Противораковая активность in vivo лизированных эпимастигот Trypanosoma cruzi различных генетических линий тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат медицинских наук Цэцэгсайхан, Батмонх

• Цэцэгсайхан, Батмонх
• кандидат медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Цэцэгсайхан, Батмонх

ВВЕДЕНИЕ. 3

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Trypanosoma cruzi и болезнь Чагаса. 6

1.2. Противоопухолевая активность препаратов из Trypanosoma cruzi in vivo.12

1.3. Возможное участие иммунологических механизмов в противоопухолевом эффекте Trypanosoma cruzi.24

1.4. Генотипическая неоднородность вида Trypanosoma cruzi.35

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Штаммы Trypanosoma cruzi коллекции лаборатории «Генетика инфекционных заболеваний».

2.2. Культивирование трипаносом. 41

2.3. Приготовление лизатов T.cruzi.

2.4. Исследование противоопухолевой активности лизатов T.cruzi in vivo.43

2.5. Определение антител к T.cruzi методом непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ). 45

2.6. Исследование общности антигенов T.cruzi и клеток аденокарциномы Эрлиха.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Действие лизатов эпимастигот Trypanosoma cruzi на рост аденокарциномы Эрлиха мышей in vivo.

3.1.1. Действие лизатов в дозе 5 ке/мышь. 47

3.1.2. Действие лизатов в дозе 15 ке/мышь.50

3.1.3. Степень противоопухолевой активности лизатов, полученных из разных клонов Т. cruzi. 53

3.2. Влияние антител против Trypanosoma cruzi на опухолевый рост

3.2.1. Фоновые антитела к Т. cruzi у интактных мышей.58

3.2.2. Общность антигенов Т. cruzi и клеток аденокарциномы Эрлиха и антитела, индуцированные прививкой опухоли. 61

3.2.3. Иммуногенность препаратов из Т. cruzi. 67

3.2.4. Антитела к Т. cruzi и противоопухолевый эффект.80

3.3. Различия клонов Т. cruzi в противоопухолевом эффекте in vivo.91

ГЛАВА 4. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Противораковая активность in vivo лизированных эпимастигот Trypanosoma cruzi различных генетических линий»

Жгутиковое простейшее Trypanosoma cruzi - возбудитель болезни Чагаса, остающейся серьёзной проблемой Южной и Центральной Америки.

Интересная особенность этого паразита - открытый в 1931 году Г.И. Роскиным и Е.В.Экземплярской антагонизм между T.cruzi и процессом злокачественного роста, что легло в основу нового направления современной онкотерапии - биотерапии злокачественных заболеваний (Клюева, Роскин, 1946, 1957). Трипаносома оказалась способной предпочтительно перед нормальными клетками размножаться и развиваться в раковых клетках хозяина и таким образом подавлять опухолевый рост или приводить к полной регрессии новообразований. Эта противораковая активность T.cruzi распространяется и на злокачественные заболевания человека.

Противораковое начало сохраняется в культуральных (эпимастиготных) формах и убитых клетках T.cruzi, на основе чего из них производились два противоопухолевых препарата: круцин в России и трипаноза во Франции.

Механизм противоракового действия T.cruzi до сих пор нельзя считать выясненным. Уже в первых работах Г.И. Роскин высказал предположение об участии в этом феномене нескольких факторов. И в настоящее время появились данные, свидетельствующие о том, что эффект T.cruzi не сводится только к прямому воздействию на раковые клетки и что в противораковом феномене участвуют иммунологические механизмы.

Известно, что в патогенезе болезни Чагаса значительное место занимают аутоиммунные процессы, развивающиеся в результате общности антигенов паразита и тканей хозяина. Такая общность достаточно хорошо описана в отношении антигенов миокарда и нервной ткани. В последние годы появились данные об экспрессии на поверхностных структурах T.cruzi муцинов, сходных по строению с муцинами малигнизированных клеток.

В настоящее время показано, что вид T.cruzi в высокой степени структурирован генетически, а степень противораковой активности различна у штаммов данного вида, неодинаковых по биологическим свойствам.

Возможность исследования противоопухолевых свойств T.cruzi не на штаммах, а на клонах, т.е. генетически чистых линиях этого высоко дифференцированного вида появилась только теперь. Первые исследования показали, что клоповые культуры могут быть продуцентами активного начала и степень эффекта соответствующих лизатов in vitro зависит от принадлежности клона к определенной генетической группе (Шеклакова, 2003).

Цель работы: Изучение противораковой активности in vivo лизированных эпимастигот T.cruzi различных генетических линий и участия иммунологических механизмов в этом эффекте.

В соответствии с поставленной целью сформулированы следующие задачи:

1. Изучить противораковую активность in vivo лизатов из различных клонов T.cruzi;

2. Исследовать общность антигенов T.cruzi и аденокарциномы Эрлиха;

3. Провести анализ гуморального иммунологического ответа на прививку опухоли и введение лизатов;

4. Оценить влияние антител против T.cruzi на рост опухоли;

5. Сравнить рост клонов T.cruzi на различных искусственных питательных средах.

Научная новизна.

В настоящей работе получило продолжение использование в биотерапии опухоли генетически чистых линий (клонов) T.cruzi. Их обнаруженный ранее эффект на раковых клетках in vitro (Шеклакова, 2003), в данной работе впервые подтвержден в отношении аденокарциномы Эрлиха мышей in vivo. Показано, что эффект зависит от дозы вводимого препарата.

Впервые выявлена общность антигенов T.cruzi и аденокарциномы Эрлиха.

Выявлено, что противораковое действие препарата из T.cruzi осуществляется, in vivo на фоне значительного пула антител (AT) к трипаносоме: фоновых, индуцированных опухолью и возникших после введения лизатов.

Установлено, что все указанные AT оказывают ингибиторное влияние на рост прививной опухоли мышей.

При культивировании на искусственных питательных средах (среды LIT, NNN, махачкалинская) выявлены различия клонов по динамике роста, накоплению клеток и способности к длительному культивированию в этих условиях.

Практическая значимость работы.

1. Полученные данные вносят определенный вклад в изучение феномена противораковой активности T.cruzi и его связи с генетической гетерогенностью этого вида. Показана возможность использования клоновых культур T.cruzi в качестве продуцента противоопухолевого начала.

2. Выяснено, что даже у интактных мышей имеются фоновые антитела к T.cruzi, что заставляет более строго относиться к контролю в опытах по исследованию противоопухолевой активности трипаносомы.

3. Для выбора сред и клонов продуцента, способных культивироваться в достаточных для производства количествах, важны найденные клоновые различия T.cruzi при культивировании на искусственных питательных средах. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Лизаты клонов T.cruzi обладают противораковой активностью in vivo, но различаются по её степени в зависимости от клоновой принадлежности определенным генетическим группам

2. T.cruzi имеет общие антигены с аденокарциномой Эрлиха.

3. Лизаты T.cruzi обладают иммуногенностью и вызывают in vivo гуморальный ответ.

4. In vivo противоопухолевый эффект препаратов из T.cruzi осуществляется на фоне различных антител к трипаносоме, которые важны для противоракового эффекта.

5. Клоны различных генетических групп T.cruzi различаются по характеру роста на искусственных питательных средах.

Апробация работы. Диссертация выполнена в соответствии с научным направлением кафедры микробиологии медицинского факультета Российского Университета Дружбы Народов и программой совместных исследований с Московским Государственным Университетом. Результаты исследований и основные положения диссертации доложены и обсуждены на конференции кафедры микробиологии РУДН (2003, 2004), международной конференции и III съезде Паразитологического общества при РАН (Петрозаводск, 2003), форуме монгольских студентов, обучающихся в Вузах РФ (Москва, 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ.

Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, выводов и библиографического указателя. Работа изложена на 110 страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 таблицами, 24 рисунками. Список литературы содержит 169 работ: 32 российских и 137 зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Цэцэгсайхан, Батмонх

ГЛАВА 4. ВЫВОДЫ

1. Способность продуцировать противоопухолевое начало является видовым свойством T.cruzi. Как штаммы паразита, так и клонированные, генетически разные линии трипаносомы в виде лизата эпимастигот вызывают подавление роста аденокарциномы Эрлиха.

2. В пределах испытанных доз (5 и 15 млн.кл./мышь) степень противоопухолевого эффекта пропорциональна им и зависит от клона T.cruzi.

3. Противораковое действие препарата из T.cruzi осуществляется in vivo на фоне значительного пула антител к T.cruzi разного происхождения: а) фоновых антител к T.cruzi, обнаруженных у 14 % интактных мышей; б) антител к T.cruzi, индуцированных прививкой аденокарциномы Эрлиха, имеющей общие с антигены с трипаносомой; в) антител к T.cruzi, образовавшихся в результате введения лиофилизированного лизата эпимастигот паразита.

4. Все типы антител к T.cruzi влияют на противораковый эффект трипаносомы: а) фоновые антитела к T.cruzi достоверно сдерживают рост опухоли; б) антитела к T.cruzi, индуцированные прививкой аденокарциномы Эрлиха, также ингибируют её рост; в) опухолевый рост находится в сложной зависимости от антител, индуцированных лизатами паразита.

5. Выявлены различия клонов T.cruzi по степени ингибиции развития опухоли, по иммунногенности, по антигенной общности с аденокарциномой, а также по способности расти в различных культуральных средах.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Цэцэгсайхан, Батмонх, 2005 год

1. Воробьева Н.В., Калинникова В.Д., Оглоблина Т.А., Гусев М.В.Влияние лизатов эпимастиготных форм Trypanosoma cruzi на пролиферацию лимфоцитов человека in vitro. //Вестн. Моск. Ун.-та. Сер. 16. - Биология,- 1998.-№ 2.- С. 16-21.

2. Каллиникова В.Д. Биология трипанозомы шизотрипанум круци и её туморотропизм как биологическая предпосылка биотерапии рака антибиотиком круцином. // Круцин в терапии рака. М.: МГУ. -1963.- С. 19-23

3. Каллиникова В.Д. Биология трипаносомы Schizotrypanum cruzi и ее туморотропизм как биологическая предпосылка биотерапии рака круцином. //Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 16. -Биология. -1964а,- №1. С. 39-42.

4. Каллиникова В.Д. Противоопухолевые свойства жгутикового простейшего Trypanosoma cruzi.// Тула: Гриф и К, 2004. 280 с.

5. Каллиникова В.Д., Кац Г.И. Жизненный цикл Trypanosoma cruzi и антибластомная активность на его разных этапах. // Противораковый антибиотик круцин. М.: Изд-во МГУ.-1968.- С. 9-19.

6. Вестн. Моск. Ун-та. Сер.16. - Биология.- 1994 б.- № 3.- С.25-33.

7. Карпенко Л.П., Яшина Н.В. Методические указания к лабораторным занятиям по теме «Микробиологическая диагностика протозойных инфекций».// М., 2004. —46 с.

8. Клюева Н.Г. Пути биотерапии рака. // Вест. АМН СССР.-1946.- № 2-3. С. 44-53.

9. Клюева Н.Г., Роскин Г.И. Биотерапия злокачественных опухолей. // М.: Изд-во АМН СССР, 1946.-224 с.

10. Клюева Н.Г., Роскин Г.И. Проблема противораковых антибиотиков. // М.:Изд-во Ин-та вакцин и сывор, 1957,- 247 с.

11. Клюева Н.Г. Круцин как противораковый антибиотик. // Круцин в терапии рака. М.: МГУ.- 1963 б.-С. 12-18.

12. Лейкина М.И. О методе определения антибластомной активности круцина на культуре злокачественных клеток человека. // Противораковый антибиотик круцин. М.: Изд-во МГУ. -1968,- С. 267-271.

13. Лейкина М. И., Смирнова H.A. Действие инфекции Trypanosoma cruzi и круцина на перевивную меланому мышей. // Противораковый антибиотик круцин. М.: Изд-во МГУ. 1968.- С. 165-169.

14. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. // Пер. с англ.- М.: Мир, 2000.- С. 380-382.

15. Розендал Я.А. Борьба с переносчиками болезней: методы, предназначенный для отдельных лиц и общин. // Издательство «Медицина». Всемирная организация здравоохранения. - 1998.

16. Роскин Г.И., Каллиникова В.Д. Связь активности круцина с содержанием рибонуклеиновой кислоты в клетках исходных культур продуцента.// Противораковый антибиотик круцин. М.: Изд-во МГУ.-1968,- С. 77-83.

17. Роскин Г.И., Коломина С.М. Чувствительность саркомы-180 и карциномы Эрлиха к круцину. // Противораковый антибиотик круцин. М.: Изд-во МГУ.- 1968.- С. 154159.

18. Роскин Г.И., Оглоблина Т.А. Лечение круцином мышей высокораковой линии С3Н. // Противораковый антибиотик круцин. М.: Изд-во МГУ. -1968.- С. 170-172.

19. Роскин Г.И., Романова К.Г. Исследование действия протозойных токсинов на клетки злокачественных опухолей.// Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1936.- Вып. 17.- № 4. С. 595-603.

20. Роскин Г.И., Романова К.Г. Исследование терапевтического действия протозойных эндотоксинов на экспериментальный рак. // Бюл. экспер. биологии и медицины.-1938.- Т. 6,-Вып. 1.- С. 119-121.

21. Роскин Г.И., Соколова Г.А. Влияние круцина и инфекции Trypanosoma cruzi на экспериментальные лейкозы мышей. // Противораковый антибиотик круцин. М.: Изд-во МГУ. 1968,- С. 160-164.

22. Роскин Г.И., Экземплярская Е. Протозойная инфекция и экспериментальный рак. // Журн. микробиол. и иммунол. 1932.- Т.9.- № 3,- С. 339-349.

23. Скорикова А.С. Действие круцина на процессы, вызываемые вирусом саркомы Рауса. //Противораковый антибиотик круцин. М.: Изд-во МГУ,- 1968.- С.184-199.

24. Шеклакова Л.А., Карпенко Л.П., Кравцов Е.Г. Сравнительная характеристика распределения антигенов в клетках различных штаммов эпимастигот Trypanosoma cruzi. // Биомед. техпол. -2000.- Вып. 13.- С. 37-42

25. Шеклакова Л. А., Каллиникова В.Д., Карпенко Л.П. Тибайренк М. Действие лизированных Trypanosoma cruzi различных генетических групп на культуры раковых клеток человека. // Биомед. Технол. 2001. - вып. 16. - С. 224-230.

26. Alcina A., Fresno M. A tubulin-related 55 kilodalton surface antigen recognized by different Trypanosoma cruzi stage-specific monoclonal antibodies from infected mice. // Mol. Biochem. Parasitol. -1988. Vol. 29. - P. 181-190.

27. Almeida I.C., Gazzinelli R., Ferguson M.A.J., Travassos L.R. Trypanosoma cruzi Mucins: Potential Functions of a complex structure. // Mem. Do Inst. Oswaldo Cruz. — 1999.-Vol. l.-P. 173-176.

28. Alves M.J.M. Members of the Tc-85 protein family from Trypanosoma cruzi are adhesion proteins. //Braz. J. Med. Biol. Res. -1996,-Vol. 29. P. 831-833.

29. Andersson J. Experimental Chagas disease. // Stockholm, Microbiology and tumorbiology center. Karolinska Institutet, 2003.

30. Andrade S.G. Trypanosoma cruzi: Clonal Structure of Parasite Strains and the importance of principal clones.// Mem. Inst. Oswaldo Cruz.-1999. Vol. 94. -Suppl. 1. -P. 185-187.

31. Arciniegas D., Ortegon M., Rodrigues A., Mercado M., Rosas T., Velasco V., Puerta C. Determinación de la perencia de anticuerpos contra colágeno tipo 1 y IV en pacientas chagasicos. // Acta Med. Columb. -2000. Vol. 25.- No. 3.- P. 1117- 1121.

32. Avila J.L., Rojas M., Galili U. Immunogenic Gal a 1-3 Gal carbohydrate epitopes are present on pathogenic American Trypanosoma and Leishmania. // J. Immunol. -1989.-Vol. 142.-P. 2828-2834.

33. Barnabe C., Brisse S., Tibayrenc M. Population structure and genetic typing of Trypanosoma cruzi, the agent of Chagas disease: a multilocus enzyme electrophoresis approach.// Parasitology. -2000. Vol. 120. - P. 513-526.

34. Barr S.C. Anti-heart tissue antibodies during experimental infection with pathological and non-pathologenic T.cruzi isolates in dogs. // Intern. J. For Parasitol. -1993.- Vol. 23.-No.7.-P. 961-967.

35. Berzovfsky J.A., Terabe M., Oh S., Belyakov I.M., Jeffrey D.A., Janik J.E., Morris J.C. Progress on new vaccine strategies for the immunotherapy and prevention of cancer. // J. Clin. Invest.-2004.- Vol. 113.-P. 1515-1525.

36. Blanco L. Accion des Schizotrypanum cruzi sobre el desarollo del sarcoma-180 en ratones albinos C3H . // Tesis de Caracas.- 1961.

37. Bogliolo A. R., Lauriapires L., Gibson W.C. Polymorphisms in Trypanosoma cruzi: Evidence of genetic recombination.// Acta Tropica. -1996. Vol. 61.- P. 31 -40.

38. Bonfa E., Viana V.S.T., Barreto A.C.P., Joshinari N.IL, Cassermelli W. Autoantibodies in Chagas disease. An antibody cross-reactive with human and T.cruzi ribosomal proteins. // J. Immunol. -1993.- Vol. 150. -No.9.- P. 3917-3923.

39. Brisse S., Barnabe C., Tibayrenc M. J. Identification of six Trypanosoma cruzi phylogenetic lineages by random amplified polymorphic DNA and multilocus enzyme electrophoresis. // Parasitol. 2000.- Vol. 30,- P. 35-44.

40. Cabrai H.R.A. The tumorocidal effect of Trypanosoma cruzi: its intracellular cycle and the immune response of the host. // Medical Hypotheses. -2000. Vol. 54. - No.l- P. 1-6.

41. Cardoso D.F., Takehara H.A., Mota J. Autoantibodies induced by immunization with dead bloodstream trypomastigotes of T.cruzi. // Mem. Inst. Oswaldo Cruz. -1990. Vol. 85.- Suppl.l.- P.77.

42. Coudert J., Juttin P. Note sur Taction d'un lysat de Trypanosoma cruzi vis-a vis d'un cancer greffe du rat.// Compt.rend. Soc. Biol. -1950. Vol.144.- № 11-12. P. 847-849.

43. Coudert J. Recherches, expérimentales et cliniques sur Faction d'un extrait lyophilise de Trypanosoma cruzi vis-à-vis de quelques neoplasies. // Sem. Hôpitaux Le Paris.- 1956. -No. 74/9.-P. 419-427.

44. Coudert J. Que peut-on attendre de Futilization des extraits de Trypanosoma cruzi dans le traitement des neoplasmes. // Sem. Hôpitaux. -1958.- J.34. No.44.- P. 1290-1294.

45. Coudert J. Que peut-on attendre de lutilisation des extraits de Trypanosoma cruzi dauc le treatment des neoplasmes. Sem. Flopitaux. Sem. Therap. -1959. Vol. 35.- No. 1,-P.47-51.

46. Coudert J. Клинические и экспериментальные исследования действия лиофилизированного экстракта Trypanosoma cruzi на некоторые формы рака. // Антибиотики. -1961.- Т. 6. № 2. - С.99-105.

47. Davis C.D., Kuhn R.E. Detection of antigens with affinity for host-cell membrane polypeptides in culture supernatants of Trypanosoma cruzi. // Infcc. Immunol. -1990.-Vol. 58.-P. 1-6.

48. Eckhardt A.E., Goldshtein I.J. Isolation and characterization of a family of a —D-galactosyl-containing glycopeptides from Erlich ascites tumor cells.// Biochem. 1983. -Vol.22.- P. 5290-5297.

49. Elbhoudidi A., Riverd M.T., Basin H., Goldmann M., Carlier J. Kinetics of immunoglobulin in isotypes during murine Trypanosoma cruzi infection. // Bull. Soc. Fr. parasitol. -1990. Vol.8. - Suppl. 1. - P. 522.

50. Ferguson M.A.J. The surface glycoconjugates of trypanosomatid parasites. // Philos. Trans.R. Soc. Lond. Biol. Sci. -1991.- Vol. 352.- P. 1295-1305.

51. Freire Т., Medeiros A., Reis C.A., Real F.X., Osinaga E. Biochemical characterization of soluble Tn glycoproteins from malignant effusions of patients with carcinomas.- // Oncol. Rep.-2003. Vol.10.-P. 1577-1585.

52. Frosch S., Swantje K., Bernhard F. Trypanosoma cruzi is a potent inducer of interleukin-12 production in macrophages. // Med. Microbiol. Immunol. -1996,- Vol. 185.- No. 3. -P. 189-193.

53. Fausto G. Characterisation of stages and strains of Trypanosoma cruzi by analysis of cell membrane components.// J. Immunol. 1981. - Vol. 127.- No.3.

54. Galili U., Mandrell R.E., Hamedeh R.M., Shohet S.B., Griffiss J.M. Interaction between netural anti-a-galactosyl immunoglobulin G and bacteria of the human flora. // Infec. Immun. -1988,- Vol. 56. P. 1730-1737.

55. Galili U., Anaraki F., Thall A., Hill-black C., Radie M. One percent of human circulating B-lymphocytes are capable of producing the natural anti-Gal antibody. // Blood. -1993. -Vol.82. No.8. - P. 2485-2493.

56. Gea S., Ordonez P., Carban F., Josa D., Chizzolini C., Vottero-Cima E. Chagas disease cardioneuropathy. Association of anti-T.cruzi and anti-sialic nerve antibodies. // Amer. J. Trop. Med. Hyg. -1993.- Vol.495.- P. 581-588.

57. Gruzhit O., Fisken R. Failure of Trypanoma lysate in treatment of Brown-Pearce czrcinomic in rabbit. // Fed. Proc. -1948. Vol. 7. - P. 271.

58. Guiterrez L.S., Burgos M.H., Brengio S.D.R. Antibodies from Chagas patient's serum bind to the gut epithelial cell surface of Triatoma infestans. // Microscopio electrónica y Biología Celular. -1991,- Vol. 15.-No.2.-P. 145-157.

59. Hauschka T.S., Saxe L.H.Jr., Blair M. Trypanosoma cruzi in the treatment of mouse tumors.//J. Nat. Cancer Inst. -1947.- Vol. 7,-No. 4.- P. 189-197.

60. Hauschka T.S., Goodwin M.B. Trypanosoma cruzi endotoxin (KR) in the treatment of malignant mouse tumors. // Science. -1948. Vol. 107.-P. 600-602.

61. Henriksson J., Aslund L., Macina R.A. Chromosomal localization of seven cloned antigen genes provides evidence of diploidy and further demonstration of karyotype variability in Trypanosoma cruzi. // Mol. Biochem. Parasitol. -1990. Vol. 42. -P. 213214.

62. Henriksson J., Petrsson U., Solari A. Trypanosoma cruzi: Correlation between karyotype variability and isoenzyme classification. // Exp. Parasitol. -1993. Vol.77.- P. 334-348.

63. Hernandes-Munian C., Alcina A., Fresno M.A. Trypanosoma cruzi specific monoclonal antibody crossreactive with activated mouse B lymphocytes. // Bull. Soc. Fr. parasitol. — 1990.-Vol. 8. Suppl. l.-P. 610.90. Hoare 1960

64. Hontebeyric-Jaskowicz M. Murine Trypanosoma cruzi infection: a role for Th2 cells in the immunopathology of chronic infection. // Res. Immunol. -1991.-Vol. 142. No. 2. -P. 141-143.

65. Hudson L., Britten V. Immune response to South American trypanosomiasis and its relationship to Chagas disease. // British Med. Bull. -1985,-Vol. 41. No. 2.- P. 175-180.

66. Jazin E.E., Bontempi E.J., Sanchez D.O., Aslund L., Henriksson J., Frasch A.C.C., Petersson U. T.cruzi exoantigen is a member of a 160 kDa gene family. // Parasitology. -1995.-Vol. llO.-No.l.-P. 61-69.

67. Jedeloo G.C., Lignac G.O.E., Ligtenberg M.A.J., Van Thiel P.H. The biotherapeutic action of Trypanosoma cruzi on tar carcinoma in mice.// J. Nat. Cancer Inst.- 1950.- Vol. 10.-No. 4.-P. 809-813.

68. Kierzenbaum F., Lopez H.M , Sztein M.B. Inhibiton of specific immune responses by a protein produced by Trypanosoma cruzi in the course of Chagas disease.// Immunology. -1994.- Vol. 81.- No. 3,- P. 462-467.

69. Kierzenbaum F., Chagas disease and the Autoimmunity hypothesis. //-1999. Vol.12. -No.2. - P. 210-223.

70. Kinnamon K.E., Poon B.T., Hanson W.L., Waits V.B. //Activity of anticancer compounds against Trypanosoma cruzi infected mice.//Am. J. Trop. Med. Hyg. 1998. -Vol. 58(6). P. 804-806.

71. Laguens R.P., Meckert P.C., Chambo Y. Origin and significance of anti-heart and anti-skeletal muscle autoantibodies in Chagas disease. //Res. Immunol. -1991.-Vol. 142.-No. 2.-P. 160-163.

72. Lana M.D., Pinto A.S., Basrenta B., Barnabe C., Noel S., Tibayrenc M. // Trypanosoma cruzi: Infectivity of clonal genotype infections in acute and chronic phases in mice. //Exp.Parasitol.-2000.- Vol. 96. P. 61-66.

73. La Temple D.C., Abrams J.T., Zhang S.J., Galili U. Increased immunogenecity of tumor vaccines complexed with anti-Gal: Studies in knockout mice for a-1, 3 galactosyltransferase. // Cancer Res. 1999. - Vol. 59. - P. 3417-3423.

74. Lederkremer R.M., Alves M.J.M., Fonseca G.C., Colli W. A lipopeptidophosphoglycan from Trypanosoma cruzi (epimastigota):isolation, purification and carbohydrate composition. // Biochem. Biophys. -1976. - Vol. 444,- P. 85-96.

75. Leon J.S., Daniels M.D., Toriello K.M., Wan K., Engman D.M. A cardiac myosin-specific autoimmune response is induced by immunization with T.cruzi proteins. //Infect. Immun. -2004. Vol.72.- No.6.- P. 3410-3417.

76. Levin M.I. Molecular mimicry and Chagas heart disease: high anti-R-13 autoantibody levels are markers of severe Chagas heart complaint. // Res. Immunol. — 1991. Vol. 142,- No. 2.- P. 157-159.

77. Lob G. L"action du Schizotrypanum cruzi sur Tadenocarcinom provoque de la mamelle chez la souris. // Schwez. Zeschr. Allgem. Pathol, und Bakter. -1950. Bd. 13.-No. 3.- P. 279-296.

78. Lo-Man R., Bay S., Vichier-Guerre S., Deriaud E., Cantacuzene D., Leclerc C.

79. A fully synthetic immunogen carrying a carcinoma-associted carbohydrate for active specific immunotherapy.//Cancer Res. 1999. - Vol.59. - P. 1520-1524.

80. Lo Man R., Vichier-Guerre S., Bay S., Deriaud E., Cantacuzene D., Leclerc C. Anti-tumor immunity provided by a synthetic multiple antigenic glycopeptide displaying a tri-Tn glycotope.// The J. Immun. -2001. - Vol. 166. - P. 2849-2854.

81. Lopes M.F., DosReis G.F. Apoptosis as a cause of T-cell unresponsiveness in experimental Chagas disease. // Braz.J.Med. a. Biol. Res. -1995. Vol. 28.-P. 913-918.

82. Macedo A.M., Machado C.R., Oliveira R.P., Pena S.D.J. Trypanosoma cruzi: genetic structure of populations and relevance of genetic variability to the Chagas disease. // Mem. Do Inst. Oswaldo Cruz. 2004.- Vol. 99,- No. 1,- P. 1-12.

83. Majumder S., Kierzenbaum F. Mechanisms of Trypanosoma cruzi down-regulation of lymphocyte function. // J. Immmunol. 1996,- Vol. 156.-P. 3866-3874.

84. Malisoff W.M. The action of the endotoxin of Trypanosoma cruzi (KR) on malignant mouse tumors.// Science. 1947. - Vol. 106. - P. 591-594.

85. Maneesh J., Karan D., Batra S.K. Mucins in protozoan parasites.// Frontiers in Вести. Моск. Ун-та. Сер.16. -Биология.-1995.- № 1 .Bioscience. -2001.- Vol. 6. - P. 1276-1283.

86. McConville M.J., Mullin K.A., Ilgoutz S.C., Teasdale R.D. Secretory pathway of Trypanosomatid parasites. // Microbiol. Mol. Biol. Rew. -2002. Vol.66. - No.l. - P. 122-154.

87. McCormick T.S., Rowland E.C. Trypanosoma cruzi: recognition of a 43-kDa muscle glycoprotein by autoantibodies present during murine infection.// Exp. Parasitol. -1993.-Vol. 77.- P. 273-281.

88. Melo C.C.M.J., Cavalcanti J.H., Bonaldo M.C., Mortensen R.F., Aranjo-Jorge T.C. T.cruzi: Detection of surface antigen cross-reactive to human C-reactive protein. // Exptl. Parasitol.-1998. Vol. 90.-No.2.- P. 143-153.

89. Miatello C.C., Katzin A.M., Umezawa E.E., Solana M.E. T.cruzi ribosomal antigens are recognized by sera from patients with Chagas infection and/or Chagasic disease. //Mem. Inst. Oswaldo Cruz. -1990. Vol. 85. Suppl.l. - P.69.

90. Miles M.A., Souza A., Povoa M., Shaw J.J., Lainson R., Toye P.J. Isozymic heterogeneity of Trypanosoma cruzi in the first auchtonous patients with Chagas disease in Amazonian Brazil. //Nature, London. -1978. Vol. 272. -P. 819-821.

91. Millar A.E., Kahn S.J. Trypanosoma cruzi: the effect of nitric oxide synthesis inhibition on the CD4 T ce;; response to the trans-silaidase superfamily.// Exp. Parasitol. -2000. Vol. 94. - No.2.- P. 84-91.

92. Minoprio P. Chagas disease: CD-5B-cell-dependent Th2 pathology. // Res. Immunol.-1991.-Vol.142.-No.2.-P.137-140.

93. Minoprio P. Parasite polyclonal activators: new target for vaccination approacges. // Intern. J. Parasitol. -2001,- Vol. 31.- No. 5-6,- P. 587-590.

94. Mirkin G.A. // Clin. Exp. Immunol. -1997. Vol. 107,- P. 328-334.

95. Moretti E.A., Basso B., Voltero-Cima E. Exoantigen of T.cruzi. 1. Conditions for their detection and immunogenic properties in experimental infections. // J. Protozoology.-1985.-Vol. 32. -No.l.-P. 150-153.

96. Petry K., Van Voorhis W. C. Antigens of Trypanosoma cruzi that mimic mammalian nervous tissues: investigations of their role in the autoiimune pathophysiology of chronic Chagas disease. // Res. Immunol. 1991. - Vol. 142.-No.2.-P. 151-156.

97. Piuvezam M.R., Russo D.M., Burns Y.M., Skeiky Y.A.W., Grabstein K.H., Reed S.G. Characterization of response of normal human T-cells to Trypanosoma cruzi antigens. // J.Immunol. -1993. Vol. I50.-No. 3.- P. 916-924.

98. Pollevick G.D., Di Noia J.M., Salto M.L., Lima C., Leguizamon M.S., Lederkremer R.M., Frasch A.C. Trypanosoma cruzi surface mucins with exposed variant epitopes. // J. Biol. Chem. -2000. Vol.275. - P. 27671-27680.

99. Previato J.O., Andrade A.F., Pessolani M.C., Mendonca-Previato L. Incorporation of cialic acid into Trypanosoma cruzi macromolecules. A proposal for a new metabolic route. // Mol. Biochem. Parasitol. -1985.- Vol.16.- P. 85-96.

100. Previato J.O., Jones C., Goncalves L.B.P., Wait R., Travassos L.R., Mendonca-Previato L. O-glycosidically linked N-acetylglucosamine-bound oligosaccharides from glycoproteins of Trypanosoma cruzi. // Biochem. J. -1994. Vol. 301. - P. 151-159.

101. Revollo S., Oury B., Laurent J.P., Barnabe C., Quesney V., Carriere V., Noel S., Tibayrenc M. Trypanosoma cruzi: Impact of clonal evolution of the parasite on its biological and medical properties. // Exp. Parasitol. 1998. - Vol. 89. - P. 30-39.

102. Ribeiro dos Santos R., Pirmez C., Savino W. Role of autoreactive immunological mechanisms in Cahgasic carditis. // Res. Immunol. 1991. - Vol. 142.- No. 2.- P. 134137.

103. Rosenberg H. Cancer chemo (toxino) therapy revisited and alternative ways of healing,// Thesis Doctor of Naturopathy. Inst. Of Drugless Therapy. -1990.

104. Ruiz R., Rigoni V.L., Gonzalez J., Yoshida N. The 35/50 kDa surface antigen of Trypanosoma cruzi metacyclic trypomastigotes, an adhesion molecule involved in host cell invasion. // Parasite immunol. -1993. Vol. 15.- P. 121-125.

105. Sanchez G., Wallace A., Munoz S., Venegas J., Ortiz S., Asolari A.characterization of Trypanosoma cruzi populations by several molecular markers supports a clonal mode of reproduction. -1984

106. Schenkman S., Diaz C., Nussenzweig V. Attachment of Trypanosoma cruzi trypomastigotes to receptors at restricted cell surface domains. // Exp. Parasitol. —1991. -Vol. 72.- P. 76-86.

107. Skeyky J.A.W., Benson D.R., Juderian J.A., Sleath P.R., Parsons M., Reed J. Trypanosoma cruzi acidic ribosomal P protein gene family: Novel P proteins encoding unusual cros-reactive epitopes. //J. Immunol. -1993. Vol.151. - No.10.- P.5504-5515.

108. Spain D.M., Molomut N., Warshaw L.J. Preparation of lysates from cultures of Trypanosoma cruzi and their effects on normal and tumor-bearing mice. // Proc. Soc. Exper. Biol. Med. -1948. Vol. 69.-P. 134-136.

109. Springer G.F. T and Tn, general carcinoma autoantigens. // Science. 1984. -Vol. 224. - No. 4654. - P. 1198-1206.

110. Sztein M.B., Cuna W.R., Kierzenbaum F. Trypanosoma cruzi inhibits the expression of CD3, CD4, CD8, and IL-2R by mitogen-activated helper and cytotoxic human lymphocytes. //J. Immunol. 1991. - Vol. 144,- No. 9.- P. 3558-3562.

111. Tarleton R.I. The role of T-cell subpopulations in experimental Chagas disease. // Res. Immunol. -1991,-Vol. 142. No. 2.- P. 130-133.

112. Ternynk Th., Bleux Ch., Gregoire Y., Avrameas S., Kanellopoulos-Langevin C. Comparison between antibodies arising during Trypanosoma cruzi infection in mice and natural autoantibodies. // J.Immunol. 1990. -Vol. 144.-No. 4.-P. 1504-1511.

113. Tibayrenc M., Ward P., Moya A., Ayala F.J. // Natural populations of Trypanosoma cruzi, the agent of Chagas disease, have a complex multiclonal structure. // Proc. Natl. Acad.Sci.USA. -1986. Vol. 83.- P. 115-119.

114. Tibayrenc M., Ayala F. V. Towards a population genetics of microorganisms: the clonal theory of parasitic protozoa. // Parasitol. Today. 1991. - Vol.7. - P. 228-232.

115. Tibayrenc M. Integrated genetic epidemiology of infectious diseases: the Chagas model. // Mem. Inst. Oswaldo Cruz. -1998. Vol. 93,- No.5.- P.577-580.

116. Tibayrenc M., Ayala F.V. Isoenzyme variability in Trypanosoma cruzi, the agent of Chagas disease: genetical, taxonomical, and epidemiological significance. // Evolution. 1988. - Vol. 42. - No.2. - P. 277-292.

117. Tibbetts R.S., McCormick T.S., Rowland E.C., Miller S.D., Engman D.M. Cardiac antigen-specific autoantibody production is associated with cardiomyopathy in T.cruzi- infected mice.// J. Immunol. -1994. Vol.152.- No.3.- P. 1493-1499.

118. Tiralongo von E. Trans-sialidase from Trypanosoma congolense isolation, characterization and molecular biology. // Dissertation zur erlangung des doktorgrades der naturwissenschaften. -Dr. rer. Nat. - Universität Bremen. — 2002.

119. Torrealba L.F., Roys D.S., Ramos J. Otra nota sobre extractos de protozoarios y cancer. // Gazeta medica de Caracas. 1962. -Vol.70. No 3-6. - P. 291-297.

120. Travassos L.R., Almeida I.C. Carbohydrate immunity in American trypanosomiasis.// Springer Semin. Immun. -1993. Vol. 15.- P. 183-204.

121. Unfer R.C., Hellrung D., Link C.J. Immunity to the a (1, 3) Galactosyl epitope provides protection in mice challenged with colon cancer cells expressing a (1, 3) Galactosyl-transferase.// Cancer Res. 2003. - Vol.63. - P. 987-993.

122. Van Voorhis W.C., Eisen H. A surface antigen of Trypanosoma cruzi that mimics mammalian nervous tissue. // J. Exptl. Med. -1989. Vol. 169,- P. 641-652.

123. Van Voorhis W.C. Coculture of human peripheral blood mononuclear cells with Trypanosoma cruzi leads to proliferation. // J. Immunol. 1992. - Vol. 148.-No.1.- P. 239-248.

124. Vermelho A.B., Meirelles M.N.L., Pereira M.C., Pohlentz G., Barreto-Bergter E. Heart muscle cells share common neutral glycosphingolipids with Trypanosoma cruzi. // Acta Tropica.-1997. Vol. 64., Issues 3-4. - P. 131-143.

125. Villas Boas M.H., Barretto-Bergter E. Reactivity of Chagas sera with crude and highly purified glycosphingolipid fraction from T.cruzi epimastigotes as detected by ELISA. //Abstract IX Int. Congress Prozool. Berlin. 1993. -No.516. - P.131.

126. Wang, Bao-Le., Harwick, Larissa C., Bligh H.M. Characterization of T/Tn antigen-pulsed dendritic cells and subsequently activated T lymphocytes. // Suppl. To Clin. Cancer Res. 1999. - Vol.5.

127. Yabsley M.J., Noblet G.P., Pung O.J. Use of indirect immunoiluorescent antibody test (IFAT) and blood culture to detect Trypanosoma cruzi infections in raccoons from

128. Georgia. // -2003.- The second International virtual conference in veterinary medicine: diseases of exotic animals and wildlife.

129. Zhang Q., Tiabyrenc M., Ayala F.Y. Linkage disequilibrium in natural populations of T.cruzi, the agent of Chagas disease. // J. Prozool. -1988. Vol. 35.- No. l.-P. 81-85.