Тропонин I как маркер инфаркта миокарда: Биохимические особенности тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, доктор биологических наук Катруха, Алексей Генрихович

• Катруха, Алексей Генрихович
• доктор биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации доктор биологических наук Катруха, Алексей Генрихович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Диагностика инфаркта миокарда.

1.1.1. Миоглобин

1.1.2. Белок, связывающий жирные кислоты

1.1.3. Лактатдегидрогеназа 25 1.1.4 Креатинкиназа

1.1.5. Тропонин Т

1.1.6. Тропонин I

1.2. Тропонин I. Биохимия и применение в медицине 28 1.2.1. Тропониновый комплекс 28 1.2.2 Тропонин Т 29 1.2.3. Тропонин С 31 1.2 4. Тропонин!

1.2.5. Регуляция мышечного сокращения

1.2.6. Взаимодействие тропонина I с тропонином Т.

1.2.7. Фосфорилирование Tnl.

1.2.8. Ингибиторные участки Tnl и его взаимодействие с актином и тропомиозином.

1.2.9. Тропонин I в диагностике ИМ.

1.3. Белок, связывающий жирные кислоты

1.3.1. Общая характеристика

1.3.2. FABP как маркер инфаркта миокарда

ГЛАВА 2.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Получение моноклональных антител С5.

2.2. Определение классов и субклассов моноклональных антител.

2.3. Аффинная очистка моноклональных антител на РгА-Sepharose.

2.4. Определение концентрации моноклональных антител.

2.5. Образцы ткани.

2.6. Тестирование тканей.

2.7. Приготовление аффинной колонки для выделения тропонинового комплекса.

2.8. Определение концентрации cTnl, сТпТ.

2.9. Получение конъюгата моноклональных антител с биотином.

2.10. Получение конъюгата моноклональных антител схелатом европия

2.11. Электрофоретическое разделение белков в полиакриламидном геле.

2.12. Окраска геля.

2.13. Иммуноблоттинг.

2.14. Приготовление растворов тропонина I.

2.15. Твердофазный иммуноферментный анализ.

2.16. Идентификация белков тропонинового комплекса.

2.17. Образцы сывороток от больных с инфарктом миокарда, нестабильной стенокардией и от здоровых доноров.

2.18. Выделение FABP.

2.19. Выделение тропонинового комплекса.

2.20. Приготовление аффинной колонки для получения сыворотки, не содержащей cTnl.

2.21. Твердофазный синтез пептидов на целлюлозной основе

2.22. Взаимодеиствие моноклональных антител с синтетическими пептидами.

2.23. Моделирование некроза сердечной ткани.

2.24. Иммобилизация человеческого сердечного ТпС на BrCN-активированной сефарозе.

2.25. Исследование взаимодействия Tnl с иммобилизованным

2.26. Фосфорилирование cTnl цАМФ-зависимой протеинкиназой.

2.27. Определение участков взаимодействия cTnl с ТпС.

ГЛАВА

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Разработка нового метода выделения cTnl из сердца человека.

3.2 Получение моноклональных антител к cTnl.

3.3 Попытка разработки диагностической системы для количественного определения cTnl в крови больных с ИМ.

3.4 Влияние образования бинарного комплекса TnC - cTnl на взаимодействие антител с антигеном.

3.5 Изучение кинетики выведения очищенного cTnl и cTnl в форме комплекса с другими тропонинами из кровотока экспериментальных животных

3.4. Использование метода смешанного сэндвича для количественного определения бинарного комплекса cTnl - TnC в крови больных.

3.5. Комплекс cTnl - сТпТ в крови больных инфарктом миокарда.

3.6. Получение нового поколения моноклональных антител к тропонину I, одинаково эффективно узнающих как свободный cTnl, так и cTnl в комплексе с другими тропонинами.

3.7. Синтез библиотеки пептидов cTnl и эпитопное картирование моноклональных антител.

3.8. Перекрестное взаимодействие МАТ с сердечными изоформами сТпI других видов животных.

3.9. Определение участков взаимодействия cTnl с ТпС.

3.10. Изучение биохимических факторов, оказывающих влияние на взаимодействие cTnl с антителами 158 3.10.1. Протеолитическая деградация cTnl в ткани сердечной мышцы при некрозе.

3.10.2. Влияние молекулы ТпС на стабильность cTnl

3.10.3. Влияние фосфорилирования cTnl цАМФ-зависимой протеинкиназой in vitro на связывание антител с cTnl.

3.10.4. Влияние гепарина на связывание антител с cTnl

3.11. Создание новой диагностической системы для количественного определения cTnl

3.12. Исследование влияния различных факторов на пару моноклональных антител 19С7 - 8Е10.

3.13. Предварительные клинические испытания новой диагностической системы.

3.14. Определение верхней границы нормы для cTnl.

3.15. Диагностическая система для количественного определения белка, связывающего жирные кислоты (FABP).

3.16. Исследование содержания cTnl и FABP в сыворотках больных инфарктом миокарда и нестабильной стенокардией.

3.17. Использовние полного тропонинового комплекса с качестве стандарта в диагностических системах 201 3.18. Использование тропонинового комплекса для калибровки диагностических систем.

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Тропонин I как маркер инфаркта миокарда: Биохимические особенности»

Сердечно-сосудистые заболевания, а среди них - инфаркт миокарда (ИМ), стоят на первом месте среди причин смерти, опережая онкологические, инфекционные и другие заболевания. Часто болезнь развивается стремительно, и у врачей остаются часы, иногда минуты на то, чтобы поставить правильный диагноз. Поэтому, именно в случае ИМ ранняя и достоверная диагностика, своевременно начатое лечение могут спасти миллионы человеческих жизней.

Во всех развитых странах для диагностики ИМ в настоящее время применяются биохимические методы, основанные на измерении в крови концентрации или ферментативной активности белков - маркеров ИМ. Первым таким белком - маркером в середине пятидесятых годов стала аспартатаминотрансфераза (Ladue J. et al., 1954; Karmen A. et al., 1954). Позже, через год появились сообщения о возможности использования для диагностики ИМ лактатдегидрогеназы (Wroblewski F. et al., 1955; Vessell E. et al., 1957), затем появились работы, посвященные креатинкиназе (Dreyfus J.et al., 1960; Van der Veen K. et al., 1966; Konttinen A. et al., 1975), миоглобину (Grenadier E.et al., 1983), легким и тяжелым цепям миозина (Trahem С. et al., 1978) и целому ряду других белков, которые впоследствии долгое время использовались в клинической практике. Все эти белки различались по молекулярной массе, времени появления в кровотоке после начала заболевания, времени выведения из кровотока и другим параметрам. Однако, всех их объединяло один очень важный недостаток - все они не были абсолютно кардиоспецифичны. Даже "золотой стандарт" последних двух десятилетий - MB изоформа креатинкиназы не позволяла врачам поставить правильный диагноз со стопроцентной гарантией.

В 1987 году было предложено использовать в качестве маркера некроза клеток сердечной мускулатуры белок тропонин I (Tnl) (Cummins В. et al., 1987). Tnl наряду с двумя другими белками - тропонинами Т и С (ТпТ и ТпС) является компонентом тропонинового комплекса, входящего в состав тонких филаментов поперечнополосатой и сердечной мускулатуры. Ранее было показано, что в организме человека существует изоформа Tnl (Syska Н. et al., 1974), которая исключительно кардиоспецифична, не синтезируется в других органах и имеет существенные различия в первичной структуре по сравнению с двумя другими изоформами этого белка, характерными для скелетной мускулатуры. Такие различия позволили получить сначала поликлональные, а затем и моноклональные антитела к сердечному Tnl (cTnl), не имеющие перекрестного взаимодействия со скелетными формами. И уже в 1992 году две группы исследователей из Англии и США сообщили о создании диагностических систем для количественного определения cTnl в крови больных (Larue С. et al., 1992; Bodor G. et al., 1992). С этого момента начинается широкомасштабное использование этого маркера в клинической практике, и на данный момент практически все крупнейшие мировые компании-производители медицинских диагностических систем выпускают или готовятся к выпуску диагностических систем для количественного или качественного определения cTnl в крови больных.

Причиной успеха cTnl у врачей-кардиологов стала, как указывалось выше, его исключительная кардиоспецифичность. На данный момент со всей очевидностью показано, что концентрация этого белка в крови превышает значения, характерные для нормы, только в случае наличия участка некротизации клеток сердечной мышцы (Bertinchant et а!., 1996; Altinier S.et al., 1997). В отличие от миоглобина, креатинкиназы, тропонина Т и всех других использовавшихся ранее белков - маркеров ИМ, концентрация cTnl в крови не повышается ни в случае серьезных острых или хронических поражений скелетной мускулатуры, ни в случае почечной недостаточности. Таким образом, с врачи-кардиологи впервые получили в свое распоряжение уникальный инструмент с помощью которого появляется возможность поставить диагноз с очень высокой степенью достоверности.

Следует также отметить, что концентрация cTnl в крови здоровых людей очень низка. Это дает возможность регистрировать даже самое небольшое увеличение его концентрации в случае другого заболевания, зачастую связанного с гибелью клеток миокарда - нестабильной стенокардии.

Однако, несмотря на то, что cTnl широко используется в клинике уже почти на протяжении десяти лет, до сих не существует единого международного стандарта для тропониновых диагностических систем. Очевидно, такая ситуация сложилась из-за того, что до последнего времени оставался невыясненным вопрос, в какой биохимической форме этот белок попадает в кровяное русло и в каком виде существует в кровотоке. Без этих знаний невозможно выбрать одну, наиболее подходящую для использования с этой целью форму белка из многообразия полученных на данный момент форм cTnl (изолированной, в комплексе с другими белками, рекомбинантной и т.д.)- Отсутствие точных знаний о представленной в кровотоке форме cTnl, делает невозможным и правильный подбор моно- или поликлональных антител для создания надежных диагностических систем, дающих достоверный результат при количественном исследовании cTnl в крови больного.

Следствием такого положения вещей явилось абсолютное отсутствие корреляции между результатами, полученными при использовании различных диагностических систем. На практике результаты измерения концентрации cTnl в одном и том же образце крови больного двумя различными (даже утвержденными FDA) диагностическими системами могут различаться на порядок и даже более. Это, в свою очередь, приводит в замешательство врачей, использующих тропониновые диагностические системы в клинической практике. Невозможность сравнить результаты, полученные в разных лабораториях на разных приборах, существенно тормозит развитие теоретических разработок, связанных с практическим применением данного маркера в клинической практике.

Работы по получению моноклональных антител к cTnl и по разработке диагностической системы для количественного определения этого белка в крови больных были начаты в нашей лаборатории в 1991 году. После первых же экспериментов по тестированию образцов сыворотки больных с помощью полученных антител, выяснилось, что cTnl в крови больного неоднороден и, что вероятно, представлен в виде различных биохимических форм. Для нас стало очевидно, что без детального изучения биохимических свойств этого белка в кровотоке невозможно создание надежной диагностической системы.

За прошедший с 1991 г. период нам удалось прояснить некоторые биохимические особенности cTnl циркулирующего в крови больного. Нами впервые было показано, что во-первых, значительная часть cTnl существует в крови больных с ИМ в виде комплекса с TnC (Katrukha et al., 1997), а во-вторых, большая часть cTnl в крови, представлена в виде протеолитических фрагментов, а не в виде целой молекулы, как считалось ранее (Katrukha et al., 1998). Мы убедительно показали влияние фосфорилирования молекулы cTnl цАМФ-зависимой протеинкиназой на взаимодействие ряда антител с антигеном и на необходимость учитывания этого фактора при подборе антител для диагностической системы. Было также установлено отрицательное воздействие гепарина на уровень сигнала ряда диагностических систем, что приводит к серьезному искажению результатов измерения белка в крови.

Анализируя результаты наших исследований, мы смогли подготовить рекомендации по подбору и тестированию антител, пригодных для создания надежных диагностических систем. Нами впервые было предложено использовать полный тропониновый комплекс для изготовления стабильных стандартов cTnl в диагностических системах, а наша идея по использованию этого комплекса в качестве международного иммунологического стандарта считается многими учеными наиболее перспективным направлением в развитии процесса стандартизации тропониновых диагностических систем.

Единственным недостатком cTnl как маркера некроза клеток сердечной мышцы является его недостаточно раннее появление в крови больных после появления первых признаков заболевания. Для того, чтобы лечение больных с ИМ и нестабильной стенокардией было наиболее эффективным и не сопровождалось всевозможными осложнениями, необходимо начинать его в течение полутора-двух часов после начала приступа. Однако, повышение концентрации cTnl в крови больного наблюдается обычно не раньше, чем через 4-6 часов после начала сердечного приступа, когда уже существенный участок сердечномышечной ткани подвергается необратимым некротическим изменениям. Безусловно, в этом случае терапевтическое вмешательство становится гораздо менее эффективным. Обычно в клинической практике для ранней диагностики ИМ используются диагностические системы, основанные на количественном определении в крови больного миоглобина. Однако, миоглобин не является кардиоспецифичным белком и при его применении в диагностике ИМ велик риск появления ложноположительных результатов.

В последнее время все больший интерес со стороны исследователей и компаний - производителей диагностических систем уделяется белку, связывающему жирные кислоты (fatty acid binding protein; FABP) как к возможному кандидату на замещение миоглобина при ранней диагностике ИМ (Glatz et al., 1988). FABP, имея сходную с миоглобином кинетику выделения после ИМ, является несравненно более кардиоспецифичным. Кроме того было показано, что использозание FABP наиболее эффективно именно при поражении сердечной мускулатуры.

В данной работе мы приводим результаты исследований, наглядно демонстрирующих, что FABP совместно с cTnl может быть успешно использован не только для диагностики ИМ, но и для диагностики заболеваний, связанных с незначительными повреждениями сердечной мышцы-такими как микроинфаркты и нестабильная стенокардия.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Катруха, Алексей Генрихович

ВЫВОДЫ

• Разработан новый высокоэффективный метод выделения cTnl и других компонентов тропонинового комплекса из сердечно-мышечной ткани человека.

• Получено более 50 линий гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела, специфичные к сердечной форме Tnl.

• Осуществлено детальное эпитопное картирование полученных моноклональных антител.

• Показано влияние образования бинарного комплекса cTnl-TnC на взаимодействие части моноклональных антител с cTnl.

• Впервые показано, что в кровяное русло больных с ИМ cTnl выделяется в основном в виде комплекса с ТпС.

• Исследована деградация молекулы cTnl под воздействием эндогенных протеаз в сердечной ткани человека при некрозе. Показано, что наиболее устойчивой к протеолизу частью молекулы cTnl является участок, ограниченный 30 - 110 аминокислотными остатками. Стабильность данного участка молекулы обеспечивается взаимодействием cTnl с ТпС.

• Показано влияние фосфорилирования молекулы cTnl цАМФ-згвисимой протеинкиназой на взаимодействие ряда моноклональных антител с антигеном. Впервые исследовано содержание фосфорилированной и дефосфорилированной форм cTnl в крови больных с ИМ.

• Исследовано влияние присутствующего в образце гепарина на взаимодействие МАТ с антигеном.

• На основе полученных моноклональных антител разработана высокочувствительная и надежная экспериментальная система для количественного определения cTnl в крови.

• Предложена новая методика приготовления стабильных стандартов cTnl на основе полного нативного тропонинового комплекса.

• Показана целесообразность использования полного нативного тропонинового комплекса в качестве международного иммунологического стандарта для проведения калибровки тропониновых диагностических систем.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Катруха, Алексей Генрихович, 2000 год

1. A., Cardiac troponin I. A marker with high specificity for cardiac injury. Circulation1993,88, 101-106. • Adams J.E. 3rd; Davila-Roman V.G.; Bessey P.Q.; Blake D.P.; Ladenson J.H.;

2. Jaffe A.S. Improved detection of cardiac contusion with cardiac troponin I. Am.

3. Heart. J. 1996; 131(2): 308-12.• Adams J.E. 3rd; Schechtman K.B.; Landt Y.; Ladenson J.H.; Jaffe A.S.

4. Comparable detection of acute myocardial infarction by creatine kinase MBisoenzyme and cardiac troponin I. Clin. Chem. 1994; 40(7 Pt 1): 1291-5. • Adams J.E. 3rd; Sicard G.A.; Allen B.T.; Bridwell K.H.; Lenke L.G.; Davila

5. EF-hand of troponin С for Ca2+ coordination, by genetic engineering. (1992) J.

6. Biol. Chem., 267, 15469-15474.• Bailey, K. (1946) Nature, 157, 368-369. • Bass NM, Manning JA, Tissue expression of three structurally different fatty acid binding proteins from rat heart muscle, liver, and intestine, Biochem Biophys Res

7. J. Lamy, F. Paolucci, B. Pau, Interet du dosage de la troponine I cardiaquehumaine dans le diagnostic de I'infarctus aigu du myocarde. JArch-Mal-Coeur1. Vaiss. 1996, 89(1): 63-8 • Bodor G.S., Anderson P.A., Ladenson J.H., Crimmins D.L., Allen P.D., and

8. Hoppe-Seyler, 1989, 370, 229-238.• Breitbart, R.E., Nguyen, H.T., Medford, R.M., Destree, A.T., Mahdavi, V., and

9. Nadal-Ginard, B. (1985) Cell, 41, 67-82.• Brisson, J.R., Sykes, B.D., Smillie, L.B., and Golosinska, K. Interaction of tropomyosin and troponin T: a proton nuclear magnetic resonance study. 1986,

10. Overhauser effect to determine the structure of a Gly-110 inhibitory troponin Ipeptide analog when bound to cardiac troponin C.I992, Biochim. Biophys. Acta, 1160,25-54. • Chandra M.; da Silva E.F.; Sorenson M.M;. Ferro J.A.; Pearlstone J.R.; Nash

11. Corsico В, Cistola DP, Frieden C, Storch J The helical doглain of intestinal fattyacid binding protein is critical for collisional transfer of fatty acids to phospholipid membranes. Proc Natl Acad Sci U S A 1998; 95(21): 12174-8

12. Crisman T.S., Claffey K.P., Saouf R., Hanspal J., Brecher P. Measurement of ratheart fatty acud binding protein by ELISA: tissue distribution, developmental changes and subcellular distribution. J. Mol. Cell. Cardiol., 1989, 21, 577-83.

13. Crisman TS, Claffey KP, Saouaf R, Hanspal J, Brecher P, Measurement of ratheart fatty acid binding protein by ELISA. Tissue distribution, developpmental changes and subcellular distribution. J Mol Cell Cardiol, 1987; 19(5): 423-31.

14. Cummins В.; Auckland M.L; Cummins-P. Cardiac-specific troponin-lradioimmunoassay in the diagnosis of acute myocardial infarction. Am Heart J. 1987(a), 113(6): 1333-44

15. Cummins В.; Cummins P. Cardiac specific troponin I release in canineexperimental myocardial infarction: development of a sensitive enzyme linked immunoassay. J. Mol. Cell. Cardiol. 1987(b); 19(10): 999-1010.

16. Dhoot, G.K., Cell, P.G.H., and Perry, S.V. The localization of the different formsof troponin I in skeletal and cardiac muscle cells. Exp. Cell. Res., 1978; 117, 357370.

17. Dobrovol'sky, A.В., Gusev, N.B., and Friedrich, P. Crosslinking of troponincomplex with 1,3-difluoro-4,6-dinitrobenzene. Identification of the crosslink formed between troponin С and troponin I in the absence of Ca "^". 1984,

18. Biochim. Biophys. Acta, v.789, p.144-151.• Dohet С, Ruegg J.С, Trayer 1.Р., and Ai-Hillawi E. Reconstitution of skinned cardiac fibres with human recombinant cardiac troponin-l mutants and troponin

19. A.; Schipman N.; Kantelip J.P. Use of cardiac troponin I as a marker ofperioperative myocardial ischemia. Ann. Thorac. Surg. 1995; 59(5): 1192-4. • Etievent J.P.; Chocron S.; Toubin G.; Taberlet C; Alwan K.; Clement F.; Cordier

20. Fujimori K., Smillie L.B., and Reinach F.C. Structural and regulatory functions ofthe NH2- and COOH-terminal regions of skeletal muscle troponin I. J. Biol.

21. Chem., 1994, 269, 5230-5240.• Farah C.S.; Miyamoto C.A.; Ramos C.H.; da Silva A.C.; Quaggio R.B; Fujimori

22. K.; Smillie LB.; Reinach F.C. Stnjctural and regulatory functions of the NH2 and

23. Severin E, Gusev N. Epitope mapping of anti-troponin antibodies, Biochem. Mol.

24. F., Jaffe A.S. Prognostic Influence of elevated values of cardiac troponin I inpatients with unstable angina. Circulation. 1997; 90(6): 2618-21. • Galvani, M., Ottani, F., Ferrini, D., Ladenson, J.H., Destro, A., Baccos, D.,

25. MP, van der Vusse GJ Fatty-acid-binding protein as a plasma marker for theestimation of myocardial infarct size in humans. Br Heart J 1994;71 (2): 135-40 • Glatz JF, van Bilsen M, Paulussen RJ, Veerkamp JH, van der Vusse GJ,

26. Reneman RS Release of fatty acid-binding protein from isolated rat heartsubjected to ischemia and reperfusion or to the calcium paradox. Biochim

27. Biophys Acta 1988; 1;961(1):148-52• Glatz JF, Van der Vusse GJ, Maessen JG, Van Dieijen-Visser MP, Hermens

28. A.S. Elevated donor cardiac troponin I. A marker of acute graft failure in infantheart recipients. Circulation. 1994; 90(6): 2618-21. • Greig, A., Hirschberg, Y., Anderson, P.A.W., Hainsworth, C, and Malouf, N.N.

29. T, Nomura M, Nagamura Y, Watanabe Y, Hishida H, Tanaka T, Kawamura К

30. Biol. Chem. 1980; 255(20): 9635^0.• Julian DG, Camm AJ, Frangin G, Janse MJ, Munoz A, Schwartz FJ, Simon F.

31. Randomised trial of effect of amiodarone on mortality in patients with leftventricular dysfunction after recent myocardial infarction: EMIAT. European

32. Myocardial Infarct Amiodarone Trial Investigators. Lancet 1997 Mar8;349(9053):657-74 • Karmen A., Wroblewski F., Ladue J.S. Transaminase activity in human blood. J.

33. Clin. Invest,1954, 34, 126-33.• Kato К., Ishiguro Y., Ariyoshi Y. Enolase isozymes as disease markers:

34. Distribution of three enolase subunits in various human tissues. Dis markers,1983, 1,213-20. • Katrukha A, Bereznikova, A, Esakova T, Severina M, Pettersson K., Lovgren, T,

35. Troponin complex for the preparation of tropoin I calibrators and standards.

36. American Association for Clinical Chemistry, 49'^ Annual Meeting, 1997, Clin1. Chem, 43{6):106. • Katrukha A.G., Bereznikova A.V., Esakova T.V., Filatov V.L., Bulargina T.V., and

37. Gusev N.B. A new method of human cardiac troponin I and troponin Tpurification. 1995, Biochem. Mol. Biol. Int., 36, 195-202. • Katrukha AG, Bereznikova AV, Filatov VL, Esakova TV, Kolosova OV,

38. Pettersson K, Lovgren T, Bulargina TV, Trifonov IR, Gracianskyi NA, Pulkki K,

39. Vuopio-Pulkki L-M, Gusev NB. Cardiac troponin I degradation: application forreliable immunodetection. Clin Chem 1998; 44, 12, 2433-2440. • Katrukha, A.G., Bereznikova, A.V., Esakova, T.V., Pettersson, K., Lovgren, Т.,

40. Biochemistry, 26, 7035-7042.• Levine, B.A., Moir, A.J.R., and Репу, S.V. The interaction of troponin-l with the

41. N-terminal region of actin ;1988, Eur. J. Biochem., 172, 389-397.• Li, M.X., Sykes, B.D., Smillie, L.B.; Kay, СМ.; Tsuda, S., and Gagne, S.M.

42. Hamm C.W.; O'Hanesian M.A.; Wagner G.S.; Kleiman N.S.; Harrell F.E. Jr;

43. NH2 terminus of fast skeletal muscle troponin I in its biological activity. 1992 J.

44. Reinach F.C. Concerted action of the high affinity calcium binding sites inskeletal muscle troponin С J. Biol. Chem. 1995; 270(17): 9770-7. • Specht 1996, Bartetzko N, Hohoff, Kuhl, Franke R, Borchers T, Spener F,

45. Matsuda Early detection of cardiac damage with heart fatty acid-binding proteinafter cardiac operations. Ann Thorac Surg 1998; 65(1):54-8 • Swiderek К., Heilmeyer L.M. Jr., Hoffmann F., Schachtele C, Meyer H.E., and

46. Jaquet K. Sites phosphorylated in bovine cardiac troponin T and I.

47. J.D. The role of the four Ca^ "" binding sites of troponin С in the regulation ofskeletal muscle contraction. J. Biol. Chem. 1996; 271(14): 8381-6. • Takeishi, Y., Chu, G., Kirkpatrick, D.M., Li, Z., Wakasaki, H., Kranias, E.G., King,

48. G.L. and Walsh, R.A. In vivo phosphorylation of cardiac Tnl by protein kinase

49. Kawamura K, Morita H, Abe S, et al Human heart-type cytoplasmic fatty acidbinding protein in serum and urine during hyperacute myocardial infarction. Int J

50. J Biol Chem 1990;265(27): 16255-61• Vallins. W., Brand N., Dabhade N., Bulter-Browne G., Yacoub M.H., Barton

51. Maessen JG, Punt CD, Van Dieijen MP, Van der Vusse GJ, Glatz JF

52. Sanders G., Independent prognostic value of C/reactive protein and troponin I inpatients with unstable angina or non-Q-wave myocardial infarction.

53. Cardiovascular research 1999, 42, 240-245.• Wodzig KW, Kragten JA, Hermens WT, Glatz JF, van Dieijen-Visser MP

54. Estimation of myocardial infarct size from plasma myoglobin or fatty acid-bindingprotein. Influence of renal function. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1997; 35(3): 191-8 • Wodzig KW, Kragten JA, Modrzejewski W, Gorski J, van Dieijen-Visser MP,

55. Proposal for the multinational monitoring of trends and determination incardiovascular disease. Geneva: Cardiovascular Disease unit of WHO, 1981. • Wroblewski F., Ladue J.S. Lactic dehydrogenase activity in blood. Proc. Soc.

56. Asayama K, Ishii H,Human heart-type cytoplasmic fatty acid-binding protein asan indicator of acute myocardial infarction Heart Vessels 1995;10(6):304-9. • Young AC, Scapin G, Kromminga A, Patel SB, Veerkamp JH, Sacchettini JC,

57. Histochem Cell Biol 1995; 103(2):147-561. Р0ССИ(>СКЛ51. , 1. Ч Б Л И О Т Е ' ^ . ^ Г у