Молекулярно-генетический мониторинг минимальной остаточной болезни у пациентов с хроническим миелолейкозом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.46, кандидат медицинских наук Бутлицкий, Дмитрий Александрович

• Бутлицкий, Дмитрий Александрович
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Бутлицкий, Дмитрий Александрович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ХРОНИЧЕСКИЙ МИЕЛОЛЕЙКОЗ: ПАТОГЕНЕЗ, КЛИНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ, ТЕРАПИЯ, ДИАГНОСТИКА.

1.1. ПАТОГЕНЕЗ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛОЛЕЙКОЗА.

1.2. КЛИНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛОЛЕЙКОЗА.

1.3. ТЕРАПИЯ ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛОЛЕЙКОЗА.

1.3.1. МИЕЛОСАН.

1.3.2. ГИДРОКСИМОЧЕВИНА.

1.3.3. ИНТЕРФЕРОН-АЛЬФА.

1.3.4. ГЛИВЕК.

1.3.5. ТРАНСПЛАНТАЦИЯ СТВОЛОВЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ КЛЕТОК У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ.

1.4. МИНИМАЛЬНАЯ ОСТАТОЧНАЯ БОЛЕЗНЬ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ МИЕЛОЛЕЙКОЗЕ.

1.5. ДИАГНОСТИКА ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛОЛЕЙКОЗА.

1.5.1. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ (ПЦР).

1.6. КЛОНАЛЬНАЯ РЕАРАНЖИРОВКА Т-КЛЕТОЧНОГО РЕЦЕПТОРА ГАММА-ДЕЛЬТА ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ МИЕЛОЛЕЙКОЗЕ.

1.6.1. СТРОЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКИ Т-КЛЕТОЧНОГО РЕЦЕПТОРА ГАММА-ДЕЛЬТА.

1.7. ТЕЛОМЕРАЗА И ТЕЛОМЕРАЗНАЯ АКТИВНОСТЬ.

1.7.1. ТЕЛОМЕРАЗНАЯ АКТИВНОСТЬ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ МИЕЛО ЛЕЙКОЗЕ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. ХАРАКТЕРИСТИКА ИССЛЕДУЕМЫХ ГРУПП.

2.2. ХАРАКТЕРИСТИКА МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.2.1.ВЫДЕЛЕНИЕ ЛЕЙКОЦИТОВ ИЗ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И КОСТНОГО МОЗГА.

2.2.2.ВЫДЕЛЕНИЕ ГЕНОМНОЙ ДНК.

2.2.3. ВЫДЕЛЕНИЕ ТОТАЛЬНОЙ РНК.

2.3. РЕАКЦИИ АМПЛИФИКАЦИИ.

2.3.1. ПОДГОТОВИТЕЛЬНЫЙ ЭТАП.

2.3.2.ВЫЯВЛЕНИЕ ХИМЕРНОГО ГЕНА ВСЯ-АВЬ И ЕГО ПОДТИПОВ.

2.3.3. ВЫЯВЛЕНИЕ РЕАРАНЖИРОВОК Т-КЛЕТОЧНОГО РЕЦЕПТОРА ГАММА-ДЕЛЬТА.

2.3.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЕЛОМЕРАЗНОЙ АКТИВНОСТИ.

2.3.5. ВЫЯВЛЕНИЕ ХИМЕРНОГО ГЕНА BCR-ABL ПРИ ПОМОЩИ ПРОТОКОЛА REAL-TIME ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.4. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ.

2.4.1. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В АГАРОЗНОМ ГЕЛЕ.

2.4.2. геТЕРОДУПЛЕКСНЫЙ АНАЛИЗ (ГДА).

2.5. МЕТОДЫ СТАТИСТИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ

РЕЗУЛЬТАТОВ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. ВСТРЕЧАЕМОСТЬ ТРАНСЛОКАЦИИ t(9;22) У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ.

3.1.1. ВСТРЕЧАЕМОСТЬ РАЗЛИЧНЫХ ВАРИАНТОВ ТРАНСЛОКАЦИИ t(9;22) У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ.

3.1.2. ВЫЯВЛЕНИЕ СВЯЗИ МЕЖДУ ВАРИАНТАМИ ТРАНСЛОКАЦИИ t(9;22) И ФАЗАМИ ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛОЛЕЙКОЗА.

3.1.3. ВЫЯВЛЕНИЕ ТРАНСКРИПТАТА ХИМЕРНОГО ГЕНА BCR-ABL У ПАЦИЕНТОВ, ПОЛУЧАВШИХ МОНОТЕРАПИЮ ГЛИВЕКОМ.

3.2. ОЦЕНКА УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ СУБЪЕДИНИЦЫ hTERT ФЕРМЕНТА ТЕЛОМЕРАЗЫ У ПАЦИЕНТОВ С ХМЛ, ПОЛУЧАВШИХ МОНОТЕРАПИЮ ГЛИВЕКОМ.

3.3. ВЫЯВЛЕНИЕ КЛОНАЛЬНОЙ РЕАРАНЖИРОВКИ Т-КЛЕТОЧНОГО РЕЦЕПТОРА ГАММА-ДЕЛЬТА У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ.

3.3.1. ОТРАБОТКА ПРОТОКОЛА ВЫЯВЛЕНИЯ КЛОНАЛЬНОЙ РЕАРАНЖИРОВКИ ТКР ГАММА-ДЕЛЬТА.

3.3.2. ДИАГНОСТИРОВАНИЕ КЛОНАЛЬНЫХ РЕАРАНЖИРОВОК ТКР ГАММА-ДЕЛЬТА У ПАЦИЕНТОВ С

ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ.

3.4. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ПАЦИЕНТОВ С ХМЛ ПОСЛЕ АЛЛОГЕННОЙ НЕРОДСТВЕННОЙ ТСГК.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетический мониторинг минимальной остаточной болезни у пациентов с хроническим миелолейкозом»

В настоящее время не вызывает сомнений, что в патогенезе большинства гематологических заболеваний основную роль играют так называемые химерные гены, получающиеся путем генетических аберраций (транслокаций, инверсий, делеций и т.д.) (Johansson В. et al., 2003). Гены, сформировавшиеся при этих транслокациях, кодируют не характерные для данного типа клеток белки, которые либо инициируют реакции, предотвращающие апоптоз клетки либо изменяют рецепторный репертуар клетки. Кроме того, существует большая группа транслокаций, патогенетическое значение которых не определено, но известно, что они являются маркерами для некоторых патологических процессов.

С точки зрения лабораторной диагностики гематологических заболеваний, данные генетические перестройки являются высокоспецифическими маркерами течения патологического процесса. Исследования данных маркеров как качественные, так и количественные могут служить одним из основных диагностических и прогностических критериев. Кроме того, разработка высокочувствительных методов выявления генетических перестроек является основой для определения минимальной остаточной болезни. Минимальная остаточная болезнь (МОБ) — это состояние персистенции небольшого количества клеток лейкозного клона в организме больного. Мониторные исследования количества трансформированных клеток позволяют корректировать проводимую терапию, что в свою очередь позволяет снизить частоту рецидивов путем коррекции проводимой терапии (Colombat М. et al., 2006; Ecket С. et al., 2000).

Одним из наиболее клинически значимых генетических нарушений при хроническом миелолейкозе (XMJI) является транслокация bcr-abl (филадельфийская хромосома), которая встречается в 95% случаях(0е Klein et al., 1986). Точки разрыва при данной транслокации находятся в гене аЫ хромосомы 9 и в области гена bcr хромосомы 22. Транслокация приводит к образованию химерного гена bcr-abl. В зависимости от положения точек разрыва на 22 хромосоме, различают несколько типов транслокации - Ь3а2, Ь2а2, ela2 (Biernaux С. et al., 1993; Van Dongen et al., 1996).

Стандартная диагностика XMJI направлена на определение непосредственно транслокации t(9;22) при помощи цитогенетического метода и метода FISH и определение транскриптата химерного гена BCR-ABL с использованием молекулярно-генетических методов. Однако в ряде случаев для постановки диагноза стандартных методов диагностики бывает недостаточно. Это характерно для больных, у которых количество опухолевых клеток столь мало, что оно находится ниже уровня разрешения используемых диагностических методик. Такие состояния могут возникать у больных после проведения химиотерапии. Также существуют такие течения XMJI, при которых BCR-ABL может не определяться. В этих случаях стандартная диагностика не может применяться вследствие отсутствия объекта для поиска. Исходя из вышеперечисленных данных, становится очевидно, что для диагностики XMJI помимо стандартных методик требуются дополнительные методы диагностики.

Цель работы. Разработка информативной системы для подтверждающей диагностики и мониторинга хронического миелолейкоза с целью определения минимальной остаточной болезни на фоне использования различных методов терапии.

Задачи исследования.

1. Разработать протокол для качественной и полуколичественной (автоматизированной) оценки вариантов транслокаций 1:(9;22) у больных ХМЛ;

2. Изучить клиническую значимость определения клональных реаранжировок Т-клеточного рецептора у больных ХМЛ;

3. Изучить активность субъединицы теломеразы ЬТЕЯТ у больных ХМЛ;

4. Изучить чувствительность больных ХМЛ к химиотерапии;

5. Разработать единый протокол молекулярно-генетического обследования пациентов с ХМЛ на минимальную остаточную болезнь. I

Научная новизна.

Впервые проведена оценка состояния опухолевого клона у больных хроническим миелолейкозом методом, включающим в себя методику определения реаранжировок Т-клеточного рецептора и методику определения активности субъединицы ЬТЕЯТ фермента теломеразы. Также проведена сравнительная оценка данных методик со стандартными методами диагностики.

Впервые даны практические рекомендации для мониторинга ВСЯ-АВЬ-негативных больных ХМЛ. Данные рекомендации включают в себя полную схему обследования больных ХМЛ, начиная с момента постановки диагноза и далее, для наблюдения за изменениями молекулярно-генетических показателей в динамике.

Практическая значимость. Предложен для клинической практики протокол обследования BCR-ABL-негативных больных XMJI, включающий в себя как стандартные, так и дополнительные методы диагностики.

Апробация результатов исследования. Материалы диссертации изложены на IV Симпозиуме «Биологические основы терапии онкологических заболеваний» (Москва, 2005), 31я Annual Meeting of the European Group for Blood and Marrow Transplantation (Прага, 2005), конференции «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (2005), 1ой Российско-Американской конференции «Биотехнология и онкология»(Санкт-Петербург, 2005), 16 Wilsede Meeting «Modern trends in human leukemia» (Wilsede, 2005), 32^ Annual Meeting of the European Group for Blood and Marrow Transplantation (Гамбург, 2006).

По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе в иностранных журналах.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Моноклональные реаранжировки Т-клеточного рецептора у больных XMJI не является редкостью и отражают степень вовлеченности лимфоидного ростка в патогенез XMJI. Несмотря на отсутствие прямых статистических корреляций между наличием или отсутствием BCR-ABL и «моно-» или поликлональностью Т-клеточного рецептора гамма-дельта, последний может использоваться в качестве дополнительного критерия оценки состояния опухолевого клона у BCR-ABL- негативных пациентов.

2. Повышенная теломеразная активность (экспрессия мРНК субъединицы hTERT теломеразы) может сохраняться на фоне проводимой терапии, указывая на минимальную остаточную болезнь или на устойчивость к некоторым химиопрепаратам. Повышение теломеразной активности, особенно в посттрансплантационном периоде, как правило связано с прогрессированием основного заболевания.

3. У больных ХМЛ на фоне терапии Гливеком в стандартной дозировке в 43% случаев выявляются признаки минимальной остаточной болезни. Последнее может указывать на один из механизмов резистентности к данному препарату.

4. Единый протокол молекулярно-генетического обследования больных ХМЛ, включающий динамическое наблюдение за изменчивостью специфических (ВСЯ-АВЬ) и опосредованных показателей (теломеразная активность и реаранжировки ТКР) с учетом особенностей клинической картины применим у больных ХМЛ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 96 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания используемых в работе материалов и методов исследования, собственных результатов, обсуждения и выводов. Библиография включает 94 источников литературы, из которых 13 отечественных и 81 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 19 рисунками и 13 таблицами.

Заключение диссертации по теме «Клиническая лабораторная диагностика», Бутлицкий, Дмитрий Александрович

ВЫВОДЫ.

1. Встречаемость варианта Ь3а2 транслокации 1(9;22) у больных ХМЛ выше, чем других вариантов (51,7%). Встречаемость варианта е1а2 минимальна (1,3 %). В хроническую фазу у 28,6% пациентов ген ВСЯ-АВЬ не выявлялся. В фазу акселерации и фазу бластного криза у 100% обследованных определялось наличие транскриптата химерного гена ВСЯ-АВЬ;

2. На фоне монотерапии Гливеком (400 мг\сут) у 43% пациентов, находившихся в хронической фазе, сохранялось наличие гена ВСЯ-АВЬ, что отражает состояние минимальной остаточной болезни.

3. Монотерапия Гливеком в дозе 400 мг в сутки приводит к снижению количества ВСЯ-АВЬ позитивных клеток у больных ХМЛ и уменьшает экспрессию мРНК гена ЬТЕЯТ. ^

4. Уровень экспрессии мРНК гена ЬТЕЯТ был достоверно повышен у пациентов с ВСЯ-АВЬ по сравнению с группой здоровых'доноров (р=0,045) и группой пациентов без ВСЯ-АВЬ(р=0,032).

5. Уровень экспрессии мРНК гена ЬТЕЯТ у пациентов без ВСЯ-АВЬ был ниже, чем в группе здоровых доноров, однако данные различия были не достоверны(р=0,68).

6. Явление моноклональности Т-клеточного рецептора гамма-дельта определялось у больных ХМЛ вне зависимости от клинической картины заболевания.

7. При восстановлении гемопоэза на раннем этапе постТСГК-периода моноклональные реаранжировки ТКР появлялись с отсрочкой на 10-12 дней после появления ВСЯ-АВЬ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Типирование вариантов транслокации у больных ХМЛ целесообразно только на этапе первичной диагностики. Впоследствии можно осуществлять мониторинг МОБ при помощи консенсусных праймеров.

Для повышении объективности исследования в условиях цитопении после проведения курса химиотерапии и особенно для детекции МОБ необходимо использовать полуколичественный протокол (Ы^Сускг).

Детекция клональных реаранжировок Т-клеточного рецептора показана как дополнительный диагностический инструмент, подтверждающий вовлеченность лимфоидного ростка в патогенез ХМЛ и для прогнозирования развития бластного криза по лимфоидному типу.

Детекция и мониторинг экспрессии гена ЬТЕЯТ теломеразы, отражающие активность патологического процесса, должны проводиться как на фоне монотерапии Гливеком, так и в процессе ТСГК.

Исследование клональных реаранжировок Т-клеточного рецептора и мониторинг экспрессии гена ЬТЕЯТ теломеразы могут служить самостоятельными методами мониторинга МОБ у пациентов с ХМЛ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Бутлицкий, Дмитрий Александрович, 2006 год

1. Богданов К.В., Фролова О.И., Марннец О.В. и др. Клиническое значение вариантов хромосомной транслокации t(9;22) у больных хроническими миелолейкозами // Гематол. и трансфузиол.-2003.-№3,-С.3-9.

2. Боровиков В.П., Боровиков И.П. Введение в программу Statistica // М.: КомпьютерПресс, 1997.-С.20-35.

3. Волкова М.А. Гливек революция в терапии хронического миелолейкоза // Онкология.-2003.-№ 14.-С.4-9.

4. Глянц С. Медико-биологическая статистика // Пер. с анг. д.ф-м.н. Данилова Ю.А.-М.: «Практика».-1999.-424 с.

5. Закс Л. Статистическое оценивание // Пер. с нем. Варыгина В.Н.- М.: «Статистика».-1976.-598 с.

6. Клаус Дж. Лимфоциты. Методы. М.: Мир.-1990.-С52-53.

7. Петухов В.Н., Строжа И.Л., Жиличев A.B. и др. Эффективность альфа-интерферонотерапии и bcr-abl транскрипты у больных хроническим миелолейкозом // Гематол. и трансфузиол.-1999.-Т.44.,№1.-С.З-6.

8. Шизон К. Хронический миелолейкоз у детей // Гематол. и трансфузиол.-1998.-Т.43 .-С.22-24.

9. Яворковский Л.И. Полимеразная цепная реакция в диагностике онкогематологических заболеваний // Эксп. Онкология.-1991.-Т. 13.-С.3-7.

10. Aldous W К, Marean A J, DeHart М J. et al. Fluorescent detection of telomerase activity // Methods Mol Biol.-2002.-Vol.191.-P. 137-146.

11. Amikam D., Henig C., Carter A. et al. A correlation between the expression of the bcr-abl chimeric gene and severity of the clinical state of CML patients with time // Scand. J. Immunol.-1995.-Vol.41.-P.529-533.

12. Becker K, Pan D, Whitley С В. Real-time quantitative polymerase chain reaction to assess gene transfer // Hum Gene Ther.-1999.-Vol.10.-P.2559-2566. t

13. Bhatia R., Mc Carthy J.B., Verfaillie C.M. Interferon-alfa restores normal beta 1 integrin-mediated inhibition of hematopoietic progenitor proliferation by the marrow microenvironment in chronic myelogenous leukemia // Blood.-1996.-Vol.87.-P.3883-3891.

14. Biernaux C., Loos M., Sele A. et al. Detection of major bcr-abl gene expression at a very low level in blood cells of some healthly individuals // Blood.-1995.-Vol.8.-P.3118-3122.

15. Bock O, Serinsoz E, Schlue J. et al. Different expression levels of the telomerase catalytic subunit hTERT in myeloproliferative and myelodysplastic diseases // Leuk Research.-2004.-Vol.28.-P.457-460.

16. Brunori M, Luciano P, Gilson E. et al. The telomerase cycle: normal and pathological aspects // J Mol Med.-2005.-Vol.83.-P.244-257.

17. Campanini F, Santucci MA, Pattachini L. et al. Competitive polymerase chain reaction as a method to detect the amplification of bcr-abl gene of chronic myeloid leukemia // Haematologica.-2001.-Vol.86.-P.167-173.

18. Cerione R. and Zheng Y. The Dbl family of oncogenes // Curr. Opin. Cell. Biol.-1996.-Vol. 8 .-P.216-222.

19. Coccoris M, de Witte M A, Schumacher T N. Prospects and limitations of T cell receptor gene therapy // Curr Gene Ther.-2005.-Vol.5.-P.583-593.

20. Colombat M, Fort MP, Chollet C. et al. Molecular remission in chronic myeloid leukemia patients with sustained complete cytogenetic remission after imatinib mesylate treatment // Haematologica.-2006.-Vol.91.-P.162-168.

21. Cortes D., Stoica G., Pierce J.H. et al. The Bcr-Abl tyrosine kinase inhibits apoptosis by activating a Ras-dependent signaling pathway // Oncogene.1996.-Vol. 13 .-P.2589-2594.

22. Cortes J.E., Talpaz M., Beran M. et al. Philadelphia chromosome-negative chronic myelogenous leukemia with rearrangement of the breakpoint cluster region. Long-term follow-up results // Cancer.-1995.-Vol.75.-P.464-470.

23. Cwynarski K., Roberts I., Iakobelli S. et al. Stem cell transplantation for chronic myeloid leukemia in children // Blood.-2003. V.78,-P.1428-1431.

24. Double JA. Telomerase as a therapeutic target. Therapeutic potential of telomerase inhibitors //Methods Mol Biol.-2002.-Vol.l91.-P.209-216.

25. Drobyski W R, Hessner M J. The use of the polymerase chain reaction to predict for subsequent relapse in unrelated marrow transplantation for chronic myelogenous leukemia // Leuk Lymphoma.-1998.-Vol.31.-P.317-323.

26. Goldman G. and Draker B.J. Chronic myeloid leukemia: current treatment options // Blood.-2001.- Vol.98, №7.-P.2039-2042.

27. Hasford J., Pfirrmann M., Hehlmann R. et al. A new prognostic score for survival of patients with chronic myeloid leukemia treated with interferonalfa // J. Natl.Cancer Institute.- 1998.-Vol.90, №11.-P.850-858.

28. Hilbe W, Kuhr T, Apfelbeck U. et al. Dose escalation of ara-c may improve response rates in a subgroup of chronic myeloid leukemia patients with poor response to interferon-alpha and low-dose ara-C // Leuk Lymphoma.-2001.-Vol.42.-P. 1283-1288.

29. Johansson B, Fioretos T, Mitelman F. Cytogenetic and molecular genetic evolution of chronic myeloid leukemia // Acta Haematol.-2002.-Vol. 107.-P.76-94.

30. Kantaryjian H., Sawyers C., Hochhaus A. et al. Hematological and cytogenetic responses to Imatinib Mesylat in chronic myeloid leukemia // New. Engl. J. Med.-2002.- Vol.346, № 9.-P.645-652.

31. Langabeer SE, Gale RE, Harvey RC. et al. Transcription-mediated amplification and hybridisation protection assay to determine BCR-ABLtranscript levels in patients with chronic myeloid leukaemia // Leukemia.-2002.-Vol.l6.-P.393-399.

32. Lee S J. Chronic myelogenous leukaemia // Br J Haematol.-2000.-Vol. 111.-P.993-1009.

33. Levis I.D., Haylock D.N., Moore S. et al. Peripheral blood is a source of BCR-ABL-negative pre-progenitors in early chronic phase chronic myeloid leukemia // Leukemia.-1997.-Vol.l 1 .-P.581-587.

34. Lipton J H, Derzko C M, Curtis J. Alpha-interferon and pregnancy in a patient with CML // Hematol Oncol.-1996.-Vol.l4.-P.l 19-122.

35. Loriaux M, Deininger M. Clonal cytogenetic abnormalities in Philadelphia chromosome negative cells in chronic myeloid leukemia patients treated with imatinib // Leuk Lymphoma.-2004.-Vol.45.-P.2197-2203.

36. Lukasova E., Kozubek S., Kozubek M. et al. Localization and distance between Abl and Bcr genes in interphase nuclei of bone marrow cells of control donors and patients with chronic myeloid leukemia // Human Genetics.-1997.-Vol.l00.-P.525-535.

37. Macera MJ., Smith L.J., Frankel E. et al. A philadelphia negative chronic myelogenous leukemia with chimeric bcr-abl gene on chromosome 9 and b3a2 splice junction//Cancer. Genet. Cytogenet.-1998.-Vol.l01.-P.143-147.

38. Mauro M J, Druker B J. Chronic myelogenous leukemia // Curr Opin 0ncol.-2001 .-Vol. 13 .-P.3-7.

39. Mei Y P, Zhu X F, Zhou J M. et al. siRNA targeting LMPl-induced apoptosis in EBV-positive lymphoma cells is associated with inhibition of telomerase activity and expression // Cancer Lett.-2006.-Vol.232.-P.189-198.

40. Miyamura T. Interaction of bcr-abl with the retinoblastoma protein in philadelphia chromosome-positive cell lines // Int. J. Hematol.-1997;-Vol.62.-P.l 15-121.

41. Nanjangud G J, Saikia TK, Chopra H. et al. Development of Ph positive chronic myeloid leukemia in a patient with chronic lymphocytic leukemia treated with total body irradiation: a rare association // Leuk Lymphoma.-1996.-Vol.22.-P.355-3 59.

42. Osborne T. Accurate urine telomerase test for detecting bladder cancer // Nat Clin Pract Oncol.-2006.-Vol.3.-P.69. ^

43. Pasternak G., Hochhaus A., Schltheis B. et al. Chronic myelogenous leukemia: molecular and cellular aspects // J. Cancer Res. Clin. Oncol.-1998.-Vol.l2.-P.643-660.

44. Pear W.S., Miller J.P., Xu L. et al. Efficient and rapid induction of a chronic myelogenous leukemia-like myeloproliferative disease in mice receiving p210 bcr-abl-transduced bone marrow // Blood.-1998.-Vol.92.-P.3780-3792.

45. Peggs K., Mackinnon S. Imatinib Mesylat the new gold standard for treatment of chronic myeloid leukemia // New. Engl. J. Med.-2003.- V.348, № 11.-P. 1048-1050.

46. Pelz A F, Kroning H, Franke A. et al. High reliability and sensitivity of the BCR/ABL1 D-FISH test for the detection of BCR/ABL rearrangements // Ann Hematol.-2002.-Vol.81 .-P. 147-153.

47. Pendergast A.M. Nuclear tyrosine kinases: from Abl to Wee 1 // Curr. Opin. Cell. Biol.-1996.-Vol.8.-P. 174-181.

48. Posthuma E.F.M., de Paus R., Kluin-Nelemans H. et al. The b3a2 junction type of the bcr-abl oncogene is a favorable prognostic factor for a complete response to interferon treatment in patients with chronic myeloid leukemia

49. CML) 11 Chronic Myeloid Leukemia molecular and biological studies. Simposium.-1999.-Abstract # 378.

50. Prowse KR. Detection of telomerase activity in neural cells // Methods Mol Biol.-2002.-Vol. 198.-P. 137-147.

51. Rasoul N A, Elhalawani N, Nafae M H. et al. Telomerase activity in Philadelphia positive chronic myeloid leukaemia // Egypt J Immunol.-2004.-Vol.ll.-P.l-8.

52. Reiffers J., Mahon F.X., Boiron J.M. et al. Autografting in chronic myeloid leukemia: an overview // Leukemia.-1996.-Vol.l0.-P.385-388.

53. Rozman C., Urbano-Ispizua A., Cervantes F. et al. Analysis of the clinical relevance of the breakpoint location within M-bcr and the type of chimeric mRNA in chronic myelogenous leukemia // Leukemia.-1995.-Vol.9.1. P.l 104-1107. (

54. Saffroy R, Lemoine A, Brezillon P. et al. Real-time quantitation of bcr-abl transcripts in haematological malignancies // Eur. J. Haematol.-2000.-Vol.65.-P.258-266.

55. Saglia G. Consistent amounts of acute leukemia-associated pi 90 bcr-abl transcripts are expressed by CML patients at diagnosis // Blood.-1996.-Vol.87.-P. 1075-1080.

56. Saglio G. Minimal residual disease detection in human leukemias: biologic and clinical significance // Acta Haematol Pol.-1995.-Vol.26.-P.19-24.

57. Salgia R., Li J., Ewaniuk D.S. et al. Bcr-Abl induces multiple abnormalities, of cytoskeletal function//J. Clin. Invest.-1997.-Vol.l00.-P.46-57.

58. Salgia R., Pisick E., Sattler M. et al. pi30 Cas forms a signaling complex with the adapter protein Crkl in hematopoietic cells transformed by the Bcr-Abl oncogene // J. Biol. Chem.-1996.-Vol.271.-P.25198-25203.

59. Savage D., Antman K. Imatinib Mesylat a new oral targeted therapy //

60. Cancer Res.-2005.-Vol.65.-P.3513-3517. 82.Shuai K, Halpern J, ten Hoeve J. et al. Constitutive activation of STAT5 by the BCR-ABL oncogene in chronic myelogenous leukemia // Oncogene.1996.-Vol. 13 .-P.247-254.

61. Smit M L, Giesendorf B A, Vet J A. et al. Semiautomated DNA mutation analysis using a robotic workstation and molecular beacons // Clin Chem.-2001.-Vol.47.-P.739-744. *

62. Storlazzi C T, Anelli L, Surace C. et al. Molecular cytogeneticcharacterization of a complex rearrangement involving chromosomes 9 and 22 in a case of Ph-negative chronic myeloid leukemia // Cancer Genet Cytogenet.-2002.-Vol. 13 6.-P. 141 -145.

63. Tauchi T., Miyazawa K., Feng G.S. et al. Bcr-Abl is a chimeric oncoprotein that exhibits deregulated tyrosine kinase activity and is implicated in the pathogenesis of Philadelphia chromosome-positive leukemia // Biol. Chem.1997.-Vol.272.-P. 13 89-1394.

64. Tennant L. Chronic myelogenous leukemia: an overview // Clin J. Oncol Nurs.-2001 .-Vol.5 .-P.218-219.

65. Trepel M., Scheding S., Groscurth P. et al. A new look at the role of p53 in leukemia cell sensitivity to chemotherapy // Leukemia.-1997.-Vol. 11.1. P. 1842-1849.Q

66. Van,Dongen J., Szczepanski T., De Bruijn M. et al. Detection of minimal residual disease in acute leukemia patients // Cytokines and Molecular Therapy.-1996.-Vol.2.-P. 121-133.

67. Vulliamy T J, Walne A, Baskaradas A. et al. Mutations in the reverse transcriptase component of telomerase (TERT) in patients with bone marrow failure // Blood Cells Mol. Dis.-2005.-Vol.34.-P.257-263.

68. Welch P.J. and Wang J.Y.J. Abrogation of retinoblastoma protein function by c-Abl through tyrosine kinase-dependent and independent mechanisms // Mol. Cell. Biol.-1995.-Vol. 15.-P.5542-5551.

69. Wen X., Lin H.H., Shih H.J. et al. Kinase activation of nonreceptor tyrosine kinase is sufficient to transactivate STAT-mediated gene expression* in salivary and lung epithelial cell // J. Biol. Chem.-1999.-Vol.274.-P.38204-308210.

70. Yamagata T, Mitani K, Kanda Y. et al. Elevated platelet count features the variant type of BCR/ABL junction in chronic myelogenous leukaemia // Br. J. Haematol.-1996.-Vol.94.-P.370-372.