Вирус Эпштейна-Барр и рак желудка: Поиск и анализ вирусологических и молекулярно-биологических маркеров тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Гончарова, Елена Васильевна

• Гончарова, Елена Васильевна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Гончарова, Елена Васильевна

Перечень сокращений и условных обозначений Введение

1. Обзор литературы

1.1. Общая характеристика ВЭБ

1.2. Молекулярно-генетическая организация ВЭБ

1.3. Жизненный цикл вируса

1.3.1. Литическая инфекция

1.3.2. Латентная инфекция

1.3.2.1. EBERs

1.3.2.2. Ядерные белки

1.3.2.3. Латентные мембранные белки

1.4. Заболевания человека, связанные с ВЭБ

1.4.1. Инфекционный мононуклеоз

1.4.2. Лимфома Беркитта

1.4.3. Лимфогранулематоз

1.4.4. Недифференцированный рак носоглотки

1.4.5. Рак желудка

2. Материалы и методы

3. Результаты исследований

3.1. Доказательство присутствия ВЭБ-ассоциированных форм РЖ в России

3.2. Характеристика ВЭБ-ассоциированных форм РЖ в некоторых регионах России и бывшего СССР

3.2.1. Обнаружение ВЭБ-ассоциированных случаев РЖ методом гибридизации in situ

3.2.2. Особенности гуморального ответа к белкам ВЭБ у больных ВЭБ-ассоциированной формой РЖ 65 3.3 Молекулярно-биологический анализ вариантов LMP1 ВЭБ, амплифицированных из тканей желудка

3.3.1. Поиск и отбор ВЭБ-ассоциированных случаев РЖ

3.3.2. Амплификация, клонирование и сиквенсный анализ вариантов LMP1, полученных из тканей желудка

3.3.3. Определение экспрессии и функциональный анализ

LMP1 больных ВЭБ-ассоциированной формой РЖ

4. Обсуждение

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Вирус Эпштейна-Барр и рак желудка: Поиск и анализ вирусологических и молекулярно-биологических маркеров»

Изучение роли вирусов в возникновении опухолей человека составляет важный аспект современных исследований в области онкологии. Среди различных онкогенных вирусов существенный интерес представляет вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ), который относится к семейству герпесвирусов, является убиквитарным и персистирует в организме человека в течение всей жизни. С этим вирусом связывают возникновение африканской лимфомы Беркитта (ЛБ), недифференцированного рака носоглотки (нРНГ), В-клеточных лимфом у больных с иммунодефицитами различного происхождения и др. /14, 141, 96/. Спектр патологических процессов у человека, в возникновении которых, как полагают, участвует ВЭБ, постоянно расширяется. В настоящее время широко обсуждается вопрос о роли ВЭБ в процессе канцерогенеза эпителиальных клеток желудка. Прямые доказательства ассоциации ВЭБ и рака желудка (РЖ) получены в результате обнаружения в опухолевых клетках ряда вирусных маркеров таких, например, как РНК гена EBER1, белков EBNA1 и LMP2. Кроме того, установлено, что опухолевые клетки, несущие геном вируса моноклональны. Вирусные маркеры находили в опухолевых клетках желудка любой морфологической структуры, но наиболее часто при низкодифференцированных формах с интенсивной лимфоидной пролиферацией /130/.

Учитывая тот факт, что практически 95-100% населения планеты инфицировано ВЭБ, механизм возникновения ассоциированных с этим вирусом заболеваний, включая и РЖ, остается открытым. Возникает вопрос, один и тот же или разные генетические варианты вируса персистируют у здоровых и больных лиц, в опухолевых и морфологически "нормальных" клетках. В этой связи, ген ВЭБ - BNRF1, кодирующий латентный мембранный белок 1 (LMP1) представляет особый интерес. Во-первых, это один из 6 немногих генов ВЭБ, который обладает трансформирующим потенциалом; во-вторых, определенные структурные перестройки этого гена способствуют увеличению трансформирующего потенциала вируса /53/. Возможно, дальнейший глубокий молекулярно-биологический анализ "опухолевых" и "неопухолевых" вариантов ВЭБ позволит, по крайней мере, приблизиться к решению поставленного вопроса.

Рак желудка в России занимает одно из ведущих мест среди наиболее часто встречающихся новообразований человека /3/. В связи с этим, поиск ВЭБ-ассоциированных случаев РЖ (ВЭБ+РЖ), определение их частоты среди всех опухолей этой локализации, а также выяснение роли вируса в их этиопатогенезе, представляется актуальной научной и практической задачей.

Целью настоящей диссертационной работы явилось обнаружение ВЭБ-ассоциированных форм рака желудка в некоторых регионах России с различным уровнем заболеваемости РЖ, определение их удельного веса среди новообразований желудка, серологическая характеристика, а также детальное вирусологическое, молекулярно-биологическое и морфологическое изучение.

В ходе выполнения исследований предполагалось решить следующие задачи: создать архив клинического материала от больных РЖ (парафиновые блоки с фрагментами опухолей, операционный материал, сыворотки крови); исследовать опухолевый материал от больных РЖ из нескольких регионов России и стран бывшего СССР на присутствие вирусной информации в реакции гибридизации in situ (ISH) с использованием в качестве вирусного маркера РНК гена EBER1 ВЭБ; проанализировать морфологическую структуру случаев РЖ, ассоциированных с ВЭБ; провести скрининг сывороток больных РЖ и здоровых носителей на наличие и титры антител к белкам литического цикла ВЭБ; 7 определить первичную нуклеотидную структуру одного из генов латентной инфекции ВЭБ - LMP1, амплифицированного из образцов опухолевой и морфологически неизмененной тканей желудка, больных ВЭБ-ассоциированной формой РЖ; субклонировать полученные варианты LMP1 ВЭБ в эукариотический экспрессирующий вектор и изучить их функциональное поведение.

Научная новизна работы заключается в том, что впервые был проведен поиск ВЭБ-ассоцииированных случаев РЖ в России, охарактеризована их морфологическая структура, изучен гуморальный ответ больных РЖ к белкам литического цикла инфекции ВЭБ. Кроме того, впервые были определены нуклеотидные последовательности вариантов полноразмерного гена LMP1 ВЭБ, амплифицированного из тканей ВЭБ+РЖ; проведен анализ по изучению их экспрессии и способности активировать транскрипционный фактор NFkB.

Практическое значение полученных результатов исследований состоит в выявлении форм опухолей желудка, ассоциированных с ВЭБ на территории нашей страны. Обнаружение таких случаев РЖ может послужить важной предпосылкой для углубленного изучения их этиопатогенеза, разработки новых подходов ранней диагностики и, возможно, терапии ВЭБ+РЖ. Результаты данных исследований будут также способствовать более глубокому пониманию механизмов ВЭБ-ассоциированного канцерогенеза на модели одной из эпителиальных опухолей человека. 8

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Онкология», Гончарова, Елена Васильевна

ВЫВОДЫ

1. Впервые согласно данным вирусологического, молекулярно-биологического и клинико-морфологического исследованиям показано наличие ВЭБ-ассоциированных форм РЖ (ВЭБ+РЖ) в России и Узбекистане. Согласно ретроспективным исследованиям (614 случаев) частота ВЭБ+РЖ составляет 7,3-15,7%.

2. Установлено, что ВЭБ-ассоциированные случаи РЖ: чаще встречаются среди мужчин (16,8%), чем среди женщин (4,5%); в основном принадлежат к низкодифференцированной аденокарциноме с солидным ростом (18,0%) и умереннодифференцированной тубулярной аденокарциноме (15,3%); редко локализуются в антральной части желудка (5,5%); 80-100% опухолевых клеток содержат генетическую информацию ВЭБ, в то время как инфильтрирующие опухоль лимфоциты вирусного материала не содержат.

3. Показано, что высокая активность гуморального иммунного ответа к белкам ВЭБ в 70% случаев коррелирует с присутствием генетической информации ВЭБ в опухолевых клетках этих же больных РЖ.

4. Впервые проведено определение нуклеотидных последовательностей вариантов гена LMP1 ВЭБ, амплифицированных из тканей ВЭБ-ассоциированных случаев РЖ. Установлено, что варианты LMP1 ВЭБ+РЖ характеризуются специфическим набором точечных мутаций достоверно отличающих их от ранее охарактеризованных LMP1 Сао и В95.8, а так же LMP1, полученных от больных нРНГ и здоровых вирусоносителей из России.

5. Функциональный анализ клонов LMP1 ВЭБ+РЖ впервые обнаружил ранее неизвестное явление инактивации гена LMP1 ВЭБ.

95

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Гончарова, Елена Васильевна, 2001 год

1. Двойрин В.В., Аксель М.Е. Трапезников Н.Н. Состояние онкологической помощи населению стран СНГ в 1995 г.-М.:ОНЦ РАМН.-1996.-273с.

2. Дифференциальная диагностика рака носоглотки с помощью серелогических маркеров вируса Эпстайна-Барр: Утв. Упр. Онкологической помощи главного Упр. Леч.-проф. Помощи. М., 1987.- 21с.

3. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование; Пер. с англ.- М.:Мир, 1984.- 480 с.

4. Birnboim H.C., Doly J. A rapid alkaline axtraction procedure for screening: recombinant plasmid DNA //Nucleic Acids Res.-1979.-Vol.7.-1513.96

5. Bochkarev A., Barwell J.A., Pfuetzner R.A., Bochkareva E., Frappier L., Edwards A.M. Crystal structure of the DNA-binding domain of the Epstein-Barr virus origin binding protein EBNA1, bound to DNA // Cell.-1996.-Vol. 84.-P. 791-800.

6. Bonnet M., Guinebretiere J.M., Kremmer E., Grunewald V., Benhamou E., Contesso G., Joab I. Detection of Epstein-Barr virus in invasive breast cancers // J. Natl. Cancer Inst.-1999.-Vol.91.-P. 1376-1381.

7. Boyer H.W., Roulland-Dussoix D. A complementation analysis of the restriction and modification of DNA in Escherichia coli // J. Mol. Biol.-1969.-Vol.4L-P.459-472.

8. Burke A.P., Yen T.S.B., Shekitka K.M., Sobin L.H. Lymphoepithelial carcinoma of the stomach with Epstein-Barr virus demonstrated by polemerase chain reaction // Mod. Pathol.-1990.-Vol.3.-P.377-380.

9. Burkitt D.P. A carcinoma involving the jaws in African children // Br.J.Sur.-1958.-Vol.46.-P.218-223.

10. Butler A.E., Colby T.V., Weiss L., Lombard C. Lymphoepithelioma-like carcinoma of the lung // Am. J. Serg. Pathol.-1989.-Vol.l3.-P.632-639.

11. Ceccarelli D.F., Frappier L. Functional analyses of the EBNA1 origin DNA binding protein of Epstein-Barr virus// J. Virol.-2000.-Vol.74.-P.4939-4948.97

12. Clifford P. On the epidemiology of nasopharyngeal carcinoma // Int. J. Cancer. -I970.-Vol.5.-P.287-309.

13. Cohen J.I., Wang F., Mannick J., Kieff E. Epstein-Barr virus nuclear protein 2 is a key determinant of lymphocyte transformation // Proc. Acad. Natl. Sci. USA.-1989.-Vol. 86.-P.9558-9562.

14. Cotter M.A. 2nd, Robertson E.S. Modulation of histone acetyltransferase activity through interaction of epstein-barr nuclear antigen 3C with prothymosin alpha // Mol. Cell. Biol.-2000.-Vol.20.-P.5722-5735.

15. Cruickshank J., Shire K., Davidson A.R., Edwards A.M., Frappier L. Two domains of the epstein-barr virus origin DNA-binding protein, EBNA1, orchestrate sequence-specific DNA binding // J. Biol. Chem.-2000.-Vol.275.-P.22273-22277.

16. Dambaugh Т., Raab-Traub N., Heller M., Beisel C., Hummel M., Cheung A., Fennewald S., King W., Kieff E. Variations among isolets of Epstain-Barr virus // Ann. N. Y. Acad. Sci.-1980.-354.-P.309-325.

17. Dunn B.E., Vakil N.B., Schneider B.G., Miller M.M., Zitzer J.B., Peutz Т., Phadnis S.H. Localization of Helicobacter pylori urease and heat shock protein in human gastric biopsies // Infect. Immun.-1997.-Vol.65.-P.-l 181-1188.

18. Epstein M.A., Barr Y.M. Virus particles in cultured lymphoblasts from Burkitt's lymphoma // Lancet.-1964.-Vol.l.-P.252-253.

19. Fahreus R., Rymo L., Rhim J.S., Klein G. Morphological transformation of human keratinocytes expressing the LMP gene of Epstein-Barr virus // Nature.-1990.-Vol.345 .-P.447-449.

20. Farrell P.J., Bankier A., Seguin C., Deininger P., Barrell B.G. Latent and lytic cycle promoters of Epstein-Barr virus // EMBO J.-1983.-Vol.2.-P.1331-1338.

21. Fingeroth J.D., Clabby M.L., Strominger J.D. Characterization of a T-lymphocyte Epstein-Barr virus/C3d receptor (CD21) // J.Virol.-1988.-Vol.62.-P.1442-1447.

22. Fischer N., Kremmer E., Lautscham G., Mueller-Lantzsch N., Grasser F.A. Epstein-Barr virus nuclear antigene 1 forms a complex with the nuclear transporter karyopherin a2 //J.Biol.Chem.-1997.-Vol. 272.-P. 3999-4005.

23. Fischer N., Kopper В., Graf N., Schlehofer J.R., Grasser F.A., Mueller-Lantzsch N. Functional analysis of different LMP1 proteins isolated from Epstein-Barr virus-positive carriers // Virus Res.-1999.-Vol.60.-P.41-54.

24. Fries K.L., Miller W.E., Raab-Traub N. Epstein-Barr virus latent membrane protein 1 blocks p53-mediated apoptosis through the induction of the A20 gene // J. Virol.-1996.-Vol.70.-P.8653-8659.99

25. Fukayama M., Hayashi Y., Iwasaki Y., Chong J., Ooba Т., Takizawa Т., Koike M., Mizutani S., Miyaki M., Hirai K. Epstein-Barr virus-associated gastric carcinoma and Epstein-Barr virus infection of the stomach // Lab Invest.-1994.-Vol.71.-P.73-81.

26. Gallo O., Di Lollo S., Grassani P., Gallina E., Baroni G. Detection of Epstein-Barr virus genome in sinonasal undifferentiated carcinoma by use of in situ hybridization // Otolaryngol. Head Neck Syrg.-1994.-Vol.l 12.-P.659-664.

27. Gergely L., Klein G., Ernberg I. Host cell macromolecular synthesis in cell containing EBV-induced early antigens, studied by combined immunofluorescence and radioautography // Virology.-1971.-Vol.45.-P.22-29.

28. Gires O., Kohlhuber F., Kilger E., Baumann M., Kieser A., Kieser C., Hammerschmidt W. Latent membrane protein 1 of Epstein-Barr virus interacts with JAK3 and activates STAT proteins // EMBO J.-1999.-Vol.l8.-P.3064-3073.

29. Gires O., Zimber-Strobl U., Gonnella R., Ueffmg M., Marschall G., Zeidler R., Pich D., Hammerschmidt W. Latent membrane protein 1 of Epstein-Barr virus mimics a constitutively active receptor molecule // EMBO J.-1997.-Vol. 16.-P.6131-6140.

30. Gussander E., Adams A. Electron microscopic evidence for replication of circular Epstein-Barr virus genomes in latently infected Raji cells // J. Virol.-1984.-Vol.52.-P.549-556.100

31. Hammerscmidt W., Sugden В., Baichwal V.R. The trnsforming domain alone of the latent membrane protein of the Epstain-Barr virus is toxic to cells when expressed at the high levels // J. Virol.-1989.-Vol.63.-P.2469-2475.

32. Harn H.J., Chang J.Y., Wang M.W., Ho L.I, Lee H.S., Chiang J.H., Lee W.H. Epstain-Barr virus-associated gastric adenocarcinoma in Taiwan // Hum Pathol.-1995.-Vol.26.-P.267-271.

33. Henle G. Henle W., Diehl V. Relation of Burkitt's tumour-associsted herpes-type virus infectious mononucleosis /7 Proc. Natl. Acad. Sci USA.- 1968.-Vol.59.-P.94-101.

34. Henle G., Henle W. Immunofluorescence in cells derived from Burkitt's lymphoma // J. Bacteriol.-1966.-Vol.91 .-P. 1248-1256.

35. Howe J.G., Shu M.-D. Epstein-Barr virus small RNA (EBER) genes: unique transcription units that combine RNA polymerase II and II promoter elements // Cell.-1989.-Vol.57.-P.825-834.

36. Howe J.G., SteitzJ.A. Localization of Epstein-Barr virus-encoded small RNAs by in situ hybridization // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1986.-Vol.83.-P.9006-9010.

37. Hsieh J.J., Zhou S., Chen L., Young D.B., Hayward S.D. CIR, a corepressor linking the DNA binding factor CBF1 to the histone deacetylase complex // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1999.-Vol.96.-P.23-28.101

38. Hu L.F., Zabarovsky E.R., Chen F., Cao S.L., Ernberg I., Klein G. Winberg G. Isolation and sequencing of the Epstein-Bar virus BNLF-1 gene (LMP1) from a Chinese nasopharingeal carcinoma // J. Gen. Virol.-1991.-Vol.72.-P.2399-2409.

39. Kaiser C., Laux G., Eick D., Jochner N., Bornkamm G.W., Kempkes B. The proto-oncogene c-myc is a direct target gene of Epstein-Barr virus nuclear antigen 2 //J. Virol.-1999.-Vol.73.-P.4481-4484.

40. Kieff E. Epstain-Barr virus and its replication //Fields B.N., Knipe D.M., Howley P., Chanock R.M., Melnick J.L., Month T.P., Roizman В., Straus S.E., eds. Fields Virology, Philadelphia, Lippincott-Raven.-1996.-P.2343-2396.

41. Kieser A., Kilger E., Gires O., Ueffmg M., Kolch W., Hammerschmidt W. Epstein-Barr virus latent membrane protein-1 triggers AP-1 activitu via the c-Jun N-terminal kinase cascade //EMBO J.-1997.-Vol.l6.-P.6478-6485.102

42. Kitay M.K., Rowe D.T. Protein-protein interaction between Epstain-Barr virus nuclear antigene-LP and cellular gene products: binding of 70-kilodalton heat shock proteins // Virology.-1996.-Vol. 220.- P.91-99.

43. Kleines M., Finke K., Ritter K., Schaade L. Induction of rgowth rate and transcriptional modulation of growth promoters and growth inhibitors in epithelial cells by EBV-LMP1 // Virus Res.-2000.-Vol.68.-P.63-69.

44. Komano J., Maruo S., Kurozumi K., Oda Т., Takada K. Oncogenic role of Epstein-Barr virus-encoded RNAs in Burkitt's lymphoma cell line Akata // J. Virol.-1999.-Vol.73 .-P.9827-9831.

45. Kushner S.R. An improved method for transformation of Escherichia coli with ColEl-derived plasmids. In: Genetic engineering (Boyer H.B. and Nicosia S., eds.).-Elsevier/North-Holland, Amsterdam.-1978.-P.17.

46. Lee E.S., Locker J., Nalesnik M., Reyes J., Jaffe R., Alashari M., Nour В., Tzakis A., Dickman P.S. The assiciation of the Epstein-barr virus with smooth-muscle tumors occurring after organ transplantation // New Engl. J. Med.-1995.-Vol.332.-P.19-25.

47. Leoncini L., Vindigni C., Megha Т., Funto I., Pacenti L., Musaro M., Renieri A., Seri M., Anagnostopoulos J., Tosi P. Epstein-Barr virus and gastric cancer: data adn unanswered questions // Int. J. Cancer.-1993.^-Vol.53.-P.898-901.103

48. Leung S.Y., Chau K.Y., Yuen S.T., Chu K.M., Branicki F.J., Chung L.P. p53 overexpression is different in Epstain-Barr virus-associated and Epstain-Barr virus-negative carcinoma // Histopathology.-1998.-Vol.33.-P.311-317.

49. Levine P.H., Stemmermann G., Lennette E.T., Hildesheim A., Shibata D., Nomura A. Elevated antibody titers to Epstein-Barr virus prior to the diagnosis of Epstein-Barr-virus-associated gastric adenocarcinoma // Int. J. Cancer.-1995.-Vol.60.-P.642-644.

50. Lieberman P.M., Berk A.J. In vitro transcriptional activation, dimerization, and DNA-binding spesifity of the Epstein-Barr virus Zta protein // J. Virol.-1990.-Vol.64.-P.2560-2568.

51. Liebowitz D., Wang D., Kieff E. Orientation and patching of the latent infection membrane protein encoded by Epstein-Barr virus // J. Virol.-1986.-Vol.58.-P 233237.

52. Liebowitz D., Mannick J., Takada K., Kieff E. Phenotypes of Epstein-Barr virus LMP1 deletion mutants indicate transmembrane and amino-terminal cytoplasmic domains nesessary for effects in B-lymphoma cells // J. Virol.-1992.-Vol.6.-P.4612-4616.

53. Lin C.S., Kuo H.H., Chen J.Y., Yang C.S., Wang W.B. Epstein-Barr virus nuclear antigen 2 retards cell growth induces p21(WAFl) expression and modulates p53 activity post-translationally // J. Mol. Biol.-2000.-Vol.303.-P.7-23.

54. Longnecker R., Kieff E. A second Epstein-Barr virus membrane protein (LMP2) is expressed in latent infection and colocolizes with LMP1 // J. Virol.-1990.-Vol.64.-P.2319-2326.

55. Luka J., Kallin В., Klein G. Induction of the Epstain-Barr virus (EBV) cycle in latently infected cells by n-butyrate // Virology.-1979.-Vol.94.-P.228-231.104

56. Mackey D., Sugden В. The linking regions of EBNA1 are essential for its support of replication and transcription // Mol. Cell. Biol.-1999.-Vol.l9.-P.3349-3359.

57. Mann K.P., Staunton D., Thorley-Lawson D.A. Epstein-Barr virus-encoded protein found in plasma membranes of transformed cells // J.Virol.-1985.-Vol.55.-P.710-720.

58. Mannic J.B., Cohen J.I., Birkenbach M., Marchini A., Kieff E. The Epstein-Barr virus nuclear protein encoded by the leader of the EBNA RNAs is important in B-lymphocyte transformation // J. Virol.-1991.-Vol.65.-P.6827-6837.

59. Manolov G., Manolova Y. Marker band in one chromosome 14 from Burkitt lymphoma // Nature.-1972.-Vol.237.-P.33-34.

60. Matsunou H., Konishi F., Hori H., Ikeda Т., Sasaki K., Hirose Y., Yamamichi N. Characteristics of Epstein-Barr virus-associated gastric carcinoma with lymphoid stroma in Japan // Cancer -1996.-Vol.77.-P.1998-2004.

61. Matsuo Т., Heller M., Petti L., O'Shiro E., Kieff E. Persistence of the active Epstain-Barr virus genome integrated into human lymphocyte DNA // Science.-1984.-226.-P. 1322-1325.

62. Miller G. Epstein-Barr virus. Biology, pathogenesis and medical aspect. In B.N.Fields and D.M.Knipe (ed.). Virology Raven Press, New York.-1990.-P.l 921-1958.

63. Miller C.N., Lee J.H., Kieff E., Longnecker R. An integral membrane protein (LMP2) blocks reactivation of Epstein-Barr virus from latency following surface immunoglobulin crosslinking // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1994.-Vol.91.-P.772-776.

64. Miyasashita E.M., Yang В., Lam K.M., Crawford D.H., Thorley-Lawson D.A. A novel form of Epstein-Barr virus latency in normal В cells in vivo // Cell.-1995.-Vol.80.-P.593-601.

65. Moorthy R.K., Thorley-Lawson D.A. Biochemical, genetic, and functional analyses of the phosphorylation sites on the Epstein-Barr virus-encoded oncogenic latent membrane protein LMP-1 // J. Virol.-1993.-Vol.67.-P.2637-2645.

66. Old L.J., Clifford P., Boyse E.A., DeHavre E., Geering G., Oettgen H.F., Williamson B. Precipitating antibody in human sera to an antigen present in cultured Burkitt's lymphoma cells //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1966.-Vol.56.-P. 1699-1704.

67. Parker G.A., Touitou R., Allday M.J. Epstein-Barr virus EBNA3C can disrupt multiple cell cycle checkpoints and induce nuclear division divorced from cytokinesis // Oncogene.-2000.-Vol.l9.-P.700-709.

68. Parsonnet J., Friedman G.D., Vandersteen D.P., Chang Y., Vogelman J.H., Orentreich N., Sibley R.K. Helicobacter pylori infection and the risk of gastric carcinoma // N. Engl. J. Med.-1991 .-Vol.325.-P. 1127-1131.106

69. Petti L., Sample C., Kieff E. Subnuclear localization and phosphorylation of Epstein-Barr virus latent infection nuclear proteins // Virology.-1990.-Vol. 176,-P.563-574.

70. Purtilo D.T., Sakamoto K., Barnabei V. Epstein-Barr virus-induced diseases in boys with x-linked lymphoproliferative sindrome // Am. J. Med.-1982.-Vol.73.-P.49-56.

71. Raab-Traub N., Dambaugh Т., Kieff E. DNA of Epstain-Basrr virus VIII. B95-8, the previous prototype, is an unusual deletion derivative // Cell.-1980.-22.-P.257-267.

72. Raab-Traub N., Flynn K. The structure of the termini of the Epstain-Barr virus as a marker of clonal cellular proliferation // Cell.-1986.-Vol.47.-P.883-889.

73. Robinson J., Smith D., Niedermann J. Mitotic EBNA-positive lymphocytes in periferal blood during infectious mononucleosis // Nature.-1980.-Vol.287.-P.334-335.

74. Rochford R, Miller C.L., Cannon M.J., Izumi K.M., Kieff E., Longnecker R. In vivo growth of Epstein-Barr virus transformed В cells with mutations in latent membrane protein 2 (LMP2) // Arch. Virol.-1997.-Vol.l42.-P.707-720.107

75. Rogers R.P., Speck S.H. Alternative splicing dicitates translasional starting Epstein-Barr virus transcripts // EMBO J.-1990.-Vol.9.-P.2273-2277.

76. Rowe M., Rowe D.T., Gregory C.D., Young L.S., Farrell P.J., Rupani H., Rickinson A.B. Differences in В cell phenotype reflect novel patterns of Epstein-Barr virus latent gene expression in Burkitt's lymphoma cells // EMBO J.-1987.-Vol.6.-P.2743-2751.

77. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., Scharf S.J, Higuchi R, Horn G.T., Mullis K.B., Ehrlich H.A. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with thermostabile DNA polymerase // Scince.-1988.-Vol.239.-P.487-491.

78. Saiki Y., Ohtani H., Naito Y., Miyazawa M., Nagura H. Immunophenotypic characterization of Epstein-Barr virus-associated gastric carcinoma: massive infiltration by proliferating CD8+ T-lymphocytes // Lab. Invest.-1996.-Vol.75.-P.67-76.

79. Sandvej K., Gratama J.W., Munch M., Zhou X.G., Bolhuis R.L., Andersen B.S., Gregersen N., Hamilton-Dutoit S. Sequence analysis of the Epstein-Barr virus108

80. EBV) latent membrane protein-1 gene and promoter region: identification of 4 variants among wild-type EBV isolates // Blood.-1997.-Vol.90.-P 323-330.

81. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing whith chain-terminating inhibitors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1977.-Vol.74.-P.5463-5467.

82. Shibata D., Weiss L.M. Epstein-Barr virus-associated gastric adenocarcinoma // Am. J. Pathol.-1992.-Vol.l40.-P.769-774.

83. Shousha S., Luqmani Y.A. Epstein-Barr virus in gastric carcinoma and adjacent normal gastric and duodenal mucosa// J. Clin. Pathol.-1994.-Vol.47.-P.695-698.

84. Shin W.S., Kang M.W., Kang J.H., Choi M.K., Ann B.M., Kim J. K., Sun H.S., Min K.W. Epstein-Barr virus-assiciated gastric adenocarcinomas among Koreans //Am. J. Clin. Pathol.-1996.-Vol. 105.-P.l 74-181.

85. Sinclair A.J., Palmero I., Peters G., Farrell P.J. EBNA-2 and EBNA-LP cooperate to cause GO to G1 transition during immortalization of resting human В lymphocytes by Epstein-Barr virus //EMBO J.-1994.-Vol.l4.-P.3321-3328.

86. Sinha S.K., Todd S.C., Hedrick J.A., Speiser C.L., Lambris J.D., Tsoukas C.D. Characrization of the EBV/C3d receptor on the human Jurkat T cell line: Evidence for a novel transcript // J. Immunol.-1993.-Vol. 150.-P.5311-5320.

87. Spruck III C.H, Tsai Y.C., Huang D.P., Yang A.S., Riedeot III W.M., Gonzalez-Zulueta M., Choi P., Lo K.W., Yu M.C., Jones PA. Absence of p53 gene mutations in primary nasopharyngeal carcinoma // Cancer Res.-1992.-Vol.52.-P.4787-4790.

88. Summers H., Barwell J.A., Pfiietzner R.A., Edwards A.M., Frappier L. Cooperative assembly of EBNA1 on the EBV latent origin of replication // J. Virol.-1996.-Vol.70.-P. 1228-1231.

89. Svadmyr E., Jondal M. Cytotoxic effector cells specific for B-cell lines transformed by Epstein-Barr virus are present with infectious mononucleosis // Proc. Natl. Acad. Sci.USA.-1975.-Vol.72.-P.1622-1626.

90. Swaminathan S., Tomkinson В., Kieff E. Recombinant Epstein-Barr virus with small RNA (EBER) gene deleted transforms lymphocytes and replicates in vitro // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-199L-Vol.88.-P. 1546-1550.

91. Takada K. Epstein-Barr virus and gastric carcinoma // Cancer.-1999.-Vol.6.-P.95-100.

92. Thorley-Lawson D.A., Geilinger K. Monoclonal antibodies against the major glycoprotein (gp350/220) of Epstein-Barr virus neutralize infectivity // Proc. Natl Acad.Sci. USA.-l980.-Vol.77.-P.5307-5311.

93. Toczyski D.P., Matera A.G., Ward D.C., Steitz J.A. The Epstein-Barr virus (EBV) small RNA EBER1 binds and relocalizes ribosomal protein L22 in EBV-infected human В lymphocytes // Proc. Natl. Acad. USA.-1994.-Vol.91.-P.3463-3467.

94. Tong X., Wang F., Thut C., Kieff E. The Epstein-Barr virus nuclear protein 2 acidic domain can interact with TFIIB, TAF40 and RPA70 but not with TBR // J.Virol.-1995.-Vol.69.-P.585-588.

95. Tsai C.C., Chen C.L., Hsu H.C. Expression of Epstein-Barr virus in carcinomas of major salivary glands: a strong association with lymphoepithelioma-like carcinoma // Hum. Pathol.-1996.-Vol.27.-P.258-262.

96. Van Grunsven W.M.J., Spaan J.M., Middeldorf J.M. Localization and diagnostic application of immunodominant domains of the BFRF3-encoded Epstein-Barr virus capsid protein // J. Infect. Dis.-1994.-Vol.l70.-P.13-19.

97. Waltzer L., Perricaudet M., Sergeant A., Manet E. Epstein-Barr virus EBNA ЗА and EBNA 3C proteins both repress RBP-Jk-EBNA2-activated transcription by inhibiting the binding of RBP-Jk to DNA // J. Virol.-1996.-Vol.70.-P.5909-5915.

98. Wang D., Liebovitz D., Kieff E. An EBV membrane protein expressed in immortalized lymphocytes transforms established rodent cells // Cell.-1985.-Vol.43.-P.831-840.

99. Wang F., Petti L., Braun D., Seung S., Kieff E. A bicistronic Epstein-Barr virus mRNA encodes two nuclear proteins in latenly infected, growth-transformed lymphocytes // J. Virol.-1987.-Vol.61.-P.945-954.

100. Weiss L.M., Strickler J.G., Warnke R.A., Purtilo D.T., Sklar J. Epstein-Barr viral DNA in tissues of Hodgkin's desease // Am. J. Pathol.-1987.-Vol.l29.-P.86-91.

101. Wilson J.B., Levine A.J. The oncogenic potential of EBV nuclear antigen 1 in transgenic mice // Curr. Top. Microbiol. Immunol.-1992.-Vol.l82.-P.375-384.

102. Wolf H., zur Hausen H., Becker V. EB viral genomes in epithelial nasopharyngeal carcinoma cells // Nature.-1973.-Vol.244.-P.245-247.

103. Yamamoto N., Tokunaga M., Uemura Y., Tanaka S., Shirahama H., Nakamura Т., Land C.E., Sato E. Epstein-Barr virus and gastric remnant cancer // Cancer.-1994.-Vol.74.-P.805-809.

104. Yamamoto N., Takizawa Т., Iwanaga Y., Shimizu N., Yamamoto N. Malignant transformation of В lymphoma cell line BJAB by Epstein-Barr virus-encoded small RNAs // FEBS Letters.-2000.-Vol.24249.-P.l-6.

105. Yanai H., Takada K., Shimizu N., Mizugaki Y., Tada M., Okita K. Epstein-Barr virus infection in non-carcinomatous gastric epithelium // J. Pathol.-1997.-Vol.l83.-P.293-298.

106. Yao Q.Y., Rowe M., Martin В., Young L.S., Rickinson A.B. The Epstein-Barr virus carrier state: dominance of a single growth-transforming isolate in the blood and in the oropharynx of healthy virus carriers // J. Gen. Virol.-1991.-Vol.72.-P.1579-1590.

107. Yoshiyama H., Shimizu N., Takada K., Persistent Epstein-Barr virus infection in a human T-cell line: Unique of latent virus expression // EMBO J.-1995.-Vol. 14.-P.3706-3711

108. Zur Hausen H., Schulte-Holthausen H., Klein G., Henle W., Henle G., Clifford P., Santesson L. EBV DNA in biopsies of Burkitt tumours and anaplastic carsinomas of the nasopharynx // Nature.-1970.-Vol.228.-P.1056-1058.