Варианты хромосомной транслокации Т(9;22) у больных хроническим миелолейкозом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Богданов, Константин Викторович

• Богданов, Константин Викторович
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Богданов, Константин Викторович

1. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

2. ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1.Современные взгляды на возникновение лейкозов. Роль протоонкогенов в развитии опухолевых процессов

1.2. Хромосомные изменения и лейкозы 17 1.2.1. Хронический миелолейкоз и его лечение

1.3. Протоонкоген аЫ, ген Ьсг, кодируемые ими белки, их структура и функции

1.4. Молекулярная организация генома в районе точки разрыва при хромосомной транслокации 1(9\22) ^

1.5. Методы детекции хромосомной транслокации 1(9,22)

1.6. Применение метода РТ-ПЦР в клинической практике для определения хромосомной транслокации 1(9;22)

1.6.1. Применение метода РТ-ПЦР для диагностики и мониторинга минимальной остаточной болезни (МОБ)

1.6.2. Применение метода РТ-ПЦР для диагностики ХМЛ и РЬ-позитивного ОЛЛ

1.7. Клиническое и прогностическое значение вариантов хромосомной транслокации К9;22) у больных ХМЛ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал исследования. Краткая характеристика общей группы больных

2.2. Цитогенетическое исследование

2.2.1. Получение и культивирование клеток костного мозга и крови

2.2.2. Приготовление препаратов хромосом

2.2.3. Дифференциальное окрашивание хромосом

2.2.4. Анализ хромосом и принципы кариотипирования 51 2.3. Молекулярно-биологический метод исследования

2.3.1. Изолирование лейкоцитов из периферической крови больных ХМЛ и доноров путем лизирования раствором 0.83% хлорида аммония

2.3.2. Выделение РНК из изолированных лейкоцитов

2.3.3. Выделение РНК из клеток линии К562 54 2.3.3а. Контроль качества РНК, выделенной из периферической крови больных ХМЛ и клеток линии К

2.3.4. Проведение двухступенчатой РТ-ПЦР 55 2.3.4а. Синтез кДНК в реакции обратной транскрипции 55 2.3.46. Амплификация кДНК в полимеразной цепной реакции

2.3.5. Идентификация продуктов РТ-ПЦР

2.3.6. Распределение больных по группам. Статистическая обработка полученных результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Исследование качества образцов РНК, полученных из периферической крови больных ХМЛ и клеток линии К

3.2. Оценка чувствительности двухступенчатой РТ-ПЦР с использованием коммерческого аналога ТЙ1 полимеразы, ТЕТ-2 термостабильной ДНК-полимеразы

3.3. Изучение частоты встречаемости вариантов хромосомной транслокации 1:(9;22) у больных ХМЛ

3.4. Сравнительная характеристика основных клинико-гематологических показателей у больных ХМЛ с вариантами транслокации Ь3а2 и Ь2а

3.5. Сравнительная прогностическая характеристика ХМЛ с разными вариантами транслокации Ь3а2 и Ь2а

3.5.1. Определение зависимости между вариантом транслокации (Ь3а2 или Ь2а2) и достижением полной гематологической ремиссии у больных ХМЛ, получавших терапию интерфероном-альфа

3.5.2. Определение зависимости между вариантом транслокации (Ь3а2 или Ь2а2) и достижением полной гематологической ремиссии у больных ХМЛ, получавших терапию миелосаном и гидроксимочевиной

3.5.3. Определение зависимости между вариантом транслокации (Ь3а2 или Ь2а2) и достижением цитогенетической ремиссии (редукция РЬ-позитивного лейкозного клона) у больных ХМЛ, получавших терапию интерфероном-альфа

3.5.4. Определение зависимости между вариантом транслокации (Ь3а2 или Ь2а2) и достижением цитогенетической ремиссии (редукция РЬ-позитивного лейкозного клона) у больных ХМЛ, получавших терапию миелосаном и гидроксимочевиной

3.5.5. Определение зависимости между группами больных ХМЛ с разными вариантами транслокации (Ь3а2, Ь2а2) и общей продолжительностью жизни этих пациентов при использовании терапии интерфероном-альфа

3.5.6. Определение зависимости между группами больных ХМЛ с разными вариантами транслокации (Ь3а2, Ь2а2) и общей продолжительностью жизни этих пациентов при использовании терапии миелосаном и гидроксимочевиной

3.5.7. Определение зависимости между группами больных ХМЛ с разными вариантами транслокации (Ь3а2, Ь2а2) и длительностью хронической фазы ХМЛ при использовании терапии интерфероном-альфа

3.5.8. Определение зависимости между группами больных ХМЛ с разными вариантами транслокации (Ь3а2, Ь2а2) и длительностью хронической фазы (длительностью фазы акселерации и БК) ХМЛ при использовании терапии миелосан-гидроксимочевина

3.5.9. Определение зависимости между группами больных ХМЛ с разными вариантами транслокации (Ь3а2, Ь2а2) и длительностью фазы акселерации и стадии БК ХМЛ при использовании терапии интерфероном-альфа

3.5.10. Определение зависимости между группами больных ХМЛ с разными вариантами транслокации (Ь3а2, Ь2а2) и вариантом властного криза ХМЛ (миелоидный или лимфоидный вариант)

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

3. ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Варианты хромосомной транслокации Т(9;22) у больных хроническим миелолейкозом»

Филадельфийская хромосома (Ph-хромосома) - результат реципрокной транслокации t(9;22)(q34;qll), была первой хромосомной аберрацией, связанной со специфической формой онкологического заболевания, хронического миелолейкоза (De Klein et al., 1986). Ph-хромосома обнаруживается в 95% случаев хронического миелолейкоза (ХМЛ), и в 20% случаев острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ) у взрослых, в 2% случаев острого миелобластного лейкоза (ОМЛ), а также в 5% случаев детского ОЛЛ (Kurzrock et al., 1988). Показано, что точки разрыва при Ph-транслокации находятся в гене abl хромосомы 9 и в области гена bcr хромосомы 22. Транслокация приводит к образованию слитного (химерного) гена bcr-abl. В зависимости от положения точек разрыва на хромосоме 22, различают несколько типов транслокации. При хромосомной перестройке по типу Ь3а2 или Ь2а2, когда точка разрыва происходит в главной • зоне M-bcr (breakpoint cluster region) гена bcr, образуется слитный онкоген bcr-abl, кодирующий белок р210 с молекулярной массой 210 кД. Когда точка разрыва происходит в минорной зоне m-bcr гена bcr (хромосомная перестройка типа ela2) образуется ген, кодирующий белок р190 с молекулярной массой 190 кД (Groffen et al., 1984; Pasternak et al., 1998). Последний вариант хромосомной транслокации по типу ela2, как правило, характерен для ОЛЛ, но в редких случаях (2-3%) встречается при ХМЛ и ОМЛ (Saglio et al., 1996; Pear et al., 1998). Варианты хромосомной транслокации по типу Ь3а2 и Ь2а2 встречаются при всех вышеназванных лейкозах.

При цитогенетическом анализе клеток костного мозга и периферической крови больных XMJI Ph-хромосому в ряде случаев выявить не удается. Подобная ситуация встречается у 5% больных XMJI и 10-15% больных острыми лейкозами. Причинами этого могут быть недостаточно большие выборки при цитогенетическом анализе (практически возможно обнаружить 1 Ph-позитивную клетку на 1000 нормальных), что недостаточно, особенно при проведении химиотерапии и/или трансплантации костного мозга (ТКМ), сопровождаемой редукцией лейкозного Ph-позитивного клона у больных лейкозами. Это серьезное ограничение, так как успех терапии и последующая тактика ведения больных XMJI во многом зависят от правильной оценки степени клинико-гематологической ремиссии, от полноты эрадикации лейкозного клона (степени редукции Ph-позитивного клона), что в конечном итоге и определяет длительность жизни пациента (Kantaijian et al., 1990).

Еще одно ограничение цитогенетического анализа связано с недостаточной разрешающей способностью светооптической микроскопии. При микроскопическом исследовании Ph-хромосом не удается дифференцировать разные варианты Ph-транслокации. Последняя задача представляется актуальной, так как в настоящее время широко обсуждается вопрос о значимости различных вариантов транслокации t(9;22) в отношении прогноза и течения хронического миелолейкоза (Mills et al., 1989; Delage et al., 1991; Sawyers, 1993; Tanaka et al., 1993; Nakamura et al., 1994; Rozman et al., 1995; Baccarani et al., 1995). Сделано предположение о возможной корреляции между типом Ph-хромосомной транслокации и клиническим ответом на интерферон-альфа (Inoue et al., 1992; Cortes et al., 1995; Posthuma et al., 1999). Однако, проведенные работы не давали возможности адекватно определить связь вариантов транслокации с прогнозом XMJ1, так как имели ряд ограничений. Блот-гибридизация по Саузерну, позволяет различить варианты химерного гена bcr-abl, однако, не способна различить продукты альтернативного сплайсинга мРНК (Shtivelman et al., 1985, 1987). Позже было показано, что разные варианты Ph-транслокации могут быть эффективно идентифицированы с помощью метода РТ-ПЦР (обратная транскрипция с последующей полимеразной цепной реакцией), однако, анализ клинических и биологических особенностей больных с разными вариантами транслокаций проводился при этом в течении короткого времени и на небольшой выборке пациентов.

Вопрос о том имеют ли прогностическое и клиническое значение варианты транслокации по типу Ь3а2 и Ь2а2 у больных XMJI, остается открытым до настоящего времени. Это делает актуальной работу по использованию метода РТ-ПЦР для идентификации вариантов транслокации t(9;22), исследованию частоты встречаемости разных вариантов транслокации у больных XMJI, оценке влияния вариантов транслокации по типу Ь3а2 и по типу Ь2а2 на эффективность терапии, а также общую продолжительность жизни больных XMJI.

Цель и задачи исследования.

Основной целью работы являлась оценка частоты встречаемости разных вариантов транслокации t(9;22)(q34;qll) у больных ХМЛ с помощью метода РТ-ПЦР, исследование связи между вариантами транслокации и клинико-гематологическими показателями больных ХМЛ. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать эффективность использования метода РТ-ПЦР для идентификации вариантов транслокации 1(9;22)(ц34^11) у больных ХМЛ.

2. Исследовать частоту встречаемости разных вариантов транслокации К9;22)(я34;я11) у больных ХМЛ.

3. Провести сравнительный анализ основных клинико-гематологических показателей (лейкоцитоз, тромбоцитоз, спленомегалия-гепатомегалия) у больных ХМЛ с вариантами транслокации Ь3а2 или Ь2а2 в момент постановки диагноза.

4. Изучить влияние разных вариантов транслокации (Ь3а2 или Ь2а2) на продолжительность хронической фазы и общую продолжительность жизни у больных ХМЛ при терапии интерфероном-альфа, миелосаном и гидроксимочевиной.

5. Изучить связь между разными вариантами транслокаций и частотой достижения клинико-гематологической и цитогенетической (редукция РЬ-позитивного лейкозного клона) ремиссий у больных ХМЛ при терапии интерфероном-альфа, миелосаном и гидроксимочевиной.

Научная новизна.

В результате проведенных исследований показано, что метод двухступенчатой РТ-ПЦР с использованием ТЕТ-7 ДНК-полимеразы позволяет эффективно выявлять варианты хромосомной транслокации 1(9;22)(я34;ц11) у больных ХМЛ. Метод позволяет выявить 1 лейкозную клетку на 100 тыс. нормальных клеток. Впервые оценена частота встречаемости различных вариантов транслокации 1(9;22)(ц34;я11) у больных ХМЛ в Российской Федерации. Впервые показано, что эффективность терапии ХМЛ интерфероном-альфа различна у пациентов-носителей гена Ьсг-аЫ (Ь3а2 V.?. Ь2а2), продолжительность хронической фазы у них составляет 25 и 19 месяцев, а общая продолжительность жизни 56.4 и 37 месяцев, соответственно.

Практическая значимость работы.

Показано, что проведение метода РТ-ПЦР позволяет эффективно выявлять разные варианты хромосомной транслокации 1(9 ;22) в периферической крови у больных ХМЛ. Выявляемые варианты хромосомной транслокации Ь3а2 и Ь2а2 позволяют прогнозировать эффективность терапии интерфероном-альфа. Наличие варианта транслокации Ь3а2 у больных ХМЛ является благоприятным прогностическим фактором при терапии интерфероном-альфа.

Разработанная нами модификация РТ-ПЦР метода диагностики вариантов транслокации 1(9;22) описана в методических рекомендациях для врачей: "Интегральная молекулярно-биологическая характеристика гемопоэза и регулирующих его факторов при миелодиспластическом синдроме и лейкозах человека", издательство СПбГМУ им. И. П. Павлова (в печати). Полученные нами данные используются при чтении курса лекций "Современные методы работы с хромосомами в биологии и медицине" для студентов биолого-почвенного факультета СПбГУ и в циклах по гематологии для студентов лечебного факультета СПбГМУ им. И. П. Павлова.

14

Апробация работы.

Основные положения работы были представлены и обсуждены на симпозиуме "Генные технологии в диагностике и лечении злокачественных и наследственных болезней человека" (Москва, 1998), конференции "25 лет первой трансплантации костного мозга в России" (Москва, 1999), симпозиуме "Лейкозы человека и современные тенденции" (Вильс, Германия, 2000) и на научных семинарах лаборатории генной терапии онкогематологических заболеваний СПбГМУ им. И.П. Павлова.

По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения экспериментальных данных, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, содержащего 128 публикаций. Работа изложена на 127 страницах машинописного текста, содержит 14 таблиц и 15 рисунков.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Богданов, Константин Викторович

ВЫВОДЫ

1. Показано, что метод РТ-ПЦР может быть эффективно использован для идентификации цитогенетически неразличимых вариантов транслокации 1(9;22)(ц34;ц11).

2. Частота встречаемости вариантов транслокации Ь3а2 и Ь2а2 у 66 обследованных больных ХМЛ составляет 64% и 35%, соответственно. У одного больного ХМЛ была выявлена коэкспрессия обоих вариантов транслокации ^9;22)(я34;я11).

3. Не обнаружено связи между типом химерного гена Ъсг-аЫ (Ь3а2 или Ь2а2) и клинико-гематологическими показателями (лейкоцитоз, тромбоцитоз, спленомегалия-гепатомегалия), а также вариантом бластного криза (лимфоидный или миелоидный) в момент постановки диагноза.

4. Показано, что больные ХМЛ с вариантами химерного гена Ь3а2 и Ь2а2 различаются по эффективности терапии интерфероном-альфа. Достижение полной гематологической ремиссии при терапии интерфероном-альфа происходит достоверно чаще у носителей транслокации Ь3а2, чем у больных с вариантом транслокации Ь2а2.

107

5. Редукция РЬ-позитивного лейкозного клона Ь3а2 при терапии интерфероном-альфа происходит достоверно чаще, чем клона Ь2а2.

6. Достоверных различий по частоте достижения цитогенетической и полной гематологической ремиссий при терапии гуанин-связывающим алкилирующим агентом миелосаном и ингибитором рибонуклеотидной редуктазы гидроксимочевиной у носителей разных вариантов транслокации не выявлено.

7. Носители транслокации Ь3а2, в сравнении с носителями транслокации Ъ2а2, имеют большую продолжительность хронической фазы (25 и 19 месяцев) и общую продолжительность жизни (56.4 и 37 месяцев) при терапии интерфероном-альфа. Достоверных различий в продолжительности хронической фазы ХМЛ и общей продолжительности жизни при терапии миелосаном и гидроксимочевиной у носителей разных вариантов транслокации не выявлено.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Богданов, Константин Викторович, 2000 год

1. Боровиков В.П., Боровиков И.П. Введение в щмирамму Statistica // М.: Компьютер Пресс, 1997.- С. 20-35.

2. Георгиев Г.П. О механизме канцерогенеза: "промоторная" гипотеза //Молекулярная биология.- 1981.-Т.15.- С.261-273.

3. Гублер Е.В., Генкин A.A. Применение критериев непараметрической статистики для оценки различий двух групп наблюдений в медико-биологических исследованиях // М.: Медицина, 1969,- С. 9-15.

4. Киселев Ф.Л., Павлиш O.A., Татосян А.Г. Молекулярные основы канцерогенеза у человека// М.: Медицина, 1986.- С.300-320.

5. Клаус Дж. Лимфоциты. Методы // М.: Мир.-1990.- С.52-53.

6. Напалков Н.П., Анисимов В.Н., Князев П.Г., Лихачев А.Я. Современные представления о механизмах канцерогенеза // М.: ВНИИМИ.-1987.-Вып.5.- С.80-84.

7. Сейц И.Ф., Князев П.Г. Молекулярная онкология // Л.: Медицина, -1986.- С.340-350.

8. Татосян А.Г., Тополь Л.З., Семенова Л.А. Биологическая активность вирусных и клеточных онкогенов // М.: ВНИИМИ.-1986.-Вып.5. С.70-80.

9. Ю.Шизон К. Хронический миелолейкоз у детей // Гематол. и трансфузиол.-1998.-Т.43.- С.22-24.

10. Херрингтон С., Магки Дж. Молекулярная клиническая диагностика. Методы //М.: Мир.- 1999.- С.303-320.

11. Яворковский Л.И. Полимеразная цепная реакция в диагностике онкогематологических заболеваний // Эксп. онкология.-1991.-Т. 13.-С.3-7.

12. Adamson E.D. Oncogenes in development // Development.-1987.-Vol.99.-P.449-471.

13. Amikam D., Henig C., Carter A., Sharon R., Ben-Ishai Z. A correlation between the expression of the bcr-abl chimeric gene and severity of the clinical state of CML patients with time // Scand. J. Immunol.-1995.-Vol.41.-P.529-533.

14. Arcese W., Iori A.P., Di-Nucci G., Martinez-Rolon J., pinto R.M., Mandelli F. What does one do for the CML patient in relapse after allogeneic bone marrow transplantation? // Leuk-Lymphoma.-1993.-Vol.lL-P.213-219.

15. Baccarani M., Tura S., Russo D. et al. Chronic myeloid leukemia, bcr-abl transcript, response to alfa-interferon and survival // Leukemia.-1995.-Vol.9.- P. 1648-1652.

16. Bartram C.R. Application of molecular genetics to diagnosis in leukemia.-Haematology trends'93 (ed. Lechner K., Gadner H.) // Schattauer. -Stuttgart-New York.-1993.- P.280-296.

17. Baskaran R., Dahmus M.E., Wang J.Y. Tyrosine phosphorilation of mammalian RNA polymerase II carboxyl-terminal domain // Proc. Natl. Acad. Sei. USA -1993.-Vol.90.- P.11167-71.

18. Benz M., Schroeder M., Herz M., Stilgenbauer S., Lichter P., Dohner H. Detection of trisomy 8 on blood smears using fluorescence in situ hybridization // Leukemia.-1993.-Vol. 7.- P.752-7.

19. Bernands A., Rubin C.M., Westbrook C.A., Paskind M., Baltimore D. The first intron in the human c-abl gene is at least 200 kilobases long long is a target for translocations in chronic myeloid leukemia // Mol. Cell. Biol.-1987.-Vol.7-.P.3231-3236.

20. Bhatia R., Me Carthy J.B., Verfaillie C.M. Interferon-alpha restores normal beta 1 integrin-mediated inhibition of hematopoietic progenitor proliferation by the marrow microenvironment in chronic myelogenous leukemia // Blood.-1996.-Vol.87.- P.3883-91.

21. Biemaux C., Loos M., Seis A., Hurz G., Stryckmans P. Detection of major bcr-abl gene expression at a very low level in blood cells of some healthy individuals // Blood.-1995.-Vol.8. P.3118-3122.

22. Bishop J.M. Viral oncogenes // Cell.-1985.-Vol.42,- P.23-38.

23. Bishop J.M. Molecular themes in oncogenesis // Cell.-1991.-Vol. 64.-P.235-248.

24. Blick E., Westin J., Gutterman J. Oncogene expression in human leukemia // Blood.-1984.-Vol. 83.- P. 1922-1928.

25. Castro-Malaspina H., Schaison G., Briere J., Pasquier A., Tanzer J., Jacquillat C., Bernard J. Philadelphia chromosome-positive chronicmyelocytic leukemia in children. Survival and prognostic factors // Cancer.-1983.-Vol.52,- P.721-727.

26. Cerione R. and Zheng Y. The Dbl family of oncogenes // Curr. Opin. Cell. Biol.-1996.-Vol.8. P.216-222.

27. Chen W., Peace D.J., Rovira D. T-cell immunity to the joining region of 210 Bcr-Abl protein // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.-1992.-Vol.89. P. 1468-1472.

28. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal. Biochem.-1987.-Vol. 162,- P. 156-159.

29. Clark S.S., Mc Laughlin J., Timmons M., Ben-Meriah Y., Dow L.W., Crist W., Rovera G., Smith S.D., Witte O.N. Expression of a distinctive Bcr-Abl oncogene in Phi-positive acute lymphocytic leukemia (ALL) // Science.-1988.-Vol.239. P.775-778.

30. Cortez D., Stoica G., Pierce J.H., Pendergast A.M. The Bcr-Abl tyrosine kinase inhibits apoptosis by activaing a Ras-dependent signalling pathway // Oncogene.-1996.-Vol. 13.- P.2589-94.

31. Creagan R.P., Ruddle F.H. The clone panel: a systematic approach to gene mapping using interspecific somatic cell hybrids // Cytogenet. Cell. Genet.-1975.-Vol. 14. P. 282-86.

32. Daley G.Q., Van Etten R.A., Baltimore D. Induction of chronic myelogenous leukemia by the p210 bcr-abl gene of the Philadelphia chromosome // Science.-1990.-Vol.247.- P.824-830.

33. Deikmann D., Brills S., Garraet M.D. Bcr encodes a GTPase-actvating protein forp21 Rac // Nature.-l991 .-Vol.351. P.400-4.

34. De Klein A., van Agthoven T., Groffen C., Heisterkamp N., Groffen G., Grosveld G. Molecular analysis of both transcriptional products of a Philadelphia-positive CML patient // Nucleic Acids Res.-1986.-Vol.14.-P.7071-82.

35. Delage R., Soiffer R.J., Dear K., Ritz J. Clinical significance of bcr-abl gene rearrangement detected by polymerase chain reaction after allogenicbone marrow transplantation in chronic myelogenous leukemia // Blood. -1991.-Vol.78.- P.2759-2767.

36. Fainstain E., Marcelle C., Rosner A., Canaani E., Gale R.P., Dreazen O., Smith S.D., Croce C.M. A new fused transcript in Philadelphia chromosome positive acute lymphocytic leukemia // Nature.-1987.-Vol.30.- P.89-94.

37. Fainstain E., Einat M., Gokkel E., Marcelle C., Croce C.M., Gale C.M., Canaani E. Nucleotide sequence analysis of human abl and bcr-abl cDNAs // Molecular Cell Biology.-1989.-Vol.9.- P. 1477-1481.

38. Garcia R., Jove R. Activation of STAT transcription factors in oncogenic tyrosine kinase signalling // J. Biomed. Sci.-1998.-Vol.5.- P.79-85.

39. Goff S.P., Gilboa E., Witte O.N., Baltimore D. Structure of the Abelson murine leukemia virus genome and the homologies cellular gene: studies with cloned viral DNA // Cell.-1980.-Vol.22.- P.777-85.

40. Gordon M.Y., Dowding C.R., Riley G.P., Goldman J.M., Greaves M.F. Altered adhesive interactions with marrow stroma of haemopoietic progenitor cells in chronic myeloid leukemia // Nature.-1987.-Vol.328.-P.342-4.

41. Groffen J., Stephenson J.R., Heisterkamp N. et al. Philadelphia chromosomal breakpoints are clustered within a limited region, bcr on chromosome 22 // Cell.-1984.-Vol.36.- P.93-99.

42. Hehlmann R., Heimpel H., Hasford J., Kolb H.J., Pralle H., Hossfield D.K. Randomized comparison of interpheron-alpha with busulfan and hydroxyurea in chronic myelogenous leukemia // Blood.-1984.-Vol.84.-P.4064-77.

43. Heistercamp N., Stam K., Groffen J., de Klein A. and Grosveld G. Structural organization of bcr gene and its role in the Ph translocation // Nature.-1985.-Vol.320.- P. 758-761.

44. Hughes T.P., Morgan G.J., Martiat P. et al. Detection of residual leukemia after bone marrow transplant for chronic myeloid leukemia: role of polymerase chain reaction in predicting relapse // Blood.-1991.-Vol.77.- P.874-878.

45. Kantaijian H.M., Deisseroth A.B., Kurzrock R., Estrov Z., Talpaz M. Chronic myelogenous leukemia: a concise update // Blood.-1993.-Vol.82.- P.691-703.

46. Kantaijian H.M., Smith T.L., O'Brien S. etal. Prolonged survival in chronic myelogenous leukemia following cytogenetic responce to alpha interferon therapy.// Annals of Internel Medicine.-1995.-Vol. 122,- P.254-261.

47. Konopka J.B., Witte O.N. Activation of the abl oncogene in murine and humanleukemias //Bioch. Biophys. Acta.-1985.-Vol.823.-P.l-17.

48. Kurzrock R., Guttrman J.U., Talpaz M. The molecular genetics of Philadelphia chromosome-positive leukemias // N. Engle. J. Med.-1988.-Vol.319.- P.990-8.

49. Kaplan E.L., Meier P. Nonparametric estimation for incomplete observations //J. Am. Stat. Assoc.-1958.-Vol.53 P.457-481.

50. Levis I.D., Haylock D.N., Moore S., To L.B., Hughes T.P. Peripheral blood is a source of BCR-ABL-negative pre-progenitors in early chronic phase chronic myeloid leukemia // Leukemia.-1997,-Vol. 11.- P.581-7.

51. Li W.J., Smith L.A., Kabat K.G., Kloetzer W.S., Arlinghaus R.B. Differential effects of tumor promoters on p210 bcr-abl expression // Hematol. Pathol.-1989.-Vol.3.- P. 113-23.

52. Lukasova E., Kozubek S., Kozubek M. et al. Localisation and distance between Abl and Bcr genes in interphase nuclei of bone marrow cells ofcontrol donors and patientswith chronic myeloid leukemia // Human Genetics.-1997.-Vol. 100: 525-535.

53. Lugo T.G., Pendergast A.M., Muller A.J., Witte O.N. Tyrosine kinase activity and transformation potency of bcr-abl oncogene products // Science.-1990.-Vol.247.- P. 1079-82.

54. Macera M.J., Szabo P., Lin J.H., De Salvo A.T., Shah H.O., Verma R.S. Direct visualization of the transposed abl gene in a duplicated masked Ph chromosome//Genes. Chromosom. Cancer.-1993.-Vol.8.- P. 127-130.

55. Macera M.J., Smith L.J., Frankel E., Szabo P., Verma R.S. A Philadelphia negative chronic myelogenous leukemia with chimeric bcr-abl gene on chromosome 9 and a b3a2 splice junction. // Cancer. Genet. Cytogenet.-1998.-Vol. 101.- P.143-7.

56. Mc Clain K.L. Expression of oncogenes in human leukemias // Cancer Res.-1984.-Vol.44.- P.5384-5389.

57. Mc Laughlin J., Chianese E., Witte O.N. Alternative forms of Bcr-Abl oncogene have quantitatively different potencies for stimulation of immature lymphoid cells //Mol. Cell. Biol.-1989.-Vol.9.- P. 1866-1868.

58. Meyers T.W., Gelfand D.H. Reverse transcription and DNA amplification by Thermus thermophilus DNA polymerase // Biochemistry.-1991 .-Vol.30.- P.7661-7666.

59. Mills K.I., Hynds S.A., Burnett A.K., Mac Kenzie E.D., Bernie G.D. Further evidence that the site of the breakpoint in the major breakpoint cluster region (M-bcr) may be a prognostic indicator // Leukemia.-1989.-Vol.3.- P.837-40.

60. Miyamura T. Interaction of bcr-abl with the retinoblastoma protein in Philadelphia chromosome-positive cell lines // Int. J. Hematol.-1997.-Vol.62.- P. 115-21.

61. Morgan G.J., Hernandez A., Chan L.C., Hughes T., Martiat P., Wiedemann L.M. The role of alternative splicing patterns of bcr-abl transcripts in the generation of the blast crisis of chronic myeloid leukemia//Br. J. Haem.-1990.-Vol.76,- P.33-38.

62. Muller A.J., Pendergast A.-M., Havlik M.H., Puil L., Pawson T., Witte O.N. A limited set of SH2 domains binds Bcr through a high-affinity phosphotyrosine -independent interaction // Mol. Cell. Biol.-1992.-Vol.12.- P.5087-5093.

63. Nakamura K.T., Okamoto N., Mizutani S. Molecular analysis of bcr-abl mRNA during long-term follow-up of cases of chronic myelogenous leukemia // Rinsho-Ketsueki.-1994.-Vol.35. -P.853-61.

64. Neel B.G., Hayward W.S., Robinson H.L., Fang J., Astrin S.M. Avian leukosis virus-induced tumors have common proviral integration sites and synthesize discrete new RNAs: oncogenesis by promoter insertion // Cell.-1981.-Vol.23.- P.323-334.

65. Nichols J., Nimer S.D. Transcription factors, translocations and leukemia // Blood.-1992.-Vol.80.- P.2953-2963.

66. Nowell P., Hungerford D. A minute chromosome in human granulocytic leukemia // Science.-1960.-Vol. 132.- P. 1497-99.

67. Pasternak G., Hochhaus A., Schultheis B., Hehlmann R. Chronic myelogenous leukemia: molecular and cellular aspects // J. Cancer Res. Clin. Oncol.-1998.-Vol. 12.- P.643-60.

68. Pear W.S., Miller J.P., Xu L., Pui J.C., Soffer B. Efficient and rapid induction of a chronic myelogenous leukemia-like myeloproliferative disease in mice receiving p210 bcr-abl-transduced bone marrow // Blood.-1998.-Vol.92.- P.3780-92.

69. Pendergast A.M., Gishizki M.L., Havlik M.H., Witte O.N. SHI domain autophosphorylation of p210 bcr-abl is requuired for transformation but not growth factor independence. // Mol. Cell. Biol.-1993.-Vol. 13.-P. 1728-36.

70. Pendergast A.M. Nuclear tyrosine kinases: from Abl to Wee 1 // Curr. Opin. Cell. Biol.-1996.-Vol.8.-P. 174-81.

71. Reiffers J., Mahon F.X., Boiron J.M., Faberes C., Marit G., Cony-Makhoul P., Broustet A. Autografting in chronic myeloid leukemia: an overview // Leukemia.-1996.-Vol. 10.- P.385-8.

72. Ridley A.J., Hall A. The small GTP-binding protein rho regulates the assembly of focal adhesions and actin stress fibers in response to growth factors // Cell.-1992.-Vol.70.- P.389-99.

73. Rowley J.D. A new consistent chromosomal abnormality in myelogenous leukemia identified by quinacrine fluorescence and giemsa staining // Nature.-1973.-Vol.243.- P.290-291.

74. Salgia R., Li J., Ewaniuk., D.S., Pear W., Pisick E., Burky S.A., Ernst T., Sattler M., Chen L., Griffin J.D. Bcr-Abl induces multiple abnormalities of cytoskeletal function // J. Clin. Invest.-1997.-Vol. 100.-P.46-57.

75. Saglio G. etal. Consistent amounts of acute leukemia-associated pi90 bcr-abl transcripts are expressed by CML patients at diagnosis // Blood.-1996.-Vol.87.-P.1075-80.

76. Sawyes C.L., Denny C.T., Witte O.N. Leukemia and the disruption of normal hematopoiesis // Cell.-1991.-Vol.64.-337-50.

77. Sawyers C.L. Molecular consequences of the Bcr-Abl translocation in chronic myelogenous leukemia // Leukemia and Lymphoma.-1993.-Vol.lL-P.101-103.

78. Saiki S., Scharf F. et al. Enzymatic amplification of b-globin genomic sequences and restriction site analysis of sickle cell anemia // Science.-1985.-Vol.230.-P. 1350-1354.

79. Schaefer-Rego K., Dudek H., Popenoe D., Arlin Z., Mears J.G., Bank A., Leibowitz D. CML patients in blast crisis have breakpoints localized to a specific region of the Bcr // Blood.-1987.-Vol. 70.- P.448-55.

80. Seabright M. A rapid banding technique for human chromosomes // Lancet. -1971. Vol. 2. - P.971.

81. Seeker-Walker L.M., Craig J.M., Hawkins J.M., Hofïbrand A.V. Philadelphia-positive acute limphoblastic leukemia in adults: age distribution, Bcr breakpoint and prognostic significance // Leukemia. -1990.-Vol.5.-P. 196-199.

82. Shtivelman E., Liftshitz B., Gale R.P., Roe B.A., Canaani E. Fused transcript of abl and bcr genes in chronic myelogenous leukemia // Nature.-1985.-Vol.315.- P.550-554.

83. Shtivelman E., Liftshitz B., Gale R.P., Roe B.A., Canaani E. Alternative splicing of RNAs transcribed from the human abl gene and from the bcr-abl fused gene // Cell.-1986.-Vol.47.- P.277-284.

84. Shtivelman E., Gale R.P., Dreazen O. et al. bcr-abl RNA in patients with chronic myelogenous leukemia //Blood.-1987.-Vol.69. P.971-973.

85. Silver R.T. Chronic myeloid leukemia A perspective of the clinical and biological issuues of the chronic phase // Hematol. Oncol. Clin. North. Am.-1990.-Vol.4.- P.319-35.

86. Tanaka K., Hashimoto T., Oguma N., Dohy H., Kamada N. Influence of M-bcr breakpoint sites on the duration of chronic phase in 100 patients with chronic myelocytic leukemia // Cancer Genet. Cytogenet.-1993.-Vol.70.-P.39-47.

87. Trepel M., Scheding S., Groscurth P., Horny H.P., Malipiero U., Brugger W., Dichgans J., Weller M. A new look at the role of p53 in leukemia cell sensitivity to chemotherapy // Leukemia.-1997.-Vol.ll.P. 1842-9.

88. Van Dongen J., Szczepanski T., De Bruijn M. et al. Detection of minimal residual disease in acute leukemia patients // Cytokines and Molecular Therapy.-1996.-Vol.2.- P. 121-133.

89. Verma R., Babu A. Human chromosomes manual of basic techniques // Pergamon Press.-1988.- P.4-256.

90. Wandle U.B., Butzler R., Niederle N., Kloke O., Mengelkoch B., Becher R., Seeber S., Opalka B. Bcr-Abl and negative clonogenic cells in127

91. CML patients undergoing long term interferon treatment // Leukemia. -1994.-Vol.8.- P.776-779.

92. Weinberg R.A. The action of oncogenes in the cytoplasma and nucleus // Science.-1985.-Vol.230.- P.770-776.

93. Welch P.J. and Wang J.Y.J. Abrogation of retinoblastoma protein function by c-Abl through tyrosine kinase-dependent and independent mechanisms//Mol. Cell. Biol.-1995.-Vol. 15.-P.5542-5551.

94. Wen X., Lin H.H., Shih H.M., Kung H.J., Ann D.K. Kinase activation of nonreceptor tyrosine kinase is sufficient to transactivate STAT-mediated gene expression in salivary and lung epithelial cells // J. Biol. Chem.-1999.-Vol.274.- P.38204-38210.

95. Willecke K., Schaefer R. Human oncogenes // Human Genet.-1984.-Vol.66.- P. 10933.

96. Witte O.N., Rosenberg N.E., Baltimore D. A normal cell protein cross-reactive to the major Abelson murine leukemia virus gene product // Nature.-1979.-Vol.281.- P.396-8.