Влияние иммуносупрессоров на клеточно-матриксные взаимоотношения при экспериментальных нефропатиях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.15, Пальцева, Екатерина Михайловна

• Пальцева, Екатерина Михайловна
• 2005

Оглавление диссертации Пальцева, Екатерина Михайловна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Введение.

1.2. Экспериментальные модели, используемые для изучения прогрессирования гломерулонефрита.

1.3. Роль клеток и внеклеточного матрикса почечного клубочка в прогрессировании гломерулонефрита.

1.4. Применение иммуносупрессоров при прогрессировании гломерулонефрита.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние иммуносупрессоров на клеточно-матриксные взаимоотношения при экспериментальных нефропатиях»

Актуальность проблемы

Наиболее частым конечным исходом хронического гломерулонефрита является хроническая почечная недостаточность. Предупреждение и замедление прогрессирования болезней почек с целью отдаления терминальной почечной недостаточности - важнейшая проблема современной нефрологии [8]. В патогенезе гломерулонефритов могут играть важную роль как иммуно-воспалительные механизмы, так и неиммунные механизмы, в результате которых наблюдаются различные изменения структуры клубочков: гиперклеточность, утолщение базальной мембраны и увеличение мезангиального матрикса, отложение субэндотелиальных, субэпителиальных и мезангиальных депозитов, нарушение структуры подоцитов, приводящие к развитию склероза. Морфологическим субстратом прогрессирующей потери почечной функции и развития хронической почечной недостаточности, вне зависимости от варианта хронического гломерулонефрита, является склероз. Для замедления прогрессирования хронической почечной недостаточности в настоящее время широко применяются иммуносупрессоры. Хотя механизмы повреждения почечных клубочков при воспалительных и невоспалительных нефропатиях существенно различаются, терапия данными препаратами достаточно эффективна. При этом остаются не ясными механизмы действия различных иммуносупрессоров, способствующие восстановлению функции почечных клубочков, при различных вариантах гломерулопатий.

Цель исследования

Изучение влияния иммуносупрессоров на структуру внеклеточного матрикса и факторы, регулирующие продукцию компонентов внеклеточного матрикса, на моделях воспалительной и невоспалительной гломерулопатий.

Задачи исследования

1. Индуцировать развитие гломерулосклероза различного генеза на моделях нефротоксического нефрита и пуромицин-аминонуклеозидного нефроза.

2. Изучить распределение компонентов внеклеточного матрикса под влиянием преднизолона, циклоспорина А и микофенолата in vivo и in vitro при гломерулосклерозе, развившемся при индукции моделей нефротоксического нефрита и пуромицин-аминонуклеозидного нефроза.

3. Сравнить экспрессию ряда факторов роста и цитокинов, регулирующих продукцию внеклеточного матрикса и пролиферацию, в моделях нефротоксического нефрита и пуромицин-аминонуклеозидного нефроза под влиянием преднизолона, циклоспорина А и микофенолата in vivo и in vitro.

4. Сопоставить экспериментальные данные с вариантами гломерулопатий, морфологически близкими экспериментальным моделям.

Научная новизна

• Впервые продемонстрировано изменение распределения компонентов ВКМ под влиянием преднизолона, циклоспорина А и микофенолата in vivo и in vitro при развившемся на фоне нефротоксического нефрита и пуромицин-аминонуклеозидного нефроза гломерулосклерозе.

• Впервые проведено сравнение распределения активной (растворимой) и латентных (клеточно- и матрикс-ассоциированной) форм ТФРр, оФРФ, ИЛ-1(3 и ФНОа при гломерулосклерозе, развившемся при индукции моделей воспалительной (нефротоксического нефрита) и невоспалительной (пуромицин-аминонуклеозидного нефроза) гломерулопатий, и их изменение под действием преднизолона, циклоспорина А и микофенолата.

Практическая значимость

Модели нефротоксического нефрита и пуромицин-аминонуклеозидного нефроза отражают некоторые механизмы повреждения структур почечного клубочка и имеют морфологическое сходство с некоторыми морфологическими вариантами хронического гломерулонефрита (ХГН) человека, что позволяет использовать эти экспериментальные нефропатии для клинических испытаний различных подходов в их лечении. Экспериментальное исследование показало, что различие структуры склероза при воспалительных и невоспалительных нефропатиях обуславливает различный эффект используемых в нефрологии иммуносупрессоров на прогрессирование гломерулосклероза. Особенно это следует учитывать при выборе препарата для терапии невоспалительных гломерулопатий.

Публикации

По теме диссертационной работы опубликовано 10 печатных работ. Из них - 2 статьи и 8 тезисов. Материалы диссертации доложены на 17-м конгрессе Европейского общества патологов (Барселона, 1999), 18-м конгрессе Европейского общества патологов (Берлин, 2001), 24-м конгрессе Международной академии патологии (Амстердам, 2002), 40-м Международном конгрессе нефрологии (Берлин, 2003), научных конференциях кафедры патологической анатомии ММА им. И.М.Сеченова.

Структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка использованной литературы. Текст изложен на 124 стр. машинописного текста, иллюстрирован 28 таблицами и 30 рисунками. Библиографический указатель включает 113 источников, из них 9 отечественных.

Заключение диссертации по теме «Патологическая анатомия», Пальцева, Екатерина Михайловна

выводы

1. Для модели нефротоксического нефрита характерно развитие склероза на фоне воспаления с увеличением отложений коллагена IV типа и появлением интерстициальных коллагенов I и III типов в зоне мезангия в отличие от модели пуромицин-аминонуклеозидного нефроза, которая характеризовалась отсутствием воспаления и развитием склероза преимущественно за счет увеличения отложений коллагена IV типа. Воспаление при нефротоксическом нефрите сопровождалось повышением содержания активных форм ИЛ-lß и ФНОа; развитие гломерулосклероза - резко выраженным фиброгенным эффектом ТФР/3. При пуромицин-аминонуклеозидном нефрозе уровень продукции ТФР/3, ИЛ-1а, ИЛ-1/3 и ФНОа был ниже контрольных значений.

2. Преднизолон при нефротоксическом нефрите уменьшал пролиферацию клеток и прогрессирование склероза, подавляя отложения интерстициальных коллагенов I, III типов за счет уменьшения продукции и перевода активных форм ТФР/3 и оФРФ в латентные формы, связывающиеся с компонентами внеклеточного матрикса. При пуромицин-аминонуклеозидном нефрозе преднизолон не влиял на отложения коллагена IV типа, усиливая провоспалительное действие ФНОа и препятствуя переводу латентной формы ТФР/3, содержание которой значительно увеличивалось, в активную форму.

3. Циклоспорин А на модели воспалительной нефропатии (нефротоксический нефрит) уменьшал прогрессирование склероза (отмечалось подавление накопления интерстициальных коллагенов I и III типов) и клеточную пролиферацию за счет подавления провоспалительных цитокинов ИЛ-1/3 и ФНОа: В модели невоспалительной нефропатии (пуромицин-аминонуклеозидный нефроз) циклоспорин А предотвращал дальнейшее прогрессирование склероза, не уменьшая его, за счет усиления провоспалительного действия ИЛ-1 /3 и ФНОа.

4. МФ в моделях воспалительной (нефротокисческий нефрит) и невоспалительной (пуромицин-аминонуклеозидный нефроз) нефропатий уменьшал склеротические изменения в почечных клубочках, подавляя накопление коллагена IV типа и фиброгенное действие ТФР/3 и оФРФ. Данный препарат не влиял на воспалительную реакцию при нефротоксическом нефрите.

5. В модели нефротоксического нефрита все три иммуносупрессора (преднизолон, циклоспорин А и микофенолат) улучшали клубочковую фильтрацию, увеличивая сократимость мезангиальных клеток с фенотипом миофибробластов (повышали экспрессию а8МА), и ремоделируя структуру внеклеточного матрикса (усиливали накопление ламинина-5 и фибронектина).

6. Преднизолон и микофенолат подавляли фиброгенное действие ТФР/3, вызывая перевод его активной формы в латентную форму в моделях воспалительной (нефротоксический нефрит) и невоспалительной (пуромицин-аминонуклеозидный нефроз) нефропатий, а циклоспорин А - только при пуромицин-аминонуклеозидном нефрозе.

1.5. Заключение

Таким образом, процесс прогрессирования хронического гломерулонефрита включает в себя изменения как со стороны клеточных, так и неклеточных структур (компонентов ВКМ и разрушающих их протеиназ, факторов роста и цитокинов) почечного клубочка. Наблюдающееся при этом развитие склероза обусловлено различными факторами, ключевыми из которых являются пролиферация клеток, избыточное отложение компонентов ВКМ и сниженная их деградация. В настоящее время в терапии хронических гломерулонефритов используются такие обладающие иммуносупрессивным действием препараты как метилпреднизолон, циклоспорин А, микофенолат. Механизмы действия иммуносупрессоров, предупреждающих прогрессировать хронического гломерулонефрита, в настоящее время мало изучены. Поэтому исследование стромально-клеточных взаимоотношений, а также их изменения под действием иммуносупрессоров при хроническом гломерулонефрите является актуальным для нефрологии и патоморфологии.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Характеристика материала

Экспериментальное исследование проведено на 95 крысах линии Вистар (самцы) массой 80-90 г. Исследования проводились на модели ускоренного нефротоксического нефрита (НТН) и пуромицин-аминонуклеозидного нефроза (ПАН). Животные составили 9 групп: контрольная группа - 5 животных; хронический НТН - 10 животных; хронический НТН, леченый преднизолоном - 10 животных; хронический НТН, леченый циклоспорином А — 10 животных; хронический НТН, леченый микофенолатом — 10 животных; хронический ПАН - 20 животных; хронический ПАН, леченый преднизолоном — 10 животных; хронический ПАН, леченый циклоспорином А - 10 животных; хронический ПАН, леченый микофенолатом — 10 животных.

Нефротоксический нефрит был индуцирован антителами к гломерулярной базальной мембране (рис. 1). После преиммунизации НКС с адъювантом Фрейнда и введением через 5 суток после преиммунизации нефротоксической сыворотки (НТС) из расчета 110 мг/кг веса. Отправной точкой начала терапии являлось развитие гломерулосклероза. На 40-е сутки развития НТН 1-я группа крыс получила два пульса преднизолона (70 мг/кг), 2-я группа — ЦсА в дозе 15 мг/кг интраперитонеально в течение 9 дней, 3 группа - МФ в дозе 40 мг/кг перорально в течение 10 дней (рис. 1). Дозы вводимых препаратов соответствовали дозировкам, используемым в терапии хронического гломерулонефрита с пересчетом на массу экспериментального животного.

Пуромицин-аминонуклеозидный нефроз был индуцирован путем интраперитонеального введения 5 мг/100 г пуромицин-аминонуклеозида (Sigma, США) (рис. 1). Отправной точкой начала терапии являлось развитие гломерулосклероза. На 70-е сутки ПАН 1-я группа крыс получила два пульса преднизолона (70 мг/кг), 2-я группа - ЦсА в дозе 15 мг/кг интраперитонеально в течение 9 дней, 3 группа - МФ в дозе 40 мг/кг перорально в течение 10 дней (рис. I). Дозы вводимых препаратов соответствовали дозировкам, используемым в терапии хронического гломерул о нефрита с пересчетом на массу экспериментального животного.

НТН

ПАН

14

70

79 КО

А А

Пульсы ПЗ (70 мг/кг)

Рис. 1. Схема эксперимента: индукция моделей нефротоксического нефрита и пуромицин-аминонуклеозидного нефроза и воздействие на них преднизолоном, циклоспорином А и ми ко фен о л атом.

Для клинико-морфологического исследования были использованы биоптаты почек больных хроническим гломерулонефритом. Исследование биоптатов почек больных хроническим гломерулонефритом проведено на биопсийном материале, полученном от 49 больных, которые находились на лечении в клинике профессиональных болезней им. Е.М.Тареева ММА им. И.М.Сеченова, городской клинической больнице № 52, клинической больнице № 2, клинике им. Бурденко. Все больные в зависимости от морфологического диагноза были поделены на 7 групп по 7 больных в каждой: 1 группа включала больных с болезнью минимальных изменений (МИ), 2 группа - больных с мембранозным гломерулонефритом (МН), 3 группа - больных с фокально-сегментарным гломерулосклерозом (ФСГС), 4 группа - больных с мезангиопролиферативным гломерулонефритом (Mill Н), 5 группа - больных с мезангиопролиферативным гломерулонефритом с фибропластической трансформацией (МПГН+ФТ), 6 группа - больных с мезангиокапиллярным гломерулонефритом (МКГН), 7 группа - больных с мезангиокапиллярным гломерулонефритом с фибропластической трансформацией (МКГН+ФТ). В каждой из этих групп были как не леченые больные, так и получавшие терапию преднизолоном/метилпреднизолоном.

2.2 Методы исследования.

Для гистологического исследования экспериментального материала образцы фиксировали в нейтральном 10% формалине, затем заливали в парафин, для иммуногистохимического исследования образцы замораживали при температуре -70°С. Парафиновые срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином.

Получение первичной культуры мезангиальных клеток почечных клубочков крыс проводили в стерильных условиях. Для выделения почечных клубочков материал (корковое вещество почек) последовательно протирали через режущее сито с размером ячейки 110 мкм и пропускали полученный гомогенат через собирающее сито с размером ячейки 70 мкм. После повторного осаждения клубочков центрифугированием их инкубировали с коллагеназой IV типа активностью 388 ед/мл (Sigma, США). Затем, после отмывки материала от коллагеназы, клубочки разводили полной культуральной средой и сажали в культуральные пластиковые флаконы из расчета 10000 клубочков на 1 флакон площадью 25 см , в ячейки луночной плашки по 1000 клубочков из расчета «340 клубочков на 1 см . Полная культуральная среда состояла из культуральной среды RPMI 1640 - 40% (Пан Эко, Россия), среды Dulbecco's modified eagle medium - 40% (Sigma, США), дополненных эмбриональной телячьей сывороткой — 20% (Bio Clot (Pty), Германия), глютамином 2-4 мМ/мл - 1% (ПанЭко, Россия) и пенициллином 100 Ед/мл, стрептомицином 0,1 мг/мл - 1% (ПанЭко, Россия). Культивирование проводили в С02-инкубаторе при 37°С в течение 3-х недель с обновлениями среды 2 раза в неделю. Контроль за ростом культуры осуществляли с помощью фазово-контрастной микроскопии 2 раза в неделю.

Иммуногистохимическое исследование проводили на криостатных срезах толщиной 5 мкм и в культуре мезангиальных клеток почечных клубочков. Криостатные срезы фиксировали охлажденным ацетоном в течение 5 минут. Культуру мезангиальных клеток на ячейках луночных плашек фиксировали холодным спиртом (охлажденным при -70°С) также в течение 5 минут.

Для иммуногистохимического исследования клинического материала образцы замораживали при температуре -70°С. Иммуногистохимическое исследование проводили на криостатных срезах толщиной 5 мкм. Криостатные срезы фиксировали охлажденным ацетоном в течение 5 минут.

Применяли иммунопероксидазный (стрептавидин-биотиновый) метод с использованием моноклональных (*) и поликлональных (**) антител.

1. Для оценки межклеточных взаимодействий использовали антитела, характеризующие компоненты внеклеточного матрикса:

• Коллагены:

- интерстициальные коллагены I, III типов (IMTEK Ltd., Россия)**;

- компонент базальных мембран - коллаген IV типа (IMTEK Ltd., Россия)**.

• Ламинины:

- ламинин общий (Sigma, США)**;

- ламинин-2 - мерозин (NovoCastra, Великобритания)*;

- ламинин-5 (Chemicon, США)*;

• Фибронектин (Calbiochem, США)*;

• Гепарансульфатпротеогликан (Chemicon, США)**.

2. Для оценки развития фиброза использовали антитела к следующим антигенам:

• ТФРр - трансформирующий фактор роста-ß (NovoCastra, Великобритания)*;

• TOPß-PI - рецептор I типа к трансформирующему фактору роста ß (Santa Cruz, США)**;

• TOPß-PII - рецептор II типа к трансформирующему фактору роста ß (Santa Cruz, США)* *;

• оФРФ - основной фактор роста фибробластов (Santa Cruz, США)**;

• ОФРФ-Р1 — рецептор I типа к основному фактору роста фибробластов (Santa Cruz, США)**.

3. Для оценки уровня воспаления были использованы антитела:

• ИЛ-1а - интерлейкин 1а (Santa Cruz, США)**;

• ИЛ-1 ß - интерлейкин 1 ß (Santa Cruz, США)* *;

• ФНОа - фактор некроза опухолей а (Chemicon, США)*. 4. Для оценки баланса между синтезом и деградацией внеклеточного матрикса:

• ММП-9 - матриксная металлопротеиназа-9 (NovoCastra, Великобритания)*;

• ТИМП-1 - тканевой ингибитор матриксных металлопротеиназ первого типа (NovoCastra, Великобритания)*.

5. Для характеристики гладкомышечных клеток - aSMA - a-гладкомышечный актин (NovoCastra, Великобритания)*. Первичные антитела выявляли либо с помощью биотинилизированных вторичных антител (Sigma, США) и стрептавидина, меченного пероксидазой (Sigma, США). После этого выявляли метку с помощью диаминобензидина

ДАБ) (Sigma, США). Либо применяли набор фирмы «Zymed», США. Срезы докрашивали гематоксилином и заключали в полистирол.

При интерпретации результатов изучения определяемых антигенов учитывали локализацию и интенсивность их окрашивания, которую оценивали полу количественным методом по следующим критериям: (-) — отсутствие реакции, (-+) - очень слабая реакция в отдельных клубочках, (+-) - слабая реакция в части клубочков, (+) - умеренная реакция, (++) - сильная реакция.

Иммуноферментным методом определяли содержание ТФРР, оФРФ, ИЛ-10 и ФНОа в супернатанте культуры мезангиальных клеток почечных клубочков. Использовались наборы R&D (США) на иммуноферментном анализаторе (Stat-Fax-2100, Awareness Technology Inc., США). Пробы супернатанта брали из культуральных пластиковых флаконов. Культура мезангиальных клеток подвергалась однократному замораживанию до -70°С с последующим размораживанием при tK0MH. В лизате клеток определялось содержание клеточно-ассоциированных форм цитокинов и факторов роста. После удаления клеток со дна флаконов удалялся внеклеточный матрикс с помощью одноразовых скребков. Данная фракция исследовалась на содержание матрикс-ассоциированных форм цитокинов • и факторов роста. Количественная оценка факторов проводилась с помощью программного обеспечения иммуноферментного анализатора и программы Excel (Microsoft Со).

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Морфологическая характеристика НТН и ПАН.

К 40-м суткам после введения НТС в почечных клубочках развивались морфологические изменения, по морфологической картине близкие Mill Н и МКГН с фибропластической трансформацией. Почечные клубочки увеличены в размерах. Мочевое пространство слабо выражено, сохранившиеся капиллярные петли сдвинуты, в основном, на периферию клубочка резко расширенной зоной мезангия. Мезангий увеличен как за счет гиперклеточности, так и за счет накопления внеклеточного матрикса (рис. 2). В отдельных клубочках наблюдается спадение ряда капиллярных петель с развитием очагов склероза. Капсула клубочков не изменена, вокруг отдельных клубочков слабая лимфо-гистиоцитарная инфильтрация. Эпителий канальцев и интерстиция существенно не изменен.

Использование иммуносупрессоров (ПЗ, ЦсА и МФ) вызывало небольшие изменения, уменьшая гиперклеточность мезангия и мезангиальный матрикс в отдельных клубочках. В то же время, при функциональной оценке почек, наблюдалось снижение протеинурии (от 600 мг/сутки при НТН до 350-450 мг/сутки после лечения) независимо от типа иммуносупрессора.

К 70-м суткам после введения пуромицин-аминонуклеозида в почечных клубочках развивались морфологические изменения, по морфологической картине близкие ФСГС. Почечные клубочки не увеличены. Мочевое пространство выражено. Отмечалось отсутствие тургора в сохранившихся капиллярных петлях, участки их спадения. В зонах спадения капиллярных петель выражен процесс склероза без признаков гиалиноза (рис. 3). Зона мезангия расширена, в основном, за счет накопления внеклеточного матрикса. Проведение идентификации клеток в зонах склероза на светооптическом уровне практически не возможно. Капсула клубочков не изменена. Эпителий канальцев существенно не изменен.

Использование иммуносупрессоров вызывало небольшие изменения, уменьшая общую клеточность клубочков и внеклеточный матрикс в отдельных клубочках. В то же время, при функциональной оценке почек, наблюдалось снижение протеинурии (800 мг/сутки при ПАН - 400-500 мг/сутки после лечения).

Рис. 2. Хроническая стадия нефротоксического нефрита. Мезангий увеличен как за счет гиперклеточности, так и за счет накопления внеклеточного матрикса. Окраска гематоксилином и эозином. Х400.

Рис. 3. Хроническая стадия пуромицин-аминонуклеозидного нефроза. Выраженный склероз в зонах спадения капиллярных петель почечных клубочков. Окраска гематоксилином и эозином. Х400.

3.2. Характеристика клеточно-матриксных взаимоотношений в почечных клубочках и культуре мезангиальных клеток при нефротоксическом нефрите и пуромицин-аминонуклеозидном нефрозе

3.2.1. Характеристика активной формы ИЛ-1а и латентных форм ИЛ

1риФНОа

Развитие склероза является сложным процессом, регулируемым рядом цитокинов и ростовых факторов. Большая часть этих факторов активна в растворимой форме. Поэтому, по результатам иммуногистохимической реакции можно судить о содержании связанных, т.е. латентных, неактивных форм факторов роста и цитокинов и, косвенно, об их продукции.

Развитие склероза наряду с ТФРР и оФРФ контролируется провоспалительными цитокинами, которые регулируют как пролиферативную активность клеток, так и накопление и расщепление компонентов ВКМ. Активные формы ИЛ-ip и ФНОа обладают провоспалительной и фиброгенной активностью.

В отличие от ИЛ-ip, связанная форма ИЛ-1а является активной формой данного цитокина. Интенсивность иммунопероксидазной метки при реакции на ИЛ-1а, ИЛ-ip и ФНОа уменьшалась по сравнению с нормой в обеих моделях, что свидетельствует о понижении экспрессии ИЛ-1а, ИЛ-ip и ФНОа (связанные формы). Причем ИЛ-ip и ФНОа уменьшались как in vivo, так и in vitro (табл. 1.2).

Список литературы диссертационного исследования Пальцева, Екатерина Михайловна, 2005 год

1. Богомазова С.Ю. Роль мононуклеарных лейкоцитов в развитии гломерулосклероза при экспериментальных гломерулопатиях (регуляция клеточной пролиферации и продукции внеклеточного матрикса): Дисс. . .канд. мед. наук М., 1997.

2. Медведева Т.Ю. Влияние препаратов, блокирующих ренин-ангиотензиновую систему, на прогрессирование почечной недостаточности в клинике и эксперименте: Дисс. .канд. мед. наук. — М., 2001.

3. Опаленов К.В. Роль мембрано- и матрикс-ассоциированных медиаторов в развитии гломерулопатий: Дисс. .канд. мед. наук. М., 1998. - С. 70-75.

4. Пальцев М.А., Иванов А.А. Межклеточные взаимодействия. М.: Медицина, 1995.

5. Серов В.В, Пальцев М.А., Иванов А.А. Перспективы иммуноморфологичекого изучения гломерулонефрита. // Арх. Патолог. -1988.-№9.-С. 86-91.

6. Тареева И.Е. Новые данные о механизмах прогрессирования гломерулонефрита. // Materia Medica. 1995. - # 2 (6). - С. 5-19.

7. Тареева И.Е., Шилов Е.М., Краснова Т.Н. Лечение гломерулонефритов. -М., 2000.

8. Шилов Е. М. Последние достижения в предупреждении прогрессирования почечных заболеваний. // Практическая нефрология. 1997.- # 1. - С. 4-7.

9. Шилов Е.М., Краснова Т.Н. Иммунодепрессивная терапия гломерулонефрита. // Materia Medica. 1995. - # 2 (6). - С. 21-38.

10. Abbate М., Zoja С., Morigi М. et al. Transforming growth factor-(31 is up-regulated by podocytes in response to excess intraglomerular passage of proteins. // Am. J. of Pathol. 2002. Vol. 161, # 6. - P. 2179-2193.

11. Abrass C.K., Adcox M.J., Raugi G.J. Aging-associated changes in renal extracellular matrix // Am. J. of Pathol. 1995. - Vol. 4, #3. - P. 742-752.

12. Adler S. Characterization of glomerular epithelial cell matrix receptors. // Am. J. of Pathol. 1992. - Vol. 141. P. 571-578.

13. Aktas G., Kayton R. Ultrastractural immunolocalization of basic fibroblast growth factor in fibroblasts and extracellular matrix. // Histochem. Cell. Biol. -2000.-Vol. 113.-P. 227-233.

14. Allegri L. Antigens in experimental models of membranous nephropathy: are they involved in human disease? // Nephrol. Dial. Transplant. 1997 - Vol. 12. -P. 1801-1804.

15. Arai T., Morimoto K., Masaoka H. et al. Ultrastractural background of albuminuria in rats with passive Heymann nephritis. // Nephrol. Dial. Transplant. 1997. - Vol. 12. - P. 2542-2548.

16. Ashcroft G.S., Dodsworth J., Egon van Boxtel et al. Estrogen accelerates cutaneous wound healing associated with an increase in TGF-(31 levels // Nature Medecine. 1997. - Vol. 3 (11). - P. 1209-1215.

17. Aviezer D., Iozzo R.V., Noonan D.M. et al. Suppression of autocrine and paracrine functions of basic fibroblast growth factor by stable expression of perlecan antisense cDNA // Mol. And Cell. Biology. 1997. - P. 1938-1946.

18. Badid C., Desmouliere A., Laville M. Mycophenolate mofetil: implications for the treatment of glomerular disease. // Nephrol. Dial. Transplant. 2001. - Vol. 16.-P. 1752-1756.

19. Badid C., Vincent M., Mc Gregor B. MMF reduces myofibroblast infiltration and collagen III deposition in rat ramnant kidney. // Kidney Int. 2000. - # 1. -P. 33-47.

20. Barnes J.L., Hastings R.R., De la Garza M.A. Sequential expression of cellular fibronectin by platelets, macrophages, and mesangial cells in proliferative glomerulonephritis. // Am. J. Pathol. 1994. - Vol. 145 (3). - P. 585-597.

21. Bazzoni G., Dejana E., Lampugnani M.G. Endothelial adhesion molecules in the development of the vascular tree: the garden of forking paths // Current Opinion in Cell Biology. 1999. - Vol. 11.- P. 573-581.

22. Beasley D., Cooper A.L. Constitutive expression of interleukin-1 alpha precursor promotes human vascular smooth muscle cell proliferation // Am. J. Physiol. 1999. - Vol. 276 (3). - Pt 2 H901-912.

23. Bertelli R., Valenti F., Oleggini R. et al. Cell-specific regulation of alpha 1 (III) and alpha2(V) collagen by TGF-betal in tubulointerstitial cell models // Nephrol. Dial. Transplant. 1998. - Vol. 13 (3). - P. 573-579.

24. Bertram J.F., Messina A., Ryan G.B. In vitro effects of puromycin aminonucleoside on the ultrastructure of rat glomerular podocytes. // Cell Tissue Res. 1990. - Vol. 260. - P. 555-563.

25. Bogomazova S.Iu., Gladskikh O.P., Ivanov A.A. et al. Cytokines and extracellular matrix in experimental glomerulopathies // Arkh. Patol. —1997. -Vol. 59 (6). P. 45-50.

26. Borkakoti N. Matrix metalloproteases: variations on a theme // Prog. Biophys. Mol. Biol. 1998. - Vol. 70 (1). - P. 73-94.

27. Carey David J., Biochen. J. Syndecans: multifunctional cell-surface co-receptors // Biochem. J. 1997. - Vol. 327. - P. 1-16.

28. Cohen A.H., Nast C.C. TGF-beta in renal allograft rejection // Miner. Electrolyte Metab. 1998. - Vol. 24 (2-3). - P. 197-201.

29. Coimbra T., Wiggins R., Noh J.W. et al. Transforming growth factor-P production in anti-glomerular basement membrane disease in the rabbit. // Am. J. of Pathol. 1991. - Vol. 138, # 1. - P. 223-233.

30. Cotran R.S., Kumar V., Robbins S.L. Robbins pathologic basis of disease. -W.B. Saunders company. 4th ed., 1989.

31. Cotran R.S., Kumar V., Collins T. Robbins pathologic basis of disease. W.B. Saunders company. 6th ed., 1999.

32. Curran S., Murray G.I. Matrix metalloproteinases in tumor invasion and metastasis. // J. of Pathol. 1999. - Vol. 189. - P. 300-308.

33. Damjanov I., Linder J. Anderson's pathology. 10th edition, A Times Mirror Company, 1996. - P. 3 87.

34. David G., Bernfield M. Type I collagen reduces the degradation of basal lamina proteoglycan by mammary epithelial cells // The J. of Cell Biology. 1981. -Vol. 91.-P. 281-286.

35. Dong B., Zou W.Z., You J.F. A study on the proliferative and sclerosing mechanism of glomerular mesangium. // Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi. -1994. -Vol. 23(1). -P. 10-13.

36. Dubus I., Vendrely B., Christophe I. et al. Mycophenolic acid antagonizes the activation of cultured human mesangial cells. // Kidney Int. 2002. - Vol. 62 (3). -P.857-867.

37. Ebihara N., Mizushima H., Miyazaki K. et al. The functions of exogenous and endogenous laminin-5 on corneal epithelial cells. // Exp. Eye Res. 2000. -Vol. 71(1).-P. 69-79.

38. Eckes B., Kessler D., Aumailley M. et al. Interactions of fibroblasts with the extracellular matrix: implications for the understanding of fibrosis // Springer Semin Immunopathol. 1999. - Vol. 21 (4). - P. 415-429.

39. Fogo A.B. Mesangial matrix modulation and glomerulosclerosis. // Exp. Nephrology. 1999. - Vol. 7, # 2. - P. 147-159.

40. Gagnoux-Palacios L., Allegra M., Spirito F. et al. The short arm of the laminin gamma2 chain plays a pivotal role in the incorporation of laminin 5 into the extracellular matrix and in cell adhesion. // J. Cell Biol. 2001.- Vol. 153 (4). -P. 835-850.

41. Galzie Z., Kinsella A.R., Smith J.A. Fibroblast growth factors and their receptors // Biochem. Cell. Biol. 1997. - Vol. 75. - P. 669-694.

42. Gao B., Curtis T.M., Blumenstock F.A. et al. Increased recycling of a5(31 integrins by lung endothelial cells in response to tumor necrosis factor. // J. of Cell Science. 2000. - Vol. 113. - P. 247-257.

43. Gharaee-Kermani M., Wiggins R., Wolber F. et al. Fibronectin is the major fibroblast chemoattractant in rabbit anti-glomerular basement membrane disease. //Am. J. of Pathol. 1996. - Vol. 148, # 3. - P. 961-967.

44. Gold L.I., Jussila T., Fusenig N.e. et al. TGF-p isoforms are differentially expressed in increasing malignant grades of HaCaT keratinocytes, suggesting separate roles in skin carcinogenesis. // J. of Pathol. 2000. - Vol. 190. - P. 579-588.

45. Goldfinger L.E., Jiang L., Hopkinson S.B. et al. Spatial regulation and activity modulation of plasmin by high affinity binding to the G domain of the alpha 3 subunit of laminin-5. // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275, # 45. - P. 3488734893.

46. Greenhalgh D.G. The role of apoptosis in wound healing // The International J. of Biochemistry and Cell Biology. 1998. - Vol. 30. - P. 1019-1030.

47. Hansen K.M., Berfield A.K., Spicer D. et al. Rat mesangial cells express two unique isoforms of laminin which modulate mesangial cell phenotype. // Matrix Biology. 1998. -Vol. 17. - P. 117-130.

48. Hari P., Bagga A., Jindal N. et al. Treatment of focal glomerulosclerosis with pulse steroids and oral cyclophosphamide. // Pediatr. Nephrol. 2001. - Vol. 16 (11).-P. 901-905.

49. Hauser I.A., Renders L., Radeke H.-H. et al. Mycophenolate mofetil inhibits rat and human mesangial cell proliferation by guanosine depletion. // Nephrol. Dial. Transplant. 1999. - Vol. 14. - P. 58-63.

50. Hayashi K., Horikoshi S., Osada S. et al. Macrophage-derived MT1-MMP and increased MMP-2 activity are associated with glomerular damage in crescentic glomerulonephritis. // J. Pathol. 2000. - Vol. 191. - P. 299-305.

51. Jennette J.C., Olson J.L., Schwartz M.M., Silva F.G. Heptinstall's pathology of the kidney. Lappincott-Raven, 5th ed., vol. 1. P. 85-136.

52. Jennette J.C., Olson J.L., Schwartz M.M., Silva F.G. Heptinstall's pathology of the kidney. Lappincott-Raven, 5th ed., vol. 1. P. 137-168.

53. Joosten S.A., van Dixhoorn M.G., Borrias M.C. et al. Antibody response against perlecan and collagen types IV and VI in chronic allograft rejection in the rat. // Am. J. of Pathol. 2002. - Vol. 160, # 4. - P. 1301-1310.

54. Jyo Y., Sasaki T., Nomura S. et al. Expression of tenascin in mesangial injury in experimental glomerulonephritis // Exp. Nephrol. — 1997. Vol. 5 (5). - P. 423-428.

55. Karkar A.M., Smith J., Pusey C.D. Prevention and treatment of experimental crescentic glomerulonephritis by blocking tumour necrosis factor a. // Nephrol. Dial. Transplant. 2001. - Vol. 16. - P. 518-524.

56. Kasuga H., Sakamoto S., Kawachi H. et al. Effects of anti-TGF-beta type II receptor antibody on experimental glomerulonephritis. // Kidney Int. 2000. -Vol. 60(5).-P. 1745-1755.

57. Kerjaschki D., Exner M., Ullrich R. et al. Pathogenic antibodies inhibit the binding of apolipoproteins to megalin/gp330 in passive Heymann nephritis. // J. Clin. Invest. 1997. - Vol. 100, # 9. - P. 2303-2309.

58. Klein M., Radhakrishnan J., Appel G. Cyclosporine treatment of glomerular diseases. 1999. - P. 1-14.

59. Koshikawa N., Giannelli G., Cirulli V. et al. Role of cell surface metalloprotease MT1-MMP in epithelial cell migration over laminin-5. // Cell Biol. 2000. - Vol. 148, #3. - P. 615-624.

60. Kosmehl H., Berndt A., Katencamp D. Molecular variants of fibronectin and laminin structure, physiological occurrence and histipathological aspects // Virch. Arch. 1996. - Vol. 423. - P. 311-322.

61. Kulkarni A. B., Ward J. M., Yaswen L. et al. Transforming Growth Factor-pi Null Mice // Am. J. of Pathol. 1995. - Vol. 146 (1). - P. 264-274.

62. Kuwada S.K., Li X. Integrin a5pi mediates fibronectin-dependent epithelial cell proliferation through epidermal growth factor receptor activation. // Mol. Boil, of the Cell. 2000. - Vol. 11. - P. 2485-2496.

63. Lambert V., Munaut C., Jost M. et al. Matrix metalloproteinase-9 contributes to choroidal neovascularization. // Am. J. of Pathol. 2002. - Vol. 161, # 4. - P. 1247-1253.

64. Levine D., Rockey D.C., Milner T.A. et al. Expression of the integrin a8pi during pulmonary and hepatic fibrosis. // Am. J. of Pathol. 2000. - Vol. 156, #6. - P.1927-1935.

65. Luger T.A., Schwarz T. The role of cytokins and neuroendocrine hormones in cutaneous immunity and inflammation // Allergy. 1995. - Vol. 50. - P. 292302.

66. Lust J.A., Donovan K.A. The role of interleukin-1 beta in the pathogenesis of multiple myeloma // Hematol. Oncol Clin. North. Am. 1999. - Vol. 13 (6). -P. 1117-1125.

67. Marti H.P., Lee L., Kashgarian M. et al. Transforming growth factor-beta 1 stimulates glomerular mesangial cell synthesis of the 72-kd type IV collagenase. //Am. J. Pathol. 1994. - Vol. 144 (1). - P. 82-94.

68. Meyrier A. Treatment of idiopathic nephrotic syndrome with cyclosporine A. // J. of Nephrol. 1997. - Vol. 10, # 1. - P. 14-24.

69. Mukhin N.A., Serov V.V., Kogan E.A. et al. The clinico-morphological characteristics of interstitial lung diseases. // Klin. Med. (Mosk.). 1995. - Vol. 73(3).-P. 77-80.

70. Mundhenke C., Meyer K., Drew S. et al. Heparan sulfate proteoglycans as regulators of fibroblast growth factor-2 receptor binding in breast carcinomas. // Am. J. ofPathol.-2002.-Vol. 160,# l.-P. 185-194.

71. Nakamura T., Ebihara I., Shirato I. et al. Increased steady-state levels of mRNA coding for extracellular matrix components in kidneys of NZB/W F1 mice. // Am. J. ofPathol. 1991. - Vol. 139. - P. 437-450.

72. Nakamura T., Ebihara I., Shirato I. et al. Modulation of basement membrane component gene expression in glomeruli of aminonucleoside nephrosis. // Lab. Invest. 1991. - Vol. 64, # 5. - P. 640-647.

73. Nakamura T., Ebihara I., Tomino Y. et al. Glucocorticoid ameliorates altered gene expression of extracellular matrix components in kidneys of New Zealand black/white F1 mice. //Clin. Sci. (Colch.). 1992. - Vol. 83 (6). - P. 701-709.

74. Powell D. W., Mifflin R. C., Valentich J. D. et al. Myofibroblasts. I. Paracrine cells important in health and disease // AJP-Cell. 1999. - Vol. 277, Issue 1. -C1-C19.

75. Ranieri E., Gesualdo L., Grandaliano G. et al. The role of a-smooth muscle actin and platelet-derived growth factor-B receptor in the progression of renal damage in human IgA nephropathy. // J. Nephrol. 2001. - Vol. 14. - P. 253262.

76. Riou J.F., Umbhauer M., Shi D.L. et al. Tenascin: a potential modulator of cell-extracellular matrix interactions during vertebrate embryogenesis // Biol. Cell. — 1992.-Vol. 75(1).-P. 1-9.

77. Samwal V., Pandya M., Bhaskaran M. et al. Puromycin aminonucleoside induces glomerular epithelial cell apoptosis. // Exp. Mol. Pathol. 2001. - Vol. 70 (1). - P. 54-64.

78. Saunders S., Bernfield M. Cell surface proteoglycan binds mouse mammary epithelial cells to fibronectin and behaves as a receptor for interstitial matrix // The J. of Cell Biol. 1988. - Vol. 106. - P. 423-430.

79. Schaefer L., Lorenz T., Daemmrich J. et al. Role of proteinases in renal hypertrophy and matrix accumulation. // Nephrol. Dial. Transplant. 1995. -Vol. 10.-P. 801-807.

80. Shankland S.J., Johnson R.J. TGF-f3 in glomerular disease. // Mineral and electrolyte metabolism. 1998. - Vol. 24. - P. 168-173.

81. Stahl P.J., Felsen D. Transforming growth factor-(3, basement membrane, and epithelial-mesenchimal transdifferentiation. // Am. J. of Pathol. 2001. - Vol.159, # 4. P. 1187-1192.

82. Tang W.W., Feng L., Loskutoff D.J. et al. Glomerular extracellular matrix accumulation in experimental anti-GBM Ab glomerulonephritis. // Nephron. — 2000.-Vol. 84(1).-P. 40-48.

83. Taraboletti G., D'Ascenzo S., Borsotti P. et al. Shedding of the matrix metalloproteinases MMP-2, MMP-9, and MT1-MMP as membrane vesicle-associated components by endothelial cells. // Am. J. of Pathol. 2002. - Vol.160,#2.-P. 673-680.

84. Tesch G.H., Lan H.Y., Atkins R.C. et al. Role of interleukin-1 in mesangial cell proliferation and matrix deposition in experimental mesangioproliferative nephritis. // Am. J. of Pathol. 1997. - Vol. 151, # 1. - P. 141-150.

85. Tisher C.C., Brenner B.M. Renal pathology with clinical and functional correlations. J.B.Lippincott company, 1989. - Vol. 1. - P.43-66.

86. Tisher C.C., Brenner B.M. Renal pathology, with clinical and functional correlations. 2nd ed., J.B.Lippincott company, 1994. - Vol. 1. - P. 116-142.

87. Urushihara M., Kagami S., Kuhara T. et al. Glomerular distribution and gelatinolytic activity of matrix metalloproteinases in human glomerulonephritis. // Nephrol. Dial. Transplant. 2002. - Vol. 17 (7). - P. 1189-1196.

88. Waldherr R., Noronha I.L., Niemir Z. et al. Expression of cytokines and growth factors in human glomerulonephritides // Pediatr. Nephrol. 1993. -Vol. 7 (4).-P. 471-478.

89. Xu y., Berrou J., Fouqueray B. Et al. Induction of urokinase receptor expression in nephrotoxic nephritis. // Exp. Nephrol. 2001. - Vol. 9 (6). - P. 397-404.

90. Yang J., Youhua L. Dissection of key events in tubular epithelial to myofibroblast transition and its implications in renal interstitial fibrosis. // Am. J. of Pathol.- 2001. -Vol. 159, #4.-P. 1465-1475.

91. Yu X., Miyamoto S., Mekada E. Integrin a2pl-dependent EGF receptor activation at cell-cell contact sites. // J. of Cell Science. 2000. - Vol. 113. - P. 2139-2147.

92. Zeizberg M., Bonner G., Maeshima F. et al. Collagen composition and assembly regulates epithelial-mesenchymal transdifferentiation. // Am. J. of Pathol.-2001.-Vol. 159, #4.-P. 1313-1321.

93. Zhao Yun, Young S.L., Mcintosh J.C. Induction of tenascin in rat lungs undergoing bleomycin-induced pulmonary fibrosis // A.J.P.-Lung. 1998. -Vol. 274, Issue 6. - L1049-L1057.

94. Zhou F.-Yu, Owens R.T., Hermonen J. et al. Is the sensitivity of cells for FGF-1 and FGF-2 regulated by cell surface heparan sulfate proteoglycans? // Eur. J. Cell Biol. 1997. - Vol.73. - P. 166-174.