Исследование иммунохимических и биохимических свойств N-концевого фрагмента предшественника натрийуретического пептида В-типа человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Сеферян, Карина Рубеновна

• Сеферян, Карина Рубеновна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сеферян, Карина Рубеновна

Список используемых сокращений.

Введение.

1 Обзор литературы.

1.1 Натрийуретические пептиды.

1.1.1 Семейство натрийуретических пептидов.

1.1.2 Строение натрийуретических пептидов.

1.2 Синтез и ceKpeijim BNP.

1.2.1 Экспрессия BNP в различных тканях.

1.2.2 Структура гена BNP.

1.2.3 Регуляция экспрессии гена BNP.

1.2.4 Процессинг предшественника BNP.

1.2.5 Формы BNP в крови.

1.2.6 Конвертазы прогормонов, предположительно принимающие участие в процессинге proBNP.

1.2.7 Олигомерньге формы proBNP и NT-proBNP.

1.3 Инактивация натрийуретических пептидов.

1.4 Рецепторы натрийуретических пептидов.

1.5 Физиологическое действие BNP.

1.6 Сердечная недостаточность.

1.6.1 Обгцая характеристика.

1.6.2 Гемодинамические изменения в организме при сердечной недостаточности.

1.6.3 Использование BNP и NT-proBNP в клинической практике.

1.7 Измерение концентрации NT-proBNP в крови.

2 Материалы и методы исследования.

2.1.1 Создание молекулярно-генетической конструкции рЕТ-23а(+)-NT-proBNP для экспрессии рекомбинантного NT-proBNP в клетках Е. coli.

2.1.2 Экспрессия рекомбинантного NT-proBNP. Получение лизата клеток Е. coli.

2.1.3 Конъюгирование пептидов с белком-носителем.

2.1.4 Иммунизация мышей и получение линий гибридомных клеток, продуцирующих антитела, специфичные к NT-proBNP.

2.1.5 Иммуноферментный и иммунофосфоресцентный анализы.

2.1.6 ДСН-электрофорез в полиакршамидном геле.

2.1.7 Электрофорез в трис-трщииовой буферной системе.

2.1.8 Иммунохимическое окрашивание белков, иммобилизованных на нитроцеллюлозной мембране.

2.1.9 Иммобилизация антител на BrCN-активированной сефарозе.

2.1.10 Выделение NT-proBNP из плазмы крови методом аффинной хроматографии.

2.1.11 Ферментативное дегликозилирование эндогенного NT-proBNP.

2.1.12 Хроматографическое разделение белков.

2.1.13 Трипсинолиз эндогенного NT-proBNP и дегликозилирование протеолитических фрагментов с использованием гидроксида аммония.

2.1.14 Масс-спектрометрический анализ.

3 Результаты и их обсуждение.

3.1 Получение и очисткарекомбинантного NT-proBNP.

3.1.1 Создание молекулярно-генетической конструкцииpET-23a(+)-NT-proBNP для экспрессии рекомбинантного NT-proBNP в клетках Е. coli.

3.1.2 Очистка рекомбинантного NT-proBNP.

3.2 Получение моноклональных антител, специфичных к NT-proBNP.

3.2.1 Конъюгирование пептидов с белком- носителем и иммунизация мышей.

3.2.2 Получение линий гибридомных клеток, продуцирующих антитела, специфичные к NT- proBNP.

3.2.3 Определение эпитопной специфичности моноклональных антител.

3.3 Исследование биохимических особенностей эндогенного NT-proBNP.

3.3.1 Изучение взаимодействия моноклональных антител с NT-proBNP, содержащимся в крови больных с СН.

3.3.2 Протеолитическая деградация NT-proBNP и ее влияние на связывание с моноклоналънъти антителами.

3.3.3 Проверка гипотезы о существовании NT-proBNP в крови в виде гомо- или гетероолигомерных комплексов.

3.3.4 Гликозилирование молекулы NT-proBNP и его влияние на взаимодействие с антителами.

3.3.5 Определение сайтов гликозилирования NT-proBNP методом MALDI-MS/MS.

3.4 Влияние О-гликозилирования на иммунореактивностъ NT-proBNP, выделенного из индивидуальных образцов плазмы больных с СН.

4 Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование иммунохимических и биохимических свойств N-концевого фрагмента предшественника натрийуретического пептида В-типа человека»

Натри йуретический пептид В-типа (Brain Natriuretic Peptide, BNP) является пептидным гормоном, функциональным антагонистом ренин-ангиотензин-альдостероновой системы и симпатической нервной системы. BNP участвует в регуляции кровяного давления, объема жидкости в организме и её электролитного состава, вызывая вазодилатацию сосудов, ускоряя выведение натрия и усиливая диурез. BNP осуществляет свое действие на организм, взаимодействуя с рецепторами натрийуретических пептидов А-типа, которые являются мембран-связанными гуанилатциклазами. BNP синтезируется кардиомиоцитами в виде прогормона proBNP (108 аминокислотных остатков, а.к.о.), который затем расщепляется специфической конвертазой на физиологически активный BNP (32 а.к.о.) и N-концевой фрагмент прогормона (NT-proBNP, 76 а.к.о.), которые выделяются в кровоток. Физиологическая функция NT-proBNP, если имеется, пока остается неизвестной.

Уровень экспрессии гена BNP и секреция BNP и NT-proBNP в кровоток значительно увеличиваются при сердечной недостаточности (СН). Сердечная недостаточность представляет собой заболевание, при котором сердце не способно обеспечить организхм кровью в необходимых количествах, которое проявляется в виде характерных симптомов (одышка, утомляемость, ограничение физической активности, отеки, влажные хрипы в легких и др.). Сердечная недостаточность может развиваться в результате различных сердечно-сосудистых заболеваний, таких как коронарная болезнь сердца, гипертония, дефекты клапанов сердца, аритмия, кардиомиопатия, а также в результате повреждений миокарда любой этиологии. Клинические проявления СН неспецифичны, что значительно затрудняет диагностику заболевания. Показано, что при СН концентрация BNP и NT-proBNP в крови увеличивается прямо пропорционально степени дисфункции левого желудочка сердца. В настоящее время измерение концентрации BNP и NT-proBNP с использованием иммунохимических методов широко используется в клинической практике при обследовании больных с подозрением на СН. Использование BNP и NT-proBNP как биохимических маркеров СН позволяет значительно повысить точность диагностики СН. Помимо этого, измерение концентрации обоих пептидов в крови обладает высоким прогностическим значением у пациентов с СН, а также у пациентов, перенесших острый инфаркт миокарда.

Несмотря на широкое применение в клинике, до последнего времени практически ничего не было известно о биохимических особенностях BNP и NT-proBNP, обнаруживаемых в крови человека. Однако, данные о том, в какой форме маркер существует в крови, необходимы как для интерпретации результатов теста, так и для правильного подбора антител, используемых в диагностических системах; выбора калибратора и стандартов. На взаимодействие антител с белком-мишенью может оказывать влияние целый ряд факторов (протеолитическая деградация, комплексообразование, пострансляционные модификации и др.), что может приводить к недостоверным результатам при измерении концентрации маркера в крови пациента. Данная работа посвящена исследованию иммунохимических и биохимических свойств эндогенного NT-proBNP.

1 Обзор литературы.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Сеферян, Карина Рубеновна

4 Выводы

1. Создана система экспрессии и разработан метод получения высокоочищенного препарата рекомбинантного NT-proBNP.

2. Получены и охарактеризованы моноклональные антитела, специфичные к различным участкам молекулы NT-proBNP человека.

3. Показано, что в крови больных с сердечной недостаточностью N-концевой участок молекулы NT-proBNP подвергается протеолизу.

4. Впервые эндогенный NT-proBNP описан как гликопротеин с гликозилированием О-типа.

5. Выявлены отличия в степени гликозилирования а) одного и того же участка молекулы NT-proBNP у различных больных; б) различных участков молекулы в крови одного больного.

6. Установлено, что гликозилирование препятствует взаимодействию антител, специфичных к участкам 5-12 и 28-60, с NT-proBNP. Рекомендовано в системах для количественного определения NT-proBNP использовать антитела, специфичные к участкам 13-20 и 63-71 молекулы NT-proBNP.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сеферян, Карина Рубеновна, 2010 год

1. Altschul, S. F., Madden, Т. L., Schaffer, A. A., Zhang, J., Zhang, Z., Miller, W. &1.pman, D. J. 1997. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Res 25: 3389-402.

2. Arden, К. C., Viars, C. S., Weiss, S., Argentin, S. & Nemer, M. 1995. Localization ofthe human B-type natriuretic peptide precursor (NPPB) gene to chromosome lp36. Genomics 26: 385-9.

3. Bettencourt, P., Ferreira, A., Dias, P., Castro, A., Martins, L. & Cerqueira-Gomes, M.2000. Evaluation of brain natriuretic peptide in the diagnosis of heart failure.1. Cardiology 93: 19-25.

4. Brandt, I., Lambeir, A. M., Ketelslegers, J. M., Vanderheyden, M., Scharpe, S. & De

5. Meester, I. 2006. Dipeptidyl-peptidase IV converts intact B-type natriuretic peptide into its des-SerPro form. Clin Chem 52: 82-7.

6. Campbell, D. J., Mitchelhill, К. I., Schlicht, S. M. & Booth, R. J. 2000. Plasma aminoterminal pro-brain natriuretic peptide: a novel approach to the diagnosis of cardiac dysfunction. J Card Fail 6: 130-9.

7. Chan, J. C., Knudson, O., Wu, F., Morser, J., Dole, W. P. & Wu, Q. 2005. Hypertensionin mice lacking the proatrial natriuretic peptide convertase corin. Proc Natl Acad Sci USA 102: 785-90.

8. Cheng, V., Kazanagra, R., Garcia, A., Lenert, L., Krishnaswamy, P., Gardetto, N.,

9. Clopton, P. & Maisel, A. 2001. A rapid bedside test for B-type peptide predicts treatment outcomes in patients admitted for decompensated heart failure: a pilot study. J Am Coll Cardiol 37: 386-91.

10. Chinkers, M. & Garbers, D. L. 1989. The protein kinase domain of the ANP receptor is required for signaling. Science 245: 1392-4.

11. Cortes, R., Rivera, M., Salvador, A., Garcia de Burgos, F., Bertomeu, V., Rosello-Lleti,

12. E., Martinez-Dolz, L., Paya, R., Almenar, L. & Portoles, M. 2007. Urinary B-type natriuretic peptide levels in the diagnosis and prognosis of heart failure. J Card Fail 13: 549-55.

13. Crimmins, D. L. & Kao, J. L. 2008. A glycosylated form of the human cardiac hormonepro B-type natriuretic peptide is an intrinsically unstructured monomeric protein. Arch Biochem Biophys 475: 36-41.

14. Davidson, N. C., Naas, A. A., Hanson, J. K., Kennedy, N. S., Coutie, W. J. & Struthers,

15. A. D. 1996. Comparison of atrial natriuretic peptide B-type natriuretic peptide, and N-terminal proatrial natriuretic peptide as indicators of left ventricular systolic dysfunction. Am J Cardiol 77: 828-31.

16. Del Ry, S., Passino, C., Emdin, M. & Giannessi, D. 2006. C-type natriuretic peptide andheart failure. Pharmacol Res 54: 326-33.

17. Dubois, С. M., Laprise, M. H., Blanchette, F., Gentry, L. E. & Leduc, R. 1995.

18. Processing of transforming growth factor beta 1 precursor by human furin convertase. J Biol Chem 270: 10618-24.

19. Emdin, M., Passino, C., Prontera, C., Fontana, M., Poletti, R., Gabutti, A., Mammini, C.,

20. Giannoni, A., Zyw, L., Zucchelli, G. & Clerico, A. 2007. Comparison of brain natriuretic peptide (BNP) and amino-terminal ProBNP for early diagnosis of heart failure. Clin Chem 53: 1289-97.

21. Fenrick, R., Babinski, K., McNicoll, N., Therrien, M., Drouin, J. & De Lean, A. 1994.

22. Cloning and functional expression of the bovine natriuretic peptide receptor-B (natriuretic factor Rlc subtype. Mol Cell Biochem 137: 173-82.

23. Flynn, T. G., de Bold, M. L. & de Bold, A. J. 1983. The amino acid sequence of an atrialpeptide with potent diuretic and natriuretic properties. Biochem Biophys Res Commun 117: 859-65.

24. Fuat, A., Murphy, J. J., Hungin, A. P., Curry, J., Mehrzad, A. A., Hetherington, A.,

25. Johnston, J. I., Smellie, W. S., Duffy, V. & Cawley, P. 2006. The diagnostic accuracy and utility of a B-type natriuretic peptide test in a community population of patients with suspected heart failure. Br J Gen Pract 56: 327-33.

26. Gerbes, A. L., Dagnino, L., Nguyen, T. & Nemer, M. 1994. Transcription of brainnatriuretic peptide and atrial natriuretic peptide genes in human tissues. J Clin Endocrinol Metab 78:1307-11.

27. Giuliani, I., Rieunier, F., Larue, C., Delagneau, J. F., Granier, С., Pau, В., Ferriere, M.,

28. Saussine, M., Cristol, J. P., Dupuy, A. M., Merigeon, E., Merle, D. & Villard, S. 2006. Assay for measurement of intact B-type natriuretic peptide prohormone in blood. Clin Chem 52: 1054-61.

29. Gladysheva, I. P., Robinson, B. R., Houng, A. K., Kovats, T. & King, S. M. 2008. Corinis co-expressed with pro-ANP and localized on the cardiomyocyte surface in both zymogen and catalytically active forms. JMol Cell Cardiol 44: 131-42.

30. Goetze, J. P., Dahlstrom, U., Rehfeld, J. F. & Alehagen, U. 2008. Impact of Epitope

31. Specificity and Precursor Maturation in Pro-B-Type Natriuretic Peptide Measurement. Clin Chem.

32. Goetze. J. P., Jensen, G., Moller, S., Bendtsen, F., Rehfeld, J. F. & Henriksen, J. H.2006. BNP and N-terminal proBNP are both extracted in the normal kidney. Eur J Clin Invest 36: 8-15.

33. Goodfriend, T. L., Elliott, M. E. & Atlas, S. A. 1984. Actions of synthetic atrialnatriuretic factor on bovine adrenal glomerulosa. Life Sci 35: 1675-82.

34. Gustafsson, F., Steensgaard-Hansen, F., Badskjaer, J., Poulsen. A. H., Corell. P. &

35. Hildebrandt, P. 2005. Diagnostic and prognostic performance of N-terminal ProBNP in primary care patients with suspected heart failure. J Card Fail 11: SI 5-20.

36. Hammerer-Lercher, A., Fersterer, J., Holzmann, S., Bonatti, J., Ruttmann, E., Hoefer, D.,

37. Mair, J. & Puschendorf, B. 2006. Direct comparison of relaxation and cGMP production in human coronary by-pass grafts in response to stimulation with natriuretic peptides and a nitric oxide donor. Clin Sci (bond) 111: 225-31.

38. Hammerer-Lercher, A., Neubauer, E., Muller, S., Pachinger, O., Puschendorf, B. & Mair,

39. J. 2001. Head-to-head comparison of N-terminal pro-brain natriuretic peptide, brain natriuretic peptide and N-terminal pro-atrial natriuretic peptide in diagnosing left ventricular dysfunction. Clin ChimActa 310: 193-7.

40. Hanford, D. S., Thuerauf, D. J., Murray, S. F. & Glembotski, С. C. 1994. Brainnatriuretic peptide is induced by alpha 1-adrenergic agonists as a primary response gene in cultured rat cardiac myocytes. J Biol Chem 269: 26227-33.

41. Harris, P. J., Thomas, D. & Morgan, Т. O. 1987. Atrial natriuretic peptide inhibits angiotensin-stimulated proximal tubular sodium and water reabsorption. Nature 326: 697-8.

42. Hashiguchi, Т., Higuchi, K., Ohashi, M., Minamino, N., Kangawa, K., Matsuo, H. &

43. Nawata, H. 1988. Porcine brain natriuretic peptide, another modulator of bovine adrenocortical steroidogenesis. FEBSLett 236: 455-61.

44. He, X. 1., Chow, D. c., Martick, M. M. & Garcia, К. C. 2001. Allosteric activation of aspring-loaded natriuretic peptide receptor dimer by hormone. Science 293: 165762.

45. Hermanson, G. 1996. Bioconjugate techniques. Academic press Inc.

46. Heublein, D. M., Huntley, В. K., Boerrigter, G„ Cataliotti, A., Sandberg, S. M., Redfield,

47. M. M. & Burnett, J. C. Jr 2007. Immunoreactivity and guanosine 3',5'-cyclic monophosphate activating actions of various molecular forms of human B-type natriuretic peptide. Hypertension 49: 1114-9.

48. Hino, J., Tateyama, H., Minamino, N., Kangawa, K. & Matsuo, H. 1990. Isolation andidentification of human brain natriuretic peptides in cardiac atrium. Biochem Biophys Res Commun 167: 693-700.

49. Hirata, Y., Shichiri, M., Emori, Т., Marumo, F., Kangawa, K. & Matsuo, H. 1988. Brainnatriuretic peptide interacts with atrial natriuretic peptide receptor in cultured rat vascular smooth muscle cells. FEBS Lett 238: 415-8.

50. Hughes, D., Talwar, S., Squire, I. В., Davies, J. E. & Ng, L. L. 1999. Animmunoluminometric assay for N-terminal pro-brain natriuretic peptide: development of a test for left ventricular dysfunction. Clin Sci (Lond) 96: 373-80.

51. Hunt, P. J., Espiner, E. A., Nicholls, M. G., Richards, A. M. & Yandle, T. G. 1996.

52. Differing biological effects of equimolar atrial and brain natriuretic peptide infusions in normal man. J Clin Endocrinol Me tab 81: 3871-6.

53. Hunt, P. J., Espiner, E. A., Nicholls, M. G., Richards, A. M. & Yandle, T. G. 1997a. Therole of the circulation in processing pro-brain natriuretic peptide (proBNP) to amino-terminal BNP and BNP-32. Peptides 18: 1475-81.

54. Hunt, P. J., Richards, A. M., Nicholls, M. G., Yandle, T. G., Doughty, R. N. & Espiner,

55. E. A. 1997b. Immunoreactive amino-terminal pro-brain natriuretic peptide (NT-PROBNP): a new marker of cardiac impairment. Clin Endocrinol (Oxf) 47: 28796.

56. Hunt, P. J. Yandle, T. G., Nicholls, M. G., Richards, A. M. & Espiner, E. A. 1995. Theamino-terminal portion of pro-brain natriuretic peptide (Pro-BNP) circulates in human plasma. Biochem Biophys Res Commun 214: 1175-83.

57. Itoh, H., Nakao, K., Mukoyama, M., Saito, Y., Yamada, Т., Shirakami, G., Arai, H.,

58. Hosoda, K., Suga, S., Yoshida, I. & et, a. 1. 1990. Preparation of monoclonal antibodies against brain natriuretic peptide and their application to radioimmunoassay and passive immunization. Endocrinology 127: 1292-300.

59. Januzzi, J. L., van Kimmenade, R., Lainchbury, J., Bayes-Genis, A., Ordonez-Llanos, J.,

60. Januzzi, J. L. Jr, Camargo, C. A., Anwaruddin, S., Baggish, A. L., Chen, A. A., Krauser,

61. Jensen, К. Т., Carstens, J. & Pedersen, E. B. 1998. Effect of BNP on renalhemodynamics, tubular function and vasoactive hormones in humans. Am J Physiol 21 A: F63-72.

62. Jewett, J. R., Koller, K. J., Goeddel, D. V. & Lowe, D. G. 1993. Hormonal induction oflow affinity receptor guanylyl cyclase. EMBOJX 2: 769-77.

63. Jourdain, P., Jondeau, G., Funck, F., Gueffet, P., Le Helloco, A., Donal, E., Aupetit, J. F.,

64. Aumont, M. C., Galinier, M., Eicher, J. C., Cohen-Solal, A. & Juilliere, Y. 2007. Plasma brain natriuretic peptide-guided therapy to improve outcome in heart failure: the STARS-BNP Multicenter Study. J Am Coll Cardiol 49: 1733-9.

65. Julenius, К., Molgaard, A., Gupta, R. & Brunak, S. 2005. Prediction, conservationanalysis, and structural characterization of mammalian mucin-type O-glycosylation sites. Glycobiology 15: 153-64.

66. Karl, J., Borgya, A., Gallusser, A., Huber, E., Krueger, K., Rollinger, W. & Schenk, J.1999. Development of a novel, N-terminal-proBNP (NT-proBNP) assay with a low detection limit. Scand J Clin Lab Invest Suppl 230: 177-81.

67. Kearney, M. T. & Marber, M. 2004. Trends in incidence and prognosis of heart failure;

68. You always pass failure on the way to success. Eur Heart J25: 283-4.

69. Kilic, A., Bubikat, A., Gassner, В., Baba, H. A. & Kuhn, M. 2007. Local actions of atrialnatriuretic peptide counteract angiotensin II stimulated cardiac remodeling. Endocrinology 148: 4162-9.

70. Kimura, K., Yamaguchi, Y., Horii, M., Kawata, H., Yamamoto, H„ Uemura, S. & Saito,

71. Y. 2007. ANP is cleared much faster than BNP in patients with congestive heart failure. Eur J Clin Pharmacol 63: 699-702.

72. Kishimoto, I., Dubois, S. K. & Garbers, D. L. 1996. The heart communicates with thekidney exclusively through the guanylyl cyclase-A receptor: acute handling of sodium and water in response to volume expansion. Proc Natl Acad Sci US A 93: 6215-9.

73. Knappe, S. Wu, F., Masikat, M. R., Morser, J. & Wu, Q. 2003. Functional analysis ofthe transmembrane domain and activation cleavage of human corin: design and characterization of a soluble corin. J Biol Chem 278: 52363-70.

74. Kohler, G. & Milstein, C. 1975. Continuous cultures of fused cells secreting antibody ofpredefined specificity. Nature 256: 495-7.

75. Kudo, T. & Baird, A. 1984-1985. Inhibition of aldosterone production in the adrenalglomerulosa by atrial natriuretic factor. Nature 312: 756-7.

76. Kuhn, M. 2003. Structure, regulation, and function of mammalian membrane guanylylcyclase receptors, with a focus on guanylyl cyclase-A. Circ Res 93: 700-9.

77. Laemmli, U. K. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head ofbacteriophage T4. Nature 227: 680-5.

78. Lam, С. S., Burnett, J. C. Jr, Costello-Boerrigter, L., Rodeheffer, R. J. & Redfield, M. M.2007. Alternate circulating pro-B-type natriuretic peptide and B-type natriuretic peptide forms in the general population. J Am Coll Cardiol 49: 1193-202.

79. Lang, С. C., Prasad, N., McAlpine, H. M., Macleod, C., Lipworth, B. J., MacDonald, T.

80. M. & Struthers, A. D. 1994. Increased plasma levels of brain natriuretic peptide in patients with isolated diastolic dysfunction. Am HeartJXTJ: 1635-6.

81. LaPointe, M. C. 2005. Molecular regulation of the brain natriuretic peptide gene.1. Peptides 26: 944-56.

82. Latini, R., Masson, S., Anand, I., Salio, M., Hester, A., Judd, D., Barlera, S., Maggioni,

83. A. P., Tognoni, G. & Cohn, J. N. 2004. The comparative prognostic value of plasma neurohormones at baseline in patients with heart failure enrolled in Val-HeFT. Eur Heart J 25: 292-9.

84. Light, D. В., Corbin, J. D. & Stanton, B. A. 1990. Dual ion-channel regulation by cyclic

85. GMP and cyclic GMP-dependent protein kinase. Nature 344: 336-9.

86. Lopez, M. J., Garbers, D. L. & Kuhn, M. 1997. The guanylyl cyclase-deficient mousedefines differential pathways of natriuretic peptide signaling. J Biol Chem 272: 23064-8.

87. Lowe, D. G. 1992. Human natriuretic peptide receptor-A guanylyl cyclase is selfassociated prior to hormone binding. Biochemistry 31: 10421-5.

88. Lowe, D. G., Camerato, T. R. & Goeddel, D. V. 1990. cDNA sequence of the humanatrial natriuretic peptide clearance receptor. Nucleic Acids Res 18: 3412.

89. Lowe, D. G., Chang, M. S., Hellmiss, R., Chen, E., Singh, S., Garbers, D. L. & Goeddel,

90. D. V. 1989. Human atrial natriuretic peptide receptor defines a new paradigm for second messenger signal transduction. EMBOJ 8: 1377-84.

91. Maack, Т., Marion, D. N., Camargo, M. J., Kleinert, H. D., Laragh, J. H., Vaughan, E. D.

92. Jr & Atlas, S. A. 1984. Effects of auriculin (atrial natriuretic factor) on blood pressure, renal function, and the renin-aldosterone system in dogs. Am J Med 77: 1069-75.

93. Maisel, A. S., Krishnaswamy, P., Nowak, R. M., McCord, J., Hollander, J. E., Due, P.,

94. Marin-Grez, M., Fleming, J. T. & Steinhausen, M. 1986. Atrial natriuretic peptide causespre-glomerular vasodilatation and post-glomerular vasoconstriction in rat kidney. Nature 324: 473-6.

95. Marttila, M., Hautala, N., Paradis, P., Toth, M., Vuolteenaho, O., Nemer, M. &

96. Ruskoaho, H. 2001. GATA4 mediates activation of the B-type natriuretic peptide gene expression in response to hemodynamic stress. Endocrinology 142: 4693700.

97. Masson, S., Latini, R„ Anand, I. S., Vago, Т., Angelici, L., Barlera, S., Missov, E. D.,

98. Michielsen, E. C., Bakker, J. A., Kimmenade, R. R., Pinto, Y. M. & Dieijen-Visser, M. P.2008. The diagnostic value of serum and urinary NT-proBNP for heart failure. Ann Clin Biochem 45: 389-94.

99. Minamino, N., Aburaya, M., Ueda, S., Kangawa, K. & Matsuo, H. 1988. The presenceof brain natriuretic peptide of 12,000 daltons in porcine heart. Biochem Biophys Res Commun 155: 740-6.

100. Miyagi, M. & Misono, K. S. 2000. Disulfide bond structure of the atrial natriureticpeptide receptor extracellular domain: conserved disulfide bonds among guanylate cyclase-coupled receptors. Biochim Biophys Acta 1478: 30-8.

101. Miyagi, M., Zhang, X. & Misono, К. S. 2000. Glycosylation sites in the atrial natriuretic peptide receptor: oligosaccharide structures are not required for hormone binding. Eur JBiochem 267: 5758-68.

102. Molloy, S. S., Bresnahan, P. A., Leppla, S. H., Klimpel, K. R. & Thomas, G. 1992.

103. Human furin is a calcium-dependent serine endoprotease that recognizes the sequence Arg-X-X-Arg and efficiently cleaves anthrax toxin protective antigen. J Biol Chem 267: 16396-402.

104. Mosterd, A. & Hoes, A. W. 2007. Clinical epidemiology of heart failure. Heart 93:1137-46.

105. Mueller, Т., Gegenhuber, A., Poelz, W. & Haltmayer, M. 2003. Comparison of the

106. Biomedica NT-proBNP enzyme immunoassay and the Roche NT-proBNP chemiluminescence immunoassay: implications for the prediction of symptomatic and asymptomatic structural heart disease. Clin Chem 49: 976-9.

107. Mueller, Т., Gegenhuber, A., Poelz, W. & Haltmayer, M. 2005. Diagnostic accuracy of

108. В type natriuretic peptide and amino terminal proBNP in the emergency diagnosis of heart failure. Heart 91: 606-12.

109. Mukoyama, M., Nakao, K., Hosoda, K., Suga, S., Saito, Y., Ogawa, Y., Shirakami, G.,

110. Nakagawa, O., Ogawa, Y., Itoh, H., Suga, S., Komatsu, Y., Kishimoto, I., Nishino, K.,

111. Nussenzveig, D. R., Lewicki, J. A. & Maack, T. 1990. Cellular mechanisms of theclearance function of type С receptors of atrial natriuretic factor. J Biol Chem 265: 20952-8.

112. Ogawa, Y., Itoh, H., Tamura, N., Suga, S., Yoshimasa, Т., Uehira, M., Matsuda, S.,

113. Shiono, S., Nishimoto, H. & Nakao, K. 1994. Molecular cloning of the complementary DNA and gene that encode mouse brain natriuretic peptide and generation of transgenic mice that overexpress the brain natriuretic peptide gene. J Clin Invest 93: 1911-21.

114. Ogawa, Y., Nakao, K., Mukoyama, M., Hosoda, K., Shirakami, G., Arai, H., Saito, Y.,

115. Suga, S., Jougasaki, M. & Imura, H. 1991. Natriuretic peptides as cardiac hormones in normotensive and spontaneously hypertensive rats. The ventricle is a major site of synthesis and secretion of brain natriuretic peptide. С ire Res 69: 491-500.

116. Ogawa, Y., Tamura, N.; Chusho, H. & Nakao, K. 2001. Brain natriuretic peptide appearsto act locally as an antifibrotic factor in the heart. Con J Physiol Pharmacol 79: 723-9.

117. Okumura, K. Yasue, H., Fujii, H., Kugiyama, K., Matsuyama, K., Yoshimura, M.,

118. Oliver, P. M., Fox, J. E., Kim, R., Rockman, H. А., Клт, H. S., Reddick, R. L., Pandey,

119. K. N., Milgram, S. L., Smithies, O. & Maeda, N. 1997. Hypertension, cardiac hypertrophy, and sudden death in mice lacking natriuretic peptide receptor A. Proc Natl Acad Sci USA 94: 14730-5.

120. Omland, Т., Persson, A., Ng, L., O'Brien, R., Karlsson, Т., Herlitz, J., Hartford, M. &

121. Caidahl, K. 2002. N-terminal pro-B-type natriuretic peptide and long-term mortality in acute coronary syndromes. Circulation 106: 2913-8.

122. Ozaki, J., Shimizu, H., Hashimoto, Y., Itoh, H., Nakao, K. & Inui, K. 1999. Enzymaticinactivation of major circulating forms of atrial and brain natriuretic peptides. Eur J Pharmacol 370: 307-12.

123. Pankow, K., Wang, Y., Gembardt, F., Krause, E., Sun, X., Krause, G., Schultheiss, H. P.,

124. Siems, W. E. & Walther, T. 2007. Successive action of meprin A and neprilysin catabolizes B-type natriuretic peptide. Circ Res 101: 875-82.

125. Pemberton, С. J., Johnson, M. L., Yandle, T. G. & Espiner, E. A. 2000. Deconvolution analysis of cardiac natriuretic peptides during acute volume overload. Hypertension 36: 355-9.

126. Pemberton, C. J., Yandle, T. G., Charles, C. J., Rademaker, M. Т., Aitken, G. D. &

127. Espiner, E. A. 1997. Ovine brain natriuretic peptide in cardiac tissues and plasma: effects of cardiac hypertrophy and heart failure on tissue concentration and molecular forms. J Endocrinol 155: 541-50.

128. Pidgeon, G. В., Richards, A. M., Nicholls, M. G., Espiner, E. A., Yandle, T. G. &

129. Frampton, C. 1996. Differing metabolism and bioactivity of atrial and brain natriuretic peptides in essential hypertension. Hypertension 27: 906-13.

130. Pikkarainen, S., Tokola, H., Majalahti-Palviainen, Т., Kerkela, R., Hautala, N. Bhalla, S.

131. S., Charron, F., Nemer, M., Vuolteenaho, O. & Ruskoaho, H. 2003. GATA-4 is a nuclear mediator of mechanical stretch-activated hypertrophic program. J Biol Chem 278: 23807-16.

132. Porter, J. G., Arfsten, A., Palisi, Т., Scarborough, R. M., Lewicki, J. A. & Seilhamer, J. J.1989. Cloning of a cDNA encoding porcine brain natriuretic peptide. J Biol Chem 264: 6689-92.

133. Potter, L. R., Abbey-Hosch, S. & Dickey, D. M. 2006. Natriuretic peptides, theirreceptors, and cyclic guanosine monophosphate-dependent signaling functions. EndocrRev 27: 47-72.

134. Potter, L. R. & Hunter, T. 2001. Guanylyl cyclase-linked natriuretic peptide receptors:structure and regulation. J Biol Chem 276: 6057-60.

135. Rademaker, G. J. Pergantis, S. A., Blok-Tip, L. Langridge, J. I., Kleen, A. & Thomas

136. Oates, J. E. 1998. Mass spectrometric determination of the sites of O-glycan attachment with low picomolar sensitivity. Anal Biochem 257: 149-60.

137. Rademaker, M. Т., Charles, C. J., Kosoglou, Т., Protter, A. A., Espiner, E. A., Nicholls,

138. M. G. & Richards, A. M. 1997. Clearance receptors and endopeptidase: equal role in natriuretic peptide metabolism in heart failure. Am J Physiol 273: H2372-9.

139. Rosenkranz, A. C., Woods, R. L., Dusting, G. J. & Ritchie, R. H. 2003. Antihypertrophicactions of the natriuretic peptides in adult rat cardiomyocytes: importance of cyclic GMP. Cardiovasc Res 57: 515-22.

140. Rutten, J. H., Boomsma, F. & van den Meiracker, A. H. 2006. Higher renal extraction of

141. ANP compared with NT-proANP, BNP and NT-proBNP. Eur J Clin Invest 36: 514-5.

142. Sawada, Y., Inoue, M., Kanda, Т., Sakamaki, Т., Tanaka, S., Minamino, N., Nagai, R. &

143. Takeuchi, T. 1997. Co-elevation of brain natriuretic peptide and proprotein-processing endoprotease furin after myocardial infarction in rats. FEBS Lett 400: 177-82.

144. Scarborough, R. M., Schenk, D. В., McEnroe, G. A., Arfsten, A. Kang, L. L., Schwartz,

145. K. & Lewicki, J. A. 1986. Truncated atrial natriuretic peptide analogs. Comparison between receptor binding and stimulation of cyclic GMP accumulation in cultured vascular smooth muscle cells. J Biol Chem 261: 129604.

146. Schagger, H. & von Jagow, G. 1987. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal BiochetJ2 166: 368-79.

147. Schellenberger, U., O'Rear, J., Guzzetta, A., Jue, R. A., Protter, A. A. & Pollitt, N. S.2006. The precursor to B-type natriuretic peptide is an O-linked glycoprotein. Arch Biochem Biophys 451: 160-6.

148. Schiller, P. W., Maziak, L., Nguyen, Т. M., Godin, J., Garcia, R., De Lean, A. & Cantin,

149. M. 1985. Synthesis and biological activity of a linear fragment of the atrial natriuretic factor (ANF). Biochem Biophys Res Commiin 131: 1056-62.

150. Schirger, J. A., Heublein, D. M., Chen, H. H., Lisy, O., Jougasaki, M., Wennberg, P. W.

151. Burnett, J. C. Jr 1999. Presence of Dendroaspis natriuretic peptide-like immunoreactivity in human plasma and its increase during human heart failure. Mayo Clin Proc 74: 126-30.

152. Schoenfeld, J. R., Sehl, P., Quan, C., Burnier, J. P. & Lowe, D. G. 1995. Agonistselectivity for three species of natriuretic peptide receptor-A. Mol Pharmacol 47: 172-80.

153. Schoenfeld, J. R., Tom, J. Y. & Lowe, D. G. 1997. Mutations in B-type natriuretic peptide mediating receptor-A selectivity. FEBS Lett 414: 263-7.

154. Seferian, K. R., Tamm, N. N., Semenov, A. G., Mukharyamova, K. S., Tolstaya, A. A.,

155. Seidler, Т., Pemberton, C., Yandle, Т., Espiner, E., Nicholls, G. & Richards, M. 1999.

156. The amino terminal regions of proBNP and proANP oligomerise through leucine zipper-like coiled-coil motifs. Biochem Biophys Res Commun 255: 495-501.

157. Seilhamer, J. J., Arfsten, A., Miller, J. A., Lundquist, P., Scarborough, R. M., Lewicki, J.

158. A. & Porter, J. G. 1989. Human and canine gene homologs of porcine brain natriuretic peptide. Biochem Biophys Res Commun 165: 650-8.

159. Semenov, A. G., Postnikov, А. В., Tamm, N. N., Seferian, K. R., Karpova, N. S.,

160. Bloshchitsyna, M. N., Koshkina, E. V., Krasnoselsky, M. I., Serebryanaya, D. V. & Katrukha, A. G. 2009. Processing of pro-brain natriuretic peptide is suppressed by O-glycosylation in the region close to the cleavage site. Clin Chem 55: 489-98.

161. Shimekake, Y., Kawabata, Т., Nakamura, M. & Nagata, K. 1992. The role of the Cterminal region of rat brain natriuretic peptide in receptor selectivity. FEBS Lett 309: 185-9.

162. Shimizu, H., Masuta, К., Aono, K., Asada, H., Sasakura, K., Tamaki, M., Sugita, K. &

163. Yamada, K. 2002. Molecular forms of human brain natriuretic peptide in plasma. Clin Chim Acta 316: 129-35.

164. Shimizu, H., Masuta, K., Asada, H., Sugita, K. & Sairenji, T. 2003. Characterization ofmolecular forms of probrain natriuretic peptide in human plasma. Clin Chim Acta 334:233-9.

165. Song, D. L., Kohse, K. P. & Murad, F. 1988. Brain natriuretic factor. Augmentation ofcellular cyclic GMP, activation of particulate guanylate cyclase and receptor binding. FEBS Lett 232: 125-9.

166. Steg, P. G., Joubin, L., McCord, J;, Abraham, W. Т., Hollander, J. E., Omland, Т.,

167. Mentre, F., McCullough, P. A. & Maisel, A. S. 2005. B-type natriuretic peptide and echocardiography determination of ejection fraction in the diagnosis of congestive heart failure in patients with acute dyspnea. Chest 128: 21-9.

168. Stingo, A. J., Clavell, A. L., Heublein, D. M., Wei, С. M., Pittelkow, M. R. & Burnett, J.

169. C. Jr 1992. Presence of C-type natriuretic peptide in cultured human endothelial cells and plasma. Am J Physiol 263: H1318-21.

170. Sudoh, Т., Kangawa, K., Minamino, N. & Matsuo, H. 1988. A new natriuretic peptide inporcine brain. Nature 332: 78-81.

171. Sudoh, Т., Maekawa, K., Kojima, M., Minamino, N., Kangawa, K. & Matsuo, H. 1989.

172. Cloning and sequence analysis of cDNA encoding a precursor for human brain natriuretic peptide. Biochem Biophys Res Commun 159: 1427-34.

173. Sudoh, Т., Minamino, N., Kangawa, K. & Matsuo, H. 1990. C-type natriuretic peptide

174. CNP): a new member of natriuretic peptide family identified in porcine brain. Biochem Biophys Res Commun 168: 863-70.

175. Suga, S., Nakao, K., Hosoda, K., Mukoyama, M., Ogawa, Y., Shirakami, G., Arai, H.,

176. Saito, Y., Kambayashi, Y., Inouye, K. & et, a. 1. 1992. Receptor selectivity of natriuretic peptide family, atrial natriuretic peptide, brain natriuretic peptide, and C-type natriuretic peptide. Endocrinology 130: 229-39.

177. Takahashi, N., Saito, Y., Kuwahara, K., Harada, M., Kishimoto, I., Ogawa, Y.,

178. Talwar, S., Squire, I. В., Davies, J. E., Barnett, D. B. & Ng, L. L. 1999. Plasma Nterminal pro-brain natriuretic peptide and the ECG in the assessment of left-ventricular systolic dysfunction in a high risk population. Eur Heart J 20: 173644.

179. Tamura, N., Ogawa, Y., Chusho, H., Nakamura, K., Nakao, K., Suda, M., Kasahara, M.,

180. Hashimoto, R., Katsuura, G., Mukoyama, M., Itoh, H., Saito, Y., Tanaka, I., Otani, H. & Katsuki, M. 2000. Cardiac fibrosis in mice lacking brain natriureticpeptide. Proc Natl Acad Sci USA 97: 4239-44.

181. Tateyama, H., Hino, J., Minamino, N., Kangawa, K., Minamino, Т., Sakai, K., Ogihara,

182. T. & Matsuo, H. 1992. Concentrations and molecular forms of human brain natriuretic peptide in plasma. Biochem Biophys Res Commun 185: 760-7.

183. Thuerauf, D. J. & Glembotski, С. C. 1997. Differential effects of protein kinase C, Ras,and Raf-1 kinase on the induction of the cardiac B-type natriuretic peptide gene through a critical promoter-proximal M-CAT element. J Biol Chem 272: 7464-72.

184. Thuerauf, D. J., Hanford, D. S. & Glembotski, С. C. 1994. Regulation of rat brainnatriuretic peptide transcription. A potential role for GATA-related transcription factors in myocardial cell gene expression. J Biol Chem 269: 17772-5.

185. Togashi, K., Fujita, S. & Kawakami, M. 1992. Presence of brain natriuretic peptide inurine. Clin Chem 38: 322-3.

186. Togashi, K., Hirata, Y., Ando, K., Takei, Y., Kawakami, M. & Marumo, F. 1989. Brainnatriuretic peptide-like immunoreactivity is present in human plasma. FEBS Lett 250: 235-7.

187. Troughton, R. W., Frampton, С. M., Yandle, T. G., Espiner, E. A., Nicholls, M. G. &

188. Richards, A. M. 2000. Treatment of heart failure guided by plasma aminoterminal brain natriuretic peptide (N-BNP) concentrations. Lancet 355: 1126-30.

189. Structure of the dimerized hormone-binding domain of a guanylyl-cyclase-coupled receptor. Nature 406: 101-4.

190. Vanneste, Y., Pauwels, S., Lambotte, L. & Deschodt-Lanckman, M. 1990. In vivometabolism of brain natriuretic peptide in the rat involves endopeptidase 24.11 and angiotensin converting enzyme. Biochem Biophys Res Соттип \1Ъ: 265-71.

191. Varki, A., Cummings, RD., Esko, JD., Freez, HH., Hart, GW. & Etzler, ME. 2008.

192. Essentials of glycobiology. NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press.

193. Vogt-Schaden, M., Gagelmann, M., Hock, D., Herbst, F. & Forssmann, W. G. 1989.

194. Degradation of porcine brain natriuretic peptide (pBNP-26) by endoprotease-24.11 from kidney cortical membranes. Biochem Biophys Res Commun 161: 1177-83.

195. Watanabe, Т. X., Noda, Y., Chino, N., Nishiuchi, Y., Kimura, Т., Sakakibara, S. & Imai,

196. M. 1988. Structure-activity relationships of alpha-human atrial natriuretic peptide. Eur J Pharmacol 147: 49-57.

197. Watanabe, Y., Nakajima, K., Shimamori, Y. & Fujimoto, Y. 1997. Comparison of thehydrolysis of the three types of natriuretic peptides by human kidney neutral endopeptidase 24.11. Biochem Mol Med 61: 47-51.

198. Wilson, E. M. & Сhinkers, M. 1995. Identification of sequences mediating guanylylcyclase dimerization. Biochemistry 34: 4696-701.

199. Wright, S. P., Doughty, R. N., Pearl, A., Gamble, G. D., Whalley, G. A., Walsh, H. J.,

200. Gordon, G., Bagg, W., Oxenham, H., Yandle, Т., Richards, M. & Sharpe, N. 2003. Plasma amino-terminal pro-brain natriuretic peptide and accuracy of heart-failure diagnosis in primary care: a randomized, controlled trial. J Am Coll Cardiol 42: 1793-800.

201. Wu, C., Wu, F., Pan, J., Morser, J. & Wu, Q. 2003. Furin-mediated processing of Pro-Ctype natriuretic peptide. J Biol Chem 278:25847-52.

202. Yamamoto, K., Burnett, J. C. Jr, Jougasaki, M., Nishimura, R. A., Bailey, K. R., Saito,

203. Y., Nakao, K. & Redfield, M. M. 1996. Superiority of brain natriuretic peptide as a hormonal marker of ventricular systolic and diastolic dysfunction and ventricular hypertrophy. Hypertension 28: 988-94.

204. Yan, W., Sheng, N., Seto, M., Morser, J. & Wu, Q. 1999. Corin, a mosaic transmembrane serine protease encoded by a novel cDNA from human heart. J1. Biol Chem 274: 14926-35.

205. Yan, W., Wu, F., Morser, J. & Wu, Q. 2000. Corin, a transmembrane cardiac serineprotease, acts as a pro-atrial natriuretic peptide-converting enzyme. Proc Natl AcadSci USA 97: 8525-9.

206. Yandle, Т., Fisher, S., Espiner, E., Richards, M. & Nicholls, G. 1999. Validatingaminoterminal BNP assays: a word of caution. Lancet 353: 1068-9.

207. Yasue. H., Yoshimura, M., Sumida, H., Kikuta, K., Kugiyama, K., Jougasaki, M.,

208. Виноградов, А.А. и Ямсков, ИА. 1998. Дегликозилирование гликопротеинов.

209. Биоорганическая химия. 24: 803-815.

210. Остерман JI.A. 1985. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. Москва: Наука.