Электрохимический анализ кардиомаркеров в плазме крови тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Шумков, Андрей Алексеевич

• Шумков, Андрей Алексеевич
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Шумков, Андрей Алексеевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ:

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ТЕСТ СИСТЕМЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОХИМИЧЕСКИХ БЕЛКОВ-МАРКЁРОВ ИНФАРКТА МИОКАРДА

1.1. Белки - маркёры инфаркта миокарда

1.1.1. Тропонины

1.1.2. Креатинкиназа - MB

1.1.3. Кардиомиоглобин

1.1.4. сБСЖК

1.1.5. Цитохром с

1.1.6. Перспективные белки-маркёры в диагностике инфаркта миокарда

1.2. Клинические методы анализа белков-маркёров инфаркта миокарда

1.2.1. Лабораторные тесты, использующиеся в клиниках

1.2.2. Тест системы, использующиеся в клинической практике, и как самоконтроль для определения острого инфаркта миокарда

1.3. Роль нанотехнологий в биомедицинских исследованиях

1.4. Новые подходы к созданию тест-систем для анализа белков-маркёров инфаркта миокарда

1.4.1. Оптические биосенсоры

1.4.2. Акустические биосенсоры

1.4.3. Биосенсоры на основе магнитных наночастич

1.4.4. Пьезокварцевые иммуносенсоры

1.4.5. Электрохимические биосенсоры

1.4.6. Альтернативные подходы к определению белков маркёров инфаркта

миокарда

2

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.2. Оборудование

2.3. Методики приготовления растворов

2.4. Методы

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Модификация электродов наночастиц золота

3.2. Модификация электродов наночастицами серебра

3.3. Модификация электрода магнитными наночастицами на основе оксидов железа

3.4. Изучение структуры модифицированных электродов

3.5. Разработка электрохимических иммуносенсоров на белки-маркёры инфаркта миокарда

3.6. Анализа тропонина I и Т с помощью разработанных электрохимических иммуносенсоров на основе AgH4 и АиНЧ

3.7. Определение сердечного белка, связывающего жирные кислоты, и кардиомиоглобина

3.8. Определение цитохрома с в плазме крови

3.9. Определение тропонина I по электрохимическому сигналу железа в составе магнитных наночастиц

3.10. Потенциометрический метод определения тропонина I

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ:

СН - сердечная недостаточность;

ИМ - инфаркт миокарда;

ОИМ - острый инфаркт миокарда;

ССЗ - сердечно-сосудистые заболевания;

НЧ - наночастицы;

Ат - антитела;

Ат1 - моноклональные антитела к тропонину I; Атт - моноклональные антитела к тропонину Т;

АтсБСЖК - моноклональные антитела к сердечному белку, связывающему жирные кислоты;

АткМб - моноклональные антитела к кардиомиоглобину;

КК - креатинкиназа;

КК-МВ - креатинкиназа МВ;

ИЛ - интерлейкин;

ФНОа - фактор некроза опухоли а;

ИФА - иммуноферментный метод анализа;

ЭРЯ - поверхностный плазмонный резонанс;

АиНЧ - наночастицы золота;

А§НЧ - наночастицы серебра;

мНЧ - магнитные наночастицы;

ДДАБ - диметилдидодециламмония бромид; ПГЭ - печатный графитовый электрод;

ПГЭ/Аиэ/ДДАБ/Ат/ - печатный графитовый электрод, модифицированный наночастицами золота (электросинтез), ДДАБ и антителами к соответствующему белку маркёру инфаркта миокарда;

ПГЭ/Аих/ДДАБ/Ат/ - печатный графитовый электрод, модифицированный наночастицами золота, стабилизированными ДДАБ в хлороформе (химический синтез) и антителами к соответствующему белку маркёру инфаркта миокарда;

ПГЭМ£э/ДДАБ/Ат/ - печатный графитовый электрод, модифицированный наночастицами серебра (электросинтез), ДДАБ и антителами к соответствующему белку маркёру инфаркта миокарда;

ПГЭ/Agx/ДДAБ/Aт/ - печатный графитовый электрод, модифицированный наночастицами серебра, стабилизированными ДДАБ в хлороформе (химический синтез) и антителами к соответствующему белку маркёру инфаркта миокарда;

ФБ - фосфатный буфер (рН 7,4);

ЦБ - цитратный буфер (рН 6,0);

Е - потенциал относительно А§М£С1, В;

V - скорость развертки потенциалов, В/с;

ИВА - инверсионная вольтамперометрия;

ДИВА - дифференциально-импульсная вольтамперометрия;

КВВА - квадратно-волновая вольтамперометрия;

I - время, с;

1:ох - время окисления, с; Еох - потенциал окисления, В;

время инкубации, мин; ^тм- время отмывки, мин; 1ЭЛ- время электросинтеза, с; СЭМ - сканирующая электронная микроскопия;

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Электрохимический анализ кардиомаркеров в плазме крови»

ВВЕДЕНИЕ

Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) являются одной из основных проблем Российского здравоохранения. Подход к персональной оценке рисков и правильному диагнозу должен включать в себя следующие критерии: профиль лабораторных данных, клинические и визуальные данные пациентов [1].

В настоящее время в клинико-диагностических лабораториях для определения сердечных белков-маркёров основным методом остаётся иммуноферментный анализ (ИФА), с нижним диапазоном определяемой концентрации белка 10 пг/мл. Несмотря на высокую чувствительность, данный метод требует большой объём исследуемого образца (от 100 мкл), использует дополнительные расходные материалы, а сама процедура анализа занимает два часа. Кроме того, иммуноферментный анализ проводится в лабораториях стационаров, больниц и диагностических центрах, таким образом, время постановки диагноза составляет в среднем 6 часов [2]. Необходимость диагностики инфаркта миокарда (ИМ) в ранние сроки продиктована тем, что тромболитическая терапия в первые 2-6 часов снижает смертность в среднем на 30%, а терапия, начатая через 7-12 часов - лишь на 13% [3]. Тест-системы, которые разработаны на данный момент, и могли бы быть использованы в качестве профилактических тест-систем («ронй-о^саге») и на скорой помощи, не нашли широкого применения, так как являются полуколичественными и имеют высокий порог чувствительности, что может приводить к появлению большого количества ложноотрицательных результатов. Следовательно, необходимы новые диагностические подходы к определению белков-маркёров ИМ, которые бы отвечали требованиям, предъявляемым к профилактическим тест системам: портативность, минимальное время анализа, низкая стоимость, сменный тип сенсорного элемента, чувствительность и селективность к определению белков-маркёров [4, 5]. Создание диагностических систем нового поколения, отвечающих

требованиям, предъявляемым к профилактическим тест-системам, а так же выявление новых белков-маркёров инфаркта миокарда, является одним из приоритетных направлений в современных биомедицинских исследованиях.

В лаборатории биоэлектрохимии ФГБУ «ИБМХ» РАМН с 2008 года ведутся научные разработки новых подходов к определению белков-маркёров острого инфаркта миокарда (ОИМ) в плазме крови. Были получены патенты по прямому электрохимическому методу определения кардиомиоглобина на поверхности печатного графитового электрода. Определение кардиомиоглобина в плазме крови основано на прямом переносе электронов между гемовой группой кардиомиоглобина и поверхностью электрода [6, 7]. В то же время, большинство белков-маркёров ОИМ не содержат гемовой группы и находятся в достаточно низком диапазоне концентраций, например как тропонин I (20,4 пг/мл (0,9 пМ)) [8]. Определить такие белки на немодифициронной поверхности электрода, без дополнительного усиления сигнала не представляется возможным. В связи с этим необходимо разработать новый электрохимический подход к селективному определению кардиомаркеров острого инфаркта миокарда.

Цель исследования: разработка принципов электрохимического анализа биохимических маркёров острого инфаркта миокарда.

В соответствии с поставленной целью в диссертационной работе были сформулированы следующие задачи:

1. Разработать метод определения белков-маркёров инфаркта миокарда в плазме крови здоровых доноров и больных острым инфарктом миокарда по сигналу наночастиц металлов методами инверсионной, квадратно-волновой вольтамперометрии и с помощью потенциометрического анализа.

2. Отработать условия модификации печатных графитовых электродов:

а) наночастицами золота, полученными химическим синтезом и электросинтезом,

б) наночастицами серебра, полученными химическим синтезом и электросинтезом,

в) магнитными наночастицами на основе оксидов железа.

3. Найти оптимальные параметры электрохимической регистрации наночастиц металлов на поверхности электрода с помощью инверсионной и квадратно-волновой вольтамперометрии.

4. Разработать условия связывания антител с соответствующими белками-маркёрами инфаркта миокарда плазмы крови (кардиомиоглобин, тропонин I, тропонин Т, сердечный белок, связывающий жирные кислоты) на модифицированных электродах.

5. Провести сравнительный анализ иммуносенсоров по следующим параметрам: аналитическая и диагностическая чувствительность, воспроизводимость.

Научная новизна работы

В процессе проведения исследования впервые разработаны методы: -электрохимического определения белков-маркеров острого инфаркта миокарда, таких как сердечный белок, связывающий жирные кислоты, кардиомиоглобин, тропонин I и Т в плазме крови здоровых доноров и больных острым инфарктом миокарда по интенсивности сигнала наночастиц металлов (наночастиц золота, серебра и магнитных наночастиц на основе оксидов железа), на поверхности печатного графитового электрода с помощью высокочувствительных электрохимических методов: инверсионной и квадратно-волновой вольтамперометрии.

-определения белка-маркёра тропонина I в плазме крови здоровых доноров и больных острым инфарктом миокарда потенциометрическим методом анализа, с использованием электродов, модифицированных

наночастицами золота, полученными электросинтезом. Показано, что аналитическая чувствительность потенциометрического метода анализа для разработанного электрохимического иммуносенсора на тропонин I составляет 18,0 пг/мл (0,8 пМ). Личный вклад автора

Соискателем проработана отечественная и зарубежная литература по теме диссертации. Соискатель лично принимал участие в планировании экспериментов, осуществлял подбор необходимых условий в методиках и выполнении основных экспериментов. Практическая значимость исследования

Результаты диссертационной работы имеют практическую ценность в решении задач ранней диагностики острого инфаркта миокарда, а также возможности своевременной постановки диагноза, и, как следствие, начала лечения, в больницах и отделениях скорой помощи. Разработанные электрохимические иммуносенсоры на основе одноразовых печатных графитовых электродов, модифицированных наночастицами металлов, для определения белков-маркёров инфаркта миокарда (сердечный белок, связывающий жирные кислоты, кардиомиоглобин, тропонина I и Т) обладают высокой чувствительностью: диапазон минимально-определяемых концентраций в плазме крови составляет 2,7 - 4,3 пМ. Специфичность определения белков-маркёров обеспечивается за счёт нанесения на поверхность печатного графитового электрода, модифицированного наночастицами металлов, моноклональных антител к соответствующим белкам-маркёрам инфаркта миокарда. Диагностическая чувствительность составляет 87%. Относительное стандартное отклонение среднего результата не превышает 9%. Анализ требует малого количества исследуемого образца (1 мкл плазмы или сыворотки крови), измерение занимает 2 минуты и может проводиться с помощью портативного электрохимического анализатора. Разработанные иммуносенсоры могут быть использованы в качестве профилактических тест-систем для самоконтроля.

Апробация работы

Основные положения диссертации были представлены на IV Международной Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2009), VII Международной Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2012), II всероссийской научной конференции молодых учёных «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия» (Санкт-Петербург, 2012). Структура и объём диссертации

Диссертация изложена на 165 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов (глава 2), изложения результатов и их обсуждения (глава 3), заключения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 186 источник. Работа иллюстрирована 63 рисунками, 8 таблицами и 1 приложением.

Положения, выносимые на защиту:

-Разработка метода электрохимического определения белков-маркёров

острого инфаркта миокарда в плазме крови здоровых доноров и больных острым инфарктом миокарда по сигналу наночастиц металлов методом инверсионной и квадратно-волновой вольтамперометрии.

-Сравнительный анализ аналитической и диагностической чувствительности разработанных иммуносенсоров для определения белков-маркёров в плазме и сыворотке крови.

-Определение тропонина I потенциометрическим методом анализа с помощью электродов, модифицированных золотыми наночастицами, полученными электросинтезом, в плазме крови здоровых доноров и больных острым инфарктом миокарда.

ГЛАВА 1. ТЕСТ СИСТЕМЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОХИМИЧЕСКИХ БЕЛКОВ-МАРКЁРОВ ИНФАРКТА МИОКАРДА

1.1. Белки - маркёры инфаркта миокарда

В качестве первых маркёров инфаркта миокарда были предложены биологически активные вещества, такие как катехоламины, в частности, норадреналин. В 1990 году, была продемонстрирована взаимосвязь сердечной недостаточности с ренин-ангиотензиновой-альдостероновой системой [9]. После исследования катехоламинов, внимание исследователей было сосредоточенно на эндотелиальном пептиде (ЕТ)-1. Данный пептид состоит из 21 аминокислоты, и обладает мощным вазоконстрикторным действием [10]. (ЕТ)-1 пептид вызывает фиброз желудочков и эндотелия сосудов, а также является мощным индуктором высвобождения других нейрогормонов, в том числе и натрийуретического пептида. Последний, в свою очередь, играет важную роль в биогуморальной регуляции сердечной недостаточности. Например, попадая в кровеносное русло, мозговая изоформа натрийуретического пептида и Ы-терминальный про-натрийуретический пептид может свидетельствовать о повреждении кардиомиоцитов [11]. В 90-х годах в патофизиологию сердечной недостаточности был включён С-тип натрийуретического пептида [12]. Увеличение концентрации данного белка в крови указывает на тяжесть сердечной недостаточности [13]. В 90-х годах прошлого века была показана роль интерлейкинов (ИЛ-6) и фактора некроза опухоли а (ФНОа) в воспалительном процессе при сердечно-сосудистой недостаточности [14, 15], и был обнаружен новый биомаркёр сердечной недостаточности - пентраксин (РТХ)-З. Как ранний маркёр воспаления, данный маркёр принадлежит к семейству С-реактивного белка [16]. Высокая концентрация в плазме крови РТХ-3 может указывать на повреждение миокарда [17].

Сердечные тропонины - чувствительные и специфические маркёры ОИМ. Появление данных белков в крови служит показателем воспалительных и окислительных процессов в кардиомиоцитах, а также нервно-гуморальной активности [18]. Увеличение концентрации сердечного тропонина I показывает степень повреждения миофибрилл, а также может использоваться в качестве независимого прогностического фактора смертности при сердечной недостаточности [19, 20]. сБСЖК является белком-маркёром клеточного повреждения мембран. По концентрации данного белка маркёра в плазме крови можно оценить степень тяжести состояния больного с сердечной недостаточностью [21]. Увеличение концентрации таких белков-маркёров как тропонин Т и сБСЖК, является независимым прогностическим показателем неблагоприятного исхода для больных с сердечной недостаточностью [22]. В настоящее время в клинической лабораторной диагностике для определения ИМ используют следующие кардиоспецифические белки-маркёры: тропонин I и Т, кардиомиоглобин, КК-МВ и сБСЖК.

1.1.1. Тропонины

Впервые белок тропонин был открыт ЕЬазЫ и Коёаша в 1965 году. Тропонины I, Т и С - компоненты сократительного аппарата, т.е. структурно-связанные белки кардиомиоцитов [23]. Тропониновый комплекс имеет важное значение для кальций-опосредованной регуляции сокращения скелетных и сердечных мышц [24]. Сердечная форма тропонина I экспрессируется только в сердечной мышце, молекулярная масса данного белка составляет 24 кДа, а различие в аминокислотной последовательности между скелетной и мышечной изоформой составляет около 40% [23, 25]. Функцией данного белка является ингибирование АТФ-азы, и, как следствие, сократительного акта миозина [26]. В то же время, тропонин Т существует в различных изоформах с уникальными структурами в медленных и быстрых скелетных мышцах, в миокарде, различие между данными видами изоформ может составлять приблизительно 6-11%. Молекулярная масса тропонина Т составляет от 30 до

37 кДа для разных изоформ, в частности, для сердечной изоформы молекулярная масса белка составляет 37 кДа [27, 28]. Функцией данного белка является связывание тропонина Т с тропомиозином и образование тропонин-тропомиозинового комплекса [29]. Концентрация данного белка может увеличиваться и при других заболеваниях, таких как: дерматомиозит, гемолиз, септический шок, алкогольная интоксикация и т. д. [23, 27]. Определение тропонина С не нашло своего применения в клинической практике, так как по аминокислотной последовательности сердечная и скелетная изоформы не отличаются друг от друга [23].

В норме концентрация тропонина I составляет 20,4 пг/мл (0,9 пМ) [8]. Данный белок является ранним маркёром ОИМ, и экспрессируется в кровеносное русло спустя 4-6 часов после начала некроза миокарда [30]. Повышенная концентрация тропонин I сохраняется в течение 10 дней На рисунке 1 показан график динамики высвобождения тропонина I у больных ОИМ (•) [26].

г 1Г*0

- 100

со

I

х х а

Ь

о х

аз <

1-1-1-[~г

0 12 24 36 48 60 71 % 120 144 168 192 216 240 Время после наступления загрудинной боли (ч)

Рисунок 1. Динамика высвобождения тропонина I (•) и КК-МВ (о) у больных ОИМ [26].

По литературным данным, концентрация тропонина I после

наступления ОИМ может превышать пороговое значение в 20 - 50 раз [3].

Также содержание тропонина I в плазме крови повышается у больных с

нестабильной стенокардией и при развитии микронекрозов. В отличие от тропонина Т, концентрация тропонина I не повышается у больных с почечной недостаточностью, при массивных повреждениях и заболеваниях мышц [27].

Определение содержания тропонина Т позволяет провести диагностику инфаркта миокарда как в ранние, так и поздние сроки. Содержание данного белка в крови повышается спустя 4-6 часов после развития приступа. Спустя 3 дня концентрация его выходит на плато, которое сохраняется в течение 5-6 дней. В норме значение концентрации тропонина Т по разным данным составляет от 0,1 до 0,5 нг/мл (2,7 - 13,5 пМ) [26, 30-32]. Для врачей-клиницистов анализ сердечного тропонина - ценный инструмент в диагностике ИМ, в том числе на уровне микроинфаркта, а также, обесечивает независимую прогностическую информацию [26]. По концентрации тропонинов в плазме крови можно провести оценку обширности повреждения миокарда [31]. 1.1.2. Креатинкиназа - МВ

Креатинкиназа-МВ - гетеродимерный фермент с молекулярной массой 86 кДа. Основной функцией КК-МВ является поддержание уровня АТФ в мышечных тканях [26]. Измерение ферментативной активности КК-МВ является одним из основных клинических методов диагностики ИМ [33]. Увеличение КК-МВ в сыворотке крови специфично для ОИМ. Повышение концентрации КК-МВ в плазме крови может дать ложноположительный результат у больных с заболеваниями мышц, алкогольной интоксикацией, и у больных диабетом [26]. КК-МВ может быть обнаружена в скелетной мускулатуре и мозге, однако, присутствие данной изоформы в высоких концентрациях уникально для миокарда [34]. КК-МВ при ОИМ появляется в сыворотке крови спустя 3—4 часа после начала симптомов и достигает диагностически значимого уровня (12 МЕ/л) к 4-6-му часу, пик концентрации приходится на 6-9 час, в зависимости от обширности повреждения мышечной ткани [35]. Повышенная концентрация данного фермента может сохраняться

до 48-72 часов [26]. На рисунке 1 представлена динамика высвобождения тропонина I (•) и КК-МВ (о) у больных ОИМ [26]. При операциях на сердце (пороки сердца, коронарное шунтирование) активность КК-МВ используется для диагностики послеоперационного инфаркта миокарда. После операции, вследствие гипоксии и повреждения миокарда, активность КК-МВ в крови повышается и возвращается в норму в течение 10-12 часов. При развитии ИМ активность КК-МВ повышается примерно в 8 раз [3].

К недостаткам данного маркёра можно отнести относительно низкую специфичность (при повреждении скелетной мускулатуры, травмах, после хирургических вмешательств), низкую чувствительность в ранние (< 6 часов) или поздние (>36 часов) сроки от развития симптомов ОИМ, а также низкую чувствительность при минимальном повреждении миокарда [27].

1.1.3. Кардиомиоглобин

Кардиомиоглобин - низкомолекулярный гемопротеин (17,8 кДа), тканеспецифический маркёр сердечной недостаточности, появляющийся в крови после развития ОИМ. При гипоксии миокарда ткань клеток быстро подвергается некрозу, и, благодаря своим маленьким размерам, миоглобин быстро выделяется в кровяное русло [26, 36, 37].

Кардиомиоглобин имеет большое сродство к кислороду; большее, чем гемоглобин. Данный белок связывает переносимый гемоглобином кислород с образованием оксимиоглобина и, таким образом, обеспечивает работающую мышцу некоторым запасом кислорода. Таким образом, функцией миоглобина является обеспечение кислородом мышечной ткани [26]. Концентрация миоглобина в крови увеличивается спустя 1-3 часа после наступления некроза миокарда [38, 39]. Данный белок-маркёр в неизмененном виде экскретируется с мочой и уже через 24 часа с момента начала заболевания возвращается к норме. Миоглобин имеет органоспецифичность для некроза миокарда, тем не менее, у больных с почечной недостаточностью и повреждениями скелетной

мускулатуры, может наблюдаться повышенная концентрация данного белка [40]. Увеличение концентрации миоглобина является критерием острой фазы ИМ. Анализ данного белка-маркёра в сочетании с другими кардиомаркёрами, такими как КК и кардиотропонинами, может компенсировать его диагностические недостатки [36]. В различных источниках «пороговая» концентрация кардиомиоглобина в крови, превышение которой свидетельствует об ИМ, варьируется в достаточно широких пределах от 70 -90 нг/мл (4-5 нМ) [41-44] до 200 нг/мл (11 нМ) [45] и, по всей видимости, зависит от индивидуальных особенностей организма. Однако большинство исследователей придерживаются среднего значения около 100 нг/мл (6 нМ) [32, 46-48]. Концентрация миоглобина при развитии ИМ может повышаться в 4-10 раз от порогового значения. По уровню кардиомиоглобина в крови можно судить об обширности инфаркта на ранней стадии его развития, что важно для выбора оптимального лечения больных [49].

1.1.4. сБСЖК

Сердечный белок, связывающий жирные кислоты (сБСЖК) — относительно новый биомаркёр, который был предложен в конце 80-х XX века

.Г.Р. и соавторами в качестве раннего маркёра повреждения и некроза

миокарда [50]. сБСЖК - низкомолекулярный белок (14-15 кДа), находящийся

в цитоплазме кардиомиоцита [51, 52]. При повреждении миокарда он имеет

динамику высвобождения, сходную с таковой у миоглобина, то есть является

ранним, но более специфичным маркером повреждения кардиомиоцитов [53].

Функция данного белка заключается в интерцеллюлярном транспорте жирных

кислот [54]. сБСЖК появляется спустя 4 часа после развития приступа и

достигает максимума через 5 часов, возвращаясь к норме спустя 20 часов

(рисунок 2). Повторный инфаркт миокарда характеризуется более быстрым

высвобождением сБСЖК из кардиомиоцитов в кровеносное русло (рисунок 2)

[55]. сБСЖК широко представлен в цитоплазме кардиомиоцитов [2]. У

здоровых людей в крови циркулирует небольшое количество сБСЖК; так у

17

женщин уровень сБСЖК достоверно ниже, чем у мужчин (0,7 нг/мл (50,0 пМ) и 1,2 нг/мл (80,0 пМ), соответственно), что, по-видимому, связано с различием в мышечной массе [56]. Время, динамика и механизм выделения данного белка при заболевании сердечно сосудистой системы схожи с миоглобином. Тем не менее, сБСЖК более чувствителен, чем кардиомиоглобин и КК-МВ. Данный белок-маркёр можно обнаружить в скелетных мышцах, в небольших количествах в почках, печени, тонкой кишке и головном мозге, но его концентрация в 10 раз меньше чем в сердечной мышце, за счёт чего данный белок имеет большую специфичность [2, 57]. По литературным данным концентрация сБСЖК при ОИМ может повышаться в 20-25 раз [58]. В настоящее время данный белок является наиболее перспективным для диагностики ОИМ [55].

Рисунок 2. Динамика высвобождения сБСЖК у больных с повторным развитием ОИМ [55]. 1.1.5. Цитохром с

Цитохром с - относительно небольшой (104 аминокислоты) водорастворимый белок, локализованный в межмембранном пространстве митохондрий [59]. Цитохром с является положительно заряженным белком [60]. Высвобождаясь в кровеносное русло, данный белок активирует запрограммированную клеточную гибель, таким образом, повышение концентрации данного белка в крови может служить признаком развития

^ 800 т

-р 7ПЛ

|

сБСЖК

и 200

& юо -V

о ¡10

инфаркта миокарда [59]. Существуют различные механизмы клеточной гибели при СН, например, апоптоз, онкозис, аутофагия и некроз. Многочисленные наблюдения указывают на специфическую и преобладающую роль в гибели кардиомиоцитов такого механизма как апоптоз, происходящего в демаркационной зоне после восстановления кровотока [61].

Апоптоз - процесс также известный как запрограммированная клеточная гибель, жизненно важен для трансформаций, которые сопровождают рост и развитие растений и животных [59]. На клеточном уровне продемонстрировано, что реперфузия кровотока является мощным индуктором апоптоза [62]. Сердечная ишемия / реперфузионное повреждение происходит аналогичным путем, как и при развитии нейродегенеративных заболеваний; внезапная реперфузия кровотока вызывает чрезмерное производство активной формы кислорода (АФК), что приводит к высвобождению цитохрома сив конечном итоге приводит к запуску апоптоза. Высвобождение цитохрома с в цитозоль кардиомиоцитов обусловлено множеством механизмов, включая генерацию АФК, перекисное окисление кардиолипина и перегрузки митохондрий ионами кальция [63].

Первое сообщение о том, что цитохром с играет важную роль в клеточной гибели, было опубликовано в 1996 году [64]. При реперфузии кровотока, цитохром с высвобождается в цитозоль инфарктных кардиомиоцитов и, через мембрану последних, попадает в кровеносное русло. Таким образом, цитохром с представляет собой потенциальный биомаркёр реперфузионного повреждения миокарда, связанный с апоптозом, и прокладывает путь для новых потенциальных терапевтических подходов к предотвращению или сведению к минимуму реперфузионного повреждения миокарда [65]. Тем не менее, данный белок присутствует во всех тканях и следовательно является неспецифическим маркёром инфаркта миокарда. На рисунке 3 представлен график динамики выхода цитохрома с из повреждённых кардиомиоцитов после коронарного вмешательства. Пороговая

концентрация цитохрома с в крови по литературным данным считается 0,80 мкМ (0,01 мкг/мл) [59]. К недостаткам данного белка-маркёра ИМ можно отнести достаточно быстрое возвращение к нормальному значению (спустя 3 дня), отсутствие таканеспецифичности и увеличение его концентрации в случае, если больной принимает цитохром с содержащие лекарственные препараты (например препарат «Цитохром С»).

Рисунок 3. Динамика высвобождения сывороточного цитохрома с [59].

1.1.6. Перспективные белки-маркёры в диагностике инфаркта миокарда

Изучение основных молекулярных механизмов различных заболеваний играет важную роль в биомедицинских исследованиях. В связи с этим поиск новых биомаркёров может однозначно указать на пути развития того или иного заболевания [66]. По клинической значимости белки маркёры можно разделить на два основных вида: диагностические и прогностические.

По механизму действия и функциональной значимости белки-маркёры подразделяются на:

1) Биологически активные вещества. К ним относят: катехоламины, ренин-ангиотензин-альдестероновая система, аргинин, вазопрессин, копептин, натрийуретический пептид. Данные маркёры относятся к

прогностическим, хромогранин А и В, адреномедуллин - к диагностическим [67, 68].

2) Маркёры повреждения миокарда. К ним относят: кардиомиоглобин, Пентраксин 3. Данные маркёры имеют прогностическое значение в клинической практике. Тропонин I, тропонин Т, цитохром с, сБСЖК относят к диагностическим белкам маркерам ИМ [68-70].

3) Маркёры воспалительных процессов: С-реактивный белок, цитокины (ИЛ 1,2,3,8,18 и ФНО-а) , прокальцитонин, неопретин, тромбин и протромбин и т.д. Данная группа белков относится к прогностическому типу белков маркёров ИМ [68, 69, 71-74].

4) Маркёры оксидативного стресса. К данной группе относят: миелопероксидаза, мочевые порфирины, плазменный малондиалдегидрад, гамма - глутаровая трансфераза, уреиновая кислота, альбумин модифицированный при ишемии. Эти белки также относят к прогностическому типу [69, 75].

5) Матричные и клеточные ремодуляторы: матричные металлопротеиназы, коллагеновые пропептиды, галектин-3 и др. Эти белки имеют прогностическое значение для диагностики ОИМ [76].

6) Белки, указывающие на эндотелиальную дисфункцию: эндотелии, адиопектин, гомоцистеин и т.д. [77, 78].

Тем не менее, не существует идеального белка-маркёра инфаркта миокарда. На сегодняшний день известно более 177 потенциальных маркёров сердечнососудистых патологий (заболеваний) и исследования в данной области активно продолжаются [79].

1.2. Клинические методы анализа белков-маркёров инфаркта миокарда

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шумков, Андрей Алексеевич, 2013 год

СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Никулин Б.А. Пособие по клинической биохимии // 2007. ГЭОТАР-Москва. Москва.

2. Hasanzadeh М., Shadjou N., Eskandani М., de la Guardia M., and Omidinia E. Electrochemical nano-immunosensing of effective cardiac biomarkers for acute myocardial infarction // TrAC Trends in Analytical Chemistry. 2013. 49. 20-30.

3. Ткачук В.А. Клиническая биохимия // 2008. ГЭОТАР-Москва. Москва.

4. Lewandrowski К. Point-of-Care Testing: An Overview and a Look to the Future (Circa 2009, United States) // Clinics in Laboratory Medicine. 2009. 29. 421-432.

5. Christenson R.H. and Azzazy H.M. Cardiac point of care testing: a focused review of current National Academy of Clinical Biochemistry guidelines and measurement platforms//Clin Biochem. 2009. 42. 150-157.

6. Арчаков A.M., Шумянцева B.B., Булко T.B., Курнышова A.B., и Вагин М.Ю. Патент № 2425382 //2009.

7. Арчаков А.И., Шумянцева В.В., Булко Т.В., Курнышова А.В., и Вагин М.Ю. Способ экспресс-определения кардиомиоглобина в плазме крови с помощью электрохимического иммуносенсора // Патент № 2425382. 2008.

8. Xu Q., Хи Н., Gu Н., Li J., Wang Y., and Wei M. Development of lateral flow immunoassay system based on superparamagnetic nanobeads as labels for rapid quantitative detection of cardiac troponin I // Materials Science and Engineering: C. 2009. 29. 702-707.

9. Swedberg K., Eneroth P., Kjekshus J., and Wilhelmsen L. Hormones regulating cardiovascular function in patients with severe congestive heart failure and their relation to mortality. CONSENSUS Trial Study Group // Circulation. 1990. 82. 1730-1736.

10. Giannessi D., Del Ry S., and Vitale R.L. The role of endothelins and their receptors in heart failure //Pharmacological Research. 2001. 43. 111-126.

11. Daniels L.B. and Maisel A.S. Natriuretic Peptides // Journal of the American College of Cardiology. 2007. 50. 2357-2368.

12. Del Ry S., Passino C., Emdin M., and Giannessi D. C-type natriuretic peptide and heart failure //Pharmacological Research. 2006. 54. 326-333.

13. Del Ry S., Passino C., Maltinti M., Emdin M., and Giannessi D. C-type natriuretic peptide plasma levels increase in patients with chronic heart failure as a function of clinical severity //Eur J Heart Fail. 2005. 7. 1145-1148.

14. Vasan R.S., Sullivan L.M., Roubenoff R., Dinarello C.A., Harris T., Benjamin E.J., Sawyer D.B., Levy D., Wilson P.W., and D'Agostino R.B. Inflammatory markers and risk of heart failure in elderly subjects without prior myocardial infarction: the Framingham Heart Study // Circulation. 2003. 107. 1486-1491.

15. Elster S.K., Braunwald E., and Wood H.F. A study of C-reactive protein in the serum of patients with congestive heart failure // Am Heart J. 1956. 51. 533-541.

16. Ishino M., Takeishi Y., Niizeki T., Watanabe T., Nitobe J., Miyamoto T., Miyashita T., Kitahara T., Suzuki S., Sasaki T., Bilim O., and Kubota I. Risk stratification of chronic heart failure patients by multiple biomarkers: implications of BNP, H-FABP, and PTX3 //Circ J. 2008. 72. 1800-1805.

17. Latini R., Maggioni A.P., Peri G., Gonzini L., Lucci D., Mocarelli P., Vago L., Pasqualini F., Signorini S., Soldateschi D., Tarli L., Schweiger C., Fresco C., Cecere R., Tognoni G., and Mantovani A. Prognostic significance of the long pentraxin PTX3 in acute myocardial infarction//Circulation. 2004. 110. 2349-2354.

18. Scirica B.M. and Morrow D.A. Troponins in acute coronary syndromes // Semin Vase Med. 2003. 3. 363-374.

19. Sato Y., Kita T., Takatsu Y., and Kimura T. Biochemical markers of myocyte injury in heart failure //Heart. 2004. 90. 1110-1113.

20. Kociol R.D., Pang P.S., Gheorghiade M., Fonarow G.C., O'Connor C.M., and Felker G.M. Troponin elevation in heart failure prevalence, mechanisms, and clinical implications //J Am Coll Cardiol. 2010. 56. 1071-1078.

21. Niizeki T., Takeishi Y., Arimoto T., Nozaki N., Hirono O., Watanabe T., Nitobe J., Miyashita T., Miyamoto T., Koyama Y., Kitahara T., Suzuki S., Sasaki T., and Kubota I. Persistently increased serum concentration of heart-type fatty acid-binding protein predicts adverse clinical outcomes in patients with chronic heart failure //Cire J. 2008. 72. 109-114.

22. Setsuta K., Seino Y., Kitahara Y., Arau M., Ohbayashi T., Takano T., and Mizuno K. Elevated levels of both cardiomyocyte membrane and myofibril damage markers predict adverse outcomes in patients with chronic heart failure//Cire J. 2008. 72. 569-574.

23. Tsai S.-H., Chu S.-J., Hsu C.-W., Cheng S.-M., and Yang S.-P. Use and interpretation of cardiac troponins in the ED // The American Journal of Emergency Medicine. 2008. 26. 331-341.

24. Takeda S., Yamashita A., Maeda K., and Maeda Y. Structure of the core domain of human cardiac troponin in the Ca(2+)-saturated form // Nature. 2003. 424. 35-41.

25. Mair J., Genser N., Morandell D., Maier J., Mair P., Lechleitner P., Calzolari C., Larue C., Ambach E., Dienstl F., Pau В., and Puschendorf B. Cardiac troponin I in the diagnosis of myocardial injury and infarction // Clin Chim Acta. 1996. 245. 19-38.

26. Manoj Joshi, Nitin Kale, R.Lai, S. Mukherji, and Rao V.R., Development of a Bio-Chip for Cardiac Diagnostics 2008.

27. Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики: для врачей и фельдшеров // 2007. ГЭОТАР-Медиа. Москва.

28. Wei В. and Jin J.P. Troponin T isoforms and posttranscriptional modifications: Evolution, regulation and function // Archives of Biochemistry and Biophysics. 2011. 505. 144-154.

29. Камкин А.Г., Каменский А.А. Фундаментальная и клиническая физиология // 2004. Academia. Москва.

30. McDonnell В., Hearty S., Leonard P., and O'Kennedy R. Cardiac biomarkers and the case for point-of-care testing //Clin Biochem. 2009. 42. 549-561.

31. Steen H., Giannitsis E., Futterer S., Merten C., Juenger C., and Katus H.A. Cardiac Troponin T at 96 Hours After Acute Myocardial Infarction Correlates With Infarct Size and Cardiac Function // Journal of the American College of Cardiology. 2006. 48. 2192-2194.

32. Kawde A.-N., Rodriguez M.C., Lee T.M.H., and Wang J. Label-free bioelectronic detection of aptamerB C-protein interactions // Electrochemistry Communications. 2005. 7. 537-540.

33. Lin J.C., Apple F.S., Murakami M.M., and Luepker R.V. Rates of positive cardiac troponin I and creatine kinase MB mass among patients hospitalized for suspected acute coronary syndromes //Clin Chem. 2004. 50. 333-338.

34. Saenger A.K. and Jaffe A.S. The use of biomarkers for the evaluation and treatment of patients with acute coronary syndromes // Med Clin North Am. 2007. 91. 657-681.

35. Boateng S. and Sanborn T. Acute myocardial infarction //Disease-a-Month. 2013. 59. 83-96.

36. Будников Т.К. Химический анализ в медицинской диагностике Том 11// Наука. Vol. 11. 2010. Наука. Москва.

37. Suprun E., Shumyantseva V., Rakhmetova S., Voronina S., Radko S., Bodoev N., and Alexander A. Label-Free Electrochemical Thrombin Aptasensor Based on Ag Nanoparticles Modified Electrode //Electroanalysis. 2010. 22. 1368-1392.

38. Mair J., Artner-Dworzak E., Lechleitner P., Morass В., Smidt J., Wagner I., Dienstl F., and Puschendorf B. Early diagnosis of acute myocardial infarction by a newly developed rapid immunoturbidimetric assay for myoglobin // Br Heart J. 1992. 68.462-468.

39. Gilkeson G., Stone M.J., Waterman M., Ting R., Gomez-Sanchez C.E., Hull A., and Willerson J.T. Detection of myoglobin by radioimmmunoassay in human sera: its usefulness and limitations as an emergency room screening test for acute myocardial infarction // Am Heart J. 1978. 95. 70-77.

40. de Winter R.J., Koster R.W., Sturk A., and Sanders G.T. Value of myoglobin, troponin T, and CK-MBmass in ruling out an acute myocardial infarction in the emergency room//Circulation. 1995. 92. 3401-3407.

41. McCord J., Nowak R.M., McCullough P.A., Foreback C., Borzak S., Tokarski G., Tomlanovich M.C., Jacobsen G., and Weaver W.D. Ninety-minute exclusion of acute myocardial infarction by use of quantitative point-of-care testing of myoglobin and troponin I //Circulation. 2001. 104. 14831488.

42. Newby L.K., Storrow A.B., Gibler W.B., Garvey J.L., Tucker J.F., Kaplan A.L., Schreiber D.H., Tuttle R.H., McNulty S.E., and Ohman E.M. Bedside multimarker testing for risk stratification in chest pain units: The chest pain evaluation by creatine kinase-MB, myoglobin, and troponin I (CHECKMATE) study//Circulation. 2001. 103. 1832-1837.

43. Castaldo A.M., Ercolini P., Forino F., Basevi A., Vrenna L., Castaldo P., D'Ambrosio V., and Castaldo A. Plasma myoglobin in the early diagnosis of acute myocardial infarction//Eur J Clin Chem Clin Biochem. 1994. 32. 349353.

44. Hillis G.S., Zhao N., Taggart P., Dalsey W.C., and Mangione A. Utility of cardiac troponin I, creatine kinase-MB(mass), myosin light chain 1, and myoglobin in the early in-hospital triage of "high risk" patients with chest pain//Heart. 1999. 82. 614-620.

45. Apple F.S., Christenson R.H., Valdes R., Jr., Andriak A.J., Berg A., Duh S.H., Feng Y.J., Jortani S.A., Johnson N.A., Koplen B., Mascotti K., and Wu A.H. Simultaneous rapid measurement of whole blood myoglobin, creatine kinase MB, and cardiac troponin I by the triage cardiac panel for detection of myocardial infarction//Clin Chem. 1999. 45. 199-205.

46. Di Serio F., Antonelli G., Trerotoli P., Tampoia M., Matarrese A., and Pansini N. Appropriateness of point-of-care testing (РОСТ) in an emergency department //Clin Chim Acta. 2003. 333. 185-189.

47. Будников Г.К. Биосенсоры как новый тип аналитичеких устройств // Соросовский образовательный журнал. 1996. 12. 26-32.

48. Clark L.C.Jr., and Lyons С. Electrode systems for continuous monitoring in cardiovascular surgery//Ann N Y Acad Sci. 1962. 102. 29-45.

49. Mathew Т., Menown I., Smith В., Smye M., Nesbitt S., Young I., and Adgey A.A. Diagnosis and risk stratification of patients with anginal pain and nondiagnostic electrocardiograms //Qjm. 1999. 92. 565-571.

50. Glatz J.F., Kleine A.H., van Nieuwenhoven F.A., Hermens W.T., van Dieijen-Visser M.P., and van der Vusse G.J. Fatty-acid-binding protein as a plasma marker for the estimation of myocardial infarct size in humans // Br Heart J. 1994. 71. 135-140.

51. Kakoti A. and Goswami P. Heart type fatty acid binding protein: Structure, function and biosensing applications for early detection of myocardial infarction //Biosensors and Bioelectronics. 2013. 43. 400-411.

52. Зырянова A.B., Ярохно H.H., и Николаев К.Ю. Изучение специфичности качественного иммунохроматографического метода определения сердечного белка, связывающего жирные кислоты, в группе больных середчно-сосудистыми заболеваниями без недавних коронарных событий //Сибирский медицинский журнал. 2010. 25.

53. Tanaka Т., Hirota Y., Sohmiya K.-I., Nishimura S., and Kawamura K. Serum and urinary human heart fatty acid-binding protein in acute myocardial infarction//Clinical Biochemistry. 1991.24. 195-201.

54. Storch J. and McDermott L. Structural and functional analysis of fatty acid-binding proteins //J Lipid Res. 2009. 50 Suppl. S126-131.

55. Alhadi H.A. and Fox K.A. Do we need additional markers of myocyte necrosis: the potential value of heart fatty-acid-binding protein // Qjm. 2004. 97. 187-198.

56. Pelsers M.M., Chapelle J.P., Knapen M., Vermeer C., Muijtjens A.M., Hermens W.T., and Glatz J.F. Influence of age and sex and day-to-day and within-day biological variation on plasma concentrations of fatty acid-binding protein and myoglobin in healthy subjects //Clin Chem. 1999. 45. 441-443.

57. Okamoto F., Sohmiya K., Ohkaru Y., Kawamura K., Asayama K., Kimura H., Nishimura S., Ishii H., Sunahara N., and Tanaka T. Human heart-type cytoplasmic fatty acid-binding protein (H-FABP) for the diagnosis of acute myocardial infarction. Clinical evaluation of H-FABP in comparison with myoglobin and creatine kinase isoenzyme MB // Clin Chem Lab Med. 2000. 38.231-238.

58. Hartmann F., Kampmann M., Frey N., Muller-Bardorff M., and Katus H.A. Biochemical markers in the diagnosis of coronary artery disease // Eur Heart J. 1998. 19 Suppl N. N2-7.

59. Ashe D., Alleyne T., and Iwuoha E. Serum cytochrome c detection using a cytochrome c oxidase biosensor//Biotechnol Appl Biochem. 2007. 46. 185189.

60. Li K., Li Y., Shelton J.M., Richardson J.A., Spencer E., Chen Z.J., Wang X., and Williams R.S. Cytochrome c deficiency causes embryonic lethality and attenuates stress-induced apoptosis //Cell. 2000. 101. 389-399.

61. Gustafsson A.B. and Gottlieb R.A. Heart mitochondria: gates of life and death//Cardiovasc Res. 2008. 77. 334-343.

62. Weiss J.N., Korge P., Honda H.M., and Ping P. Role of the mitochondrial permeability transition in myocardial disease // Circ Res. 2003. 93. 292-301.

63. Huttemann M., Pecina P., Rainbolt M., Sanderson T.H., Kagan V.E., Samavati L., Doan J.W., and Lee I. The multiple functions of cytochrome c and their regulation in life and death decisions of the mammalian cell: From respiration to apoptosis //Mitochondrion. 2011. 11. 369-381.

64. Liu X., Kim C.N., Yang J., Jemmerson R., and Wang X. Induction of apoptotic program in cell-free extracts: requirement for dATP and cytochrome c//Cell. 1996. 86. 147-157.

65. Marenzi G., Giorgio M., Trinei M., Moltrasio M., Ravagnani P., Cardinale D., Ciceri F., Cavallero A., Veglia F., Fiorentini C., Cipolla C.M., Bartorelli A.L., and Pelicci P. Circulating cytochrome с as potential biomarker of impaired reperfusion in ST-segment elevation acute myocardial infarction // Am J Cardiol. 2010. 106. 1443-1449.

66. Braunwald E. Biomarkers in heart failure // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecular Basis of Disease. 2008. 358. 2148-2159.

67. Wu A.H., Jaffe A.S., Apple F.S., Jesse R.L., Francis G.L., Morrow D.A., Newby L.K., Ravkilde J., Tang W.H., Christenson R.H., Cannon C.P., and Storrow A.B. National Academy of Clinical Biochemistry laboratory medicine practice guidelines: use of cardiac troponin and B-type natriuretic peptide or N-terminal proB-type natriuretic peptide for etiologies other than acute coronary syndromes and heart failure // Clin Chem. 2007. 53. 20862096.

68. Plebani M. Biochemical markers of cardiac damage: from efficiency to effectiveness //Clin Chim Acta. 2001. 311. 3-7.

69. Островский O.B., Ткачева B.B., и Островская В.О. Лабораторные маркеры повреждения миокарда в современной кардиологии // Спецвыпуск ЛАБОРАТОРИЯ. 2013. №2. 31-36.

70. Heistad D.D. Unstable coronary-artery plaques //N Engl J Med. 2003. 349. 2285-2287.

71. Malarstig A., Eriksson P., Hamsten A., Lindahl В., Wallentin L., and Siegbahn A. Raised interleukin-10 is an indicator of poor outcome and enhanced systemic inflammation in patients with acute coronary syndrome // Heart. 2008. 94. 724-729.

72. Sinagra E., Perricone G., Romano C., and Cottone M. Heart failure and anti tumor necrosis factor-alpha in systemic chronic inflammatory diseases // European Journal of Internal Medicine. 2013. 24. 385-392.

73. Morrow D.A., Rifai N., Antman E.M., Weiner D.L., McCabe C.H., Cannon

C.P., and Braunwald E. C-Reactive Protein Is a Potent Predictor of Mortality

146

Independently of and in Combination With Troponin T in Acute Coronary Syndromes: A TIMI 11A Substudy // Journal of the American College of Cardiology. 1998. 31. 1460-1465.

74. Galvani M., Ferrini D., Ghezzi F., and Ottani F. Cardiac markers and risk stratification: an integrated approach //Clinica Chimica Acta. 2001. 311. 917.

75. Khan S.Q., Kelly D., Quinn P., Davies J.E., and Ng L.L. Myeloperoxidase aids prognostication together with N-terminal pro-B-type natriuretic peptide in high-risk patients with acute ST elevation myocardial infarction // Heart. 2007. 93. 826-831.

76. Tousoulis D., Andreou I., Tentolouris C., Antoniades C., Papageorgiou N., Gounari P., Kotrogiannis I., Miliou A., Charakida M., Trikas A., and Stefanadis C. Comparative effects of rosuvastatin and allopurinol on circulating levels of matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in patients with chronic heart failure //Int J Cardiol. 2010. 145. 438-443.

77. Закирова Н.Э., Хафизов H.X., Карамова И.М., Закирова А.Н., и Оганов Р.Г. Иммуновоспалительные реакции при ишемической болезни сердца //Рациональная Фармакотерапия в Кардиологии. 2007. 2. 16-19.

78. Maurer М., Burri S., de Marchi S., Hullin R., Martinelli M., Mohacsi P., and Hess O.M. Plasma homocysteine and cardiovascular risk in heart failure with and without cardiorenal syndrome //Int J Cardiol. 2010. 141. 32-38.

79. Anderson L. Candidate-based proteomics in the search for biomarkers of cardiovascular disease // J Physiol. 2005. 563. 23-60.

80. Zelada-Guille'n G.A., Tweed-Kent A., Niemann M., Goringer H.U., Riu J., and Rius F.X. Ultrasensitive and real-time detection of proteins in blood using a potentiometric carbon-nanotube aptasensor // Biosensors and Bioelectronics. 2013. 41. 366-371.

81. Бабко A.K., Дубовенко Л.И., и Луковская Н.М. Хемилюминисцентный метод анализа // Н.Б. Булгакова. 1966. Октябрь. Киев.

82. Uyanik A. Gas chromatography in anaesthesia: I. A brief review of analytical methods and gas chromatographic detector and column systems // Journal of Chromatography В: Biomedical Sciences and Applications. 1997. 693. 1-9.

83. Turkova J. Affinity chtomatography // Vol. 12. 1980. Elsevier Scientific Publishin Company. New York.

84. Cullen L., Parsonage W., Greenslade J., Aldous S., George P., Lamanna A., Ungerer J., Richards M., Pemberton C., Hammett C., and Than M. Diagnosis of AMI Using Sex-Specific Cut-Off Values of a Highly Sensitive Troponin I Assay in Emergency Department Patients With Chest Pain // Heart, Lung and Circulation. 2013. 22, Supplement 1. S36.

85. Елисеев A.A. и Лукашин A.B. Функциональные наноматериалы // Ю.Д. Третьякова. 2010. Физматлит. Москва.

86. Старостин В.В. Материалы и методы нанотехнологий // Бином. Лаборатория знаний. П. Л.Н.. 2010. Москва.

87. Robert A. and Freitas J. Nanomedicine, Volume I: Basic Capabilities // Vol. 1. 1999. Landes Bioscience. Austin.

88. D'Orazio P. Biosensors in clinical chemistry - 2011 update // Clinica Chimica Acta. 2011.412. 1749-1761.

89. Mascini M. and Tombelli S. Biosensors for biomarkers in medical diagnostics //Biomarkers. 2008. 13.

90. Иванов A.C. Исследование межмолекулярных взаимодействий с помощью оптических биосенсоров, работающих на эффекте поверхностного плазмонного резонанса // Оптические биосенсоры в исследовании межмолекулярных взаимодействий. 2012. 4. 142-153.

91. Yeung D., Gill A., Maule С.Н., and Davies R.J. Detection and quantification of biomolecular interactions with optical biosensors // TrAC Trends in Analytical Chemistry. 1995. 14. 49-56.

92. Yuk J.S., Jung J.-W., Kim Y.-M., and Ha K.-S. Analysis of protein arrays with a dual-function SPR biosensor composed of surface plasmon microscopy

and SPR spectroscopy based on white light // Sensors and Actuators B: Chemical. 2008. 129. 113-119.

93. Dutra R.F. and Kubota L.T. An SPR immunosensor for human cardiac troponin T using specific binding avidin to biotin at carboxymethyldextran-modified gold chip //Clin Chim Acta. 2007. 376. 114-120.

94. Jarvenpaa M.L., Kuningas K., Niemi I., Hedberg P., Ristiniemi N., Pettersson K., and Lovgren T. Rapid and sensitive cardiac troponin I immunoassay based on fluorescent europium(III)-chelate-dyed nanoparticles // Clin Chim Acta. 2012. 414. 70-75.

95. Islam M.S., Yu H., Lee H.G., and Kang S.H. Molecular switching fluorescence based high sensitive detection of label-free C-reactive protein on biochip //Biosens Bioelectron. 2010. 26. 1028-1035.

96. Wolf M., Juncker D., Michel B., Hunziker P., and Delamarche E. Simultaneous detection of C-reactive protein and other cardiac markers in human plasma using micromosaic immunoassays and self-regulating microfluidic networks //Biosens Bioelectron. 2004. 19. 1193-1202.

97. Hill H.R. and Martins T.B. The flow cytometric analysis of cytokines using multi-analyte fluorescence microarray technology//Methods. 2006. 38. 312316.

98. Hun X. and Zhang Z. Functionalized fluorescent core-shell nanoparticles used as a fluorescent labels in fluoroimmunoassay for IL-6 // Biosens Bioelectron. 2007. 22. 2743-2748.

99. Ganesh N., Block I.D., Mathias P.C., Zhang W., Chow E., Malyarchuk V., and Cunningham B.T. Leaky-mode assisted fluorescence extraction: application to fluorescence enhancement biosensors //Opt Express. 2008. 16. 21626-21640.

100. Jung J.W., Jung S.H., Yoo J.O., Suh I.B., Kim Y.M., and Ha K.S. Label-free and quantitative analysis of C-reactive protein in human sera by tagged-internal standard assay on antibody arrays // Biosens Bioelectron. 2009. 24. 1469-1473.

101. Pultar J., Sauer U., Domnanich P., and Preininger C. Aptamer-antibody on-chip sandwich immunoassay for detection of CRP in spiked serum // Biosens Bioelectron. 2009. 24. 1456-1461.

102. Heyries K.A., Mandon C.A., Ceriotti L., Ponti J., Colpo P., Blum L.J., and Marquette C.A. "Macromolecules to PDMS transfer" as a general route for PDMS biochips //Biosens Bioelectron. 2009. 24. 1146-1152.

103. Christodoulides N., Tran M., Floriano P.N., Rodriguez M., Goodey A., Ali M., Neikirk D., and McDevitt J.T. A microchip-based multianalyte assay system for the assessment of cardiac risk// Anal Chem. 2002. 74. 3030-3036.

104. Yang Y.N., Lin H.I., Wang J.H., Shiesh S.C., and Lee G.B. An integrated microfluidic system for C-reactive protein measurement // Biosens Bioelectron. 2009. 24. 3091-3096.

105. Wu W.-Y., Bian Z.-P., Wang W., and Zhu J.-J. PDMS gold nanoparticle composite film-based silver enhanced colorimetric detection of cardiac troponin I//Sensors and Actuators B: Chemical. 2010. 147. 298-303.

106. Torabi F., Mobini Far H.R., Danielsson B., and Khayyami M. Development of a plasma panel test for detection of human myocardial proteins by capillary immunoassay//Biosens Bioelectron. 2007. 22. 1218-1223.

107. Jie G., Liu B., Pan H., Zhu J.J., and Chen H.Y. CdS nanocrystal-based electrochemiluminescence biosensor for the detection of low-density lipoprotein by increasing sensitivity with gold nanoparticle amplification // Anal Chem. 2007. 79. 5574-5581.

108. Shen W., Tian D., Cui H., Yang D., and Bian Z. Nanoparticle-based electrochemiluminescence immunosensor with enhanced sensitivity for cardiac troponin I using N-(aminobutyl)-N-(ethylisoluminol)-functionalized gold nanoparticles as labels //Biosens Bioelectron. 2011. 27. 18-24.

109. Pieper-Furst U., Kleuser U., Stocklein W.F., Warsinke A., and Scheller F.W. Detection of subpicomolar concentrations of human matrix metalloproteinase-2 by an optical biosensor//Anal Biochem. 2004. 332. 160167.

110. Dutra R.F., Mendes R.K., Lins da Silva V., and Kubota L.T. Surface plasmon resonance immunosensor for human cardiac troponin T based on self-assembled monolayer // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2007.43. 1744-1750.

111. Liu J.T., Chen C.J., Ikoma Т., Yoshioka Т., Cross J.S., Chang S.J., Tsai J.Z., and Tanaka J. Surface plasmon resonance biosensor with high anti-fouling ability for the detection of cardiac marker troponin T // Anal Chim Acta. 2011. 703. 80-86.

112. Hoa X.D., Kirk A.G., and Tabrizian M. Enhanced SPR response from patterned immobilization of surface bioreceptors on nano-gratings // Biosens Bioelectron. 2009. 24. 3043-3048.

113. Kapoor R. and Wang C.W. Highly specific detection of interleukin-6 (IL-6) protein using combination tapered fiber-optic biosensor dip-probe // Biosens Bioelectron. 2009. 24. 2696-2701.

114. Lee J., Lee Y., Park J.-Y., Seo H., Lee Т., Lee W., Kim S.K., Hahn Y.K., Jung J.y., Kim S., Choi Y.-S., and Lee S.S. Sensitive and reproducible detection of cardiac troponin I in human plasma using a surface acoustic wave immunosensor//Sensors and Actuators B: Chemical. 2013. 178. 19-25.

115. Krishnamoorthy S., Iliadis A.A., Bei Т., and Chrousos G.P. An interleukin-6 ZnO/SiO(2)/Si surface acoustic wave biosensor //Biosens Bioelectron. 2008. 24.313-318.

116. McBride J.D. and Cooper M.A. A high sensitivity assay for the inflammatory marker C-Reactive protein employing acoustic biosensing // J Nanobiotechnology. 2008. 6. 5.

117. Tan W., Wang К., He X., Zhao X.J., Drake Т., Wang L., and Bagwe R.P. Bionanotechnology based on silica nanoparticles // Med Res Rev. 2004. 24. 621-638.

118. Першина А.Г., Сазонов А.Э., и Мильто И.В. Использование магнитных наночастиц в биомедицине // Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск. 2008. 2. 70-78.

119. Ruan C., Zeng K., Varghese O.K., and Grimes C.A. A staphylococcal enterotoxin B magnetoelastic immunosensor//Biosens Bioelectron. 2004. 20. 585-591.

120. Rossi L.M., Quach A.D., and Rosenzweig Z. Glucose oxidase-magnetite nanoparticle bioconjugate for glucose sensing // Anal Bioanal Chem. 2004. 380. 606-613.

121. Ibraimi F., Kriz D., Lu M., Hansson L.O., and Kriz K. Rapid one-step whole blood C-reactive protein magnetic permeability immunoassay with monoclonal antibody conjugated nanoparticles as superparamagnetic labels and enhanced sedimentation//Anal Bioanal Chem. 2006. 384. 651-657.

122. Dittmer W.U., Evers T.H., Hardeman W.M., Huijnen W., Kamps R., de Kievit P., Neijzen J.H.M., Nieuwenhuis J.H., Sijbers M.J.J., Dekkers D.W.C., Hefti M.H., and Martens M.F.W.C. Rapid, high sensitivity, point-of-care test for cardiac troponin based on optomagnetic biosensor // Clinica Chimica Acta. 2010. 411. 868-873.

123. Meyer M.H.F., Hartmann M., Krause H.-J., Blankenstein G., Mueller-Chorus B., Oster J., Miethe P., and Keusgen M. CRP determination based on a novel magnetic biosensor//Biosensors and Bioelectronics. 2007. 22. 973-979.

124. Mattos A.B., Freitas T.A., Silva V.L., and Dutra R.F. A dual quartz crystal microbalance for human cardiac troponin T in real time detection // Sensors and Actuators B: Chemical. 2012. 161. 439-446.

125. Kim N., Kim D.-K., and Cho Y.-J. Development of indirect-competitive quartz crystal microbalance immunosensor for C-reactive protein // Sensors and Actuators B: Chemical. 2009. 143. 444-448.

126. Mohammed M.I. and Desmulliez M.P. Lab-on-a-chip based immunosensor principles and technologies for the detection of cardiac biomarkers: a review //Lab Chip. 2010. 11. 569-595.

127. Silva B.V., Cavalcanti I.T., Mattos A.B., Moura P., Sotomayor Mdel P., and Dutra R.F. Disposable immunosensor for human cardiac troponin T based on

streptavidin-microsphere modified screen-printed electrode // Biosens Bioelectron. 2010. 26. 1062-1067.

128. Zhou F., Lu M., Wang W., Bian Z.P., Zhang J.R., and Zhu J.J. Electrochemical immunosensor for simultaneous detection of dual cardiac markers based on a poly(dimethylsiloxane)-gold nanoparticles composite microfluidic chip: a proof of principle//Clin Chem. 2010. 56. 1701-1707.

129. Saleh Ahammad A. J., Yo-Han Choi, Kwangnak Koh, Jae-Ho Kim, Jae-Joon Lee, and Lee. M. Electrochemical Detection of Cardiac Biomarker Troponin I at Gold Nanoparticle-Modified ITO Electrode by Using Open Circuit Potential//Electrochemical science. 2011. 6. 1906-1916.

130. Bhalla V., Carrara S., Sharma P., Nangia Y., and Raman Suri C. Gold nanoparticles mediated label-free capacitance detection of cardiac troponin I //Sensors and Actuators B: Chemical. 2012. 161. 761-768.

131. Zhang G.J., Luo Z.H., Huang M.J., Ang J.J., Kang T.G., and Ji H. An integrated chip for rapid, sensitive, and multiplexed detection of cardiac biomarkers from fingerprick blood//Biosens Bioelectron. 2011. 28. 459-463.

132. Monson C.F., Driscoll L.N., Bennion E., Miller C.J., and Majda M. Antibody-antigen exchange equilibria in a field of an external force: design of reagentless biosensors//Anal Chem. 2009. 81. 7510-7514.

133. Suprun E., Bulko T., Lisitsa A., Gnedenko O., Ivanov A., Shumyantseva V., and Archakov A. Electrochemical nanobiosensor for express diagnosis of acute myocardial infarction in undiluted plasma // Biosensors and Bioelectronics. 2010. 25. 1694-1698.

134. Pakapongpan S., Palangsuntikul R., and Surareungchai W. Electrochemical sensors for hemoglobin and myoglobin detection based on methylene blue-multiwalled carbon nanotubes nanohybrid-modified glassy carbon electrode // Electrochimica Acta. 2011. 56. 6831-6836.

135. Billah M., Hays H.C.W., and Millner P.A. Development of a myoglobin impedimetric immunosensor based on mixed self-assembled monolayer onto gold //Microchim. Acta. 2008. 160. 447-454.

136. Mishra S.K., Kumar D., Biradar A.M., and Rajesh. Electrochemical impedance spectroscopy characterization of mercaptopropionic acid capped ZnS nanocrystal based bioelectrode for the detection of the cardiac biomarker myoglobin//Bioelectrochemistry. 2012. 88. 118-126.

137. Karimian N., Vagin M., Zavar M.H.A., Chamsaz M., Turner A.P.F., and Tiwari A. An ultrasensitive molecularly-imprinted human cardiac troponin sensor//Biosensors and Bioelectronics. 2013. 50. 492-498.

138. Moreira F.T.C., Dutra R.A.F., Noronha J.P.C., and Sales M.G.F. Surface Imprinting Approach on Screen Printed Electrodes Coated with Carboxylated PVC for Myoglobin detection with Electrochemical Transduction // Procedia Engineering. 2012. 47. 865-868.

139. Zhang X. and Yadavalli V.K. Surface immobilization of DNA aptamers for biosensing and protein interaction analysis // Biosensors and Bioelectronics. 2011.26.3142-3147.

140. Qiu H., Sun Y., Huang X., and Qu Y. A sensitive nanoporous gold-based electrochemical aptasensor for thrombin detection // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 2010. 79. 304-308.

141. Zhang X., Yang W., Wang C., Yang F. and Yang X. A sensitive impedimetric thrombin aptasensor based on polyamidoamine dendrime, // Talanta. 2009. 78. 1240-1245.

142. Polsky R., Gill R., Kaganovsky L., and Willner I. Nucleic acid-functionalized Pt nanoparticles: Catalytic labels for the amplified electrochemical detection ofbiomolecules //Anal Chem. 2006. 78. 2268-2271.

143. Zheng J., Feng W., Lin L., Zhang F., Cheng G., He P., and Fang Y. A new amplification strategy for ultrasensitive electrochemical aptasensor with network-like thiocyanuric acid/gold nanoparticles // Biosens Bioelectron. 2007. 23. 341-347.

144. Tasis D., Tagmatarchis N., Bianco A., and Prato M. Chemistry of carbon nanotubes//Chem Rev. 2006. 106. 1105-1136.

145. Hansen J.A., Wang J., Kawde A.N., Xiang Y., Gothelf K.V., and Collins G. Quantum-dot/aptamer-based ultrasensitive multi-analyte electrochemical biosensor//J Am Chem Soc. 2006. 128. 2228-2229.

146. Yang R., Tang Z., Yan J., Kang H., Kim Y., Zhu Z., and Tan W. Noncovalent assembly of carbon nanotubes and single-stranded DNA: an effective sensing platform for probing biomolecular interactions //Anal Chem. 2008. 80. 74087413.

147. Tang J., Tang D., Niessner R., Knopp D., and Chen G. Hierarchical dendritic gold microstructure-based aptasensor for ultrasensitive electrochemical detection of thrombin using functionalized mesoporous silica nanospheres as signal tags //Anal Chim Acta. 2012. 720. 1-8.

148. Liu X., Li Y., Zheng J., Zhang J., and Sheng Q. Carbon nanotube-enhanced electrochemical aptasensor for the detection of thrombin //Talanta. 2010. 81. 1619-1624.

149. Kang Y., Feng K.J., Chen J.W., Jiang J.H., Shen G.L., and Yu R.Q. Electrochemical detection of thrombin by sandwich approach using antibody and aptamer//Bioelectrochemistry. 2008. 73. 76-81.

150. Sun T., Wang L., Li N., and Gan X. Label-free electrochemical aptasensor for thrombin detection based on the nafion@graphene as platform // Bioprocess BiosystEng. 2011.34. 1081-1085.

151. Fan X., White I.M., Shopova S.I., Zhu H., Suter J.D., and Sun Y. Sensitive optical biosensors for unlabeled targets: a review // Anal Chim Acta. 2008. 620. 8-26.

152. Dong X.Y., Mi X.N., Zhao W.W., Xu J.J., and Chen H.Y. CdS nanoparticles functionalized colloidal carbon particles: preparation, characterization and application for electrochemical detection of thrombin // Biosens Bioelectron. 2011. 26. 3654-3659.

153. Wang Y., He X., Wang K., Ni X., Su J., and Chen Z. Electrochemical detection of thrombin based on aptamer and ferrocenylhexanethiol loaded silica nanocapsules//Biosens Bioelectron. 2011. 26. 3536-3541.

154. Suprun E., Shumyantseva V., Bulko T., Rachmetova S., Rad'ko S., Bodoev N., and Archakov A. Au-nanoparticles as an electrochemical sensing platform for aptamer-thrombin interaction // Biosensors and Bioelectronics. 2008. 24. 825-830.

155. Stan D., Mihailescu C.-M., Iosub R., Moldovan C., Savin M., and Baciu I. Electrochemical studies of homogeneous self-assembled monolayers versus mixed self-assembled monolayers on gold electrode for "label free" detection of heart fatty acid binding protein //Thin Solid Films. 2012. 526. 143-149.

156. Zhou F., Lu M., Wang W., Bian Z.P., Zhang J.R., and Zhu J.J. Electrochemical immunosensor for simultaneous detection of dual cardiac markers based on a poly(dimethylsiloxane)-gold nanoparticles composite microfluidic chip: a proof of principle // Clin Chem. 2010. 56. 1701-1707.

157. Dou Y., Haswell S.J., Greenman J., and Wadhawan J. Voltammetric immunoassay for the detection of protein biomarkers //Electroanalysis. 2012. 24. 264-272.

158. Luxton R., Badesha J., Kiely J., and Hawkins P. Use of external magnetic fields to reduce reaction times in an immunoassay using micrometer-sized paramagnetic particles as labels (magnetoimmunoassay) // Anal Chem. 2004. 76. 1715-1719.

159. Jagadeesan K.K., Kumar S., and Sumana G. Application of conducting paper for selective detection of troponin//Electrochemistry Communications. 2012. 20. 71-74.

160. Kong T., Su R., Zhang B., Zhang Q., and Cheng G. CMOS-compatible, labelfree silicon-nanowire biosensors to detect cardiac troponin I for acute myocardial infarction diagnosis // Biosensors and Bioelectronics. 2012. 34. 267-272.

161. Shumyantseva V.V., Bulko T.V., Rudakov Y.O., Kuznetsova G.P., Samenkova N.F., Lisitsa A.V., Karuzina I.I., and Archakov A.I. Electrochemical properties of cytochroms P450 using nanostructured

electrodes: Direct electron transfer and electro catalysis // Journal of Inorganic Biochemistry. 2007. 101. 859-865.

162. Shumyantseva V.V., Carrara S., Bavastrello V., Jason Riley D., Bulko T.V., Skryabin K.G., Archakov A.I., and Nicolini C. Direct electron transfer between cytochrome P450scc and gold nanoparticles on screen-printed rhodium-graphite electrodes //Biosensors and Bioelectronics. 2005. 21.217222.

163. Chikae M., Idegami K., Kerman K., Nagatani N., Ishikawa M., Takamura Y., and Tamiya E. Direct fabrication of catalytic metal nanoparticles onto the surface of a screen-printed carbon electrode // Electrochemistry Communications. 2006. 8. 1375-1380.

164. Karadeniz H., Erdem A., Caliskan A., Pereira C.M., Pereira E.M., and Ribeiro J.A. Electrochemical sensing of silver tags labelled DNA immobilized onto disposable graphite electrodes // Electrochemistry Communications. 2007. 9. 2167-2173.

165. Кавецкая И.В., Волошина T.B., Караванский B.A., and Красовский В.И. Оптические свойства золотых наночастиц // Конденсированные среды и межфазные границы. 2009. 11. 53-57.

166. Philip D. Synthesis and spectroscopic characterization of gold nanoparticles // Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy. 2008.71. 80-85.

167. Brabec V. and Mornstein V. Electrochemical behaviour of proteins at graphite electrodes: II. Electrooxidation of amino acids // Biophysical Chemistry. 1980. 12. 159-165.

168. Brabec V. and Mornstein V. Electrochemical behaviour of proteins at graphite electrodes. I. Electrooxidation of proteins as a new probe of protein structure and reactions // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure. 1980. 625. 43-50.

169. Tan H. and Chen Y. Silver nanoparticle enhanced fluorescence of europium (III) for detection of tetracycline in milk // Sensors and Actuators B: Chemical. 2012. 173. 262-267.

170. Tartaj P., Morales M.P., Veintemillas-Verdaguer S., Gonzalez-Carreo Т., Serna C.J., and Buschow K.H.J, chapter 5 Synthesis, Properties and Biomedical Applications of Magnetic Nanoparticles. in Handbook of Magnetic Materials // K.H.J. Buschow. 2006. Elsevier. 403-482.

171. Fernandez-Baldo M.A., Bertolino F.A., Messina G.A., Sanz M.I., and Raba J. Modified magnetic nanoparticles in an electrochemical method for the ochratoxin A determination in Vitis vinifera red grapes tissues // Talanta. 2010. 83. 651-657.

172. Глинна JI. and Стьюарда M. Стурктура и функции антител // Мир. 1983. Москва.

173. Gnedenko O.V., Mezentsev Y.V., Molnar A.A., Lisitsa A.V., Ivanov A.S., and Archakov A.I. Highly sensitive detection of human cardiac myoglobin using a reverse sandwich immunoassay with a gold nanoparticle-enhanced surface plasmon resonance biosensor // Analytica Chimica Acta. 2013. 759. 105-109.

174. Guo H., He N., Ge S., Yang D., and Zhang J. MCM-41 mesoporous material modified carbon paste electrode for the determination of cardiac troponin I by anodic stripping voltammetry//Talanta. 2005. 68. 61-66.

175. Song S.Y., Han Y.D., Kim K., Yang S.S., and Yoon H.C. A fluoro-microbead guiding chip for simple and quantifiable immunoassay of cardiac troponin I (cTnl)//Biosensors and Bioelectronics. 2013. 26. 3818-3824.

176. Zhu J., Zou N., Mao H., Wang P., Zhu D., Ji H., Cong H., Sun C., Wang H., Zhang F., Qian J., Jin Q., and Zhao J. Evaluation of a modified lateral flow immunoassay for detection of high-sensitivity cardiac troponin I and myoglobin//Biosensors and Bioelectronics. 2013. 42. 522-525.

177. Lee S. and Kang S.H. Quenching effect on gold nano-patterned cardiac troponin I chip by total internal reflection fluorescence microscopy // Talanta. 2013. 104. 32-38.

178. Nampi P.P., Kartha C.C., Jose G., P.R A.K., Anilkumar Т., and Varma H. Sol-gel nanoporous silica as substrate for immobilization of conjugated biomolecules for application as fluorescence resonance energy transfer (FRET) based biosensor // Sensors and Actuators B: Chemical. 2013. 185. 252-257.

179. Gomes-Filho S.L.R., Dias A.C.M.S., Silva M.M.S., Silva B.V.M., and Dutra R.F. A carbon nanotube-based electrochemical immunosensor for cardiac troponin T//Microchemical Journal. 2013. 109. 10-15.

180. Mattos A.B., Freitas T.A., Kubota L.T., and Dutra R.F. An o-aminobenzoic acid film-based immunoelectrode for detection of the cardiac troponin T in human serum//Biochemical Engineering Journal. 2013. 71. 97-104.

181. Ren L., Wang J.-C., Liu W., Tu Q., Liu R., Wang X., Xu J., Wang Y., Zhang Y., Li L., and Wang J. An enzymatic immunoassay microfluidics integrated with membrane valves for microsphere retention and reagent mixing // Biosensors and Bioelectronics. 2012. 35. 147-154.

182. Alizadeh V., Mousavi M.F., Mehrgardi M.A., Kazemi S.H., and Sharghi H. Electron transfer kinetics of cytochrome с immobilized on a phenolic terminated thiol self assembled monolayer determined by scanning electrochemical microscopy//Electrochimica Acta. 2011. 56. 6224-6229.

183. Assefa H. and Bowden E.F. Electron transfer reaction of cytochrome с peroxidase at tin oxide electrodes // Biochemical and Biophysical Research Communications. 1986. 139. 1003-1008.

184. Будников Г.К., Майстренко В.Н., и Вяселов М.Р. Основы современного электрохимического анализа // Методы в химии. 2003. Москва.

185. Ibupoto Z.H., Jamal N., Khun К., and Willander M. Development of a disposable potentiometric antibody immobilized ZnO nanotubes based sensor

for the detection of C-reactive protein // Sensors and Actuators B: Chemical. 2012. 166-167. 809-814. 186. Moreira F.T.C., Dutra R.A.F., Noronha J.P.C., Fernandes J.C.S., and Sales M.G.F. Novel biosensing device for point-of-care applications with plastic antibodies grown on Au-screen printed electrodes // Sensors and Actuators B: Chemical. 2013. 182. 733-740.