejuk A, Dwyer J, Zamora A, Vandenbark AA, Offner H. (2002) Evaluation of the effects of 17beta-estradiol (17beta-e2) on gene expression in experimental autoimmune encephalomyelitis using DNA microarray. Endocrinology, 143: 313319.

90. Mayer, R.J. and Walker, J.H. (1987) Immunochemical procedures. In: Immunochemical methods in cell and molecular biology. Academic Press: San Diego, CA. 259 281

91. Michel, Т., Reichhart, J.M., Hoffmann, J.A., Royet, J. (2001) Drosophila Toll is activated by Gram-positive bacteria through a circulating peptidoglycan recognition protein. Nature, 414: 756-759.

92. Mingari, M.C., Moretta, A., Moretta, L (1998) Regulation of KIR expression in human T cells: a safety mechanism that may impair protective T-cell responses. Immunol. Today, 19: 153-157.

93. Мог, G., Singla, M, Steinberg, A.D., Hoffman, S.L., Okuda, K., Klinman, D.M.1997) Do DNA vaccines induce autoimmune disease? Hum. Gene Ther., 8: 293300.

94. Nanda, N.K., Sercarz, E.E. (1995) Induction of Anti Self - Immunity to Cure Cancer. Cell, 82:13-17.

95. Nauts, H.C. (1989) Bacteria and cancer—antagonisms and benefits. Cancer Surv. 8:713-723.

96. Nestle FO, Alijagic S, Gilliet M, Sun Y, Grabbe S, Dummer R, Burg G, Schadendorf D. (1998) Vaccination of melanoma patients with peptide- or tumor lysate-pulsed dendritic cells. Nat. Med., 4: 328-332.

97. Newborg MF, North RJ. (1980) On the mechanism of T cell-independent anti-Listeria resistance in nude mice. J Immunol. 124: 571-576

98. Nigro JM, Baker SJ, Preisinger AC, Jessup JM, Hostetter R, Cleary K, Bigner SH, Davidson N, Baylin S, Devilee P, (1989) Mutations in the p53 gene occur in diverse human tumour types. Nature, 342: 705-708.

99. Ochiai, M., Ashida, M. (1999) A pattern recognition protein for peptidoglycan. Cloning the cDNA and the gene of the silkworm, Bombyx mori. J. Biol. Chem. 274:11854-11858.

100. Paglia, P., Chiodoni, C„ Rodolfo, M„ Colombo, M.P. (1996) Murine dendritic cells loaded in vitro with soluble protein prime cytotoxic T lymphocytes against tumor antigen in vivo. J. Exp. Med., 183: 317-322.

101. Pan ZK, Ikonomidis G, Pardoll D, Paterson Y. (1995) Regression of establishedtumors in mice mediated by the oral administration of a recombinant Listeria monocytogenes vaccine. Cancer Res. 55: 4776-4779.

102. Pardoll, D. (1995) Paracrine cytokine adjuvants in cancer immunotherapy. Ann. Rev. Immunol., 13: 399-415.

103. Pardoll, D.M. (1998) Cancer vaccines. Nature Med. Vaccine suppl. 4: 525-531.

104. Paster, L. (1882) Une statistique au sujet de la vaccination preventive contre le charbon, portant sur quatre-vingt-cinqmille animaux. CR Acad. Sci., Paris, 95:1250-1252.

105. Paster, L., Chamberland, C.-E., Roux, E. (1881) Sur la vaccination charbonneuse. CRAcad. Sci., Paris, 92:1378-1383.

106. Plautz GE, Yang ZY, Wu BY, Gao X, Huang L, Nabel GJ. (1993) Immunotherapy of malignancy by in vivo gene transfer into tumors. Proc Natl Acad Sci USA. 90: 4645-4649.

107. Poirier TP, Kehoe MA, Beachey EH. (1988) Protective immunity evoked by oraladministration of attenuated aroA Salmonella typhimurium expressing cloned streptococcal M protein. J Exp Med. 168: 25-32.

108. Porgador, A., Gilboa, E. (1995) Bone marrow-generated dendritic cells pulsed with a class I-restricted peptide are potent inducers of cytotoxic T lymphocytes. J. Exp. Med., 182:255-260.

109. Porgador, A., Snyder, D., Gilboa, E. (1996) Induction of antitumor immunity using bone marrow-generated dendritic cells. J. Immunol., 156: 2918-2926.

110. Portnoy, D.A. (1992) Innate immunity to a facultative intracellular bacterial pathogen. Curr. Opin. Immunol. 4: 20-24.

111. Prud'homme, G.J., Lawson, B.R., Chang, Y., Theofilopoulos, A.N. (2001) Immunotherapeutic gene transfer into muscle. Trends Immunol 22: 149-155.

112. Ramet, M., Manfruelli, P., Pearson, A., Mathey-Prevot, В., Ezekowitz, R.A. (2002) Functional genomic analysis of phagocytosis and identification of a Drosophila receptor for E. coli. Nature 416: 644-648.

113. Ravetch, J.V., Lanier, L.L. (2000) Immune inhibitory receptors. Science, 290: 84-89.

114. Rehman, A., Taishi, P., Fang, J., Majde, J.A., Krueger, J.M. (2001) The cloning of a rat peptidoglycan recognition protein (PGRP) and its induction in brain by sleep deprivation. Cytokine, 13:8-17.

115. Restifo, N., Rosenberg, S. (1999) The development of recombinant and synthetic cancer vaccines. Curr. Opin. Oncol., 11: 50-57.

116. Rosenberg, S.A., Kawakami, Y., Robbins, P.F., Wang, R.F. (1996) Identification of the genes encoding cancer antigens: implications for cancer immunotherapy. Adv. Cancer Res. 70: 145-177.

117. Rubinfeld B, Robbins P, El-Gamil M, Albert I, Porfiri E, Polakis P. (1997) Stabilization of beta-catenin by genetic defects in melanoma cell lines. Science, 275: 1790-1792.

118. Sadoff JC, Ballou WR, Baron LS, Majarian WR, Brey RN, Hockmeyer WT, Young JF, Cryz SJ, Ou J, Lowell GH. (1988). Oral Salmonella typhimurium vaccine expressing circumsporozoite protein protects against malaria. Science 240: 336-338.

119. Sambrook, J., Fritsch E F., Maniatis Т., (1989) Molecular cloning. 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press: Ann Arbor, Ml.

120. Sanes JR, Rubenstein JL, Nicolas JF. (1986) Use of a recombinant retrovirus to study post-implantation cell lineage in mouse embryos. EMBO J., 5: 3133-3142.

121. Sato Y, Roman M, Tighe H, Lee D, Corr M, Nguyen MD, Silverman GJ, Lotz M, Carson DA, Raz E. (1996) Immunostimulatory DNA sequences necessary for effective intradermal gene immunization. Science, 273: 352-354.

122. Schafer, R., Portnoy, D.A., Brassell, S.A., Paterson, Y. (1992) Induction of a cellular immune response to a foreign antigen by a recombinant Listeria monocytogenes vaccine. J Immunol. 149: 53-59.

123. Schmidt, W., Buschle, M., Zauner, W., Kirlappos, H., Mechtler, K., Trska, B, Birnstiel, M. (1997) Cell-free tumor antigen peptide-based cancer vaccines. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 3262-3267.

124. Schnare, M., Barton, G.M., Holt, A.C., Takeda, K., Akira, S., Medzhitov, R. (2001) Toll-like receptors control activation of adaptive immune responses. Nat. Immunol., 2: 947-950.

125. Schulz M, Zinkernagel RM, Hengartner H. (1991) Peptide-induced antiviral protection by cytotoxic T cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 88: 991- 993.

126. Shimizu J, Suda T, Yoshioka T, Kosugi A, Fujiwara H, Hamaoka T. (1989) Induction of tumor-specific in vivo protective immunity by immunization with tumor antigen-pulsed antigen-presenting cells. J. Immunol., 142: 1053-1059.

127. Sivori S, Vitale M, Morelli L, Sanseverino L, Augugliaro R, Bottino C, Moretta L, Moretta A. (1997) p46, a novel natural killer cell-specific surface molecule that mediates cell activation. J Exp Med, 186:1129-1136.

128. Smith, H.R., Chuang, H.H., Wang, L.L., Salcedo, M., Heusel, J.W., Yokoyama, W.M. (2000) Nonstochastic coexpression of activation receptors on murine natural killer cells. J. Exp. Med., 191: 1341-1354.

129. Soloski, M.J. (2001) Recognition of tumor cells by the innate immune system. Curr. Opin. Immunol., 13: 154-162.

130. Song K, Chang Y, Prud'homme GJ. (2000) IL-12 plasmid-enhanced DNA vaccination against carcinoembrionic antigen (CEA) studied in immune-gene knockout mice. Gene Ther. 7: 1527-1535.

131. Song K, Chang Y, Prud'homme GJ. (2000) Regulation of T-helper-1 versus T-helper-2 activity and anhancement of tumor immunity by combined DNA-based vaccination and nonviral cytokine gene transfer. Gene Ther. 7: 481-492.

132. Speeht JM, Wang G, Do MT, Lam JS, Royal RE, Reeves ME, Rosenberg SA, Hwu P. (1997) Dendritic cells retrovirally transduced with a model antigen gene are therapeutically effective against established pulmonary metastases. J. Exp. Med., 186: 1213-1221.

133. Srivastava, P.K., Heike, M. (1991) Tumor-specific immunogenicity of stress-induced proteins: convergence of two evolutionary pathways of antigen presentation? Semin Immunol., 3: 57-64.

134. Staveley-O'Carroll K, Sotomayor E, Montgomery J, Borrello I, Hwang L, Fein S, Pardoll D, Levitsky H. (1998) Induction of antigen-specific T cell anergy: An early event in the course of tumor progression. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95: 1178-1183.

135. Steinman, R.M., Cohn, Z.A. (1973) Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution. J. Exp. Med., 137: 1142-1162.

136. Stover CK, de la Cruz VF, Fuerst TR, Burlein JE, Benson LA, Bennett LT, Bansal GP, Young JF, Lee MH, Hatfull GF (1991) New use of BCG for recombinant vaccines. Nature 351, 456-460

137. Tamura, Y., Peng, P., Liu, K., Daou, M., Srivastava, P.K. (1997) Immunotherapy of tumors with autologous tumor-derived heat shock protein preparations. Science, 278: 117-120.

138. Thomas MC, Greten TF, Pardoll DM, Jaffee EM (1998) Enhanced tumor protection by granulocyte-macrophage colony-stimulating factor expression at the site of an allogeneic vaccine. Hum Gene Ther. 9: 835-843.

139. Thomas, L. (1959) In Discussion of cellular and humoral aspects of the hypersensitive states, Hoeber-Harper, New York, 529-532.

140. Timmerman, J.M., Levy, R. (1999) Dendritic cell vaccines for cancer immunotherapy. Annu. Rev. Med., 50: 507-529.

141. Titzer S, Christensen O, Manzke 0, Tesch H, Wolf J, Emmerich B, Carsten C, Diehl V, Bohlen H. (2000) Vaccination of multiple myeloma patients with idiotype-pulsed dendritic cells: immunological and clinical aspects. Br J Haematol. 108: 805-816.

142. Toes RE, Blom RJ, van der Voort E, Offringa R, Melief CJ, Kast WM. (1996) Protective antitumor immunity induced by immunization with completely allogeneic tumor cells. Cancer Res., 56: 3782-3787.

143. Topalian, S.L., Gonzales, M.I., Parkhurst, M., Li, Y.F., Southwood, S., Sette, A.,

144. Rosenberg, S.A., Robbins, P.F. (1996) Melanoma-specific CD4+ T cell recognize nonmutated HLA-DR restricted tyrosinase epitopes. J. Exp. Med., 183: 19651971.

145. Urban, J.L., Burton, R.C., Holland, I.M., Kripke, M.L., Schreiber, H. (1982) Mechanisms of syngeneic tumor rejection. Susceptibility of host-selected progressor variants to various immunological effector cells. J. Exp. Med., 155: 557-573.

146. Uyttenhove, C., Maryanski, J., Boon, T. (1983) Escape of mouse mastocytoma P815 after nearly complete rejection is due to antigen-loss variants rather than immunosuppression. J. Exp. Med. 157: 1040-1052.

147. Van den Eynde В., Lethe, В., Van Pel, A., De Plaen, E., Boon, Т., (1991) The gene coding for a major tumor rejection antigen of tumor P815 is identical to the normal gene of syngenic DBA/2 mice. J. Exp. Med., 173: 1373-1384.

148. Van den Eynde, В., Peeters, O., De Backer, O., Gaugler, В., Lucas, S., Boon, T: (1995) A new family of genes coding for an antigen recognized by autologouscytolytic T lymphocytes on a human melanoma. J Exp Med, 182: 689-698.

149. Van den Eynde, B.J., Van der Bruggen, P. (1997) T cell defined tumor antigens. Curr. Opin. Immunol, 9:684-693.

150. Van der Eynde, В., Lethe, В., Vel Pel, A., De Plaen, E., Boon, T. (1991) The gene coding for a major tumor rejection antigen of tumor P815 is identical to the normal gene of syngeneic DBA/2 mice. J. Exp. Med., 173: 1373-1384.

151. Van Pel A, van der Bruggen P, Coulie PG, Brichard VG, Lethe B, van den Eynde B, Uyttenhove C, Renauld JC, Boon T. (1995) Genes coding for tumor antigens recognized by cytolytic T lymphocytes. Immunol. Rev. 145: 229-250.

152. Vance, R.E., Kraft, J.R., Altman, J.D., Jensen, P.E., Raulet, D.H. (1998) Mouse CD94/NKG2A is a natural killer cell receptor for the nonclassical major histocompatibility complex (MHC) class I molecule Qa-l(b). J. Exp. Med., 188: 1841-1848.

153. Wallich R, Bulbuc N, Hammerling GJ, Katzav S, Segal S, Feldman M. (1985) Abrogation of metastatic properties of tumour cells by de novo expression of H-2K antigens following H-2 gene transfection. Nature 315: 301-305.

154. Wang M, Bronte V, Chen PW, Gritz L, Panicali D, Rosenberg SA, Restifo NP. (1995) Active immunotherapy of cancer with a nonreplicating recombinantfowlpox virus encoding a model tumor-associated antigen. J. Immunol. 154: 46854692.

155. Wang, В., Godillot, A.P., Madaio, M.P., Weiner, D.B., Williams, W.V. (1998) Vaccination against pathogenic cells by DNA inoculation. Curr. Top. Microbiol. Immunol., 226: 21-35.

156. Weiner, G.J., Liu, H.M., Wooldridge, J.E., Dahle, C.E., Krieg, A.M. (1997) Immunostimulatory oligodeoxynucleotides containing the CpG motif are effective as immune adjuvants in tumor antigen immunization. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 10833-10837.

157. Wen, Y.J., Ling, M., Bailey-Wood, R., Lim, S.H. (1998) Idiotypic protein-pulsed adherent peripheral blood mononuclear cell-derived dendritic cells prime immune system in multiple myeloma. Clin. Cancer Res., 4: 957-62.

158. Werner, Т., Liu, G., Kang, D., Ekengren, S., Steiner, H., Hultmark, D. (2000) A family of peptidoglycan recognition proteins in the fruit fly Drosophila melanogaster. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97: 13772-13777.

159. Wick M, Dubey P, Koeppen H, Siegel CT, Fields PE, Chen L, Bluestone JA, Schreiber H. (1997) Antigenic cancer cells grow progressively in immune hosts without evidence for T cell exhaustion or systemic anergy. J. Exp. Med., 186: 229238.

160. Wortzel, R.D., Philipps, С., Schreiber, H. (1983) Multiple tumour-specific antigens expressed on a single tumour cell. Nature, 304: 165-167.

161. Wu, J., Song, Y., Bakker, A.B., Bauer, S., Spies, Т., Lanier, L.L., Phillips, J.H. (1999) An activating immunoreceptor complex formed by NKG2D and DAP 10. Science, 285: 730-732.

162. Xiang ZQ, Yang Y, Wilson JM, Ertl HC. (1996) A replication-defective human adenovirus recombinant serves as a highly efficacious vaccine carrier. Virology 219:220-227.

163. Yasamura Y, Tashjian AH Jr, Sato GH. (1966) Establishment of four functional, clonal strains of animal cells in culture. Science, 154: 1186-1189.

164. Автор благодарит Сергея Львовича Киселева, чье терпение и чуткое, требовательное руководство не только успешно направляло научные исследования, но и позволило многое понять и приобрести в общении с окружающими людьми.

165. Участие Георгия Павловича Георгиева и всех сотрудников лаборатории молекулярной гентики рака позволило организовать проведение работы.

166. Автор признателен коллегам Павлу Мироновичу Кириленко, Елене Сергеевне Захаровой, Раисе Андреевне Мусиной за участие на этапах проведения работы.

167. Спасибо всем сотрудникам различных подразделений ИБГ РАН, которые помогали решать технические вопросы обеспечения и проведения работ.

168. Отдельная благодарность Андрею Юрьевичу Суровому за предоставленные реактивы и консультации по вопросам трансфекции эукариотических клеток.

169. Автор выражает свою признательность Екатерине Викторовне Моисеевой, за помощь в проведении экспериментов на мышах A/Sn, и Игорю Брызгалову, за организацию и проведение работ с бестимусными мышами.

170. Выражаю особую благодарность родным и близким мне людям, без поддержки которых, выполнение данной работы было бы невозможным.